Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунопатогенез и алиментарная иммунокоррекция при заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта

с> зт'

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ИМЕНИ АКАД. А. А. БОГОМОЛЬЦА

На правах рукописи

ШАРМАНОЕЗ Алмаз Турегельдинович

УДК 612.017. 1 + 615.857.6/.9: [616.329^616.33—002.2+616.342—002.44]

ИММУН0ПАТ0ГЕНЕЗ И АЛИМЕНТАРНАЯ ИММУН0К0РРЕКЦИЯ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ВЕРХНЕГО ОТДЕЛА ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА

14.00.36 — аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

КИЕВ — 1991

Работа выполнена в Институте физиологии Академии паук КазССР

Официальные оппоненты: — доктор медицинских наук, профессор

Н. М. Бережная

— доктор медицинских наук, профессор А. Н. Чередеев

— доктор медицинских наук Э. Г. Исаева

Ведущее учреждение — Институт иммунологии МЗ СССР

Защита диссертации состоится ■—"-- 1991 года

в 13 час. 30 мин на заседании специализированного совета Д 088.13.06 при Киевском медицинском институте им. академика А. А. Богомольца (Кисв-57, пр. Победы, 34, санитарпо-гигнепическни корпус).

Отзывы иа автореферат высылать по адресу: 252057, Кяев-57, пр.. Победы, 34, санитарно-гигиенический корпус.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского медицинского института (252057, Кпев-57, ул. Зоологическая, 1, стоматологический корпус).

Автореферат разослан -1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских паук

В. Г. БОРДОНОС

лгл .

мФлм№хгь пювлтi

.—'-FW'^shi! органов пивоварения завкмак/г одно из брдуиих мест по ^TAöio'if- и распространенности среди населения »»¡«»Я страны и еоо-15% в структуре о&тй смертности. У лиц молодого возраста смертность от болеоней органов пищс-вароикя аанимает второе место после смертности 'от нрсчаеткья случаев и превышает этот показатель при сердечно-сео/дкстш и легочных ваболеяашшх. Около С'О/. населения кшит хэяоои со ctopoüh 3©лудоч1го-!1ишечиого тракта, а по некоторым данным бол -е 502 трудоспособного населения рзаситих стран страд лют хроническим гастритом и другими хроническим» аабо-левшшяш органов пиеэв»!* шга. При этом болезни верхнего отдела пищеварительного тракта ииеюг ведущее значение (ИХ. Ьюклеико 1998, П. Я. Григорьев и со авт. 1039, 1986). Как видно, данная проблема является актуальной ъ медицине и затрагивает ряд аспектов социальной кизни ОбИЙСТВа.

Многие хронические заболевания пикеБОда и желудкл (ааофагит, атрофичеекий гастрит, лодипоз) принято рассматривать кг«с предопу-холевые, поскольку они характеризуется высоким риском рая лития злокачественных новообразований (tonг \0Q7, Coma t'ol Corral et al. 1600). Казахстан относится к регионам с повышенной заболеваемостью раком пищевода, частота которого на 100 тыо. населения в республике составляет 25,6 у мужчин и 14,4 у «лщ:ш, что значительно преви:'.а2Т заболеваемость раком указанной локализации в других регионах Советского Союза, а также ряда других стран (В.R Дворян и др. 1938). Высокие показатели смертности от злокачественных новообразований пищевода и желудка и связанные с этим значительные социадьно-эконошчсекие потери позволяют обоснованно рассматривать борьбу с ними в числе государственных проблем.

Многочисленные данные свидетельствует о важной роли первичных и вторичных нарушений иммунной системы в патогенезе забпл<-ваии:) пищеварительного тракта (А. С. Логинов и соавт. 1985, [I !,L Сапронон-ков 1987, Brandt zaeg- et al. 1985, MacDerrnott et al. 19ЯС .Тагцап. Shanahan, 1990). Однако, ввиду Фрагментарности указанных исследований и противоречивости отдельных результатов, в настоящее время нет достаточно целостного представления об иммунопатогенече Со-

«тоней верхнего отдела пищеварительного тракта.

föxuoii особенностью болезней органов пищеварения является тесиая кнтегрированноеть различных патогенетических механизмов, многие из которых сопряжены с метаболическими нарушениям!! (43). Еиясненио иммунопатологических механизмов при заболеваниях пищеварительного тракта должно предусматривать комплексное имыунол з-гическое исследование на основе анализа характера взаимосвязей количественно-функциональных параметров иммунной системы с отдельными функциональными группами белкоЕ кроьи, осуществляющими интеграцию метаболических процессов в организме.

Реализация указанного подхода мокет явиться основой для разработки методов дифференцированной терапии указанных заболеваний с примененном комплексных подходов, иаяравлоиних на корр^сция им-мушшх и метаболических нарушений. Традиционно иммунокерригирую-шд;! терапия предусматривает в основном использование гормонов и медиаторов . иммунной системы, а также фармакологических средств -иммуностимуляторов естественного происхождения и синтетических препаратов (Р. Б. Петров 1S82, А. Г. Чучалин, 19М). Предпринятые ранее попытки фармакологической иммуюкоррекции при ряде хронических заболеваний пищеварительного тракта (язвенной болезни, хроническом гастрите) не представляются достаточно эффективными и патогенетически обоснованными. ,

Б комплексной терапии болезней органов пищеварения использование алиментарного фактора, обеспечивающего.коррекцию многочисленных физиологических, и метаболических нарушений, имеет ведущее значение. Многочисленные данные свидетельствуют об участии отдельных пишевых веществ (нутриентов) в функционировании иммуно-комлететных клеток в качестве субстрата их метаболизма, регуляторов активации и взаимодействия в процессе иммунного ответа (Cross,Newberne.1980,-Beisel,1982,Chandra 1986,1988,1989). Вместе с тем способы направленного влияния на конкретные звенья иммунной системы с помощь» нутриентов, терапевтические подходы к их использованию с целью иимунокоррекции недостаточно разработаны.

В связи с вышеизложенным в настоящей работе были поставлены

сл^дуладе цели и задачи: исело лишня:

Комлокспня оценка состояния раздашь« звеньев иммунной системы у Сюлыияг хроническими и опухолевыми заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта, выяснение патогенетической значимости изменения колмоствешю-функциональних свойств иммунскоупе-тентных клеток, теоретическое и экспериментальное обоснование- к иг учен не воэмоулоети алиментарной иммунокоррекции при указанных заболеваниях.

Зздэт к иосхедррлтш:

- Изучить фенотипичег! -о» распределение мо.чонуклеарних клеток слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки с помощь» лазерной проточной цитофлюориметрии и моноклональннх антител; провести сравнительный анализ еубпопуляцконного состава лимфоцитов- слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта и периферической крови, а также иммунных белков в эндогенном содержимом тонкий ккшки и сыворотке крови человека.

- Исследовать количественное распределение основных субпопуляций мононуклеарных клеток крови, оценить митогеннкй ответ лимфоцитов, противоопухолевую цитотокеичность естественных киллеров, Фагоцитарную активность и окислительный метаболизм нейтрофчлоа, иммунохимччески определить уровни иммуноглобулинов, Факторов комплемента, транспортных белков и белков острой фази воспаления в сыворотке крови больных эрозивным эзофагигом, хроническим гастритом, язвенной болезнью и пищевой аллергией с гелудочно-кишечными проявлениями.

- Провести иммунофелотипиросамие, оценку противоопухолевой цитотокеичности и количестве иного содержания естественных киллеров, мнтогонного ответа лиьфэцитов и кинетики генерации активных форм 'да нейтрофилами крови, определить содержание в плазме крови иммутт'пгх белков, альбумина, це|>у.гоп.:аамин-1 и агюлэтюнритеи нов у Оольиих раком пищевода и даадудка.

- Вмени'ть патогенетическую значимость ит-^нений в тлфкней сиете;.!'1, а т.чк'.о отдельных Функциональных групп белкой км-,ни, оп-

А

редыить из основании корреляционного к регрессионного анализов характер их взаимосвязей у болькьк с предопухолевши и опухолевыми наболеваниими пищевода и желудка, ив.?щ.кой болезнью, а также У здоровых лудой в процессе адаптации к экстре наиышм воздействиям.

- Дать теоретическое обоснование шемоккоети иммушкоррекцли е помокьч айяменгарных Факторов. Исследовать иммугошдулиругдао свойства ьктаманов Е и к - ка клеточной модели, а так.« в эксперименте путем иммунологической сценки гаЭДекто!: недостаточности витаминов Е и Д, избытка полинэнасиа^нних кнрных кислот. Изучить иммунокоррпгирухшре действие фармакологических каяцентрадай витаминов Б: и А в составе ферментированного продукта на противоопухолевую цнтотоксичность естественных киллеров и окислительны,) мета-Соли-чм фагоцитоз в условиях острой затравки канцерогеном М-иитро-оопиперидинам.

- Провести клиническую апробация обогащенного ферментирован--ного продукта у больных хроническим гастритом и язвенной болезнью, изучить иммунокорригирукдае свойства продукта, его влияние* на естественную противоопухолевую цитотоксичнооть, окислительный «етаЗолиам фагоцитов крови, содержание имму?юглобу,тинов. фактороз комплемента, белков острой фаан воспаления и транспортных белков, разработать методику его применения при патологии верхнего отдела пищеварительного тракта.

2. Научная новизна работы.

- Впервые о помощью метода лазерной проточной цитофлюоримет-рии с использованием моноклонвльных антител проведено изучение субпопуляционного распределения ликфоцигов, выделенных из Оиопта-тов слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта человека, проведен сравнительный анализ фенотипичесглго состава лимфоцитов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, а ташке периферической крови; анализирован изотипкческий состав иммуноглобулинов и определено содержание СЗ и С4 факторов комплемента в различных фракциях эндогенного содержимого (перфузатов и смывов) тонкой кишки человека.

- Впервые при различных хронических и опухолевых заболеваниях

верхнего отдела пищеварительного тракта проведено комплексное исследование антигенов лимфоцитарной дифференциации CD2.CD3.CD4, CD8.CDllb.CD14,ССйО,С021.С056 (ККН1) на мононуклеарных клетках периферической крови. Анализированы параметры флюоресценции имму-нокомпететных клеток, связавшихся с моноюганальными антителами, определяемые с помощью лазерной проточной цитофлюоримегрии -средний канал флюоресценции и удельная флюоресценция, показана информативность указанных параметров при оценке количественного распределения маркерных антигенов на лимфоцитах, их функциональное значение.

-Комплексное иммунологическое, иммунохимическое и биохимическое исследование впервые позволило установить взаимосвязи медду различными количественно-функциональными параметрами иммунной системы, а также метаболическими изменениями при хронических и опухолевых заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта, доказать важное патогенетическое значение отдельных звеньев иммунитета, а также интегрированность различных патогенетических механизмов при указанных заболеваниях.

- В настоящей работе впервые систематизированы многочисленные сведения о роли отдельных нутриентов в функционировании клеток иммунной системы в качестве субстрата их метаболизма, регуляторов активации и взаимодействия в процессе иммунного реагирования, теоретически обоснована возможность алиментарной иммунокоррекции, экспериментально доказана возможность алиментарной модификации окислительного метаболизма макрофагов, противоопухолевой цитоток-сичности естественных киллеров, обосновано использование обогащении ферментированных продуктов в качестве иммунокорригирующих средств,и в клинических условиях у больных с хроническими заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта доказана возможность алиментарной коррекции отдельных иммунных нарушений с помощью обогащенного ({ерментированного продукта.

3. Практическая ценность результатов.

Анализ особенностей различных заболеваний верхнего отдела пищеварительного тракта, основанный на комплексной клинико-иммуно-

л^гичегкой опйькэ, позволил определить ряд кк4орматпвних парачет--ров, изучении взаимосвязи которых может »меть значение для днЭДе-Генця::.чы:оЛ оценки опухолевой и хронической аптотзгт верхнего отдела шшг^-зрнтельного тракта,

ДпроСшмя обогыденгюгз ферментировавиого продукта, народу с высокой клинической эффективностью, позволила установить его им-иуая&.чулъругя&р свойства и рзд другму '4шиологич>«кл*х "'Фактов у осладых с хроническими заОолезсшш'и верхнего отделл пиневч}.!'--тельн<)Го тракта.

По ре.'-у.С'ьтшам (типической апробыщп ферментированного продукта в соавторству изданы методические рекомендации "Применение нового соогаауииого кисломолочного продукх-а "Жлгер" дли нио$лла:г-тйки и дучеш* больных и беременных анемией, а так»; хроническими заболеваниями органов пищеварения", в которых изложена методика лечении больных с; заболеваниями верхнего отдела пищеварительного гранта с помэ-дрв обогащенных ферментированных продуктов.

Теоретические полольниа и практические рекомендации, основанные на результатах настоящего исследования, имюлььуотсл в учебном процессе кафэдры гаетроантеродогнл Алма-Атинстого институтч усовершенствования врачей МЗ СССР, кафевры питания Центрального ордена Ленина института усовершенствования врачей (ЦОЛИУВ) Ш СССР, а такте в работе иммунологических лабораторий ряда науч-ио-изследоеательеких лабораторий г. Алма-Аты.

4. СУ потто полотная, выносиш? та защ/лу,

- Субпопуляционное распределение лимфоцитов слизистой оболочки желудочно-кишечного тратта, а таю» изогилический состав имму-нох-лобулннов в эндогенном содержимом тонкой кшгки значительно отличаются ст периферической к;х>ви. Цитзфлюориыетрическиа анализ антигенов лейкоцитарной дифференциации с использованием параметров флюоресценции клеток, связавшихся с моноклональными антителами, позволяет оценить функциональные свойства отдельных популяций иммунокомпетентных клеток и установить их патогенетическую значимость при патологии верхнего отдела шщзварительного тракта.

- Различный характер взаимосвязей между отдельными количеет-

венно функционгаьнкми параме,грЭ1.ш иммунной системы, .ч такде ?.нео-ккй урогенъ сг.;!оий иыму.ших и других фушдтокальтж групп (л-лков Кропи свйдотсльстроввии об иятргрирорянности различит шл^'кчь'к механизмов и их знилонкоети от метаболических нарушений у больны* о заболеваниями верхнего отдела пищеварительного траста

- Теоретической основой бооможюсти ада.'.эптарной иммунокоррекции является участие отдельных нутриестов в функцсонирог.-чшга шуяноЯ системы д качество субстрата метаболизма таслгококадтс-н-тиьге клеток, регуляторов их активации и взаимодействия в процессе иммунного реагироьания. Обогащенный ферментированный продукт обладал тмунсторригируйщим. свойства}/« в ■'ч-;оперпменте и у больных хроническим гастритом и язгенкой болезнью.

Г>. Апробация работы и пуЗжацт

Основяш подоякнйя дололвны и обсуждены на: - Ооветско-фод-цузском семинаре "Современные достижения и перспективы диагностики анемии и иммунодефицитов" С Алма-Ата, 1990 г.); Советско-Американском симпозиуме "Наиболее важные аспекты современной науки о питании" (Алма-Ата,1990 г.); Международном онкологическом конгрессе (Гамбург, №Г, 19Я0 г.); Всесоюзной конференции "Экологические аспекты иммунопатологических состояний" (Алмл-лта. 1РР0 г.); Мз^еспубликанской конференции "Актуальные вопросы питания и проблемы алиментарно-зависимых заболеваний в республиках Средней Азии к Казахегаге" (Карши,1990 г.); Всесоюзном симпозиум по биохимии липидов (Алма-Ата, 1987 г.); и и III Всесоюзной конференции "Биоантиокендант" (МоекЕа, 1985 г. и 1980 г.); 5-й ^республиканской конференции аллергологов-иммунологов Казахстана и республик Средней Азии (Алма-Ата, 1586 г.); Всесокзкой конфзр«-<ншм "Современные методи иммунотерапии" (Таякеит, 1984 г.); Сбнестве аллергологов и тлунологов Казахстана (Алма-Ата, 19Я9 г.) и »^«л.чнии ученых советов Института физиологии ан Каз ССР (19.49г.) и института регион »льннх проблем питания /е'Ь СССР (Ю!\7г.).

Но теме диссертации опубликорчно 39 работ.

0С>Ъ(.у и сг ¡ситу 1-йдко'УЧ'гтчг. Работа кзлот»ч на ЯЭ7 стрч-Нинах ма:::ине!;поного т-'-кота ¡5 состоит из трех гла:-., ;еет• к1 1:

выводов. Диссертация иллюстрирована 37 таблицами и 28 рисунками. Библиографический указатель включает 303 источника- из них 50 отечественных и 253 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Кпинико-иммунологическое исследование было проведено на 294 больных, которые были распределены по следующим клиническим группам: хронический гастрит с сохраненной секрецией - 48 больных; -хронический гастрит с секреторной недостаточностью - 47 больных, среди них преобладали больные с атрофическим гастритом; эрозивный эзофагит - 16 больных; язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки - 99 больных; язвенная болезнь желудка - 20 больных; пищевая аллергия с клиническими проявлениями в желудочно-кишечном тракте -12 больных; рак пищевода и вентрикулокардиоэзофагеальный рак - 24 больных (первичные) и 12 Сольных после химиолучевой терапии; рак желудка - 16 больных (первичные). Больные находились на стационарном лечении в гастроэнтерологических отделениях 1-Дородной больницы и 1-Городской клинической больницы г. Алма-Аты, 4- и 63-городских клинических больниц г. Москвы, а также в отделении лекарственной терапии Института онкологии и радиологии МЗ Каз ССР.

Среди Сольных хроническим гастритом преобладали женщины (75Х), средний возраст больных составлял 44.35il.66. Большинство больных язвенной болезнью - мужчины (63.2%), средний возраст больных 42.0*1.63. Среди больных с онкологической патологией (рак пивевода и желудка) чада встречались лица старше 50 лет (средний возраст 60.45*1.21 лег) из них 73.81% - мужчины.

Диагностику заболеваний проводили на основании клинических данных (жалобы, анамнестические данные, осмотр и физикзльное обследование) , а также с использованием лабораторных и инструментальных методов исследования, в ряде случаев проводили гистологическую верификацию диагноза В качестве контроля исследован материал от 60 практически здоровых лиц и доноров крови в иозрасте от 19 до 50 ле' .

У 40 большое язвенной болезнью с локализацией язвы в желудке и двенадцатиперстной кишке, а также у 37 больных хроническим гастритом с сохраненной секрецией и секреторной недостаточностью проводилось клинико-иммунологическое исследование в процессе лечения с помощью обогащенного ферментировавнного продукта.

Для выяснения взаимосвязи иммунных белков крови человека с другими функциональными группами белков, а также параметрами витаминной обеспеченности, характеризующими статус питания, было обследовано 92 человека - четыре группы здоровых мужчин в воврае-те 18 - 22 лет, находившихся в экстремальных условиях горно-пустынной местности на фоне различного характера питания.

Экспериментальное исследование с целью выяснения возможности алиментарной иммунокоррекции проводилось на 128 растущих крысах линии Aug-Lac и WAG.

В настоящей работе использованы следующие методы исследования:

- субпопуляционный анализ Т лимфоцитов (CD2,CD3,CD4»CD8), В лимфоцитов (CD20.CD21), NK-клеток (CD56) и моноцитов (CDllb,CD14) человека. В работе использовались следующие моноклональные антитела, меченные фикоэритрином : T3RD1, T4RD1, T8RD1, T11RD1, B1RD1, NKH1RD1, антитела, меченные F1TC: Mol и Ш2, а также контрольные антитела MsIgGl-RDl, MsIeG2a-RDl, KtelgM-FITC (Coulter Clone,США). Исследования проводились на проточном цитофлюоримете ЕРICS-С (Coultronics, Франция),

- иммунохимическое определение иммуноглобулинов A,M.G, факторов комплемента СЗ и С4 и других белков сыворотки крови (альбумина, трансферрина, гаптоглобина, церулоплазмина. аполипопротеинов А и В, альфа-i-антитрипсина и альфа-2-макроглоОулина) методом кинетической нефелометрии на иммунохимическом анализаторе ICS-2 Весктап (Австрия)

- определение кинетических параметров люминолзависимой хеми-люминесценции перитонеальных макрофагов крыс и нейтрофилов периферической крови человека, стимулированных опсонизированным зимо-заном и форболмиристатацетатом (Baxter et al. 1983),

- тест восстановления нитросинего тетразолия фагоцитами пери-

(-1 U I

ферической крови,

- оценка фагоцитарной активности нейтрофилов крови с помощью лазерной проточной цитофлюориметрии,

- оценка митогенного ответа лимфоцитов цельной крови на ФГА по включению ЗН-тимидина СBloemeha et al. 1989),

- изучение цитотоксической активности естественных киллеров к опухолевым клеткам К562 мембранотоксическим тестом (Рыкова М. Р. и соавг. 1981) , а также цитостатической активности естественных киллеров (совместно с Сапаровым А.С. и Тасполатовым Б.К),

- оценка первичного иммунного ответа к эритроцитам барана по накоплению в селезенке крыс антителообразуицих клеток,

- определение микровязкости плазматической мембраны макрофагов крыс с помощью флюоресцентного зонда пирена на флюоресцентном спектрофотометре Hitachi-850 (Япония),

- определение активности антиоксидантных ферментов в макрофагах - глутатионпероксидазы (Little et al. 1970) и супероксиддисму-тааы (McCord, Fridovich, 1969) на спектрофотометре Hitachi 557,

- биохимическое определение триглицеридов и холестерина в сыворотке крови человека на биохимическом анализаторе Abbott.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

С целью выяснена особенностей количественного распределения субпопуляций лимфоцитов в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта человека нами исследовались мононуклеарные клетки, выделенные с помощью коллагеназы и хелатируюших растворов из биопта-тов желудка и двенадцатиперстной кишки у 16 больных хроническим гастритом. Шмунофенотипирование проводилось с помощью лазерной проточной цитофлюориметрии и с использованием моноклональных антител. Показано, что в отличие от периферической крови, лимфоциты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта характеризуются низким соотношением CD4/CD8 субпопуляций клеток (£9. ['>%/?.В. 6Х - в желудке и СП 15%/41.6Х - в двенадцатиперстной киико), доминированием CD8 /прессорных/цитотоксических лимфоцитов в кишечнике, а

также низкой экспрессией CD2.CD3 антигенов - маркеров пан-Т лимфоцитов: 49% и 47% соответственно в желудке, 54% и 437. - в двенадцатиперстной кишке.

Фенотипические особенности лимфоцитов слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта человека могут быть связаны с повышенным уровнем спонтанной активации отдельных субпопуляций указанных клеток, обусловленным специфическим контактом внутриэпителиальных лимфоцитов с энтероцитами, презенгирущими антигены, благодаря экспрессии HLA-DR молекул в апикальной цитоплазме и на базо-латеральной мембране (Sponcer et al. 1986, Jarry et al. 1990, Mayrhofer et al.1990). Доминирование CD8 судрессорных/цитотоксических лимфоцитов, по-видимому, связано с регуляторной ролью указанных клеток и может быть обусловлено известным феноменом перорально-индуциро-ванной толерантности. В меньшей степени может иметь значение неспецифическое скопление отдельных субпопуляций клеток в эпителиальных компартментах кишечника, а также селективная "экстракция" лимфоцитов из периферической крови в лимфоузлы и лимфоидную систему кишечника, благодаря специфическому взаимодействию лимфоид-ных рецепторов с эндотелиальными клетками и энтероцитами (Kimpton et al. 1989, Jalkanen et al. 1989).

Нами отмечался повышенный уровень экспрессии CD56 (NKH1) антигена на мононуклеарных клетках слизистой оболочки желудка (26.5%) и двенадцатиперстной кишки (31.0%), что моиет служить обЬяснением обнаруженной ранее высокой противоопухолевой цитоток-сичности естественных киллеров желудочно-кишечного тракта, локализованных вероятно в большей степени в Lamina propria слизистой оболочки (Selby et al. 1983, Gerf-Bensussan et al.,1984, Dobbins 1986).

По нашим,данным более 35% мононуклеарных клеток слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки человека экспрессиро-вали CD20 антиген - маркер В лимфоцитов. В связи с этим иммунохи-мически с помощью метода кинетической нефелометрии был проведен изотипический анализ иммуноглобулинов, секретируемых в просвет тонкой кивки. Показано, что в перфузатах тонкой кишки доминирова-

ли иммуноглобулины А, уровень которых более, чем в 2 раза превышал количество 1гМ и в 4 раза - Причем дифференцированный анализ фракционного состава эндогенного содержимого тонкой кишки показал, что 1еА б основном выделялись из свободной фракции, а остальная часть данных иммуноглобулинов была в той или иной степени интегрирована со слизью пристеночного слоя тонкой кишки. Факторы комплемента СЗ и С4 равномерно распределялись в различных фракциях эндогенного содержимого тонкой кишки человека

Обнаруженные особенности изотипического распределения иммунных белков и экспрессии маркерных антигенов на различных субпопуляциях лимфоцитов вполне укладываются в предложенную ранее ВгаЫЬгаае: еЬ а1. (1085) концепцию иммунологического гомеоетаза в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, важнейшими Функциональными элементами которого являются:

- иммунное исключение при участии секреторных 1еА и частично пентамерных 1еМ;

- иммунная регуляция, которая осуществляется благодаря балансу регуляторных популяций лимфоцитов, изотипическим и идиотипи-ческим взаимодействиям;

- иммунная элиминация путем образования иммунных комплексов, привлечения системы комплемента и клеточных цитотоксических реакций.

Нарушение укаэ&п'ых механизмов может лежать в основе морфологических и функциональных изменений в желудочно-кишечном тракте, инициирующих развитие патологического процесса. Находясь в структурно-функциональном единстве с иммунной системой в целом, лимфоциты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта вносят существенный вклад в количественное распределение и функциональные свойства иммунокомлетентлых клеток в периферической крови.

Выяснение патогенетической значимости иммунологических изменений в периферической крови у больных с хронической и опухолевой патологией верхнего отдела пищеварительного тракта (хроническим гастритом, эрозивным эзофагитом, язвенной болезнь» желудка и две-надцатшк'!ей кишки, раком пищевода и желудка) явилось предме-

том комплексного коолодоволкл о коподьооваппом ргтда колкчоотвоп-

ньк и функциональных тестов.

Количественный анализ экспрессии дифференцировочных антигенов лимфоцитов с помощью лазерной проточной цитофлюориметрии показал высокую информативность оценки среднего канала флюоресценции клеток, связавшихся с моноклональными антителами, конЬюгированными с флюорохромами. Несмотря на отсутствие выраженных различий в процентном содержа. CD2 и CD3 субпопуляций Т лш&цитов (табл.1), у больных с опухолевой патологией желудка по сравнению с хроническим гастритом отмечалось достоверное повышение степени экспрессии CD3 и CD2 антигенов клеточной дифференциации, которая характеризовалась средним каналом флюоресценции (mean) и удельной флюоресценцией (moan/X). Принимая во внимзние важную рецепторную и регуляторную роль указанных мембранных. молекул, нам представляется, что количественный анализ их экспрессии с помогаю параметров флюоресценции специфических моноклональнкх антител может в определенной степени отражать функциональное состояние отдельных популяций лимфоцитов и иммунной системы в целом ( А. Е Чередеев, Коваль чук JL а ,1989, Breltmeyer et al. 1987, Cantrell et al. 1988, Matsuyama ot al. 1988,Yoon-Sook et al. 1989).

Общая тенденция к повышению экспрессии CD4 антигена лимфоцитов (параметр mean) на фоне снижения процентного содержания данной популяции клеток была характерна для всех клинических групп (табл.2) и, по-видимому, отражала компенсаторную реакцию, направленную на восстановление баланса основных регуляторных популяций лимфоцитов. Значительное повышение соотношения параметров удельной флюоресценции ( mean/3) CD4/CD8 лимфоцитов по сравнению с донорами наблюдалось во всех клинических группах и было особенно выраженным у больных с неоплазией . Указанные изменения сопровождались подавлением пролиферативного ответа лимфоцитов на ФГА при использовании высоких концентраций митогена , что позволяет предположить реципрокные взаимоотношения лимфопролиферативного ответа и степени экспрессии отдельных дифференцировочных антигенов Т лимфоцитов.

•1-1 IOI

Таблица 1. Нммунофенотипирование Т-лмфцитов периферической с заболеваниями пищеварительного тракта с помощью THRD1 и лазерной проточной цитофлкариштрии.

крови по СОЗ и СВ2 у больных моноклональных антител ТЗЮ1,

ТЖ

Группы больных

СШГ

wean X пвап/Х man X rnean/X

1. Хронический гастрит 47.7*0+3.94 49. 46+2. 98 0.89+0.081 62.21+6.17 69. 96+3. 44 0. 82+0. 065

п-14 п-14

2. Эрозивный ээофагит 53. 98+4.97 50.98+4.70 1.27+0.33 73. 52+5.19 77. 04+3.16 0. 91+0. 071

n-il п-11

3. Язвенная болезнь 69.14+5.27 54.18+1.96 1.39+0.11 70.35+4.23 73.40+1.60 0. 99+0. 059

двенадцатиперстной п-30 п-30

кишки

4. Рак пищевода 57.26+5.37 50.10+3. 83 1.26+0.14 65.51+5.21 74. 50+1. 59 0. 88+0.071

п-19 П-18

5. Рак желудка 77.06+9. 09 49.81+4.61 1.58+0.29 82. 42+7.17 79.43+3.10 1.08+0.072

п-10 п-10

6. Доноры 56.27+3.01 56. 88+1.57 1.04+0.070 58. 79+2. И 76. 47+1.33 0.79+0. 042

п-57 п-61

pl,3 <0.01 pl,5 <0.01 р2,3 <0.05 р2,5 <0.05 рЗ,6 <0.05 pl,6 <0.05 р!,3 <0.001 pli 4 <0.05 pl,5 <0.05 рЗ,6 <0.01 р5,6 <0.01 pl,5 <0. 05 pi,5 <0.05 "рз;б <0. oi р5,6 <0.001

Таблица 2. Параметры фяюоресцвнции лимфоцитов периферической крови, связавшихся с ъюноклонзлып&ш антителами к CD4 и CD8 антигенаи у больных с патологией верхнего отдела пищеварительного тракта.

Параметры флюоресценции

Труппы больных

1. Хроничес- 2. Эрозивный 3. Дуодеяаль-... А. Рак 5. Рак 6. Здоровые

кий гастрт ээофагит ная язва - пгарвода .желудка доноры

Средний канал 52.69+4.17 флюоресценции (mean) 1щоцент клеток за 92+3.56

Удельная флюо- 1.91+0.39 ресценция (шеап/Х)

CD4 лимфоциты: • 64.47+5.70 60. 82+4. 48 57. 42+4.31 62.5415. 51

33. 49+3.31 2.03+0.36

32. 41+1.92

2.15+0.21 рЗ,6<0.001

32. 88+2.23 38.51+%. j0 1.95+0.23 1.84+0.26

БО. 23+2. 46

37. 02+1.22 р3,б<0. 05 1. 39+0. 06 р4,6<0.05

Средний канал 74.13+7.00

флюоресценции

(msan)

Щюцент клеток 24.77+2.65

Удельная флюо- 3.35+0.58 ресценция (mean/Z)

CD8 лимфоциты: I :

86. 44+6. 33 82.12+а 75 75.63+4.06 84. Б7±6. 24

30.11+3.68 24.44+1.43 27.22+2.02 27.11+2.63 а 57+0.77 а 71+0.29 3.03+0.26 3.46+0.50

71. 40+2. 51 р2,6<0. 05 р3,б<0. 05 22. 99+0. 91

3. 44+0.19

Средний канал 0.68+0.04 флворесценции-(пеап)

процент, клеток 1.58+0.23 1.15+0.14 1.49+0.14

Удельная флюо- 0.66+0.10 0.68+0.12 0.66+0.09

ресценция (rean/Z) pl.6<0.05 рЗ,6<0.05

Соотношение CD4/CD8 лим&эшггов: 0.74+0.04 0.72+0.04 0.75+0.04 0.73+0.03

1.38+0.19 1.74+0.03

0. 68±0. 09 р4,6<0. 01

0. 69+0. 09 р5,6<0. 01

0. 68+0. 02

1.78+0.11 р2,б<0.01 0. 44+0.02

Достоверно низкое процентное содержание лимфоцитов, зкспрес-сирующих С056 (ШН!) антиген естественных киллеров и значительное повышение степени экспрессии данного антигена наблюдалось у больных эрозивным эзофагитом - предопухолевым заболеванием пищевода, по сравнению с больными раком пишэвода, а также здоровыми донорами (табл. 3). Снижение противоопухолевой цитотоксичности естественных киллеров, которую оценивали с помощью мембранотоксического теста, было характерно как для больных с предопухолевой, так и опухолевой патологией пищевода и желудка, в то время как при язвенной болезни имело место повышение индексов цитотоксичности.

Как видно, функциональная активность лимфоцитов и ее взаимосвязь с экспрессией дифференцировочных антигенов существенным образом зависят от характера патологии и топических особенностей патологического процесса в верхнем отделе пищеварительного тракта.

Оценка В системы иммунитета показала, что у больных раком пищевода и желудка наблюдалось снижение относительного числа В лимфоцитов, зкспрессирующих СБ20 и С021 маркеры, а также НЬА-01? антиген, одновременно с увеличением плотности указанных мембранных молекул (табл.4). Это, по-видимому, отражалось на уровнях иммуноглобулинов А, М,в в крови, которые значительно снижались у указанных больных. Особенно это касалось иммуноглобулинов М, концентрация которых при раке пищевода была в три раза ниже, чем у больных хроническим гастритом (табл.4). Корреляционный анализ позволил установить отрицательные связи между уровнями иммуноглобулинов и степенью экспрессии ГО20 и С021 антигенов на В лимфоцитах больных раком пищевода и желудка.

Хронический гастрит характеризовался высоким содержанием в крови у больных иммуноглобулинов. Патологический уровень обнаруживался при хроническим гастрите с сохраненной секрецией. По-видимому, способность В лимфоцитов к поликлональному синтезу иммуноглобулинов была подавлена при опухолевой патологии, а при хроническом гастрите имела место поликлональная активация В лимфоцитов и повышенная секреция иммуноглобулинов различных изоти-

Таблица 3. 9гззпрооокл СОВб (НКН1) ааткаопа н протпвоопуяолонал цктогононч:,ооть еотеотхюпяых киллеров пер!фртеаюй кроЕИ больных хрошаесю-ш, предопухолъвихи и опухолгяьш заболеваниями педэвода и желудка

1. Кронтес- 2. Эрозивный 3. Луодеталь- 4. Рал 5. Рах ' б. Здоровые кий гастрит эзофагит пая язва пшрвода жлудка доноры

Параметры флюоресценции естественных киллеров, связавшихся с моноклональныш антителами ККН1-Ш1:

- Средний канзл 32.73+3.58 44.49+6.49 40.37±3.82 37.40+4.20 49.50+5.54 30.98+2.26 флюоресценции р1,Ь<0.05 р3,б<0.05 р5,6<0.01

(пеал)

- Процент клеток 4.79+1.42 2.57+0.83 5.40*0.73 5.77*1.26 4.26*1.86 6.08+0.71

р2,3<0.05 р2,4<0.05 р2,б<0.01

- Удельная фяюорес-18.10+5.19 52.21+19.16 12.48+2.40 10.30+2.53 28.19+9.86 11.78+1.88 ценция (шеап/%) р2.3<0.05 р2,4<0.05 р2,6<0.05

Индексы цитотоксичности естественных киллеров к опухолевым клеткам К562 з % при

- 6.25/1 16. 4+5. 7 р1,3<0.05 2а 1+5.0 34.5+4.3 16.9+2.9 рЗ,4<0.01 10.8+6.4 рЗ,б<0.01 24.5+5.8

- 12.5/1 21.9+5.8 р1,3<0.01 29. 5+4.7 р2,3<0.01 48.5+4.2 рЗ,4< 0.001 21.8+а4 1а 6+7.3 рЗ,5<0.01 31. 3+5.0 рЗ,6<0.05

- 25/1 29.0+6.9 р1.3<0.01 30. 5+7.1 р2,3<0. 01 56. 8+5.2 рЗ, 4< 0.001 27.9+3.2 р4,6<0.01 24.7±4.8 рЗ,5<0.001 4а 2+4.3 р5,7<0.01

- 50/1 33.1+5.6 р1,3<0.01 р!.6<0.01 33.5*6. 2 р2,3<0.01 р2,6<0.05 60. 8*4. 3 рЗ,4< 0.001 рЗ,5<0.01 32.6*3.5 р4.6< 0.001 30.2*10.1 р5,б<0.05 52. 8+а 6

Таблица 4. В система иммунитета у больных с патологией верхнего отдела пищеварительного тракта

Группы больных

1. Хронический гастрит

2. Эрозивный эзофазит

3. Луоденаль-ная язва

4. Рак

ладе во да

5. Рак желудка

Экспрессия В лимфоцитами CD2U антигена (параметры флюоресценции клеток)

Средний канал 63.54+9.09 79.19+9.54 62.99+4.66 71.41+7.39 80.82+5.97

флюоресценции (mean) р2,6<0.01 р3,5<0.05 р4.6<0.05 р5,б<0.001

Процент клеток 10.59+2.24 7.48+1.12 10.84+1.43 7.49+0.91 5.53+0.53

pl,5<0.05 р2,б<0.01 рЗ,5<0.01 р4,б<0.001 р5,6<0.001

Удельная флюо- 11.32+3.19 15.29+3.81 14.72+3.54 12.69+2.42 15.59±1.88

ресценция (mean/7.) р2,6<0.05 рЗ,6<0.05 р4,6<0. 05 р5.6<0.001

Экспрессия Б лимфоцитами CD21 антигена (параметры флюоресценции клеток)

- Средний канал флюоресценции (rre an)

- Процент клеток

- Удельная флюо-

43. 05+2. 34 pl,4<0. 05

3. 64+0. 38 pl.S'.O.OS 14. 35+1.73

ресценция (пезп/%) pl,3<0.05

45.52+4.88

2. 35+0. 71 23. 64+7. 10

53. 47+7. 00 рЗ,5<0. 05

6.46+0.98 рЗ,4<0. 01 9. 94+0. 97 рЗ,4<0. 05

56.37+5. 55 р4,5<0. 05

3. 27+0. 47

22. 04+5. 21

91.91+12.24 pl,5<0. 01

3. 62±1.14

38. 52+16.12

6. Здоровые доноры

50. 85-3. 09 рЗ, 6<б. 05 12. 41+1.07

7. 0б±0. 87

46. 33+2.38 р5,б<0. 001

4. 23+0. 38 рЗ,6<0. 05 16. 94+2. 51

сыворотке крови (mg/dl) 175.04+22.91 217.60+12.76

Содержание иммуноглобулинов в

.VA 301.90+32.61

(.'¡: 70 - 312) pl,2<0. 01

IgM 213.16+24. 62

IN': 56 - 3521 pi ,2<0.001

¡£G 1546. 1+84. 8 (N: 639 - 1349) pi,2<0.001

103. 66+19.95 868. 1+123. 9

pl,3<0. 02 119. 52+7.34 pi ,3< 0.001 1177. 1+47. 7

243. 86+47. 20 253. 79+62. 27

69.74+11.12 pl,4<0. 001 1025.6+105.9 pi. 4< 0.001

85. 44+21. 44 pi, 5< 0.001 996. 3+196. 8 pi. 5< 0.05

пов.

Многостороннему изучению подвергалась фагоцитарная система крови. Анализ фагоцитарной активности нейтрофилов о помощью метода лазерной проточной цитофлюориметрии не выявил существенной разницы в количестве фагоцитировавших клеток и числе фагоцитированных частиц флюоролагекса, а обнаруженное снижение параметров флюоресценции нейтрофилов у больных раком пищевода и язвенной болезнью вероятно объяснялось низкими фоновыми значениями (табл. б).

Кинетические параметры люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов, стимулированных опсояиэированным зкмозаном, были значительно ниже во всех клинических группах, что свидетельствовало о подавлении окислительного метаболизма нейтрофилов (табл б). Шесте с тем, стимуляция форболмиристатацетатом не позволила выявить статистически значимых отличий параметров люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофилов больных по сравнению с донорами (табл. Б), Высокий уровень спонтанного восстановления НОТ фагоцитами цельной крови наблюдался у больных язвенной болезнью по сравнению с хроническим гастритом, что свидетельствовало о повышенной генерации супероксидного радикала, не связанной с фагоцитозом.

Ключевую роль в противоопухолевой защите выполняют моноциты крови. Цитометрическая оценка экспрессии моноцитарных дифференци-ровочных антигенов CD14 и CDllb (Мо2 и Mol соответственно) позволила установить достоверное снижение процентного числа моноцитов во всех клинических группах по сравнению с донорами (табл.6). Повышение среднего канала флюоресценции CD14+ моноцитов наблюдалось у больных раком пищевода. Корреляционный анализ с использованием данного параметра показал, что степень связи экспрессии CD14 антигена с другими маркерными антигенами мононуклеарных клеток крови была низкой у доноров а также у больных язвенной болезнью и значительно возрастала при опухолевой патологии пищевода и желудка. Значение связей моноцитов с другими популяциями иммунокомпе-тетних меток у больных раком пищевода и желудка было подтверждено с помощью множественного корреляционного и регрессионного анализа.

Табдхш 6. Функцис.;аяьвая активность вейтрофиюз крови у больных с хронт&сюй и опухолевой патологией верхвззо сгдиа ттвзрительного тракта.

„.. ^ . , . tpyaw больных ' "'" : ' : :

v .нщиэнальш? ■_• . - - , ___ _.

парсютры 1. Хронжес-2. Ду.-деяаЖ^ ' 1 ¿.Рак 6. Здэроеыз ~

кий гастрит взя язвз пх&вош дэноры

Процентное содержание нейтрофилов. фагоцитировав пш фдгородйтеке по данным проточной цктометрюе

- Л&теке Б МКЛ 13.42±0.43 6.32+1.15 , J&79t4.24 7.51+0.98

Dil £<0.001 pl,4<0.001

V Латекс 10 ша 22.67+3.42 9.22+1.83 25.72+6.7S 12.25+1.33

pl 2<0.01 £>2 3<0.С5

- Латекс 20 мкд 38.31+5.49 21*46+1. CS З3*86±5.10 31.6543.87

pl,2<0.01 р2.3<0.05 р2,4<0.05

Кинетические параметры люминолзависимой хемилшинесцетда при стимуляции опсонизтфованкш экмоганом

- Амплитуда (mY) 1097.00+174.62 1004.86+112.15 1303.8Ш74.05 161а 92+143.57

р2,4<0. 01

~ Интегрированный 6745.47+1128.75 5389.81+561.89 6730.89*879.51 10475.15+1115.77

огвОТ (mV. min) pl,4<0.05 р2.4<0.001 рЗ,4<0. 05

- Скорость дссти- 129.50+22.35 154. 32+16. 87 194.00±23. £37 410.20±40. 63 зкения пика (mV/min) pl.4<0.(Xtl р2,4<0.001 рЗ,4<0.001

Кинетические параметры люминолзависимой хемилшинесцешщи при стимуляции форболмиристатацетаток

- Амплитуда (mV) 246.09+36.08 338.20+57.67 181.08+28.96 225.07+22.13

- Интегрированный 882.27+130.43 1186.85+199.63 657.03*85.15 634.14i63.27 ответ (mV.min) р2,3<0.05

- Старость дости- 65.87+12.06 86.70+16.17 51.27±10.73 54.83+4.58 гения пика (mV/min)

ГпЗджуг в. ¡¿авоциги, азапаизт-аая а ыояоаловсн&иьалг Ыо1 а НаЗ, и

в хрови у бояьпш с ялтгэгйэй верхнего оадала ок^влргтгх^сЕО

Паражтры Группы больных

фпзоресштт 1. Хровтес-кий гаотрмт 2. Эрозивный 3. Дъмея&а- 4. Рак сзс./аглг паз язва лздэвода 5. Рак ха дудка б. здороьог донода

Средний канал 71.29+13.1 флюоресценции С паап )

Щюценг клеток 18.38+3.23

Удельйая флво- 7.71+аЗЗ ресцонцкя (шеап/2)

10а 85+16.43 68.45+6.48 77.82+7.55 101.29+14.9 66.09+4.60

12.92+1.68 15.42+1.93 17.42+2.03 1а 03+2.07 11.54+1.08

р1,б<0.05

11.76+&30 а 88+2.29 11.21+5.30 9. 14+2.20 21.34+6.93

Пзраыетры^флворесценцки СИ 4 (иг2+) шкоцкгов^к^оаи: ^

Средний канал 64.14+6.70 флюоресценции

( иЭЗП)

Процент клеток 4.27*1.08

Удельная флюоресценция (тзап/%

р1,б<0.001 26.57*5.97

75.36+8. 42

4.26*1.24 р2,6< 0.001 22.69+7.05

65. 90+2.63

6.76+1.15 рЗ,6<0.001 20.32+5.04

5.66+2. £о " Э.05 ¿га 24

р4,6<о! Со 50. 31+? ~

66. 09+4. 60 р4,6<0.05

ll.54tl.03

32.35+5. 25

СЗ кошлешот (ггд/с11) (№ 83 - 177) 04 кошцеиент

«акторы кг.-.аигжета в сшюротке крови:

144.52+9.07 112.03+18,31 12а 6315.45 130. ОЗЛ 6.22 116.25116.21

К: 15 - 45)

29.82+1.90 р1.6<0.05

22.81+а 01

25.62+1.43 га 17+2.34 24.72+7.31

Высокий уровень корреляции между средними ■каналами флюоресценции С020 В лимфоцитов и СЮ6 (ЫКН1) естественных киллеров, наблюдавшийся во всех клинических группах , значительно снижался при раке пии/евода и желудка. Внесение в уравнение множественной корреляции параметров флюоресценции С014 и СБИЬ моноцитов способствовало значительному повышению коэффициента корреляции СЭ20 и МКН1 клеток. Можно предположить, что способность естественных киллеров регулировать функциональную активность В лимфоцитов снижалась в условиях онкологической патологии и могла быть компенсирована с помощью моноцитов.

Важной особенностью патологии органов пищеварения является интегрированность многочисленных патогенетических механизмов, в основе многих из которых лежат метаболические нарушения. Наш ис-оледована взаимосвязь иммунных белков с транспортными белками (альбумином, трансфертном, церулоллазмином, и аполипопротеинами), а также с белками острой фазы воспаления (альфа1-антитрипсином и альфа2-макроглобулином), выполняющими важную роль в метаболических и физиологических процессах.

Показано, что для больных раком 'пищевода и желудка было характерно значительное снижение уровня альбумина и церулоплазмина одновременно с низким содержанием иммуноглобулинов (табл. 7). У больных хроническим гастритом уменьшение концентрации в крови транспортных белков наоборот сопровождалось повышенным синтезом иммуноглобулинов и некоторым возрастанием белков острой фазы воспаления (табл. 7). Высокие уровни корреляционных связей, а также коэффициентов линейной регрессии между иммунными и транспортными белками наблюдались у больных с опухолевой патологией пищевода и желудка и свидетельствовали о сопряженности иммунопатологических механизмов и метаболических нарушений при указанных заболеваниях. Относительное повышение концентрации белков острой фазы воспаления при хроническом гастрите вероятно отражало патогенетические особенности данного заболевания, связанные с развитием воспалительного процесса и вовлечением поликлонального синтеза иммуноглобулинов.

Таблица 7. Функциональные группы белков в крови у больных с заболеваниями верхнего отдела питварительного тракта.

Группы больных

Белки 1. Хронический гастрит 2. Эрозивный ээофагит 3. Язва желудка 4. Дуоденальная язва Б. Рак пищевода 6. Рак желудка

1. Альбумин (N-37-51e/l) 49.9Ô+3. 36 р1,б<0.01 ¿7.1S+3. Si pl. 2< 0.001 47.00+3.64 р3.5<0. 01 р2,3<0. 001 43.06+1.65 р4,5<0. 01 р2,4< 0.001 31.82+3. 48 pl. 5* 0.001 31.13±4.54 рЗ, 6< 0. 05 р4,6<0. 05

2. Трансферрин (N-204-360mg/dl) 371. 70+24. 77 305.55+26. 44 £06. 63+15 95 pl, 4<0. 05

3. Церулоплазмин (N-21-53irg/dl) 20.1Ô+2.91 20. 43+3. 41 26. 63+2. 21 - 23. 38+1.30 ¿5. Ô2+3. 50 30. 25+D. Эб

4. Альфа-1-анти-трипсин (N-S5-213mg/dl) 164.83+11.42 14Ô. 50+16.56 140. 74+7. 14

5. Альфа-2-макро-глобулин (N-146-369mg/dl) 262.70+14.19 1ÔÔ. 70+10.72 pl,3<0. 001 193. 05+11.39 pl, 4<0. 001

6. Аполшюпро- • теин А (N-96-202mg/dl) ÔS. 72+17. 03 ' 78.15+11.53 05. Ô3+6.31 £3.12+9.04 105. 9+23. 7

7. Аполипопро-теин В (N-43-112mg/dl) 89. 32+15. 69 77.90+15.37 104.21+7.20 р4,6<0. 01 . 74. 76+8. 52 р4,5<0. 05 59.70+13.3

Как видно, различные виды патологии верхнего отдела пищеварительного трата характеризуются комплексом взаимосвязанных количественно-функциональных изменений иммунной системы, отражающих вероятно нарушения имыукокошетегкых клеток на уровне слизистой оболочки желудочао-кишечного тракта. Патогенетическая зкачншсть иммунологических сдвигов определяется не только степень» количественных изменений отдельных параметров по сравнению с нормальными вэличинами, но и характером их взаимосвязи с функциональными группами белков крови, метаболическими нарушениями в' организма, физиологическими и морфологическими иамэкенияии, а такзс- клшш-ческини особенностями болезни.

Каково место и значение колцчественно-фунзщиональных изызне-ннй имцушой системы у больных с патологией верхнего отдела пищеварительного тракта? Является дк огш еаконоызрным следствием метаболических н физиологических нарушений в организме больных, ео-дуздих к разнообразный нарушениям функциональных свойств сс^ати-чоских клеток, в том числе и клеток кмиуикой системы? Либо пару-пон/'Л регуляторной и эффокгорной функциии иммунной системы лежат в основе воспалительных процессов, кз«енений клеточной пролкфера-щш, диффэренцировки и в связи с этим ведут к развитию воспалительных н дистрофических изменений в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, шгут явиться важным фактором, способствующим развитию неопластическкх процессов в пищеводе и желудке?

Очевидно, «по трудно однозначно ответить на эти вопроса Вместе с тем, принимая во внимание различный характер иммунологических сдвигов при отдельных видах патологии верхнего отдела пищеварительного тракта (например, вовлечение факторов противоопухолевой защиты, повышение степени взаиюсвя8анности моноцитов при опухолевой патологии, или признаки поликлональной активации В лимфоцитов одновременно с более высоким уровнем бел)сов острой фазы воспаления при хронкческоы гастрите), можно предполоаяь достаточно специфическое участие.иммунной системы в отдельных звеньях патогенеза указанных заболеваний. Учитывая важную роль местных иммунных механизмов в поддержании иммунологического гомеостаза в

слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, их тесную взаимосвязь с системными иммунными реакциями, можно вполне обоснованно с нашей точки зрения рассматривать обнаруженные иммунологические сдвиги в качестве важных элементов иммунопатогенеза заболеваний верхнего отдела пищеварительного тракта В любом случае понимание механизмов иммунопатогенеза указанных заболеваний может явиться основой для разработки новых подходов к их интегрированной профилактике и дифференцированной терапии с включением методов, направленных на восстановление нарушенных иммунологических функций.

Предпринятые ранее попытки фармакологической иммунокоррекции при заболеваниях пищеварительного тракта представляются недостаточно эффективными и патогенетически обоснованными.

Как известно, в комплексной терапии болезней органов пищеварения ведущее значение имеет использование алиментарного фактора, обеспечивающего коррекцию разнообразных физиологических и метаболических нарушений. Многочисленные данные свидетельствуют о важной роли отдельных пищевых веществ (нутриентов) в функционировании клеток иммунной системы в качестве субстратов их метаболизма, регуляторов активации и взаимодействия в процессе иммунного реагирования. Вместе с тем реальные подходы к иммунокоррекции с помощью нутриентов недостаточно разработаны. Нами была поставлена задача выяснить возможность алиментарной иммунокоррекции в эксперименте и у больных с хроническими заболеваниями верхнего отдела пищеварительного тракта.

На модели адаптации человека к экстремальным воздействиям (гипоксии. Физической нагрузке и повышенной температуре) нами анализировалась взаимосвязь иммуноглобулинов и факторов комплемента с некоторыми биохимическими параметрами, характеризующими статус питания. Определение транспортных белков, участвующих в транспорте и метаболизации пищевых веществ, является, как известно, важны»/ критерием статуса питания, и их снижение может свидетельствовать об эндогенной недостаточности нутриентов . Нами было показано, что адаптационные процессы у человека сопровождаются повышением концентрации транспортных и других функциональных

групп белков крови. Высокий уровень корреляции наблюдался между иммунными белками и трансферрином.

Определение обеспеченности исследованных лиц различными витаминами позволила установить положительную корреляционную связь иммуноглобулинов и факторов комплемента с количественным содержанием в крови альфа-токоферола (витамина Е) и отрицательную свявь с уровнем ретинола (витамина А). Принимая во внимание зависимость указанных витаминов от экзогенного поступления, а транспортных белков - от характера питания, можно предположить возможность алиментарной модификации спектра иммунных белков, а также других функциональных параметров иммунной системы не только в условиях экстремальных воздействий, но и при патологии пищеварительного тракта

Нами на различных уровнях: клеточном - с использованием модели лшинолзависимой хемилюминесценции макрофагов, в эксперименте на животных, а также у больных с хроническим гастритом и язвенной болезнью, исследована возможность алиментарной модификации некоторых функциональных свойств иммунокомпететных клеток и предпринята попытка коррекции отдельных иммунных нарушений в условиях патологии.

В системе In vitro показано эффективное подавление окислительного метаболизма макрофагов альфа-токоферолом и продемонстрирована индукция лшинолзависимой хемилюминесценции макрофагов с помощью арахидоновой кислоты. Снижение респираторного взрыва макрофагов под влиянием токоферола может быть связано с его прямым антирадикальным эффектом, селективным ингибированием мембраносвя-ванных ферментов системы НАДФН-оксидоредуктаз, участвующих в формировании высокореакционных свободных радикалов кислорода,а также мемОраностабилиэирующей функцией витамина Е. Эффект арахидоновой кислоты вероятно обусловлен трансформацией жирнокислотного профиля мембраны и аллостерической активацией мембраносвяэанных ферментов респираторного взрыва макрофагов.

Характе влияния указанных нутриентов был подтвержден в эксперименте in vivo на моделях E-витаминной недостаточности и избы-

точного поступления полиненасыщэнных жирных кислот у крыс, в которых было показано значительное повышение кинетических параметров люминолзависимой хемилюминесценции макрофагов, не обеспеченное эффективной антиоксидантной защитой со стороны внутриклеточных ферментов - глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы. Кроме того при Е-витаминной недостаточности наблюдалось снижение степени эксимеризации флюоресцентного зонда пирена в макрофагах, что свидетельствовало о повышении микровязкости гидрофобной зоны мембран указанных клеток и подтверждало мембраноактивные свойства токоферола (табл.8).

Подавление мембранотоксической активности естественных киллеров по отношению к опухолевым клеткам К562 наблюдалось в условиях комбинированной недостаточности токоферола и ретинола, а тага® подострой затравки канцерогеном N-нитрозопиперидином. Фармакологические дозы указанных витаминов в составе ферментированного продукта оказывали иммунокорригирущее действие на противоопухолевую цитотоксичность естественных киллеров в условиях острой затравки крыс N-нитрозопиперидином (индексы мембранотоксичности при соотношении эффектор/мишень 50/1: 39.4б±2.70 - продукт и 31.74±2.20 -контроль, р<0.05). Ферментированный продукт, обогащенный физиологическими концентрациями токоферола и ретинола, а также микроэлементами, витаминами группы В, аскорбиновой кислотой и лизоцимным гидролизатом способствовал возрастанию кинетических параметров люминолзависимой хемилюминесценции макрофагов, повышению степени индуцированного восстановления НОТ фагоцитами крови, а также накоплению антителообразующих клеток в селезенке в ответ на иммунизацию эритроцитами барана.

Обнаруженные эффекты вероятно в значительной степени связаны с действием таких компонентов ферментированных продуктов, как пептиды, образуемые в результате молочнокислого гидролиза казеина, гликопептиды и липополисахариды стенок лактоСактерий, а также бактериологические ферменты, образуемые в процессе ферментации (Namba et al.1981, DeSlirone et al. ,1987, Perdleon et al.1988).

Таким образом нами экспериментально на моделях in vitro и in

Таблица . Влияние Е-витажнной недостаточности и полиненасыщенных жирных кислот на окислительный метаболизм перитонеальных макрофагов.

Группы экспериментальных животных

1, Контроль

п~8

г. Дефицит витатна Е п-9

3. Избыток

шшк

п-11

Кинетические параметры люминолзависимой хемилюминесценции макрофагов, стимулированных опсониэированным зимозаном:

Максимальная скорость респираторного взрыва, шУ/гпт

Интегральный показатель за 10 мин. тУ

Интегральный показатель аа 20 мин. тУ

4.50+1.20

276. 20+69.60

715. 20+152.00

14. 80+3.80 р1,2<0. 05

790.10+185. 50 р1,2<0. 05

1709. 90+336.70 р1,2<0. 05

Активность антиоксидантных ферментов в макрофагах:

Супероксиддис-мутаза, ед. акт/ /1 млн. клеток

Глутатионперок-сидаза, нмоль окисл. НАДФ-Н/ /1млн. клеток

6. 40+1. 40

91.60+16.10

3. 30+0. 80 р1,2<0. 05

83.70+11.0

17. 50+5. 40 р1,3<0. 05

706.60+171.60 р1,3<0. 05

1527. 8+368. 90 р1,3<0. 05

4. 80+0. 80

67. 80+4. 80

Степень эксимеризации флюоресцентного зонда гшрена в макрофагах:

Коэффициент

эксимеризации

пирена

0.400+0.012

О. 357+0. 015 р1,2<0. 05

vivo продемонстрирована возможность модификации функций иммунной системы с помощью отдельных физиологически активных нутриентов и комплекса алиментарных факторов в составе ферментированного продукта Показано, что некоторые иммунологические эффекты нутриентов реализуются на уровне иммунокомпететных клеток, в частности, путем модификации физико-химических свойств плазматических мембран. Полученные экспериментальные данные легли в' основу иммунологических исследо1. ¡ий у больных с хронической патологией верхнего отдела пищеварительного тракта в рамках клинической алррбации разработанного ранее ферментированного продукта, обогащенного Физиологическими дозами токоферола, аскорбиновой кислоты, витаминов группы В, а таюке микроэлементами и лизоцимним гидролизатом.

Продукт, оказывая благоприятный клинический эффект, способствовал нормализации патологически высоких уровней иммуноглобулинов в крови у больных хроническим гастритом с сохраненной секреторной функцией. В частности это относится к иммуноглобулинам А и G, содержание которых в сыворотке крови больных до лечения составляло 317. 6±37.32 mg/dl (N-70-312) и 1631.Б±83.96 rt^/dl (N-639-1349) соответственно, а после лечения снижалось до нормальных величин: 292.3±41.6 mg/dl - IgA и 1379.6±103. 9 п^/dl - leG. Уровень транс-феррина у больных с данной патологией до лечения бил виде нормы: 371.78±25.32 mg/dl (N-204-360), лечение продуктом способствовало его нормализации (305.23i27. 76 rre/dl). Аналогичная тенденция сохранялась и для других белков - СЗ и С4 факторов комплемента, альфа- 1- антитрипсина и альфа-2-макро глобулина

У больных хроническим гастритом с секреторной недостаточностью в результате лечения продуктом восстанавливалась сниженная противоопухолевая цитотоксичность естественных киллеров (индекс мембранотоксичности при соотношении эффекторов и мишеней 6.25/1 до лечения продуктом: 6.69Ü.79. после лечения: 20. 99i5. О), а также повышался уровень сывороточного альбумина (с 39. 04±4.0-1 ^/1 до 52. 44i6. 35).

Наконец, обогащенный ферментированный продукт однозначно подавлял уровень спонтанного восстановления НОТ при язвенной болез-

ни и хроническом гастрите, что следует рассматривать как благоприятный эффект, направленный на ограничение не,.индуцированных фагоцитарной реакцией деструктивных процессов свободнорадикальногс окисления. j l

Нам представляется, что имело, место специфическое иммуномоду-лирувдэе действие обогащенного ферментированного продукта, который восстанавливал патологически измененные функции.иммунной системы у больных с хронической патологией верхнего отдела пищеварительного тракта. Ка это указывали, в частности, результаты экспериментальной апробации отдельных вариантов обогащенных ферментированных продуктов, когда использовались соответствующие контрольные группы. Важным преимуществом ферментированных продуктов, как иммунокорригирукщих средств, является фармакологический характер действия иммуноактивных компонентов при сохранении физиоло-гичности алиментарного воздействия. j - '

Многообразные физиологические эффекты ферментированных продуктов, наряду с широкой возможностью модифицировать их состав, комбинируя различные нутриенты с известными иммунокорригирующим* свойствами, позволяют рассматривать их в качестве перспективны) средств комплексной терапии заболеваний верхнего отдела пищеварительного тракта

ВЫВОДЫ '

1. Иммунофенотипирование мононуклеарных клеток, выделенных из би-оптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки человека, показало, что в отличие от периферической крови лимфоцитi слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта характеризуйте} низким соотношением CD4/CD8 субпопуляций клеток, доминированиек CD8 супресеорных/цитотоксических лимфоцитов над CD4 субпопуляцие< в кишечнике, низкой экспрессией CD2 и CD3 антигенов Т лимфоцитов, повышенным процентным содержанием CD56+ естественных киллерньв клеток и В лимфоцитов, несущих маркер CD20.

2. В эндогенном содержимом (перфузатах и смывах) тонкой кишки человека доминировали иммуноглобулины А, концентрация которых более

чем в 2 раза превышала IgM и в 4 раза - IgG. Более 50% иммуногло-5улинов локализовалось в свободной фракции эндогенного содержимого, а остальная часть была в той иди иной степени интегрирована го слизью пристеночного слоя тонкой кишки.

3. Использование лазерной проточной цитофлюориметрии для иммуно-{йнотипирования периферической крови у больных хроническим гастритом, эрозивным ч^офагитом, язвенной болезнью," раком пищевода и ¡келудка показало ..-докую информативность анализа параметров, характеризующих распределение на клетках антигенов лимфоцитарной дифференциации: среднего канала флюоресценции (mean) и удельной флюоресценции (iman/Z).

4. Иммунофенотипирование позволило установить достоверное повышение указанных' параметров CD2 и CD3 Т лимфоцитов у больных раком келудка по сравнению с хроническим гастритом; общую тенденцию к повышению экспрессии CD4 антигена лимфоцитов на фоне снижения процентного' содержания данной популяции клеток у больных с предо-пухолевой и опухолевой патологией пищевода и желудка, а также язвенной болезнью; значительное повышение соотношения CD4/CD8 лимфоцитов ,по удельной флюоресценции у больных с предопухолевой и эпухолевой патологией пищевода и желудка, а также с язвенной болезнью по сравнению с донорами. При этом наблюдалось подавление лролиферативного ответа лимфоцитов цельной крови на фитогемагглю-гинин.

5. Низкое процентное' содержание клеток, экспреесирушаэтх CD56 (NKH1) антиген естественных киллеров и значительнее повышение степени экспрессии данного антигена наблюдалось у больных эрозивным эзофагитом - предопухолевым заболеванием пищевода, по сравнению с больными раком пищевода и здоровыми донорами. Вместе с тем знижение противоопухолевой цитотоксичности естественных киллеров 5ыло характерно для больных как с опухолевой, так и предопухолевой патологией пищевода и желудка. При язвенной болезни имело место повышение индексов цитотоксичности естественных киллеров

5. У больных раком пищевода и желудка наблюдалось снижение ; - -с тигельного числа В лимфоцитов, экспрессирующих маркеры CCC.J и

CD21, a такте HLA-DR антиген, одновременно■ с увеличением плотности указанных мембранных молекул (повышение параметров mean и mean/£). у указанных больных значительно снижались уровни иммуноглобулинов в крови. Корреляционный анализ позволил установить отрицательные связи между иммуноглобулинами и степенью экспрессии В лимфоцитами CD20 и CD21 антигенов. . i

7. Многосторонний анализ фагоцитарной системы крови показал достоверное снижение кинетических параметров люминолзависимой хеми-люминесценции нейтрофилов, стимулированных опсонизи;ованным зимо-заном, у больных хроническим гастритом, язвенной болезнью и раком пищевода; высокий уровень спонтанного восстановления ШТ фагоцитами цельной крови у больных язвенной болезнью; отсутствие существенных изменений параметров респираторного взрыва нейтрофилов, стимулированных форболмиристатацетатом, а также способности нейтрофилов к фагоцитозу флюоролатекса .

8. Относительное количество моноцитов крови, экепрессирующих CD14 (Мэ2) антигенный кластер было достоверно снижено у больных раком пищевода, эзофагитом и гастритом; средний канал флюоресценции (mean) указанных клеток достоверно повышался при раке пищевода. Корреляционный анализ позволил установить значительное возрастание при раке пищевода связи экспрессии CD14 антигена с другими дифференцировочными кластерами, которая была низкой у здоровых доноров и у больных язвенной болезнью.

9. Иммунохимическая оценка белкового спектра крови с помощью метода кинетической нефелометрии показала снижение уровня альбумина и церулоплазмина одновременно с низким содержанием иммуноглобулинов у больных раком пищевода и желудка а также эрозивным эзофагитом. При хроническом гастрите уменьшение концентрации в крови альбумина, церулоплазмина и аполипопротеина А наоборот сопровождалось повышенным синтезом иммуноглобулинов и некоторым возрастанием белков острой фазы воспаления.

10. Корреляционный и регрессионный анализ позволил установить высокий уровень связей между иммунными белками и другими функциональными группами белков крови при хронических и опухолевых забо-

.еваниях пищеварительного тракта Взаимосвязь между иммунными и ранспортныш белками была подтверждена такте в исследованиях с спользованием модели адаптации человека к экстремальным воздейс-виям (гипоксии, физической нагрузке и высокой температуре). Кро-:е того было показано, что иммуноглобулины и факторы комплемента' оложительно коррелируют с уровнем в крови витамина Е и отрица-елъно с витамином А.

1. На клеточно.. адели путем оценки люмиолозависимой хемилвми-есценции макросов показана возможность модификации in vitro кислительного метаболизма указанных клеток с помощью витамина Е : арахндоновой кислоты. В эксперименте in vivo наблюдалось значи-елыюе повышение кинетических параметров люминолзависимой хеми-юминесценции . макрофагов при дефиците витамина Е и избытке доли-енасыкрнных мирных кислот. Комбинированная недостаточность вита-инов Е и А в условиях подострой затравки животных канцерогеном -нитрозопиперидином приводила к подавлению противоопухолевой ци-отоксичности . естественных киллеров. Указанные витамины в фарма-шогических концентрациях в составе ферментированного продукта называли , иммунокорригирующее действие на естественную противоо-ухолевую цитотоксичность в условиях острой затравки эксперимен-альных животных N-нитрозопиперидином.

2. В процессе клинической апробации продукта молочнокислой фер-¡ентации, обогащенного витамином Е, аскорбиновой кислотой, вита-инами группы В, микроэлементами, лиаоцимным гидролизатом, отме-:алась нормализация высоких уровней иммуноглобулинов и трансфертна в крови у больных хроническим гастритом с сохраненной секре-ией; наблюдалось восстанавление сниженной противоопухолевой ци-отоксичности естественных киллеров, установлено повышение уровня ывороточного альбумина при хроническом гастрите

секреторной недостаточностью, подавление высокого уровня не свя анного с фагоцитозом спонтанного восстановления НОТ при язвенной олезни и хроническом гастрите. Иммунокорригирущие свойства обо-шденных ферментированных продуктов, наряду с высокой биологичео-.ой и клинической эффективностью, позволяют рассматривать их ис-ольэованне в качестве перспективных средств в комплеюшой тера-:ии заболеваний пищеварительного тракта

список onnomix рлтт, спуелшювлгш?; по теме accept ации

1. Окислительный мотаОолизм макрофагов и состояние йврментс аотйоотадзитной защиты //Докл. Акад. наук СССР.-1985. -285-N3-0759-r'6S (соавт. Айдарханов Б. В. , Шарма!юв Т. Е )

2. Effect of vitamin £ deficiency on oxidative metabolism ar tint ¡oxidant enzyrriss activity of macrophages //Annalc of Nutritic and Hitabollsio. - 1990. -34-pi43-146 (соавт. Aidarkhanov 8. B. Kurii^irijalinov S. №. )

3. Влияние витшяна E на окислительный метаболизм макрофаге //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1986-N6-c72i 725 (соавт. Курмангалинов С. Я , Айдарханов Б. Б.)

4. Влияние полиненасывдгнпых жирных кислот на иммунный ответ окислительный метаболизм макрофагов//Куриал микробиол. эпидем. m мунол. -1985. - КЗ -с52-55

5. Влияние алиментарных про- и антиоксидантных факторов г окислительны"! метаболизм макрофагов //Вопр. питания - 1985. N3. -с52-55

6. Пищевые вещества и функционирование меток иммунной ежи мы// Вопр. питания. -1990. -N1. - о. 4-11

7. Повышение активности естественных киллеров у крыс с недос таточностыо витамина А // Вопр. питания.-1989.-N2.-30-32 (соавч Сатаров А. С., Конь И. Я)

8. Изучение возможности коррекции иммунной системы с помзиц пищевых продуктов //Вопр. питания.-1986. -N4. -39-41 (соавт-. Т. Ш. Ulaj манов, Д. И. Вигдорович, В. Б. Айдарханов)

9. Влияние диет с различным содержание жирорастворимых витг минов на противоопухолевую цитотоксичноеть естественных килл« ров//3дравоохранение Казахстана. -1989. -Н8. -с31-33 (соавт. Canape А. С. Дасполатов Б. К)

10. Питание, гипокинезия и иммунитет//Здравоохраненке Казахе, на.-1985.-N8.-с.54-58 (соавт.Шарманов Т. Ш.,Айдарханов Б. Б.)

И. Роль отдельных нутриентов в функционировании клеток имчу! ной системы и изучение возможности диетической иммунокорре! ции//Основние проблемы аллергологии.-Алма-Ата.-1987.-с. 65-70 (ct авт. Паричков Т. KL .5«дотов II В.)

12. Глл'ж шг-гми крови: имиувохш.таеский пнакиз н *те><;оч кинет; ческой i!!'4'i.noM-?Tp-iin и клиническое ?r.t4'*Hi!'' пр;; •.•• nr.

:итс и язвииной болезии'/Акгуальиыг попроси 6i{ox«:.w/. человека л швотних. -Алма-Ата. -1990. -с45-54 (соавт. Лукьянова К. íL »Ka&flfeKGit П. , Курмаигалинова И. Л., Бп.чиепа И. Р.)

13. голь антиокеидантньи енотом в фу^сционироганпи макрофа--'он//Ь снмп. по аллергологии и клин, иммуногогии оои. стран: fea. доил. «Варна, Болгария. -1935. - с. ¡313

14. ОДюцюналыдо активность естественн',!>: киллеров перифери-кчжой крови больнж чроническим гастритом и язвенной болезнью в нюцоисс-- лйч^иия спецкачионрованним продуктом// 4 яационалы'мй гимпозиум по пиганию и гастроэнтерологии Hl*J5i Тез. докл. - Со-Бия, 1988. - с.69 (соавт.Сьпздов А.С.)

15. Роль липидов и антиокоидлнтов в функционировании иммунной !истемы//ВдесошньЯ симпозиум /го Сюммш жядечоз: Тез. докл. >лм1-Лта,1987. - с. 227-223 (соавт. Шрманэв Т. ш., АЛдархаьов .1 В. , Курмангалинов О, М.)

1С. Иммунокоррокция с помощью лечебно-профилактических продуктов// Кснф. аллергологов и иммунологов Средней Азии и Казахстана: "ев. дою;. - Алма-Ата, 1986.-с. 5о

17. Активность супероксиддиснутпзы и глутатюнпероксидазы клеток иммунной системы при дефиците витамина Е // Бсес. еимл. по ■:вд. энзпмологии. - Махашсала, 1986. - с. 157-158 (соавт. Зннчук Г. Я , Абишев Б. X. ,Курмангалинов С. М.)

18. Иммунопатологические болезни органов пищеварения. Клини-jocKoe значение исследования именных белков крови у больных хро-шческим гастритом и язвенной болезнью // Питание здорового и больного человека. - Матер, межреспубликанской конф. - Ааха-5ад,193&. - с. 44-4G (соавт. Сапаров А. С. .Еияшева И.?.)

19. Роль питания в модификации метаболического и Фуккционалъ-юго состояния организма /7 4 конф. биохимиков республик Средней \зии и Казахстана: Матер. конф. - Акхабад,1686. - с. 394-305 (со-1вт. Ширманой Т. Ш. «Синявский Ю. А. , Айдархачов Б. Е.)

£0. Применение нового обогащенного кисломолочного продукта 'Кигер" для профилактики и лечения больных и беременных с анемией, а тшеж хроническими заболеваниями органов пищеварения // Ме-од. ре ком. - Алма-Ата, 1980. - 10с.

21. Юшико-эксперименгальная оценка продукта ферментации мо-гока, обогащенного альфа-токоферолом // Биоантиоксидант: Матер. 3

Всесоюзной конференции. - КЬсква.1989. - с. 262-263' (соавт. Айдар-хашв Е Б. .Сапаров А. С., Тасполатов В.К.) •

22. Использование алиментарных факторов в качестве специфи-ческиих иммутомодуляторов // Матер. Всесоюзного семинара и пленарного заседания по проблеме "Антибиотики". - ШскваД988. - с. 3-4 (соавт. Айдарханов Б. В., Курмангалинов С. М., Тасполатов Е К.)

23. Иммунокоррекция активности естественных киллеров больньа хроническим гастритом с помощью обогащенного кисломолочного продукта // Там же. - с.147-148 (соавт. Сапаров А. С., ТасполатоЕ Б. К , Никитин С. А., Айдарханов Б. а)

24. Иммунные белки крови и противоопухолевая цитотоксичносте естественных киллеров у больных хроническими заболеваниями органов пищеварения // 1 Всесоюзный иммунологический сЬезд: ,Тез. докл. - Сочи,1989. - с.145

25. Иммунопатология и алиментарная коррекция при заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта //Актуальные вопросы питания и проблемы аяиментарно-эависймых заболеваний в республиках Средней Азии и Казахстане: Матер, конф. - Карши, 1990. - 211-213

26. Особенности нарушений киллёрных механизмов лимфоцитов при катаральном и эрозивном эзофагитах // Там же. - с. 82-83 ( соавт. Цой И. Г., Сапаров А. С.)

27. Взаимосвязь между отдельными функциональными группам? белков крови и витаминной обеспеченностью людей в условиях высокогорья/Лам же. -с. 165-166 (соавт. Ким Б. И.,Курмангалинова И. А.)

28. Иммунопатология хронических и опухолевых заболеваний пищеварительного тракта // Экологические аспекты иммунопатологических состояний: Матер. Всес. конф. - Алма-Ата, 1990. - т1. - с. 74

29. Клинико-экспериментальная оценка иммуномодулирующих свойств нового обогащенного ферментированного продукта "Ша-Фе" // Реабилитация иммунной системы: Матер. 2 междунар. симпозиума. - Дагомыс, 1990. - с. 359 (соавт. Курмангалинов С. М., ТасполатоЕ Б. К , Курмангалинова И. А.)

30. Активность естественных киллеров и лимфокин-активирован-ных киллеров периферической крови больных предопухолевыми заболеваниями и раитом пищевода//Там же. -с. 90(соавт. Цой И. Г. .Сапаров А. С

31. Клеточные иммунные механизмы и белки крови при • заболеваниях верхнего отдела пищеварительного тракта // Физиология пище-

варения и всасывания: Матер. 15 Всесоюзной конф. - Краснодар. 16Р0 (еоавт. НлЛтибеков Е. Б. , Асы.'бекона Д., Мухамбетьярола ДР.)

32. Оксигемоглобин как источник радикалов кислорода при хем.:-лгаишсцентном методе исследования плазмы крови // Всес. совеяь го хо.\ашомикесценции: Тез. докл. - Уфа, 19S6. - е. 68 ( соавт. Кур-мачглдмнов С. М. , Андарханов В. В, , Токмурзил К. У.

яз. Дшшюлвачномквд хекилкшиесцекция полимэрфнолдернш кде-тск человека, стимулированных о.тсониэпрованнш зимсганом, форбол-кириотатацетатсм и опухолевыми клетками KG62 // Иммунопатология и аллергия. - Алма-Ата, 1491. - е. 191-195 (соавт. Мухамбетьярова Л. Р.

34. Модифицирующее влияние алиментарных факторов на иммунологические реакции // Современны» методы иммунотерапии : Матер. Всесоюзной конф. - Ташкент, 1984. - с. 28Й-239

ЗЬ. Иммунный ответ и окислительный метаболизм в иммуноко,¡патентных клетках в условиях гипокинезии и разнохе.рктерного питания // Актуальные вопросы науки о питании: Матер конф. - Москва, 1985. - с. 93 (еоавт. Зинчук Т. Я , Тасполатов Б. К.)

35. Immunologic function and metabolic disorders In piitier.ts with pathology of allirontary tract // 10 th Meeting of European Federation of Immunological Societies: Abstracts. Fdinburgft,1990 (соавт. Saparov A. S., Mukhambotjarova L. R., Kalshifcekov E.B. .Asylbekova D. T.)

37. Perspectives for utilization of Immune properties of mamrialian milk and colostrum // Most important issues of modern nutrition science: Soviet-American Symposium, Abstracts. Alma-Ata, 1990. - p. 34-35 (соавт. Kurirangallnov S. M., Aldarkhanov В. B.)

38. Nutrition and food allergy // Там же. - p.51-52 (соавт. Nuemanova Z. S. , E?enzhpr>ova 13. M.)

39. Nutrition and immunity: clinloal and experimantal aspects // Там же. - p. 66 - 67 (соавт. Monakhov В. V., Saparov A. S.)