Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунобиологические особенности пыльцы хлопчатника и ее роль как аллергена в специфической диагностике при поллинозах

ШНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ТАШКЕНТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ВТОРОЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

Р Г о ОД

2 /} цоя -по-» ш правах и^01"500

МАВЛЯНСВА Нигера Вэситовна

УЖ 616-056:3:576.8.097.2-02

ИММУНОШ0Л01ИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПЫЛЬЦУ ХЛОПЧАТНИКА И ЕЁ РОЛЬ КАК АЛЛЕРГЕНА В СПЕЦШЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ПРИ П0ЛЛИН03АХ

(14.00.36 - Аллергология н иммунология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент - 1997 гол

Работа выполнена в Ташкентском научно-исследовательском институте вакцин и сывороток.

НАУЧНЬй РУКОВОДИТЕЛЬ: поктор медицинских наук,

профессор М.М.ШЖЕРДЬШВ.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: д.м.н., проф. Ш.Я.ЗАК1РХ0^ЛЕВ

д.б.н., проф. П.Х.ХАЛИХОВ

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕВДЕНКЕ: институт иммунологии Ali Республики

Узбекистан

Защита диссертации состоится "_"_ 199? г.

е ."_" часов на заседании специализированного Совета

Д.087.09.02 при Ташкентском Государственном Втором медицинском институте. Адрес: 700109. гор.Ташкент, ул.Фароби, 2.

С ииссертэцией можно ознакомиться в библиотеке институт;!.

Автореферат разослан "_"_ 1227 г.

Ученый секретарь специализированного Совета,

доктор медицинских наук, А.А.БАТЫРБЕКОЗ

профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

А1ГГУАДЬН0СТЬ ТЕШ. В настоящее Еремя аллергические иоиезни являются актуальной проблемой здравоохранения, что объясняется катастрофическим ростом заболеваемости ими населения высокоразвитых стран. Число больных во всем мире каждые 10 лет удваивается (А.Д.Адо и соавт., 1980-1995).

Даже в экологически благополучных районах обнаружена высокая степень сенсибилизации населения. Отмечается тенденция к дальнейшему росту заболеваемости поллинозами особенно в промыш-ленно развитых странах С'Д.М.Хакбердыэв, 1989-1996, Ш.И.Наврузова, 1994).

Однако Еедущей причиной аллергозов остается пыльца растений и продукты переработки растительного сырья. Поллинозы (Р011еп -пыльца) распространены повсеместно, а вряде регионов, таких как Краснодарский край, Туркмения, южная зона Казахстана, они занимают первое место среди всех аллергических заболеваний (Н.Д.Беклемишев и соавт., 1995).

Неблагополучной зоной в отношении поллинозов остается и Узбекистан, на полях которого в огромных количествах выращивается хлопчатник.

Б настоящее время для специфической диагностики имеется только аллерген из волокна хлопчатника. В связи с отсутствием диагностического препарата не проводится специфическая диагностика аллергоза к пыльце хлопчатника. Сегодня такой препарат тлеет первостепенное значение и необходим в достаточном количестве для специфической диагностики не только в Узбекистане, но и всех государствах, где выращивается хлопок-сырец.

Цель работы - изучить физико-химические, иммунобиологические и аллергенные свойства пыльцы хлопчатника, определить технологические параметры приготовления из него препарата, пригодного для специфической диагностики аллергии.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ :

1. Изучить общую морфологическую структуру пыльцы хлопчатника метопом электронной сканирующей микроскопии.

2. Приготовить несколько серий аллергенов, различающихся по •концентрации активного начала для изучения состава аллергена в

широком наборе тестов и клинических испытаний.

3. Изучить физико-химические, иммунохимические и специфические аллергенные свойства пыльцы хлопчатника.

4. Изучить компонентный состав аллергена из пыльцы хлопчатника с помощью хроматографии низкого давления.

НАУЧНАЯ НСШЗНА. Впервые получены и изучены препараты, выделенные из аллергена пыльцы хлопчатника кри'огидратным метолом. Показана неоднородность отдельных криогидратных фракций, по содержанию веществ отличающихся.как по молекулярному в'есу, так и по химической природе. Отобран и отработан метод получения кри-огидратных фракций, стабилизированных методом лиофилизации. Изу-! «юны иммунобиологические свойства тоталвного аллергена и его составляющих фракций. Доказано, что экстракт из пыльцы хлопчатника вызывает сенсибилизацию, а также развитие общего анафилактического шока. Выявлено, что наиболее активные в иммунохимическом отношении компоненты тотального аллергена содержатся во второй криогидратной фракции. Определена роль тотального аллергена и его фракций в этиологии поллинозов для больных, имеющих специфическую повышенную чувствительность к нему.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Разработана и оформлена техническая документация на диагностический аллерген из пыльцы хлопчатника. Экспериментальный производственный регламент и фармакопейная статья на изготовление и контроль этого аллергена утверждены на научно-техническом Ученом Совете Ташкентского КЖВС (протокол № 4 от 5 мая 1993 г.). Впервые показана возможность получения лиофилизирйЕанных препаратов из пыльцы хлопчатника, что позволяет наметить исследования для усовершенствования технологии получения диагностических и лечебных аллергенов.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Экстракт из пыльцы хлопчатника обладает аллергенными и антигенными свойствами.

2. Аллерген из пыльцы хлопчатника состоит из биополимеров, различавдихся по молекулярному весу, Сахаров, олигосахзридов и минеральных соединений.

3. ■ Аллерген из пыльцы хлопчатника обладает высокой специфической активностью и может быть использован для специфической диагностики аллергических заболеваний, в этиологии которых

имеет значение пыльца хлопчатника.

.4. Пыльцевые зерна хлопчатника крупные многодырчатые, на

поверхности имеют шипы и поры.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ В ПРАКТИКУ.

1. Составлено и разослано в лечебно-профилактические учреждения Узбекистана информационное письмо "Пахта гули чангига аллергия тар^алишининг худупий хусусиятлари, специфик диагностика-си бз профилактикаси", утвержденное Главным управлением науки и новой технологии ГЛЗ РУз (Ташкент, 28.09.1392 г.).

2. Основные положения и выводы, изложенные в диссертации используются в учебном процессе кафедры патологической физиологии и кафедры детской аллергологии Ташкентского педиатрического медицинского института при чтении лекций и проведении практических занятой по разделам "Реактивность", "Аллергия", "Поллинозы", и

'"Иммунология". ""

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА.

Основные разделы диссертации выполнены автором самостоятельно. При участии автора изучена общая морфологическая структура пыльцы хлопчатника с помощью электронного сканирующего микроскопа на базе лаборатории морфологии института иммунологии ГЛЗ Российской Федерации (Е.Л.Игонин), определен молекулярный Еес от-, дельных фракций пыльцы хлопчатника методом жидкостной хроматогра*-фии к.м.н. В.Н.Синяшн, исследована специфическая активность аллерген:.! из пыльцы хлопчатника на практически здоровых и больных поллинозами (к.м.н. Б.Б.Бахромов).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные положения диссертации положены на научных конференциях кафедры патофизиологии ТашШЭД и лаборатории аллергологии ТашНИИЗС (Ташкент, 1990-1993 гг.), научно-практической конференции аллергологов Узбекистана (Ташкент, 1909), на 1-ом съезде аллергологов и иммунологов Турменистана (Ашгабад, 1991), на 1/ом Республиканском съезде иммунологов и аллергологов Узбекистаана (Са- • марканд, 1991), на 1-ом съезде иммунологов и аллергологов Чувашии (Чебоксары, 1991), межлабораторной научной конференции Ташкентского НИИВС (Ташкент, 1992), Международном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата, 1992), научно-

практической конференции молодых ученых ТашЕЛИ и ТащЩИВО (Ташкент, 1993), заседании научно-практического общества иммунологов и аллергологов Узбекистана (Ташкент, 1994), объединенной научной конференции модико-биологических дисциплин ТашПЛИ и лабораторий ТашНИИВС (1997).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Ссноеной текст диссертации изложен на 71 странице машинописи

Работа состоит из введения, обзора литературы,материала и методики, объема выполненной работы и исследований, 3-х глаг собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего III отечественных и 87 зарубежных источников. Текст иллюстрирован 4 таблицами и 16 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Пыльцу хлопчатника собирали на хлопковых полях Берхнечир-чикского района Ташкентской области, в период массового цветения хлопчатника (июль-август) в утренние часы (6.00-9.00), когда не наблюдается опадения пыльцы. При этом из каждого цветка изымали только пыльценос вместе с пыльцой. Материал помещали в стеклянные колбы. Собранный материал высушивали в специально оборудо-йанном поллинарии. Сухой продукт просеивали через набор сит и собирали фракцию, проходящую через сито Л 7. Аллерген из пыльцы хлопчатника готовили по общепринятой методике приготовления неинфекционных аллергенов по :,ШП'У-42 (А.Д.Адо и соавт., 1933).

Ультраструктуру пыльцы хлопчатника изучили с помощью японского электронного сканирующего микроскопа.

Ахшрогенность>'воды определили на трех кроликах. Безвредность приготовленного аллергена проверили на 85 лабораторных животных: белых мышах - 25, белых крысах - 20, морских свинках - 20, кроликах - 20.

Стерильность приготовленного аллергена из пыльцы хлопчатника проверяли путем его посева в тиогликолеЕых средах, которые вместе с исследуемым аллергеном выдерживали в течение 14 суток

притемпературе +37°С для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов и при +22°0 - для выявления грибов. Содержание фенола в аллергенах определяли по Р.А.Волковой и соавт., (1971). Биохимическую стандартизацию аллергена проводили по белковому азоту,который определяли реактивом фолина методом Лоури (И.С.Гущин,1973). Удовлетворительные и адекватные результаты по содержанию белка в препарате были получены методами Къельдаля и Песслера (последний метод разработан в лаборатории биохимии ГИСК им.Л.А.Тарасевича). Фракционный состав и молекулярный вес отдельных фракций аллергена изучали методом жидкостной хроматографии низкого давления. В качестве носителей применяли гели сефалаксов <3- -25, G -50, & -75 и G -100. Исходный аллерген фракционировали криогидратным :.гетодсм. Для изучения аллергенных свойств пыльцы хлопчатника эксперименты были поставлены на 190 животных. Всего были проведены 1025 исследований. Общий анафилактический'шок на морских свинках воспроизводили путем трехкратной их сенсибилизации по общепринятой методике (А.Д.Адо и соэет., 1971). Для изучения антигенных свойств экстракта из пыльцы хлопчатника кр'оликов многократно иммунизировали по общепринятым схемам (В.Ф.Лукманова и соавт.,1967, Х.Фримель, 1970, С.А.Захваткина, 1983).

Преципитирующие антитела в сыворотке крови иммунизированных кроликов определяли иммунодиф^узией в геле по Ouchte-г лу (1949).

При проведении экспериментов на лабораторных животных соблюдали принцип гуманного отношения к ним: применяли местную (2% новокаин) и общую (рауш наркоз эфиром) анестезию (Г.В.г.йтина и соавт. 1979, В.В.Карпенко, 1985, С.А.Куфлина и соавт., 1985).

Биологическую стандартизацию аллергена из пыльцы хлопчатника и его фракций проводили по И.Лишка (1963) в соответствии с современными требованиями на добровольцах - 25 практически здоровых: мужчин - 10, женщин - 15, в возрасте 20-50 лет и-70 больных поллинозами, имевших и не имевших контакт с пыльцой хлопчатника:

мужчин - 45, жвкшян-25, в возрасте 18-60 лет.

Статистическую обработку цифровых данных проводили на электронном микрокалькуляторе RocuTift Zntt-t^ciiLOMCiC !4odt£ - 44 (Япония). Результаты считали достоверными при t >2 и Р<0,05. (А.И.Ойвин, I960).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОВСТДДЕНИЕ.

Хлопчатник относится к ветвистш кустарниковым травам высотой Ьо 1,5 м. В Средней Азии в основном выращивается хлопчатник мохнатый - 'iSoi^fp'^u■w^ г * «£«</9. Кустарник высотой 50-60 см. Стебель ветвистый, от основания деревенеющий. Листья тре- пятилопа-стные. Растение умеренно опушенное. Цветки одиночные, при распускании утром белые или кремовожелтые (без центрального пятна). Постепенно к вечеру приобретают лиловый цвет. Каждый цветок цветет один день. Цветение куста длится много недель (июнь-сентябрь., иногда и октябрь).

При сканирующей электронной микроскопии пыльцевые зерна хлопчатника представляют собой крупные, многодольчатые и многодырчатые образования. По обе стороны от экватора, на равном расстоянии между типами и полосами проходит два пояса пор (по 10 в каждом). Экзинз увенчана шипами длиной 10-10 мк. Между соседними порами находится по два шипа.. Диаметр пыльцевых зерен без шипов 98,1 мк, с типами - 116 мк.

Концентрация фенола в аллергенах составляла 0,2-0,35^, что соответствует предъявляемым требованиям. Для изучения безвредности аллергена опытным животным вводили его подкожно, внутримышечно, внутривенно,- внутрибрюшинно в следующих количествах: белым мышам- - по 2,5-5,0 мг/кг, белым крысам - по..1,3-2,6 мг/кг, морс-, ким свинкам - по 0,6-1,6 мг/кг, кроликам - по 0,15-0,2 мг/кг. Контрольные животные в те же сроки и в том же количестве получали экстрагирующую жидкость.

Исследования показали, что аллерген из пыльцы з хлопчатника является безвредным. За время наблюдения, в течение 2-4 недель, все животные были активны, рефлекс по приему пищи не снизился, отмечали прибавку в массе.

Содержание белка в аллергене при определении по Къельдалю составило -.1 6+0,01 мг/мл или 6500 ВР£//мл, по биуретовому методу - 1,37+0,12 мг/мл или 7000 РЛ^/мл, по Несслеру - 0,56+0,15 мг-мл или 8000 Р/П//мл.

Для соизмерения данных содержания условного- белка в препарате с проявлением аллергенной активности при его аппликации провели исследование с осадком, образующимся при добавлении в аллерген фосфорно-вольфрамовой кислоты.

Для более полного представления об аллергене был изучен

химический состав по некоторым химическим тестам. Криогидратные фракции аллергена из пыльцы хлопчатника не одинаковы по содержанию белка. Фракций аллергена различаются и по содержанию зольного остатка. Редуцирующая способность углеводных компонентов кри-огидратных фракций обнаруживается только после гидролиза. Это свидетельствует о том, что углеводные компоненты в этих субстратах представлены в виде олигосахаридов. В колонках со всеми видами носителей были получены однотипные'результаты, хотя профиль элюции фракций для отдельных носителей несколько отличался.

Анализ профиля элюции при измерении проб на спектрофотометре при 280 нм показывает, что криогидратная фракция I (ф-1) содержит три субфракции, условно обозначенных как СФ-I.I, СФ-1.2, СФ-1.3. По скорости элюции эти субфракции распределяются так: СФ-I.I. - 24,45?, СФ-1.2. - 47,7%, Сф-1.3. - 30,-1%. Неоднородная и криогенная фракция 2, которая имеет четыре субъединицы в соотношении: СФ-2.1 - 13,СЙ, СФ-2.2 - 55,СЙ, СФ-2.3. - 20,8S?, СФ-2.4 - 10,952. •

Профиль элюции криогидратной фракции 3 при измерении ее отдельных проб при длине волны 280 нм обнаруживается только один компонент и в незначительном количестве.

Несколько иная картина наблюдается при измерении тех же проб элюции при длине волны 226 нм. 3 криогидратной фракции I выявляется три доминантных компонента, содержащихся в различных количествах и различающихся по молекулярному весу. В этой фракции содержится: СФ-Ia - 29,1%, СФ-Ití - 65,7%, СФ-1в - 5,0$.

В криогидратной фракции 2 определяется до семи- отдельных субъединиц. Однако доминирующими биополимерами являются СФ-2.1. до 22,7% и СФ-2.4. - 39,0. Все остальные субъединицы в этой фракции составляют около 15,0$.

В криогидратной фракции 3 при длине волны 226 нм выявляется пик (компонент) в пробах 200-210 мл элюции и компонент 260-300 мл элюции второго компонента во фракции 3 содержится - 83,тогда как в пробе элюента 200-210 подобного вещества содержится всего лишь около 14,СЙ.

Результаты изучения криогидратных фракций в колонке с сефа-дексом (г -100 и элюции фосфатным буфером рН=7,2 позволяют-предложить- Ш'о в каждой криогидратной фракции содержится несколько, компонентов биополимеров, а в суммарном аллергене (во всех трех

криогидратных фракциях) - больше 10 субъедяниц, различающихся по химическому составу.

Субъединицы биополимеров аллергена с наиболее высоким молекулярным весом содержится в криогидратной фракции 2, а с наиболее низким - во фракции З..Все остальные фракции, по нашим данным,составляют сложные вещества, в частности гликопротеиды. ■

Наши данные были подтверждены при анализе растворов Крахмала, который наибольшую степень поглощения имеет при длине волны 226 к;:. ~

Для выяснения достоверности полученных результатов определяли редуцирующие вещества до и'-после гидролиза. Редуцирующая способность аллергена и его фракции до гидролиза практически равна нулю, а после гирролиза редуцирующая способность отдельных фракций достигает 45 т/%. Эти обстоятельства позволяют нам'высказывать предположение, что аллерген содержит не только полипептиды и олигосахариды, но и гликопептиды, в' тотальном экстракте - углеводы, органические кислоты и различные соли.

Установлено, что экстракт из пыльцы хлопчатника обладает выраженными аллергенными свойствами. У всех сенсибилизированных морских свинок, при внутривенном введении им разрешающей позы специфического аллергена ¡развивались анафилактические реакции различной степени тяжести клинического течения вплоть до- летального исхода.

Так, из общего количества сенсибилизированных животных - 55 шок со смертельным исходом наблюдали у 30 (54,6$), тяжелый шок -у II (20.,0%), средней тяжести - 3 (5,4$), легкий - у II (20,0/2). Следовательно, смертельная и тяжелая формы общего анафилактического шока наблюдали у 41 (74,6$). Анафилактический индекс (АИ).= 3,0.

У контрольных животных, получивших экстрагирующую, жидкость признаки общего анафилактического шока отсутствовали.

Для выяснения специфичности- анафилактической реакции поставили специальные опыты на 20 морских свинках (опытных - 5, контрольных - 15). Всех животных: и опытных, и контрольных сенсибилизировали аллергеном из пыльцы хлопчатника. На 18-й день сенсибилизации опытным животным в качестве разрешающей довы аллергена внутривенно вводили специфический аллерген из пыльцы хлопчатника,

а контрольным - аллерген, изготовленный из другого сырья: из

пыльцы грецкого ореха, коконов тутового.шелкопряда.-или экстрагирующую жидкость•• . ■•■-.,

Результаты исследований подтвердили наше .предположение о специфичности анафилактической реакции, вызываемой аллергеном из пыльцы хлопчатника: у. всех животных, сенсибилизированных аллергеном из пыльцы хлопчатника и получивших.при разрешающей инъек- . ции тот же препарат (экстракт из пыльцы- хлопчатника-), развились анафилактические реакции различной степени выраженности - анафилактический индекс = 3,4; у всех животных, сенсибилизированных . аллергеном из пыльцы хлопчатника, но получивших при разрешающей ' инъекции яругой аллерген (из пыльцы грецкого ореха-,--кокон тутового шелкопряда) общая анафилактическая -реакция отсутствовала, анафилактический индекс равнялся нулю (Р<0,05).

Сравнительные исследования показали,• что аллергенная актив- ' ность цыльцы хлопчатника (АИ в 3,0-3,4) несколько уступает аналогичной активности нормальной лошадиной сыворотки (ЛИ =4,0) и приближается к аллергенной активности пыльцы айлантуса (АИ=»3,6).

В сыворотке крови морских свинок, активно -сенсибилизированных аллергеном из пыльцы хлопчатника выявили "сенсибилизирующие специфические гомоцитотропные антитела (ГЦА), средние отрицательные логарифметрические титры (М+м ' к0,10?™1 находились в пределах 2,3+0,2 - 5,5+0,4. Величина титра ГЦА зависела от степе^-ни развития сенсибилизации: чем сильнее была сенсибилизация, тем выше был титр антител. Наблюдалась коррелятивная связь между тя-" жестью анафилактического шока в и титром ГЦА ( £ = 0,98).

Для ло клинической оценки коммерческого аллергена как диагностического препарата необходимо было определить его иммуноген-нке свойства." Их нёобхогамо было подтвердить в прямых иммунологических опытах по способности стимулировать антителогенез; а затем установить наличие преципитирующих антител в иммунохимичес-ких реакциях.

В результате проведенных исследований было установлено, что в сыворотках крови всех животных, иммунизированных аллергеном, имеются специфические преципитирующие антитела. Зоны преципитации формировались только с сывороткам кроликов, иммунизированных аллергеном из пыльцы хлопчатника, а против сывороток крови от контрольных животных зон преципитации не формировались. У 3 кроликов из 7 опытных титр специфических преципитирующих антител составил 1:16, а у 2 - 1:64, у'2 - 1:128.

Все дальнейшие опыты по изучению антигенной активности аллергена и его криогидратных фракций, выделенных из тотального солевого экстракта, проводили с сыворотками кроликов, имевшими титр 1:128. При использовании этих сывороток крови формировании зон преципитации заканчивалось через 24 часа' и выявлялось максимальное количество антигенных компонентов в исследуемых образцах.

Полученные даннне свидетельствуют о том, что в тотальном солевом экстракте (аллергене) из пыльцы хлопчатника имеется два компонента, манифестно взаимодействующих с антителами иммунной сыворотки. Важно было выяснить: в каких криогидратных фракциях содержатся эти биополимеры. Для этого мыгровели опыты с криогид-ратными фракциями. Растворы фракций готовили из расчета, чтобы в •образце концентрация белка составила 2 мг/мл.

При исследовании было установлено, что с первой криогидрат-ной фракцией формируется две зоны преципитации: ближе к лунке с сывороткой до титра 1:8 и ближе к лунке с аллергеном до титра 1:32 Со второй, соответственно, 1:128 и 1:64, с третьей - 1:8 и 1:4.

Таким образом, наиболее активные в иммунологическом отношений, компоненты тотального аллергена содержатся во второй криоги-дратной фракции.

Результаты биологической апробации были следующими: у большинства больных, имевших в анамнезе контакт с пыльцой хлопчатника наблюдали' положительные реакции различной степени выраженности. В целом, из 20 обследованных больных положительные реакции отмечались у 17 (85,СЙ), в том числе слабая степень - у 3, умеренная -у. 8, выраженная - у 6. У большинства больных, не имевших контакта о пыльцой хлопчатника кожные пробы были отрицательными. Однако у небольшой части пациентов - 3 (15,С$), наблюдали положительные реакции, что свидетельствует о наличии у них скрытой сенсибилизации к данному аллергену. Наряду с этим, у определенной части больных, имевших в анамнезе контакт с пыльцой хлопчатника сенсибилизация не развилась, что, по-видимому, связано с индивидуальными особенностями реактивности организма больных.

У всех практически здоровых кожные пробы на аллерген из пыльцы хлопчатника были отрицательными.

Нами также были поставлены кожные пробы с различными фракциями аллергена из пыльцы хлопчатника на практически здоровых (15) и больных (30). При проверке криогидратных фракций, выделенных из аллергена пыльцы хлопчатника установлено, что в контрольной

группе ни у одного пациента не развивалась положительная реакция ни на одну из фракций.. В то'же время в группах, имевших контакт .с пыльцой хлопчатника, развивалась активно, причем у некоторых пациентов манифестность развития реакции достигала высшего проявления, особенно при постановке кожных проб с фракцией 2. У пациентов, не имевших контакт с пыльцой хлопчатника на фракцию I результаты кожных проб были отрицательными, а с фракциями П и Ш удавалось выявлять наличии скрытой сенсибилизации.

Результаты проверки аллергена и его криогидратных фракций свидетельствуют, что аллерген - тотальный солевой экстракт из-пыльцы хлопчатника - пригоден для специфической диагностики явной и скрытой сенсибилизации у пациентов, имеющих специфическую повышенную чувствительность к пыльце хлопчатника.

Криогидратные фракции вызывают специфические аллергические реакции при аппликации их лицом, сенсибилизированным пыльцой хлопчатника или её компонентами. Наиболее выраженные реакции наблюдаются у сенсибилизированных пыльцой при постановке кожных проб с фракцией 2.

Вероятно, диагностические препараты на основе криогидратных фракций могут быть более эффективными субстратами для конструирования препаратов как для диагностики, так и лечения больных поллин'озами.

ВЫВОДЫ:-.

1. При сканирующей электронной.микроскопии обнаружено, что на поверхности пыльцевых" зерен хлопчатника имеется многочисленные шипы и поры.

2. Аллерген из пыльцы хлопчатника представляет сложное вещество, ' состоящее не менее чем из 20 субъединиц, различающихся по молекулярному весу и химическим.свойствам. Биополимеры.с наиболее низкой молекулярной массой во фракции I и 1П.

3. Экстракт из пйльцы хлопчатника обладает аллергенными свойствами. У морских свинок, сенсибилизированных данным аллергеном, успешно воспроизводится общий анафилактический шок, активная и пассивная кожная анафилаксия.

4. Аллерген из пыльцы хлопчатника обладает антигенными свойствами: в сыворотке крови иммунизированных кроликов обнаруживаются специфические преципитиругацие антитела. Наиболее активные в ' иммунохимическом отношении компоненты тотального аллергена содержится в криогидратной фракции - П.

•

5. Результаты проверки аллергена и его криогидратных фракций свидетельствуют, что аллерген - тотальный солевой экстракт из пыльцы хлопчатника - пригоден для специфической диагностики сенсибилизированных людей пыльцой хлопчатника.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОЗАШЫХ- ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Хакбердыёв Й;:М., Мавлянова Н.В. - Аллергенные свойства пыльцы хлопчатника'//Тезисы докл.1-го Республиканского съезда иммунологов и аллергологов УзбССР 14-17 мая 1931 г."Актуальные вопросы клинической иммунологии и'ретиональной-'аллергологии." "Уз-бекистон" Ташкент, 1991." - С.236.

2. М.ГЛ.Хакбердыёв, С.А.Захваткина, Н.В.Сусина, Б.Б.Бахромов, Н.З.Мавлянова, И.В.Сгибова '(Ташкент) "Региональные особенности пыльцевых аллергенов1Узбекистана, их производство, значение в специфической'диагностике поллинозов//Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии в'Аридной :"зоне'. Ашхабад,'1991 г., С.52.

3. С.А.Захваткина, А.В.МавляноЕЭ, И.В.СгибОЕа, 1С.X.Хакбердыёв. "Аллергенные и антигенные свойства пыльцы хлопчатника, айлан-туса, кенафа и 'листьев табака//Тезисы I съезда иммунологов и аллергологов Чуваший/Чебоксары, 1991. -'С.56.

4." С.А.Захваткина, И.Р.Бабаева,'Н.В.Мавлянова "Специфическая активность пыльцевых аллергенов"//Микробиология, иммунология,эпидемиология, профилактика инфекционных'заболеваний. Ташкент, 1991. - С.82-84.

5. Н.В.Мавлянова. Аллергенные свойства пыльцы хлопчатника и её специфическая активность/Дезисы Международного симпозиума по а'ллергологии и клинической иммунологии. Алма-Ата, 1992. - С. 124.

6. И.В.Сгибова, И.-В.МавляноЕа "Аллергены из пыльцы кенафа и хлопчатника//Актуаяьные вопросы иммунологии и аллергологии. Сб. научных трудов. Ташкент, 1992. С.79-83.

7. Н.В.Мавлянова. Пахта гуличангига аллергия таркалншининг худупий хусусиятлари, специфик диагностикаси, профилактикаси// Ахборот хати. Тошкент, 1992. - 3 б. • -

8. М.М.Хакбердыев, Н.В.Мавлянова, Сгибова И.В., Юлдашев И.Р. и др. - Периферическая кровь и комплемент сыворотки крови у морских свинок при сенсибилизации аллергенами из пыльцы айлантуса,

хлопчатника, кенафа, грецкого ореха и чинары//Тезисы докл.юбилейной науч.конф."Проблемы биотехнологии, микробиологии, эпидемиологии и профилактики инфекционных заболеваний". ТашНИИВС 75-лет

(1918-1993). Ташкент, 1993. - С.73-74.

9. МавляноЕа Н.В., Сгибова И.В., Хакбердыев Т.Ы., Захватки-на С.Л. и пр. - Специфическая активность аллергенов из пыльцы хлопчатника, кенафа, айлантуса, полыни, дебелы и мари//Тезисы докл. юбилейной кауч.конф. "Проблемы биотехнологии, микробиологии, эпидемиологии и профилактики инфекционных заболеваний. Таш-БИИЗС 75-лет (1918-1993). Ташкент, 1993. - С.76-77.

Н.В.МАВЛЯНОВА

ПАХТА ГУЛИ ЧАНГИНИНГ ИММУНОБИОЛОГИИ ХУСУСИЯТЛАРИ ВА УНИ АЛЛЕРГЕН СИФАТИДА П0ЛЛИН03ЛАРНИНГ СПЕЦИФИК ДИАГНОСТИКАСИДАГИ ТУТГАН УРНИ

X У Л О С А

Криогидрат усули билан пахта гули чанги аллергенидан препаратлар ажратиб олинди ва урганилди.

Пахта гули чанги доначаларини сканирловчи электрон микроскопда текширилганда уларнинг нуп тешикли эканлиги, сат^ида тиканаклари ва ьоваклари борлиги аницланди. Хар бир органелла Узига хос кимёвий хусусиятга эга.

Акратилган криогидрат фракцияларининг молекуляр оркрлиги ва кимёвий таркиби бир хил эмаслиги аницланди. Барцарорлаштирялган лиофилизацияга асосланган фракцияларни ажратиб слиш усули ишлаб чичилди.

Уыу.мий препаратнинг ва унинг таркибига. кирувчи фракцияларнинг иммунобиологии хоссалари урганилди. Пахта гули чанги экстрактининг сенсибилизация чацириши исбот цилинди ва у умумий анафилактик шикнинг ривожланиши билан тасди}{ланади. Пахта гули чангидан олинган аллергеннинг антигенлик ){оссасига эга эканлиги шу модда билан и(лмунизацияланган 1[уёнларнинг чон зардобида специфик преципитация-ловчи антителалар борлиги билан исботланди. Умумий аллергендан ажратиб олинган иккинчи криогидрат фракциянинг иммунокимёвий жи^атдан энг фаол эканлиги аницланди.

Пахта гулидан олинган аллерген диагностик аллерген сифатида ючори специфик фаолликка эга ва этиологиясида пахта гули чанги аНамиятга эга булган аллергик касалликларнинг специфик диагностика-сида цулланилиши мумкин.

H. V. HAVLANOVA

Innnnobioloeical peculiarities o-f cotton pollen and its role as an allergen in specific diagnostics at pollenoses.

RESUME

The preparations were obtained and subjected to studies which ted been separated from the cotton pollen allergen by cryohYdrate method.

Wille ebKJjts an electronic scanning microscopic studies, the rol Ionized cotton seeds have been found to be nultlholed with spines and pores on the surface thereof.

A non-unlienrity of separate cr/ohydratc fractions W3S ejfoiblted both for tbjlr nolecular wlcbt and for their chemical nature. A BEthod was ¿sielcred and worXed out to obtain cryohYdrate tractions stabilized fcy lloFbTlitlc nethod. .

'Ibe lnnunoblological properties of the total preparation and its components have been studied. It was proved that tlie extraction from the. cotton pollen causes sensibilization confirmed with the develoHiwrit. of the general anarhylatlc shocK.

The allergen made of cotton pollen possesses the antigenic properties, 1. e. specific precipitating antibodies have been found in the blood serum of lmnunized rabbits.

Tbe total allergen components which are cost active with avlew of their iiKnunocbemistry are contained in the cryohYdrate fraction 2. .

Allergen made of cotton pollen possesses high specific activity as a diagnostic a Hereon, and may be used for the purposes of specific diagnostics roetbodology for allergic diseases, the etiology of which is'Siffected by the Cotton pollea