Иммуно-цитохимические критерии диагностики и прогнозирования течения хронического токсоплазмоза

Кончакова, Анна Александровна

Диссертации по медицине → Инфекционные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Иммуно-цитохимические критерии диагностики и прогнозирования течения хронического токсоплазмоза

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Кончакова, Анна Александровна Ростов-на-Дону 2008 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.10

Автореферат диссертации по медицине на тему Иммуно-цитохимические критерии диагностики и прогнозирования течения хронического токсоплазмоза

На правах рукописи

Кончакова Анна Александровна

003453АЫи

ИММУНО-ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОКСОПЛАЗМОЗА

14.00.10 - Инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

' I- г

П 1 ■

Ростов-на-Дону 2008

003453480

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Авдеева Марина Геннадьевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Пшеничная Наталья Юрьевна доктор медицинских наук, профессор Беляева Наталья Михайловна

Ведущая организация: Российский государственный

медицинский университет

Защита состоится « » Л, 2008 года в «■//?» часов на заседании

V у

диссертационного совета Д 208.082.02 при ГОУ ВПО Ростовском государственном медицинском университете (344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан «Ур» /У^Г/уЙ-^ 2008 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Т.Н. Кузина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Токсоплазмоз представляет актуальную проблему современной инфекционной патологии и включен в программу ВОЗ по изучению зоонозов. Это вызвано широким повсеместным распространением токсоплазмоза. Так, в странах СНГ инфицировано около 30% населения, в Санкт-Петербурге - до 25%, а общее число инфицированных в мире составляет 1,5 млрд человек [Ю.В .Лысенко и соавт., 2002; Ю.В.Лобзин, 2003].

В настоящее время прояснены многие особенности эпидемиологии и патогенеза токсоплазмоза. Тем не менее, сохраняется ряд спорных и неоднозначно решаемых вопросов в области диагностики и лечения его хронических и латентных форм. Малоспецифичная клиническая симптоматика токсоплазмоза существенно затрудняет диагностику обострения хронических форм заболевания. Принципиальную важность диагностика обострений токсоплазмоза приобретает во время беременности. Активация хронического приобретенного токсоплазмоза, происходящая у беременных со сниженным иммунным фоном, может оказывать неблагоприятное влияние на течение беременности и родов и требует своевременного медицинского вмешательства и наблюдения. В то время, как широко распространенное носительство токсоплазмоза или латентное течение процесса не нуждается в проведении лечения [Л.А.Колесникова-Тартынских, 1998; И.П.Терещенко и соавт., 2006]. До настоящего времени отсутствуют достаточно надежные лабораторные критерии специфической диагностики обострения хронического токсоплазмоза, а его клинические проявления на фоне беременности могут быть малотипичными и стертыми.

Так, основными методами лабораторной диагностики токсоплазмоза являются серологические методы (ИФА, РНИФ). Однако, данные серологической диагностики не позволяют достоверно диагностировать

обострение процесса и оценить эффективность лечения [В.В.Васильев, 2003]. Сложившаяся ситуация требует пересмотра и систематизации диагностики токсоплазмоза в зависимости от периода заболевания и применяемых схем лечения.

Чувствительными критериями активности и прогноза течения инфекционного и паразитарного процесса являются цитохимические показатели лейкоцитов и уровень нитрита сыворотки крови, отражающий содержание синтезируемого макрофагами эндогенного иммуномодулятора - оксида азота [М.Г.Шубич 2003; М.Г.Авдеева и соавт., 2004]. Не претендуя на специфичность в диагностике, данные показатели рассматриваются в контексте общих клинических проявлений и позволяют оценить эффективность лечения. Предшествующими исследованиями показано участие макрофагов в патогенезе токсоплазмоза, а также роль иммунологических нарушений в формировании хронического течения заболевания [Э.Ь^Ыеу, 2000; Т.В.Бейер, 2003]. Определение цитохимической активности клеток лимфоцитарно-макрофагальной системы в совокупности с оценкой уровня оксида азота и показателей клеточного иммунитета при хроническом токсоплазмозе ранее не проводилось.

Цель исследования: повышение качества диагностики и эффективности лечения больных токсоплазмозом на основе разработки клинико-лабораторных и иммуно-цитохимических критериев определения стадии течения процесса и оценки эффективности проводимой терапии. Задачи исследования:

1. Изучить особенности клинического проявления приобретённого токсоплазмоза у взрослых в остром периоде, в периоде обострения хронического течения и в периоде обострения на фоне беременности.

2. Изучить частоту сочетания хронического приобретённого токсоплазмоза с другими оппортунистическими инфекциями:

цитомегаловирусная инфекция, герпетическая инфекция, хламидийная инфекция, инфекция, вызванная вирусом Эпштейн-Барр.

3. Изучить активность кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы лейкоцитов у больных с приобретённым токсоплазмозом в остром периоде, в периоде обострения хронического течения и в периоде обострения на фоне беременности.

4. Изучить особенности иммунологического ответа по уровню показателей клеточного иммунитета (CD3, CD4, CD8, CD16, CD19), иммуноглобулинов, ЦИК, оксида азота у больных с хроническим токсоплазмозом.

5. На основании изучения иммуно-цитохимической активности макрофагально-лимфоцитарной системы, ИФА, РНИФ, разработать клинико-диагностические критерии оценки стадии течения токсоплазмоза.

6. Разработать патогенетически обоснованные показания к началу этиотропной терапии, а также критерии оценки ее эффективности.

Новизна исследования. Определены особенности клинического течения острого и хронического приобретённого токсоплазмоза, в том числе у беременных. Установлена высокая частота сочетания хронического токсоплазмоза с другими оппортунистическими инфекциями: цнтомегаловирусная инфекция, герпетическая инфекция, хламидийная инфекция, инфекция, вызванная вирусом Эпштейн-Барр.

Впервые установлено диагностическое значение повышения активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы лейкоцитов при остром приобретённом токсоплазмозе. Впервые, на основании повышения активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы лейкоцитов, диагностировано обострение течения хронического приобретённого токсоплазмоза, в том числе на фоне беременности.

Впервые изучено диагностическое значение уровня оксида азота у больных с хроническим приобретённым токсоплазмозом, в том числе на фоне беременности с осложненным течением. Изучены изменения иммунологических показателей: клеточного иммунитета (СЭЗ, СБ4, СЭ8, СО 16, СО 19), уровня иммуноглобулинов и ЦИК. На основании изучения активности лимфоцитарно-макрофагальной системы, показателей иммунитета, ИФА, РНИФ, ПЦР разработаны клинико-диагностические и прогностические критерии течения паразитарного процесса при гоксоплазмозе. Разработаны патогенетически обоснованные показания к началу этиотропной терапии хронического токсоплазмоза, а также критерии оценки ее эффективности.

Практическая значимость. Материалы исследования позволили расширить понимание патогенеза токсоплазмоза. Показана роль кислой фосфатазы, кислой неспецифической а-нафтилацетат эстеразы лейкоцитов и оксида азота в диагностике обострения хронических форм токсоплазмоза. Выявлены изменения иммунной системы при обострении хронического приобретённого токсоплазмоза, и определены показания к проведению селективной иммунокоррекции. Разработан алгоритм диагностики течения хронического приобретённого токсоплазмоза, предложены критерии прогнозирования характера течения паразитарного процесса. Определены патогенетически обоснованные показания к началу этиотропной терапии, а также критерии оценки ее эффективности.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Острый приобретённый токсоплазмоз характеризуется выраженным повышением цитохимической активности лейкоцитов в виде увеличения активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы наиболее существенной в моноцитах.

2. Обострение хронического приобретенного токсоплазмоза проявляется в вице умеренного повышения в крови активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы преимущественно в лимфоцитах и нормальными значениями уровня оксида азота.

3. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется выраженным повышением в крови активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов при нормальном уровне активности в моноцитах.

4. Эффективная этиотропная терапия токсоплазмоза приводит к нормализации цитохимической активности лейкоцитов, что является прогностическими критериями достижения стойкой ремиссии.

Внедрение результатов работы. Результаты диссертационной работы внедрены в работу специализированной клинической инфекционной больницы департамента здравоохранения Краснодарского края и других инфекционных стационарах (отделениях) Краснодарского края. Отдельные положения диссертации включены в лекции и практические занятия интернов и курсантов кафедры инфекционных болезней ФПК и ППС КГМУ.

Апробация диссертационного материала. Основные результаты работы доложены на VII Российском съезде инфекционистов «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней» (Нижний Новгород, 2006), первой, второй и третьей Южнороссийских научно-практических конференциях с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России» (Геленджик, 2005; Майкоп, 2006; Сочи, 2008); юбилейной научно-практической конференции «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2006), VIII всероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007).

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе в издании, рекомендованном ВАК.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 157 страницах, состоит из введения, 5 глав, включая обзор литературы, трёх клинических примеров, заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, иллюстрирована 24 таблицами, 15 рисунками. Библиографический указатель включает 189 источников, в том числе 100 отечественных и 89 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика больных и методов исследования. В соответствии с целями и задачами работы проводилось наблюдение 129 больных токсоплазмозом, из которых 20 больных страдали острым токсоплазмозом, у 78 больных диагностирован хронический приобретённый токсоплазмоз в стадии обострения и 31 беременная с клиникой обострения хронического приобретенного токсоплазмоза, находившихся на лечении на базе специализированной клинической инфекционной больницы г. Краснодара, на базе ООО Медико-фармарцевтического объединения «Клиника «На здоровье» с 2004 по 2007.

Возраст больных колебался от 17 до 54 лет, средний возраст составил 29,6±1,09 лет. Клиническая картина и лабораторные показатели изучались в динамике заболевания с минимальной кратностью 1 раз в 7 дней. Диагноз токсоплазмоза устанавливали на основании клинико-эпидемиологических и лабораторных данных. Все больные были обследованы серологическим методом ИФА с определением специфических антител класса Ig М и Ig G.

Общие анализы крови и мочи, биохимические исследования крови (билирубин, аминотрансферазы, белок и белковые фракции, креатинин, мочевина, щелочная фосфатаза и другие) проводили по общепринятым унифицированным методикам (Клинический диагноз - лабораторные

основы // Меньшикова В.В., Дедов И.И., Маколкин В.И., Мухин Н.А. Под редакцией Меньшикова В.В., 1997) и кинетическими методами на анализаторе Carmey Livia.

Об уровне оксида азота судили по содержанию ближайшего метаболита оксида азота нитрита в крови. Использовался метод, основанный на реакции Грисса (Ikeda M. et al., 1995; Navarro J.A. et al.,1996). Сущность его состоит в осаждении белков сернокислым цинком и проведении реакции, основанной на способности нитрита диазотировать сульфаниловую кислоту с образованием красно-фиолетового диазосоединения с а-нафтиламином. Интенсивность окраски, пропорциональную содержанию нитрита, измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длинне волны 538 нм.

Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определялось методом M. Digeon et al. (1977) в модификации Н.А.Константиновой (1986) с применением в качестве реагента полиэтиленгликоля 6000. Метод основан на изменении величины светового рассеяния раствора полиэтиленгликоля вследствие осаждения им ЦИК из сыворотки крови.

Гуморальное звено иммунной системы оценивали по содержанию в крови В-лимфоцитов и иммуноглобулинов основных классов (A, M, G) по методике G. M anchi ni (1965) (Иммунологические методы, 1987).

Исследование количества популяций и субпопуляций лимфоцитов проводилось методом моноклональных антител (МКАТ) с использованием моноклональных антител ЛТЗ (CD3), ЛТ4 (CD4), ЛТ8 (CD8), ИК090 (CD3), ИК091 (CD22), ИК092 (CD71), ИКОЮ5 (CD25) путем выявления клеток в иммунофлуоресцентном тесте по стандартной методике, разработанной в лаборатории моноклональных антител НИИ Иммунологии РАМН и с помощью пероксидазоантипероксидазного метода (Д.Ф.Глузман и соавт., 1988; А.Ю.Барышников, 1990).

Определение активности кислой фосфатазы (Goldberg, Barka в модификации М. Г. Шубина, М. Г. Авдеевой, 1988). Принцип метода основан на реакции азосочетания с использованием в качестве субстрата а-нафтилфосфата натрия, который под действием кислой фосфатазы (КФ) при рН 5,5 расщепляется с образованием а-нафтола. Последний немедленно вступает в реакцию азосочетания с гексозатированным розанилином. В результате реакции образуется нерастворимый азокраситель красно-коричневого цвета, распологающийся в местах локализации КФ.

Определение активности а-нафтилацетат эстеразы (по методу Ku]enkampff,1977). В основе метода лежит реакция азосочетания. В качестве субстрата реакции используется а-нафтилацетат натрия, расщепляемый а-нафтилацетат эстеразой до а-нафтола. Последний вступает в реакцию азосочетания с гексазотированным п-розанилином, с образованием нерастворимого азокрасителя красно-коричневого цвета, который откладывается в местах локализации неспецифической эстеразы.

Клинические и лабораторные показатели регистрировались в специально разработанной карте и обрабатывались методами вариационной статистики с применением персонального компьютера.

Вычислялись средняя арифметическая вариационного ряда (А/), стандартное отклонение (&), ошибка среднего арифметического (т) общепринятыми методами (А.М.Мерков, Л.Е.Поляков, 1974). Для оценки достоверности различий сравниваемых показателей пользовались критерием Стыодента. В случае альтернативной вариации оценка связи между признаками проводилась по методу четырех полей путем вычисления коэффициента ассоциации (Q). Связь между признаками (показателями) при Q от 0 до 0,29 расценивалась как слабая, от 0,3-0,69 -умеренная, от 0,7 до 1,0 - сильная.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Клиника острого приобретённого токсоплазмоза у взрослых характеризуется наличием у 90-100% больных астеновегетативного синдрома (головная боль, сонливость, слабость), лимфоаденопатии в подчелюстной и задней шейной областях, субфебрилитетом, длящимся 1-3 мес., а так же развитием в 40-45% случаев артралгии, миалгии, снижения памяти, гепатомегалии, в 80% отмечаются признаки ДЖВП и хронического панкреатита с нарушением обмена билирубина в 20%. Клиническая картина хронического приобретённого токсоплазмоза в периоде обострения характеризуется, помимо выше перечисленных симптомов, наличием полилимфаденопатии в подмышечной области, снижение зрения (56%) с изменением на глазном дне (2,5%), анорексией (47%), гепатомегалией (58%), повышением трансаминаз в 65% случаев до 1,5 норм и нарушением обмена билирубина в 60%. Клиника обострения хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности отличается наличием в 80-93% случаев астеновегетативного синдрома, миалгии и артралгии, лимфоаденопатии в паховой группе лимфатических узлов, субфебрилитет отмечается в 16,7% случаев.

Анализ полученных данных показал, что при сравнении клинического течения острого и хронического токсоплазмоза выявился ряд особенностей прогрессирования патологического процесса. Так, если у больных с острым течением заболевания преобладающим являлся астеновегетативный синдром, синдром интоксикации и лимфаденопатия, то при хроническом течении процесса уже достоверно чаще регистрировались признаки органной патологии со стороны зрения и печени. Особенностью вовлечения в патологический процесс лимфатической системы явилось преимущественное поражение лимфатических узлов в задней шейной и подчелюстной группах при остром токсоплазмозе и в подчелюстной и подмышечной группах при

хроническом течении процесса. Лимфатические узлы при остром течении заболевания имели эластичную консистенцию и были умеренно болезненны, в то время как при хроническом течении становились плотными, безболезненными и могли достигать значительных размеров.

Если при остром токсоплазмозе достоверно чаще наблюдалась патология желчевыводящей системы (ДЖВП) и изменения поджелудочной железы (0=0,53), то для хронического токсоплазмоза более типичным являлось нарушение функции печени в виде гипертрансфераземии, повышения эхогенности печени при УЗИ и повышения уровня щелочной фосфатазы. При этом нарушения в билирубиновом обмене одинаково часто наблюдались при остром и хроническом течении заболевания. При исследовании общего анализа крови у больных острым и хроническим приобретённым токсоплазмозом отклонений от нормы выявлено не было.

Установлено, что типичными симптомами при обострении хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности были лимфоаденопатия в паховой группе лимфатических узлов в 93,3% случаев, астеновегетативные нарушения и миалгии составили по 80%. В группе обследуемых беременных достаточно редко отмечался субфебрилитет 16,7'/и. Признаки поражение вегетативной нервной системы выявлялись в виде эмоциональной лабильности у 24 человек, что составило 80,0% случаев. Обследование на оппортунистические инфекции, проведено у 78 больных хроническим приобретённым токсоплазмозом. Данные отражены на рис. 1,2,3.

У всех наблюдаемых беременных имела место акушерско-гинекологическая патология: фетоплацентарная недостаточность - 12 (40%), задержка внутриутробного развития плода - 5 (16,7%), угрожающие преждевременные роды - 15 (50,0%), симптомы гестоза - 14 (46,7%), патологический прелименарный период -5(16,7%).

Снижение зрения Анорексия Головная боль Гепатомегалия Снижение памяти ¡£ Артралгии и миалгии Сонливость Слабость Субфебрилитет Полилимфаденопатия

з25:

с_

Э 3!

Э 45 3 45

55 :

Л 65 :

У........Л

ТшО

Рис. 1. Частота встречаемости клинических симптомов острого приобретённого токсоплазмоза.

Нарушение на глазном дне Изменение на ЭКГ Нарушение памяти Повышение зхогенности печени по данным УЗИ Анорексия Артралгии и миалгии УЗИ-признаки ДЖВП и хронического панкреатита Гепатомегалия Снижение зрения Субфебрилитет Полилимфаденопотия Астеновегетативный

45 47

1 1 1 1 1 [II

"ТТ' Т 1 ; 1

^ ^ ; у ; > У У

Рис. 2. Частота встречаемости клинических симптомов хронического приобретённого токсоплазмоза.

70" | 60-1 504030 20 10 ! о-!

цитомегало герпетическая хламидийная вирус

вирусная инфекция инфекция Эпштейн-Барр

инфекция

Рис. 3. Вероятность встречаемости оппортунистической инфекции в сочетании с хроническим приобретённым токсоплазмозом

Цитохимическая активность лейкоцитов при остром приобретённом токсоплазмозе. У больных с острым приобретённым токсоплазмозом суммарная активность КНЭ лимфоцитов достоверно превышала уровень контрольной группы в ¡,6 раз (Р<0,001), составляя в среднем 172,8±3,59 у.е. против контроля 111,3±1,9 у.е.. Уровень активности КНЭ моноцитов был достоверно (Р<0,001) повышен в 1,6 раз, составляя 146,3±1,93 у.е. против контроля 89,1±10,8 у.е.. Активность кислой фосфатазы лейкоцитов также была существенно повышена во всех клеточных группах. Уровень КФ лимфоцитов в среднем составлял 1) 8,4=2,80 у.е., достоверно превышая уровень контроля (31,7±2,32 у.е.) в 3,7 раз (Р<0,001). КФ моноцитов оказалась самой активной, составляя в средних значениях 112,7±1,99 у.е. и также достоверно (Р<0,001)

превышала значения контроля (21,3±6,28 у.е.) в 5,3 раза. В нейтрофилах активность КФ составила в среднем 106,4±4,60 у.е., достоверно превышая уровень контрольной группы (45,5±4,1 у.е.) в 2.3 раза (Р<0,001) (табл.1).

Таким образом, при остром приобретённом токсоплазмозе определена повышенная цитохимическая активность лейкоцитов в виде увеличения активности КФ и КНЭ. Повышение активности КФ лейкоцитов было более выражено.

Цитохимическая активность лейкоцитов при хроническом приобретённом токсоплазмозе в периоде обострения. Активность кислой фосфатазы лейкоцитов оказалась существенно повышенной во всех клеточных группах. Уровень КФ лимфоцитов в среднем составлял 113,5±3,92 у.е. и достоверно (Р<0,001) превышал значения контрольной группы (31,7±2,32 у.е.) в 3,5 раза. Самой активной показала себя кислая фосфатаза в моноцитах, составив в среднем 90,0±4,17 у.е., достоверно (Р<0,001) превысив значения контроля (21,3±6,28 у.е.) в 4,4 раза. В нейтрофилах средний уровень значений активности кислой фосфатазы составил 87,2±3,40 у.е., превышая в 1,9 раз уровень контроля (45,5±4,1 у.е.) с достоверностью Р<0,001. Активность кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов составила в среднем 172,9±4,05 у.е., что достоверно превышало уровень контрольной группы (111,3±1,9 у.е.) в 1,6 раз (Р<0,001). Активность КНЭ в моноцитах составило в среднем 98,9±3,11 у.е. и достоверно не отличалась от контроля, средние значения которого составляли 89,1±10,8 у.е. (табл.1).

Таким образом, для паразитарно-воспалительного процесса у больных с хроническим приобретённым токсоплазмозом характерно умеренное повышение цитохимической активности лимфоцитов и нейтрофилов, а также активация моноцитов в виде повышения активности кислой фосфатазы.

Сравнение цитохимической активности лейкоцитов у больных с острым и хроническим приобретённым токсоплазмозом выявило достоверно более высокую активность КНЭ и КФ моноцитов при остром течении процесса. Цитохимическая активность нейтрофилов также была достоверно выше при остром приобретённом токсоплазмозе (Р<0,01). Уровень цитохимической активности при остром и хроническом приобретённом токсоплазмозе не отличался (таблица 1).

Более выраженная активация цитохимических показателей моноцитов при остром течении токсоплазмоза подтверждает роль этих клеток в развитии защитных реакций организма на токсоплазмы.

Таблица 1.

Активность КФ и КНЭ лейкоцитов у больных хроническим и острым

приобретённым токсоплазмозом

Ферменты Хронический токсонлазмоз Острый токсоплазмоз Контроль Р Р1 Р2

М ± гп М ± т М ± ш

КНЭ лимфоцитов 172,9 ± 4,05 172,8 ± 3,59 111,3 ± 1,9 *** ***

КНЭ МОНОЦИТОВ 98,9 ± 3,11 146,3 ± 1,93 89,1 ± 10,8 *** ***

КФ лимфоцитов 113,5 ± 3,92 118,4 ± 2,80 31,7 ± 2,32 ***

КФ моноцитов 90,0 ± 4,17 112,7 ± 1,99 21,3 ± 6,28 *** ***

КФ нсГггрофшю в 87,2 ± 3,40 106,4 ± 4,6 45,5 ± 4,1 ** *** ***

Примечание: Р - достоверность различия между показателями активности ферментов у больных острым и хроническим приобретённым токсоплазмозом (*■•■*) - Р<0,001. Р1 - достоверность различия между показателями активности ферментов у больных острым приобретённым токсоплазмозом и контролем, (***) - Р<0,001. Р2 - достоверность различия между показателями активности ферментов у больных токсоплазмозом и контролем, (***) — Р<0,001.

Цитохимическая активность лейкоцитов при хроническом приобретённом токсоплазмозе в периоде обострения на фоне беременности. У обследованных беременных уровень активности кислой фосфатазы лейкоцитов был достоверно выше контроля (Р<0,001) во всех группах клеток. Активность нейтрофилов, содержащих клетки с кислой фосфатазой в среднем составила 107,7±4,23 у.е., что превышало уровень контрольной группы (45,5±4,1 у.е.) в 2,4 раза. Ещё активнее вели себя лимфоциты в виде увеличения активности кислой фосфатазы, составляя при этом 177,8±3,53 у.е., и достоверно (Р<0,001) превышала контроль (31,7±2,32 у.е.) в 5,6 раз. В моноцитах активность кислой фосфатазы составила в среднем 168,3±9,70 у.е. и оказалась достоверно (Р<0,001) активнее в 6 раз по сравнению со значениями контрольной группы (21,3±6,28 у.е.). Активность КНЭ в лимфоцитах и моноцитах изменялась в меньшей степени, чем активность кислой фосфатазы. Так уровень КНЭ в лимфоцитах превышал норму в 1,7 раз, составив в среднем 188,7±8,83 у.е. против контроля 111,3±1,9 у.е.. Активность моноцитов, содержащих НЭ, составляла в среднем (127,03±9,77 у.е.).

Таким образом, активность КФ и КНЭ лейкоцитов у беременных третьего триместра гестации на фоне хронического токсоплазмоза могут служить дополнительными лабораторными критериями обострения паразитарного процесса.

Диагностическое и прогностическое значение цитохимической активности кислой фосфатазы и альфа-нафтилацетат эстеразы лейкоцитов у больных хроническим приобретённым токсоплазмозом на фоне зтиотропной терапии. Для оценки критериев эффективности этиотропной терапии токсоплазмоза проведено сравнение показателей общего анализа крови, биохимического анализа крови, а так же, КФ и КНЭ до начала терапии и после её окончания. Исследуемая группа состояла из 20 больных хроническим приобретённым токсоплазмозом. Все больные

получали этиотропную терапию по схеме: фансидар по 1-ой таблетке два раза в неделю, в сочетании с лейковорином 25 мг - одна инъекция два раза в неделю в дни приёма фансидара, на протяжении восьми недель. Исследования проводились непосредственно перед началом лечения и на I -ой неделе после окончания курса специфической терапии.

Активность КНЭ и КФ лимфоцитов до лечения были существенно повышенными составляя 177,3±9,59 у.е. и 105,9±6,82 у.е., соответственно, что превышало уровень контрольной группы в 1,6 и 4 раза (Р<0,001). После курса терапии КНЭ и КФ лимфоцитов достоверно снижались (Р<0,01) до 122,7±6,45 у.е. и 29,1±5,62 у.е., приближаясь к норме. В моноцитах повышения активности КНЭ не отмечалось, составляя до лечения 92,1±5,42 у.е. и после проведения курса специфической терапии 92,5±6,01 у.е., в тоже время уровень КФ моноцитов превышал значения контрольной группы в 4,5 раза, составляя до лечения 95,6±8,62 у.е.. После лечения активность КФ моноцитов возвращалась к уровню контрольной группы и составляла 25,6±3,86 у.е.. Активность КФ нейтрофилов у исследуемой группы больных до лечения составляла 90,5±6,58 у.е., превышая уровень контрольной группы в 6,8 раз (Р<0,001). После лечения активность КФ нейтрофилов снижалась до 14,8±2,77 у.е., что оказалось ниже значений контрольной группы (таблица 2).

Таким образом, выявленное повышение цитохимической активности моноцитов и лимфоцитов при хроническом приобретенном токсоплазмозе, с последующей нормализацией показателей под действием этиотропного лечения, указывает на важную роль клеток лимфоцитарно-макрофагальной системы в течении паразитарно-воспалительного процесса при токсоплазмозе и возможность использования этих параметров в качестве дополнительных диагностических тестов.

Таблица 2

Динамика активности КФ и КНЭ лейкоцитов у больных хроническим

приобретённым токсоплазмозом до и после лечения

Ферменты До лечения После лечения Контроль Р PI

М ± m М ± in М ± ш

КФ лимфоцитов 105,9 ± 6,82 29,1 ± 5,62 31,7 ± 2,32 ***

КФ моноцитов 95,6 ± 8,62 25,6 ± 3,86 21,3 ± 6,28

КФ нейтрофило в 90,5 ± 6,58 14,8 ± 2,77 45,5 ± 4,10 *$*

КНЭ лимфоцитов 177,3 ± 9,59 122,7 ± 6,45 111,3 ± 1,9 и--**

КНЭ моноцитов 92,1 ± 5,42 92,5 ± 6,01 89,1 ± 10,77

Примечание: Р - достоверность различия между показателями активности ферментов у больных с обострением токсоплазмоза до и после лечения, (* * *) - Р<0,001; Р1 - достоверность различия между показателями активности ферментов у больных после лечения и контролем.

Оценка иммунного статуса у больных токсоплазмозом по данным иммунограмъи Исследование иммунного статуса выявило явления вторичного иммунодефицита разной степени у 70% больных. Отмечалось снижение общего содержания Т-лимфоцитов (CD3) до уровня средних значений 49,7±1,74 и повышение уровня Т-супрессоров (CD8), что в среднем составляло 25,0±0,74, повышение NK-клеток (CD 16) до 12,2±0,91%, происходило снижение иммунорегуляторнго индекса Тх/Тс (CD4/CD8) - 1,6±0,06, характерным являлось также повышение содержания Вл (CD19) в среднем до 17,6±1,34%. Значение иммуноглобулинов в общей группе больных практически не отличались от нормы. Однако IgA имел тенденцию к снижению и в среднем составлял 1,74±0,09 г/л.. Напротив, средний уровень ЦИК - 0,058±0,009 ед. оказался

повышенным. Исследование фагоцитарной активности установило относительное снижение процента фагоцитоза - 47,9±1,75%, при нормальных значениях фагоцитарного числа - 4,4±0,12 и повышении фагоцитарного индекса до 2,3±0,14. Процент переваривания был снижен и составлял 62,1±0,95%, индекс переваривания при этом составил 1,4±0,08.

Оценка уровня оксида азота у больных хроническим приобретённым токсоплазмозом. Оценку уровня оксида азота проводили у 45 больных хроническим приобретённым токсоплазмозом в стадии обострения. Выявилось снижение уровня оксида азота у 60% больных, повышенное содержание наблюдалось в 9% случаев, при среднем значении 6,44±0,64 мкмоль/л., которое достоверно от нормы не отличалось (Р>0,05). Уровень оксида азота в сыворотке крови исследовали у 30 беременных женщин при сроке гестации 33-40 недель, и имевших в виде сопутствующей патологии хронический приобретённый токсоплазмоз в стадии обострения. Среднее значение уровня оксида азота у обследованных женщин составило 11,38±2,07 мкмоль/л.

Сопоставление уровня оксида азота с характером течения беременности выявило следующие результаты. В группе женщин, не нуждающихся в проведении интенсивной терапии, и, отнесенных по шкале Андреева Б.П. (1981) ко 2 группе, уровень нитрита сыворотки крови составил 3,48±0,75 мкмоль/л.. В группе беременных, нуждающихся, в силу развившейся акушерской патологии, в целенаправленном лечении, а в трех случаях в проведении интенсивной терапии, и, отнесенных к 3-4 группам шкалы, уровень нитрита сыворотки крови был достоверно выше и составлял 7,9±1,32 мкмоль/л. (Р<0,05). Максимальные значения нитрита 23,5 и 24,6 мкмоль/л. зарегистрированы у женщин с прогрессирующим гестозом, ставшим показанием к операции кесаревого сечения.

ВЫВОДЫ

1. Клиника острого приобретённого токсоплазмоза у взрослых характеризуется наличием у 90-100% больных астеновегетативного синдрома (головная боль, сонливость, слабость), лимфоаденопатии в подчелюстной и задней шейной областях, субфебрилитетом, длящимся 1 -3 мес., а так же, развитием в 40-45% случаев артралгии, миалгии, снижения памяти, гепатомегалии, в 80% отмечаются признаки ДЖВП с нарушением обмена билирубина в 20% и хронического панкреатита.

2. Клиническая картина хронического приобретённого токсоплазмоза в периоде обострения характеризуется присоединением полилимфаденопатии в подмышечной области, снижения зрения (56%) с изменением на глазном дне (2,5%), анорексии (47%), гепатомегалией (58%), повышением трансаминаз в 65% случаев до 1,5 норм и нарушением обмена билирубина в 60%.

3. Клиника обострения хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности отличается наличием в 80-93% случаев астеновегетативного синдрома, миалгии и артралгии, лимфоаденопатии в паховой группе лимфатических узлов, субфебрилитет отмечается в 16,7% случаев.

4. Хронический приобретённый токсоплазмоз проявляется на фоне латентного течения цитомегаловирусной инфекции в 69% случаев, герпетической инфекции в 34%, хламидийной инфекции в 26%, инфекции, вызванной вирусом Эпштейн Барр в 6%. Наличие маркеров более двух оппортунистических инфекций наблюдалось у 78% больных.

приобретённого токсоплазмоза повышение активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лейкоцитов менее выражено, чем при остром (КФ лимфоцитов возрастает в 3,5 раз, моноцитов в 4,4 раза, нейтрофилов в 1,9 раза, КНЭ лимфоцитов в 1,6 раз), уровень активности КНЭ моноцитов остается в норме. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется выраженным повышением активности ферментов лейкоцитов (КФ лимфоцитов в 5,6 раз, моноцитов в 6 раза, нейтрофилов в 2,4 раза, КНЭ лимфоцитов в 1,7 раз) при нормальном уровне активности КНЭ в моноцитах.

6. Изменения в иммунном статусе больных с хроническим приобретенным токсоплазмозом соответствуют вторичному структурному иммунодефициту выражающемуся снижением числа Т-лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса, повышением содержания В-лимфоцитов и МК клеток, повышением уровня ЦИК и подавлением показателей фагоцитарной способности нейтрофилов, характерным для незавершенного фагоцитоза.

7. Острый токсоплазмоз характеризуется сочетанием наличия серологических маркеров (^ М в ИФА к токсоплазмам, низкоавидные ^ в, РНИФ) с высокой активностью кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лейкоцитов. Для обострения хронического приобретённого токсоплазмоза помимо специфических серологических маркеров (ИФА ^ в высокой степени авидности, РНИФ) типично умеренное повышение активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется в ИФА 1« б высокой степени авидности, положительным РНИФ и выраженным повышением активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов.

8. Повышение активности КФ и КНЭ лейкоцитов при наличии типичной клиники и серологических маркеров токсоплазмоза служит показанием к началу этиотропной терапии. Эффективность этиотропного лечения отражается в нормализации цитохимической активности лейкоцитов, что является прогностическими критериями достижения стойкой ремиссии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Больным приобретённым токсоплазмозом для диагностики стадии процесса (острый, хронический в стадии обострения, хронический в стадии ремиссии) рекомендуется определение цитохимической активности лейкоцитов периферической крови по уровню кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы.

2. Выявление повышения активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов более чем в 3 раза характерно для острого и обострения хронического приобретённого токсоплазмоза. Повышение активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы моноцитов в 1,5 раза характерно для острого токсоплазмоза.

3. Для оценки эффективности лечения токсоплазмоза рекомендуется проводить контроль активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лейкоцитов до и после лечения. Нормализация уровня активности ферментов свидетельствует о наступлении ремиссии или выздоровлении.

4. Больным хроническим приобретенным токсоплазмозом целесообразно проводить обследование на наличие цитомегаловирусной, герпетической и хламидийной инфекции, как наиболее часто регистрирующихся сопутствующих заболеваний.

5. Наличие иммунодефицита, при остром и хроническом токсоплазмозе

обосновывают целесообразность включения в схему патогенетической терапии адаптогенов, микроэлементов, по показаниям, селективной иммунокоррекции.

СПИСОК научных трудов по теме диссертации

!. Авдеева М.Г., Кончакова A.A., Монако С.Ю., Бондаренко И.Н., Еремина Г.А., Коваленко Е.Е. Клиническое значение уровня оксида азота сыворотки крови в оценке течения беременности и родов на фоне хронического приобретенного токсоплазмоза // Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России: тез. докл. Южно-Российской научно-практической конференции,- Ростов-на-Дону - Краснодар, 2005.-С. 16-18.

2. Еремина Г.А., Городин В.Н., Авдеева М.Г., Зотов C.B., Ахмедова O.A., Кондрашова О.В., Коваленко Е.Е., Книжник Т.А., Кончакова A.A. Современная серологическая диагностика токсоплазмоза // Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины: тез. докл. Юбилейной научно-практической конференции.- СПб., 2006 - С. 104-105.

3. Авдеева М.Г., Кончакова A.A.,Монако С.Ю., Передирий И.Р. Состояние лимфоцитарно-макрофагапьной системы при хроническом приобретенном токсоплазмозе у беременных // Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России: тез. докл. Южно-Российской научно-практической конференции.- Ростов-на-Дону - Краснодар-Майкоп, 2006.-С. 14-15.

4. Авдеева М.Г., Бондаренко И.Н., Кончакова A.A., Еремина Г.А., Коваленко Е.Е., Метальников A.M., Монако С.Ю., Передерий И.Р. Иммуно-цитохимические критерии прогноза течения беременности на фоне хронического приобретенного токсоплазмоза // Новые технологии в

диагностике и лечении инфекционных болезней: тез. докл. VII Российского съезда инфекционистов. - Нижний Новгород, 2006.- С. 239.

5. Авдеева М.Г., Городин В.Н., Кончакова A.A., Передирий И.Р. Цитохимическая активность лимфоцитов и нейтрофилов у больных с хроническим приобретенным токсоплазмозом // Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины: тез. докл. Юбилейной научно-практической конференции.- СПб., 2006,- С. 14-15.

6. Авдеева М.Г., Кончакова A.A., Реук Н.С. Изменения иммунного статуса у больных токсоплазмозом // Успехи современного естествознания. -2007.-№7.-С. 39-40.

7. Авдеева М.Г., Кончакова A.A. Цитохимическая активность лейкоцитов при хроническом приобретенном токсоплазмозе на фоне проводимой терапии // Матер, конференции «Вопросы инфекционной патологии»,- СПб., 2007.- С. 205.

8. Авдеева М.Г., Кончакова A.A. Клиническое значение иммуно-цитохимических показателей у больных токсоплазмозом // Эпидемиология и инфекционные болезни.- 2008,- №2,- С.52-54.

9. Авдеева М.Г., Кончакова A.A., Монако С.Ю., Шубич М.Г. Цитохимическая активность лейкоцитов в динамике острого токсоплазмоза // Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России: тез. докл. Южно-Российской научно-практической конференции с международным участием.- Сочи, 2008.- С. 10-11.

Подписано в печать 07.11.2008 г. Формат 60*84 1/16 Бумага офсетная. Печать RISO. Гарнитура Тайме. Усл. п.л.1 Заказ 2. Тираж 120. Отпечатано в ЗАО «Типография «Минерва», г. Краснодар, ул. Зиповская, 9

Оглавление диссертации Кончакова, Анна Александровна :: 2008 :: Ростов-на-Дону

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Исторические этапы изучения токсоплазмоза, проблемы клинической диагностики, лечения.

1.2. Проблемы иммунопатогенеза, лабораторной диагностики, прогнозирования течения токсоплазмоза.

1.3. Клиническое значение цитохимических методов оценки функциональной активности иммунокомпетентных клеток.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объем исследований.

2.2. Методики иммунологических исследований.

2.2.1. Оценка содержания циркулирующих иммунных комплексов.

2.2.2. Оценка содержания иммуноглобулинов.

2.2.3. Характеристика клеточного звена иммунной системы.

2.3. Методики цитохимических исследований.

2.3.1.Определение активности кислой фосфатазы (Goldberg, Barka в модификации М. Г. Шубича, М. Г. Авдеевой, 1988).

2.3.2. Определение активности а-нафтилацетат эстеразы (по методу Kulenlcampff, 1977).

2.3.3. Реакция Грисса.

2.4. Статистическая обработка материала.

ГЛАВА 3. КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРИОБРЕТЕННОГО ТОКСОПЛАЗМОЗА.

3.1. Клинико-лабораторная характеристика острого приобретённого токсоплазмоза.

3.2. Клинико-лабораторная характеристика хронического приобретённого токсоплазмоза.

3.3. Клинико-лабораторная характеристика хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности.

ГЛАВА 4. ЦИТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ПРИОБРЕТЁННОМ ТОКСОПЛ АЗМОЗЕ.

4.1. Цитохимическая характеристика лейкоцитов при остром приобретённом токсоплазмозе.

4.2. Цитохимическая характеристика лейкоцитов при хроническом приобретённом токсоплазмозе.:.

4.3. Цитохимическая характеристика лейкоцитов при хроническом приобретённом токсоплазмозе на фоне беременности.

4.4. Диагностическое и прогностическое значение цитохимической активности кислой фосфатазы и альфа-нафтилацетат эстеразы лейкоцитов у больных хроническим приобретённым токсоплазмозом на фоне этиотропиой терапии.

ГЛАВА 5. ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТОКСОПЛАЗМОЗА.

5.1. Оценка иммунного статуса у больных хроническим приобретённым токсоплазмозом по данным иммунограмы.

5.2. Оценка уровня оксида азота у больных хроническим приобретённым токсоплазмозом.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРИМЕРЫ.

Клинический пример №1.

Клинический пример №2.

Клинический пример №3.

Введение диссертации по теме "Инфекционные болезни", Кончакова, Анна Александровна, автореферат

Токсоплазмоз представляет актуальную проблему современной инфекционной патологии и включен в программу ВОЗ по изучению зоонозов. Это вызвано широким повсеместным распространением токсоплазмоза. Так, в странах СНГ инфицировано около 30% населения, в Санкт-Петербурге - до 25%, а общее число инфицированных в мире составляет 1,5 млрд человек (Ю.В.Лысенко и соавт., 2002; Ю.В.Лобзин, 2003).

В настоящее время прояснены многие особенности эпидемиологии и патогенеза токсоплазмоза. Тем не менее, сохраняется ряд спорных и неоднозначно решаемых вопросов в области диагностики и лечения его хронических и латентных форм. Малоспецифичная клиническая симптоматика токсоплазмоза существенно затрудняет диагностику обострения хронических форм заболевания. Принципиальную важность диагностика обострений токсоплазмоза приобретает во время беременности. Активация хронического приобретенного токсоплазмоза, происходящая у беременных со сниженным иммунным фоном, может оказывать неблагоприятное влияние на течение беременности и родов и требует своевременного медицинского вмешательства и наблюдения. В то время, как широко распространённое носительство токсоплазмоза или латентное течение процесса не нуждается в проведении лечения (Л.А.Колесникова-Тартынских, 1998; И.П.Терещенко и соавт., 2006). До настоящего времени отсутствуют достаточно надежные лабораторные критерии специфической диагностики обострения хронического токсоплазмоза, а его клинические проявления на фоне беременности могут быть малотипичными и стертыми.

Так, основным методом лабораторной диагностики являются серологические методы (ИФА, РНИФ). Однако, данные серологической диагностики не позволяют достоверно диагностировать обострение процесса и оценить эффективность лечения (В.В.Васильев, 2003). Сложившаяся ситуация требует пересмотра и систематизации диагностики токсоплазмоза в зависимости от периода заболевания и применяемых схем лечения.

Чувствительными критериями активности и прогноза течения инфекционного и паразитарного процесса являются цитохимические показатели лейкоцитов и уровень нитрита сыворотки крови, отражающий содержание синтезируемого макрофагами эндогенного иммуномодулятора - оксида азота (М.Г.Щубич 2003; М.Г.Авдеева и соавт., 2004). Не претендуя на специфичность в диагностике, данные показатели рассматриваются в контексте общих клинических проявлений и позволяют оценить эффективность лечения. Предшествующими исследованиями показано участие макрофагов в патогенезе токсоплазмоза, а также роль иммунологических нарушений в формировании хронического течения заболевания (D.L.Sibley, 2000; Т.В.Бейер, 2003). Определение цитохимической активности клеток лимфоцитарно-макрофагальной системы в совокупности с оценкой уровня оксида азота и показателей клеточного иммунитета при хроническом токсоплазмозе ранее не проводилось.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Повышение качества диагностики и эффективности лечения больных токсоплазмозом на основе разработки клинико-лабораторных и иммунно-цитохимических критериев определения стадии течения процесса и оценки эффективности проводимой терапии.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

2. Изучить частоту сочетания хронического приобретённого токсоплазмоза с другими оппортунистическими инфекциями: цитомегаловирусная инфекция, герпетическая инфекция, хламидийная инфекция, инфекция, вызванная вирусом Эпштейн-Барр.

4. Изучить особенности иммунологического ответа по уровню показателей клеточного иммунитета (CD3, CD4, CD8, CD 16, CD 19), иммуноглобулинов, ЦИК, оксида азота у больных с хроническим токсоплазмозом.

5. На основании изучения иммуно-цитохимической активности макрофагально-лимфоцитарной системы, ИФА, РНИФ, разработать клишпсо-диагностические критерии оценки стадии течения токсоплазмоза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Определены особенности клинического течения острого и хронического приобретённого токсоплазмоза, в том числе у беременных.

Установлена высокая частота сочетания хронческого токсоплазмоза с другими оппортунистическими инфекциями: цитомегаловирусная инфекция, герпетическая инфекция, хламидийная инфекция, инфекция, вызванная вирусом Эпштейн-Барр. Впервые установлено диагностическое значение повышения активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы лейкоцитов при остром приобретённом токсоплазмозе. Впервые, на основании повышения активности кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы лейкоцитов, диагностировано обострение течения хронического приобретённого токсоплазмоза, в том числе на фоне беременности. Впервые изучено диагностическое значение уровня оксида азота у больн ых с хроническим приобретённым токсоплазмозом, в том числе на фоне беременности с осложненным течением. Изучены изменения иммунологических показателей: клеточного иммунитета (CD3, CD4. CD8, CD16, CD19), уровня иммуноглобулинов и ЦИК. На основании изучения активности лимфоцитарно-макрофагальной системы, показателей иммунитета, ИФА, РНИФ, ПЦР разработаны клинико-диагностические и прогностические критерии течения паразитарного процесса при токсоплазмозе. Разработаны патогенетически обоснованные показания к началу этиотропной терапии хронического токсоплазмоза, а также критерии оценки ее эффективности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Материалы исследования позволили расширить понимание патогенеза токсоплазмоза. Показана роль кислой фосфатазы, кислой неспецпфической а-нафтилацетат эстеразы лейкоцитов и оксида азота в диагностике обострения хронических форм токсоплазмоза. Выявлены изменения иммунной системы при обострении хронического приобретённого токсоплазмоза, и определены показания к проведению селективной иммунокоррекции. Разработан алгоритм диагностики течения хронического приобретённого токсоплазмоза, предложены критерии прогнозирования характера течения паразитарного процесса. Определены патогенетически обоснованные показания к началу этиотропной терапии, а также критерии оценки ее эффективности.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Острый приобретённый токсоплазмоз характеризуется выраженным повышением цитохимической активности лейкоцитов в виде увеличения активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы наиболее существенной в моноцитах.

2. Обострение хронического приобретенного токсоплазмоза проявляется в виде умеренного повышения в крови активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы преимущественно в лимфоцитах и нормальными значениями уровня оксида азота.

3. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется выраженным повышением в крови активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой песпецифической эстеразы лимфоцитов при нормальном уровне акшвности в моноцитах.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты диссертационной работы внедрены в работу специализированной клинической инфекционной больницы департамента здравоохранения Краснодарского края и других инфекционных стационарах (отделениях) Краснодарского края. Отдельные положения диссертации включены в лекции и практические занятия интернов и курсантов кафедры инфекционных болезней ФГЖ и ППС КГМУ.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИОННОГО МАТЕРИАЛА

Основные результаты работы доложены на VII Российском съезде инфекционистов «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней» (Нижний Новгород, 2006), первой, второй и третьей Южнороссийских научно-практических конференциях с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России» (Геленджик, 2005; Майкоп, 2006; Сочи, 2008); юбилейной научно-практической конференции «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины» (Санкт-Петербург, 2006), VIII всероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2007).

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе в издании, рекомендованном ВАК.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммуно-цитохимические критерии диагностики и прогнозирования течения хронического токсоплазмоза"

ВЫВОДЫ

1. Клиника острого . приобретённого токсоплазмоза у взрослых характеризуется наличием у 90-100% больных астеновегетативного синдрома (головная боль, сонливость, слабость), лимфоаденопатии в подчелюстной и задней шейной областях, субфебрилитетом, длящимся 1-3 мес., а так же, развитием в 40-45% случаев артралгии, миалгии, снижения памяти, гепатомегалии, в 80% отмечаются признаки ДЖВП с нарушением обмена билирубина в 20% и хронического панкреатита.

5. Острый приобретённый токсоплазмоз характеризуется повышением активности КФ лимфоцитов в 3,7 раз, моноцитов в 5,3 раза и нейтрофилов в 2,3 раза, а так же повышение активности КНЭ лимфоцитов и моноцитов в 1,6 раз против контроля. При обострении хронического приобретённого токсоплазмоза повышение активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лейкоцитов менее выражено, чем при остром (КФ лимфоцитов возрастает в 3,5 раз, моноцитов в 4,4 раза, нейтрофилов в 1,9 раза, КНЭ лимфоцитов в 1,6 раз), уровень активности КНЭ моноцитов остается в норме. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется выраженным повышением активности ферментов лейкоцитов ( КФ лимфоцитов в 5,6 раз, моноцитов в 6 раза, нейтрофилов в 2,4 раза, КНЭ лимфоцитов в 1,7 раз) при нормальном уровне активности КНЭ в моноцитах.

6. Изменения в иммунном статусе больных с хроническим приобретенным токсоплазмозом соответствуют вторичному структурному иммунодефициту выражающемуся снижением числа Т-лимфоцитов, иммунорегуляторного индекса, повышением содержания В-лимфоцитов и ЫК. клеток, повышением уровня ЦИК и подавлением показателей фагоцитарной способности нейтрофилов, характерным для незавершенного фагоцитоза.

7. Острый токсоплазмоз характеризуется сочетанием наличия серологических маркеров М в ИФА к токсоплазмам, низкоавидные ^ С, РНИФ) с высокой активностью кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лейкоцитов. Для обострения хронического приобретённого токсоплазмоза помимо специфических серологических маркеров (ИФА ^ С высокой степени авидности, РНИФ) типично умеренное повышение активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов. Обострение хронического приобретённого токсоплазмоза на фоне беременности характеризуется в ИФА ^ С высокой степени авидности, положительным РНИФ и выраженным повышением активности кислой фосфатазы лейкоцитов и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Выявление повышения актиности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы лимфоцитов более чем в 3 раза характерно для острого и обострения хронического приобретённого токсоплазмоза. Повышение активности кислой фосфатазы и кислой неспецифической эстеразы моноцитов в 1,5 раза характерно для острого токсоплазмоза.

4. Больным хроническим приобретенным токсоплазмозом с дифференциально-диагностической целью целесообразно проводить обследование на наличие цитомегаловирусной, герпетической и хламидийной инфекции, как наиболее часто регистрирующихся сопутствующих заболеваний.

5. Наличие иммунодефицита, при остром и хроническом токсоплазмозе обосновывают целесообразность включения в схему патогенетической терапии адаптогенов, микроэлементов и, по показаниям, селективной иммунокоррекции.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Кончакова, Анна Александровна

1. Авдеева М.Г. Лимфоцито-моноцито-нейтрофильные взаимодействия в аспекте прогнозирования тяжести течения и исходов лептоспироза : автореф. дис. . канд. мед. наук. - Краснодар, 1990.- 17с.

2. Авдеева М.Г. Морфофункциональное состояние лимфоцитов и моноцитов при разной тяжести течения лептоспироза // Кубан. науч. мед. вести.- 1999.- № 12(48) .- С. 16-19.

3. Авдеева М.Г. Новые молекулярные механизмы развития инфекционного процесса / М.Г. Авдеева, В.В. Лебедев, М.Г. Шубич // Гастроэнтерология.- Краснодар, 2006.

4. Авдеева М.Г. Оксид азота сыворотки крови как дополнительный критерий оценки течения лептоспироза / М.Г. Авдеева, И.Н. Бондаренко // Клинич. лаб. диагностика.- 2006.- № 6.- С. 50-52.

5. Авдеева М.Г. Патогенетические механизмы инициации синдрома системного воспалительного ответа / М.Г. Авдеева, М.Г. Шубич // Клинич. лаб. диагностика.- 2003.- № 6.- С. 3-10.

6. Авдеева М.Г. Патогенетические механизмы инициации синдрома системного воспалительного ответа / М.Г. Авдеева, М.Г. Шубич // Клинич. лаб. диагностика.- 2003.- № 6.- С. 3-8.

7. Авдеева М.Г. Патологическая анатомия и танатогенез иктерогеморрагического лептоспироза с позиций системного воспалительного ответа / М.Г. Авдеева, Н.Ю. Белозеров, О.Н. Понкина и др. // Кубан. науч. мед.веста.-).- 2004. № 5-6 (71-72).- С. 23-26.

8. Авдеева М.Г. Уровень нитрита и кислотнопептические показатели натощакового содержимого желудка при гастродуоденальной патологии / М.Г. Авдеева, В.Б. Карпюк, М.Г. Шубич // Успехи современ. естествознания,- 2003.- № 3.- С. 27-28.

9. Авербах М.М. Повышенная чувстантельность замедленного типа и инфекционный процесс / М.М. Авербах, В.Я. Герберт, В.И. Литвинов.-М. : Медицина, 1974. 246 с.

10. Ю.Андреева Е. Врождённый токсоплазмоз // Мед. газета.- 2005. № 38, вып. 34.- С. 8.

11. Н.Андреева Е. Врождённый токсоплазмоз // Мед. газета.- 2005. № 39, вып. 35.- С. 9.

12. Асатова М.М. Роль токсоплазменной инфекции в формировании акушерской и перинатальной патологии : дис. . д-ра мед. наук.- Л., 1991.- 43 с.

13. Бажора Ю.И. Цитохимические методы идентификации различных . популяций лимфоцитов : (обзор лит.) / Ю.И. Бажора, Б.Н. Пясецкий //

14. Лаб. дело.- 1987.- № 3.- С. 182-185.

15. Байориненг Д. Болезни матери и ребенка / Д. Байориненг, А. Арлаускене Вильнюс, 1990.- С. 45-49.

16. Бейер Т.В. / Т.В. Бейер, Н.В. Свежова // Природа.-2004. № 5. - С. 1319.

17. Бейер Т.В. Клеточная биология споровиков — возбудителей протозойных болезней животных и человека.- Л. : Наука, 1989.- 184 с.

18. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз. Киев : Наук, думка, 1988. - 173 с.

19. Бибилейшвили З.А. Клинико-экспериментальный анализ этиологии и патогенеза позднего токсикоза беременных : автореф. дис. . д-ра. мед. Наук. Тбилиси, 1975.- 45 с.

20. Бибилейшвили З.В. Материалы к клинико-биохимической характеристике беременности, родов и послеродового периода: автореф. дис. . канд. мед. наук. Тбилиси, 1966.- 25 с.

21. Болотовский В.M. Иммуноцитохимичечкие показатели коревого вакцинального процесса / В.М. Болотовскип и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1985.- № 8.- С. 54-58.

22. Васильев В.В. Основные недостатки ведения больных токсоплазмозом / В.В. Васильев, И.С. Васильева, В.Н. Тимченко // Материалы 4 Рос. съезда врачей инфекционистов.- СПб., 2003.- С. 62-63.

23. Васильев В.В. Токсоплазмоз // Вопросы инфекционной патологии : сб. науч. тр. СПб., 1998.- С. 121-126.

24. Васильев В.В. Токсоплазмоз: современные научно-практические подходы. 2001.

25. Венглинская В.А. К вопросу о цитохимических маркерах Т-лимфоцитов человека и лабораторных животных / В.А. Венглинская, М.Г. Шубич, А.П. Парахонский, Н.Ф. Мажара // Иммунология.- 1985.- № 4.- С. 75-77.

26. Вольф В.Е. Экологически обусловленные заболевания / В.Е. Вольф, М.А. Левкович, Шевко И.Г. Левкович // Тез. докл. симп.- Ростов н/Д, 1993.- С. 20-21.

27. Глузман Д.Ф., Бабешко В.Г., Надгорная В.А.Эмбриональное кроветворение и гемобластозы у детей.- Киев : Наука Думка, 1988.- 200 с.

28. Голиков П.П. Генерация оксида азота лейкоцитами и тромбоцитами периферической крови человека в норме и при термической травме / П.П. Голиков и др. // Физиология человека.- 2003.- Т. 29, № 2.- С. 113-117.

29. Голиков П.П. Динамика содержания конечного продукта оксида азота нитрита в различных биологических жидкостях при перитоните / П.П. Голиков и др. // Вестн. интенсив, терапии.- 2000.- № 4.- С. 31-33.

30. Грачева Л.И. Случай врождённого токсоплазмоза / Л.И. Грачева, B.C. Музыкантова // Педиатрия. 1988. - № 9.- С.88-89. Метакса Г.Ю. Заболеваемость токсоплазмозом, его клиника и лечение : автореф. дис. . канд. мед. наук.- Краснодар, 1987. - 22с.

31. Двойрин В.В. Методика контролируемых клинических-испытаний / В.В. Двойрин, A.A. Клименко. М. : Медицина, 1985. - С. 144.

32. Долгих Т.М. Современный подход к диагностике и лечению токсоплазмоза : рук. для врачей. Омск, 2005. - с. 147.

33. Драгомирецкий В.Д. Динамика различных популяций лимфоцитов периферической крови после криотопзилотомии у больных хроническим тонзиллитом / В.Д. Драгомирецкий и др. // Журн. ушных, носовых и горловых болезней.- 1982. № 4.- С. 60-63.

34. Иванова Л.А. Идентификация И-, Т- и «нулевых» лимфоцитов окраской на кислую фосфатазу / Л.А. Иванова, Е.В. Васильева, В.В. Соколов // Лаб. дело.- 1979.- № 10.- С. 593-596.

35. Ивановская Т.Е. Особенности воспалительной реакции у зародыша и детей : рук. для врачей,- М. : Медицина, 1995.- С. 297-311.

36. Йыгисте А.К. Вопросы эпидемиологии и патогенеза токсоплазмоза : Гвтореф. дис. . канд. мед. наук,- М., 1963. 28 с.

37. Иыгисте А.К. Вопросыпатогенеза и профилактики врожденного тойсоплазмоза : дис. . д-ра мед. наук.- Таллинн, 1973. 42 с.

38. Иыгисте А.К. К патогенезу и лечению фетального токсоплазмоза / А.К. Йыгисте, Д.Н. Засухин// Сов. медицина. 1976. - № 11.- С. 91.

39. Казанцев А.П. // Санкт-Петербург, врач, ведомости. — 1993. № 3. - С. 30-34.

40. Караулов А. В. Клиническая иммунология и аллергология.-М.: Медицинское информационное агенство, 2002. — 651

41. Казанцев А.П. Токсоплазмоз.- Л. : Медицина, 1985. 168 с.

42. Казначеева Е.И. Уровень кислой фосфатазы в лимфоцитах больных хроническим обструктивным бронхитом // Диагностика и лечение заболеваний лёгких.-М., 1985,- С. 17-18.

43. Колесникова Л.А. Актуальные вопросы физиологии и патологии репродуктивной функции женщины // Материалы 21-й науч. сессии НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН. СПб., 1992.- С. 95-96.

44. Колесникова-Тыртынских Л.А. Значение токсоплазменной инфекции в патологии беременности и плода. (Таллинн).

45. Комиссарова И.А. Информативность ферментного статуса лейкоцитов крови в оценке состояния организма в норме и патологии : автореф. дис. . д-ра мед. наук.- М., 1983.- 34 с.

46. Королёва С.Н. / С.Н. Королёва, А.И. Новак // Труды Костром. Гос. с/х акад.- 2001.- Вып. 59,- С. 24 -29.

47. Красильников A.A. Тропические и паразитарные болезни : клиника и эпидемиология / A.A. Красильников, А.Е. Беляев ; под ред. проф. А.Я. Лысенко.-М., 1981.-С. 111-117.

48. Лобзин Ю.В. Руководство по инфекционным болезням / Ю.В. Лобзин и др.- СПб. : Фолиант, 2003.- 1040 с.

49. Лобзин Ю.В. Иммуномодуляция токсоплазмином в лечении хронического токсоплазмоза / Ю.В. Лобзин и др. // Мед. иммунология.- 2000. Т.2, № 3. - С. 299-304.

50. Лобзин Ю.В. Хронический токсоплазмоз: рациональная терапия / Ю.В. Лобзин и др. // Рос. мед. вести. 1997.- Т. 2, №> 2.- С. 67-69.

51. Лысенко А. Я. Клиническая паразитология / А. Я. Лысенко и др.. -Женева, 2002.- 752 с.

52. Маеда X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке / X. Маеда, Т. Аканке // Биохимия.- 1998.- Т. 63, вып. 7,-С. 1007-1019.

53. Малкова Е.М. Внутриутробные инфекции у новорожденных: использование генодиагностики, клинические особенности и подходы к лечению / Малкова Е.М. и др. // Педиатрия. 2002. - № 1. - С. 36-40.

54. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянекий.- Новосибирск : Наука, Сиб. отд., 1989.- 400 с.

55. Мельник М.Н. Токсоплазмоз / М.Н. Мельник, JI.K. Коровицкий, А.Е. Григорашенко, И.Д. Нетребко .- Киев : Здоров'я, 1978.- 182 с.

56. Мельников В.Д. Современное состояние проблемы токсоплазмоза // Тезисы 3-го Всесоюз. симп.- Новосибирск, 1988.- С. 37-38.

57. Мерков A.M. Санитарная статистика / A.M. Мерков, JI.E. Поляков.- М. : Медицина, 1974.- 384 с.

58. Метакса Ю.А. Токсоплазмоз в Краснодарском крае / Ю.А. Метакса, А.К. Якименко, А.Н. Евдокимов, Т.И. Сологуб // Вопросы микробиологии, эпидемиологии и клиники инфекционных болезней : учен, записки. Краснодар, 1968. - Вып. 3. - С. 258-265.

59. Модестова Е.В. Цитохимическая характеристика лимфоцитов крови больных инфекционным мононуклеозом / Е.В. Модестова, В.В. Касаткина // Лаб. дело.- 1980.- № 6.- С. 355-357.

60. Морозова В.Т. Некоторые особенности внутриклеточного метаболизма и функциональных свойств лимфоцитов при реактивных и опухолевых состояниях лимфоидной системы / В.Т. Морозова и др. // Гематология и трансфузиология.- 1986.- № 1.- С. 38-42.

61. Мощиньски П. Изменение активности неспецифической эстеразы ацетата альфанафтола в лимфоцитах периферической крови больных псориазом / П. Мощиньски, Н. Легец // Вестн. дерматологии и венерологии.- 1988.- № 5.- С. 22-24.

62. Нагоев Б.С. Функционально-метаболическая активность лейкоцитов при инфекционных заболеваниях : автореф. дис. . д-ра мед. наук.- М., 1985.-36 с.

63. Петренюк Л.М. О поражении гипоталамической области при токсоплазмозе // Врач, дело.- 1974.- № 11.- С. 118-120.

64. Пигаревский В.Е. Клиническая морфология нептрофильных гранулоцн гов.- Л., 1988,- С. 96-99.

65. Пигаревский П.В. Морфологический метод дифференцировки Т- и В-лимфоцитов путем выявления неспецифической а-нафтилацетатэстеразы / П.В. Пигаревский, Г.Л. Зельцер // Арх. патологии.- 1982.- Т. 45, № 6,- С. 63-65.

66. Пигаревский П.В. Морфологический метод дифференцировки Т- и В-лимфоцитов путём выявления неспецифической а-нафтилацетатэстеразы / П.В. Пигаревский, Г.Л. Зельцер // Арх. патологии.- 1982.- Т.45, № 6.- С. 63-65.

67. Подварко А.Г. ред. Вопросы микробиологии, эпидемиологии и клиники инфекционных болезней / ред. коллег. А.Г. Подварко, А.И. Коротяев, Г.Н. Цынкаловский [и др.].- Краснодар, 1968. 278 с.

68. Покровский В.В. ВИЧ-инфекция : клиника, диагностика и лечение / В.В. Покровский и др.. М. : ГЕОТАР-МЕД, 2003. - 492 с.

69. Покровский В.И. Инфекционный процесс // Иммунология инфекционного процесса : рук. для врачей / В.И. Покровский, И.В. Рубцов ; под ред. В.И. Покровского, С.П. Гордиенко, В.И. Литвинова.-М., 1994.- С. 10-28.

70. Робинсон М.В. Морфоцитохимические особенности субпопуляций лимфоцитов // Первый Всесоюз. иммунол. Съезд : тез. докл. 1989.- Т. 1.- С. 96.

71. Рябов Г.А. Роль оксида азота как регулятора клеточных процессов при формировании полиорганной недостаточности / Г.А. Рябов, Ю.М. Азизов // Анестезиология и реаниматология,- 2001.- № 1.- С. 8-12.

72. Саидов М.С. Приобретенные иммунодефицитные состояния в клинике и в эксперименте // Сб. науч. работ кафедры иммунологии и аллергологии и ЦНИЛ Челябинск, мед. ин-та, каф. патол. физиологии Дагестан, мед. ин-та.- Челябинск, 1990.- С. 98-101.

73. Саидов М.С. Роль хронического токсоилазмоза в этиологии самопроизвольных выкидышей / М.С. Саидов, Е.А. Шевкунова, С.Н. Нурмагомедов // Вопр. охраны материнства и детства. 1984. —№ 1. — С. 70—73.

74. Саидов М.С. Сравнительная оценка роли острого и хронического токсоплазмоза в патологии беременности : автореф. дис. . канд. мед. наук,- М., 1977.- 19 с.

75. Самсыгина Г.А., Дементьева Г.М., Талалаев А.Г. Здоровье плода и новорожденного: современное состояние и прогноз // Педиатрия,- 1999. № 5.- С. 4-6.

76. Семенова Е. И. Врождённый токсоплазмоз // Педиатрия. — 1979. — № 1, —С. 30-36.

77. Сивуха Т.А. Врачебно-трудовая экспертиза и социально-трудовая реабилитация больных нейротоксоплазмозом : автореф. дис. . д-ра мед. наук.- М., 1974.-41 с.

78. Спзякина Л.П., Андреева И.И. Справочник по клинической иммунологии / Серия «Больной вопрос».- Ростов н/Д: Феникс, 2005.-448 с.

79. Терещенко И.П. Обнаружение ДНК возбудителей внутриутробных инфекций в тканях детей с врождёнными пороками развития / И.П. Терещенко и др. // Инфекционные болезни.- 2006,- Т.4, № 3.- С. 30-34.

80. Фадеева М.А. диагностика врожденного токсоплазмоза / М.А. Фадеева, Лукьянова Т.А., Л.Д. Тамарова, Е.А. Шевкунова // Педиатрия. 1987. -№2.-С. 76—81.

81. Филиппова-Нутрихина З.Л. Врожденный токсоплазмоз и его социаьльно-экономическое значение / З.Л. Филиппова-Нутрихина, Е.А. Шевкунова // Педиатрия. — 1989. № 2. - С. 96-98.

82. Хаев А.Е. Патология женщин и здоровье детей / А.Е. Хаев и др. // Сб. науч. трудов Нальчик, 1993.- С. 88-92.

83. Харрисон Т.Р. ред. Внутренние болезни : справ. : в 10 кн. / ред 1-го издю Т.Р. Харрисон ; под. Ред Е. Браунвальда [и др.]. М. : Медицина, 1994.- Кн. 4.-С. 313-325.

84. Цинзерлинг A.B. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза / A.B. Цинзерлинг, В.А. Цинзерлинг.- СПб. : СОТИС, 2002,- С. 352.

85. Шевкунова Е.А. / Е.А. Шевкунова, М.С. Саидов, И .Я. Соколова // Всесоюз. симп. по токсоплазмозу, 2-й. М.,1976.- С. 47-49.Кершюва JI.P. / JI.P. Кершюва, С.Д. Кулиева, А.Р. Сафаралиева // Азерб мед. журн.- 1990.- № 9, - С. 32—35.

86. Шевкунова Е.А. Влияние острой и хронической токсоплазмозной инфекции на течение беременности и плод / Е.А. Шевкунова, М.С. Саидов, С.М. Омаров, И.А. Соколова // Акушерство и гинекология.-1978.-№ 2.-С. 28-30.

87. Шевкунова Е.А. История изучения токсоплазмоза в Советском Союзе. -М., 2006.-208 с.

88. Шубич М.Г. Клинико-цитохимические исследования на Кубани / М.Г. Шубич, М.Г. Авдеева//Наука Кубани.- 1997.- № 1,- С. 20-23.

89. Шубич М.Г. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии / М.Г. Шубич, Б.С. Нагоев.- М. : Медицина, 1980,- 224 с.

90. Юозапайтене И.И. Современное состояние проблемы токсоплазмоза // Тезисы 3-го Всесоюз. симп.- Новосибирск, 1988.- С. 43.

91. Augustine P.C. Cell: sporozoite interactions and invasion by apicomlexan parasites of the genus Eimeria // Int. J. Parasitol. 2001. - Vol. 21, - P. 1-8.

92. Blackmail M.J. Apical organelles of Apicomplexa: biology and isolation by subcellular fractionation / M.J. Blackmail, L.H. Bannister // Mol. Biochem. Parasitol.-2001.-Vol. 117.-P. 11—25.

93. Cesbron-Delauw M.F. Dense granule organelles of Toxoplasma gondii — their role in the host-parasite relationship // Parasitol. Today. — 1994. — Vol. 10.-P. 293-296.

94. Chobotar B. Ultrastructure / Chobotar В., Scholtyseck E // The biology of the Coccidia.- Baltimor .-1982.- P.101-165.

95. Coradello H. Toxoplasmose-Screening bei Schwangeren in Osterreich / H. Coradello, О. Thalhammer 11 Z. Geburtshilfe. Perinatol. 1984. - Bd. 188, N 5.-S. 197-200.

96. Darrel O. Human toxoplasmosis / О. Darrel et al.- New-York : University Press, 1992. 432 p.

97. Denkers B.Y. Regulation and function of T-cell-mediated immunity during Toxoplasma gondii infection / B.Y. Denkers, R. Т. Gazzinelli // Clin. Microbiol. Rev.- 1998.- Vol. 11, № 4,- P. 569-588.

98. Desmonts G. / G. Desmonts, J. Couvreur // Sem. Hop Paris — 1986 -Vol. 62, N20. P. 1418-1420.

99. Desmonts G. Toxoplasmosis in pregnancy and its transmission to the fetus / G. Desmonts, J. Couvreur // Bull. N.Y. Acad. Med. 1974. - Vol. 50, N 2. -P. 146-459.

100. Desmonts G., Couvreur J. // Progr. elm. biol. Res. — 1976— Vol. 3.- P. 115.

101. Dobrowolski J.M. Participation of myosin in gliding motility and host cell invasion by Toxoplasma gondii / J.M. Dobrowolski, V.B. Comakers, L.D. Sibley//Mol. Microbiol. 1997.-Vol. 26.-P. 163-173.

102. Dobrowolski J.M. The role of the cytoskeleton in host cell invasion by Toxoplasma gondii / J.M. Dobrowolski, L. D. Sibley // Behring Inst. Mitt. -1997.-Vol. 99.-P. 90-96.

103. Dobrowolski J.M. Toxoplasma invasion of mammalian cells is powered by the actin cytoskeleton of the parasite / J.M. Dobrowolski, L.D. Sibley // Cell. 1996. - Vol. 84. - P. 933-939.

104. Dubey J.P. Medical microbiology / ed. S. Baron et. al.. Texas, 1996. -P. 84.

105. Dubey J.P. Structures of Toxoplasma gondii tachyzoites, bradyzoites, and sporozoites and biology and development of tissue cysts / J.P. Dubey, D.S. Lindsay, C.A. Speer // Clin. Microbiol. Revs. 1998. - Vol. 11. - P. 267299.

106. Dubey J.P. Toxoplasmosis of Animals and Man / J.P. Dubey, C.P. Beatte. Boka Raton, 1989.- P. 1-30.

107. Dubremetz J.F. Characteristic proteins of micronemes and dense granules from Sarcocystis tenella zoites (Protozoa, Coccidia) / J.F. Dubremetz, C. Dissous // Mol. Biochem. Parasitol. 1980. - Vol. 1. - P. 279-289.

108. Dubremetz J.F. Host cell invasion by Toxoplasma gondii // Trends Microbiol. -1998. Vol. 6. - P. 27-36.

109. Dubremetz J.F. Subcellular organelles of Toxoplasma gondii and host cell invasion / J.F. Dubremetz, J.D. Schwartzman // Res. Immunol. — 1993. Vol.144.-P. 31-33.

110. Dubremetz J.F. Toxoplasma gondii, cell biology update // Molecular approaches to parasitology 1995. - P. 345—358.

111. Edelson R.L. Identification of subpopulations of mononuclear cells in cutaneous inflltfates. I. Differentiation between B cells, T cells and histiocytes / R.L. Edelson et al. // J. Invest. Dermatol.- 1973. Vol. 61, N 2,- P. 82-89.

112. Estran C. Toxoplasma gondii in human astrocytes in vitro: interleukin (IL)-12 and IL-10 do not influence cystogenesis / C. Estran et al. // J. Parasitol. 2006. - Vol. 92, N 5. - P. 1108-1110.

113. Feldman H. Skin reaction to toxoplasmic antigen in peoples of different ages without known history of infection / H. Feldman, A. Salin // Pediatrics.-1984.-№4.-P. 798-804.

114. Ferguson D.J.P. An ultrastructural study of the early development and tissue cyst formation of Toxoplasma gondii in the brain of mice / D.J.P. Ferguson, W.M. Hutchison // Parasitol. Res. 1987a. - Vol. 73. - P. 483491.

115. Ferguson D.J.P. The host-parasite relationship of Toxoplasma gondii in the brains of chronically infected mice / D.J.P. Ferguson, W.M. Hutchison // Virchovs Arch. A. 1987b. - Vol. 411. - P. 39-43.

116. Garweg J.G. Determinants of immunodiagnostic success in human ocular toxoplasmosis // Parasite Immunol. 2005. - Vol. 27, N 3. - P. 61-68.

117. Garweg S.-D. L. Aqueous humor and serum immunoblotting for immunoglobulin types G, A, M, and E in cases of human oculartoxoplasmosis / S.-D. L. Garweg et. al. // J. Clin. Microbiol. 2004. - Vol. 42, N 10.-P. 4593-4598.

118. Gavrilescu L.C. / Gavrilescu L.C. et al. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2005.- Vol. 289. - P. 219 - 237.

119. Glycoprotein / Y.W. Zhang // Infect. Immun. 2001. - Vol.69, N 1. -P.501-507.

120. Gomez R. The fetal inflammatory response syndrome / R. Gomez et al. // Am. J. Obstet. Gynekol. 1998. - Vol. 179. - P. 194-202.

121. Goncharov D.B. The role of Toxoplasma gondii persistence in human clinical pathology // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2006. - Bd.4. - S. 92-97.

122. Higgi K.E. Discrimination of B-, T- and Null- lymphocytes by esterase cytochemistry / K.E. Higgi, G.E. Bums, F.G.I. Hayhoe // Scand. J. Haemat.-1977.-Vol. 18,- P. 437.

123. Hill D. Toxoplasma gondii: transmission, diagnosis and prevention / D. Hill, J.P. Dubey // Clin. Microbiol.Infect. 2002. - Vol.8, N 10. - P.634-640.

124. Hunter C.A. The role of cytokines in toxoplasmosis / C.A. Hunter, C.S. Subauste, J.S. Remington // Biotherapy.-1994.- Vol. 7, N 3-4,- P. 237-247.

125. Jenun P.A. / P.A. Jenun et. al. // Norvegian experience. 1998. -Vol.106.-P. 680-686.

126. Katlama C. Impact of the primary prophylaxis of cerebral toxoplasmosis // J. Neuroradiol. 1995. - Vol. 22. - P. 193-195.

127. Kim S.K. Stage-specific expression of surface antigens by Toxoplasma gondii as a mechanism to facilitate parasite persistence / S.K. Kim, J.C. Boothroyd//J. Immunol.- 2005. Vol.174, N 12. - P.8038-8048.

128. Knowles D.M. Tissue localization of T- lymphocytes by the histochemical demonstration of acid alpha-naphthyl acetate esterase / D.M. Knowles. S. Hosk // Lab. Invest.- 1987 6.- Vol. 39, № 1.- P. 70-76.

129. Kulenkampff I. Acid esterase in human lymphoid cells and leukaemic blasts: a marker for T-lymphocytes / I. Kulenkampff, G. Ianossy, M.F. Greaves // Br. J. Haematol.- 1977. Vol. 36, N 2.- P. 231-240.

130. Lamantina Nitric oxide : the Versatility of an Extensive Signal Molecule / Lamantina et al. // Annu. Rev. Plant Biol.- 2003:- Vol. 54.- P. 109-136.

131. Lang T.H.R. Leishmania £/0/iovam'-infected macrophages: characterization of the parasitophorous vacuole and potential role of this organelle in antigen presentation / T.H.R. Lang, P.M. Kaye, J.C. Antoine // J. Cell Sci.- 1994.-Vol. 107.-P. 2137-2150.

132. Lapierre J. Toxoplasmose congenitale. Reflexions a propos de la surveillance serologique de quinze mille femmes enceintes / J. Lapierre et al.// Sem. Hop. 1983. Vol. 59, N 40.- P. 2741-2745.

133. Lassila O. Alpha-naphthyl acetate esterase activity in human adult and cord blood rosette forming cells / O. Lassila, A. Alanen // Acta Pathol. Immunol. Scand C.- 1982,- Vol. 90, № 3.- P. 152-158.

134. Li C.Y. Esterases in human leukocytes / C.Y. Li, K.W. Lam, L.T. Yam // J. Histochem. Cytochem.- 1973.- Vol. 21.- P. 1-12.

135. Liu X. Diffusion-limited reaction of free nitric oxide with erythrocytes / X. Liu et al. // J. Biol. Chem.- 1998.- Vol. 273, № 30.- P. 18709-18713.

136. Luder C.G. Down-regulation ofMHC class II molecules and inability to up-regulate class I molecules in murine macrophages after infection with

137. Toxoplasma gondii / C.G. Luder et al. // Clin. Exp. Immunol.- 1998.- Vol. 112, №2.-P. 308-316.

138. Luder C.G.K. Toxoplasma gondii and MHC-restricted antigen presentation on degradation, transport and modulation / C.G.K. Luder, F. Seeber // Int. J. Parasitol. 2001. - Vol. 31. - P. 1355-1369.

139. Mayer H.O. Nachuntersuchung von Kindern nach Toxoplasmosefrischinfektion in der Schwangerschaft / H.O. Mayer et al. // Zentralbl. Gynakol.- 1986. -Bd. 108, N24. S. 1482-1486.

140. Mordue D. Toxoplasma gondii resides in a vacuole that avoids fusion with host cell endocytic and exocytic vesicular trafficking pathways / D. Mordue et al. // Exp. Parasitol. 1999. - Vol. 92. - P. 87-99.

141. Mueller I. Nonspecific esterase activity in T-cells / I. Mueller, G. Brun Del Re, H. Buerki // Adv. Exp. Biol. 1976. - Vol. 66.- P. 117-122.

142. Mugge A. Platelets, endotheliumdependent responses and atherosclerosis / A. Mugge, U. Forestermann, P.R. Lichtlen // Ann. Med.- 1991.- Vol. 23.- P. 545.

143. Mysliwska 1. Activity of acid phosphate in resting and mitogen stimulated human peripheral blood lymphocytes / I. Mysliwska et al. // Immunobiology.- 1985.-Vol. 169, №2.-P. 198-207.

144. Ng P. Treatment of ocular toxoplasmosis / P. Ng, McCluskey P.J. //Aust. Prescr. 2002. - Vol. 25. - P. 88-90.

145. Ngo H.M. Differential sorting and post-secretory targeting of proteins in parasitic invasion / H.M. Ngo, H.C. Hoppe, K.A. Joiner // Trends Cell Biol. -2000.-Vol. 10.-P. 67-72.

146. Obrist R. Identification of lymphocyte subpopulations by simultaneous E-rosette formation and unspecific acid ecterase staining / R. Obrist, R. Albrecht, G.A. Nager// Experientia.- 1978.- Vol. 34, № 5.- P. 660-661.

147. Oligny L.L. Human molecular embryogenesis: an overviem // Pediatric. Developmental Pathology. 2001. - Vol. 4. - P. 324-343.

148. Overath P. Antigen presentation by macrophages harboring intravesicular pathogen / P. Overath, Т. Aebisher // Parasitol. Today. 1999. - Vol. 15. - P. 325-332.

149. Owen W.E. Performance characteristics of six 1MMULITE 2000 TORCH assays / W.E. Owen et al. // Am. J. Clin. Pathol. 2006. - Vol. 126, N 6. -P. 900-905.

150. Pangalis L. Cytochemical findings in human nonneoplastic blood and tonsillar В and T- lymphocytes / L. Pangalis, S.R. Waldman, IT. Rappaport // Am. J. Clin. Pathol.- 1978 5,- Vol. 69, № 3.- P. 314-318.

151. Paul J. Fruhgeburt und Toxoplasmose. — München ; Berlin, 1962. 2831 s.

152. Portegies P. The neurology of HIV-1 infection. London : Meditech Media, 1995. - 18-20 p.

153. Prigione I. Toxoplasma gondii-specific CD4+ T cell clones from healthy, latently infected humans display a ThO profile of cytokine secretion / I. Prigione et al. // Eur. J. Immunol.- 1995,- Vol. 25, № 5.- P. 1298-1305.

154. Scholtyseck Е. Elektronenmikroskopische Untersuchungen über die Merozoiten von Eimeria stiedae und E. perforans und Toxoplasma gondii.

155. Zur systematische Stellung von T. gondii / E. Scholtyseck, G. Piekarski // Z. Parasitenk. -1965.-Vol. 29.-P. 91-115.

156. Scholtyseck E. Fine structure of parasitic Protozoa. An atlas of micrographs, drawings and diagrams. Berlin : Springer-Verlag.-1979.-206 s.

157. Scholtyseck E. Ultrastructure. // The Coccidia. Baltimore : Univ. Park Press. 1973.-P. 81-144.

158. Schwab J.C. The parasitophorous vacuole surrounding intracellular Toxoplasma gondii functions as a molecular sieve / J.C. Schwab, C.J.M. Beckers, K.A. Joiner // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1994. - Vol. 91. - P. 509-513.

159. Senet M. // Techn. biol. 1981. - Vol. 7, N 4. - P 182. 184-186, 188, 190, 192.

160. Seymour G.J. Enzyme differentiation of lymphocyte subpopulations in sections of human lymph nodes tonsils and periodontal disease / G.J. Seymour, H.M. Dockreil, J.S. Green-span// Clin. exp. Immunol.- 1978.- Vol. 32.-P. 169-178.

161. Sharf M. Latent toxoplasmosis and pregnancy / M. Sharf, I. Eibschitz, E. Eylan // Obstet.Gynecol.- 1973. Vol. 42, N 3. - P. 349-354.

162. Sibley L.D. Intracellular parasite invasion strategies //Science. 2004. -Vol.304(5668). - P.248-253.

163. Smith J.E. An ubiquitous intracellular parasite: the cellular biology of Toxoplasma gondii // Int. J. Parasitol. 1995. - Vol. 25. - P. 1301-1309.

164. Stray-Pedersen B. A prospective study of acquired toxoplasmosis among 8,043 pregnant women in the Oslo area // Am. J. Obstet. Gynecol. 1980. -Vol.136, N3.-P. 399-406.

165. Su C.L. Enhanced oral transmission acquired through recent recombination led to widespread expansion of Toxoplasma / Su C.L. et al. // Science. 2003. - Vol. 299. - P. 414-416.

166. Switaj K. Association of ocular toxoplasmosis with type I Toxoplasma gondii strains: direct genotyping from peripheral blood samples / K. Switaj et al. // J. Clin. Microbiol. 2006. - Vol. 44, N 11. - P. 4262-4264.

167. Thalchamer 0. // Ost. Arzteztg. 1975. - Bd 30, N 6. -S. 382-383.

168. Veraksa A. Developmental patterning genes and their conserved functions: from model organisms to humans / A. Veraksa, M. Del Campo, W. McGinnis // Mol. Genet. Metad. 2000. - Vol. 69.-P. 85-100.

169. Ward G.E. The origin parasitophorous vacuole membrane lipids in malaria-infa erythrocytes / G.E. Ward, L.H. Miller, J.A. Dvorak // J. Cell Sci. 1993.-Vol. 106.-P. 237-248.

170. Wester C.W., Bussmann H., Moyo S. at al. Serological evidence of H1V-associated infection among HIV-1-infected adults in Botswana / C.W. Wester et al. // Clin Infect Dis. 2006. - Vol. 43, N 12. - C. 1612-1615.

171. Wilson C.B. What can be done to prevent congenital toxoplasmosis? / C.B. Wilson, J.S. Remington // Am. J. Obstet. Gynecol.- 1980. Vol.138, N 4.-P. 357-363.

172. Wilson E.H. A critical role for IL-10 in limiting inflammation during toxoplasmic encephalitis / E.H. Wilson, U. Wille-Reece, F. Dzierszinski, C.A. Hunter// J. Neuroimmunol.- 2005.- Vol.165, N 1-2. P.63-74.

173. Yoon B.H. A systemic fetal inflammatory response and development of bronchopulmonary dysplasia / B.H. Yoon et al. // Am. J. Obstet. Gynekol. — 1999.-Vol. 181.-P. 773-777.

174. Zhang Y.W. Initial characterization of CST1, a Toxoplasma gondii cyst wall/ Y.W. Zhang et al. // Infect. Immunol.- 2001.- Vol. 69, № 1.- P.501-507.