Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Бронхиальная астма (экспериментальное обоснование истользования в аллергологии лекарственных композиций, приготовленных на основе рецептуры вьетнамской народной медицины)

РГ5 ОД 1 '1 МАЙ '¡995 -

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи УДК 616-092.001

ВУ МИНЬ ТХУК

БРОНХИАЛЬНАЯ АСТМА

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В • АЛЛЕРГОЛОГИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ КОМПОЗИЦИЙ, ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ РЕЦЕПТУРЫ ВЬЕТНАМСКОЙ НАРОДНО*. МЕДИЦИНЫ)

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1995 г.

Работа выполнена на кафедре патофизиологии Российского Гос дарственного медицинского университета.

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Г.В.Поря

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор

И.В.Петр

Доктор медицинских наук, профессор

В.И.Пыц

Доктор биологических наук, профессор

В.М.Бер;

Ведущая организация: Институт иммунологии МЗ и МП РФ

Защита состоится "_"_1995 года в_часов

заседании специализированного совета Д 084.14.06 Российского г< дарственного медицинского университета по адресу: 117869, Моа ул. Островитянова, 1.,

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке РП\

/

' Автореферат разослан "_" ___" 1995 года

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат медицинских наук, .............._ .

доцент Т.Е.Кузнецова

"Ч-

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы в различных странах мира отмечается тенденция к значительному росту заболеваемости такими аллергическими болезнями как бронхиальная астма и поллинозы (Г.В.Порядин, 1983; Н.Д.Беклемишев, 1986; И.Д.Болотников, 1989; Л.Йегер, 1990; Rick et al. 1988; Chaulet 1989). Так, по данным Паде: гимаса Б.Ю. (1983) и Dutau (1988), указанными аллергическими заболеваниями в различных странах мира страдает до 10-15 % населения. Большая их распространенность, и в первую очередь, бронхиальной астмы, привлекает все более пристальное внимание исследователей мира к этой проблеме (А.Д.Адо, 1988; Г.В.Порядин, 1983-1992; М.Д.Вялушкина, 1989; Jackson et al. 1985). j

Не является исключением эта проблема и для Вьетнама. Исследования, проведенные в аллергологическом центре СРВ (Нгуен Нанг Ан, 1985; By Минь Тхук, 1990; Фан Куанг Доан, 1991; Нгуен Тхи Ван, 1993) показали высокую распространенность аллергических заболеваний во Вьетнаме (около 25 % ).

Эволюция аллергических заболеваний, рост числа больных, тяжесть течения болезни, увеличение смертных исходов в период обострения многих из них и определяет актуальность целенаправленного и всестороннего клинического и экспериментального изучения этой проблемы.(Г.В.Порядин, 1983).

Современный этап исследований аллергических болезней характеризуется интересом к изучению иммунологических сдвигов у аллергических больных, изучению отдельных звеньев патогенеза, и на их основе поиску новых лекарственных средств для лечения аллергических заболеваний. Подобный интерес объясняется тем, что согласно современным представлениям (А.Д.Адо, * 1980; Р.В.Петров, 1982; Г.В.Порядин, 1983; Г.В.Порядин, Ж.М.Салмаси, 1987) именно иммун-

ной системе, ее дисфункции отводится наиболее существенное зна1 ние в патогенезе аллергических заболеваний. Однако механизмы I мунопатогенеза аллергии человека до сих пор остаются до конца решенными.

Актуальность проблемы усиливается еще и тем, что вследстЕ различий в методических подходах и сравнительно небольшого к тингента обследуемых больных, получаемые результаты носят раз речивый характер. Получение же ответа на все эти вопросы нес ненно способствовало бы решению такой важной задачи для алл гологов, как коррекция дефекта патогенетическими лечебными ме приятиями.

С другой стороны, во Вьетнамской медицине в последнее вр все большее распространение получают лекарственные средства, г готовленные из национальных лечебных трав. Вместе с тем, их пользование в практической медицине не основано на конкретных ретических и экспериментальных разработках, а скорее имеет эмш ческий характер.

Представленная работа на основе исследований, проведенны: наиболее распространенном во Вьетнаме заболевании - клещевой б хиальной астме, и таком тяжелом' заболевании, как инфекцио аллергическая бронхиальная астма, представляет попытку экспери тального обоснования целенаправленного поиска высокоэффектиЕ антиаллергических препаратов национальной Вьетнамской медициь

Цель работы. Целью настоящей работы явилось экспери тальное обоснование использования для лечения аллергических ( ных лекарственных средств национальной Вьетнамской медии изыскание более оптимального их применения при аллергических леваниях. .

Задачи исследования.

1. Изучение противоаллергического действия лекарственных композиций национальной медицины на модели экспериментальной анафилаксии.

2. Выявление иммунотропного эффекта лекарственных композиций национальной медицины in vitro на лимфоцитах здоровых доноров и больных различными формами бронхиальной астмы.

3. Исследование иммунного статуса у больных клещевой бронхиальной астмой, в зависимости от формы и характера заболевания.

4. На основе выявленных закономерностей в иммунном статусе больных определить основные иммунологические критерии, характеризующие антиаллергического эффект лекарственных композиций национальной медицины. '

5. Исследовать влияние отобранных лекарственных композиций на иммунный статус больных бронхиальной астмой в сопоставлении с их клиническим эффектом.

6. Осуществить анализ эффективности комбинированного применения препаратов народной медицины со специфической иммунотерапией (СИТ).

Научная новизна исследований. Впервые для Вьетнама дана клн-нико-иммунологическая характеристика важной этиологической группы бронхиальной астмы - клещевой. Впервые экспериментально обоснована антиаллергическая активность лекарственных средств народной медицины, показана перспективность их применения у больных различными формами бронхиальной астмы. Проведен экспериментальный анализ механизмов антиаллергического действия наиболее активных лекарственных средств народной Вьетнамской медицины, позволивший показать, что антиаллергический эффект, их в основном связан с воздействием на иммунную систему аллергических больных. Показано

очевидное преимущество их использования в сочетании со специфи ческой иммунотерапией.

Выявлены наиболее эффективные антиаллергические средств народной медицины, впервые установлена связь их антиаллергическог действия с иммунотропным эффектом, что позволило рекомендоват эти препараты, использовавшиеся ранее в качестве противовосп; лительных, в качестве иммуномодуляторов при аллергических забол( ваниях, что позволило расширить показания к их клиническому пр! менению.

На основе экспериментального анализа выявлены наиболее эс фективные по составу лекарственные композиции, показана большг эффективность их комбинации с СИТ. Разработка вопросов, связаннь с определением роли иммунорегуляторных механизмов в развитии течении различных форм бронхиальной астмы, обусловила новый по ход к изучению путей поиска новых противоаллергических средст основанных на изучении патогенеза аллергических заболеваний у ч ловека.

Практическая значимость. Полученные нами данные открыва! новые диагностические возможности и поаьилают эффективность те[ пии бронхиальной астмы, особенно распространенной во Вьетна клещевой бронхиальной астмы. Обоснованы подходы к коррекции кс кретных дефектов в иммунной системе у большинства больных брс хиальной астмой. Даны рекомендации о целесообразности одноврем( ного использования иммуномодуляторов и СИТ. Установленные за номерности воздействия лекарственных препаратов народной ме, цины на иммунокомпетентные клетки используются в учебном проц се кафедры аллергологии Ханойского медицинского института (при учении студентов и во врачебных циклах) и научно-исследователь« работе аллергологического Центра СРВ.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на международных симпозиумах (Швеция, 1994; Япония, 1994), съездах (Ташкент, 1991) и конференциях (Москва, 1987), на Всероссийском научном Конгрессе по пульмонологии (1995), Всероссийском национальном Конгрессе "Человек и лекарство" (1995), на научных конференциях кафедры аллергологии Ханойского медицинского института и кафедры патофизиологии РГМУ, на проблемной комиссии "Внутренние болезни".

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3? печатных работ, в которых отражено ее основное содержание, в том числе монография "Теоретическое обоснование использования средств, влияющих на эффекты эндогенного гистамина при терапии аллергических заболеваний".

Объем и структура диссертации. Общий объем диссертации составляет страниц. Работа содержит 104 таблиц, 23 рисунка и состоит из введения, 7 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Библиографическая часть содержит 423 источника.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Под наблюдением находились 168.больных атопической форме бронхиальной астмы в возрасте от 17 до 65 лет и 88 больных инфе! ционно-аллергической формой бронхиальной астмы в возрасте от 18 ; 60 лет, поступивших на лечение в аллерго-иммунологический центр национальный институт г. Ханоя. Кроме того, работа выполнена р лимфоцитах периферической крови 84 практически здоровых лиц возрасте от 16 до ПО лет, 46 больных АБА (в возрасте от 17 до 65 лет Экспериментальная часть работы выполнена на 200 морем свинках обоего пола массой 250 - 300 грамм, 104 отрезках подвздо1. ной кишки и тучных клетках 50 белых крыс массой 200 - ЗООграммоЕ В работе использованы следующие методические приемь А. Специфическое яллергологическое обследование. А-1. Сбор аллергологического анамнеза. Всех больных, нах дившихся под нашим наблюдением, тщательно обследовали. При эте обращали внимание на общее состояние, наличие характерных для т жалоб, выясняли физикальные данные легких, состояние сердца, вну ренних органов. Кроме того, проводили лабораторные исследован! (анализы крови, мочи, мокроты, кала), а также электрокардиографы рентгеноскопию, рентгенографию (по показаниям). С целью выявлен» у больных повышенной чувствительности к бытовой пыли нами пров дился сбор аллергологического анамнеза по схеме, разработанной институте иммунологии МЗМП РФ, Адо А.Д., 1976 с учетом особе костей клинического течения бронхиальной астмы в условиях Вьетн ма. При сборе аллергологического анамнеза стремились получить отв ты на вопросы, помогающие уточнить причины и условия, спосо ствующие возникновению и развитию заболевания (профессия,ран<

перенесенные заболевания,причины обострения основного заболевания,влияние факторов Среды и ряд других).

А-2. Постановка кожных тестов.

Сбор аллергологического анамнеза, клинико-лабораторные исследования имеют важное > для установления факта заболевания. Однако, по их сведениям выяснить причину болезни не всегда возможно. Вот почему необходимы дополнительные специальные аллергологические исследования, к которым относятся аллерголо-гические диагностические тесты (Новиков Д.К., 1991; Федосеева В.Н., Порядин Г.В. с соавт., 1993; Бережная Н.М. с соавт., 1986; Канчурин А.Х., Вайцекеускайте Р.Л. 1988; Franklang А., 1984). Специфическую диагностику проводили в период стойкой ремиссии заболевания.

Специфическую диагностику бронхиальной астмы проводили аллергенами, изготовленными в аллергоиммунологическом отделении больницы Бак Май (г. Ханой). Для специфической диагностики использовались аллергены, содержащие 10000 PNU.

Применяли один из наиболее широко распространенных современных методов диагностики аллергии - prick-тест (тест укола). Сущность метода состоит в проведении укола в кожу на глубину не более 1-1,5 мм через каплю испытуемого аллергена или тест-контрольной жидкости.

А-3. Провокационные пробы.

Многочисленные исследования показывают, что кожная чувствительность не всегда коррелирует с бронхиальной чувствительностью. Colldahl (1952) установил, что чувствительность бронхов к специфическому аллергену в 100 раз ниже, чем кожи.

Диагностическое значение провокационных проб возрастает при сопоставлении с результатами аллергологического анамнеза и кожно-аллергических проб. Провокационные пробы являются самым объективным критерием в этиологии аллергических заболеваний (Новиков

Д.К., 1991; Бережная Н.М. с соавт., 1986; Йегер Л., 1990; Федосеев В.Н., Порядин Г.В. с соавт., 1993; Wallenstein et al., 1985; Pelican e al., 1987).

Для определения специфичности аллергена ставили провокаш онные эндоназальные пробы. Батный шарик диаметром 5 мм, смоче| ный 0,2 мл тест-контрольной жидкости (разводящая жидкость или ф| зиологический раствор), вводили в одну половину носа на 15 ми между нижней носовой раковиной и перегородкой носа. При о сутствии реакции со стороны слизистой носа в другую половинку но< вводили ватку, смоченную аллергеном (0,2 мл) на 10 - 20 мин (в зав симости от вида аллергена). С пыльцевыми и лекарственными алле генами - на 10 мин, с бытовыми, эпидермальными, бактериальными грибковыми - на 20 мин.

Продолжительность контроля за изменениями характера слизи той и отделяемого, а также субъективными жалобами больного зав село от вида аллергена, вводимого в полость носа. Так, с пыльцевьп аллергенами она составила 2 ч, с бытовыми и эпидермальными - 6 ч грибковыми и бактериальными - 24 ч от начала постановки пробы.

> feCT счихали положительным при появлении зуда в носу, чи; ния, жидкого.отделяемого, заложенности исследуемой половины но< отека слизистой. При выраженных реакциях аллерген смывали фи: ологическим раствором, и слизистую носа смазывали 0,1% раствор адреналина.

Бронхиальные провокационные тесты. Перед проведением бр хиального теста оценивали состояние больного по данным перкуссш аускультацин легких, данным рентгенодиагностики, результатам ла раторного исследования и др. Параллельно измеряли исходные пока тели функции внешнего дыхания. Изменение этих показателей в ди мике позволяет вычислить так называемый индекс бронхоспазма.

Ингаляционко-провокационные пробы считали положительным

при снижении данных пневмотахометрии на 20% и более по сравнению с исходным уровнем; при появлении субъективных жалоб, начиная от першения в горле, ощущения тяжести в груди, кашля до приступа удушья разной степени выраженности; при наличии физи-кальных отклонений (хрипы и др.) во время аускультацин больного.

А-4. Кожная проба Прауснитца-Кюстнера.

Метод пассивной сенсибилизации по Прауснитцу-Кюстнеру и его модификации получили широкое распространение в аллергологической практике. Сущность этого метода заключается в том, что 0,1мл сыворотки больного аллергическим заболеванием вводят внутрикожно здоровому человеку, а через сутки в это же место вводят тот аллерген, к которому предполагается повышенная чувствительность у исследуемого больного. В месте введения аллергена и сыворотки на коже здорового человека развивается воспалительная реакция. Если же иве-денный аллерген не соответствует сыворотке, примененной для пассивной сенсибилизации, аллергической реакции на коже не возникает. Эта реакция нашла широкое применение в диагностике атопических заболеваний. Тест позволяет выявить антитела, относящиеся к иммуноглобулину Е.

А-5. Непрямой тест дегрануляции тучных клеток (РНДТК).

Принцип метода основан на реакции тучных клеток, выполняющих роль клеток-мишеней, на образующийся комплекс антител испытуемой сыворотки больного и добавляемого in vitro В систему аллергена-Под воздействием такого комплекса развивается реакция, сопровождающаяся экскрецией медиаторов и выражающаяся уменьшением окраски гранул, изменением формы клетки, вакуолизацией протоплазмы. Методика постановки РНДТК подробно описана Зеличенко Л.И. (1969).

Б. Иммунологическое обследование-

Б-1. Выделение лимфоцитов.

Венозную кровь стабилизировали 2,7% раствором трилона I (этилендиаминтетраацетата натрия - ЭДТА) из расчета 1 мл ЭДТА н; 10 мл крови. Лимфоциты выделяли в одноступенчатом градиене плот ности по методу Boum (1968). Цельную кровь разводили в соотно шении 1:3 средой 199, наслаивали по 12 мл разведенной крови на 3 м. фикол-верографина с плотностью 1,077 г/мл и центрифугировали 3( минут при 600g. Затем собирали мононуклеарные клетки, содержа щиеся в интерфазе, в силиконовые пробирки, трижды отмывали цент рифугированием при 300g в течение 10 минут в среде 199. Далее оп ределяли количество выделенных лимфоцитов методом подсчета в ка мере Горяева. Суспензию клеток разводили средой 199 до концен трации 2х106 клеток в мл. Жизнеспособность клеток, определяема: методом окрашивания 0,1% раствором трипанового синего, в средне! составила 97%.

Б-2. Определение относительного и абсолютного содержани. в периферической крови Т-лимфоцитов в реакции спонтанного ро зеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Определени числа Т-лимфоцитов проводили с помощью реакции спонтанного Е розеткообразования по методу Jondal et al. (1972) в модификации негина Б.В. с соавт. (1987). В качестве индикаторных частиц дл определения Т-лимфоцитов использовали хранившиеся не более 2-недель в растворе Олсвера эритроциты барана (ЭБ). Непосредственн перед постановкой реакции ЭБ трижды отмывали в среде 199 и готе вили 0,5% суспензию (108 клеток в мл) эритроцитов в среде 199. Пс следующие этапы реакции проводили в 96-луночном планшете, внос туда 50 мкл исследуемой суспензии лимфоцитов и 50 мкл 0,5 е} суспензии ЭБ. Планшет центрифугировали 5 минут при 200g, поел чего выдерживали 1 час при 4°С. По истечении времени инкубаци

вносили в каждую лунку 50 мкл 1% глютарового альдегида фирмы Merck на физиологическом растворе. Через 20 минут надосадочную жидкость удаляли из лунок встряхиванием и однократно промывали осадок клеток 50 мкл дистиллированной воды. После этого к нему добавляли 50 мкл краски Задорожного С.И. и Дозморова И.М. (0,01% раствор азура II в 0,05% растворе тритона Х-100 на дистиллированной воде). Осадок аккуратно ресуспендировали и через 20 минут заполняли камеру Горяева. В каждом препарате просматривали не менее 200 лимфоцитов. За "розетку" принимали лимфоцит, присоединивший три и более эритроцитов.

Б-3. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС-розеткообразования. Клетками-индикаторами для выявления В-лимфоцитов служили эритроциты быка, сенсибилизированные антигенами и комплементом. Основные этапы реакции выполнялись по методу, описанному Jondal et al. (1972). Эритроциты быка дважды отмывали физиологическим раствором и центрифугировали при 200g в течение 5 минут. Готовили 2,5%-ную взвесь эритроцитов быка (2 мл). Вносили 2 мл кроличьей антисыворотки в разведении 1:32. Полученную смесь инкубировали при 37°С в течении 30 мин. После инкубации эритроциты дважды отмывали средой 199 при 200g в течении 5 мин. К полученному осадку добавляли 2 мл среды 199 и 2 мл комплемента в разведении 1:10. Смесь инкубировали 30 минут при 37°С, после чего трижды отмывали и готовили 0,5%-ную взвесь. К 0,1 мл суспензии лимфоцитов (2х106 клеток) добавляли 0,1 мл полученного комплекса: эритроцит - антитело - комплемент. Смесь клеток центрифугировали 5 минут при 200g. Полученные розетки также фиксировали глутаровым альдегидом и готовили мазки для подсчета.

Б-4. Определение процентного и абсолютного количества "0"-лимфоцитов. Процентное и абсолютное количество "0"-лимфоцитов

определяли путем вычитания суммарного содержания Т- и В-клеток от общего количества циркулирующих в периферической крови лимфоцитов (Froland, Natvig, 1973).

Б-5. Определение содержания "активных" розеткаобразую-щих клеток (Еа-РОК). В основу определения Еа-РОК была положена методика, разработанная Smith et al. (1975) в модификации Порядина Г.В. (1983). После добавления к выделенным и очищенным лимфоцитам исследуемых лиц суспензии эритроцитов барана, полученную смесь центрифугировали при 200 об/мин в течении 5 минут и инкубировали при 37°С в течении 10 мин. После чего клеточную взвесь мягко фиксировали глутаровым альдегидом и готовили из нее мазок на предметном стекле. Препарат окрашивали и проводили подсчет розет-кообразующих клеток аналогично Е-РОК

Б-6. Определение теофиллин-чувствительных лимфоцитов.

Существуют различные системы идентификации у человека различных типов Т-супрессорных клеток (Kunkel, Siebert, 1988). Одним из методов оценки состояния Т-супрессоров при различных заболеваниях является теофиллиновый тест, основанный на различной чувствительности субпопуляций Т-лимфоцитов, вступающих в реакцию Е-розеткообразования к теофиллину. Часть лимфоцитов, так называемая теофиллин-чувствительная субпопуляция, при инкубации с этим препаратом утрачивает способность к Е-розеткообразованию. Именно эта субпопуляция Т-лимфоцитов отождествляется с супрессорными клетками. Для постановки теста к 0,1 мл суспензии выделенных лимфоцитов и эритроцитов барана добавляли 0,1 мл 0,1 М раствора теофилли-на. Инкубировали в течении 1 час при температуре 37°С. Подсчет ро-зеткообразующих лимфоцитов проводили в камере Горяева.

Б-7. Определение Е-розеткообразующих лимфоцитов, стимулированных интерлейкином-2 (ИЛ-2). Добавление ИЛ-2 в дозе 1000

ЕД/МЛ в культуру клеток при концентрации клеток 2 млн/мл, вызывало стимуляцию Е-розеткообразования. Определение ее проводили в контрольной и опытной группе.

Б-8. Определение относительного и абсолютного содержания в периферической крови лимфоцитов, экспрессирующих СДЗ-, СД4-, СД5-, СД8-антигены, с помощью МАТ в реакции непрямой имму-нофлюоресценции. Для постановки реакции иммунофлюоресценции использовали суспензию мононуклеарных клеток в среде 199 с концентрацией 2,5х106 клеток в мл. Реакцию проводили в микроварианте на стекле, фиксируя мононуклеарные клетки на поли-Ь-лизине. Все инкубации проводили во влажной камере. После фиксации клеток вносили по 10 мкл МАТ серии ЛТ (институт иммунологии МЗ РФ): МАТ ЛТ1 против С05-антигена; МАТ ЛТ4 против С04-антнгена; МАТ ЛТ8 против С08-антигена. МАТ использовались в титре 1:100, предложенным изготовителем. Лимфоциты с МАТ помещали в холодильник на 30 минут при 4°С. После инкубации клетки отмывали в физиологическом растворе, приготовленном на фосфатном буфере, и вносили в лунки меченную флуоресцеинизотиоциона: .ч (ФИТЦ) кроличью сыворотку против иммуноглобулинов мыши (институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи) в количестве 10 мкл в рабочем титре. Выдерживали 30 минут при 4°С. По окончании инкубации клетки отмывали в физиологическом растворе, приготовленном на фосфатном буфере. Излишки жидкости удаляли встряхиванием. В лунки вносили по 10 мкл раствора глицерина, приготовленного на физиологическом растворе, и накрывали покровным стеклом. Препарат изучали в люминесцентном микроскопе Люмам-ИЗ. Просматривали в ультрафиолетовом свете и фазовом контрасте не менее 200 клеток и определяли процент флюоресцирующих лимфоцитов с изумрудным свечением.

В каждом эксперименте для контроля иммунологической специфичности сыворотки препараты инкубировали непосредственно с меченной сывороткой. В 98% случаев специфическое свечение полностью отсутствовало. В тех случаях, когда наблюдали свечение, количество светящихся клеток учитывали при оценке результатов опыта.

Для оценки влияния препаратов "Ким-Нган" и "Нук-Нак" на субпопуляции Т-лимфоцитов клетки в концентрации 2х106 кл/мл в среде 199, содержащей 10% сыворотки, культивировали в присутствии препаратов в исследованных дозах в течении 16 часов в атмосфере 5% С02 при 37°С. После 16 часов инкубационную смесь центрифугировали и определяли процент CD4-, CD5-, С08-клеток под влиянием исследуемого препарата.

Б-9. Определение относительного и абсолютного содержания в периферической крови В-лимфоцитов, несущих поверхностные иммуноглобулины, в реакции прямой, иммунофлюоресценции.. Постановка прямой реакции иммунофлюоресценсии отличалась от реакции непрямой ¡к.мунофлюоресценсии лишь тем, что сразу после фиксации лимфоцитов на поли-Ьлизине в каждую лунку вносили меченную ФИТЦ кроличью сыворотку против иммуноглобулинов человека (институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи) в рабочем титре в количестве 10 мкл. Остальные этапы аналогичны этапам реакции непрямой иммунофлюоресценсии.

Б-10. Определение пролиферативной активности лимфоцитов в реакции бластгпрансформации (РБТЛ). Для выявления эффекта испытуемых препаратов на иммунокомпетентные клетки, была использована реакция бласттрансформации Т-лимфоцитов, индуцируемая ФГА. Опыты проводили, используя лимфоциты периферической крови здоровых доноров. Моноиуклеарные клетки выделяли из периферической крови как указано выше. Реакцию ставили в стерильных

микропланшетах на 96 круглодонных лунок. В опытные лунки добавляли ФГА в субоптимальной концентрации 1 мкг/мл и испытуемый препарат. Контролем служили лунки без добавления ФГА (определение спонтанной пролиферации). Далее все клетки инкубировали в С02-инкубаторе в течении 72 часов при температуре 37°С. За 4 часа до окончания культивирования во все лунки вносили по 0.0L: мл Н3-тимидина (0,01 мкКи). По окончании инкубации содержимое каждой лунки переносили на стекловолоконные микропористые фильтры и промывали дистиллированной водой. После этого фильтры собирали, высушивали и помещали во флаконы с 10 мл толуолового сцинтиллятора. Включение метки определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика "Beckman'.

Спонтанную и индуцированную ФГА РБТЛ оценивали по вклю-ченнию Н3-тимидина соответственно в контрольных и опытных культурах в имп/мин. Пролиферативную активность лимфоцитов под действием ФГА и на ФГА в присутствии препарата выражали в виде индекса стимуляции (ИС) (Фримель Г., 1987; Weir et al., 1986):

Б-11. Исследование функциональной активности Кон-А индуцированных иммунорегуляторных Т-клеток. Оценка функциональной активности неспецифических митоген-индуцированных иммунорегуляторных лимфоцитов включала два этапа.

Первый этап: индукция поликлональными митогенами (КонА или . ФГА) иммунорегуляторнои (супрессорной или хелперной) активности лимфоцитов. Длительность первого этапа составляет 48 или 72 часа, в зависимости от используемого митогена.

Второй этап: тестирование и регистрация иммунорегуляторной функции, что основано на изменении пролиферации тест-лимфоцитов при их совместном культивировании с иммунорегуляторными клетками.

Культивирование лимфоцитов в течение указанных сроков требует строгого соблюдения стерильности (работа в стерильном блоке, стерилизация инструментов, реактивов и т.д.).

В качестве объекта исследования были выбраны регуляторные лимфоциты больных бронхиальной астмой. В качестве экспериментальной модели использовали определение иммунорегуляторной активности лимфоцитов, индуцированной конканавалином А, как наиболее информативный при аллергических заболеваниях(Петров Р.В. с соавт., 1979; Порядин Г.В. с соавт., 1980).

Для определения активности иммунорегуляторных Т-лимфоцитов выделяли мононуклеарные клетки как описано выше и ресуспендиро-пали в культуральной среде следующего состава: среда 199 -""80%, пул сывороток человека АВ-группы - 20%, глютамин - 30 мкг/мл. Лимфоциты переносили в четыре пенициллиновых флакона, содержащих по 2 мл культуральной среды, из расчета 5 миллионов клеток на один флакон. Первый флакон служит контролем, во второй добавляли кон-канавалин А в концентрации 60 мкг/мл, в третий - исследуемый препарат в различных концентрациях, в четвертый - исследуемый препарат и конканавалин А в тех же концентрациях. Лимфоциты культивировали в течение 48 часов при температуре 37°С. Через 48 .часов лимфоциты обследуемых обрабатывали митомицином С в течение 30 мин при 37°С (40 мкг/мл). Затем дважды отмывали и подсчитывали в камере Горяева. Параллельно в стерильных условиях выделяли лимфоциты из крови здорового донора, подсчитывали в камере Горяева и ставили с ними реакцию бластной трансформации в 6 рядах пробирок, по 3 пробирки в каждом ряду. В каждой пробирке содержалось по 500 тысяч лимфоцитов донора в конечном объеме 1 мл. Первый ряд пробирок служил контролем, в последующие ряды добавляли ФГА П в раз-педении 1:100, в пробирки 3, 4, 5 и 6 ряда вводили регуляторные лим-

фоциты из соответствующих пенициллиновых флаконов в соотношении 1:1. Пробирки инкубировали в течение 72 часов в термостате при 37°С. За 4 часа до окончания инкубации во все пробирки добавляли Н3-тимидин. После окончания культивирования лимфоциты отмывали на микропористых фильтрах. Фильтры помещали в сцинтилляционные кюветы и определяли включение меченного тимидина на сцинтил-ляционном счетчике. Рассчитывали индекс иммунорегуляцни. Если величина индекса иммунорегуляцни имела знак "+", то результат оценивался как индекс супрессии, если же индекс регуляции имел знак "-", то результат оценивался как индекс активации.

Б-12. Определение /^Л и методом радиальной имму-нодиффузии. Определение сывороточных иммуноглобулинов проводили по методу Мапаш е1 а1. (1965), для чего образцы исследуемых Сывороток помещали в лунки агара, который содержит антитела к иммуноглобулинам одного из классов (1й<3, ^М или ^А) в известной концентрации. Иммуноглобулины, диффундирующие из лунок в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитации, размер которых находится в тесной зависимости от содержания в сыворотке обследуемых иммуноглобулинов того или иного класса. Измеряли диаметр кольца в испытуемых пробах и по калибровочной кривой определяли концентрацию иммуноглобулина соответствующего класса в исследуемых образцах. Концентрацию выражали в г белка на 1 литр сыворотки.

Б-13. Определение секреторного иммуноглобулина А.

Для постановки реакции использовали реакцию МапсЫ по определению сывороточных иммуноглобулинов, а также моноспецифические сыворотки против секреторного Б-Е^А человека.

Б-14. Определение в сыворотке крови человека.

В нашей работе мы проводили определение общего IgE по методу ПРИСТ. Нами использованы коммерческие наборы Phadebas IgE PRIST шведской фирмы "Фармация" (Pharmacia diagnoses). Phadebas IgE PRIST (бумажный радиоиммуносорбентный тест) является методом, основанным на принципах "сандвичтехники" - использования бумажных дисков в качестве твердой фазы. Анти-IgE, ковалентно связанные с бумажным диском, реагируют с IgE изучаемого образца (сыворотки). После отмывания добавляли антитела против IgE, меченные 1251, которые формируют комплекс с IgE молекулами, связанными с антителами, фиксированными на_ бумажном диске в процессе первичной инкубации. Связанная и свободная радиоактивность разделяется в процессе промывания дисков. Радиоактивность комплёкса измеряли на гамма-счетчике. Количество связанной активности прямо пропорционально концентрации IgE в образце. Постановку теста осуществляли в соответствии с рекомендациями фирмы.

В. Экспериментальные патофизиологические метопы.

В-1. Экспериментальный анафилактический бронхоспазм.

Поскольку одно из ведущих мест в экспериментальной аллергологии занимает анафилактическая реакция гладкомышечных органов, широко используемая для выявления реакции антиген-антитело, для выявления аллергической реакции у животных и влияние на нее испытуемых препаратов, нами была выбрана модель анафилактического бронхоспазма у сенсибилизированных морских свинок. Морских свинок сенсибилизировали трижды перекристаллизованным яичным альбумином фирмы "Merck" с полным адъювантом Фрейнда по общепринятой методике. На 21-й день от начала сенсибилизации морских свинок наркотизировали путем внутримышечной инъекции нембутала из расчета 4 мг/100 г массы животного. Через 20 мин животных фиксировали спинкой вниз, выделяли трахею и вводили в нее канюлю, ко-

торую подсоединяли к дыхательной капсуле. Величину дыхательной амплитуды (размах пишущего пера) выражали в мм. Бронхоспазм у морских свинок, вызванный антигеном, выражали в процентах уменьшения амплитуды дыхания к исходной

В-2. Реакция непрямой дегрануляции тучных клеток экспериментальных животных (РНДТК). Реакцию ставили с сывороткой больных аллергией к домашней пыли, либо с сывороткой крови морских свинок, сенсибилизированных аллергеном домашней пыли. Тучные клетки получали из перитонеального экссудата здоровых крыс. Животных забивали кровопусканием, вводили внутрибрюшинно 10 мл подогретого до 37°С раствора Тироде, после легкого массажа брюшной стенки в течение 5 мин делали разрез ножницами по средней линии длиной 2 см и собирали экссудат в смоченную гепарином пробирку. Для выполнения РНДТК на предметные стекла, предварительно окрашенные 0,3% раствором нейтрального красного, наносили ингредиенты системы, каждый в объеме 0,05 мл. Всего ставили не менее 3 проб. Капли покрывали покровным стеклом, края которого смазывали вазелином и инкубировали в течение 10-15 мин при 37°С. При учете результатов подсчитывали 100 тучных клеток, вычисляя процент измененных клеток. Тест считали отрицательным, если процент деграну-лированных клеток был менее 15. Условно выделяли три степени положительной реакции: слабоположительная - от 20 до 30% измененных клеток, положительная - от 30 до 40% и резкоположительная - от 40% и более. Процент дегранулированных тучных клеток определяли вычитанием числа измененных клеток в контроле из числа измененных клеток в опыте.

Г. Статистические метопы обработки полученных результатов.

Определение достоверности различий'результатов исследований, описанных в работе, при большой выборке проводили с использоваии-

ем критериев Стьюдента. При малой выборке с неправильным распределением - с применением непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1989; Лакин Г.Ф., 1990; Миндер О.П. с соавт., 1982). Расчеты проводили на персональном компьютере типа IBM AT с применением пакета прикладных программ "Statgraphics".

Предварительно нами были проанализированы двадцать два лекарственных растения, относящихся к группе антивоспалительных и противоязвенных средств. Полученные результаты указывают на то, что эти растения, хотя и относятся к различным семействам, все содержат флавоноидные соединения в значительных количествах. Можно было предположить, что флавоноиды являются биологически активными веществами, и что именно они обусловливают антивоспалительное, антиаллергическое, противоязвенное действие лекарственных растений.

В работе использованы тотальный экстракт (настой), сумма фла воноидов, экстрагированных из "Ким-Нган" и "Нук-Нак" и компози ция, состоящая из 11 лекарственных трав.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

В последние годы исследователями установлена решающая роль лимфоцитов в иммунном ответе (Петров Р.В., 1969, 1970, 1976; Фрид-штейн А.Я., 1969, 1978; Петров Р.В. с соавт., 1986; Порядин Г.В., 1983; АгеИапо! е! а1, 1981; БЬаушо, 1984, 1986; Апаша е! а1, 1989).

Учитывая это обстоятельство , мы исследовали иммунологические параметры у 64 здоровых доноров в возрасте от 16 до 60 лет и 256 больных в возрасте от 17 до 65 лет с наиболее тяжелой формой проявления аллергии - бронхиальной астмой (168 - АБА, 88 - И АБА ) по наиболее распространенным критериям: тесты I уровня (Е-розет-кообразование, ЕАС-розеткообразование, определение "О" лимфоцитов, использование моноклоналыюй технологии ); тесты II уровня (1'Б'ГЛ, Кон-А индуцированную иммунорегуляторную активность ).

У всех обследованных больных повышенная гиперчувствительность была подтверждена комплексом аллергологических тестов с соответствующими аллергенами. В момент исследования больные не получали гормональной терапии.

У больных АБА отмечалось достоверное снижение относительного содержания Т-лимфоцитов и некоторое снижение их абсолютного количества. Иная закономерность была отмечена при исследовании содержания ЕАС-РОК. Количество ЕАС-РОК у больных АБА имело тенденцию к увеличению как относительного , так и абсолютного их содержания.

Изучение субпопуляции "нулевых" лимфоцитов в периферической крови показало, что у больных АБА имело место увеличение как относительного , так и абсолютного их содержания (Р<0,05).

Таблица 1

Характер изменения содержания лимфоцитов, вступающих в розеткообразование в периферической

крови больных бронхиальной астмой в зависимости от стадии заболевания

Группы обследованных

Здоровые Больные АБА Больные ИАБА

Исследуемые показатели п=64 ремиссия л=52 Обострение п=36 ИАБА I п=48 ИАБА -II п-32

Е-РОК % 63.16±1,6 59,95+1,0 54,45 + 1,4 62,6+1,2 53,2+0,8

кл/ мкл 1277+65 1234+52 1103+52 1270+54 1160+63

ЕАС-РОК о/ /«> 20,76+!,2 26,4 + 1,0* 22,6 + 1,2 26,0+0,8* 24.4+0,7

к л / мкл 414+25 523+55 435+43 520+36 536+48

"0"-лимфоциты. % 16,03+2,4 13,65+1,4 22,95 + 1,0* 11.4+0,5* 17,4+0,8

кл/мкл 358+73 328+67 558+75 275+31 345+42

Еа-РОК /о 22,62+1,91 15,84+1,1* 16,2+1,3* 18,8+0,9 15,6+1,2

кл/мкл 475+28 328+22 357+18 368+52 344+61

ИЛ-2 стимулированные Е-РОК % 67,53+2,16 61,1 + 1.9* 58,5±1.7 62,6+1,4 60,4+1,0

кл / мкл 1377+75 1221+75 1201 ±93 1284+68 1148+44

Теофнллинчувствн-тельные Е-РОК о/ /о 9,35+0,94 5,65+0,9* 5,01+0,5* 8,8+0,7 5.8+0.3*

кл/ мкл 185+13 123+5 95+9 144+10 94+6

*-Р<0,05

При анализе содержания Е-РОК, ЕАС-РОК и количества "0-"лим-фоцитов в периферической крови в зависимости от клинического проявления заболевания (Адо А.Д. 1976) было обнаружено, что выпиленное нами увеличение содержания "нулевых" лимфоцитов при бронхиальной астме связано в основном с обострением заболевания (табл. 1). Количество же "нулевых" лимфоцитов в крови больных, находившихся в фазе ремиссии не отличалось от их содержания у здоровых доноров.

Следовательно, на основании полученных данных можно сделать заключение, что количественное содержание изученных популлций лимфоцитов по их способности к розеткообразованию, имеет определенную связь с характером проявления бронхиальной астмы, однако эти изменения в отношении числа Е-РОК, ЕАС-РОК и "СТ-лимфоиитоа наиболее устойчиво выявлены лишь в стадии обострения АБА.

Как видно из таблицы 1, у больных ИАБА не отмечено достоверного снижения относительного содержания Т-лимфоцитов. По количество ЕАС-РОК у больных ИАБА имело тенденцию к увеличению как относительного, так и абсолютного их содержания.

Изучение субпопуляции "нулевых" лимфоцитов в периферической крови показало, что у больных ИАБА имело место снижение как относительного, так и абсолютного их содержания. Сравнение содержания Т-димфоцитов у больных ИАБА с содержанием Т-лимфоцитов у больных АБА обнаружило, что содержание последних у больных АБА с легкой степенью заболевания не отличалось от их содержания у зд-ровых доноров. Весьма интересным нам представлялось сравнить полученные результаты с данными других авторов. Анализ результатой, полученных при изучении иммунного статуса здоровых людей показал, что содержание в периферической крови популяции Т- , В- лимфоцитов не зависит от пола исследованных лиц, что совпадает с данными, полученными другими исследователями (Пастушенков В.Л. с соавт. ,1990

; Симонова A.B. с соавт. ,1989 ; Смирнов B.C. с соавт., 1990 ; Falcao , 1987).

Следовательно на основании полученных данных можно сделать заключение, что количественное содержание субпопуляций лимфоцитов может свидетельствовать об определенных изменениях в иммунной системе больного аллергией, однако они мало коррелируют со степенью тяжести заболевания, о чем указывают и другие исследователи (Порядин Г.В., 1984; Салмаси Ж.М., Межнева А.Г.; 1984; Журавлева Н.Е., 1992).

По нашим данным наиболее устойчивым и информативным показателем иммунопатологического процесса при БА является количество ЕА-РОК в периферической крови больных бронхиальной астйой, которое остается достоверно сниженным независимо от характера проявления заболевания как в стадии обострения, так и ремиссии. Более выраженным эти изменения были при ИАБА (табл. 1).

Согласно мнению Г.В. Порядина с соавт (1984, 1989), ЕА-РОК являются весьма чувствительными показателями состояния клеточного иммунитета, значительно уменьшаясь у больных с выраженными повреждениями иммунной системы и обнаруживая значительный подъем после проведения иммунотерапии, коррегирующей иммунную систему больного. С учетом независимости этого показателя от возраста и пола исследуемого, Еа-РОК становятся важным иммунологическим критерием состояния иммунной системы у аллергического больного.

Оценка теофиллин-чувствительной субпопуляции Т-лимфоцитов у больных бронхиальной астмой показала, что процент теофиллин-чувст-вительных Т-лимфоцитов достоверно снижен (Р<0,05), что свидетельствует об ослаблении супрессорной активности иммунорегуляторных клеток у обследованных больных ( табл. 1).

В последние годы, благодаря разработке способов, позволяющих оценить фиксацию на лимфоцитах интерлейкинов появились сведения

о том, что у больных БА изменяется количество лимфоцитов , несущих рецептором к интерлейкину-2 (Hsieh, 1985; Г.В Порядин, Ж.М Сал.ма-си, 1987; В. Баярт, 1989; М.Е. Богданов, 1989). Как следует из таилл-цы 1 добавление ИЛ-2 в дозе 1000 Ед/мл в культуру клеток вызывало в контроле достоверную стимуляцию Е-розеткообразования (1'<0,0 S) и практически не влияло на характер Е-розеткообразования лимфоцитами больных бронхиальной астмой, как в стадии обострения так и и стадии ремиссии. Количество лимфоцитов, несущих рецепторы к П'1 -2 хотя и возрастало в сравнении с исходным уровнем, однако это возрастание было статически недостоверным: с 57.2 ± 2.3% до 59.оО ± 1.8% при АБА и с 60.4 ± 1.6% до 61.5 ± 1.2% при ИАБА.

Таким образом , несмотря на некоторое увеличение Е-РОК после воздействия ИЛ-2, их уровень в группе больных бронхиальной асг.мой был статически ниже уровня Е-розеткообразования в контроле после аналогичной стимуляции ИЛ -2. Этот факт имеет важное значение, свидетельствуя о снижении количества Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к ИЛ-2 , что свидетельствует уже не только о количественных, но и функциональных изменениях в иммунокомпетентных клетках больных как атопическои , так и инфекционно-аллергической формой астмы.

В последнее время ряд исследователей все больше внимания уделяет определению субпопуляционного состава лимфоцитов при различных аллергических заболеваниях с помощью МАТ (Прозоровский Н.С. с соавт. , 1991). Поэтому в настоящей работе особое внимание уделено изучению субпопуляций CD4+ и CD8+- лимфоцитов, как клеткам-регуляторам иммунной системы (табл.2). Нами показано, чю для больных АБА характерно снижение относительного содержании субпопуляции CD4+ лимфоцитов как в стадии ремиссии заоолевсшин, так и при обострении, что подтверждает данные других авторов (Сильвестров В.П. с соавт., 1989; Симионка Ю.М. с соавт., 1987;

Corrigan , Ray ,1990; Varghese et al., 1990). Достоверное снижение относительного содержания субпопуляции С08+-лимфоцитов в стадии обострения нами выявлено у 80% больных АБА, тогда как в стадии ремиссии - у 78% больных. Это совпадает с результатами Revoglionc et al (1989); Журавлева Н.Е. ,1992.

Таблица 2.

Характеристика субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови здоровых доноров и больных бронхиальной астмой.

Исследуемый маркер Здоровые п = 64 Больные АБА п = 88 Больные И АБА п = 80

CD5 % кл/мкл 53,5+0,8 1007+50 53,4+0,6 995+40 52,6+1,2 1002+72

CD4 % кл/ мкл 42,6+0,6 824+38 40,3+0,7 862+56 41,2+0,8 820+56

CD8 % кл/ мкл 22,2+0,7 423+24 16,7+0,4 324+15 17,5+0,6 385+26

CD4/CD8 1,92+0,70 2,45+0,06 2,35+0,05

Ig % кл/ мкл 17,0+1,2 327+16 17,3+1,2 336+18 17,5+0,9 340+22

Однако, наиболее характерным и стабильным изменением субпо пуляционного состава лимфоцитов при атопической бронхиальной аст ме оказалось достоверное снижение относительного и абсолютного ко личества С08+- лимфоцитов, как в стадии обострения, так и в стадш ремиссии заболевания. Снижение относительного и абсолютной содержания С08+-лимфоцитов в стадии обострения выявлено у все; обследованных больных АБА , в стадии же ремиссии - у 90% больны; астмой. Количественное содержание С08+-лимфоцитов достоверю снижено уже в первый год заболевания атопической бронхиально!

астмой и это снижение сохраняется у всех больных независимо от длительности и стадии заболевания. Полученные нами результаты согласуются с данными Симийонка Ю.М. с соавт. (1989), Хечинашвили Г.Н. , Гургенидзе Г.Г. (1989), Aqvuilar et al. (1987) , Kruszewsky et al (1987) , Lokar et al. (1990) , Revogliono et al (1987), также показавшими снижение субпопуляции С08+-лимфоцитов при АБА. В тоже время , мы не смогли подтвердить результаты исследований Tsai et al (1990) , которые обнаружили у больных АБА высокие уровни CD8+-лимфоцитов и результаты Schueler et al (1985), не выявляющих изменения в содержании субпопуляции С08+-лимфоцитов при бронхиальной астме.

Нами отмечено, что у больных инфекционно-аллергической бронхиальной астмой в стадии обострения заболевания достоверно снижено относительное и абсолютное количество С08+-лимфоцитов, которое составили соответственно 16,8 ± 0,4% и 364 ± 28 кл/мкл (Р<0.001) и за счет этого повышение иммунорегуляторного индекса.

Как результат изменений в содержании CD4+ и С08-лимфоцитов , которые соответствуют функциональным субпопуляциям Т-хелперов и Т-супрессоров/эффекторов (Мальцев B.C. , 1989) у больных нами отмечено достоверное повышение . хелперно-супрессорного отношения (CD4/CD8 лимфоцитов) как в стадии обострения, так и в стадии ремиссии заболевания.

Тот факт, что снижение содержания С04+-лимфоцитов наблюдается не у всех больных атопической бронхиальной астмой, как в стадии обострения, так и в стадии ремиссии, а С08+-лимфоцитов не у всех больных в стадии ремиссии, свидетельствует об иммунологической гетерогенности больных бронхиальной астмой, что ,в свою очередь .вызывает необходимость дифференцированного подхода при назначении и оценке иммуномодулирующего лечения этим больным.

Изучение зависимости популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов от длительности и степени тяжести проведено у больных АБА и ИАБА , раздельно в стадии обострени и в стадии ремиссии заболевания.

Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови больных АБА в зависимости от длительности заболевания представлен в табл. 3. Нами не отмечено достоверных изменений содержания лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности С04+, С05+ антигены, иммуноглобулины, в зависимости от длительности заболевания. Количество С08+-лимфоцитов (как и Еа-РОК) резко снижено уже в первый год заболевания БА и это снижение сохраняется у всех больных независимо от длительности заболевания и его стадии.

Правда, обращает на себя внимание , что у больных АБА в стадии ремиссии количество лимфоцитов , несущих на своей поверхности С04-антиген, возвращается к норме при легком течении заболевания, тогда как при средне-тяжелом течении заболевания их содержание не отличается от такового при обострении астмы.

Полученные нами результаты о снижении у больных АБА количества лимфоцитов, несущих С08-антиген, не зависимо от тяжести заболевания согласуются с данными других исследователей, также установивших снижение С08+-лимфоцитов при АБА (Симийонка Ю.М. с соавт., 1987; Сильвестрова В.П. с соавт., 1989 ; Хечинашвили Г.Н. , Гургенидзе Г.Г. , 1989 ; Журавлева Н.Е. , 1992 ; АчуиЛаг е! а!. (1987) , К^еи^ку е1 а1 (1987) , Ьокаг е1 а1. (1990).

Таблица 3

Популяционных и субпопуляциоиный состав лимфоцитов периферической крови больных АБА в зависимости от длительности заболевания

Длительность заболевания

До 1 года 1-5 лет Свыше 5 лет

Показатели обострение п=10 Ремиссия п=18 Обострение п=16 Ремиссия п=20 Обострение п»10 Ремиссия п*14

СР5+ о/ /о 53,2+0.4 54,1+0,34 53,5+0,34 53,9+1,1 52,510,31 53,43+1,0

кл/ мкл 1016+29 988+38 1002±54 986+30 988155 987+34

СР4+ Л» 39,8+0,9 40,6+0,5 40,4±0,7 42,310,8 39,610,8 40,1+0,4

кл/ мкл 870+36 842+58 888+53 860167 867155 848+69

СР8+ /о 15,8±0,4 17,0+0,7 16,3+0,2 17,810.4 16,210,3 17,1+0,4

кл/ мкл 353+14 302+20 354±13 324Ц6 361+9 358+18

С04/С08 2,52+0,4 2,4+0,5 2,4810,1 2,3810,2 2.4710,1 2,35+0,5

1е+ % 17,2+0,6 17,6+0,4 17,0+0,8 17,5+0,5 17,1+0,6 17,4+0,7

кл/мкл 355+20 342+18 330+24 336+14 335+16 312+16

Заслуживает внимания и тот факт, что выявленное нами нарушение ИРИ, отражающего соотношения иммунорегуляторных клеток у больных АБА подтверждает данные, полученные Порядиным Г.В. с со-авт. (1980 , 1987) о снижении функциональной активности^ одной из субпопуляций иммунорегуляторных клеток - Т-супрессоров у больных АБА, особенно в период обострения заболевания. Данный факт позволил нам в дальнейших исследованиях использовать маркерный анализ субпопуляций иммунорегуляторных лимфоцитов для оценки их состояния при АБА, исключив тем самым более трудоемкий тест определения иммунорегуляторной функции лимфоцитов.

При исследовании характера иммунологических нарушений Т-сис-темы иммунитета у больных ИАБА (табл. 1, 2) обнаружено существенное угнетение супрессорных систем ( теофилиночувствительные Е-РОК), снижение содержания Т-лимфоцитов, несущих С08-антиген. Наиболее выраженные изменения были выявлены у больных с тяжелым течением ИАБА. Общее количество Т-лимфоцитов в этой группе больных статистически достоверно снижено по сравнению с содержанием их в крови больных с легкой степенью заболевания и у здоровых. Существенное нарушение иммунной системы у больных ИАБА - функциональная недостаточность Т-лимфоцитов, проявляющаяся прежде всего в снижении активности Т-супрессоров. Этот дефект Т-системы иммунитета может усугубляться влиянием различных стрессовых факторов (вирусная инфекция, действие аллергенов, метеорологических факторов и др.), что подтверждается и литературными данными.

Таким образом, проведенные нами исследования показали , что характерным изменением иммунного статуса у. больных БА является нарушение в соотношении иммунокомпетентных клеток (и прежде всего иммунорегуляторных), что, по нашему мнению, играет существенную роль в патогенезе заболевания.

Одной из возможных причин этого дисбаланса может быть нарушение рецепции медиаторов иммунной системы и, прежде всего, ИЛ-2. К такому предположению нас подводят обнаруженные нами выраженные изменения характера реакции лимфоцитов больных БА на ИЛ-2.

Таблица 4.

Влияние in vitro ИЛ-2 (50 МЕ/мл) на количественный состав

регуляторных субпопуляций лимфоцитов больных АБА.

Исследуемые показатели Здоровые п = 64 Обострение АБА п = 36 Ремиссия АБА п = 52

CD5 + контр. ИЛ-2 53,5+0,8 57,7+0,6 53,1+0,4 56,8+0,7 (Г" 53,8+0,4 55,5+0,5

CD4+ контр. ЙЛ-2 42,6+0,6 53,6+1,4 39,5+0,8 43,9+0,6 41,0+0,4 43,3+0,9

CD8+ контр. ИЛ-2 22,2+0,7 18,4+0,9 16,1+0,3 23,6+0,4 17,3+0,5 19,6+0,7

CD4/CD8 КОНТр. ИЛ-2 1,92+0,70 2,91+0,40 2,16+0,20 1,86+0,30 2,44+0,30 2,21+0,20

Ig+ контр. ИЛ-2 17,0+1,2 11,4+0,6 17,1 ±0,7 19,8+1,1 17,5+0,6 19,6+0,8

Инкубация лимфоцитов здоровых лиц с ИЛ -2 в концентрации 50 МЕ/МЛ (табл. 4) сопровождалась достоверным повышением содержания С04+-лимфоцитов с 42.6 ± 1.2% до 53.6 ± 1.4% (Р<0,001), достоверным снижением количества СЭ8+ -лимфопитов с 22.23 ± 0.6 до 18.4 ± 0.9% (Р<0.001). В результате изменений содержания этих двух субпопуляций мы наблюдали повышение соотношения С04/СЭ8 с 1.92 ± 0.2% до 2.91 ± 0.4%(Р<0.01). Наряду с этим отмечали снижение количества В лимфоцитов, экспрессирующих поверхностные иммуноглобулины, с 16.96 ± 0.52% до 11.4 ± 0.6.

При атопической бронхиальной астме в стадии обострения (табл. 4) ИЛ-2 в концентрации 50 МЕ/МЛ вызывал достоверное повышение содержания субпопуляцин С04+-лимфоцитов с 39.52 ± 0.8% до 43.85 ± 0.6% и СБ8+-лимфоцитов с 16.1 ± 0.3% до 23.56 ± 0.4% (Р<0.01), приближая количество последних к аналогичному показателю здоровых людей. Хелперно-супрессорное отношение достоверно снижалось с 2.46 ± 0.2% до 1.86 ± 0.3% (Р<0.001), то есть имела место нормализация этого показателя. Количество В -лимфоцитов возрастало с 17.1 ± 0.7% до 19.76 ± 1.1% (Р<0.01). В стадии же ремиссии влияние ИЛ-2 в этой концентрации не сопровождалось изменениями содержания анализируемых показателен (табл. 59).

При инфекциоино-аллергической бронхиальной астме в стадии обострения (табл. 4) , ИЛ -2 в концентрации 50 МЕ/МЛ вызывал достоверное повышение содержания субпопуляции С04+-лимфоцитов с 41.0 ± 0.7% до 44.2 ± 0.3% и С08+-лимфоцитов с 16.8 ± 0.4% до 23.2 ± 0.6% (Р<0.01), приближая количество последних к аналогичному показателю здоровых людей. Хелперно-супрессорное отношение достоверно снижалось с 2.44 ± 0.4% до 1.91 ± 0.5% (Р<0.001), то есть отмечалась нормализация этого показателя. В стадии же ремиссии влияние ИЛ-2 в этой концентрации не сопровождалось изменениями содержания значительно анализируемых показателей.

Выявленный нами противоположный эффект ИЛ-2 на регуля-торные лимфоциты здоровых людей и больных бронхиальной астмой связан, по нашему мнению, с нарушением рецепции ИЛ -2. В пользу данного предположения говорят и результаты работ, в которых показано снижение количества рецепторов к ИЛ-2 на лимфоцитах больных аллергическими заболеваниями на высоте аллергического процесса (1ЫеН , \Уоо , 1987; ЭоЬЫеп е! а1. , 1987). Другим подтверждением этого предположения является тот факт, что у больных БА синтез

ИЛ-2 регуляторными клетками практически не отличался от продукции его у здоровых лиц (Порядин Г.В. с соавт., 1992).

Изучение функциональной активности индуцированных митогеном иммунорегуляторных лимфоцитов, проведенное у 60 здоровых доноров и 168 больных бронхиальной астмой (88 - АБЛ, 80 - ИАБА) (табл. 5) показало, что в 90% (54 донора) случаев нормальные лимфоциты активированные Кон-А почти на 50% тормозили пролиферацию тест-лимфоцитов на ФГА (ИИС - 46.4 ± 6.8% ). В то же время , как и в исследованиях in vitro, нами были выявлены 6 доноров (10 %), у которых лимфоциты, обработанные Кон-А не супрессировали, а вызывали заметное (ИИА-21.04 ± 6.04%) усиления пролиферации ФГА-стиму-лированных тест-лимфоцитов.

Полученные нами данные согласуются с исследованиями, проведенными как в России (Г.В. Порядин, 1984; Ж.М. Салмаси, 1985), так и зарубежом (.Moretta et al , 1977 ; Canónica et al , 1979 ; Valverde, Vieh, 1982).

Объясняя появление у части здоровых доноров активирующей способности лимфоцитов Г.В. Порядин (1984) связывает это с тем , что Кон-А является поликлональным активатором Т-лимфоцитов, способным активировать как Т-супрессорные, так и Т-хелперные клетки. Низкую же частоту выявления активирующей способности лимфоцитов у здоровых доноров автор объясняет различным порогом реализации супрессии и активации.

Анализ результатов исследования функциональной активности иммунорегуляторных лимфоцитов у больных бронхиальной астмой (табл. 5) показал, что независимо от формы заболевания имело место выраженное и стойкое снижение супрессорнои активности Т-лимфоци-тов (Р<0.01) почти у 40% больных.

Таблица 5

Сравнительная характеристика функциональной активности Кон-А индуцированных нммунорегулятор-

ных клеток в норме и при патологии

Группы обследованных Супрессорная функция Активирующая функция

Количество наблюдений Количество обследованных ИИС(%) Количество обследованных ИИА(%)

Здоровые доноры 60 51 46,4+6,8 6 21,04+6,04

Больные АБА 88 40 33,95+5,2 43 56,83+9,3

Ремиссия 52 24 36,5+4,6 28 55.2+8,4

Обострение 36 16 36,5+5,4 20 58,4+10,2

Больные ИАБА 80 33 28,4+3,4 47 65,2+12,4

Ремиссия 48 22 31,48+3,6 - 26 62,6+14,2

Обострение 32 И 22,2+3,3 21 68,4 + 11,3

Таблица 6

Средний уровень ^Е у больных бронхиальной астмой

Форма заболевания и характер течения Кол-во обслед. Период обследования Показатели уровня общего ^Е МЕ/мл

Бронхиальная астма, агопическая форма, легкое течение. 21 Стадия ремиссии 356+24

Бронхиальная астма, атопнческая форма, средней тяжести. 24 Стадия ремиссии 363+21

Бронхиальная астма, атопическая форма, средней тяжести. 28 Стадия обострения 783+36

Инфекционно-аллергнческая форма бронхиальной астмы средней тяжести 26 Стадия ремиссии 185+23

I Ыфекипонно-аллергическая форма бронхиальной астмы средней тяжести 18 Стадия обострения 263+18

Наряду с этим, лимфоциты 55% больных АБА и 71% больных ИАБА, стимулированные митогеном, обнаруживали значительный активирующий эффект, превышавший в 2,7-3,1 раза показатель активации у здоровых доноров. Особенно высоким ИИА оказался у больных, в стадии обострения. Подобные различия в иммунном статусе, вероятно, свидетельствуют о различной степени дисбаланса функционально противоположных клеточных субпопуляций лимфоцитов у больных разными формами бронхиальной астмы.

Анализ функциональной активности лимфоцитов больных различными формами бронхиальной астмы в зависимости от фазы заболевания (ремиссия, обострение) показал, что в период обострения бронхи альной астмы снижение активности супрессорных клеток было наибо лее выраженным. В этот же период лимфоциты больных oкaзывaл^ особенно высокий активирующий эффект (особенно с тяжелым ^ средне-тяжелым течением заболевания). Достоверное снижение супрессорной активности Т-лимфоцитов (Р<0,01) и значительное уси ление активирующего влияния сохранялось и в период ремиссии эабо левания.

Следовательно , бронхиальная астма независимо от формы и фазь заболевания характеризуется дефектом иммунорегуляторных клеток который по нашим данным характеризуется не только снижение» функциональной активности супрессорных лимфоцитов, но и в боль шинстве случаев (55% при АБА, 71% при ИАБА) полным отсутстви ем у больных супрессорной функции в иммунорегуляторных клетках.

Помимо клеточного звена иммунитета иммунологическая реак тивность организма определяется состоянием и гуморального иммуни ета. По данным литературы увеличение 1дА и 1дМ сопутствует инфек ционно-аллергическои форме бронхиальной астмы. Уровень их меняет ся в зазисимости от интенсивности и степени аллергизации организм

(Спаричева Н.Х. 1980 ; Беклемишев Н.Д. с соавт., 1984 ; Riiny et al., 1979 ; Kerstenw D. , 1985).

Учитывая большой интерес к этой проблеме среди различных исследователей и отсутствие единообразного толкования иммуноглобулинов тех или иных классов в патогенезе заболеваний, затрагивающих иммунную систему, представляло большой интерес исследовать возможные изменения в содержании иммуноглобулинов у больных АБА и ИАБА. Особый интерес зти исследования представляли с нашей точки зрения в сочетании со сведениями об изменениях клеточного звена у наших больных.

Анализ результатов показал, что уровень общего IgE у больных бронхиальной астмой значительно превышал нормальный (у здоровых доноров). Особенно эти изменения были выражены у больных АБА, где содержание IgE было почти в 10 раз выше чем у здоровых и в 2,5 раза выше, чем при ИАБА.

Результаты нашего исследования совпадают с данными других авторов о значительном увеличении содержания IgE в крови больных, страдающих бронхиальной астмой с аллергией к домашней пыли (Е.А. Бусарова, 1994, Dessaint J.P., Capran А., 1988; Romangnani S., 1990; Burvows В., Vatinez F.D., Haioden H., Barbee R.A., Gline M.C., 1989).

Уровень IgE обнаружил зависимость от фазы заболевания и не зависел от его тяжести (табл. 6).

Мы попытались сравнить уровень IgE у больных с легкой и средней тяжестью течения заболевания и получили почти одинаковое значение 356 ± 24 и 363 ± 21 ME/мл, соответственно. Уровень же IgE у больных АБА в стадии обострения оказался много выше, чем у больных в стадии ремиссии 783 ± 36 против 363 ± 21 МЕ/мл (Р<0,001).

Обнаружилось, что в стадии обострения регистрируется статистически достоверное снижение IgA (160+24 мг% против 190+28 мг%;

Р<0,05) и достоверное повышение IgG (1328±56 мг% против 1265±67; Р<0,01).

Полученные данные указывают на то, что патогенез АБА чрезвычайно сложен и сопровождается серьезными иммунологическими сдвигами в организме больного.

Выявив характерное для больных бронхиальной астмой нарушение иммунного статуса, проявляющиеся прежде всего дисбалансом имму-норегуляторных лимфоцитов, и ряд других объективных нарушений мы попытались изучить возможность коррекции этих нарушений.

Предварительные скрининговые испытания серии лекарственных препаратов с противовоспалительной активностью позволили выявить природные препараты (ким-нган и нук-нак) совместная инкубация лимфоцитов больных с которыми изменяла как количественное содержание, так и функциональную активность иммунокомпетентных клеток. Наибольший интерс представил тот факт, что обработка лимфоцитов больных различными формами бронхиальной астмы прежде всего оказывала стимулирующий эффект на Т-супрессорные лимфоциты, функция которых по мнению многих исследователей, и по нашим данным, наиболее подвержена изменению при многих проявлениях аллергии и особенно атопии, состоиляя основу йх развития. Другими словами обработка иммунорегуляторных лимфоцитов исследуемыми препаратами индуцировала накопление клеток-регуляторов с тормозящей активностью в иммунном ответе, что может быть использовано в качестве важного критерия при применении с терапевтической целью у больных бронхиальной астмой различных лекарственных средств.

В исследованиях in vitro были подобраны оптимальные дозы и схемы препаратов народной медицины (ким-нган, нук-нак), которые давали наибольший эффект торможения развития экспериментальной анафилаксии.

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ ПРЕПАРАТАМИ КИМ-НГАН И НУК-НАК.

Препараты народной медицины (ким-нган и нук-нак) назначали больным в разгар заболевания и в состоянии ремиссии. Доза препаратов зависела от степени выраженности бронхиальной астмы у больного. После курса лечения наблюдение за больными вели в течение года (до следующего сезона).

Курс лечения испытуемыми препаратами составил от 21 до 30 дней. Препарат принимался через 1 день после тщательного иммунологического обследования и с учетом клиники (доза препарата зависела от тяжести течения болезни). Повторные иммунологические исследования проводили сразу по окончании лечения и через 6 месяцев после проведенного лечения. Никто из больных в момент приема испытуемых препаратов не получал антибактериальных и гормональных препаратов.

Эффективность препаратов ким-нган и нук-нак (с детальным анализом всех показателей) изучена у 146 больных, из которых у 80 ди-агносцнрована атопическая форма бронхиальной астмы (в стадии обострения или ремиссии) и у 66 - инфекцнонно-аллергическая (в стадии обострения). Продолжительность заболевания колебалась от 6 месяцев до 15 лет.

Препараты ким-нган и нук-нак дали четкий положительный терапевтический эффект у 107 больных (табл. 7). Клинически отличный эффект получен у 48 человек, когда полностью исчезли клинические проявления болезни и отсутствовали в течение 3-4-х месяцев; хороший эффект - у 33 человек, когда было отмечено значительное улучшение состояния и самочувствия больных, повышение трудоспособности, отказ от большинства препаратов (бронхолитических, антигистамшшых).

Таблица 7

Результаты лечения препаратами "Ким-Нган" и "Нук-Нак" больных АБА и ИАБА

Эффект лечения Ким-Нган Нук-Нак

АБА п=38 ИАБА п=36 АБА п=32 ИАБА п=30

Число больных % Число больных % Число больных % Число больных %

Отличный 15 39,5 10 27,8 10 31,3 13 43,3

Хороший 10 26,3 11 30,6 7 21,8 5 16,7

Удовлетворительный 8 21,0 6 16,6 6 18,8 6 20,0

Без эффекта 5 13,2 9 25,0 9 28,1 6 20,0

Итого: 38 100 36 100 • 32 100 30 100

Удовлетворительный эффект наблю.дался в 26 случаях - улучшение общего состояния, но не полный отказ от ранее используемых препаратов.

У 29 человек эффект полностью отсутствовал или был незначительным. Наибольший положительный эффект (87% и 72% - соответственно) был получен у больных АБА (у 33 из 38 больных при использовании ким-нган, у 23 и 32 больных при использовании нук-нак). Из 66 больных ИАБА лечение препаратами оказалось эффективным у 27 больных (75%) при использовании ким-нган и у 24 больных (80%) при использовании нук-нак.

На фоне лечения препаратами ким-нган и нук-нак у больных улучшились спирографические показатели. У большинства больных после лечения препаратами ким-нган и нук-нак снижалось количество эозинофилов в крови до 2-5%.

Следовательно, исследуемые препараты обнаружили выраженый терапевтический эффект у большинства больных АБА (79,5%) и больных ИАБА (77,3%), т.е. у больных наиболее тяжелой формой болезни, который подтверждался выраженными клинико-лабораторными изменениями.

В качестве иммунологических показателей у больных бронхиальной астмой исследовали количественное содержание различных субпопуляций лимфоцитов в тесте розеткообразования, экспрессию на их поверхности СО-антигена, Кон-А индуцированные иммунорегуляторные лимфоциты и содержание различных видов иммуноглобулинов.

Показатели иммунного статуса у больных нами изучены до начала лечения, в конце курса лечения (на 30-й день) и через 6 месяцев по окончании лечения.

Исследование популяции Т-лимфоцитов периферической крови

1

больных АБА в реакции разеткообразования показало, что к концу лечения больных как препаратом ким-нган, так и препаратом нук-нак на-

блюдалось повышение субпопуляции Т-лимфоцитов, образующих активные розетки, относительного и абсолютного содержания теофил-лин-чувствительных Е-РОК. Указанные количественные изменения сочетались с усилением пролиферативной активности лимфоцитов и усилением функциональной актиности иммунорегуляторных клеток, индуцированных Кон-А. Указанные изменения выявлялись при использовании препаратов как в стадию обострения АБА, так и в стадию ремиссии заболевания.

В результате лечения больных АБА препаратами ким-нган и нук-нак к концу курса лечения повышалось относительное и абсолютное содержание С08+-лимфоцитов (Р< 0,001), в результате чего соотношение СШ/С08 (ИРИ) значительно снижалось, приближаясь к уровню в контрольной группе (Р<0,001).

В результате лечения препаратами в обеих группах больных в стадию обострения несколько увеличилось содержание В-лимфоцитов, экспрессирующих поверхностные иммуноглобулины.

Таким образом, лечение больных АБА независимо от стадии заболевания сопровождалось повышением количества Т-лимфоцитов, образующих активные розетки, субпопуляции СД8+-лимфоцитов и функциональной активности иммунорегуляторных клеток, индуцированных Кон-А. Следовательно, результаты наших исследований говорят о том, что лечение больных АБА препаратом ким-нган или нук-нак сопровождается нормализацией функциональной активности Т-лимфоцитов-суп-рессоров у больных аллергией.

Следует подчеркнуть, что выявленные изменения в иммунном статусе больных АБА в ходе их лечения используемыми препаратами сохранялись и через б мес. после лечения. Так что по большинству исследованных показателей иммунный статус 85% больных приближается к показателям здоровых людей.

Здоровые АБА, АБА,

обострение ремиссия

В до лечения

Ш после курса лечения Ким-Нган ■ через 6 мес. после курса лечения

Ким Нган □ после курса лечения Нук-Нак В через 6 мес. после курса лечения Нук-Нак

Рис. 1. Динамика содержания в сыворотке крови больных АБА после проведения курса лечения ким-нган (I) и нук-нак (II)

Успешно проведенная терапия препаратами ким-нган и нук-нак сопровождалась незначительным возрастанием к моменту ее окончания продукции и и достоверным снижением уровня в плазме крови (р<0,001).

Спустя 6 мес. после лечения содержание иммуноглобулинов (за исключением 1дЕ) приближалось к норме. Но даже содержание ^Е (несмотря на высокие цифры в сравнении с нормой) за это время существенно снижалось (рис. 1).

Таким образом, проведение курса терапии больным АБА исследованными препаратами сопровождалось достоверным повышением у них активности Т-супрессоров, которая, в свою очередь, приводила к достоверному снижению содержания в крови 1дЕ. Подобная закономерность сохранялась у больных и через 6 мес. после лечения. .

Анализ иммунологических показателей у больных инфекционно-аллергической бронхиальной астмой показал, что в ходе лечения этой группы больных препаратами ким-нган и нук-нак у них происходила нормализация большинства иммунологических показателей. Так, у больных ИАБА к концу курса лечения отмечалось существенное повышение лимфоцитов, вступающих в активное розеткообразование и теофиллин-чувствительных Е-РОК. ' Нормализация пролиферативной активности, оцениваемой в РБТЛ и функциональной активности Кон-А индуцированных иммунорегуляторных клеток. Положительные сдвиги в иммунной системе больных ИАБА подтверждались и на модели с использованием моноклональной технологии). У всех больных к концу курса лечения как с использованием ким-нган, так и с использованием нук-нак повышалось относительное и абсолютное содержание "лимфоцитов, несущих С08-антиген, в результате чего ИРИ приближался к уровню у здоровых доноров.

Следует подчеркнуть, что выявленные изменения в иммунном статусе больных ИАБА не зависели от стадии заболевания и продолжали

положительную тенденцию и через 6 мес. после окончания лечения. Несмотря на однотипность изменений в иммунном статусе больных ИАБА и больных АБА по большинству исследованных показателей иммунный статус больных ИАБА под влиянием использованных препаратов претерпевал более отчетливые положительные изменения, что подтверждалось и объективным улучшением состояния больных.

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ СОЧЕТАННОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ НАРОДНОЙ ВЬЕТНАМСКОЙ МЕДИЦИНЫ СО СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИЕЙ БОЛЬНЫХ АБА

В современной практической аллергологии довольно широкое рас пространение получила специфическая иммунотерапия аллергически: заболеваний различного происхождения и особенно атопии (Бобое] А.Т., 1990; Камалов Ф.Э., 1990).

Однако, даже такой эффективный метод терапии больных эф фективен только в 70-75% случаев (А.Д. Адо , Н.М. Бережная, 1986).

Исходя из современных представлений о патогенезе аллергии не медленного типа и наших предварительных результатов, полученных I препаратами народной вьетнамской медицины, мы задались целью со единить эти два эффективных метода у больных АБА с тем, чтобы по высить положительный эффект терапии наших больных.

Прежде всего мы изучили динамику иммунологических показа телей у больных АБА в ходе специфической гипосенсибилизации.

Лечение проводили курсами (по три курса) с интервалом в одш год. Исследования проводили трижды в каждом курсе: до начала СИ' (1-3 день), в процессе лечения (10-12 день), в конце лечения (24-21 день). Специфическую иммунотерапию осуществляли подкожным вве дением водно-солевых экстрактов аллергенов по общепринятой мете дике (А.Д. Адо 1976). Критерием оценки СИТ служили клинически показатели (Порошина Ю.А. с соавт., 1988).

Исследование иммунного статуса проведено 32 больным атопичес кой формой бронхиальной астмы в стадии ремиссии в возрасте от 1 до 55 лет. У всех больных с помощью кожных проб подтвержден диа! ноз клещевой аллергии.

Недостатком метода специфической иммунотерапии является то что он дает выраженный устойчивый клинический эффект только

50% больных АБА при сенсабилизации к домашней пыли. Причем для достижения положительного результата необходим длительный курс лечения (не менее трех повторных курсов). У 31% больных АБА эф фект СИТ тем не менее был слабым. Вместе с тем иммунологические показатели, изученные у этих больных дали положительную динамику. То есть налицо несоответствие результатов иммунологических критериев и клинических последствий СИТ. Кроме того , СИТ может быть применена у больных только в стадии ремиссии. В отличие от СИТ использование препаратов, приготовленных на основе лечебных трав народной медицины, дает отличный и хороший результат у 62.44% больных АБА. Причем использование их возможно независимо от стадии и формы бронхиальной астмы.

Учитывая эти преимущества природных препаратов и с Целью сокращения сроков госпитализации болных, уменьшения частоты и тяжести рецидивов, мы попытались использовать комбинированный метод (сочетание приема препарата с первым курсом СИТ) у 30 больных АБА в стадии ремиссии. 15 больных принимали препарат ким-нган , 15 больных - препарат нук-нак.

Проведение курса СИТ больным АБА на фоне приема препаратов народной медицины сопровождалось уже после одного курса СИТ достоверным увеличением количества Е-РОК, Еа-РОК, С04+, С08+-лимфоцитов у больных АБА и значительным снижением у них уровня иммуноглобулина Е, показатели которых приближались к здоровым людям.

После комбинированной терапии выявлено также повышение су-прессорной активности лимфоцитов. Комбинированная терапия вызывала стимуляцию местного иммунитета. После лечения увеличивалась концентрация в носовой слези секреторного 1дА.

Таким образом, применение этого метода у больных атопической бронхиальной астмой нормализовало ответную реакцию различных

звеньев иммунитета. Причем эффект этот был более выражен , чем при применении этих методов раздельно и наступал в более короткие сроки.

После лечения больных комбинированным методом мы получили отличные и хорошие результаты в 86,6% случаев (13 из 15 больных). В этой группе больных клинические признаки заболевания полностью исчезали. У больных нормализовались показатели внешнего дыхания, восстанавливалась трудоспособность. Длительность ремиссии сохранялась в течении 1 года.

Заключая изложение материала, представленного в данной работе, необходимо подчеркнуть, что результаты, полученные в ходе исследования клеточных и гуморальных механизмов иммунитета при бронхиальной астме, расширили наши представления о сложных механизмах, ведущих к развитию этой патологии. Кроме того, сведения, полученные в ходе этих исследований, позволили предположить, что препараты "ким-нган" и "нук-нак" могут оказаться весьма эффективными в лечении людей, больных различными формами бронхиальной астмы.

Лекарственные препараты "ким-нган" и "нук-нак", приготовленные на яснове вьетнамских лечебных трав в испытанных концентрациях in vitro оказывают иммунокоррегирующее действие во всех исследованных моделях. Иммунокоррегирующий эффект практически не зависел ни от вида препарата , ни от его состава и обнаружил четкую дозовую зависимость. Полученные результаты свидетельствуют, что оба препарата при использовании в клинической практике в составе лечебных рецептур выполняют роль главного начала рецептуры и определяют ее клинический эффект.

выводы

1.Ha основании иммунологического скрининга 22 препаратов народной медицины выявлены два наиболее эффективных препарата (ким-нган и нук-нак), обладающих иммунотропным эффектом и способных тормозить развитие экспериментальной анафилаксии.

2. Иммунотропная направленность действия противоаллергических природных препаратов народной медицины (ким-нган и нук-нак) проявляется в достоверном повышении количества Т -лимфоцитов, образующих активные розетки и несущих на своей поверхности CD8 -антиген, нормализации функции индуцированных супрессоров. Эта направленность выявляется как в стадии обострения, так и ремиссии заболевания и не зависит от состава препарата (нативный настой, экстракт флавоноидов, лекарственная композиция).

3. Экспериментально обосновано возможное использование препаратов •• ким-нган и нук-нак для подавления развития экспериментальной анафилаксии как на уровне целого организма, так и на клеточном уровне, что является новым перспективным направлением совершенствования фармакотерапии аллергической бронхиальной астмы.

4. У больных бронхиальной астмой, независимо от формы, выявляются выраженные изменения в иммунном статусе, которые проявляются избирательным угнетением супрессорного влияния иммунорегуля-торных клеток: снижением количества Т-лимфоцитов, вступающих в активное розеткообразование, субпопуляции Т -лимфоцитов, несущих CD8 -антигены и теофиллинчувствительных лимфоцитов, нарушением индукции Т-супрессоров Кон-А. Наиболее стойко (в 100% при обострении и в 90% при ремиссии) эти изменения выявляются у больных АБА. Иммунологические сдвиги у больных БА выявляются уже в первый год заболевания и сохраняются у всех больных независимо от длительности и стадии заболевания.

5. У больных бронхиальной астмой обнаруживаются изменения показателей гуморального иммунитета, которые проявляются в достоверном повышении уровня иммуноглобулина А и иммуноглобулина Е как при АБА , так и при ИАБА. Уровень иммуноглобулина Е при АБА в 2,5 раза превышает уровень иммуноглобулина Е при ИАБА.

6. Показана принципиальная возможность использования препаратов ким-нган и нук-нак в качестве эффективного метода терапии бронхиальной астмы, особенно в период ее обострения. Клинический эффект препаратов заключается в снижении интенсивности клинических проявлений, восстановлении функции внешнего дыхания, уменьшении объема базисной фармакотерапии, наступлении глубокой и длительной ремиссии заболевания, восстановлении"трудоспособности.

7. После курса терапии с включением природных препаратов ким-нган и нук-нак у больных бронхиальной астмой отмечается восстановление супрессорного звена иммунной системы, увеличение субпопуляции Т-лимфоцитов, вступающих в активное розеткообразование, теофиллинчувствительных лимфоцитов, количества Т -лимфоцитов, несущих CD8 -антиген , нормализация соотношения CD4+/CD8+ -лимфоцитов, повышение функциональной активности индуцированных супрессоров, что может служить критерием эффективности препаратов. Прием препаратов ким-нган и нук-нак сопровождается усилением продукции иммуноглобулина М и иммуноглобулина G и супрессирует продукцию иммуноглобулина Е.

8. Установлено, что комбинированное использование препаратов ким-нган и нук-нак и СИТ приводит к значительному потенцированию их терапевтического эффекта, что выражается в сокращении сроков терапии до 1 курса СИТ, повышении ее эффективности с 50% до 86,6%, получении более стойких результатов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Монография "Роль эндогенного гистамина в механизмах иммуноре-гуляции при аллергии"//Ханой, 1993, 119 с. (соавторы Г.В.Порядин, Ю.В.Шарпань).

2. Выявление сенсибилизации к домашней пыли и дерматофагоидным клещам у атопических больных (тезисы научной конференции иммунологов и аллергологов.// Ташкент ССР, 1991, 202-203 е., (соавторы: Нгуен Нанг Ан, Г.В.Порядин)

3. Акарологические исследования домашней пыли г. Ханоя (Вьетнам) //"Аллергия и иммунопатология в клинике и эксперименте", М. 1992, вып. 2, 7-9 е., (соавторы: Порядин Г.В.)

4. Биохимический состав и аллергенная активность экстракта клещей домашней пыли города Ханоя (Вьетнам)//"Аллергия и иммунопатология в клинике и эксперименте, М., 1992, вып. 2, 63-65с.,

5. Влияние препаратов, экстрагировнных из цветов Lonicera Dasystyla К. "Ким-Нган" на розеткообразование//"Аллергия и иммунопатология в клинике и эксперименте, М., 1992, вып. 2, 144-146с.)

6. Гистамин и клинические проявления аллергических реакций / / Терапия, 1993, № 3, 35-36 е., (соавт. Фан Куанг-Доан)

7. Принципы использования препаратов, влияющих на эндогенный гистамин, при лечении заболеваний //Терапия 1993, №3, 35-36 е., (соавт. Фан Куанг Доан)

8. Влияние гистамна на иммунную систему//Практическая медицина, 1993, № 5, 11-12, (соавт. Фан Куанг Доан.)

9. Иммунологическая диагностика гиперчувствительности немедленного и замедленного типов //Практическая медицина, 1993, № 6, 13-15, (соавт. Фан Куанг Доан.)

10. Препараты, уменьшающие высвобождение гистамина из тучных

ч

клеток //Вьетнамская медицина, 1993, № 6, 38-39, соавт. Фан Куанг Доан).

11. Определение популяций и субпопуляций лимфоцитов, несущих различные маркеры здоровых людей //Терапия, 1993, № 4, 28-30, (соавт.: Г.В.Порядин, Фан Куанг Доан, Нгуен Тхи Ван).

12. Изучение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных АБА в зависимости от степей и тяжести заболевания//Практическая медицина, 1994, № 4, 14-17, (соавт.: Порядин Г.В., Фан Куанг Доан).

13. Участие гистамина в регуляции нормальных гуморальных и клеточных иммунных реакциях //Практическая медицина, 1994, № 2, 11-12, (соавт Фан Куанг Доан).

14. Опыт лечения атопической бронхиальной астмы лекарственными композициями, приготовленными на основе рецептов Вьетнамской народной медицины.//Пульмонология, 1994, приложение 3, (соавт. Порядин Г.В.).

15.Treatment of patients with amopic asthma by vitamese national medical composition / /abstracts XV International Congress of allergology and clinical immunology Sweden, 1994, 1352, (соавт.: G.V.Porjadin, J.M.Salmasy).

16. Effect of immunocorrection of Vietnamese national medical composition in Patients with bronchial asthma //2nd international congress of pathophysiology Japan, 1994, (co-authors: G.V.Porjadin and J.M.Salmasy)

17. Влияние интерлейкина-2 (ИЛ-2) in vitro на количество субпопуляций иммунорегуляторных клеток лимфоцитов//Терапия, 1994, № 3, 29-30,( соавт. Порядин Г.В.).

18. Молекулярные механизмы алергических заболеваний// Терапия, 1994, № 3, 14-21, (соавт. Порядин Г.В.)

19. Влияние специфической гипосенсибилизации (СИТ) на содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов больных атопической бронхиальной астмы //Терапия, 1994, № 1, 1-3, (соавт.: Порядин Г.В., Фан Куанг Доан)

20. Влияние препарата "нук-нак" на развитие экспериментальной анафилаксии //Терапия, 1994, № 4, 6-8,( соавт. Порядин Г.В.)

21. Влияние препарата "нук-нак на функциональную активность иммунорегуляторных лимфоцитов у больных атопической бронхиальной астмой //Терапия, 1994, № 4, 17-19, (соавт. Порядин Г.В.)

22. Влияние препарата "нук-нак" in vitro на популяционный и субно-пуляционный состав лимфоцитов в периферической крови больных атопической бронхиальной астмой //Терапия, 1995, № 1, 1-3, (соавт. Порядин Г.15.)

23. Роль иммуноглобулинов в аллергических заболеваниях// Терапия, 1995, № 1, 12-14, (соавт. Порядин Г.В.)

24. Об антианафилактическом эффекте лекарственной композиции "нук-нак" // Терапия, 1995, приложение 1217, (соавт. Порядин Г.В.)

25. Изучение сенсибилизации аллергенами домашней пыли и чистого клеща больных атонической бронхиальной астмой тестом РНДТК //Терапия, 1995, № 2, 18-20, (соавт. Порядин Г.В.)

26. Изучение сенсибилизации аллергенами домашней пыли и чистого клеща больных атопической бронхиальной астмы тестом Shelly (непрямой метод)//Терапия, 1995, Л'> 2, 1-6, (соавт. Порядки Г.В.)

27. Диагностика атопической бронхиальной астмы тестом укола (Prick-tect)//Терапия, 1995. № 3, 14-16,( соавт. Порядин Г.В.)

28. К вопросу об иммунологических нарушениях у больных бронхиальной астмой //Вьетнамская медицина, 1995, № 3, 24-27, (соавт. Порядин Г.В.)

29. Влияние препарата "нук-нак" на контрактуру гладких мышц морских свинок, вызванную гистамином и специфическим антигеном //Вьетнамсмкая медицина, 1995, № 3, 6-8, (соавт. Порядин Г.В.)

30. Содержание IgE у больных АБА в различных степенях и стадиях заболевний.//Практическая медицина. 1995, № 2, 9-11, (соавт. Порядин Г.В.)

31. Частота кожно-аллергических реакций к коммерческим бактериальным аллергенам у больных ннфекционно-аллергической бронхиальной астмой в стадии обострения и ремиссии//Генетика и внедрение, 1995, № 2, 12-15. .(соавторы: Г.В.Порядин, Нгуен Нан Ан)

32. Особенности содержания различных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови больных ИАБА различного возраста.//Генетика и внедрение, 1995, 32-35, (соавт.: Поряднн Г.В., Нгуен Нан Ан)

33. Влияние препарата "ким-нган" на лимфоциты больных АБА и ИАБА.//Генетика и внедрение, 1995, № 3, принято к печати, (соавт. Порядин Г.В.)

34. Клинико-иммунологическая оценка эффективности сочетанного использования препаратов в народной Вьетнамской медицине со специфической иммунотерапией больных атопической бронхиальной астмой //Генетика и внедрение, 1995, № 3, принято к печати,( соавт.: Порядин Г.В., Нгуен Нан Ан)

35. Функциональные методы исследования у больных атопической бронхиальной астмой аппарата внешнего дыхания//Практическая медицина, 1995, № 3, 16-19, (соавт.: Порядин Г.В., Фан Куанг Доан)

36. Иммуномодулирующий эффект препаратов "Ким-нган" и "Нук-нак" у больных бронхиальной астмой //2 Национальный конгресс "Человек и лекарство", .тезисы докладов, Москва, 1995,. с. 11 (соавт. Порядин Г.В.)

37. Опыт применения Вьетнамских растительных препаратов в лечении бронхиальной астмы//2 Национальный конгресс "Человек и лекарство", .тезисы докладов, Москва, 1995,. с. 11