Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Характер и механизмы нарушений неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты при остром отравлении арсенитами

На правах рукописи

василенко оксана анатольевна

Характер и механизмы нарушений

неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты при остром отравлении арсенитами

14.00.16— Патологическая физиология 14.00.36-Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

саратов-2004

Работа выполнена в Саратовском государственном медицинском университете и в Саратовском военном институте радиационной, химической и биологической защиты.

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор Понукалина Елена Вячеславовна

кандидат медицинских наук,

доцент Германчук Валерий Геннадьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Брилль Григорий Ефимович

доктор медицинских наук, профессор Девдариани Зураб Леванович

Ведущая организация: Волгоградский государственный медицинский университет

Защита состоится « » июня 2004 г. в « » часов на заседании диссертационного совета Д. 208.094.03 в Саратовском государственном медицинском университете по адресу: г. Саратов, 410012, Б. Казачья, 112

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Саратовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан « » 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

Бабиченко Н.Е.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение действия ксенобиотиков на иммунный гомеостаз и возможностей коррекции его нарушений при помощи иммуномодуляторов является одной из наиболее актуальных проблем патофизиологии, иммунологии и токсикологии. Это определяется наличием и использованием в Вооруженных Силах Российской Федерации токсичных химических веществ (военный аспект проблемы), загрязнением окружающей среды экотоксикантами (экологический аспект проблемы), увеличением химически опасных аварий (техногенный аспект), а также ростом отравлений токсичными химическими веществами, формирующих вторичные постинтоксикационные иммунодефицитные состояния (иммуноток-сикологический аспект проблемы), и, наконец, и это один из основных аспектов проблемы, необходимостью уничтожения десятков тонн боевых отравляющих веществ в сооответствии с Конвенцией о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия и его уничтожении [Александров В.Н., Емельянов В.И., 1990; Бадюгин И.С. и соавт., 1991; Саватеев Н.В., Куценко С.А., 1982, 1993; Конвенция..., 1993; Хаитов P.M. и соавт., 1995; Калинина Н.И., 2000а; Забродский П.Ф., 1998, 2002; Vos J. G. et al., 1983; Loose L.D., 1985; Miller К. ,1985; Luster M.J. et al., 1987; Sullivan J.B., 1989].

При этом первостепенную важность приобретает вопрос об иммунотоксичности арсенитов - люизита и продуктов его переработки. Это связано с тем, что на арсеналах Министерства обороны Российской Федерации находятся на хранении большие количества мышьяксодержащих веществ: люизита, адамсита, дифенилхлорарсина и их смесей. Запасы люизита на момент начала его уничтожения согласно Конвенции составляли порядка 7,5 тысяч тонн в местах его хранения в Саратовской и Кировской областях и Удмуртии. На территории Саратовской области находится могильник, содержащий около 3 тысяч тонн адамсита и дифенилхлорарсина. В процессе уничтожения люизита и других мышьяксодержащих отравляющих веществ будет образовываться значительное количество реакционных масс, в состав которых будет входить арсенит натрия. Продукты утилизации боевых отравляющих веществ планируется хранить на территории объектов по уничтожению химического оружия [Алимов Н.И. и соавт., 2000а; 20006; 2000в; Калинина Н.И., 20006; Щербаков A.A. и соавт., 2002].

Современные проекты специализированных объектов по уничтожению химического оружия обеспечивают безопасные условия хранения химического

оружия и уничтожения отравляющих веществ, в частности люизита, в штатных режимах их функционирования. Однако при определенных обстоятельствах этот режим их работы может быть нарушен вследствие возникновения природных и стихийных бедствий, техногенных катастроф, а также при террористических актах на объектах по хранению и уничтожению химического оружия. Данные ситуации приведут к загрязнению окружающей среды мышьяксодержащими соединениями, массовому поражению обслуживающего персонала объектов по уничтожению химического оружия и населения близлежащих населенных пунктов [Алимов Н.И. и соавт., 2000а, 2000в].

Влияние боевых отравляющих веществ кожно-нарывного действия, в частности, люизита и продуктов его утилизации на иммунный гомеостаз изучено недостаточно [Горшенин А.В. и соавт., 1998; Рембовский В.Р. и соавт., 2000]. Мышьяксодержащие соединения - люизит и вещества, образующиеся в ходе технологических процессов его переработки (арсенит натрия, треххлористый мышьяк), могут снижать неспецифическую резистентность организма (НРО) и показатели системы иммунитета у персонала объектов по хранению и уничтожению химического оружия, а также у населения, проживающего вблизи данных объектов. Причем, иммунотоксический эффект мышьяксодержащие соединения могут оказывать при воздействии достаточно низких доз ввиду высокой чувствительности иммунной системы к ксенобиотикам [Забродский П.Ф., 2002; Descotes G., 1986, 1987; Luster M. J. et al., 1987].

В настоящее время имеются многочисленные доказательства, полученные в экспериментах in vivo и in vitro, а также в процессе мониторинга за состоянием здоровья, неспецифической резистентностью организма и системой иммунитета лиц, подвергающихся острому и хроническому действию ксенобиотиков, что нарушение иммунного гомеостаза (повреждение популяций и субпопуляций иммуноцитов) токсичными химическими веществами приводит к инфекционным осложнениям и заболеваниям [Забродский П.Ф., 1993, 1998, 2002; Descotes G., 1986, 1987; Luster M. J. et al., 1987; Sullivan J. В, 1989]. Можно полагать, что такой же эффект вызывают люизит и продукты, получаемые при его утилизации.

Данные литературы о влиянии арсенита натрия - одного из наиболее

токсичных продуктов, образующегося в ходе утилизации люизита, на неспецифическую резистентность организма и систему иммунитета практически отсутствуют [П.Ф. Забродский, 2002; Давыдова В.И., 1989;

ОеБсс^ез в., 1986].

Не вызывает сомнения тот факт, что нарушения иммунного гомеостаза при остром отравлении мышьяксодержащими соединениями, в частности арсенитами, нуждаются в дальнейшем изучении.

Вопрос о фармакологической коррекции дисфункций системы иммунитета под влиянием люизита и продуктов его деструкции в постинтоксикационном периоде не изучен [Забродский П.Ф., 1998, 2002]. На сегодня необходим выбор наиболее приемлемых иммуностимуляторов из большого арсенала препаратов этой группы, имеющихся в настоящее время. Это позволит проводить научно обоснованную профилактику и лечение возникающих при интоксикациях мышьяксодержащими соединениями, как и при действии многочисленных ксенобиотиков, различных инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний [Шубик В.М., 1976; Хаитов Р. М. и соавг., 1995; Забродский П. Ф„ 1986; 1998; Оео^еу V. 8., УашаеиисЫ Н., 1993].

Таким образом, учитывая необходимость уничтожения люизита на объектах по уничтожению боевых отравляющих веществ, существующую возможность поражения работающих- на них лиц и населения близлежащих населенных пунктов в случае аварий, недостаточно изученные особенности токсического действия арсенитов на систему иммунитета, следует заключить, что проблема исследования нарушений неспецифической резистентности и иммунного статуса под влиянием люизита и основного продукта его утилизации - арсенита натрия с целью обоснования способов их коррекции актуальна и важна как в теоретическом, так и в практическом отношении.

Цель исследования: изучить характер и механизмы нарушений неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты в условиях острой интоксикации арсенитами и разработать патогенетически обоснованные принципы медикаментозной коррекции сдвигов иммунного гомеостаза.

Задачи исследования:

1. Провести комплексную оценку состояния неспецифической резистентности организма и специфических иммунных механизмов защиты у крыс при экспериментальной инфекции после острой интоксикации арсенитами

(люизитом и арсенитом натрия) по величине летальности животных, среднелетальной дозы Р. vulgaris и среднеэффективному времени жизни животных.

2. Установить закономерности влияния острого отравления люизитом и арсенитом натрия на состояние неспецифической резистентности организма в условиях экспериментальной инфекции по величине летальности крыс, среднелетальной дозы Е. coli и среднеэффективному времени жизни животных.

3. Изучить характер и механизмы воздействия арсенитов на неспецифическую резистентность организма (показатели бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточной активности лизоцима и фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов).

4. Выявить характер нарушений специфических иммунных механизмов защиты в эксперименте на животных на фоне воздействия возрастающих доз мышьяксодержащих соединений по ряду интегральных показателей оценки функционального состояния центральных и периферических органов иммунной системы.

5. Изучить особенности влияния возрастающих доз арсенитов на Т-зависимый гуморальный иммунный ответ в различные фазы антителогенеза (содержание антителообразующих клеток в селезенке ) и на кооперацию Т- и В-лимфоцитов.

6. Оценить состояние Т-независимого гуморального иммунного ответа в различные фазы антителообразования по показателям содержания антителообразующих клеток в селезенке в условиях острой интоксикации арсенитами.

7. Выявить характер нарушений клеточного звена иммунного ответа при острой интоксикации, моделируемой возрастающими дозами арсенитов, по комплексу показателей (реакции торможения миграции лейкоцитов, формированию гиперчувствительности замедленного типа, антителозависимой клеточной цитотоксичности, активности естественных клеток-киллеров).

8. Установить патогенетическую роль ацетилхолинэстеразной активности Т-лимфоцитов, содержания эстеразопозитивных клеток в селезенке и перекисного окисления липидов в нарушениях специфических иммунных механизмов защиты под влиянием арсенитов.

9. Разработать патогенетически обоснованную эффективную коррекцию расстройств иммунного гомеостаза при остром отравлении арсенитами с использованием антидота арсенитов и иммуномодуляторов.

Научная новизна работы заключается в том, что в ней впервые с позиций реализации Программы по уничтожению химического оружия в результате проведенного эксперимента на животных выявлено, что при остром отравлении арсенитами - люизитом и арсенитом натрия - нарушаются неспецифическая резистентность организма и показатели иммунного статуса.

Нами экспериментально показано, что острая интоксикация арсенитами вызывает дозозависимое увеличение летальности животных от экспериментального перитонита, а также уменьшение среднелетальной дозы микробных тел Е. coli (без предварительной иммунизации) и Р.vulgaris (после предварительной иммунизации), среднеэффективного времени жизни животных, что свидетельствует о снижении неспецифической и иммунологической резистентности организма. Под влиянием арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД5о происходит дозозависимое снижение бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до б - 9 сут.

Впервые установлено, что под влиянием острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей к 8 суткам. После острого действия арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 через 2 сут происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов и в других органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое действие арсенитов через 8 сут приводит к дозозависимому уменьшению числа колиниеобразующих единиц в селезенке.

Нами установлено, что после острой интоксикации арсенитами происходит дозозависимое более выраженное снижение Т-зависимого антителообразования (по сравнению с Т-независимым) преимущественно в продуктивный период антителопродукции через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует о снижении функции Thl- и ТЪ2-лимфоцитов и B-клеток (синтеза IgM и IgG). Под влиянием люизита и арсенита натрия in vitro существенно нарушается кооперация Т- и B-лимфоцитов. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 5, 104 и 103 М) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки.

Экспериментально зарегистрировано, что острое отравление арсенитами приводит к дозозависимому снижению функции Т-клеток и активности естественных клеток-киллеров до 9 сут; реакции гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и функцию Thl-лимфоцитов; антителозависимой клеточной цитотоксичности.

Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 6, 105 и 10 4М) уменьшают активность естественных клеток-киллеров. При этом эффект люизита статистически достоверно превышает действие арсенита натрия (р<0,05).

Нами экспериментально показано, что механизмами иммунотоксичности арсенитов являются снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, а-нафтил-АБ-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов, а также инициация перекисного окисления липидов, что доказано высокими коэффициентами корреляции между показателями перекисного окисления липидов и основными параметрами системы иммунитета.

В экспериментах определено, что при остром отравлении арсенитами -люизитом и арсенитом натрия (1,0 ЛД50) - их антидот унитиол и иммуностимулятор имунофан при изолированном применении повышают основные показатели антиинфекционной неспецифической резистентности организма, гуморального и клеточного звена иммунитета. Комбинированное использование унитиола и имунофана полностью восстанавливает основные показатели неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена иммунитета, антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность естественных клеток-киллеров.

Практическая значимость работы состоит в том, что нами доказано: в результате острой интоксикации арсенитами развивается постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, проявляющееся в дозозависимом снижении показателей неспецифической резистентности организма, специфических иммунологических механизмов защиты, параметров системы гуморального и клеточного иммунитета. Возникающий под влиянием арсенитов иммунодефицит требует применения средств коррекции нарушений неспецифической резистентности организма и иммунного гомеостаза. После острого отравления арсенитами для восстановления неспецифической резистентности организма, основных показателей гуморального и клеточного иммунного ответа целесообразно применять унитиол в комбинации с иммуностимулятором имунофаном.

Положения, выносимые на защиту

1. Острая интоксикация арсенитами - люизитом и арсенитом натрия - в условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5; 1,0 ЛД50 вызывает прямо связанную с дозой супрессию показателей неспецифической резистентности организма, специфических иммунологических механизмов защиты, основных

гуморальных и клеточных иммунных реакций.

2. При остром отравлении люизитом и арсенитом натрия происходит дозозависимая супрессия антителообразования преимущественно к Т-зависимому антигену, которая более выражена в продуктивной фазе антителогенеза. Арсениты вызывают редукцию синтеза

3. Механизмы снижения специфической иммунной защиты под влиянием арсенитов обусловлены снижением содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, нарушением кооперации Т- и В-лимфоцитов, приводящим к редукции антителообразования вследствие преимущественного поражения Т-лимфоцитов; ингибированием арсенитами ацетилхолинэстеразы Т-клеток тимуса и селезенки, а также а-нафтил-АБ-ацетатэстеразы и а-нафтил-бутиратэстеразы спленоцитов, инициацией мышьяксодержащими соединениями перекисного окисления липидов.

4. Коррекция нарушений неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты после острой интоксикации арсенитами достигается применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола и иммуностимулятора имунофана, которые при комбинированном использовании полностью восстанавливают основные показатели неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена системы иммунитета, антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность естественных клеток-киллеров.

Апробация работы, публикации. Результаты исследований были доложены на заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (май 2001 г., март 2002 г., февраль 2003 г., апрель 2004 г.), на Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты», СПб, май, 2004 г., юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы корабельной токсикологии, радиологии, обитаемости кораблей и медицинского обеспечения личного состава ВМФ» (СПб, 2004 г.), научно-практических конференциях Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты (2001, 2002, 2003, 2004 гг.), совместном заседании кафедры нормальной физиологии Саратовского государственного медицинского университета, кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты и кафедры^ токсикологии, радиологии и медицинской защиты Саратовского военно-медицинского института (апрель 2004).

По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований и практические рекомендации внедрены в учебный процесс на кафедре технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты и на кафедре токсикологии, радиологии и медицинской защиты Саратовского военно-медицинского института. Материалы исследований широко используются при проведении лекций, практических и лабораторных занятий у курсантов и слушателей курсов повышения квалификации, первичной специализации и усовершенствования врачей. По материалам диссертации издано учебное пособие «Основы токсикологии».

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 165 страницах машинописного текста (включая таблицы и список литературы), состоит из обзора литературы (глава 1); материалов и методов исследований (глава 2); собственных экспериментальных исследований (главы 3-8); заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 31 таблицей. Список литературы включает 268 наименований, из которых отечественных -188 и зарубежных - 80.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследований Исследования проводились на 1173 беспородных белых крысах и на 140 беспородных белых мышах обоего пола в равных соотношениях с массой тела соответственно 180-240 г и 18-22 г.

Эксперименты на животных проводили в соответствии с требованиями Женевской конвенции "International Guiding Principles for Biomedical Research Inroling Animals" (Geneva, 1990).

Арсениты (AC) животным вводили подкожно в растворе оливкового масла в дозах 0,2; 0,5 и (0,7) 1,0 ЛД5о(ЛД5оДЛЯ люизита и арсенита натрия составляли соответственно 3,8+0,7 и 45,4+2,9 мг/кг).

Унитиол после отравления АС в дозе 1,0 ЛД50 вводили внутримышечно по общепринятой схеме: в первые сутки - 15 мг/кг 3 раза с интервалом 8 ч, во вторые сутки — по 15 мг/кг 2 раза с интервалом 12 ч; в последующие 3 сут - по 15 мг/кг 1 раз в сут. Первую дозу антидота животные получали через 10 мин после введения арсенита. В качестве иммуностимулятора использовали имунофан в дозе 10 мкг/кг, которую вводили внутримышечно ежедневно в течение 3 сут. Доза иммуностимулятора для животных обоснована данными литературы и расчетами ; по общепринятым методам вычисления [Рыболовлев

Ю.Р., 1982]. Первую дозу животные получали через 30 мин после острой интоксикации арсинами.

Кровь для исследования факторов НРО получали из подъязычной вены крыс. Органы системы иммунитета (тимус, селезенку, лимфоузлы, клетки костного мозга) извлекали у животных после цервикальной дислокации в различные сроки после интоксикации.

Антиинфекционную неспецифическую резистентность организма без предварительной иммунизации, а также комплексную неспецифическуго резистентность и специфическую иммунологическую защиту организма с предварительной иммунизацией определяли по летальности крыс от экспериментальной инфекции, по среднелетальной дозе соответственно Е. coli и P.vulgaris и среднеэффективному времени жизни животных (Et50) в опытной и контрольной группах [Забродский П. Ф., 1987], рассчитанных методом пробит-анализа [Беленький M.JL, 1963]. Факторы НРО - бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК), содержание лизоцима в крови крыс определяли общепринятыми методами, а фагоцитарную активность нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием [Гембицкий Е.В. и соавт., 1987].

Содержание Т-клеток в тимусе определяли путем подсчета ядросодержащих клеток в органе, учитывая то обстоятельство, что лимфоциты в вилочковой железе представлены в основном только Т-популяцией [Ройт А. и соавт., 2000]. Лимфоциты в лимфоидных органах подсчитывали исходя из их относительного содержания в окрашенных мазках данного органа. Влияние АС на содержание колониеобразующих единиц (КОЕс) в селезенке изучали методом эндогенного колониеобразования [Till J. Е., Me Culloch Ё. А., 1961].

Исследование показателей Т-зависимого и Т-независимого гуморального иммунного ответа проводили у крыс через 5 сут после иммунизации соответственно эритроцитами барана (ЭБ) и Vi-антигеном (Vi-Ag) по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [Jeme N. К., Nordin А. А., 1963]. Иммунизацию проводили ЭБ (2-Ю8 клеток) и Vi-Ag (8 мкг/кг) при изучении действия АС в индуктивную фазу гуморального иммунного ответа одновременно с их введением, а в продуктивную - после введения АС через 3 сут после иммунизации. Изучение кооперации Т- и В- лимфоцитов in vitro под влиянием АС для оценки роли Т- и B-лимфоцитов в обеспечение антителопродукции определяли по методу J. К. Thomas, Т. Imamura (1986).

Для оценки состояния клеточного звена системы иммунитета определялись функция Т-лимфоцитов по реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) [Гембицкий Е.В. и соавт., 1987], реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)' и показатель антителозависимой клеточной цитотоксичности

(АЗКЦ) [Зимин Ю.И., Ляхов В.Ф., 1985]. Оценка активности естественных клеток-киллеров (ЕКК). проводилась в условиях in vivo и in vitro спектрофотометрическим методом [Гордиенко С. М., 1984].

Активность ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в Т-лимфоцитах крыс определяли методом G.M. Ellman et al. (1961), выделяя клетки методом C.B. Ширшева ( 1998). Активность а-нафтил-АБ-ацетатэстеразы и а-нафтил-бутиратэстеразы спленоцитов крыс изучали гистохимическим методом [Хейхоу Ф. Г. Дж., Кваглино Д., 1983]. Активность эстераз определяли через 3 сут после отравления АС. Влияние АС на перекисное окисление липидов (ПОЛ) оценивали по активности каталазы и пероксидазы титрометрическим методом [Покровский A.A., 1969], содержанию малонового диальдегида (МД) в крови фотометрически на колориметре КФК-2 [Коробейникова Э.Н., 1989] через 3 сут после отравления.

Полученные данные обрабатывались с использованием общепринятых статистических методов [Урбах В.Ю., 1975]. Расчеты проводились на персональном компьютере с использованием пакета программ Statgraphics.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изменение комбинированной антиинфекционной неспецифической резистентности организма и специфических иммунологических механизмов защиты после острого отравления арсенитами

В результате проведенных нами опытов было установлено, что острое отравление АС приводило к дозозависимому увеличению летальности крыс от экспериментального перитонита. При этом вполне закономерно уменьшались ЛД50 Е. coli и среднеэффективное время жизни животных - Et5o. Так, при дозах люизита, составляющих 0,2; 0,5 и 0,7 ЛД50, по сравнению с контролем, при котором летальность составляла 52,2+5,8 %, этот показатель увеличивался соответственно на 14,5 (р>0,05); 22,8 и 28,8 % (р<0,05), а при воздействии арсенита натрия в тех же дозах - соответственно на 8,9 (р>0,05); 20,0 и 24,2 % (р<0,05). При действии люизита в дозах 0,2; 0,5 и 0,7 ЛД50 ЛД50 Е. coli уменьшалась соответственно в 1,39 (р>0,05); 1,50 и 1,62 раза (р<0,05), a Et50 -соответственно в 1,30 (р>0,05); 1,44 и 1,89 раза (р<0,05). Такой же эффект оказывало острое отравление арсенитом натрия.

Аналогичные данные нами были получены при изучении влияния острого действия АС на комплексную неспецифическую резистентность и специфические иммунологические механизмы защиты организма с применением P.vulgaris с предварительной иммунизацией.

Таким образом, после острого отравления АС происходит дозозависимое увеличение летальности животных от экспериментального перитонита, дозозависимое уменьшение ЛД50 Е. coli и Р.vulgaris и среднеэффективного времени жизни животных, что свидетельствует о снижении под влиянием АС НРО и комплексной неспецифической резистентности и специфических иммунологических механизмов защиты организма.

Влияние арсенитов на факторы неспецифнческой резистентности

организма

Оценка изменения БАСК, проводившаяся у крыс под влиянием острой интоксикации АС в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, свидетельствует, что люизит и арсенит натрия приводят к дозозависимому снижению БАСК через 1-6 сут после отравления (р<0,05). Через 9 сут существенных отличий показателя от контрольного уровня не отмечалось, хотя при дозах люизита, составляющих 0,5 и 1,0 ЛД50,зарегистрирован более низкий показатель (р>0,05) по сравнению с контролем. Так, при действии люизита в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД5Я БАСК через 1 сут снижался соответственно в 1,18; 1,31 и 1,58 раза (р<0,05), а через 6 сут -соответственно в 1,15 (р>0,05); 1,22 и 1,30 раза (р<0,05).

Аналогично после острой интоксикации АС снижалась сывороточная активность лизоцима.

В экспериментах нами установлено, что под влиянием АС в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 происходит дозозависимое снижение фагоцитарной активности нейтрофилов через 1-6 сут. Через 9 сут сохранялось несущественное снижение активности нейтрофилов при максимальной дозе АС, однако данная редукция существенно не отличалась от контрольного уровня (р>0,05). Так, при действии люизита в дозах 0,2; 0,5 и. 1,0 ЛД50 показатель через 1 сут снижался соответственно в 1,28; 1,48 и 1,85 раза (р<0,05), а через 6 сут - соответственно в 1,19 (р>0,05); 1,32 и 1,61 раза (р<0,05).

Таким образом, под влиянием арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 происходит дозозависимое снижение бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.

Изменение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке, КОЕс под влиянием

арсенитов

Оценка числа Т-лимфоцитов в тимусе показала, что в прямой зависимости от дозы АС происходит снижение количества клеток в органе. Данный показатель при дозах люизита, составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, уменьшался через 2 сут соответственно в 1,29 (р>0,05); 1,58 и 2,24 раза

(р<0,05), а через 4 сут - в 1,17 (р>0,05); 1,41 и 1,56 раза (р<0,05) соответственно. Изменение числа Т-лимфоцитов в тимусе при действии арсенита натрия носило приблизительно такой же характер, как и при действии люизита. На 8 сут после острого отравления АС происходило восстановление параметра до контрольного уровня. Изменения числа лимфоцитов в селезенке были такими же, как и в тимусе.

Нами экспериментально установлено, что под влиянием АС в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 через 2 сут происходит дозозависимое уменьшение содержания лимфоцитов в костном мозге и лимфоузлах. Так, острое отравление люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 приводило к уменьшению содержания лимфоцитов в костном мозге соответственно в 1,11 (р>0,05); 1,25 и 1,35 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,10 (р>0,05); 1,23 и 1,27 (р<0,05) раза соответственно. Острое отравление люизитом вызывало снижение содержания лимфоцитов в лимфоузлах соответственно в 1,14 (р>0,05); 1,48 и 1,44 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,04 (р>0,05); 1,46 и 1,55 (р<0,05) раза соответственно. Аналогично изменялось содержание лимфоцитов в циркулирующей крови. Необходимо отметить, что снижение лимфоцитов в крови сопровождалось нейтрофилезом. Так, число нейтрофилов в крови через 2 сут в контроле составляло 2,6+0,3'109/л (п=12), а при действии люизита и арсенита натрия в среднелетальной дозе - соответственно 3,8+0,4-10% и 3,7+0,3-10% (п=11) [р<0,05].

Проведенные нами исследования показали, что острая интоксикация люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 вызывает дозозависимое снижение числа КОЕс через 8 сут соответственно в 1,54 (р> 0,05); 1,66 и 2,11 раза (р< 0,05). Арсенит натрия в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 вызывал редукцию миграции КОЕс или их гибель (гибель СКК) в 1,23 (р>0,05); 1,54 (р>0,05) и 1,89 раза (р<0,05) соответственно.

Таким образом, под влиянием острой интоксикации АС (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей к 8 суткам. Через 2 сут АС вызывают дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в органах системы иммунитета и циркулирующей крови, а также снижение числа КОЕс через 8 сут.

Влияние арсенитов на гуморальный иммунный ответ

При исследовании содержания антителообразующих клеток (АОК) в селезенке к ЭБ у белых крыс через 5 сут после острой интоксикации АС в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 было установлено (табл.1) дозозависимое снижение

показателя, позволяющее полагать, что арсениты вызывают супрессию синтеза В индуктивной фазе иммунного ответа, когда иммунизация ЭБ проводилась практически одновременно с введением АС, острое отравление люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 приводило к уменьшению содержания АОК в селезенке к ЭБ у крыс соответственно в 1,42; 1,95 и 2,64 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,24 (р>0,05); 1,77 и 2,24 (р<0,05) раза соответственно. В продуктивном периоде антителогенеза (введение АС проводили через 3 сут после иммунизации крыс ЭБ) острое отравление люизитом вызывало снижение числа АОК в селезенке к ЭБ соответственно в 1,73; 2,29 и 3,86 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,64; 1,97 и 3,21 (р<0,05) раза соответственно.

Таблица 1

Влияние острого отравления арсенитами на число антителообразуюпшх клеток к эритроцитам барана (103), синтезирующих в селезенке крыс через 5 сут после __иммунизации ЭБ (М+т, п=5-7)_

Вещества Доза Время интоксикации после иммунизации, сут

0 | 3

Контроль 0 40,1+3,3

Люизит 0,2ЛД50 28,3+3,1* 23,2+3,0*

0,5 ЛДзо 20,6+2,9* 17,5+2,3*

1,0ЛД50 15,2+2,7* 10,4+2,0*

Арсенит натрия 0,2 ЛД50 32,5+3,3 24,5+3,1 *

0,5 ЛД5о 22,7+2,8* 20,4+2,2*

1,ОЛД50 17,9+2,6* 12,5+2,1 *

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.

Результаты исследований, полученные нами, свидетельствуют о снижении под влиянием арсенитов функции Thl-лимфоцитов, индуцирующих синтез IgM [Pfeifer С. et al., 1991] B-клетками селезенки, в большей степени в продуктивной фазе антителогенеза по сравнению с индуктивной.

В наших исследованиях на белых крысах при острой интоксикации АС, при которой введение токсикантов проводилось одновременно с иммунизацией ЭБ, установлено, что под влиянием люизита и арсенита натрия через 8 сут происходит дозозависимое снижение синтеза IgG, оцениваемого по числу АОК, синтезирующих иммуноглобулины данного класса. Так, острое отравление люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД5о приводило к уменьшению содержания АОК в селезенке, синтезирующих IgG к ЭБ, у крыс соответственно в 1,33; 1,71 и 1,99 (р<0,05) раза, а арсенитом натрия - в 1,24 (р>0,05); 1,57 и 1,76 (р<0,05) раза соответственно.

При оценке содержания АОК к Vi-Ag в селезенке у белых крыс после острой интоксикации АС через 5 сут было установлено дозозависимое

снижение показателя. Редукция числа АОК к Vi-Ag свидетельствует о том, что АС вызывают супрессию синтеза IgM В-клетками [Ройт А. и соавт., 2000]. В индуктивном периоде гуморальной иммунной реакции АС оказывали менее выраженный эффект, чем в продуктивном. Т-независимая антителопродукция снижалась в меньшей степени, чем Т-зависимая.

В опытах in vitro на спленоцитах мышей установлено, что люизит в концентрациях 105, 104 и 103 М уменьшает кооперацию Т- и В-клеток (р<0,05). Аналогичный, но менее выраженный эффект (р<0,05) оказывает арсенит натрия. АС в большей степени снижают функцию Т-лимфоцитов (р<0,05) при концентрациях, составляющих 10 5, 10 и

Таким образом, после острой интоксикации АС в дозах, составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, происходит дозозависимое снижение Т-зависимого антителообразования через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует о снижении функции Thl- и Th2-лимфоцитов и В-клеток. Супрессия показателя более выражена при действии АС в продуктивный период антителопродукции. Острое отравление АС в дозах, составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛДзо, вызывает дозозависимое снижение Т-независимой антителопродукции, преимущественно в продуктивный период антителообразования, что обусловлено редукцией функции В-лимфоцитов. Под влиянием AC in vitro существенно нарушается кооперация Т- и В-лимфоцитов. AC in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 5, 104 и 103 М)

снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки. Действие люизита на кооперацию лимфоцитов и в целом на гуморальный иммунный ответ по сравнению с арсенитом натрия более выражено (р<0,05).

Оценка воздействия арсенитов на клеточные иммунные реакции

Нами установлено, что при оценке функции Т-лимфоцитов по РТМЛ у крыс через 1-6 сут после острой интоксикации, люизит (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) дозозависимо увеличивает миграцию лейкоцитов (снижает функцию Т- клеток) на 12,7...35,9 % (р<0,05). К 9 сут происходило практически полное восстановление показателя. Аналогичное действие оказывал арсенит натрия.

Нами установлено, что при острой интоксикации АС (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) происходит дозозависимое снижение реакции ГЗТ. Так, дозы люизита, составляющие 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, вызывали супрессию формирования ГЗТ соответственно в 1,47; 1,68 и 2,24 раза (р<0,05), а арсенит натрия в тех же дозах- соответственно в 1,35; 1,57 и 1,99 раза (р<0,05).

При острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия в дозах, составляющих 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50, нами установлено (табл. 2) дозозависимое уменьшение АЗКЦ под влиянием АС. Люизит в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 вызывал супрессию АЗКЦ спленоцитов у крыс через 5 сут соответственно в 1,42; 1,81 и 2,84 (р<0,05) раза, а арсенит натрия - в 1,28 (р>0,05); 1,54 и 2,07 (р<0,05) раза соответственно.

При исследовании влияния АС на ЕКК крыс нами установлено, что через 1-6 сут токсиканты (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) дозозависимо снижают активность естественных клеток-киллеров. Так, острое отравление люизитом в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 приводило к снижению активности ЕКК у крыс через 1 сут соответственно в 1,39; 1,90 и 3,64 раза (р<0,05), а арсенитом натрия - в 1,32; 1,72 и 2,79 раза (р<0,05) соответственно.

Таблица 2

Влияние острого отравления арсенитами на антителозависимую клеточную

цитотоксичность спленоцитов у белых крыс через 5 сут, % (М+т, п=5-7)

Доза Люизит Арсенит натрия

Контроль 14,5+1,3

0,2 ЛД,0 10,2+1,5* 11,3+1,6

0,5 ЛД50 8,0±1,4* 9,4+1,7*

1,0ЛД50 5,1+1,1* 7,0+1,8*

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем.

При оценке влияния АС на активность ЕКК селезенки крыс in vitro нами установлено, что при концентрациях люизита, составляющих 106, 105 и 104М, происходило прямо связанное с концентрацией уменьшение активности ЕКК соответственно в 1,57; 2,35 и 5,08 раза (р<0,05), а при действии арсенита натрия в эквимолярных концентрациях - соответственно в 1,34; 1,61 и 2,91 раза (р<0,05). Эффект люизита статистически значимо превышал действие арсенита натрия (р<0,05).

Таким образом, острое отравление АС (0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50) приводит к дозозависимому снижению функции Т-клеток и активности ЕКК до 9 сут, реакции ГЗТ, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и функцию Thl-лимфоцитов, АЗКЦ. AC in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 6, 105 и 104М) уменьшают активность ЕКК.

Роль антихолинэстеразных механизмов и перекисного окисления липидов в нарушении нммунного статуса после острой интоксикации арсенитами

Нами установлено (табл. 3), что люизит в дозе, составляющей 1,0 ЛД50, обусловливает дозозависимое снижение активности АХЭ Т-клеток тимоцитов и

спленоцитов соответственно в 1,32 и 1,41 раза (р<0,05), а арсенит натрия -соответственно в 1,20 и 1,26 раза (р<0,05).

Под влиянием острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия в дозе 1,0 ЛД5() число клеток (в основном Т-лимфоцитов), содержащих а-нафтил-АБ-ацетатэстеразу в спленоцитах крыс, снижалось соответственно в 1,50 и 1,23 раза (р<0,05), а содержащих а-нафтил-бутиратэстеразу - соответственно в 1,46 и 1,31 раза (р<0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что преимущественное снижение функции Т-клеток в гуморальных и клеточных иммунных реакциях под влиянием АС связано с ингибированием эстераз Т-лимфоцитов.

Таблица 3

Влияние острого отравления арсенитами (1,0 ЛД50) на активность ацетилхолинэстсразы _и Т- лимфоцитах тимуса и селезенки у крыс (мЕд/109) через 3 сут (М+т, п=6)

Серии опытов Тимус Селезенка

Контроль 68,2+6,3 59,5+6,1

Люизит 51,5+5,2** 42,1+4,9*

Арсенит натрия 57,0+5,0** 47,2+ 4,5**

Примечание: *; ** - различие с контролем достоверно - р<0,05, (*; ** - для расчета достоверности различий использовали соответственно 1 -критерий Стьюдента и иепараметрический критерий и Вилкоксона-Манна- Уитни).

Наши исследования показали, что АС в дозе 1,0 ЛД50 инициируют ПОЛ. Так, под влиянием люизита активность каталазы и пероксидазы снижалась соответственно в 1,94 и 1,71 раза. Под влиянием АС снижение факторов антиоксидантной системы было сопряжено с увеличением ПОЛ, что проявлялось увеличением содержания в плазме крови малонового альдегида. Так, люизит и арсенит натрия статистически значимо (р<0,05) повышали содержание данного соединения соответственно в 1,36 и 1,25 раза. Полученные данные свидетельствуют, что люизит по сравнению с арсенитом натрия в большей степени активирует ПОЛ в целом и лимфоцитов в частности.

При вычислении коэффициентов корреляции между числом АОК к ЭБ при остром отравлении люизитом и содержанием каталазы и пероксидазы в крови крыс установлено, что они составляли соответственно 0,769+0,077 (р<0,05) и 0,754+0,082 (р<0,05). Коэффициенты корреляции при острых отравлениях люизитом и арсенитом натрия между числом АОК к ЭБ и содержанием МД в крови составляли соответственно -0,763+0,079 (р<0,05) и -0,710+0,096 (р<0,05). Значения г между другими параметрами системы иммунитета при остром действии арсенитов и показателями антиоксидантной системы находились в пределах от 0,687 до 0,805 (р<0,05), а коэффициенты корреляции между содержанием малонового диальдегида в крови и показателями иммунного

статуса при действии АС составляли от -0,667 до -0,789 (р<0,05).

Таким образом, под влиянием острой интоксикации АС (1,0 ЛД50) происходит снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, а также числа а-нафтил-АБ-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов (преимущественно Т-клеток). Это свидетельствует о том, что одним из механизмов их иммунотоксичности является антихолинэстеразный эффект. Острая интоксикация АС приводит к инициации ПОЛ. Эффект люизита в эквилетальной дозе по сравнению с арсенитом натрия более выражен (р<0,05). Инициация ПОЛ под влиянием АС является одним из факторов, способствующим формированию постинтоксикационного иммунодефицитного состояния после их острого действия, что доказывается высокими коэффициентами корреляции между показателями ПОЛ и основными параметрами системы иммунитета.

Коррекция нарушении иммунного гомеостаза при остром

отравлении арсенитами

Использование унитиола - антидота АС - можно рассматривать как один из способов снижения редукции показателей НРО и иммунного статуса. При остром отравлении люизитом (1,0 ЛД50) после применения унитиола у крыс происходило увеличение выживаемости животных от экспериментальной инфекции, повышение ЛД50 E.coli и Et50 (р<0,05) (оценку показателей проводили через 1 сут). При использовании унитиола после отравления крыс люизитом через 6 сут отмечалось уменьшение снижения БАСК (р>0,05), сывороточного содержания лизоцима (р>0,05), индекса активности иейтрофилов в НСТ-тесте по сравнению с показателями при остром отравлении (р<0,05). При этом полного восстановления до контрольных значений значительно сниженных действием люизита исследованных показателей НРО не происходило. Они оставались статистически значимо более низкими, чем в контроле. Аналогичное действие оказывал унитиол при остром отравлении арсенитом натрия.

Нами экспериментально установлено, что унитиол вызывал значительно более выраженное повышение (р<0,05) гуморального иммунного ответа к Т-зависимому антигену (в 1,83 раза) по сравнению с реакцией на Т-независимый антиген (в 1,33 раза) по отношению к показателям при отравлении люизитом. Унитиол достоверно повышал сниженную люизитом активность ЕКК, АЗКЦ и реакцию ГЗТ у крыс. Аналогичное действие унитиол оказывал при остром отравлении арсенитом натрия.

Выявленное уменьшение иммунотоксичности люизита и арсенита натрия

унитиолом, не обеспечивающим полного восстановления значительно сниженных действием этих токсикантов исследованных показателей НРО и системы иммунитета, предполагает обязательное включение в схему лечения острой интоксикации иммуностимуляторов, повышающих показатели НРО, активность ЕКК и АЗКЦ, основных гуморальных и клеточных иммунных реакций.

Сравнительная характеристика наиболее часто используемых в клинике иммуностимуляторов свидетельствует о том, что имунофан при острой интоксикации АС является препаратом выбора. Необходимо подчеркнуть, что имунофан (по данным литературы) способен не только оказывать иммуностимулирующее влияние на все звенья системы иммунитета, но и обеспечивать детоксицирующий, гепатопротективный и антиоксидантный эффекты при острых отравлениях АС.

Нами установлено, что применение после острого отравления люизитом в дозе 1,0 ЛД50 (как наиболее иммунотоксичным арсенитом) иммуностимулятора имунофана частично восстанавливает основные показатели НРО, гуморального и клеточного иммунитета.

Экспериментально показано, что при остром отравлении люизитом (1,0 ЛД50) комбинированное применение его антидота унитиола и иммуностимулятора имунофана полностью восстанавливает у крыс основные показатели НРО, Т-, B-звена иммунитета, АЗКЦ и активность ЕКК.

Выводы

1. При остром отравлении арсенитами (люизитом и арсенитом натрия) в условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 происходит прямо связанная с дозой редукция антиинфекционной неспецифической резистентности организма, специфических иммунных механизмов защиты у животных при экспериментальной инфекции, супрессия Т-зависимой и Т-независимой гуморальной иммунной реакции (более выраженная в продуктивной фазе антителогенеза), функции Т-клеток, антителозависимой клеточной цитотоксичности и активности естественных клеток-киллеров. Коррекция выявленных нарушений достигается комбинированным применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола и иммуностимулятора имунофана.

2. Острое действие люизита и арсенита натрия вызывает прямо связанное с дозой увеличение летальности животных от экспериментальной инфекции, вызванной Е. coli, уменьшение ЛД50 Е. coli и среднеэффективного времени жизни животных, а также данных показателей при использовании P.vulgaris

после предварительной иммунизации, что свидетельствует о снижении неспецифической резистентности организма и специфических иммунных механизмов защиты.

3. Под влиянием арсенитов происходит дозозависимое снижение факторов неспецифической резистентности организма: бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.

4. Острая интоксикации люизитом и арсенитом натрия вызывает прямо связанное с дозой уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки в течение 4 сут с последующим увеличением этих показателей к 6 суткам. Острое действие арсенитов вызывает дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей к 8 сут. После острого отравления арсенитами через 2 сут происходит прямо связанное с дозой уменьшение числа лимфоцитов в органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое действие люизита и арсенита натрия через 8 сут приводит к дозозависимому уменьшению числа колиниеобразующих единиц в селезенке.

5. После острого отравления арсенитами происходит прямо связанное с дозой снижение Т-зависимого антителообразования через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует о снижении функции Thl- и ТЬ2-лимфоцитов и В-клеток. Редукция показателя более выражена при действии арсенитов в продуктивный период антителопродукции. Под влиянием люизита и арсенита натрия in vitro снижается кооперация Т- и В-лимфоцитов. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (105, 10 4 и 10 3 М) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки.

6. Острое отравление арсенитами вызывает дозозависимое снижение Т-независимой антителопродукции преимущественно в продуктивный период иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом, что обусловлено супрессией функции В-лимфоцитов.

7. Острое отравление арсенитами приводит к прямо связанному с дозой снижению функции Т-клеток и активности естественных клеток-киллеров до 9 сут; реакции гиперчувствителыюсти замедленного типа, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и функцию Thl-лимфоцитов, антителозависимой клеточной цитотоксичности. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 6 , 10 5 и104М) уменьшают активность естественных клеток-киллеров.

8. Под влиянием острой интоксикации арсенитами (1,0 ЛД50) происходит снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, а также числа а-нафтил-АБ-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов (преимущественно Т-клеток), которое свидетельствует о том, что одним из механизмов их иммунотоксичности является антихолинэстеразный эффект. Острая интоксикация арсенитами приводит к инициации перекисного окисления липидов. Инициация перекисного окисления липидов под влиянием арсенитов является одним из факторов, способствующим формированию постинтоксикационного иммунодефицитного состояния после их острого действия, что доказывается высокими коэффициентами корреляции между показателями перекисного окисления липидов и основными параметрами специфической иммунной защиты.

9. При остром отравлении арсенитами в дозе 1,0 ЛД50 изолированное применение унитиола и имунофана повышает основные показатели неспецифической резистентности организма, гуморального и клеточного звена иммунитета, однако они остаются ниже контрольного уровня. Комбинированное использование унитиола и имунофана полностью восстанавливает основные показатели неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты.

Практические рекомендации

1. В экспериментах на животных наиболее информативными показателями для оценки иммуносупрессивных эффектов арсенитов являются: содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность естественных клеток-киллеров, АЗКЦ, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция Т-клеток в реакции гиперчувствительности замедленного типа, активность ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, число а-нафтил-АБ-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов, показатели ПОЛ.

2. После острого отравления арсенитами происходит дозозависимое снижение показателей неспецифической резистентности организма и иммунного статуса, которое при острой интоксикации средней, тяжелой и крайне тяжелой степени тяжести (дозы арсенитов - 0,5-1,0 ЛД50 и более) требует применения средств профилактики и лечения постинтоксикационного иммунодефицитного состояния, так как возможно возникновение инфекционных осложнений и заболеваний.

3. После острого отравления арсенитами для восстановления иеспецифической резистентности организма, основных показателей гуморального и клеточного иммунного ответа целесообразно применять унитиол в комбинации с иммуностимулятором имунофаном.

Публикации по теме диссертации

1. Василенко O.A. Иммунотоксические свойства 2-хлорэтенилдихлорарсина, хлорида мышьяка и их связь с перекисным окислением липидов / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Василенко O.A. // Токсикологический вестник. - 2003.- №б,- С. II-I4.

2.Василенко O.A. Связь иммунотоксических свойств люизита, хлорида мышьяка с перекисным окислением липидов / O.A. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук: Сб. науч. ст. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2003. - Вып. №3.-С.159- 165.

3.Василенко O.A. Действие имунофана на параметры иммунной системы и перекисного окисления липидов после острых отравлений различными токсикантами / O.A. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук: Сб. науч. ст. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2003. - Вып. №3.-С. 167-172.

4. Василенко O.A. Модуляция антидотами влияния опасных токсических веществ на неспецифическую резистентность организма /O.A. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук: Научный отчет о НИР № 02042,- Саратов, СВИ РХБЗ, 2003. - 65 с.

5. Влияние средств медицинской защиты на иммунотоксичность химических ксенобиотиков / O.A. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Е.В. Понукалина: Научный отчет о НИР № 99.-Саратов, СВИ РХБЗ, 2003. -95 с.

6. Изменения иммунного статуса при остром действии ядов с различными механизмами токсического действия / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, O.A. Василенко, Н.М. Сидельникова: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. -Вып. №4. -С.144.

7. Механизмы иммунотоксичности химических соединений / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Н.М. Трошкин, O.A. Василенко: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. - Вып. №4. -С. 145.

8. Влияние антидотной терапии на формирование постинтоксикационных иммунодефицитных состояний / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, O.A. Василенко, С.М. Меркина: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. -Вып. №4.-С. 154.

9. Сравнительная оценка эффективности различных иммуностимуляторов при вторичных иммунодефицитах / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, O.A.

Василенко, В.Ф. Киричук: Сб. науч. тр. СВИ РХБЗ. - Саратов, 2004. - Вып. №4. -С. 155

10. Влияние соединений трехвалентного мышьяка на показатели системы иммунитета и перекисное окисление липидов / O.A. Василенко, П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, Н.М. Трошкин // Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты: Материалы Российской научной конференции. - СПб, 2004.- С.54.

Перечень сокращений

АЗКЦ - антителозависимая клеточная цитотоксичность

АОК - антителообразующие клетки

АС - арсениты

АХЭ - ацетилхолинэстераза

БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ЕКК - естественные клетки-киллеры

КОЕ - колониеобразующая единица

КОЕс - колониеобразующая единица селезенки

НРО - неспецифическая резистентность организма

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РТМЛ - реакция торможения миграции лейкоцитов

ЭБ - эритроциты барана

ЛД50 - средняя смертельная доза, вызывающая смертельный исход у 50 % отравленных животных

Е^о -среднеэффективное время жизни

^ - иммуноглобулин

ТЬ1, ТЬ2 - Т-лимфоциты- хелперы типа 1,2

Уьантиген - тимуснезависимый VI - антиген брюшнотифозной

(\Г|-А§) вакцины

Лицензия ИД№06268 от 14.11.01 Подписано в печать 22.04.04 Формат 60x84 1/16 Бум. Тип. Усл. печ. 1,0 Уч.-изд. л. 1,0

Тираж 100 экз. Заказ 189. Бесплатно

Саратовский государственный технический университет 410054 г. Саратов, ул. Политехническая, 77 Копипринтер СГТУ, 410054 г. Саратов, ул. Политехническая, 77

Актуальность темы. Изучение действия ксенобиотиков на иммунный гомеостаз и возможностей коррекции его нарушений при помощи иммуномодуляторов является одной из наиболее актуальных проблем патофизиологии, иммунологии и токсикологии. Это определяется наличием и использованием в Вооруженных Силах Российской Федерации токсичных химических веществ - (военный аспект проблемы), загрязнением окружающей среды экотоксикантами (экологический аспект проблемы), увеличением химически опасных аварий (техногенный аспект), а также ростом отравлений токсичными химическими веществами, формирующих вторичные постинтоксикационные иммунодефицитные состояния (иммунотоксикологический аспект проблемы), и, наконец, и это один из основных аспектов проблемы, необходимостью уничтожения десятков тонн боевых отравляющих веществ в соответствии с Конвенцией о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия и а его уничтожении [Александров В.Н., Емельянов В.И., 1990; Бадюгин И.С. и соавт., 1992; Саватеев Н.В., Куценко С.А., 1982; 1993; Конвенция., 1993; Хаитов P.M. и соавт., 1995; Калинина Н.И., 2000а; Забродский П.Ф., 1998; 2002; Vos J. G. et al., 1983; Loose L.D., 1985; Miller K. ,1985; Luster M.J. et al., 1987; Sullivan J.B., 1989].

Первостепенную важность приобретает вопрос об иммунотоксичности -арсенитов - люизита и продуктов его переработки. Это связано с тем, что на арсеналах Министерства обороны Российской Федерации находятся на хранении большие количества мышьяксодержащих веществ: люизита, адамсита, дифенилхлорарсина и их смесей. Запасы люизита на момент начала его уничтожения согласно Конвенции о запрещении разработки, производства, накопления и применения химического оружия и о его уничтожении составляли порядка 7,5 тысяч тонн в местах его хранения в Саратовской и Кировской областях и Удмуртии. На территории Саратовской области находится могильник, содержащий около 3 тысяч тонн адамсита и дифенилхлорарсина. В процессе уничтожения люизита и других мышьяксодержащих отравляющих веществ будет образовываться значительное количество реакционных масс, в состав которых будет входить арсенит натрия. Продукты утилизации боевых отравляющих веществ планируется хранить на территории объектов по уничтожению химического оружия [Алимов Н.И. и соавт., 2000а; 20006; 2000в; Калинина Н.И., 20006; Щербаков А.А. и соавт., 2002].

Современные проекты специализированных объектов по уничтожению химического оружия обеспечивают безопасные условия хранения химического оружия и уничтожения отравляющих веществ, в частности, люизита, в штатных режимах их функционирования. Однако при определенных обстоятельствах этот режим их работы может быть нарушен вследствие возникновения природных и стихийных бедствий, техногенных катастроф, а также при террористических актах на объектах по хранению и уничтожению химического оружия. Данные ситуации приведут к загрязнению окружающей среды мышьяксодержащими соединениями, массовому поражению обслуживающего персонала объектов по уничтожению химического оружия и населения близлежащих населенных пунктов [Алимов Н.И. и соавт., 2000а; 2000в].

Влияние боевых отравляющих веществ кожно-нарывного действия, в частности, люизита и продуктов его утилизации на иммунный гомеостаз изучено недостаточно [Горшенин А.В. и соавт., 1998; Рембовский В.Р. и соавт., 2000]. Мышьяксодержащие соединения - люизит и вещества, образующиеся в ходе технологических процессов его переработки (арсенит натрия, треххлористый мышьяк), могут снижать неспецифическую резистентность организма и показатели системы иммунитета у персонала объектов по хранению и уничтожению химического оружия, а также у населения, проживающего вблизи данных объектов. Причем, иммунотоксический эффект мышьяксодержащие соединения могут оказывать при воздействии достаточно низких доз ввиду высокой чувствительности иммунной системы к ксенобиотикам [Забродский П.Ф., 2002; Descotes J., 1986; 1987; Luster М. J. et al., 1987].

В настоящее время имеются многочисленные доказательства, полученные в экспериментах in vivo и in vitro, а также в процессе мониторинга за состоянием здоровья, неспецифической резистентностью организма и системой иммунитета лиц, подвергающихся острому и хроническому действию ксенобиотиков, что нарушение иммунного гомеостаза (повреждение популяций и субпопуляций иммуноцитов) токсичными химическими веществами приводит к инфекционным осложнениям и заболеваниям [Забродский П.Ф., 1993; 1998; 2002; Descotes J., 1986, 1987; Luster M.J. et al., 1987; Sullivan J.B., 1989]. Можно полагать, что такой же эффект вызывают люизит и продукты, получаемые при его утилизации.

Данные литературы о влиянии арсенита натрия - одного из наиболее токсичных продуктов, образующегося в ходе утилизации люизита, на неспецифическую резистентность организма и систему иммунитета практически отсутствуют [Забродский П.Ф., 2002; Давыдова В.И., 1989; Descotes J., 1986].

Не вызывает сомнения, что нарушения иммунного гомеостаза при остром отравлении мышьяксодержащими соединениями, в частности арсенитами," нуждаются в дальнейшем изучении.

Вопрос о фармакологической коррекции дисфункций системы иммунитета под влиянием люизита и продуктов его деструкции в постинтоксикационном периоде не исследован [Забродский П.Ф., 1998; 2002]. На сегодня необходим выбор наиболее приемлемых иммуностимуляторов из большого арсенала препаратов этой группы, имеющихся в настоящее время. Это позволит проводить научно обоснованную профилактику и лечение возникающих при интоксикациях мышьяксодержащими соединениями, как и при действии многочисленных ксенобиотиков, различных инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний [Шубик В.М., 1976; Хаитов P.M. и соавт., 1995; Забродский П.Ф., 1986; 1998; Georgiev V.St., Yamaguuchi Н., 1993].

Таким образом, учитывая необходимость уничтожения люизита, существующую возможность поражения работающих на химических объектах по уничтожению боевых отравляющих веществ и населения близлежащих населенных пунктов в случае аварий, недостаточно изученные особенности токсического действия арсенитов на систему иммунитета, следует заключить, что проблема исследования нарушений неспецифической резистентности и иммунного статуса под влиянием люизита и основного продукта его утилизации - арсенита натрия с целью обоснования способов их коррекции актуальна и важна как в теоретическом, так и в практическом отношении.

Цель исследования: изучить характер и механизмы нарушений неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты в условиях острой интоксикации арсенитами и разработать патогенетически обоснованные принципы медикаментозной коррекции сдвигов иммунного гомеостаза.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1. Провести комплексную оценку состояния неспецифической резистентности организма и специфических иммунных механизмов защиты у крыс при экспериментальной инфекции после острой интоксикации арсенитами (люизитом и арсенитом натрия) по величине летальности животных, среднелетальной дозы P. vulgaris и среднеэффективному времени жизни животных.

2. Установить закономерности влияния острого отравления люизитом и арсенитом натрия на состояние неспецифической резистентности организма в условиях экспериментальной инфекции по величине летальности крыс, среднелетальной дозы Е. coli и среднеэффективному времени жизни животных.

3. Изучить характер и механизмы воздействия арсенитов на неспецифическую резистентность организма (показатели бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточной активности лизоцима и фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов).

4. Выявить характер нарушений специфических иммунных механизмов защиты в эксперименте на животных на фоне воздействия возрастающих доз мышьяксодержащих соединений по ряду интегральных показателей оценки функционального состояния центральных и периферических органов иммунной системы.

5. Изучить особенности влияния возрастающих доз арсенитов на Т-зависимый гуморальный иммунный ответ в различные фазы антителогенеза (содержание антителообразующих клеток в селезенке ) и на кооперацию Т- и В-лимфоцитов.

6. Оценить состояние Т-независимого гуморального иммунного ответа в различные фазы антителообразования по показателям содержания антителообразующих клеток в селезенке в условиях острой интоксикации арсенитами.

7. Выявить характер нарушений клеточного звена иммунного ответа при острой интоксикации, моделируемой возрастающими дозами арсенитов, по комплексу показателей (реакции торможения миграции лейкоцитов, формированию гиперчувствительности замедленного типа, антителозависимой клеточной цитотоксичности, активности естественных клеток-киллер ов).

8. Установить патогенетическую роль ацетилхолинэстеразной активности Т-лимфоцитов, содержания эстеразопозитивных клеток в селезенке и перекисного окисления липидов в нарушениях специфических иммунных механизмов защиты под влиянием арсенитов.

9. Разработать патогенетически обоснованную эффективную коррекцию расстройств иммунного гомеостаза при остром отравлении арсенитами с использованием антидота арсенитов и иммуномодуляторов.

Научная новизна работы заключается в том, что в ней впервые с позиций реализации Программы по уничтожению химического оружия в результате проведенного эксперимента на животных выявлено, что при остром отравлении арсенитами - люизитом и арсенитом натрия, нарушаются неспецифическая резистентность организма и показатели иммунного статуса.

Нами экспериментально показано, что острая интоксикация арсенитами вызывает дозозависимое увеличение летальности животных от экспериментального перитонита, а также уменьшение среднелетальной дозы микробных тел Е. coli (без предварительной иммунизации) и P.vulgaris (после предварительной иммунизации), среднеэффективного времени жизни животных, что свидетельствует о снижении неспецифической и иммунологической резистентности организма. Под влиянием арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 происходит дозозависимое снижение бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.

Впервые установлено, что под влиянием острой интоксикации люизитом и арсенитом натрия происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей к 8 суткам. После острого действия арсенитов в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 через 2 сут происходит дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов и в других органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое действие арсенитов через 8 сут приводит к дозозависимому уменьшению числа колиниеобразующих единиц в селезенке.

Нами установлено, что после острой интоксикации арсенитами происходит дозозависимое более выраженное снижение Т-зависимого антителообразования (по сравнению с Т-независимым) преимущественно в продуктивный период антителопродукции через 5 и 8 сут после иммунизации, что свидетельствует о снижении функции Thl- и Th2-лимфоцитов и В-клеток (синтеза IgM и IgG). Под влиянием люизита и арсенита натрия in vitro существенно нарушается кооперация Т- и В-лимфоцитов. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 ^ 10 4 и 10 3 М) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки.

Экспериментально зарегистрировано, что острое отравление арсенитами приводит к дозозависимому снижению функции Т-клеток и активности естественных клеток-киллеров до 9 сут; реакции гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и функцию Th 1 -лимфоцитов; антителозависимой клеточной цитотоксичности. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 6 , 105 и 104 М) уменьшают активность естественных клеток-киллеров. При этом эффект люизита статистически достоверно превышает действие арсенита натрия (р<0,05).

Нами экспериментально показано, что механизмами иммунотоксичности арсенитов являются снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, а-нафтил-AS-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов, так же инициация перекисного окисления липидов, что - доказано высокими коэффициентами корреляции "между показателями перекисного окисления липидов и основными параметрами системы иммунитета.

В экспериментах определено, что при остром отравлении арсенитами — люизитом и арсенитом натрия (1,0 ЛД50), их антидот унитиол и иммуностимулятор имунофан при изолированном применении повышают основные показатели антиинфекционной неспецифической резистентности организма, гуморального и клеточного звена иммунитета. Комбинированное использование унитиола и имунофана полностью восстанавливает основные показатели неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена иммунитета, антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность естественных клеток-киллеров.

Практическая значимость работы состоит в том, что нами доказано: в результате острой интоксикации арсенитами развивается постинтоксикационное иммунодефицитное состояние, проявляющееся в дозозависимом снижении показателей неспецифической резистентности организма, специфических иммунологических механизмов защиты, параметров системы гуморального и клеточного иммунитета. Возникающий под влиянием арсенитов иммунодефицит требует применения средств коррекции нарушений неспецифической резистентности организма и иммунного гомеостаза. После острого отравления арсенитами для восстановления неспецифической резистентности организма, основных показателей гуморального и клеточного иммунного ответа целесообразно применять унитиол в комбинации с иммуностимулятором имунофаном.

Положения, выносимые на защиту:

1. Острая интоксикация арсенитами - люизитом и арсенитом натрия, в условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5; 1,0 ЛД50 вызывает прямо связанную с дозой супрессию показателей неспецифической резистентности организма, специфических иммунологических механизмов защиты, основных гуморальных и клеточных иммунных реакций.

2. При остром отравлении люизитом и арсенитом натрия происходит дозозависимая супрессия антителообразования преимущественно к Т-зависимому антигену, которая более выражена в продуктивной фазе антителогенеза. Арсениты вызывают редукцию синтеза IgG.

3. Механизмы снижения специфической иммунной защиты под влиянием арсенитов обусловлены снижением содержания лимфоцитов в органах системы иммунитета, нарушением кооперации Т- и В-лимфоцитов, приводящим к редукции антителообразования вследствие преимущественного поражения Т-лимфоцитов; ингибированием арсенитами ацетилхолинэстеразы Т-клеток тимуса и селезенки, а также а-пафтил-AS-ацетатэстеразы и а-нафтил-бутиратэстеразы спленоцитов, инициацией мышьяксодержащими соединениями перекисного окисления липидов.

4. Коррекция нарушений неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты после острой интоксикации арсенитами достигается применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола и иммуностимулятора имунофана, которые при комбинированном использовании полностью восстанавливают основные показатели неспецифической резистентности организма, Т-, В- звена системы иммунитета, антителозависимую клеточную цитотоксичность и активность естественных клеток-киллеров.

Апробация и реализация работы. Результаты исследований были доложены на заседаниях секции прикладных проблем безопасности хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения АВН (май 2001 г., март 2002 г., февраль 2003 г., апрель 2004 г.), на Российской научной конференции «Медико-биологические проблемы противолучевой и противохимической защиты», СПб, май, 2004 г., юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы корабельной токсикологии, радиологии, обитаемости кораблей и медицинского обеспечения личного состава ВМФ» (СПб, 2004 г.), научно-практических конференциях Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты (2001, 2002, 2003, 2004 гг.), совместном заседании кафедры нормальной физиологии Саратовского государственного медицинского университета, кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты и кафедры токсикологии, радиологии и медицинской защиты Саратовского военно-медицинского института (май 2004 г.) и внедрены в педагогический процесс кафедры технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института радиационной, химической и биологической защиты, кафедры токсикологии, радиологии и медицинской защиты Саратовского военно-медицинского института.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 168 страницах машинописного текста (включая таблицы и список литературы), состоит из обзора литературы (глава 1); материалов и методов исследований (глава 2); собственных экспериментальных исследований (главы 3-8); заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 31 таблицей. Список литературы включает 268 наименований, из которых отечественных сто восемьдесят восемь и зарубежных восемьдесят.

18

ВЫВОДЫ

1. При остром отравлении арсенитами (люизитом и арсенитом натрия) в условиях эксперимента на животных в дозах 0,2; 0,5 и 1,0 ЛД50 происходит прямо связанная с дозой редукция антиинфекционной неспецифической резистентности организма, специфических иммунных механизмов защиты у животных при экспериментальной инфекции, супрессия Т-зависимой и Т-независимой гуморальной иммунной реакции (более выраженная в продуктивной фазе антителогенеза), функции Т-клеток, антителозависимой клеточной цитотоксичности и активности естественных клеток-киллеров. Коррекция выявленных нарушений достигается комбинированным применением антидота мышьяксодержащих соединений унитиола и иммуностимулятора имунофана.

2. Острое действие люизита и арсенита натрия вызывает прямо связанное с дозой увеличение летальности животных от экспериментальной инфекции, вызванной Е. coli, уменьшение ЛД50 Е. coli и среднеэффективного времени жизни животных, а также данных показателей при использовании P.vulgaris после предварительной иммунизации, что свидетельствует о снижении неспецифической резистентности организма и специфических иммунных механизмов защиты.

3. Под влиянием арсенитов происходит дозозависимое снижение факторов неспецифической резистентности организма: бактерицидной активности сыворотки крови, сывороточного содержания лизоцима, фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов до 6 - 9 сут.

4. Острая интоксикация люизитом и арсенитом натрия вызывает прямо связанное с дозой уменьшение лимфоидного индекса тимуса и селезенки в течение 4 сут с последующим увеличением этих показателей к 6 суткам. Острое действие арсенитов вызывает дозозависимое уменьшение числа лимфоцитов в тимусе и селезенке в течение 2-4 сут с последующим восстановлением этих показателей к 8 сут. После острого отравления арсенитами через 2 сут происходит прямо связанное с дозой уменьшение числа лимфоцитов в органах системы иммунитета и циркулирующей крови. Острое действие люизита и арсенита натрия через 8 сут приводит к дозозависимому уменьшению числа колиниеобразующих единиц в селезенке.

5. После острого отравления арсенитами происходит прямо связанное с дозой снижение Т-зависимого антителообразования через 5 и 8 сут , после иммунизации, что свидетельствует о снижении функции Thl- и Т112-лимфоцитов и В-клеток. Редукция показателя более выражена при действии арсенитов в продуктивный период антителопродукции. Под влиянием люизита и арсенита натрия in vitro снижается кооперация Т- и В-лимфоцитов. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 5, 10 и 10~3 М) снижают кооперацию лимфоцитов, поражая преимущественно Т-клетки.

6. Острое отравление арсенитами вызывает дозозависимое снижение Т-независимой антителопродукции преимущественно в продуктивный период иммуногенеза по сравнению с индуктивным периодом, что обусловлено супрессией функции В-лимфоцитов.

7. Острое отравление арсенитами приводит к прямо связанному с дозой снижению функции Т-клеток и активности естественных клеток-киллеров до 9 сут; реакции гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей первичный клеточный иммунный ответ и функцию Thl-лимфоцитов, антителозависимой клеточной цитотоксичности. Арсениты in vitro в прямой зависимости от концентрации (10 6 , 10 5 и~104М) уменьшают^ активность естественных клеток-киллеров.

8. Под влиянием острой интоксикации арсенитами (1,0 ЛД50) происходит снижение активности ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, а также числа а-нафтил-АБ-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов (преимущественно Т-клеток), которое свидетельствует о том, что одним из механизмов их иммунотоксичности является антихолинэстеразный эффект. Острая интоксикация арсенитами приводит к инициации перекисного окисления липидов. Инициация перекисного окисления липидов под влиянием арсенитов является одним из факторов, способствующим формированию постинтоксикационного иммунодефицитного состояния после их острого действия, что доказывается высокими коэффициентами корреляции между показателями перекисного окисления липидов и основными параметрами специфической иммунной защиты.

9. При остром отравлении арсенитами в дозе 1,0 ЛД5о изолированное применение унитиола и имунофана повышает основные показатели неспецифической резистентности организма, гуморального и клеточного звена иммунитета, однако они остаются ниже контрольного уровня. Комбинированное использование унитиола и имунофана полностью восстанавливает основные показатели неспецифической резистентности организма и специфической иммунной защиты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В экспериментах на животных наиболее информативными показателями для оценки иммуносупрессивных эффектов арсенитов являются: содержание лимфоцитов в тимусе и селезенке, активность естественных клеток-киллеров, АЗКЦ, тимусзависимый гуморальный иммунный ответ в продуктивной фазе антителогенеза, функция Т-клеток в реакции гиперчувствительности замедленного типа, активность ацетилхолинэстеразы Т-лимфоцитов тимуса и селезенки, число а-нафтил-AS-ацетатэстеразопозитивных и а-нафтил-бутиратэстеразопозитивных спленоцитов, показатели ПОЛ.

2. После острого отравления арсенитами происходит дозозависимое снижение показателей -- неспецифической резистентности организма и иммунного статуса, которое при острой интоксикации средней, тяжелой и крайне тяжелой степени тяжести (дозы арсенитов - 0,5-1,0 ЛД50 и более) требует применения средств профилактики и лечения постинтоксикационного иммунодефицитного состояния, так как возможно возникновение инфекционных осложнений и заболеваний.

3. После острого отравления арсенитами для восстановления неспецифической резистентности организма, основных показателей гуморального и клеточного иммунного ответа целесообразно применять унитиол в комбинации с иммуностимулятором имунофаном.