Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Глобулин, связывающий половые стероиды, при остеосаркоме у мужчин

РГБ ОД

18 ф[В 202

На правах рукописи

БОРИСОВ Дмитрий Александрович

ГЛОБУЛИН, СВЯЗЫВАЮЩИЙ ПОЛОВЫЕ СТЕРОИДЫ, ПРИ ОСТЕОСАРКОМЕ У МУЖЧИН

(онкология -14.00.14)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2001

Работа выполнена в Российском онкологическом научнол центре им. Н.Н.Блохина РАМН (директор - академик РАН РАМН, профессор Н.Н.Трапезников)

Научные руководители:

член-корреспондент РАМН, профессор Н.Е.Кушлинский доктор медицинских наук, профессор М.Д.Алиев

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Л.Б.Горбачева доктор медицинских наук, профессор А.С.Ожерельев

Ведущая организация: Российский научный центр рентгенора диологии министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится « ¿^ » 200$/

«_» часов на заседании диссертационного совет

(К.001.17.01) Российского онкологического научного центра ил Н.Н.Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24)

С диссертацией можно ознакомиться' в библиотеке Российског онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН

Автореферат разослан «_»_2001г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

' Ю.А.Барсуко

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Саркомы костей - одни из важных и трудных в диагностическом и ле-бном плане разделов онкологии. Исследования биологии и биохимии опу-левого роста могут иметь большое значение в понимании механизмов воз-кновения, роста и метастазирования костных новообразовании, оценке фективности проводимого лечения и прогнозе заболевания.

Получены успешные результаты в лечении первичных опухолей кос-3, которые связаны с широким использованием адыовантпой и иеоадыо-;ггной химиотерапии в комплексном лечении костных сарком (Трапезников Н. и соавт., 1986, 2001). Однако не у всех больных отмечается эффект от миотерапии и это требует разработки методов, позволяющих оценить чув-штелыюсть опухоли к лечению. При этом, анализ клинической значимо-I биохимических показателей в лечении больных саркомами кости следует оводить с учетом морфологических критериев степени выраженности ле-эного патоморфоза первичной опухоли, которые в настоящее время счи-отся наиболее важными факторами в оценке клинического течения и про-эза этих заболеваний (Автандилов Г.Г., 1980; Кушлпнский U.E. и соавт., ?5; Соловьев Ю.Н.,2000).

Известно, что половые стероидные гормоны принимают активное уча-ie в регуляции нормального развития и функционирования костной снстс-, а также в механизмах бластомогспсза костей у человека и животных /шлнпскнй U.E. и соавт., 1999; Adamson U. и соавт., 1980; Bianchi G. и со-•„ 1989).

Интерес к метаболизму половых стероидов активизировался после от-,1тия в 1971 г. глобулина, связывающего половые стероиды, - тестостерон 1Страдиол-17р (Westphal U., 1976). В настоящее время глобулин, связы-эщий половые стероиды (ГСПС) считается основным транспортным бел-1 в сыворотке крови для тестостерона и эстрадиола-17р. Белок синтезиру-

ется гепатоцитамн и помимо транспортной функции служит буфером в под держании на постоянном уровне биологически активной фракции половы) стероидов в сыворотке крови (РоПипа^ N.. 1999). Фракция свободных сте роидов крови считается биологически активной, поскольку в клетки-мишеш проникают свободные гормоны и вызывают в них ранние и поздние биоло гические ответы (Мейнуоринг У., 1976).

Показатели ГСПС в сыворотке крови, по всей вероятности, могут из меняться при лечении онкологических больных, а также на разных этапа: опухолевой прогрессии. Поскольку в клетки-мишени проникают только сво бодные стероиды и стимулируют процессы их роста, активность воздействи их может зависеть от уровня относительной свободной фракции гормона сыворотке крови больных. Отмечена обратная корреляционная зависимост между свободной фракцией половых стероидов в крови и концентрацие ГСПС. По мнению ряда авторов, уровень ГСПС считается более чувстви тельным показателем в оценке скрытой гиперэстрогенемии или гиперандрс генемии, чем определение концентрации андрогенов и эстрогенов в сыворот ке крови (Фарта Л.Я. и Кушлинский Н.Е., 1986; РаптуогЛ 1996).

На основании выше изложенного следует полагать, что от концентр; ции ГСПС может зависеть уровень фракции биологически активного стеро! да, а это может иметь значение в патогенезе новообразований кости и отр; зиться на течении опухолевого процесса.

Анализ литературы показывает, что в настоящее время проведено ш достаточно клинических исследований, посвященных изучению эндокришк го статуса больных новообразованиями костей, хотя известно, что эти опух( ли наиболее часто встречаются в пубертатном периоде, когда начинают а] тивно функционировать половые железы (Кушлинский Н.Е., 1991; Ргаг 0.11., 1995).

Изменение на современном этапе методологических подходов в оцеш функционального состояния эндокринной системы, расширение представл ний относительно механизмов действия половых стероидных гормонов, п

воляет изменить взгляды на проблему гормоночувствнтелыюсти опухоли, а акже расширить спектр гормонозависимых новообразований и арсенал раз-ичных видов эндокринной терапии у онкологических больных.

Следовательно, проведение настоящего исследования, посвященного зучению глобулина, связывающего половые стероиды, в сыворотке крови ольных новообразованиями костей и свободных фракций половых стероид-ых гормонов (тестостерона и эстрадиола-17Р), позволит оценить роль этого елка в клиническом течении заболевания и, возможно, выявит новые крите-ии прогноза болезни.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ПЛАНИРУЕМОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель исследования — сравнительное изучение концентрации гло-улина, связывающего половые стероиды, и его связь с экспрессией в иер-1чной опухоли простагландииов серии Е, тестостерона, цЛМФ, рецепторов х-дигидротестостерона и эстрадиола-17Р, а также с уровнями половых сте-шдных гормонов в сыворотке крови больных остеосаркомой для изучения < роли в прогнозе заболевания.

Достижение указанной цели требовало решения следующих щач:

1. Провести анализ данных сравнительного определения концентрации глобулина, связывающего половые стероиды в сыворотке крови, больных остеосаркомой и в контроле с общей концентрацией половых стероидов (тестостерона, эстрадиола-17(5) и индексами свободных гормонов.

2. Изучить уровни глобулина, связывающего половые стероиды, в крови больных с учетом основных клинических показателей заболевания.

3. Изучить связь концентрации глобулина, связывающего половые стероиды и особенности базальной секреции общего тестостерона и эс-традиола-17(3, у больных остеосаркомой кости с учетом гистологических особенностей опухоли: морфологического варианта строения и степени дифференцировки новообразования, стадии заболевания.

4. Выявить зависимость между концентрацией глобулина, связывающего половые стероиды, в крови больных остеосаркомой и уровнем и частотой выявления рецепторов стероидных гормонов (5а-дигидротестостерона и эстрадиола-17Р) в первичной опухоли.

5. Выявить связь между уровнем глобулина, связывающего половые стероиды, концентрацией общего тестостерона и эстрадиолом-17(3 в сыворотке крови и показателями экспрессии простагландинов серии Е, цАМФ, кальмодулина в опухоли больных остеосаркомой и его роли в прогнозе болезни.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

В данном исследовании впервые представлен анализ корреляционно! связи между уровнями глобулина, связывающего половые стероиды в кров! и экспрессией простагландинов серии Е, цАМФ, РА и РЭ в опухоли у боль ных остеосаркомой, показана связь исследуемых показателей с основным! клиническими и морфологическими критериями заболевания и его прогно зом.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа представляет большой научно-практический интерес для анали за роли глобулина, связывающего половые стероиды, стероидных гормоно (тестостерона, эстрадиола-17р) и их рецепторов в патогенетических мехг низмах роста и метастазирования остеосаркомы, а также выявляет коррел) ционную связь исследуемых показателей с уровнями экспрессии простагла! динов серии Е и цАМФ в прогнозе заболевания.

Результаты проведенного исследования, позволяют дифференцировано подходить к выбору адекватных методов лечения и дают новые критерии в определении прогноза метастазнрования и эффективности лечения выше ука-шнных заболеваний.

Апробация работы. Результаты диссертации доложены на VII На-;иональном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000г.).

Диссертационная работа апробирована на совместной научной конфе-)енции с участием хирургического отделения общей онкологии, отделений химиотерапии и комбинированных методов лечения злокачественных опухо-[ей( хирургического отделения опухолей молочных желез, лаборатории кли-гической биохимии НИИ клинической онкологии и лаборатории биохимии >пухолен НИИ канцерогенеза Российского онкологического научного центра [М. Н.Н.Блохина РАМН 3 июля 2001 года.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 научные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введе-ия, главы «Материалы и методы», главы собственных результатов исследо-ания, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литерату-ы. Список литературы включает 41 отечественных и 88 зарубежных источ-иков. Диссертация иллюстрирована 5 таблицами и 35 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая характеристика обследованных больных

При выполнении настоящей работы были проанализированы данные щокринологического исследования 98 больных остеосаркомой (в возрасте 1-34 лет) и 30 практически здоровых мужчин соответствующего возраста, ктавивших контрольную группу. Это позволило получить статистически эстоверные результаты, необходимые для изучения уровней глобулина, свя-лвающего половые стероиды, общего тестостерона и эстрадиола-17р в сы-)ротке крови, а также простагландинов серии Е, цЛМФ, рецепторов андро-

генов (РА) и эстрогенов (РЭ) в опухоли и оценки их роли в клиническом течении и прогнозе заболевания.

Все больные были обследованы и получали лечение в хирургическом отделении общей онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН. Клшшко-ренгенологический диагноз новообразования кости у больных подтвержден данными морфологического исследования удаленной хирургическим методом опухоли или после исследования био-псийного материала из опухоли. Преобладающее большинство больных ос-теосаркомой были во втором и третьем десятилетиях жизни.

Для установления диагноза злокачественной или доброкачественной опухоли кости, а также распространенности опухолевого процесса, всем больным проводилось комплексное обследование, которое включало клинический, рентгенологический и морфологический методы исследования. Кроме того, дополнительно использовали: ангиографию, радиоизотопное иссле дование костной системы и печени, компьютерную томографию, ультразву ковое исследование и вспомогательные лабораторные биохимические мето ды.

К выбору адекватного метода лечения подходили дифференцированно с учетом гистологического строения опухоли, характера роста новообразова ния, локализации, распространенности опухолевого процесса, общего со стояния больного.

С учетом общего состояния больного и степени распространенност] опухолевого процесса химио- или химиолучевое лечение в предоперацион ном периоде получали только больные типичной остеосаркомой при локали зации опухоли в длинных трубчатых костях нижних конечностей.

Методы определения гормонов в сыворотке крови больных

Гормоны в крови больных остеосаркомой определяли до лечения и динамике в течение 1-2 лет наблюдения за пациентами. Кровь брали из лоь тевой вены у больных натощак между 8 и 9 часами утра. Сыворотку кров

получали общепринятым методом и хранили до определения в ней гормонов при -20°С.

Все гормоны определяли в сыворотке крови радиоиммунологическими методами с помощью наборов реактивов: общий тестостерон (Т) ("Amersham", Великобритания); общий эстрадиол-17Р (Э2) и ЛГ ("Farmos Diagnostica", Финляндия).

Половые стероидные гормоны определяли как прямым (без экстракции) методом, так и после предварительной экстракции стероидов из образцов сыворотки крови или цитозольной фракции опухоли органическими растворителями.

Методы определения в сыворотке крови глобулина, связывающего половые стероиды (ГСПС) и альбумина

Глобулин, связывающий половые стероиды, в сыворотке крови больных остеосаркомой определяли радноиммунологнческим методом с помощью наборов реактивов фирм "Bio-Merieux" (Франция) и "Farmos Diagnostica" (Финляндия). В наборах этих фирм используются разные принципы определения ГСПС. Так, фирмой "Bio-Merieux" предложен следующий метод определения ГСПС: после удаления из образцов сыворотки крови эндогенных стероидов углем, покрытым декстраном, белки сыворотки сорбируют на сефарозе с ковалентно-связанным конкавалином Л, который специфически связывает ГСПС. Остальные белки крови отделяют, промывая сефа-зозу буферным раствором. Сорбированный на сефарозе ГСПС насыщают из-зытком [3Н]ДГТ, центрифугируют, супернатант удаляют, сефарозу промывают, ресуспендируют, переносят во флаконы для счета и радиометрируют. количество связанного с ГСПС [3Н]ДГТ рассчитывают, исходя из того, что эдна молекула [3Н]ДГТ связывается с одной молекулой ГСПС (Wheeler M.J., 1995).

Более удобный ti быстрый метод определения ГСПС разработан фирмой "Farmos Diagnostica" (Финляндия). В этом методе используются вторич-

ные моноклоналыше антитела для связывания и осаждения ГСПС. В качесг ве маркера при этом используется ГСПС, меченный |251.

Оба набора высокоспецнфнчны по отношению к ГСПС, обеспечиваю хорошую воспроизводимость определения ГСПС и высокочувствительны.

Концентрацию ГСПС в обоих методах рассчитывают по калибровоч ным кривым для стандартного очищенного образца человеческого ГСПС выражают в нмоль/л.

Определение рецепторов андрогенов (РА) и эстрогенов (РЭ) в опухолях

Содержание РА и РЭ определяли по связывающей способности цнт< плазматических белков-рецепторов по отношению к [3Н]ДГТ, [3H]R1881 [3Н]Э2 в цитозолыюй фракции остеосарком. Для определения использовал модифицированный метод (Деггярь В.Г. и соавт., 1984), основанный на ос ждении рецепторов стероидных гормонов сульфатом протамина из цит< зольной фракции опухолей (Chamnes Ch. и соавт., 1975; Lippman М. и Ни К., 1976).

Образцы опухолевых тканей получали при открытой биопсии или п еле хирургического удаления опухоли. Ткань опухоли делили на две част одну из которых направляли на гистологическое и морфологическое иссл дование, вторую - замораживали в жидком азоте и хранили до определен] рецепторов андрогенов и эстрогенов при -70°С.

Масса образцов ткани для определения рецепторов стероидных горм нов составляла от 100 до 250 мг.

Получение цнтозольной фракции из опухолей. Опухолевую ткань i мельчали в фарфоровой ступке при охлаждении жидким азотом. Смешива с буфером. Состав буфера: 10 ммоль/л Трис-HCl ("E.Merck", ФРГ), : ммоль/л ЭДТА ("Sigma", США), 1 ммоль/л дитиотрейтола ("Koch-Light Lai ratories", Великобритания), 0,3% азида натрия ("E.Merck", ФРГ), pH 7,4 п 20°С, 10% глицерин марки "осч" (по объему). После размораживания см<

центрифугировали 10 минут при 2500-3000g. Из надосадочной жидкости по-тучали цитозоль, центрифугируя пробы при 105000xg в течении 1 часа (ро-гор АН-650, центрифуга модели "Sorval, FRC-1" фирма "Du Pont nstruments", Великобритания).

Для работы использовали цитозоль с концентрацией общего белка окою 1,0 мг/мл. Белок определяли по методу Лоури (Lowry О.II., 1951). Получе-1ЫЙ цитозоль содержал ДНК не более 0,03% от общего количества ДИК в lainioM образце ткани. ДНК определяли методом Peters S. и соавт. (1981).

Инкубация цитозоля с меченными лигаидами [3Н]ДГТ, fH]R18Sl и }Н]Э2. Инкубацию проб цитозоля с [3Н]стероидами проводили в течение 124 часов при 0-4°С.

Пробы 100 мкл цитозоля инкубировали с радиоактивными лигаидами 3Н]ДГТ, [3H]R1881, [''нРг. Чистота используемых лнгандов была не менее 8%, как указано выше. Специфическое связывание цитоплазматических елков-рецепторов со стероидами определяли при насыщающей концентра-,ии радиоактивного лиганда - 10 нМ с учетом несиецифического связывания присутствии 100-кратного избытка R1881 - для андрогенов и диэтилстиль-эстрола ("Calbiochem", США) - для эстрогенов. Для ингибнрования связы-ания андрогенов с рецепторами прогестерона во все пробы добавляли 500-ратный избыток триамниолона-ацетоннда ("Sigma", США) (Asselin J. и со-зт., 1979; Zava D. и соавт., 1979).

Обработка цитозоля сульфитом протамина. После инкубации к робам добавляли равный объем 0,2% раствора сульфата протамина ;E.Merck", ФРГ) в буфере (состав буфера описан выше). Пробы интенсивно лряхивали, инкубировали во льду 45 мин и центрифугировали 10 минут on 2500-3000xg. Надосадочиую жидкость удаляли, осадок промывали 2 раза ,0 мл охлажденного буфера, растворяли в 50 мкл ледяной уксусной кислоты добавляли 75 мкл 50% водного раствора едкого натра. Пробы из пробирок лывали в сцинтилляционные флаконы 2 порциями по 3,5 мл СЖ-8. Радпоак-

тивность проб определяли па спектрометре модели MARK 3S (фирма "Trau-cor Europa", Голландия). Эффективность счета по тритию составляла 40%.

Расчет специфического связывания. В каждом случае рассчитывали разницу между общим связыванием лиганда в трех параллельных пробах для каждого цитозоля. Специфическое связывание андрогенов и эстрогенов с ци-топлазматическими белками-рецепторами рассчитывали с учетом удельно!'! радиоактивности лиганда, коэффициента эффективности счета и выражали i фемтомолях связанного с рецептором [3Н]-стероида 1,0 мг общего цитозоль-ного белка в пробе. Это удобный, простой и быстрый метод расчета специфического связывания стероидов с белками-рецепторами.

Способ статистической обработки результатов определения рецепторов стероидных гормонов. В работе использовали простой cnocof статистической обработки результатов определения рецепторов половых сте роидных гормонов, предложенный Дегтярем В.Г. и соавт. (1985). В основ« используемого способа обработки результатов определения рецепторов сте роидных гормонов использован принцип зависимости каждо1 экспериментально полученной величины общего связывания в одной серш определений от каждой экспериментально полученной величинь неспецнфического связывания в этой же серии. При таком способ' вычисляют: 1) отдельные величины специфического связывания как разниц; между каждым значением общего и неспецифического связывания во все: параллельных определениях; 2) по вычисленным величинам рассчитываю среднее специфическое связывание, стандартное отклонение (дисперсию) i стандартную ошибку средней. Данный способ позволяет применят статистику для оценки различий между величинами специфического связывания как при насыщающих концентрациях лиганда по одной точк содержания рецепторов стероидных гормонов, так и графически определят дисперсию величин Kd и Вгпах по методу Скэтчарда или других графически методах.

Метод определения простаглаидииов серии Е. Простагланднны се-эии Е в опухолях костей выделяли по методу Karmali R. и соавт. (1983). ПГЕ шачале экстрагировали из гомогеиатов ткаии опухолей этил ацетатом в ки-:лой среде (рН =3,5-4,0) и затем определяли радиоиммунологическим мето-IOM с помощью наборов реактивов фирмы «Clinical Assays» (США) и выра-кали в пикограммах на 1,0 грамм исследуемого образца ткаии.

Метод определения кальмодулипа. Содержание кальмодулина в го-югенатах опухоли определяли радиоиммунологическим методом при ис-юльзовании наборов реактивов фирмы «Amersham» (Великобритания) и вы->ажалн в нанограммах на 1,0 мг общего белка в пробе гомогената. Общий ¡елок определяли по методу Лоурн.

Метод определения цАМФ. Концентрацию цАМФ в гомогенатах опу-:олей определяли радиоиммунологичсским методом наборами реактивов зирмы «Amersham» (Великобритания) после предварительной их экстракции юдкнеленным этанолом и выражали в нмоль/г ткани.

Математический анализ результатов исследований

Проводили с помощью системы программ статистической обработки анных медицинского исследования. Проводилось определение средней, шибки средней, сравнение исследуемых групп известными методами стати-гики: среднее, дисперсия, частота встречаемости признаков. Достоверность тличий в группах определялась по критерию Стыодента, применялся корре-яционный анализ. Отличия считали достоверными при значении р < 0,05, ;ли не указано другое значение.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Приступая к анализу уровней ГСПС в крови больных остеосаркомой ке больные мужского пола) следует отметить, что уровни этого белка коле-элись в широких пределах у всей группы пациентов (рис.1): от 11 до 60 моль/л и в среднем составили 25,0+11,2 нмоль/л. При этом, большая часть щиентов была в возрасте 2-го и 3-го десятилетий жизни. Представлял

большой интерес изучить уровни ГСПС в сыворотке крови больных остео саркомой в различных возрастных декадах жизни, а также в группах пациентов одинакового возраста.

Рис.1. Уровни ГСПС в сыворотки крови мужчин, больных остеосарко мой разного возраста.

70

60

^ 50 л с;

| 40

I

о" 30 с:

ю о

10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

Возраст (годы)

♦♦♦ ♦ ♦ ♦ ♦ ____*

Как показали результаты проведенного исследования, что наиболе низкие значения ГСПС были выявлены в группе больных 2-го десятилети жизни. Это были в основном пациенты пубертатного периода, когда активн начинают функционировать половые железы и происходит становление гс надостата.

Так, например, уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркс мой во втором десятилетии жизни в среднем равнялись 23,4+13,3 нмоль/л. ' хотя, у этих пациентов значения ГСПС имели тенденцию к снижению, он достоверно не различались между больными 3-го десятилетия жизн (26,8+11,1 нмоль/л) и пациентами в возрасте 31 года и старше (26,7+16 нмоль/л) (рис.2).

Анализ результатов исследования уровней ГСПС с учетом возрас больных по годам приведен на рис.2. При этом отмечена тенденция к увел)

чению уровней ГСПС с возрастом больных остеосаркомой. Самые высокие значения ГСПС обнаружены у больных в третьем десятилетии жизни.

Рнс.2. Средние уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой в разные годы жнзнн.

15 16 17 18-20 21-24 25 и старше

Возраст (годы)

Рис.3. Уровни ГСПС в сыворотке крови бальных с учетом гистологического варианта остеосаркомы.

35,0 г/

/

30.0

25.0 /

л ^ о 20,0 /' /

1 у/

и 15,0 /

С /

о 10,0 'у

5,0

0,0

а

Морфологические варианты остесэрхомы

П Остебластический П Телеэнгиоэктатический П Аиаппазированный □ Хондробластический

Учитывая тот факт, что прогноз при остеосаркоме может зависеть от морфологического варианта строения опухоли, интерес представлял анализ уровней ГСПС в сыворотке крови этих пациентов от этого фактора, а данные, полученные нами, представлены на рис.3.

Нами обследовано 24 больных остеобластическим вариантом гистологического строения остеосаркомы (это наиболее часто встречаемый вариант опухоли), 11 пациентов - с анаплазированным, 9 - с телеангиоэктатическим и 8 - с хондробластическим. У всех этих пациентов, которые практически не отличались по возрасту, сравнили уровни ГСПС в сыворотке крови. Как оказалось, что наиболее высокие значения ГСПС были обнаружены при остео-бластическом варианте остеосаркомы (31,7+13,8 нмоль/л), а наиболее низкие - при хондробластическом (23,1+6,1 нмоль/л). Концентрации ГСПС в кров1 больных анаплазированным (24,2+6,8 нмоль/л) и телеангиоэктатическм (26,3+13,4 нмоль/л) вариантами остеосаркомы занимали промежуточное по ложение и достоверно не отличались между обследованными группами па циентов.

Проведен нами также сравнительный анализ уровней ГСПС в сыворот ке крови больных остеосаркомой между пациентами в пубертатном период и у взрослых мужчин. Анализ полученных данных показал, что уровни ГСПС в сыворотке крови колебались в более широких пределах у взрослых муж чин, больных остеосаркомой (от 19 до 60 нмоль/л), по сравнению с больны ми, которые находились в пубертатном периоде (от 18 до 33 нмоль/л). Пр этом, наиболее низкие средние значения ГСПС выявлены в крови больны остеосаркомой в пубертатном периоде (14-18 лет), по сравнению со взросль ми мужчинами (19 лет и старше) (21,9+5,8 и 27,5+13,6 нмоль/л, соответст венно).

Интерес представлял сравнительный анализ уровней ГСПС в кров больных остеосаркомой и у практически здоровых людей соответствующег возраста (рис.4).

При этом нами была обнаружена следующая закономерность. У всех больных остеосаркомой, независимо от возраста будь то 2-е или 3-е десятилетия жизни отмечены более низкие значение ГСПС по отношению к контрольной группе. Так, уровни ГСПС у больных остеосаркомой во 2-м десятилетия жизни был равен 24,0+6,3 нмоль/л, в контроле - 30,6+7,5 нмоль/л. В 3-ем десятилетии уровни ГСПС в сыворотке крови больных составили 29,6+16,2 нмоль/л, в контроле - 39,6+9,6 нмоль/л.

Таким образом, несмотря на отсутствие достоверных различий между уровнями ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой и у практически здоровых людей 2-го и 3-го десятилетий жизни, нами отмечена тенденция к более высоким показателям этого белка и увеличение его концентрации с возрастом у здоровых людей.

Рнс.4. Концентрация ГСПС в сыворотке кропи больных остеосаркомой » в контрольных группах 2-го и 3-го десятилетий жпзпи.

II десятилетие (п= 10) III десятилетие (п=13)

Возрастные группы

Следующим этапом было изучение уровней общего тестостерона в крови больных остеосаркомой в разные годы пубертатного периода. При этом следует отметить, что средние значения общего тестостерона в сыворотке крови больных практически не отличались между указанными выше

группами. Так, в возрасте 15 лет уровень общего тестостерона был равен 8,9+5,2 нмоль/л; в 16 лет - 11,2+7,7 нмоль/л; в 17 лет - 10,2+7,5 нмоль/л; 18 лет - 9,2+6,0 нмоль/л.

Общий тестостерон и ГСПС в крови больных остеосаркомой

При этом, нами также не отмечено различий в уровнях ГСПС на этих этапах пубертата: 15 лет — 21,1+5,1 нмоль/л; 16 лет — 23,1+5,1 нмоль/л; 17 лет - 19,2+4,4 нмоль/л; 18 лет - 26,9+7,8 нмоль/л. Следует отметить, что только) больных в возрасте 18 лет уровни ГСПС имели наиболее широкие предель колебания.

Подводя итоги настоящему разделу исследований следует отметит! тенденцию к обратной зависимости между концентрацией ГСПС и общил тестостероном в сыворотке крови больных остеосаркомой у лиц мужскоп пола во 2-м десятилетии жизни (рис.5).

Рис.5. Зависимость между уровнем ГСПС и концентрацией общего тес тостерона в сыворотке крови больных остеосаркомой 2-го деептнлетш жизни.

Общий эстрадиол-17р и ГСПС в крови больных остеосаркомой

Проведен анализ базальных уровней эстрадиола-17р в сыворотке крови больных остеосаркомой во 2-ом и 3-ем десятилетиях жизни. Отмечена тенденция к более высоким значениям эстрадиола-17Р в крови больных третьего десятилетия по сравнению со вторым. Нами не выявлено зависимости между концентрацией ГСПС и базальным уровнем общего эстрадиола-17(5 в сыворотке крови больных остеосаркомой (общая группа).

В то же время, при анализе зависимости ГСПС и общей концентрации эстрадиола-17Р в сыворотке крови больных остеосаркомой во 2-м десятилетии жизни обнаружена прямая зависимость между указанными показателями (рис.6). Подобная закономерность выявлена между ГСПС и общим эстрадио-лом-17(3 в сыворотке крови больных остеосаркомой в 3-м десятилетни жизни

Рнс.6. Зависимость между ГСПС и эстраднолом-17Р п сыворотке крови больных 2-го десятилетня жизни.

Проведен анализ корреляционной связи между уровнем ГСПС и эст->адиолом-17р в сыворотке крови практически здоровых лиц мужского пола общая группа), который также не выявил никакой зависимости между ука-анными показателями.

Уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой и рецепторы андрогенов и эстрогенов в опухоли

Не отмечено различий в уровне ГСПС в сыворотке крови от наличия или отсутствия РА в первичной опухоли. Так, при наличии РА в остеосарко-мах в концентрации от .10 и более фмолей/мг белка концентрация ГСПС в сыворотке крови была равна 27,1+10,8 нмоль/л. Такие же показатели ГСПС в крови получены и у больных с отсутствием в первичной опухоли РА (27,6+11,6 нмоль/л).

В то же время, при наличии в опухоли РЭ уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой были ниже и равнялись 23,9+7,2 нмоль/л, а при отсутствии РЭ в опухоли концентрация ГСПС в крови была несколько выше (30,3+12,9 нмоль/л).

Рис.7. Зависимость между уровнями РЭ+ опухолями и ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой.

350 то" 300

I 250

г 200

§ 150 г

ё юо

п СП

а 50 0

15,5 16 17 19 20,4 21,6 22,5 23 31,8 32 33,4 35,5 ГСПС (нмоль/л)

I______________________________.. ________________________________________________

Не было обнаружено зависимости между наличием или отсутствием РА в первичной опухоли (общая группа) и концентрацией ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой.

15,5 16 17 19 20,4 21,6 22,5 23 31,8 32 33,4 35,5 ГСПС (нмоль/л)

Также ие выявлено корреляционной связи между уровнями ГСПС в крови и наличием или отсутствием РЭ в остеосаркоме.

Вместе с тем, при учете уровней ГСПС в крови и значений РЭ+ в опухоли (более 10 фмолен/мг белка) имеет место тенденция к слабой положительной зависимости между указанными показателями (рис.7.).

Не обнаружено связи между уровнями РЛ и содержанием общего тестостерона в опухоли. Также не выявлено зависимости между уровнями общего тестостерона в гомогенатах опухолей среди группы РЛ+ остеосарком.

Уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой и рецепторы андрогенов в опухоли

Не обнаружено различий в уровне тестостерона в гомогенатах РЛ+ и РА- остеосарком. Также не отличались между собой по уровню тестостерона РЭ- и РЭ+ остеосаркомы.

Не отмечено различий между уровнями ГСПС в сыворотке кровн больных остеосаркомой в зависимости от наличия или отсутствия РА и РЭ в первичной опухоли, а также концентраций простагландинов серии Е в гомогенатах новообразований кости (табл.1. и 2.).

Таблица 1.

Концентрация ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой с учетом наличия или отсутствия РА и РЭ в опухоли

РА РЭ

ГСПС нмоль/л) >10 фмоль/мг белка Не обнаружены >10 фмоль/мг белка Не обнаружены

28,6±10,7 32,1±13,2 25,1±7,9 34,2±12,8

Таблица 2.

Концентрация ГСПС в сыворотке крови с учетом уровня ПГЕ в первичной опухоли

ПГЕ

ГСПС < 9000 пг/г ткани > 9000 пг/г ткани

(нмоль/л) (п=15) (п=11)

26,4+11,7 28,6±10,3

Учитывая тот факт, что уровни ГСПС в сыворотке крови, РА, РЭ и ПГЕ в опухоли могут зависеть от возраста больных остеосаркомой, нами проведен анализ этих показателей с учетом десятилетия жизни пациентов. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Из данных, приведенных в таблице 3 можно сделать несколько выводов. Во-первых, следует отметить более высокие значения ПГЕ в остеосар-комах больных 2-го десятилетия жизни наряду с низкими показателями ГСПС. Во-вторых, в 3-м десятилетии жизни в опухолях наиболее чаще выявляются РА и РЭ, однако уровни РЭ и их разброс значительно больше во 2-м десятилетии жизни пациентов.

Таблица 3.

Уровни ПГЕ, РА и РЭ в первичной опухоли и концентрация ГСПС в крови больных остеосаркомой во 2-м и 3-м десятилетиях жизни

Обследованные группы ГСПС, нмоль/л ПГЕ, пг/г ткани РА РЭ

фмоль/мг белка % выявления фмоль/мг белка % выявления

II декада 25,4±6,0 11407+9245 24,3±7,5 33 98,3+48,5 44

III декада 29,9+13,3 5815±2829 25,1±17,3 67 38,0±19,6 56

Несмотря на различия в показателях ПГЕ между остеосаркомами больных II и III декад жизни значения цАМФ не различались в гомогенатах этих новообразований. Не отмечено также корреляционной зависимости между ГСПС в крови и цАМФ в опухоли (r=-0,31; р=0,26).

Таблица 4

Содержание цАМФ, ПГЕ в опухоли и ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой 2-го и 3-го десятилетий жизни

Обследованные группы Число наблюдений ГСПС, нмоль/л цАМФ, нмоль/г ткани ПГЕ, пг/г ткани

II декада 9 25,5±6,4 72,8±41,0 7707+6531

III декада 8 33,2+14,3 80,5+55,8 5942+3202

Уровни ГСПС и индексы свободных стероидов у больных остеосаркомой

Проведен анализ зависимости между показателями ГСПС в сыворотке крови и индексом свободных аидрогенов и эстрогенов в общей группе больных остеосаркомой. Обнаружена обратная зависимость между ГСПС и ИСА (р=-0,695) и между ГСПС и общим тестостероном в крови (р=-0,446).

Рнс.8. Зависимость концентрации ГСПС и ПСЭ в сыворотке крови больных остесаркомой.

ГСПС (нмоль/л)

Выявлена также обратная зависимость (р=-0,468) между концентрацией ГСПС и ИСЭ в общей группе больных остеосаркомой (рис.8). Однако она менее значима в сравнении с показателями для аидрогенов. Не обнаружено корреляционной зависимости между ГСПС и концентрацией общего эстра-диола-17Р в сыворотке крови этих пациентов (р=0,019).

Для эстрогенов представлялось возможным проведение анализа выше указанных показателей с учетом декады жизни больных. При этом только в третьем десятилетии обнаружена отрицательная корреляционная зависимость между ГСПС и ИСЭ (р=-0,648) и ГСПС и общим Э2 (р=-0,331).

Уровни ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомой в зависимости от лечения

Проведен сравнительный анализ уровней ГСПС в сыворотке крови практически здоровых детей, больных остеосаркомой до лечения, через 7 месяцев после адъювантной химиотерапии адриамицином с эффектом и в стадии генерализации опухолевого процесса (рис.9).

Рис.9. Уровни ГСПС в сыворотке крови практически здоровых детей и больных остеосаркомой до лечения, через 6 месяцев после адъювантной химиотерапии адриамицином и в стадии генерализации процесса.

Контроль До лечения После лечения Генерализация

процесса

Выявлено, что уровни ГСПС были ниже у больных остеосаркомой т сравнению со здоровыми детьми и значительно снижались при обнаруженш гематогенных метастазов опухоли в легких. Через 6 месяцев адыопантно! химиотерапии адриамицином концентрация ГСПС постепенно увеличива лась до его уровней в контроле.

Связь уровней ГСПС в сыворотке крови больных остеосаркомо£ с показателями безрецидивной выживаемости

Анализ безрецидивной выживаемости больных остеосаркомой в зав! симости от уровня ГСПС в сыворотке крови до начала специфического лече

ния выявил следующее. Достоверно лучшие показатели безрецидивной выживаемости нами обнаружены среди больных остеосаркомой, у которых перед началом специфической терапии концентрация ГСПС в крови была > 23 нмоль/л. При этом, безрецидивная 3-х летняя выживаемость у этих пациентов была равна 52,6% и достоверно отличалась от безрецидивной выживаемости у тех больных, у которых уровень ГСПС в сыворотке крови был < 23 нмоль/л, для этих больных данный показатель составил 11,9% (р<0.01) [рис.10).

Рис.10. Безрециднвная выживаемость больных остеосаркомой в зависимости от концентрации ГСПС п сыворотке крови.

Время (месяцы)

Таким образом, представленные нами данные указывают об эндокрин-1ых изменениях в организме больных остеосаркомой, которые направлены 1а снижение концентрации ГСПС в сыворотке крови. При этом низкие зна-[ения ГСПС связаны с неблагоприятным прогнозом безрецидивной выжн-1аемости больных.

ВЫВОДЫ

1. Несмотря на широкие пределы колебания концентраций ГСПС в сыворотке крови практически здоровых (11-30 нмоль/л) и больных остеосарко-мой (18-60 нмоль/л) лиц мужского пола, обнаружено, что средние значения ГСПГ были ниже в группе больных первичной остеосаркомой кости по сравнению с группой контроля и эта закономерность сохранялась как во 2-м, так и 3-м десятилетиях жизни.

2. Самые низкие показатели ГСПС выявлены в сыворотке крови больных остеосаркомой при генерализации опухолевого процесса - обнаружении гематогенных метастазов в легких. Адъювантная химиотерапия адриамнци-ном в течение 6 месяцев приводила к увеличению концентрации ГСПС в сы воротке крови пациентов до его значений в контроле.

3. Не зависимо от возраста, при анализе группы практически здоровы: людей и общей группы больных остеосаркомой, не выявлено достоверно! зависимости между уровнем ГСПС и концентрацией общего тестостерона : эстрадиола-17|3 в сыворотке крови. Однако во втором десятилетии жизни ; больных остеосаркомой обнаружена обратная связь между показателям ГСПС и общим тестостероном и прямая - между ГСПС и общим эстрадис лом-17р.

4. Анализ взаимосвязи концентраций ГСПС в сыворотке крови с урог нями рецепторов стероидных гормонов (РА и РЭ) в остеосаркомах больны выявил следующую закономерность: между РА в первичной опухоли и сс держанием ГСПС в сыворотке крови выявлена обратная зависимость, тог,г как между РЭ и ГСПС - прямая зависимость.

5. Не обнаружено статистически достоверных различий между уровн; ми экспрессии простагландннов серии Е, цАМФ, кальмодулина, РА, РЭ в о теосаркоме и концентрацией ГСПС в сыворотке крови этих пациентов.

6. Низкие показатели ГСПС (менее 23 нмоль/л) в сыворотке кро! больных остеосаркомой лиц мужского пола независимо от возраста и пи.

проводимого лечения следует считать неблагоприятным фактором прогноза. Показатель 3-х летней безрецидивной выживаемости в группе больных с уровнем ГСПС в сыворотке крови менее 23 нмоль/л равнялся 11,9%, тогда как в группе с концентрацией ГСПС более 23 нмоль/л - 52,6% (р < 0,01).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Влияние различных видов неоадъювантной терапии на содержание простагландинов сери Е в остсогенной саркоме. Вестник ОНЦ РАМН.-1995.-№2.-с.41-46 (в соавторстве с Кушлинским Н.Е., Соловьевым Ю.Н., Синюко-вым П.А., Амираслановым А.Т., Алиевым М.Д., Пашковым Ю.В.).

2. Исследование простагландинов серии Е в злокачественных новообразованиях и их клиническое значение. I съезд Онкологов стран СНГ, 3-6 декабря 1996г.,ч.2.- с.409 (в соавторстве Лякиной Л.Т., Кушлинским Н.Е., Полистовым Ю.И.).

3. Ингибиторы апоптоза в крови больных саркомами костей. - Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины. - Материалы II Российской конференции молодых ученых. - 2001. - с.407-408 (в соавторстве с Бабкиной И.В., Аббасовой С.Г.).

За последние годы отмечены успехи в лечении первичных опухолей костей, которые связаны с широким использованием адъ-ювантной и неоадъювантной химиотерапии в комплексном лечении костных сарком (Трапезников H.H. и соавт., 1986, 2001). Однако не у всех больных отмечается эффект от химиотерапии и это требует разработки методов, позволяющих оценить чувствительность опухоли к лечению. При этом, анализ клинической значимости биохимических показателей в лечении больных саркомами кости следует проводить с учетом морфологических критериев степени выраженности лечебного патоморфоза первичной опухоли, которые в настоящее время считаются наиболее важными факторами в оценке клинического течения и прогнозе этих заболеваний (Автандилов Г.Г., 1980; Кушлинский Н.Е. и соавт., 1995).

Известно, что половые стероидные гормоны принимают активное участие в регуляции нормального развития и функционирования костной системы, а также в механизмах бластомогенеза костей у человека и животных (Кушлинский Н.Е. и соавт., 1999; Adamson U. и соавт., 1980; Bianchi G. и соавт., 1989).

Интерес к метаболизму половых стероидов активизировался после открытия в 1971 г. глобулина, связывающего и транспортирующего половые стероиды — тестостерон и эстрадно л 17ß (West-phal U., 1976). В настоящее время глобулин, связывающий половые стероиды (ГСПС) считается основным транспортным белком в сыворотке крови для тестостерона и эстрадиола-17р. Белок синтезируется гепатоцитами и помимо транспортной функции служит буфером в поддержании на постоянном уровне биологически активной фракции половых стероидов в сыворотке крови. (Fortunati N., 1999). Фракция свободных стероидов крови считается биологически активной, поскольку в клетки-мишени проникают только свободные гормоны и вызывают в них ранние и поздние биологические ответы (Мейнуоринг У., 1976).

Уровни ГСПС в сыворотке крови, по всей вероятности, могут изменяться при лечении онкологических больных и на разных этапах опухолевой прогрессии. Поскольку в клетки-мишени проникают только свободные стероиды и стимулируют процессы их роста, активность воздействия их может зависеть от уровня относительной свободной фракции гормона в сыворотке крови больных. Отмечена обратная корреляционная зависимость между свободной фракцией половых стероидов в крови и концентрацией ГСПС. По мнению ряда авторов, уровень ГСПС считается более чувствительным показателем в оценке скрытой гиперэстрогенемии или гиперандрогенемии, чем определение содержания андрогенов и эстрогенов в сыворотке крови (Трапезников H.H. и соавт., 1996; Farnsworth W.S., 1996).

На основании вышеизложенного следует полагать, что от концентрации ГСПС может зависеть уровень фракции биологически активного стероида, а это может иметь значение в патогенезе новообразований кости и отразиться на течении опухолевого процесса.

Анализ литературы показывает, что в настоящее время проведено мало клинических исследований, посвященных изучению эндокринного статуса больных новообразованиями кости, хотя известно, что эти опухоли наиболее часто встречаются в пубертатном периоде, когда начинают активно функционировать половые железы (Кушлинский Н.Е., 1991; Frank G.R., 1995).

Изменение на современном этапе методологических подходов в оценке функционального состояния эндокринной системы, расширение представлений относительно механизмов действия половых стероидных гормонов, позволяет изменить взгляды на проблему гормоночувствительности опухоли, а также расширить спектр гор-монозависимых новообразований и арсенал различных видов эндокринной терапии у онкологических больных.

Следовательно, проведение подобного исследования, посвященного изучению глобулина, связывающего половые стероиды в сыворотке крови больных новообразованиями кости и свободных фракций половых стероидных гормонов (тестостерона и эстрадиола-17(3), позволит оценить роль этого белка в клиническом течении заболевания и, возможно, предложить новые критерии прогноза болезни.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ПЛАНИРУЕМОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель исследования — сравнительное изучение концентрации глобулина, связывающего половые стероиды, и его связь с экспрессией в первичной опухоли простагландинов серии Е, тестостерона, цАМФ, рецепторов 5 а-дигидротестостерона и эстрадиола-17|3, а также с уровнями половых стероидных гормонов в сыворотке крови больных остеосаркомой для изучения их роли в прогнозе заболевания.

Достижение указанной цели требовало решения следующих задач:

1. Провести анализ данных сравнительного определения общей концентрации половых стероидных гормонов (тестостерона, эстрадиола-17(3) и глобулина, связывающего половые стероиды в сыворотке крови, больных остеосаркомой и в контроле.

2. Изучить уровни глобулина, связывающего половые стероиды, в крови больных с учетом основных клинических и мофрологических показателей заболевания.

3. Изучить особенности базальной секреции общего тестостерона и эстрадиола-17(3, глобулина, связывающего половые стероиды, у больных остеосаркомой кости с учетом вида опухоли, возраста и пола пациентов, морфологического варианта строения и степени дифференцировки опухоли, стадии заболевания.

4. Выявить зависимость между уровнем, частотой выявления рецепторов стероидных гормонов (5а-дигидротестостерона и эстрадиола-17(3) в первичной опухоли и концентрацией глобулина, связывающего половые стероиды, в крови больных остеосаркомой.

5. Выявить связь между уровнем глобулина, связывающего половые стероиды, цАМФ, простагландинами серии Е, рецепторами андрогенов и эстрогенов в опухоли и общим тестостероном и эстрадиолом-17|3 в сыворотке крови больных остеосаркомой и рецепторами стероидных гормонов в опухоли и их роли в оценке клинической значимости исследованных показателей.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

В данном исследовании впервые будет представлен анализ корреляционной связи между уровнями глобулина, связывающего половые стероиды в крови и экспрессией простагландинов серии Е, цАМФ, РА и РЭ в опухоли у больных остеосаркомой, показана связь исследуемых показателей с клиническими и морфологическими критериями заболевания и его прогнозом.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа представляет большой научно-практический интерес для анализа роли глобулина, связывающего половые стероиды, стероидных гормонов (тестостерон, эстрадиол-17(В) и их рецепторов в патогенетических механизмах роста и метастазирования остеосар-комы, а также корреляционная связь исследуемых показателей с уровнями экспрессии простагландинов серии Е и цАМФ в прогнозе заболевания.

Результаты проведенного исследования, возможно, позволят дифференцированно подходить к выбору адекватных методов лечения и дадут новые критерии в определении прогноза метастазирования и эффективности лечения вышеуказанных заболеваний.

Апробация работы. Результаты диссертации доложены на VII Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000г.).

Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции с участием хирургических отделений общей онкологии, отделения химиотерапии и комбинированного лечения злокачественных опухолей, хирургического отделения опухолей молочных желез, лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии и лаборатории биохимии опухолей НИИ канцерогенеза Рос

10 сийского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН 03 июля 2001 года.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 научные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, главы «Материалы и методы», главы собственных результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы. Список литературы включает 41 отечественных и 88 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована 5 таблицами и 35 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Несмотря на широкие пределы колебания концентраций ГСПС в сыворотке крови практически здоровых (11-30 нмолъ/л) и больных остеосаркомой (18-60 нмоль/л) лиц мужского пола, обнаружено, что средние значения ГСПГ были ниже в группе больных первичной остеосаркомой кости по сравнению с группой контроля и эта закономерность сохранялась как во 2-м, так и 3-м десятилетиях жизни.

2. Самые низкие показатели ГСПС выявлены в сыворотке крови больных остеосаркомой при генерализации опухолевого процесса - обнаружении гематогенных метастазов в легких. Адъювантная химиотерапия адриамицином в течение 6 месяцев приводила к увеличению концентрации ГСПС в сыворотке крови пациентов до его значений в контроле.

3. Не зависимо от возраста, при анализе группы практически здоровых людей и общей группы больных остеосаркомой, не выявлено достоверной зависимости между уровнем ГСПС и концентрацией общего тестостерона и эстрадиола-17Р в сыворотке крови. Однако во втором десятилетии жизни у больных остеосаркомой обнаружена обратная связь между показателями ГСПС и общим тестостероном и прямая - между ГСПС и общим эстрадиолом-17(3.

4. Анализ взаимосвязи концентраций ГСПС в сыворотке крови с уровнями рецепторов стероидных гормонов (РА и РЭ) в остеосар-комах больных выявил следующую закономерность: между РА в первичной опухоли и содержанием ГСПС в сыворотке крови выявлена обратная зависимость, тогда как между РЭ и ГСПС - прямая зависимость.