Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Гепатопротекторная активность некоторых производных 3-гидроксипиридина при токсических повреждениях печени

На правах рукописи

СЕМЕНОВА ЕЛЕНА ВАСИЛЬЕВНА

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ З-ГИДРОКСИПИРИДИНА ПРИ ТОКСИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ ПЕЧЕНИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саранск 2009

003482668

Работа выполнена на кафедре фармакологии государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Иичина Вера Ивановна

Официальные оппоненты: Главный научный сотрудник Института

физиологически активных веществ РАН, доктор медицинских наук, профессор Кинзирский Александр Сергеевич

Заведующий кафедрой педиатрии ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева», доктор медицинских наук, профессор Балыкова Лариса Александровна

Ведущая организация: ГОУВПО «Российский государственный

медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «^»/¿¿^.¿РиЛ* 2009 года в часов на заседании диссертационного совета Д 212^117.08 при ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» (430032, г. Саранск, ул. Ульянова, 26).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68) и на официальном сайте университета - www.mrsu.ru.

Автореферат разослан «ЛЗ»009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета /

кандидат медицинских наук, доцент ^^ --- А.Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, в мире насчитывается более 2 миллиардов человек, страдающих заболеваниями печени (Дроговоз С.М., 2008). Растущий уровень заболеваемости гепатопатиями, вызванными ксенобиотическими факторами, связан с увеличением потребления лекарственных средств, химизацией пищевой промышленности, глобальным изменением экологии, высокой степенью алкоголизации населения (Григорьев П.Я, 2002; Хазанов А.И., 2006).

Возможности этиотролной терапии гепатолатий ограничены, и по-прежнему в лечении гепатитов различной этиологии весьма значительной остается роль патогенетической терапии гепатопротекторными средствами (Лобу-тева Л.А. и др., 2009). Несмотря на большое количество лекарственных средств, позиционируемых как гепатопротекторы на современном фармакологическом рынке, большинство из них являются зарубежными препаратами растительного происхождения. Эффект многих из них при острой и хронической патологии печени недостаточен и не подтверждается при независимых сравнительных исследованиях (Дроговоз С.М. и др., 1998; Верма С., Зулувас П., 2008). В связи с чем поиск новых эффективных соединений с гепатопротективным действием остается актуальным направлением отечественной фармакологии.

Протективное действие многих синтетических гепатопротекторов, эссен-циальных фосфолипидов, препаратов, содержащих флавоноиды растений, объясняют способностью подавлять патологически активированные процессы пе-рекисного окисления липидов, т.е. антиоксидантным и мембранопротекторным действием (Palasciano G., 1994; Белобородова Э.И. и др., 2000; Буеверов А.О., 2001; Gebhardt R., 2002; Дегтярева И.И. и др., 2002). Проведенные ранее исследования гибридного антиоксиданта гидроксипиридинового ряда - мексидола -свидетельствовали о наличии у него гепатопротекторной активности, в связи с чем перспективным является поиск новых высокоэффективных в отношении гепатопротекции соединений данного ряда путем направленного синтеза и скрининга среди уже существующих опытных веществ.

Работа является разделом комплексной темы Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипоксических, токсических и радиационных воздействиях». Номер государственной регистрации 01200004103.

Цель исследования: Разработка новых гепатопротектов на основе производных 3-гидроксипиридина (3-ГП).

Задачи исследования:

1. Изучить острую токсичность исследуемых соединений.

2. Оценить влияние исследуемых соединений на морфофункциональные характеристики печени (уровень активности аланиновой и аспарагиновой трансами-назы (AJ1T и ACT), щелочной фосфатазы (1ДФ), общего белка и его фракций, состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) по уровню малонового диальдегида (МДА) и активности каталазы, а также морфологическую структуру печени) при остром тетрахлорметановом гепатите у мышей и крыс и

остром аллиловом гепатите у крыс.

3. Определить возможность коррекции морфофункциональных изменений печени (уровень активности АЛТ, АСТ, ЩФ, общего белка и его фракций, состояние ПОЛ по уровню МДА и активности каталазы, а также морфологическую структуру печени) при хроническом тетрахлорметановом гепатите у крыс.

Научная новизна.

Изучена острая токсичность исследуемых производных 3-ГП, значения их 1Л)5()При внутрибрюшинном введении составили от 400 до 1650 мг/кг.

Исследована гепатопротекторная активность фумарата, никотината, ге-мисукцината, липоата и адипината 3-ГП.

У фумарата 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и гемисукцината 3-ГП в дозе 50 мг/кг выявлено антитоксическое действие на модели острой интоксикации тетрахлорметаном, проявлявшегося в снижении летальности подопытных животных. При острой интоксикации аллиловым спиртом, антитоксическое действие обнаружено у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг, снижавшего летальность животных до 0%.

На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых мышах и крысах установлено наличие гепатопротекторной активности у фумарата, адипината, гемисукцината и никотината 3-ГП, при остром аллиловом гепатите - у фумарата и никотината 3-ГП в изученных дозах, проявлявшейся в снижении степени выраженности цитолитического и холестатического синдромов, а также улучшении морфологической структуры печени, что выражалось в снижении степени дистрофии гепатоцитов, уменьшении воспалительной инфильтрации и некрозов гепатоцитов.

На модели хронического тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, выражавшегося в сохранении белоксинтетической функции печени, улучшении морфологической структуры печени: снижении степени дистрофии гепатоцитов, уменьшении воспалительной инфильтрации и некрозов гепатоцитов.

Эффективнее других исследованных производных 3-ГП степень выраженности процессов ПОЛ (по уровню МДА) в сыворотке крови белых крыс с острым тетрахлорметановым гепатитом снижали фумарат и адипинат 3-ГП (в дозе 25 мг/кг), при хроническом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг), остром аллиловом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг).

Практическая значимость.

Результаты исследования внедрены в научно-исслёдовательскую работу и учебный процесс кафедры фармакологии ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» и служат обоснованием для доклинического исследования указанных соединений.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Фумарат 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг и геми-сукцинат 3-ГП в дозе 50 мг/кг оказывают антитоксическое действие на модели острой интоксикации тетрахлорметаном, что проявляется в снижении летальности подопытных животных. При острой интоксикации аллиловым спиртом антитоксическое действие обнаружено у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг.

2. На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых мышах и крысах гепатопротекторными свойствами обладают фумарат, адипинат, гемисук-цинат и никотинат 3-ГП, при остром аллиловом гепатите - фумарат и никоти-нат 3-ГП в изученных дозах.

3. На модели хронического тетрахлорметанового гепатита протективное действие на печень оказывают фумарат и адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг.

Апробация работы. Результаты работы и основные положения, представленные в диссертации, были доложены и обсуждены на XIII, XIV, XVI Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006, 2007, 2009), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Я.В. Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005), XI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ им. Н.П. Огарева (Саранск 2006), XXXIV, XXXV, XXXVI, XXXVII Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева) (Саранск 2005 - 2008), I Международной (X Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2006), XXVIII и XXX конференции общества молодых ученых МГМСУ (Москва, 2006, 2008), XIII Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2008), 81-й конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов кандидатских диссертаций, получен 1 патент РФ.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 175 стр. машинописного текста, документирована 19 таблицами и иллюстрирована 42 рисунками. Работа состоит из введения, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя, включающего 355 источников, в том числе 227 отечественных и 128 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Эксперименты проводились на 404 нелинейных половозрелых белых мышах обоего пола, массой 18 - 25 г, содержащихся в стандартных условиях вивария и 139 нелинейных половозрелых белых крысах обоего пола, массой 180 - 220 г. Предметом исследования служили новые производные 3-ГП, препаратами сравнения - мексидол и берлитион (а-липоевая кислота), лекарственные средства с доказанной эффективностью при заболеваниях печени, используемые в клинике. Берлитион был закуплен в аптечной сети, фирма производитель - Берлин-Хеми. Субстанция мексидола, а также адипината, гемисукцината и липоата 3-ГП синтезированы в ИБХФ им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва, д.х.н. Смирновым Л.Д. Фумарат и никотинат 3-ГП синтезированы в МГУ им. Н.П. Огарева, Саранск, к.х.н. Семеновым A.B. Их структура была подтверждена данными ЯМР 'Н, ,:>С и ИК спектроскопии.

Для исследования гепатопротекторной активности указанных соединений были выбраны модели острого и хронического токсического повреждения пе-

чени, предложенные в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) исследованию новых фармакологических веществ под редакцией Фисенко В.П., 2000 г. Острое повреждение печени моделировали тетрахлорметаном и аллило-вым спиртом, хроническое - тетрахлорметаном.

Первая часть исследования (скрининговая), проведенная на белых мышах с моделированием острого тетрахлорметанового гепатита, включала 2 эксперимента с разными соединениями, проведенными: первое - в весенний период года, второе - в осенний, ввиду чего для каждого эксперимента были отдельно сформированы группы интактных и контрольных животных (1 и 2), что учитывалось при статистической обработке полученных результатов (табл. 1). Острый токсический гепатит моделировали внутрибрюшинным введением 50% масляного раствора тетрахлорметана в дозе 4 мл/кг однократно. Подопытные животные составили 16 групп, включавшие интактных и контрольных животных, а также мышей, получавших лечение препаратами сравнения и исследуемыми соединениями (табл. 1). Применяли дозы соединений в диапазоне от 1% до 10% от установленных LDs0. Дозы препаратов сравнения рассчитывали на основании среднетерапевтических доз для человека с учетом коэффициента пересчета для животных. Соединения, проявившие гспатопротекторную активность по результатам скрининга, были затем изучены на моделях острого тетрахлорметанового и аллилового гепатита на крысах.

Острый тетрахлорметановый гепатит моделировали однократным внутрибрюшинным введением 50% масляного раствора тетрахлорметана в дозе 2 мл/кг на 48 белых крысах. Острый аллиловый гепатит моделировали на 42 белых крысах однократным внутрибрюшинным введением аллилового спирта в дозе 0,05 мл/кг. Хронический тетрахлорметановый гепатит моделировали на 39 белых крысах внутрибрюшинным введением 50% масляного раствора тетрахлорметана в дозе 1 мл/кг дважды в неделю в течение 5 недель. Подопытных животных во всех экспериментах делили на группы, представленные в таблице 1, включавшие интактных и контрольных животных, а также крыс, получавших лечение препаратами сравнения и исследуемыми соединениями.

Все препараты при скрининге на белых мышах и на последующем этапе при моделировании острого токсического повреждения печени на белых крысах тетрахлорметаном и аллиловым спиртом вводились внутримышечно ежедневно однократно на протяжении 5 дней, начиная с 1-ого дня после введения гепатотоксина. При моделировании хронического повреждения печени тетрахлорметаном препараты вводились внутримышечно ежедневно однократно в течение 5 недель, параллельно с введением тетрахлорметана.

В каждой экспериментальной группе рассчитывали показатель летальности. Для определения физиологических изменений в сыворотке крови исследовали уровень активности AJIT и ACT по методу Райтмана и Френкеля. При исследовании на белых крысах определяли также в сыворотке крови уровень активности ЩФ по методу Бессея - Лоури - Брока, общего белка биуретовым методом и альбуминов методом электрофореза. О состоянии процессов ПОЛ в сыворотке крови судили по уровню МДА, который определяли по методу С.Г. Конюховой и активности каталазы, определявшейся по методу М.А. Королюка.

Таблица 1.

Серии опытов Вид Коли-

животных чество

Определение острой токсичности изучаемых соединений

1 Фумарат 3-гидроксипиридипа 42

2 Никотинат З-гидроксипиридина 60

3 Адипинат З-гидроксипиридина Белые мыши 36

4 Гемисукцинат З-гидроксипиридина 30

5 Лииоат З-гидроксипиридина 36

Острый токсический тетрахлорметановый гепатит

6 Интактные животные-1 6

7 Контроль-1 (ССЦ+0,1 мл физ. р-ра на одну особь) 16

8 ССЦ+липоат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 16

9 ССЦ+липоат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 16

10 ССЦ+фумарат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 16

11 ССЦ+фумарат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 16

12 ССЦ+берлитион 75 мг/кг 16

13 ССЦ+мексидол 25 мг/кг Белые мыши 16

14 Интактные животные-2 6

15 Контроль-2 (ССЦ+0,1 мл физ. р-ра на одну особь) 10

16 ССЦ+адипинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 12

17 ССЦ+адипинат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 12

18 ССЦ+гемисукцинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 10

19 ССЦ+гемисукцинат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 12

20 ССЦ+никотинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг 10

21 ССЦ+никотинат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 10

22 Интактные животные 6

23 Контроль (ССЦ+0,2 мл физ. р-ра на одну особь) 6

24 ССЦ+адипинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 6

25 ССЦ+гемисукцинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг Белые крысы 6

26 ССЦ+никотинат З-гидроксипиридина 50 мг/кг 6

27 ССЦ+фумарат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 6

28 ССЦ+мексидол 25 мг/кг 6

29 ССЦ+берлитион 25 мг/кг 6

Острый токсический аллиловый гепатит

30. Интактные животные 10

31 Контроль (аллиловый спирт+0,2 мл физ. р-ра на особь) 10

32 аллиловый спирт+никотинат З-гидроксипиридина 50 мг/кг Белые крысы 8

33 аллиловый спирт+фумарат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 8

34 аллиловый спирт+сукцинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 8

35 аллиловый спирт+берлитион 25 мг/кг 8

Хронический токсический гепатит

36 Интактные животные 6

37 Контроль (ССЦ+0,2 мл физ. р-ра на одну особь) 9

38 ССЦ+адипинат З-гидроксипиридина 25 мг/кг Белые крысы 6

39 ССЦ+фумарат З-гидроксипиридина 25 мг/кг 6

40 ССЦ+мексидол 25 мг/кг 6

41 ССЦ+берлитион 25 мг/кг' ' ■ 6

Структура экспериментального исследования

Для гистологического исследования готовили препараты печени по общепринятым методикам, окрашивали гематоксилином и эозином. На светооп-тическом уровне проведен качественный, а также полуколичественный анализ препаратов печени с определением индекса гистологической активности (ИГА) по модифицированной методике Кноделя. На каждом стекле подсчитывали по 50 гепатоцитов в 10 полях зрения и определяли в баллах выраженность каждого показателя: наличие белковой, гиалиново-капельной дистрофии и воспалительной инфильтрации оценивалось по 4-балльной шкале (0 - признак отсутствует, 1 - слабо выражен, 2 - умеренно выражен, 3 - значительно выражен); некроза -по 8-балльной (0 - признак отсутствует; 1 - «пятнистый некроз» с отдельными пораженными гепатоцитами; 2 - «пятнистый некроз» с группой пораженных гепатоцитов; 3 - сливной некроз с очагами пораженных гепатоцитов до 30%; 4 - сливной центролобулярный некроз с поражением 30-50% гепатоцитов; 5 -сливной некроз с поражением более 50% гепатоцитов; 6 - мостовидный некроз; 7 - ступенчатый некроз). ИГА рассчитывали, суммируя полученные баллы.

Манипуляции с животными проводились с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных».

Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью пакета программ «Excel» с определением t-критерия Стьюдента (для параметрических данных) и критерия jf (для непараметрических данных), значимыми считали различия при р<0,05 (Беленький М.Л., 1963; Лакин Г.Ф., 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Для новых пиридинпроизводных на белых мышах была изучена острая токсичность и рассчитана 1Л35о, данные представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Химическая формула Название м, г/моль LDso, г/кг

2 JOT 1 н^,соон • 1 нооС^н Фумарат 3-ГП (ди-2-этил- б-метил-3-гидроксипиридина фумарат) 390 450

JXLCT Никотинат 3-ГП (2-этил- 6-метап-З-гидроксипиридина никотинат) 260 1650

2 XX0"" Нзс С,Н5 Hjip— соон н,с-соон Гемисукцииат 3-ГП (ди-(2-этил-6-метил-З-гидроксипиридина) сукцинат) 392 400

1 Т . НгС СН-(СНг),-СООН HjC^IT^C,^ s-s Липоат 3-ГП (2-этил-б-метил-3-гидроксипиридина липоат 309 500

снГсоон Л JL • н,с^игХн, снгсоон Адйпинат 3-ГП (2-этил-б-метил-3-гидроксипиридина адипинат) 271 725

LDso новых производных 3-гидроксипиридина при внутрибрюшинном введении

Таким образом, все изучаемые соединения согласно ГОСТу 12.1.007-76 относятся к группе умеренно токсичных (III класс опасности), за исключением никотината 3-ГП, относящегося к малотоксичным соединениям (IV класс).

Скрининговым исследованием было установлено наличие антитоксического действия у фумарата 3-ГП в дозах 25 и 50 мг/кг, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и гемисукцината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, проявлявшегося в достоверном снижении летальности подопытных животных с 25% в контроле-1 до 0% на фоне введения фумарата 3-ГП (25 и 50 мг/кг), а также с 50% в контроле-2 до 8% при терапии адипинатом 3-ГП (25 мг/кг) и гемисукцинатом 3-ГП (50 мг/кг).

Введение тетрахлорметана подопытным белым мышам в указанной дозе приводило к достоверному по отношению к показателям интактных животных соответствующих групп росту активности ферментов цитолиза в сыворотке крови: АЛТ - на 77% (в контроле-1) и 91% (в контроле 2); АСТ - на 54% (в контроле-1) и 16% (в контроле-2), что свидетельствует о развитии цитолитиче-ского синдрома с характерным для поражений печени преобладанием уровня активности АЛТ по отношению к активности АСТ в сыворотке крови. Выявлено, что выраженное корригирующее влияние на уровень активности АЛТ в сыворотке крови мышей с острым тетрахлорметановым гепатитом оказывали фу-марат 3-ГП (50 мг/кг), адипинат 3-ГП (50 мг/кг), гемисукцинат 3-ГП (25 и 50 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг), достоверно снижавшие уровень активности АЛТ соответственно на 26%, 25%, 51%, 31%, 27% и 21% по сравнению со значениями данного показателя соответствующих контрольных групп.

3.50

3,00

2,50 ■

с 2,00 1

1 1,50 г

1,00 0,50 0,00 -

Влияние фумарата и липоата 3-гидроксипиридина, мексидола и берлитиона на показатели активности АЛТ и АСТ сыворотки крови белых мышей при остром тетрахлорметановом гепатите

Примечание: 1 - Интактные-1; 2 - Контроль-1 (ССЦ 4 мл/кг+физиологический раствор 0,1 мл); 3 - ССЦ+фумарат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 4 - ССЦ+фумарат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 5 - ССЦ+липоат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 6 - С(Х4+липоат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 7 — ССЦ+берлитион 75 мг/кг; 8 - ССЦ+мексидол 25 мг/кг. л - достоверность различия к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов.

Р и с. 2.

3,00

л

Влияние адипината, гемисукцината и никотината 3-гидроксипиридина на показатели активности АЛТ и АСТ сыворотки крови белых мышей при остром тетрахлорметановом гепатите

Примечание: 1 - Интактные-2; 2 - Контроль-2 (СС14 4 мл/кг+физиологический раствор 0,1 мл); 3 - ССЬ+адилинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 4 - ССЦ+адипинат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 5 - ССи+гемисукцинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 6 -ССи+гемисукцинат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 7 - ССи+никотинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; В - ССЦ+никотинат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг.

л - достоверность различия определена к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов.

Причем на фоне введения мексидола, берлитиона, фумарата в дозе 50 мг/кг и гемисукцината в дозах 25 и 50 мг/кг наблюдалось снижение активности АЛТ до уровня достоверно не отличавшегося от такового у животных соответствующих интактных групп (рис. 1, 2).

Процент снижения уровня активности АСТ в группах, получавших терапию, по сравнению с данным показателем у животных соответствующих контрольных групп составил (р <0,05); на фоне введения берлитиона - 36%, мекси-дола - 40%, липоата 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 25%, 50 мг/кг - 31 %, фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 34%, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 18%, гемисукцината в дозе 25 мг/кг - 22%, 50 мг/кг - 23%, никотината 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 19%. В указанных группах, а также остальных группах, где не было обнаружено достоверного снижения активности АСТ по отношению к контролю, уровень данного показателя достоверно не отличался от такового у интактных животных. Достоверных отличий между показателями АСТ между группами, получавшими лечение, найдено не было.

На основании скрининга (с учетом влияния изучаемых соединений на показатели выживаемости подопытных животных при острой тетрахлорметано-вой интоксикации, а также влияния на уровень активности АЛТ, как маркера цитолиза гепатоцитов) было продолжено дальнейшее исследование гепатопро-текторной активности следующих производных 3-ГП; фумарата, адипината, ге-

мисукцината и Никотината 3-ГП. Липоат 3-ГП был отсеян на этапе скрининга, поскольку не оказывал достоверного влияния на показатель активности АЛТ в сыворотке крови белых мышей с острым тетрахлорметановым гепатитом.

При исследовании физиологических параметров у подопытных белых крыс с острым тетрахлорметановым гепатитом было обнаружено, что на фоне введения тетрахлорметана у животных контрольной группы отмечалось достоверное по сравнению с данным» показателями у интактных крыс повышение активности амннотрансфсраз: АЛТ - в 2,7 раза, ACT - в 1,4 раза, а также ЩФ -в 1,8 раза, что отражало цитолитические процессы в печени, а также явления холестаза, что могло быть связано с нарушением билиарной экскреции ЩФ в связи с токсическим повреждением билиарного эпителия (табл. 3). Белые крысы в отличие от белых мышей были более устойчивы к действию тетрахлорметана, летальных исходов при моделировании и к концу эксперимента в группах не зафиксировано.

Таблица 3.

Серии опытов .АЛТ, мкмоль/л-ч ACT, мкмоль/л-ч ЩФ, нмоль/л-с МДА сыворотки, ммоль/л Каталаза сыворотки, мккат/ ммоль/л-с

Интактные 1,55±0,18 1,15±0,06 1175±160 6,21+0,16 2,40±0,08

Контроль 4,23+0,42л 1,56±0,11л 2101±138л 11,10±1,47л 2,25 ±0,23

Фумарат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 2,02+0,19* 1,00+0,03* 1528±109*# 8,10±0,99*# 2,24±0,25

Адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 1,46±0,12*#& 0,96±0,02* 1298+174*# 6,86±0,67*# 3,18±0,28*л#&

Гемисукцинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 2,2±0,15*л 0,94±0,05* 1330±151*# 11,90±1,52л# 2,58±0,26

Ннкотинат 3-ГП в дозе 50 мг/кг 1,26+0,11*#& 0,94±0,04* 1556±180*# 11,90±1,49л# 1,95±0,18#

Мексидол в дозе 25 мг/кг 2,18+0,19« 0,88±0,07* 1292±138*# 8,34±0,60л# 1,96±0,30#

Берлитион в дозе 25 мг/кг 2,34+0,21*л 1,04±0,04* 2298±194л 17,0+3,60*л& 2,80±0,18&

Влияние фумарата, адишшата, гемисукцината, ни котим ата З-гидроксипиридина, мексидола и берлитноиа на показатели АСТ, АЛТ, ЩФ, МДА и каталазы сыворотки крови белых крыс при остром тетрахлорметановом гепатите

Примечание: л - достоверность различия к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитиона; & - к группе мексидола.

Выявлено, что все исследуемые соединения и препараты сравнения достоверно снижали уровень активности АЛТ в сыворотке крови белых крыс с острым тетрахлорметановом гепатитом по отношению к уровню данного показателя в контрольной группе на 52% (фумарат 3-ГП в дозе 25 мг/кг), 66% (ади-пинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг), 48% (гемисукцинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг), 70% (ни-котинат 3-ГП в дозе 50 мг/кг), 48% (мексидол в дозе 25 мг/кг) и 45% (берлитион в дозе 25 мг/кг). Достоверно более низкие значения уровня активности АЛТ сыворотки крови по отношению к данному показателю на фоне введения препаратов сравнения, а также других исследуемых производных 3-ГП - фумарата

и гемисукцината 3-ГП были обнаружены на фоне введения никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, что может свидетельствовать о менее выраженных цитолитических процессах в печени животных данных групп.

Процент снижения уровня активности АСТ в группах, получавших терапию, по сравнению с данным показателем у животных соответствующих контрольных групп составил (р <0,05): на фоне введения фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 36%, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 38%, гемисукцината 3-ГП в дозе 25 мг/кг - 40%, никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг - 40%, мексидола в дозе 25 мг/кг - 43% и берлитиона в дозе 25 мг/кг - 33%. Достоверных отличий по данному показателю между вышеуказанными группами при попарном сравнении обнаружено не было.

Активность ЩФ в сыворотке крови белых крыс с острым тетрахлормета-новом гепатитом достоверно снижалась на фоне введения производных 3-ГП: мексидола в дозе 25 мг/кг (снижение на 39% по отношению к данному показателю у контрольных животных), адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг (на 38%), гемисукцината 3-ГП в дозе 25 мг/кг (на 37%), фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг (на 27%) и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг (на 26%), причем достоверных различий между показателями указанных групп обнаружено не было. Таким образом, можно говорить о способности изучаемых соединений устранять явления холе-стаза, наблюдаемые при острой интоксикации тетрахлорметаном. На фоне введения берлитиона активность ЩФ достоверно не отличалась от таковой у контрольных животных и была достоверно выше по сравнению с данными интакт-ной группы и группами, получавшими терапию производными 3-ГП.

Изучение состояния процессов пероксидации показало, что введение тет-рахлорметана белым крысам сопровождалось достоверным повышением уровня МДА в 1,8 раза по сравнению с контролем, при этом достоверного изменения активности каталазы в контроле обнаружено не было. В группе животных, получавших фумарат 3-ГП в дозе 25 мг/кг и адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг, наблюдалось достоверное снижение уровня МДА на 27% и 38% соответственно. Активность каталазы достоверно повышалась лишь на фоне введения адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг (на 42% по сравнению с таковой в контрольной группе).

При исследовании гистологических препаратов печени подопытных животных было обнаружено, что введение тетрахлорметана приводит к выраженным структурным изменениям: нарушается балочное строение печени, наблюдается лимфогистиоцитарная инфильтрация преимущественно центролобуляр-ной зоны ацинусов, выраженная крупно- и среднекапельная дистрофия большинства гепатоцитов. Сравнение результатов полу количественного метода оценки степени активности процесса в печени подопытных животных позволило установить, что на фоне терапии наблюдается достоверное снижение ИГА по сравнению с данным показателем у контрольных животных (рис. 3). По степени активности процесса в печени подопытных крыс с острым тетрахлормета-новым гепатитом исследуемые соединения можно расположить следующим образом в порядке убывания ИГА: берлитион (максимальное значение ИГА среди групп, получавших лечение) > никотинат 3-ГП > фумарат 3-ГП > мекси-

дол > адипинат 3-ГП > гемисукцинат 3-ГП (минимальное значение ИГА). Причем были обнаружены достоверные отличия при сравнении между ИГА разных групп (за исключением групп фумарата 3-ГП и мексидола, между которыми по данному показателю достоверного отличия обнаружено не было).

Ри с. 3.

8

6 5 4 3 2

0,00 2,00 4,00 6,00 3,00 10,00 12,00

Индекс гистологической активности

В белковая дистрофия Е] гиалиново-капельная дистрофия

□ воспалительная инфильтрация □ некроз

Влияние фумарата, адииината, гемисукцината, никотината 3-гидроксипиридина, мекендола и берлитиона на степень выраженности морфологических изменений в печени белых крыс при остром тетрахлорметановом гепатите

Примечание:1 - Интактные; 2 - Контроль (ССЦ 2 мл/кг+физиологический раствор 0,2 мл); 3 - ССЦ+фумарат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 4 - ССЦ+адипинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 5 - ССЦ+гемисукцинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 6 - ССи+никотинат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 7 - ССЦ+мексидол 25 мг/кг; 8 - ССи+ берлитион 25 мг/кг. л - достоверность различия определена к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитиона; & - к группе мексидола.

Минимальный балл по степени выраженности белковой дистрофии в печени подопытных животных отмечен в группе, получавшей адипинат 3-ГП, гиалиново-капельной - гемисукцинат 3-ГП, воспалительной инфильтрации -берлитион, некроза - гемисукцинат 3-ГП.

Таким образом, на данной модели наиболее оптимальное протективное действие на печень оказали фумарат, никотинат и адипинат 3-ГП в изучаемых дозах, что проявлялось в снижении уровня активности основного маркера цитолиза гепатоцитов - АЛТ, а также маркера холестаза - ЩФ в сыворотке крови до уровней достоверно не отличавшихся от таковых у интактных животных. Гепатопротективное действие указанных соединений подтверждалось данными гистологического исследования, свидетельствовавшего о сохранении нормального балочного строения печени, уменьшении выраженности дистрофии гепатоцитов и воспалительной инфильтрации стромы печени. Следует отметить, что активность процессов ПОЛ на данной модели эффективнее других соединений и препаратов сравнения снижали фумарат и адипинат 3-ГП.

Введение токсических доз аллилового спирта привело к гибели 50% под-

ашмоШ т I 1,(5-1 ¿"74 у - &

аШг.ггВШГ 184 Г 1,48 Го.ееВ •«» ЯШдоМ -Ш Г ■■•Ш- То.«! -а.

1111! 2.28 ВЩЩ Ш |0,5Ш'Л»& ■ 1.9бИГ=Ш 1 1,ЗЬ'Т'Г 0,981 ■»»! ШШглгЯШы-Ш .....Г 1.261

■М2.84*4ЯВГ -2,66 :: | 2,3й Г 2.50 В *

опытных белых крыс в течение первых 12 часов от начала эксперимента, что явилось проявлением общетоксического эффекта на организм животных. У выживших животных также присутствовали необратимые изменения, приводившие к летальному исходу части подопытных животных на более поздних сроках. Однако смертность в исследуемых группах существенно варьировала. В контрольной группе она составила 60%, на фоне введения никотината 3-ГП, мексидола и берлитиона - 30%. Тогда как на фоне введения фумарата 3-ГП наблюдалась 100% выживаемость, что достоверно отличалось от показателя выживаемости в группе контроля (р<0,05). Указанные данные свидетельствуют о наличии выраженного антитоксического действия у фумарата 3-ГП.

На фоне введения аллилового спирта у животных контрольной группы отмечалось достоверное по сравнению с данными показателями интактных крыс повышение активности аминотрансфераз: AJ1T - в 3,6 раза, ACT - в 1,8 раза, преобладание уровня активности AJIT над ACT в сыворотке крови характерно для поражений печени (табл. 4).

Т а б л и ц а 4.

Серии опытов АЛТ, мкмоль/л-ч ACT, мкмоль/л-ч ЩФ, нмоль/ л-с МДА сыворотки, ммоль/л Каталаза сыворотки, мккат/ммоль /л-с

Интактные 0,95±0,05 0,93±0,11 1225±111 6,23+0,17 2,4±0,08

Контроль 3,45±0,61л 1,65+0,13Л 2230±237л 7,9±0,23л 1,69±0,25л

Фумарат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 2,05±0,19*л 1,12+0,09* 1528±109*# 5,05±0,63*л#& 2,63+0,19*

Никотинат 3-ГП в дозе 50 мг/кг 1,53±0,13*л#& 1,3+0,15 1188±174* 6,08±0,62*л 3,03±0,3*

Мексидол в дозе 25 мг/кг 2,08±0,11л 0,95+0,07* 1365±189* 7,45±0,59л 2,7±0,31 *

Берлитион в дозе 25 мг/кг 2,33±0,15л 1,15+0,18 1170±83* 7,98±0,61 2,13+0,32

Влияние фумарата, никотината 3-гидроксиииридина, мексидола и берлитиона на показатели ACT, АЛТ, ЩФ, МДА и каталазы сыворотки крови белых крыс при остром аллиловом гепатите

Примечание: л - достоверность различия к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитиона; & - к группе мексидола.

Выявлено, что наиболее выраженное позитивное влияние на уровень ферментемии оказывали никотинат 3-ГП (50 мг/кг) и фумарат 3-ГП (25 мг/кг), достоверно снижавшие уровень активности АЛТ на 56% и на 41% соответственно по сравнению с контролем, в то время как на фоне введения препаратов сравнения мексидола и берлитиона отмечалось снижение на 40% и 33% соответственно. Причем уровень активности АЛТ в группе животных, получавших лечение никотинатом 3-ГП, был достоверно ниже по сравнению с данным показателем в группах, получавших берлитион, мексидол и фумарат 3-ГП. Достоверную регрессию активности АСТ до уровня достоверно не отличающегося от такового у интактных крыс вызывал фумарат 3-ГП (25 мг/кг) и мексидол (снижение на 32%> и 42% соответственно).

Выявлено, что на фоне введения аллилового спирта в контрольной группе активность ЩФ достоверно повышается на 82%. На фоне введения исследуемых соединений и препаратов сравнения отмечалось достоверное снижение активности ЩФ при терапии фумаратом 3-ГП - на 31%, никотинатом 3-ГП - на 46%, мексидолом - на 39%, берлитионом - на 47%, причем достоверных различий среди указанных групп не обнаружено.

Изучение состояния процессов пероксидации показало, что введение ал-лилового спирта сопровождалось достоверным повышением уровня МДА на 27% по сравнению с контролем, при достоверном снижении активности катапа-зы на 30%. В группе животных, получавших фумарат 3-ГП и никотинат 3-ГП, наблюдалось достоверное снижение уровня МДА на 36% и 23% соответственно, при повышении активности каталазы (р<0,05 по отношению к показателям контрольной группы) на 56% и 79% соответственно. На фоне терапии мексидолом активность каталазы была достоверно выше, чем в контроле на 60%.

При изучении гистологических препаратов печени подопытных животных было обнаружено, что введение аллилового спирта приводит к нарушению балочного строение печени с глубокой, вплоть до баллонной, дистрофией подавляющего числа гепатоцитов преимущественно в перипортальной области, зоны некроза гепатоцитов без лейкоцитарной инфильтрации. Сравнение результатов полуколичественного метода оценки степени активности процесса в печени подопытных животных, позволило установить, что на фоне терапии наблюдается достоверное снижение ИГА (рис. 4).

Рис.4.

Влияние фумарата, никотината 3-гидроксипиридина, мексидола и берлитиона иа степень выраженности морфологических изменений в печени белых крыс с острым аллиловым гепатитом

Примечание: 1 - Интактные; 2 - Контроль (аллиловый спирт 0,05 мл/кг+физиологический раствор 0,1 мл); 3 - аллиловый спирт+фумарат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 4 - аллиловый спирт+никотинат 3-гидроксипиридина 50 мг/кг; 5 - аллиловый спирт+мексидол 25 мг/кг; 6 -аллиловый спирт+берлитион 25 мг/кг.

л - достоверность различия определена к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитиона; & - к группе мексидола.

По степени активности процесса в печени подопытных крыс с острым ал-лиловым гепатитом исследуемые соединения можно расположить следующим образом в порядке убывания ИГА: мексидол (максимальное значение ИГА среди групп, получавших лечение) > фумарат 3-ГП > берлитион > никотинат 3-ГП (минимальное значение ИГА). Достоверные отличия были отмечены при сравнении групп между собой по ИГА, за исключением пары фумарата 3-ГП и бер-литиона, между которыми по данному показателю достоверного отличия обнаружено не было. Минимальные баллы по степени выраженности в печени подопытных животных белковой, гиалиново-капельной дистрофии, воспалительной инфильтрации и некроза отмечены в группе, получавшей никотинат 3-ГП.

Таким образом, на модели острого аллилового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата в дозе 25 мг/кг и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, сравнимого с действием мексидола и берли-тиона в дозе 25 мг/кг. Активность процессов ПОЛ на данной модели эффективнее препаратов сравнения снижали фумарат 3-ГП (25 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг).

Летальных исходов при моделировании хронического тетрахлорметано-вого гепатита к концу эксперимента в группах не зафиксировано. При исследовании физиологических параметров у подопытных крыс с хроническим гепатитом было обнаружено, что на фоне введения тетрахлорметана достоверное отличие по сравнению с соответствующими показателями интактных крыс в уровне активности АЛТ отмечалось лишь в группах, получавших терапию исследуемыми соединениями и препаратами сравнения, где активность АЛТ повышалась по отношению к значениям интактных животных в 1,5 раза на фоне введения фумарата 3-ГП, в 1,9 раза - на фоне введения адипииата 3-ГП ив 1,7 раза на фоне введения препаратов сравнения - мексидола и берлитиона.

В группах, получавших исследуемые соединения и препараты сравнения уровень активности ACT также был достоверно выше по сравнению с данным показателем у интактных животных: в 1,35 раза на фоне введения фумарата 3-ГП и берлитиона ив 1,28 раза на фоне введения адипината 3-ГП и мексидола, причем на фоне введения адипината 3-ГП уровень активности ACT был достоверно выше по отношению к данному показателю у контрольных животных (табл. 5). Уровень активности АЛТ в крови животных контрольной группы на фоне длительного введения тетрахлорметана достоверно не отличался от значений активности АЛТ в крови интактных животных, а уровень активности ACT был достоверно ниже данного показателя у интактных животных в 1,5 раза. Однако известно, что низкая активность АЛТ не всегда указывает на отсутствие поражения печени. В частности, ложнонизкая активность в присутствии повреждения печени возможна при формировании ЦП, блокаде токсинами внутриклеточного синтеза АЛТ (Маевская М.В., 2005). В таких случаях приоритетом обладают данные морфологического исследования печени (Давыдов В.Г. и др., 2007).

_Таблица 5.

Серии опытов АЛТ, мкмоль/л-ч АСТ, мкмоль/л-ч ЩФ, нмоль/л-с МДА сыворотки, ммоль/л Каталаза сыворотки, мккат/ ммоль/л-с Альбумины, г/л

Иптактные 1,30±0,20 1,15±0,07 1110±124 6,98±0,31 2,40+0,08 38,0+1,8

Контроль 1,79+0,17 0,76±0,06Л 1779±186л 9,41±0,77л 6,33+0,59л 34,2±0,5Л

Фумарат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 1,92±0,09л& 0,85±0,04л 2137+220л 6,35±0,99*л# 10,69+0,44*# 38,3±0,7*

Адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг 2,42±0,16*л 0,92±0,03*л 1945±78л 4,60±0,83*л 9,33+1,19* Зб,8±0,6*

Мексидол в дозе 25 мг/кг 2,28±0,Ю*Л 0,90±0,04л 1748±169л 4,43±0,52*л 10,62+0,58*#л 38,1+0,6*

Берлитион в дозе 25 мг/кг 2,20±0,11л 0,85±0,04л 2047±219л 3,95±0,39*л 7,35+0,68л& 37,3±0,8*

Влияние фумарата и адипината 3-гидроксипиридина, мсксидола и берлитиона на показатели АЛТ, АСТ, ЩФ, МДА, каталазы сыворотки крови и уровень альбуминов плазмы крови белых крыс при хроническом тетрахлорметановом гепатите

Примечание: л - достоверность различия к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитиона; & - к группе мексидола.

Таким образом, как затем показало морфологическое исследование препаратов печени подопытных животных, полученные данные об уровне фермен-темии не отражали степень поражения органа. На препаратах печени животных контрольной группы были обнаружены выраженные структурные изменения: нарушение балочного строения печени, очаговая лимфогистиоцитарная инфильтрация паренхимы печени, а также инфильтрация портальных трактов, выраженная белковая и гиалиновая крупно- и среднекапельная дистрофия подавляющего числа гепатоцитов, появление тонких фиброзных септ в области лим-фогистиоцитарной инфильтрации на месте некрозов гепатоцитов.

В то время как на фоне введения исследуемых соединений - фумарата и адипината 3-ГП, а также мексидола в дозе 25 мг/кг отмечались позитивные изменения по сравнению с контролем: сохранялось балочное строение печени, инфильтрация лейкоцитами была незначительна, дистрофические явления проявлялись умеренно выраженной зернистой дистрофией гепатоцитов, некротические явления ограничивались коагуляционным некрозом единичных гепатоцитов. Результаты полуколичественного метода оценки степени активности процесса в печени подопытных животных с хроническим тетрахлорметановым гепатитом позволяют расположить исследуемые соединения следующим образом в порядке убывания ИГА: берлитион (максимальное значение ИГА среди групп, получавших лечение) > мексидол > адипинат 3-ГП > фумарат 3-ГП (минимальное значение ИГА). Причем были обнаружены достоверные отличия как по отношению к контролю, так и при сравнении между группами по данному показателю (рис. 5). Минимальный балл по степени выраженности белковой дистрофии в печени подопытных животных отмечен в группе, получавшей фумарат 3-ГП, гиалиново-капельной - фумарат 3-ГП, воспалительной инфильтрации - адипинат 3-ГП и фумарат 3-ГП, некроза - адипинат 3-ГП.

Р и с. 5.

■ белковая дистрофия □ гиалиново-капельная дистрофия

0 воспалительная инфильтрация П некроз

Влияние фумарата и адипината 3-гидроксипириднна, мекеидола и берлитнона на степень морфологических изменений в печени белых крыс при хроническом тетрахлорметановом гепатите

Примечание: 1 - Интактные: 2- Контроль (ССЦ 1 мл/кг+физиологический раствор 0,1 мл); 3 - ССЦ+фумарат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 4 - ССЦ+адипинат 3-гидроксипиридина 25 мг/кг; 5 - ССЦ+мексидол 25 мг/кг; 6 - ССи+берлитион 25 мг/кг.

л - достоверность различия определена к данным интактных животных при р<0,05; * - к значениям контрольной серии опытов; # - к группе берлитнона; & - к группе мекеидола.

Более глубокая степень поражения печени по данным морфологического исследования на фоне введения второго препарата сравнения - берлитнона (крупнокапельная дистрофия большинства гепатоцитов, баллонная дистрофия гепатоцитов, с появлением обширных зон колликвационного некроза) при отсутствии достоверных различий в данных ферментемии по отношению к другим группам, получавшим лечение, также свидетельствует о невозможности однозначно трактовать данные биохимического исследования сыворотки крови крыс, длительно получавших тетрахлорметан.

Повышение активности АЛТ и ЩФ в контрольной группе и на фоне коррекции является признаком цитолиза гепатоцитов и холестаза в печени, повышение уровня белка вероятно связано с развитием воспалительного синдрома (в пользу чего также свидетельствует появление диспротеинемии с относительным снижением уровня альбуминов сыворотки крови в контрольной группе).

Изучение состояния процессов пероксидации показало, что длительное введение тетрахлорметана сопровождалось достоверным по отношению к показателям интактных животных повышением уровня МДА в 1,35 раза при достоверном повышении активности каталазы в 2,64 раза. На фоне введения изучаемых соединений и препаратов сравнения наблюдалось достоверное снижение уровня МДА по сравнению с данным показателем у контрольных животных на 33%, 45%, 51% и 58% на фоне введения фумарата, адипината 3-ГП, мекеидола и берлитнона соответственно. При этом на фоне введения препаратов из группы 3-ГП отмечалось достоверное повышение активности каталазы по отношению к данному показателю контрольной группы: на 69% на фоне введения фу-

марата 3-ГП и мексидола, 47% на фоне введения адипината 3-ГП. Достоверные отличия между группами, получавшими терапию, были обнаружены: по уровню МДА - между группами фумарата 3-ГП и берлитиона; по уровню активности каталазы - между группами фумарата 3-ГП и берлитиона, а также берлитиона и мексидола.

Уровень альбуминов в крови подопытных животных с хроническим тет-рахлорметановым гепатитом, получавших лечение, был достоверно в среднем на 10% выше по сравнению с показателями уровня альбуминов в группе контроля, что связано с сохранением белоксинтетической функции печени.

Таким образом, на модели хронического тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия (по результатам морфологического исследования препаратов печени) у фумарата и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг). Активность процессов ПОЛ на данной модели эффективнее других препаратов снижал фумарат 3-ГП (25 мг/кг).

ВЫВОДЫ

1. Выявлено антитоксическое действие у фумарата 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и гемисукцината 3-ГП в дозе 50 мг/кг на модели острой интоксикации тетрахлорметаном и у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг - при острой интоксикации аллиловым спиртом, проявлявшееся в снижении летальности подопытных животных.

2. В результате скрининга на белых мышах на модели острого тетрахлорметанового гепатита установлено наличие способности снижать в сыворотке крови уровень активности маркера цитолиза гепатоцитов - АЛТ у следующих производных 3-ГП: фумарата 3-ГП (50 мг/кг), адипината 3-ГП (50 мг/кг), гемисукцината 3-ГП (25 и 50 мг/кг) и никотината 3-ГП (50 мг/кг), сравнимого с действием препарата сравнения мексидола (25 мг/кг), и более значимого по сравнению с действием берлитиона (75 мг/кг).

3. На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата, адипината, гемисукцината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг), и превосходящего гепатопротекторное действие берлитиона (25 мг/кг).

4. На модели острого аллилового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата в дозе 25 мг/кг и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг) и берлитиона (25 мг/кг).

5. На модели хронического тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг) и превосходящего эффект берлитиона (25 мг/кг).

6. Эффективнее других исследованных производных 3-ГП степень выраженности процессов перекисного окисления липидов (по уровню МДА) в сыво-

ротке крови белых крыс с острым тетрахлорметановым гепатитом снижали фу-марат и адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг, при хроническом тетрахлорметановом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг), остром аллиловом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Учитывая полученные результаты о наличии у фумарата, адипината, ни-котината и гемисукцината 3-ГП выраженной способности подавлять развитие цитолитического и холестатического синдромов, а также позитивно влиять на морфологическую структуру печени, целесообразным является дальнейшее изучение их гепатопротекторной активности при интоксикации другими гепа-тотоксинами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Инчина В.И. Исследование гепатопротекторной активности новых производных 3-оксипиридина / В.И.Инчина, Е.В. Данилина // Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Я.В. Костина «Общество, здоровье, лекарство». - Саранск: Тип. «Крас. Окт.», 2005. -С. 55-57.

2. Инчина В.И. Гепатопротекторная активность фумарата и липоата 2-этил-6-метил-3-оксипиридина / В.И.Инчина, Е.В. Данилина, A.B. Семенов, Л.Д. Смирнов // Материалы XI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте», Саранск 2006 г. -Вып. 4. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2006. - С. 13-15.

3. Данилина Е.В. Синтез и исследование фармакологической активности нового экспериментального препарата - фумарата 3-оксипиридина / Е.В. Данилина, В.И. Инчина, A.B. Семенов // Вестник РГМУ. - 2006. - Т.49 - № 2. - С. 359.

4. Данилина Е.В. Гистологические аспекты гепатопротекторной активности новых производных из группы 3-оксипиридина / Е.В. Данилина, В.И. Инчина // Материалы 78-й конференции студенческого научного общества СПбГМА им. И.И.Мечникова «Человек и его здоровье», СПб 2006 г. - СПб.: Изд-во СПбГМА им. И.И.Мечникова, 2006. - С. 116-118.

5. Чаиркина Н.В. Возможности коррекции гибридными антиоксидантами морфофункциональных изменений при токсическом повреждении печени / Н.В. Чаиркина, В.И. Инчина, Е.В. Семенова, A.B. Семенов, И.Н. Исаак // Морфологические ведомости. - 2007. - № 1- 2. - С. 232-236.

6. Семенова Е.В. Изучение гепатопротекторной активности производных аминобензотиазола и гидроксипиридина при интоксикации тетрахлорметаном в эксперименте / Е.В. Семенова, В.И. Инчина, A.B. Семенов, Л.Д. Смирнов, Ю.В. Кузнецов // Материалы выездного пленума Научного общества гастроэнтерологов России, Саранск 12-13 июля 2007 г. - М.: Анахарсис, 2007. - С. 23-24.

7. Семенова Е.В. Изучение гепатопротекторной активности этилметилгид-

роксипиридина фумарата и липоата при экспериментальном токсическом гепатите / Е.В. Семенова, В.И. Инчина // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2007. - № 6. - С. 122-125.

8. Семенова Е.В. Изучение антигипоксической активности новых производных 3-гидроксипиридина / Е.В. Семенова, В.И. Инчина, A.B. Семенов // Журнал российской ассоциации по спортивной медицине и реабилитации больных и инвалидов. - 2007. - № 2. - Прил. 22. - С. 52.

9. Чаиркин И.Н. Сравнительный морфофункциональный анализ гепатопро-текторной активности а-липоевой кислоты и этилметилгидроксипиридина сук-цината при остром токсическом гепатите / И.Н. Чаиркин, В.И. Инчина, Е.В. Семенова, A.B. Семенов, Н.В. Чаиркина // Астраханский медицинский журнал. -2007. - №2. - С. 202-203.

10. Семенова Е.В. Оценка влияния производных 3-гидроксипиридина на состояние процессов перекисного окисления липидов при экспериментальном тетрахлорметановом циррозе печени у белых крыс / Е.В. Семенова, A.B. Семенов // Труды XXX Итоговой конференции общества молодых ученых МГМСУ, Москва 24-28 марта 2008 г. - М. МГМСУ, 2008. - С. 299-300.

11. Худойкина Т.В. Сравнительная оценка антиоксидантной активности ам-биола и производных 3-гидроксипидина при циррозе печени в эксперименте / Т.В. Худойкина, Е.В. Семенова, В.И. Инчина, Э.В. Романова // Материалы 81-й конференции студенческого научного общества СПбГМА им. И.И.Мечникова «Человек и его здоровье», СПб 16 апреля 2008 г. - СПб.: Изд-во СПбГМА им. И.И.Мечникова, 2008. - С. 293-294.

12. Худойкина Т.В. Оценка влияния амбиола на состояние процессов перекисного окисления липидов при экспериментальном тетрахлорметановом циррозе печени у белых крыс / Т.В. Худойкина, В.И. Инчина, Э.В. Романова, Е.В. Семенова, A.B. Семенов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. - Т. XVIII. - № 1. - С. 87.

13. Семенова Е.В. Влияние производных 3-гидроксипиридина на печень при острой интоксикации аллиловым спиртом / Е.В. Семенова, В.И. Инчина, A.B. Семенов, Т.В. Уланова, Ю.Н. Бегаева // Труды II межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы медицинской науки и образования», Пенза 2009 г. - Пенза: Информационно-издательский центр ПензГУ, 2009. - С. 225226.

14. Семенова Е.В. Влияние гибридных антиоксидантов на морфофункцио-нальные изменения при остром тетрахлорметановом гепатите в эксперименте / Е.В. Семенова, Т.В. Уланова, В.И. Инчина, A.A. Усанова, A.B. Семенов, A.A. Рубцов И Актуальные вопросы медицинской науки: сборник научных работ студентов и молодых ученых всероссийской конференции с международным участием посвященной 65-летию ЯГМА, Ярославль 2009 г. - Ярославль: Изд-во ЯГМА, 2009.-С. 121-122.

15. Инчина В.И. Влияние производных 3-гидроксипиридина на уровень фер-ментемии при остром тетрахлорметановом гепатите у крыс / В.И. Инчина, Е.В. Семенова, A.B. Семенов, Л.Д. Смирнов И Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2009. - № 2. - С. 11.

16. Инчина В.И. Изучение гепатопротекторной активности производных 3-гидроксипиридина при хроническом токсическом гепатите с переходом в цирроз / В.И. Инчина, А.А.Усанова, Е.В. Семенова, A.B. Семенов, Л.Д. Смирнов, Т.В. Уланова, A.A. Рубцов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - Т. XIX. - № 1. - С. 11.

17. Семенова Е.В. Возможности коррекции цитолитического синдрома новыми производными 3-гидроксипиридина при остром аллиловом гепатите / Е.В. Семенова, A.A. Усанова, В.И.Инчина, А.В.Семенов, Т.В. Уланова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - Т. XIX. -№ 1.-С. 109.

18. Усанова A.A. Влияние производных 3-гидроксипиридина на состояние процессов перекисного окисления липидов при экспериментальном остром тет-рахлорметановом гепатите / A.A. Усанова, Е.В. Семенова, В.И. Инчина, Т.В. Уланова, A.B. Семенов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - Т. XIX.-№ 1. - С. 114.

19. Семенов A.B. Синтез и изучение гепатопротекторной активности нового производного пиридинола-3 под лабораторным шифром ГП-5 / A.B. Семенов, Е.В. Семенова, В.И. Инчина, Т.В. Уланова, Г.Ф. Вдовина // Материалы XXXVII научной конференции «Огаревские чтения»: в 3 ч. Ч. 2: Естественные науки. -Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2009. - С. 238-239.

ПАТЕНТ РФ

По одному из изучаемых соединений - фумарату 3-гидроксипиридина получено патентное свидетельство RU2365582 «Соль 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой, обладающая метаболической и кар-диопротекторной активностью, и способ ее получения», авторы: Семенов A.B., Инчина В.И., Семенова Е.В.

Список сокращений

3-ГП - 3-гидроксипиридин

АЛТ - аланинаминотрансфераза

ACT - аспартатаминотрансфераза

ИГА - индекс гистологической активности

ИК - инфракрасная спектроскопия

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ССЦ - тетрахлорметан

ЩФ - щелочная фосфатаза

ЯМР - ядерно-магнитный резонанс

LD - летальная доза

Подписано в печать 21.10.09. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1421. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Актуальность исследования. Глобальное изменение экологии, увеличение потребления лекарственных средств и химизация пищевой промышленности приводит к росту ксенобиотической нагрузки на печень, что способстг вует увеличению распространенности гепатопатий (Григорьев П.Я., 2002). По-прежнему остро стоит проблема высокой степени алкоголизации населения нашей страны и связанная с ней высокая частота алкогольной болезни печени (Stickel F. et al, 2003; Буеверов A.O. и др., 2005; Day С., 2006; Мухин H.A. и др., 2006; Хазанов А.И., 2006). Все чаще встречаются гепатопатии на фоне эндогенной интоксикации при общесоматической и хирургической патологии. Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, в мире насчитывается более 2 миллиардов человек, страдающих заболеваниями печени (Дроговоз С.М., 2008).

Возможности этиотропной терапии различной патологии печени весьма ограничены. Непосредственно на причину заболевания воздействуют противовирусные препараты, ставшие новой ступенью в лечении вирусных гепатитов (Лапшин A.B. и др., 2008). Однако полный курс их оказался недоступен большей части инфицированных ввиду своей дороговизны и имел широкий спектр противопоказаний и побочных реакций (Блюм Х.Е., 2005; Маев-ская М.В., 2005; Ведерникова A.B. и др., 2007). С другой стороны, было показано, что даже избавление больного от вируса не означает полного излечения: остается фиброз, дистрофия клеток (Okanoueetal Т., 1999). То же относится и к заболеваниям печени токсического генеза, в том числе к лекарственным поражениям печени и алкогольной болезни печени. Поэтому роль вспомогательной патогенетической терапии гепатитов различной этиологии, в том числе вирусных, остается по-прежнему весьма значительной (Лобутева Л.А. и др., 2009).

В настоящее время существует большое число гепатопротекторных средств, используемых для коррекции функциональных и структурных изменений печени, независимо от их причинного фактора. Однако, существующие на настоящий день гепатопротекторные средства не имеют четко очер.-ченных механизмов действия и представлены, в основном, зарубежнымй препаратами растительного происхождения, для значительного числа гепа-топротекторов существенным побочным эффектом является усугубление хо-лестаза, что ограничивает их применение на практике (Дроговоз С.М. и др.,

1998). Эффект многих из них при острой и хронической патологии печени » недостаточен и не подтверждается при независимых сравнительных исследованиях, в то время как крупных рандомизированных исследований для подавляющего большинства гепатопротекторов не проводилось (Верма С., Зу-лувас П., 2008).

Универсальным звеном патогенеза клеточной патологии в настоящее время считается активация перекисного окисления липидов вне - и внутриклеточных мембран, причем данный процесс может быть первичным, и в этом случае генез его связан с агрессией свободных радикалов, либо вторичным, при этом в роли этиологического фактора будут выступать прямые ге-патотоксины, вирусы, метаболические нарушения, ишемия и т. д. (Britton R.S., Bacon B.R., 1994; Дегтярёва И.И. и др., 2000; Муфазалова H.A. и др., 2006). Большинство применяемых в настоящее время истинных гепатопро-текторных средств имеют в своем механизме действия антиоксидантный и мембранопротекторный компонент, причем именно на него исследователи делают акцент, объясняя активность многих синтетических гепатопротекторов, эссенциальных фосфолипидов, препаратов, содержащих флавоноиды растений (Palasciano G., 1994; Белобородова Э.И. и др., 2000; Буеверов А.О., 2001; Gebhardt R., 2002; Дегтярева И.И. и др., 2002). Поэтому способность влиять на процессы ПОЛ мембран гепатоцитов является важным условием эффективности новых соединений с потенциальной гепатопротекторной активностью (Буркова В.Н., 1998).

В литературе последних лет одним из наиболее перспективных и практически значимых направлений фармакотерапии указывается использование гибридных антиоксидантов - соединений, содержащих в своей структуре части, обладающие антиоксидантной активностью и фрагменты молекул, выполняющие другие специфические функции, что способствует повышению эффективности и обеспечивает более целенаправленное действие на определенные мишени (Бурлакова Е.Б., 2006; Денисов Е.Т., 2006; Сторожок Н.М., 2006). Препараты из группы производных 3-гидроксипиридина (3-ГП) отвечают данным требованиям (Смирнов Л.Д., 2006). Проведенные ранее исследования мексидола (2-этил-6-метил-3-гидроксипиридин сукцината) на моделях интоксикации тетрахлорметаном, парацетамолом, туберкулостати-ками свидетельствуют о наличии у него гепатопротекторных свойств (Смирнов Л.Д., 2006). Поэтому поиск новых высокоэффективных в отношении ге-патопротекции соединений 3-гидроксипиридинового ряда путем направленного синтеза и скрининга среди уже существующих опытных веществ является актуальной задачей.

В данной работе были исследованы эффекты гибридных антиоксидантов на основе производных 3-ГП, имеющих в своей структуре общий катион - 3-ГП (обеспечивающий высокую антиоксидантную активность) и различные анионные части. Отметим, что направление синтеза производных было обусловлено успехами замены анионного компонента гидрохлорида на сук-цинат в молекуле эмоксипина с получением нового более эффективного лекарственного средства — мексидола (мексикор, мексидант). В качестве анионных компонентов для исследуемых соединений были выбраны кислоты с самостоятельной метаболической активностью - энергообеспечивающей либо регуляторной. Препаратами сравнения выступали мексидол (сукцинат 3-ГП) и берлитион (а-липоевая кислота), лекарственные средства с доказанной эффективностью при заболеваниях печени, используемые в клинике. Субстанция мексидола, а также исследуемые соединения адипинат, гемисукци-нат и липоат 3-ГП были синтезированы в ИБХФ им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва, д.х.н. Смирновым Л.Д. Фумарат и никотинат 3-ГП синтезированы на кафедре органической химии Мордовского ГУ, Саранск, к.х.н. Семеновым

A.B. Их структура была подтверждена данными ЯМР 1Н, 13С и ИК спектроскопии.

Цель исследования. Разработка новых гепатопротекторов на основе производных 3-ГП.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить острую токсичность исследуемых соединений.

2. Оценить влияние исследуемых соединений на морфофункциональные характеристики печени (уровень активности аланиновой и аспарагиновой тран-саминазы (AJIT и ACT), щелочной фосфатазы (ЩФ), общего белка и его фракций, состояние процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) по уровню малонового диальдегида (МДА) и активности каталазы, а также морфологическую структуру печени) при остром тетрахлорметановом гепатите у мышей и крыс и остром аллиловом гепатите у крыс.

3. Определить возможность коррекции морфофункциональных изменений печени (уровень активности AJIT, ACT, ЩФ, общего белка и его фракций, состояние ПОЛ по уровню МДА и активности каталазы, а также морфологическую структуру печени) при хроническом тетрахлорметановом гепатите у крыс.

Работа выполнялась в соответствии с научной тематикой кафедры фармакологии Мордовского государственного университета «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипоксических, токсических и радиационных воздействиях».

Номер государственной регистрации - 01200004103. Научная новизна работы.

Изучена острая токсичность исследуемых производных 3-ГП, значения их LD50 при внутрибрюшинном введении составили от 400 до 1650 мг/кг.

Исследована гепатопротекторная активность фумарата, никотината, гемисукцината, липоата и адипината 3-ГП.

У фумарата 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и гемисукцината 3-ГП в дозе 50 мг/кг выявлено антитоксическое действие на модели острой интоксикации тетрахлорметаном, проявлявшееся в снижении летальности подопытных животных. При острой интоксикации аллиловым спиртом, антитоксическое действие обнаружено у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг, снижавшего летальность животных до 0%.

На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых мышах и крысах установлено наличие гепатопротекторной активности у фумарата, адипината, гемисукцината и никотината 3-ГП, при остром аллиловом гепатите—у фумарата и никотината 3-ГП в изученных дозах, проявлявшейся в снижении степени выраженности цитолитического и холестатического синдромов, а также улучшении морфологической структуры печени, что выражалось в снижении степени дистрофии гепатоцитов, уменьшении воспалительной инфильтрации и некрозов гепатоцитов.

На модели хронического тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, выражавшегося в сохранении белоксинтетической функции печени, улучшении морфологической структуры печени: снижении степени дистрофии гепатоцитов, уменьшении воспалительной инфильтрации и некрозов гепатоцитов.

Эффективнее других исследованных производных 3-ГП степень выраженности процессов ПОЛ (по уровню МДА) в сыворотке крови белых крыс с острым тетрахлорметановым гепатитом снижали фумарат и адипинат 3-ГП (в дозе 25 мг/кг), при хроническом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг), остром аллиловом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг).

Практическая ценность работы

Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу и учебный процесс кафедры фармакологии ГОУВПО «МГУ им. Н.П. Огарева» и служат обоснованием для доклинического исследования указанных соединений.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Фумарат 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг и ге-мисукцинат 3-ГП в дозе 50 мг/кг оказывают антитоксическое действие на модели острой интоксикации тетрахлорметаном, что проявляется в снижении летальности подопытных животных. При острой интоксикации аллиловым спиртом антитоксическое действие обнаружено у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг.

2. На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых мышах и крысах гепатопротекторными свойствами обладают фумарат, адипинат, ге-мисукцинат и никотинат 3-ГП, при остром аллиловом гепатите — фумарат и никотинат 3-ГП в изученных дозах.

3. На модели хронического тетрахлорметанового гепатита протективное действие на печень оказывают фумарат и адипинат 3-ГП в дозе 25 мг/кг.

Апробация работы.

Результаты работы и основные положения, представленные в диссертации, были доложены и обсуждены на XIII, XIV, XVI Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006, 2007, 2009), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Я.В. Костина «Общество, здоровье, лекарство» (Саранск, 2005), XI научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов МГУ им. Н.П. Огарева (Саранск 2006), XXXIV, XXXV, XXXVI, XXXVII Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева) (Саранск 2005 - 2008), I Международной (X Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2006), XXVIII и XXX конференции общества молодых ученых МГМСУ (Москва, 2006, 2008), XIII Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2008), 81-й конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 19 работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов кандидатских диссертаций, получен 1 патент РФ (RU2365582).

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 175 стр. машинописного текста, документирована 19 таблицами и иллюстрирована 42 рисунками. Работа состоит из введения, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя, включающего 355 источников, в том числе 227 отечественных и 128 иностранных.

ВЫВОДЫ

1. Выявлено антитоксическое действие у фумарата 3-ГП в дозе 25 и 50 мг/кг, адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг и гемисукцината 3-ГП в дозе 50 мг/кг на модели острой интоксикации тетрахлорметаном и у фумарата 3-ГП в дозе 25 мг/кг — при острой интоксикации аллиловым спиртом, проявлявшееся в снижении летальности подопытных животных.

2. В результате скрининга на белых мышах на модели острого тетра-хлорметанового гепатита установлено наличие способности снижать в сыворотке крови уровень активности маркера цитолиза гепатоцитов — АЛТ у следующих производных 3-ГП: фумарата 3-ГП (50 мг/кг), адипината 3-ГП (50 мг/кг), гемисукцината 3-ГП (25 и 50 мг/кг) и никотината 3-ГП (50 мг/кг), сравнимого с действием препарата сравнения мексидола (25 мг/кг), и более значимого по сравнению с действием берлитиона (75 мг/кг).

3. На модели острого тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата, адипината, гемисукцината 3-ГП в дозах 25 мг/кг и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг), и превосходящего гепатопро-текторное действие берлитиона (25 мг/кг).

4. На модели острого аллилового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата в дозе 25 мг/кг и никотината 3-ГП в дозе 50 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг) и берлитиона (25 мг/кг).

5. На модели хронического тетрахлорметанового гепатита на белых крысах установлено наличие гепатопротекторного действия у фумарата и адипината 3-ГП в дозе 25 мг/кг, сравнимого с действием мексидола (25 мг/кг) и превосходящего эффект берлитиона (25 мг/кг).

6. Эффективнее других исследованных производных 3-ГП степень выраженности процессов перекисного окисления липидов (по уровню МДА) в сыворотке крови белых крыс с острым тетрахлорметановым гепатитом снижали фумарат и адипинат 3-ГП в дозах 25 мг/кг, при хроническом тетра-хлорметановом гепатите — фумарат (25 мг/кг) и никотинат 3-ГП (50 мг/кг), остром аллиловом гепатите - фумарат 3-ГП (25 мг/кг).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Учитывая полученные результаты о наличии у фумарата, адипината, никотината и гемисукцината 3-гидроксипиридина выраженной способности подавлять развитие цитолитического и холестатического синдромов, а также позитивно влиять на морфологическую структуру печени, целесообразным является дальнейшее изучение их гепатопротекторной активности при интоксикации другими гепатотоксинами.