Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение гепатопротекторной активности мексидола при острых и хронических повреждениях печени

" На правах рукописи

с

КЕЛЕЙНИКОВА ТАМАРА ТРОФИМОВНА

ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ МЕКСИДОЛА ПРИ ОСТРЫХ И ХРОНИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ ПЕЧЕНИ

14.00.25. - ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САРАНСК - 1998

Работа выполнена в Мордовском государственном университете

им. Н.П. Огарева

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.И. Инчина

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор А.Л. Ураков

кандидат медицинских наук, доцент Л.А. Белова

Ведущее учреждение: Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится "_"_1998 г. в "_" часов на

заседании диссертационного совета К 063. 72. 11. при Мордовском государственном университете имени Н.П. Огарева (430000, г. Саранск, ул. Большевитская, д. 68)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева.

Автореферат разослан "_"_ 1998 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент А. Балыкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Проблема фармакотерапии острых и хронических заболеваний печени является актуальной для современной медицины в связи с увеличением частоты ¡аболеваний, серьезным прогнозом при гепатитах и циррозах, отсутствием вы-:окоэффективных лекарственных средств (Логинов A.C., Аруин Л.И., 1985; Чпросина З.Г., Серов В.В: 1993; Ивашкин В.Т. 1993)

Печень является центральным органом регуляции гомеостаза и био-рансформации лекарственных веществ. В этой связи изменение ее состояния :ущественно влияет на целый ряд метаболических показателей и качество фоводимой терапии (Блюгер А.Ф. с соавт., 1990; Ивашкин В.Т. с соавт., 1992; 1одымова С.Д. 1993; Васильев А.П., с соавт.,1993).

Экологический дисбаланс окружающей среды негативно влияет' на ос-ювные регуляторные системы гомеостаза, центральной из которой является [ечень. Изменения, возникающие в основном регуляторе метаболических провесов, является базисом для формирования различных заболеваний, в том чис-;е атеросклероза, нарушений иммунитета и др. (Левин Ю.М., 1998).

Однако, несмотря на значимость изучаемой проблемы, в настоящее время тсутствуют высокоэффективные препараты с отчетливым гепатопротекторным ффектом, с чем и связаны неудачи в лечении острых и хронических заболева-ий печени. Имеющиеся в арсенале врачей средства, применяемые для лечения иффузных заболеваний печени, не имеют четко очерченных механизмов дей-твия и представлены, в основном, препаратами растительного происхождения Ивашкин В.Т., 1993; Комаров Ф.И., 1995). Между тем печень из всех внутрен-их органов отличается наиболее высокой чувствительностью к продуктам пе-екисного окисления липидов (ПОЛ) (Фролов В.И., Новочадов В.В., 1996; Ка-имов Х.Я. с соавт., 1996).

Установлена роль активных форм кислорода в развитии повреждения ге-атоцитов при остром вирусном гепатите и других хронических заболеваниях ечени (Матюшин Б.Н., Логинов A.C., 1996). Учитывая высокую уязвимость еченочных клеток к продуктам ПОЛ, можно предположить возможность при-

менения антиоксидантов при различных повреждениях печени, где активация процессов липопероксидации является ведущим патогенетическим механизмом.

Работа является разделом комплексной темы кафедры фармакологии Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева "Влияние гиподинамии, гипоксемии и профессиональных вредностей на развитие и течение патологии внутренних органов". Номер государственной регистрации 01870009146.

Цели и задачи исследования

Основной целью настоящего исследования явилось изучение гепатопро-текторных свойств производного 3-оксипиридина мексидола при остром и хроническом повреждении печени.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение влияния мексидола и препарата сравнения цитохрома С ш некоторые метаболические показатели и морфофункциональное состояние печени при 30-суточном иммобилизационном стрессе.

- 2. Исследование влияния мексидола на динамику основных метаболических синдромов и морфологической изменений печени при острой интоксикации четыреххлористым углеродом в сравнении с гепатопротектором эссенциа-ле.

3. Проведение сравнительной оценки влияния мексидола, эссенциале £ аевита на динамику основных клинических и биохимических показателей з больных с хроническими диффузными заболеваниями печени на фоне стандартной комплексной терапии.

Научная новизна работы

В результате исследования впервые получены следующие новьк

данные:

Исследована гепатопротекторная активность мексидола на модели дли тельного иммобилизационного стресса. Установлено, что мексидол по гепато протекторному эффекту превосходит препарат сравнения цитохром С.

Выявлено, что мексидол проявляет гепатопротекторную активность н: модели острого повреждения печени четыреххлористым углеродом. Его защит ный эффект на данной модели превосходит препарат сравнения эссенциале.

Установлено, что мексидол проявляет антиоксидантное действие при остром токсическом и стрессорном повреждении печени, превосходя препараты сравнения цитохром С и эссенциале.

Показано, что одним из факторов реализации гепатопротекгорного эффекта мексидола является повышение сорбционных свойств альбумина.

Мексидол превосходит по гепатопротекторной активности препараты ;равнения эссенциале и аевит у больных с хроническим гепатитом невирусной этиологии.

Практическая значимость работы

Полученные данные являются экспериментально-клиническим обоснованием применения мексидола в комплексной терапии больных с диффузными ¡аболеваниями печени, в этиологии которых ведущую роль играет токсический фактор.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Мексидол оказывает гепатопротекторное действие в условиях модели-ювания длительного стресса при ограничении подвижности. Эффект препарата гроявляется в ограничении степени повреждения гепатоцитов, предотвращении швития цитолитического, мезенхимально-воспалительного синдромов, роста удержания в плазме крови и эритроцитах малонового диальдегида (МДА), а -акже в сохранении альбуминсинтетической и холестеринсинтетической функ-дай печени.

2. В условиях острой интоксикации четыреххлористым углеродом (СС14) ¡ведение мексидола, в отличие от препарата сравнения эссенциале, не нарушает ючевинсинтетическую способность гепатоцитов, ограничивает негативную ди-[амику белкового спектра сыворотки крови, ограничивает степень роста АЛТ и ровня МДА в ткани печени и эритроцитах.

3. Введение мексидола в схему лечения больных с хроническим гепати-ом позволяет потенцировать эффект стандартной терапии, что проявляется в окращении времени достижения начала редукции клинической картины и бо-ее быстрой регрессии активности АЛТ.

Апробация работы

Результаты работы и основные положения диссертации были доложень на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва 1998), Международной конференции, посвященной актуальным вопросам кли нической фармакологии (Москва, 1998), VI Международном конгресс! "Реабилитация в медицине и иммунореабилитация" (Сочи, 1998), 3 конферен ции молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н.П Огарева (1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, глав! ' "Материалы и методы", 3-х глав собственных исследований, обсуждения полу ченных результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 15 страницах и иллюстрирована 24 таблицами и 24 рисунками. Библиографиче ский список включает источников 212 источников (171 отечественный и 4 иностранный).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В соответствии с поставленными целями и задачами изучено гепатопрс текгорное действие мексидола (3-окси-6-метил-2-этилпиридин сукцинат; ВНЦБАВ, Ст. Купавна) на модели хронического стресса и острой интоксикаци четыреххлористым углеродом на 69 кроликах породы "шиншилла".

В клинике гепатопротекторное действие мексидола изучено у 130 бол! ных с хроническим гепатитом, в основном, алкогольного и алиментарнс токсического генеза.

Экспериментальная часть включала в себя два блока исследования, i первых 4-х сериях (1-4) изучено гепатопротекторное действие мексидола на мс дели хронического стресса, который моделировали иммобилизацией животны в течение 30 суток по методу В.В. Тявокина (1975), помещая кроликов в клетк малого объема из проволочного каркаса и деревянного основания, резко огр; ничивающих перемещение по клетке, но не затрудняющих доступа к воде

пище. Воздействие иммобилизационного стресса изучали на 15 животных. Контролем к 1-й серии опытов явились 7 кроликов, содержавшихся в обычных условиях вивария (группа синхронизированного эксперимента). Обе группы животных находились на обычном пищевом рационе, включающем зерно, сено и корнеплоды. Во третьей серии опытов в качестве препарата сравнения изучено влияние цитохрома С (0,125 мг/кг в/в 1 раз в сутки) на морфофункциональное гостояние печени при длительной (30 суток) иммобилизации (9 кроликов). В 4 серии эксперимента исследовали влияние мексидола (1 мг/кг в\в 1 раз в сутки з течение 30 суток ограничения подвижности) - 9 кроликов. До ограничения подвижности и на 30 сутки опыта проводили биохимические исследования сы-зоротки и плазмы крови забираемой из краевой вены уха кролика.

Следующий блок экспериментальных исследований их 3-х серий (5, б и 7) 5ыл посвящен исследованию гепатопротекгорного действия мексидола на мотели острого токсического гепатита, воспроизводимого введением четыреххло-эистого углерода. В качестве препаратов сравнения был выбран гепатопротек-гор эссенциале (НаКегтап, Кельн, ФРГ), содержащий диглицериновые эфиры солинофосфорной кислоты в комбинации с ненасыщенными жирными кислотами, пиридоксина гидрохлорид 2,5 мг, цианкобаломин 10 мкг, никотинамид 15 мг и натри й^-пантотена 1,5 мг.

В 5-й серии на 10 кроликах моделировали острое токсическое поврежде-ше печени четыреххлористым углеродом, который вводили п/к в дозе 4 мл/кг >0% масляного раствора однократно.

В б-й серии (7 кроликов) изучено гепатопротекторное действие препарата ¡равнения эссенциале при в/р введении в дозе 0,5 мл на 1 кг массы тела еже-шевно 1 раз в сутки 3 раза до инъекции ССЦ и 3 раза после инъекции ССЦ.

В 7-й серии (7 кроликов) изучено гепатопротекторное действие мексидола I дозе 50 мг/кг в/в в течение 3 суток до инъекции ССЦ и 2 раза в сутки в течение 1-х суток после введения ССЦ.

До и после завершения исследования проводили изучение содержания тонового диальдегида (МДА) по методу Конюховой С.Г с соавт.(1989), ка-алазы в плазме, эритроцитах, ткани печени по методу (Королюк М.А. с со-вт,1985). При завершении эксперимента животных забивали гильотинным ме-одом, предварительно введя в/в летальную дозу тиопентала натрия (100 мг/кг). "усочки печени фиксировали в 4% растворе формалина для гистологического

исследования. Навески ткани печени гомогенизировали и в надосадочной жидкости исследовали содержание МДА и каталазы.

В сыворотке крови определяли содержание общего холестерина по методу Илька (Меньшиков В.В., 1987), холестерина а-липопротеидов при добавлении гепарина в присутствии солей марганца, триглицеридов и общих липидов -стандартным набором реактивов фирмы "Лахема" (Чехия), Р-липопротеидов -турбодиметрическим методом, общего белка - биуретовой реакцией. Активность ферментов (АЛТ, ACT, ЩФ, ЛДГ), содержание в сыворотке креатинина, мочевины, билирубина, К+, Na+, Са2+ определялись на полуавтоматическом анализаторе Hospitex Screen master plus (Щвецария) с набором реактивов Hospitex Diagnostic. Белковые фракции определяли методом электрофореза Швейцарской компании "Hospitex" с компьютерным денситометром.

Определение общей и эффективной концентрации альбумина на (ОКА и ЭКА) проводили с флуоресцентным зондом К-35 по методу Добрецова Г.Е. и Миллера Ю.И. (1994) на анализаторе АКЛ-01 "Зонд".

Для оценки степени повреждения гепатоцитов был использован индекс повреждения гепатоцитов, оцениваемый в баллах в зависимости от выраженности изменений (В.И. Инчина, 1994). Отсутствие изменений оценивали в 0 баллов, наличие признаков умеренной белковой дистрофии гепатоцитов - в 1 балл наличие отека гепатоцитов - в 2 балла, признаки гидропической дистрофии - i 3 балла, некроз гепатоцитов и лимфгистиоцитарной инфильтрации - в 4 балла Подсчитывали по 50 гепатоцитов в 10 полях зрения и определяли в баллах степень повреждения клеток, затем суммировали и вычисляли средний балл пс каждому случаю наблюдения.

Характеристика клинической группы больных

Было обследовано 130 больных с хроническими диффузными заболева ниями печени (гепатитами) на базе 17 отделения 4 ГКБ г. Саранска. Все обсле дуемые пациенты были разделены на 4 группы: 1-я группа (контрольная) из 5: пациента находилась на стандартной терапии, включающей в себя дезинтокси кационную терапию (5% раствор глюкозы, изотонический растворы натри; хлорида до 1,5 л в сутки в течение 7-10 суток) витамины и их аналоги (тиамш хлорид 2,5% 1 мл в/м, кокарбоксилазу 100 мг в/м, витамин Вб, пиридоксин,' гидрохлорид 5% 1 мл в/м, кислоту никотиновую 1% 1 мл в/в, цианкобаломш

Bi2 0,01% 1 мл в/м, кислоту аскорбиновую 5% 1 мл в/в), кислоту липоевую 3,5% 2 мл в/м, желчегонные средства, сирепар 10 мл в/м.

Для сравнения эффективности мексидола было выбрано 2 препарата: ге-латопротектор эссенциале и аевит. В этой связи в клинический анализ введены 2 группы сравнения: 1-я - пациенты, в комплексную терапию которых включен эссенциале в дозе 10 мл в/в в течение 10-12 суток (32 пациента). Вторую группу сравнения составил 21 пациент, в комплексную терапию которых входил аевит, масляный раствор, содержащий в 1 мл аксерофтола ацетата (витамин А) 35мг 'около 100000 ME) и альфа-токоферола ацетата (витамин Е) - 100 мг в/м 1 раз в 1снь в течение 18-20 суток.

Исследование гепатопротекторной активности мексидола (5% 2 мл в/в 1 )аз в сутки на 5% 40 мл глюкозы или 0,9% растворе натрия хлорида в течение 10-12 cyroi^, проведено у 26 пациентов с хроническим гепатитом, получавших ¡тандартную терапию. Препарат разрешен к клиническому применению Прика-;ом Минздрава РФ N 432 от 12.12.96. в качестве антиоксиданта, антигипоксиче-:кого средства.

Все 3 группы пациентов были рандомизированы' по полу, возрасту, дли-ельности заболевания и нозологическим формам. У всех пациентов до и после газначенной терапии проводились биохимические исследования: AJIT, ACT, ЦФ, ЛДГ, МДА, билирубин, общий белок и белковые фракции.

Все полученные данные подвергнуты статистической обработки с опре-¡елением критерия t Стьюдента на ЭВМ IBMPC 386 при помощи пакета про-рамм "Medstat".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Печень играет центральную роль в метаболизме и биотрансформации ¡ногих веществ, поступающих извне и образующихся в организме.

Решение целого ряда вопросов патогенеза и коррекции повреждений пе-ени невозможно в условиях клиники и требует создания адекватной экспери-ентальной модели на животных. Гепатопротекторная активность мексидола ри хронической интоксикации этанолом и четыреххлористым углеродом изу-алась Яворским А.Н. с соавт. (1988). Была проведена сравнительная оценка |)фективности мексидола с а-токоферолом. Поэтому нами была выбрана дру-

гая экспериментальная модель, воспроизводящая условия хронического эндо-токсикоза - длительный иммобилизационный стресс.

Повторные стрессорные воздействия рассматриваются как индуктор воспалительного поражения печени (Целикман В.Э. с соавт., 1996). Повреждения печени различной степени тяжести модулируются при холодовом и иммерсионном стрессе (Денисенко Н.Д. с соавт., 1996), при неадекватной физической нагрузке (Федоров В.Н. с соавт., 1996), при невесомости (Бедненко B.C., Сураков Г.П., 1996), при иммобилизационном стрессе (Федоров Н.В. с соавт., 1996).

Выбор модели длительного иммобилизационного стресса основан на данных Фролова В.П. и Новочадова В.В. (1996) об усилении действия эндогенных повреждающих факторов, связанных с аутоинтоксикацией или иммунным повреждением других органов при переходе острой патологии печени в хроническую форму. Длительное ограничение подвижности не только моделирует дистрофические изменения гепатоцитов (Инчина А.И., 1994; Гераськина М.А.. 1997), но и позволяет изучить действие лекарственных препаратов в условиях выраженного эндотоксикоза (Зорькина A.B., 1997), развитие которого расценивается как ведущий клинический синдром при диффузных поражениях печени различной этиологии (Терновский К.С., .1985; Лопухин Ю.М., 1985; Вороно! Г.Г.. с соавт., 1998). В то же время исследования, проведенные Бобровницкш Л.П. и Ушаковым Л.Б. (1998) показали, что кумулятивные эффекты ряда неблагоприятных факторов среды и деятельности человека в значительной степеш совпадают с проявлениями так называемого множественного метаболическогс синдрома, который лежит в основе развития основных неинфекционных забо леваний человека. Кроме того, в условиях длительного иммобилизационногс стресса, гиперактивация лейкоцитов может явиться дополнительным иммуно зависимым звеном патогенеза (Дубовская Т.Н., 1997). Производные 3 оксипиридина улучшают иммунный статус, способствуя увеличению содержа ния фосфоинозидитов в иммунркомпетентных клетках (Базанов Г.А. с соавт. 1997).

Нарушение синтетической функции печени и преобладание катаболиче ских процессов при моделировании длительного ограничения подвижност! проявилось в значительных сдвигах белкового спектра сыворотки крови в вид развития гипоальбуминемии (с 36,0±1,8 г/л до 28,40±1,95 г/л, Р<0,001), сниже ния содержания общего белка (с 63,8±1,7 до 57,2±1,6 г/л, Р<0,05), резком воз

растании доли ß2 (с 3,79±0,25 до 7,1±0,9%, Р<0,05)и у- фракций глобулинов (с 14,8±0,8 до 19,9+0,5%, Р<0,05).

Полученные нами данные согласуются с результатами исследования, проведенного Ли С.Е. (1998) о нарушении регенерации печени, развивающейся при гипокинезии в эксперименте.

Проведение корригирующей фармакотерапии мексидолом и питохромом С позволило предотвратить снижение содержания общего белка в сыворотки крови. Однако в отличие от препарата сравнения содержание альбуминов не снижалось только на фоне мексидола (36,0+1,8 г/л и 39,02+1,97 г/л, Р>0,05).

В поставленных экспериментальных сериях была отмечена разнонаправленная динамика отдельных фракций глобулинов. В серии сравнения наблюдалась тенденция к некоторому снижению aj-глобулинов, достоверно возрастали <х2 (с 9,7±1,0% до 14,94±1,85%, Р<0,05) и у-фракции (с 11,8±0,4% до 17,42±0,95%, Р<0,001). Причем степень роста содержания у-глобулинов была более значительной, чем контроле, что является отражением развития мезенхи-мально-воспалительного синдрома, а сочетание пониженного содержания альбуминов с гипер-аг-глобулинемией мы можем расценить, как следствие соче-танного повреждения почек. Анализ клинического материала; проведенного Голиковым С.Н. с соавт., (1982) также свидетельствует о том, что характерной особенностью поражения печени при интоксикации различного генеза является его сочетание с поражением почек. Содержание ßi и Рг-глобулинов достоверно не отличалось от исходного уровня.

На фоне введения мексидола содержание аь Рг и у -глобулинов было достоверно ниже контрольной серии, ßi - не отличалось от исходного уровня. Отмечался рост только аг-глобулинов (с 9,7±1,1% до 15,7±1,3%, Р<0,001).

Таким образом, применение мексидола на модели длительного иммоби-лизационного стресса позволят предотвратить нарушение альбуминсрщтетиче-ской функции печени и ограничивать развитие мазенхимально-воспалительного синдрома.

Видимо, такое действие препарата связано с тем, что мексидол прежде всего способствует восстановлению эндоплазматической сети и митохондрий, т. е. клеточных образований, обеспечивающих белоксинтетическую и энергетическую функции в клетке (Мериног .Т.А. с соавт., 1986; Дюмаев K.M. с соавт., 1995)

Применение сукцинатпроизводного 3-оксипиридина при длительном им-мобилизационном стрессе позволило также ограничить атерогенный сдвиг ли-иидного спектра сыворотки крови, характерный и для повреждений печени другой этиологии (Воронов Г.Г. с соавт., 1998).

На фоне введения мексидола ограничивалась степень роста р-липопротеидов, холестерина липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и индекса атерогенности (рис.1). В отличие от контрольной группы и серии сравнения, где содержание холестерина липопротеидов высокой плотности (Хс ЛПВП) резко снижалось, применение мексидола предупредило уменьшение данного показателя. В целом исследуемый препарат оказал более мягкое действие на показатели липидного обмена, чем цитохром С, на фоне введения которого отмечено резкое падение содержания холестерина всех липидных фракций, что может свидетельствовать о нарушении холестеринсинтетической функции гепатоцитов.

Повреждение мембран живых клеток в результате чрезмерной активизации перекисного окисления липидов (ПОЛ) является ведущим патогенетическим звеном вызванных стрессом нарушений функционирования систем живого организма (Денисенко Н.П. с соавт., 1996; Федоров В.Н. с соавт., 1996). Роль липопероксидации, как одного из значимых факторов патогенеза повреждений гепатоцитов при длительном иммобилизационном стрессе показана Гераскиной М.А.(1997). Применение мексидола позволило полностью предотвратить нарастание уровня вторичного продукта ПОЛ в плазме крови и эритроцитах. Активность каталазы в изученных средах практически не отличалась от контрольных цифр (табл.1).

Синдром цитолиза занимает центральное место в патологии печени. Наиболее характерными его признаками являются нарушения проницаемости мембран и перераспределение содержания различных соединений (ионное, витаминов, ферментов и др.) между внутри- и внеклеточным пространством.

Выраженность цитолитического синдрома может служить наглядным критерием эффективности препарата как гепатопротекторного средства и при моделировании ограничения подвижности. Наиболее чувствительной к стрес-сорному воздействию в ранние сроки эксперимента оказалась ACT, активность которой возрастала на 27%, в поздние сроки на 38% увеличивалась АЛТ. К моменту окончания опыта активность АЛТ составила 1,11±0,1 ммоль/л, ACT ■ 0,82±0,05 ммоль/л). Значительное увеличение АЛТ и ACT при удлинении сро -

12 3 4 1234 12 3 4 1 23 4 1234 1 234 1234

Общие ВЛП Триглицериды Общий ХсЛПНП ХсЛПВП ИА

липиды . холестерин

Рис 1. Влияние мексидола и цнтохрома С на динамику липидного спектра сыворотки крови кроликов при 30 суточном иммобнлизационном стрессе (в % к исходному уровню). 1- исходные данные; 2- контроль; 3-цитохром С; 4-мексидол.

*- достоверность различия по отношению к контролю; достоверность различия по отношению к исходному уровню.

Таблица 1.

Влияние мексидола и цитохрома С на уровень малонового диальдегида (МДА) и активность каталазы эритроцитов и плазмы крови кроликов при 30 суточном ограничении подвижности (М±т).

Серия Контроль Цитохром С Мексидол

Показатели Исходные 14 суток 30 суток Исходные 14 суток 30 суток Исходные 14 суток 30 суток

данные гиподина- гиподина- данные гиподина- гиподина- данные гиподина- гиподи-

мии мии мии мии мии намии

МДА плазмы 1,80±0,08 4,36±0,19 4,12+0,17 1,82±0,08 2,59±0,53 4,19+0,5 1,87+0,02 2,02+0,3 1,56+0,1

Ммоль/л Р<0,001 Р<0,001 Р<0,05 Р1<0,001 Р<0,001 Р!>0,05 Р>0,05 Р,<0,001 Р>0,05 Р1<0,001

МДА эритро- 2,40+0,32 4,63 ±0,3 8 2,81±0,4 2,4+0,3 2,51±0,53 2,99+0,42 2,4+0,3 1,44±0,2 1,26±0,18

цитов Р<0,001 Р>0,05 Р>0,05 Р>0,05 - Р<0,05 Р<0,05

Ммоль/л Р,<0,001 Р]>0,05 Р,<0,001 Р,<0,001

Каталаза 0,638±0,09 0,42+0,06 0,30+0,09 0,64+0,09 0,72+0,08 1,2±0,1 0,46+0,04 0,247±0,01 0,25±0,01

плазмы Р<0,05 Р<0,001 Р>0,05 Р<0,001 Р<0,001 Р<0,05

Мкат/мл/с Р|<0,05 Р,<0,001 Р,<0,005 Р[>0,05

Каталаза 2,77+0,28 2,45±0,65 1,35±0,39 3,7+0,42 5,36+0,58 4,93+0,72 3,48+0,37 2,39±1,04 1,82+0,68

эритроцитов Р>0,05 Р<0,001 Р<0,001 Р<0,05 Р>0,05 Р<0,05

Мкат/мл/с Р,<0,01 Р,<0,05 Р,<0,05 Р!>0,05

к»

Примечание: достоверность различий Р рассчитана по отношению к исходным данным, Р1 к данным контрольной серии.

ков гипокинезии указывает на изменение клеточных мембран, способствующих "утечке ферментов" (Содский О.П. с соавт., 1998). На фоне применения цито-хрома С активность AJ1T возросла с 0,7+0,07 до 1,1+0,1 ммоль/л, Р<0,01). Ежедневное введение мексидола предотвратило, в отличие от препарата сравнения, нарастание активности трансаминаз в сыворотке крови при 30-суточном им мобилизационном стрессе (активность АЛТ - 0,52±0,04 ммоль/л, Р<0,001; ACT -0,21+0,03 ммоль/л, Р<0,001).

Показатели уровня билирубина в условиях модели не превышали исходных значений и составили в среднем 0,1 ммоль/л на всех сроках наблюдения.

Микроскопическим проявлением синдрома цитолиза при 30-суточном иммобилизационном стрессе является жировая дистрофия и центральная гид-ропическая (баллонная) дистрофия с явлениями кариопикноза и кариорексиса. При, этом радиальное расположение печеночных балок, характерное для ин-тактных животных, приобретало хаотичный характер. Отек гепатоцитов приводил к сдавлению капилляров. В паренхиме выявлялись очаги моноцеллюлярно-го очагового и, рассеянного некроза. Наблюдалась интенсивная периваскуляр-ная гистоцитарная инфильтрация, представленная фибробластами и лимфоцитами. Некроз гепатоцитов и воспалительная инфильтрация, выступающие в качестве стимуляторов, коллагенообразования, приводят к развитию фиброза, проявляющегося в тенденции распределения инфильтратов и соединительной ткани, основное вещество которой было гомогенизировано и уплотнено из портальных трактов к центральной вене. Наличие холестаза подтверждало выявление желчных пигментов в печеночных клетках и лейкоцитах центральной вены. По данным Целикман В.Э. с соавт. (1996) даже при кратковременных стрессор-ных воздействиях в течение 3*х дней у крыс возрастала объемная плотность лимфоцитов в ткани печени, одновременно наблюдалась тенденция к увеличению объемной плотности фагоцитирующих мононуклеаров и полиморфно-ядерных лейкоцитов.

Ежедневное введение мексидола, как и препарата сравнения цитохрома С позволило ограничить в значительной степени развитие повреждений гепатоцитов. У группы кроликов, получавших мексидол, в основном сохранялась нормальная архитектоника печени. Явления резких дистрофических изменений гепатоцитов отмечались только в центральных зонах долек. Структура микроцир-куляторного русла была более сохранной; видимо, за счет снижения отека гепатоцитов. В" отличие от контроля и серии сравнения лимфогистиоцитарная ин-

фильтрация была не выражена. Явления внутридольковой инфильтрации не отмечались. В отличие от серии сравнения, желчные пигменты в гепатоцитах не обнаруживались.

Механизм возникновения внутрипеченочного холестаза в серии с введением цитохрома С может быть связан с образованием компонентов желчи, в первую очередь за счет подавления метаболизма холестерина в гепатоцитах.

Индекс повреждения печеночной ткани' на фоне введения мексидола (0,86+0,1 усл.ед.) хотя и превышал уровень иитактной группы (0,40±0,16), но был достоверно меньше показателя в контрольной серии (3,6+0,21 усл.ед., Р<0,001) и в группе с введением цитохрома С (1,48+0,28 усл.ед., Р<0,05).

Таким образом, результаты проведенного исследования позволили выявить гепатопротекторное действие мексидола на модели длительного стрес-сорного воздействия при ограничении подвижности. Введение препарата позволило сохранить альбуминсинтетическую, холестеринсинтетическую функции печени, ограничить атерогснную динамику липидного спектра сыворотки крови, предотвратить рост вторичного продукта липопероксидации - малонового диальдегида в плазме крови и эритроцитах, снизить степень повреждения ге-патоцитов, предотвратить развитие цитолитического синдрома.

Следующим этапом исследования было изучение влияния мексидола на морфофункциональное состояние печени при моделировании острого токсического гепатита. Четыреххлористый углерод (ССЦ) является классическим гепа-тотропным ядом и используется в качестве модели токсического гепатита. Патогенез поражения гепатоцитов определяется интерференцией гомеостатиче-ских сдвигов, происходящих не только на клеточном, но также на системном и центральном уровнях. Эндоплазматическая система является местом первичного действия яда. Вероятно, что в этом случае первичным является образование высокоактивных метаболитов, ведущих к повреждению, прежде всего эндо-плазматической системы - места своего образования. Но в более поздние сроки действие их распространяется и на другие субклеточные структуры (митохондрии, липосомы, ядра), поражение которых может быть непосредственным механизмом цитолиза и некроза клеток.

Четыреххлористый углерод расщепляется до свободного радикала СС13, который вызывает перекисное окисление липидов, что способствует высвобождению лизосомальных гидролитических ферментов.

Для контрольной серии через 72 часа после введения ССЦ было характерно достоверное снижение альбуминов сыворотки крови ( до 77,8+5,3% от исходного уровня), рост a i ( до169,9±4,5%),а2 (до 156± 14%),у-глобулинов (до 165,7+22,6% от исходного уровня).

Применение мексидола и зссенциале в лечебно-профилактическом режиме не предотвратило нарушения альбуминсинтетической функции печени. В серии сравнения так же, как в контрольной группе, возрастало содержание ai до 148,2 ±14,6% к исходному уровню) и . фракций глобулинов ( до 185,5±19,4%). Степень роста у-фракции была более резко выражена, чем после введения CCU без коррекции, составив 213,0+12,5% (Р < 0,05), по сравнению с контролем. На фоне введения зссенциале достоверно увеличивалось содержание Рг(до 171,2+13,6 %) и р2- фракции (до 189,8+39,9% от исходного уровня).

На фоне лечебно-профилактического введения мексидола менялось только абсолютное содержание Pi-глобулинов, возрастая до 139,4+18,33%. Отличительной особенностью опытной серии явилось отсутствие достоверного роста у-глобулинов (9,74+1,08 г/л и 11,2±1,2 г/л, Р > 0,05), что косвенно свидетельствует о снижении явлений мезенхимально-воспалительного синдрома.

В настоящее время доказано, что активация ПОЛ имеет наиболее важное значение из существующих механизмов повреждения мембран при острых экзогенных отравлениях (Алимбаев Е.А. с соавт., 1998).

Через 72 часа после введения ССЦ уровень МДА возрастал в плазме и эритроцитах (табл.2). Одновременно было отмечено значительное снижение активности каталазы в изученных средах. Введение зссенциале оказало позитивное действие на динамику ПОЛ в плазме и эритроцитах, однако в ткани печени отмечался значительный рост МДА и снижение активности каталазы.

Введение мексидола позволило предотвратить рост вторичного продукта ПОЛ - МДА в ткани печени, в эритроцитах и оптимизировать реакцию каталазы в плазме крови и гепатоцитах (рис .2).

Главное действующее вещество гепатопротектора зссенциале "эссенциальные" фосфолипиды (субстанция EPL), являются основными элементами в структуре печеночной оболочки и клеточных органелл печени. EPL в организме оказывают нормализирующее действие на метаболизм липидов, белков и детоксикационную функцию печени; восстанавливают и сохраняют клеточную структуру печени и фосфолипидзависимые энзиматические системы,

Таблица 2.

Содержание малонового диальдегида и активности каталазы в плазме крови и эритроцитах кроликов через 72 после введения четыреххлористого углерода (М±ш%).

МДА плазмы ч МДА эритроцитов Каталаза плазмы Каталаза эритроцитов

Контроль 180,05±13,94 238,73+11,89 18,5±1,6 50,7518,85

Эссенциале 131,95+4,44 Р<0,05 363,98+14,08 Р<0,001 110,05±23,9 Р<0,001 223,3±25,3 Р<0,001

Мексидол 157,26±9,84 Р>0,05 Р,>0,05 101,63±4,42 Р<0,001 Р!<0,001 92,56±9,05 Р<0,001 Р 1>0,05 57,72±6,12 Р>0,05 Р,<0,001

Примечание: Достоверность различий Р рассчитано по отношению к контролю, Р к серии сравнения.

МДА

0,25 0,2

0,15 0,1

0,05 0

1 2 3 4

Катал аза

Рис. 2 . Уровень малонового диальдегида и активности каталазы печени кроликов через 72 часа после введения СС^. , 1-интакгные кролики;

2-контрольная группа;

3-эссенциале;

4-мексидол.

Примечание: Д достоверность различия по отношению к интактной группе; ♦-достоверность различия по отношению к контрольной группе.

м кат/сек/л

д

тормозят формирование соединительной ткани в печени. Витамины, входящие в состав препарата, выполняют функцию коферментов в различных биохимических процессах. Но, учитывая каскадный самоподдерживающийся характер свободнорадикального окисления, нельзя ожидать, что введение извне на фоне гиперактивизации ПОЛ фосфолипидов способно ограничить или прервать этот процесс. Скорее, введение таких компонентов играет роль дополнительного субстрата ПОЛ. Видимо, этим и можно объяснить рост уровня вторичного продукта ПОЛ в печени и эритроцитах на фоне применения эссенциале при моделировании острой печеночной недостаточности введением ССЦ.

Не исключено , что при выраженной жировой дистрофии усиление пере-кисного окисления липидов носит и адаптивный характер, направленный на ускорение метаболизма в клетках печени триглицеридов. Но расценивать активацию ПОЛ, в данном случае, как появление роста вторичного продукта мы можем лишь в случае параллельной активизации ферментов антиоксидантной защиты, что отсутствует в серии сравнения.

Развитие цитолитического синдрома на фоне воздействия гепатотропного яда CCL) не удалось предотвратить ни в одной серии сравнения. Однако степень роста активности аланиновой трансаминазы (АЛТ) в группе с применением мексидола была менее выражена, чем в серии сравнения. Уровень АЛТ на фоне введения мексидола после затравки CCL( составил 798,4%±156,6%, на фоне эссенциале 1409,5±37,2% (Р<0,01) и в контроле 704,2+147,2% к исходному уровню. ACT возрастала до 1136,2±353,6% в контрольной группе, до 813+117,1% в серии с мексидолом, в серии с эссенциале до 150,9+14,2% (Р<0,01).

Влияние и эссенциале и мексидола предотвратило нарастание ионов К+в плазме крови, что также свидетельствует об ограничении повреждения мембран клеток.

Через 72 часа после введения подопытным животным четыреххлористого углерода достоверно возрастало содержание мочевины в сыворотки крови, что связано, видимо, с повышением распада аминокислот и дополнительным возрастанием нагрузки на печень (рис.3). Поэтому достоверное снижение содержания мочевины в серии сравнения мы трактовали как нарушение связывания аммиака гепатоцитами. При остром токсическом гепатите, по мнению Каримова Х.Д. с соавт. (1996) снижение процессов биотрансформации связано с пере

)0 ¡)0 -эо -

90 -30 -

эо -

90 -00 -О

шш

1----"Г

1 2 3 4 1 2 3 4

АЛТ

АСТ

12 3 4 Билирубин

250 200 150 100 50 0

2 3 К

2 3 N-1

12 3 4 Мочевина

Рие.З. Активность трансаминаз, динамика содержания билирубина, мочевины в сыворотке крови, ионов К и № в плазме при введении ССЦ.

1-исходный уровень;

2-контрольная группа;

3-эссенциале;

4-мексидол.

Примечание: *-достоверность различия по отношению к контролю.

I

4

4

ключением НАДФН в глютатионредуктазную активность для обезвреживания продуктов ПОЛ.

На фоне введения эссенциале достоверно возрастало содержания билирубина до 431,76+140,2% за счет непрямой фракции, в отличие от опытной и контрольной групп.

Одним их механизмов гепатопротекторного действия мексидола в условиях острой интоксикации, по-видимому, является увеличение под влиянием препарата у интакгных животных уже через 3 дня введения концентрации эффективного альбумина в сыворотке крови ( до 238±22% от исходного уровня), играющего роль важного звена дезинтоксикации.

Установлено, что мексидол связывается с белками крови кроликов в среднем на 42%, что, по мнению Дюмаева К.В. с соавт. (1995), свидетельствует о липофильности препарата и позволяет сделать вывод о возможности образования в организме животных кровяного депо мексидола.

Введение с корригирующей целью в лечебно-профилактическом режиме эссенциале и мексидола не удалось предотвратить повреждающее действие че-тыреххлористого углерода. Картина жировой дистрофии гепатоцитов и очаги некрозов отмечены во всех сериях. Однако ограничение в определенной степени прогрессирования процесса все же имело место. На фоне введения мексидола индекс повреждения гепатоцитов был достоверно ниже контрольной серии.

Таким образом, на модели острого токсического повреждения печени че-тыреххлористым углеродом мексидол проявил гепатопротекторный эффект, превосходящий таковой у препарата сравнения эссенциале и проявляющийся в ограничении степени морфологических изменений и проявлений цитолитиче-ского синдрома, предотвращении проявлений мезенхимально-воспалительного синдрома и сохранении мочевинсинтетической функции гепатоцитов.

Гепатопротекторная активность мексидола, выявленная нами на модели острого токсического гепатитаа при введении ССЦ и на модели длительного иммобилизационного стресса согласуется с данными Яворского А.Н. с соавт., (1988), о гепатозащитном действии препарата, при хронической интоксикации этанолом, и четыреххлористым углеродом в эксперименте, где мексидол показал превосходящую токоферол активность по влиянию на зоны некроза печени и снижению количества "регрессивных" клеточных форм гепатоцитов.

Следует отметить, что многочисленные гепатопротекторные средства, предложенные на основе экспериментальных исследований для лечения заболеваний печени; в большинстве случаев не находят внедрения в практическую медицину, что связано прежде всего с тем, что в гепатологии существует особенно большой разрыв между фармакологическим эффектом исследуемого препарата в эксперименте и в клинике.

Поэтому следующим разделом работы было проведение клинических наблюдений 130 больных с хроническими диффузными заболеваниями печени на базе гастроэнтерологического отделения 4 ГКБ г. Саранска. Введение мекси-дола в схему комплексного лечения больных с хроническими гепатитами было обосновано многочисленными литературными данными о роли перекисного окисления липидов как одного из основных звеньев патогенеза при заболеваниях печени независимо от этиологии ( Дроговоз С.М. с соавт., 1995; Матюшкин Б.Н., Логинов А.С.,1996; Хачатурян М.Л. с соавт.,1996; Литвинова Н.В. с соавт.,1998; Виноградова Л.Ф., 1998 и др.).

Все больные получали стандартную терапию, включающую 5% раствор глюкозы, изотонический раствор хлорида натрия до 1,5 л/сут в течение 7-10 суток, витамины и их аналоги (тиамина хлорид 2,5% - 1 мл п/к, кокарбоксилаза 100 мг в/м, пиридоксина гидрохлорид 5% - 1 мл п/к, кислоту никотиновую 1% -1 мл в/в, цианкоболамин 0,01% - 1мл в/м, кислоту аскорбиновую 5% - 1 мл.), сирепар 10,0 в/м, липоевую кислоту 0,5% - 2 мл в/м, желчегонные средства.

Для оценки эффективности мексидола было выбрано 2 препарата сравнения: гепатопротектор эссенциале и аевит.

32 пациентам в комплексную терапию был включен эссенциале в дозе 10 мл в/в в течение 10-12 суток. 21 пациенту - аевит в/м 1 раз в сутки по 1 мл в течение 18-20 дней.

Введение мексидола 5% - 2 мл в/в 1 раз в сутки на изотоническом растворе хлорида натрия проводилось у 26 пациентов в течение 10-12 суток.

Контрольную группу составили 51 пациент, получавший стандартную терапию.

Клинические группы были рандомизированы по возрастному, половому составу и нозологическим формам.

Средний показатель исходной активности АЛТ в контрольной группе превышал нормальные значения на 253,9 ±22,5% и составил 2,18+0,18 ммоль/л. Нормализация активности АЛТ к 14 суткам наблюдалась у 8 больных (27,6%)

из числа пациентов с исходно повышенными значениями ферментов, в остальных случаях средний показатель АЛТ к 14 суткам составил 1,79+0,19 ммоль/л.

У 9 пациентов (17,6%) в контрольной группе улучшение клинической картины отмечалось к 7 суткам, у 27 (52,9%) к 15, у 14 больных (27,5%) - к 30 суткам пребывания в стационаре. Время достижения полной редукции клинических симптомов составила 22,8±3,4 суток.

При введении в схему комплексного лечения эссенциале к 14 суткам активность АЛТ в среднем составила 1,14+0,25 ммоль/л. Улучшение состояния пациентов в 6 случаях (18,8%) наступило к 7 суткам, у 15 - к 15 суткам (46,9%), у 8 пациентов к 20-м (25%), у 3-х (9,3%) - к 30-м суткам пребывания в стационаре. В среднем время достижения начала редукции основных клинических симптомов составила 18,1±1,3 суток, что достоверно не отличалось от показателей контрольной группы. Длительность лечения больных составила 29,6±1,4 суток.

При введении в комплексную терапию аевита улучшение состояния к 7 суткам наблюдалось у 1 (4,8%) пациента, к 15 - у 4-х (19,3%), к 20-м - у 12 пациентов (57,2%), к 30-м - у 4-х (19,3%). В среднем начало редукции основных симптомов отмечено к 20, 0±4,3 суткам, как в контроле и в группе с эссенциале. Средняя длительность лечения в стационаре составила 24,7б±1,76 суток, аналогично группе контроля и группе сравнения. К 14 суткам активность АЛТ в среднем составила 2,33±0,15 ммоль/л. Нормализация активности АЛТ к моменту выписки из стационара отмечалась у 7 (53,9%) из 13 больных с исходно повышенным показателем.

Введение мексидола в схему комплексного лечения больных с хроническим гепатитом позволило к 14 суткам стационарного лечения добиться значительной регрессии активности АЛТ по сравнению с контролем до 1,38±0,2 ммоль/л, в то время как среднее значение АЛТ в начале лечения составило 2,02±0,21 ммоль/л. Улучшение клинической картины у 8 пациентов (30,8%) отмечалось к 7 суткам, у 14 (53,8%) - к 15 суткам, у 3-х (11,5%) - к 20-м суткам, у 2 пациентов (7,6%) - 30 суткам. Средняя продолжительность лечения составила 20,1+1,01 суток.

Наиболее значительным результатом применения мексидола можно также считать достоверное сокращение сроков достижения начала редукции клиниче-

ской картины среди больных с невирусной этиологией заболевания до 10,"0±0,65 суток.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали гепато-протекторную активность мексидола превосходящую препараты сравнения (на моделях длительного стрессорного повреждения печени цитохрома С, острого токсического повреждения ССЦ - эссенциале), продемонстрировали повышение эффективности стандартной терапии при лечении больных с хроническими диффузными заболеваниями печени невирусной этиологии.

На современном этапе при фармакотерапии ряда острых и хронических болезней печени применяются как этиотропные, так и патогенетические лекарственные средства. Действие последних направлено на устранение одного из ведущих механизмов патогенеза повреждения печени - дестабилизации мембран гепатоцитов, зависящей от инициирования свободнорадикального пере-кисного окисления липидов. Поэтому для предупреждения или ограничения этих процессов в клетке целесообразно использовать наиболее активные мем-браностабилизирующие средства с антиоксидантной активностью и широким спектром действия, одним из которых и является мексидол.

ВЫВОДЫ

1. Производное 3-оксипиридина мексидол проявлял гепатопротекггорную активность на моделях острой интоксикации четыреххлористым углеродом и длительного иммобилизационного стресса.

2. Введение мексидола при длительном иммобилизационном стрессе позволило ограничить повреждение гепатоцитов. В отличие от препарата сравнения цитохрома С, мексидол предотвращал развитие цитолитического и мезен-химально-воспалительного синдромов, нарушение холестерин- и альбуминсин-тетической функций печени, рост содержания малонового диальдегида в плазме крови и эритроцитах.

3. Мексидол не предотвращал развитие цитолитического синдрома при

введении четыреххлористого углерода, но предупреждал рост содержания ио-

*

нов К в плазме и , в отличие от препарата сравнения эссенциале ограничивал степень роста индекса повреждения гепатоцитов и активности АЛТ в сыворотке крови.

4. При моделировании острого токсического гепатита на фоне введения мексидола, в отличие от эссенциале, отсутствовал рост уровня малонового ди-альдегида в эритроцитах и ткани печени, содержание oti, 012 и у - глобулинов в сыворотке крови, не нарушалась мочевинсинтетическая функция гепатоцитов. Одним из механизмов реализации гепатопротекторного действия мексидола является преимущественное ингибирование процессов ПОЛ в печени и увеличение концентрации эффективного альбумина в сыворотке крови.

5. Введение мексидола в схему комплексного лечения больных с хроническим гепатитом, в отличие от эссенциале и аевита, обеспечило более быструю регрессию активности АЛТ и позволило достоверно сократить сроки достижения начала редукции клинических признаков у больных с гепатитом невирусной этиологии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется включить мексидол в дозе 2 мл. 5% раствора в комплексную терапию больных с хроническим гепатитом невирусной этиологии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Келеиникова Т.Т., Винтин H.A.. Гепатопротекторный эффект вами-на при длительном иммобилизационном стрессе// III конференция молодых ученых Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева. Научные труды. Часть II. Саранск. -1997- С.166.

2. Келеиникова Т.Т. Комплексная фармакологическая профилактика повреждений печени при длительном стрессе // III конференция молодых ученых Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева. Научные труды. Часть II. Саранск. -1997- С. 167.

3. Келейникова Т.Т., Зорькина A.B., Инчина В.И. Фармакологическая профилактика и коррекция повреждений печени при длительных стрессорных воздействиях// V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" -Москва. 21-25 апреля 1998 г.-Тез. докл. -М,-1998-С. 574.

4. Келейникова Т.Т., Инчина В.И., Зорькина A.B. Возможности коррекции синдрома метаболической дисфункции некоторыми производными 3-

сипиридина// V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" -осква. 21-25 апреля 1998 г.-Тез. докл. -М..-1998-С. 574.

5. Келейникова Т.Т., Инчина В.И., Зорькина A.B., Машков Ю.И. шяние производных 3-оксипиридина, цитохрома С и вамина на липидный ектр сыворотки крови в условиях пролонгированного иммобилизационного ресса//Вестник Мордовского университета-1998.-N3-4. - С. 92-95.

6. Келейникова Т.Т., Инчина В..И. Гепатопротекторная активность не-торых производных 3-оксипиридина//У Международная конференция иггуальные вопросы клинической фармакологии". -Москва. 2-3 июля 1998 г.-:з. докл.-М.-1998. - С. 42.

7. Келейникова Т.Т., Инчина В.И. Экспериментальное обоснование именения электронакцепторных, атиоксидантных и энергообеспечивающих единений при стрессорных повреждениях печени//У Международная конфе-нция "Актуальные вопросы клинической фармакологии". -Москва. 2-3 июля.-98 г.-Тез. докл. -М.-1998.-С. 43.

8. Келейникова Т.Т. Мексидол - как потенциальный гепатопротектор// 5орник научных трудов ученых Мордовского государственного университета 1ени Н.П. Огарева.Часть 3. 1998.-С.100-101.

9. Келейникова Т.Т., Зорькина A.B., Инчина В.И. Гепатопротекторное йствие производных 3-оксипиридииа/ЛУ Международный конгресс еабилитация в медицине и иммунореабилитации". Сочи. 1-5 июля 1998 года. :з. докл.-М.-1998,-С.92.