Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Функциональный резерв фагоцитирующих клеток крови у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде ремиссии и его коррекция

На правахрукописи

ХАЙБУЛЛИНА ГУЗЕЛЬ АНВАРОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ РЕЗЕРВ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК КРОВИ У ДЕТЕЙ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ РЕСПИРАТОРНОГО ТРАКТА В ПЕРИОДЕ РЕМИССИИ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.09 - педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2004

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете и на кафедре медико-биологических дисциплин ВЭГУ.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Медведев Юрий Анатольевич, доктор медицинских наук, профессор Фархутдинова Луиза Валеевна.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

Алсынбаев Махамат Махаматуллович, кандидат медицинских наук, доцент Панова Людмила Дмитриевна.

Ведущее учреждение: Челябинская государственная медицинская

академия.

Защита диссертации состоится « /а г. часов на

заседании Регионального диссертационного совета КМ 882.124.81. при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу: 458814, Уфа, ул. Новороссийская, 185.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Иммунопрепарат» по адресу 458814, Уфа, ул. Новороссийская, 185.

Автореферат разослан« » 2884 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

К.А. Лукманова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Болезни органов дыхания занимают первое место в структуре общей заболеваемости детей и подростков. Разработке мер по снижению детской заболеваемости, поиску новых методов профилактики и лечения с целью формирования здорового общества призвана способствовать Федеральная целевая программа «Дети России» (Л. Д. Царегородцева, 2003).

Острые и хронические бронхолегочные заболевания и повторные инфекции верхних дыхательных путей составляют основной перечень болезней респираторного тракта в детском возрасте (А.Н. Кокосов, 1998, М.Л. Студеникин, 1998; В.К. Таточенко, 2001; СЮ. Каганов, 2000, 2003). По разным данным, заболевания органов дыхания составляют 75—250 случаев на 1000 детей в год (С.Ю. Каганов, 2003; М.А. Скачкова, 2003). Вместе с тем до 85% детей, проживающих в условиях экологического неблагополучия, составляют дети группы риска, которые имеют по 2-3 обострения в год хронических заболеваний или часто, более 4 раз в год, болеют острыми респираторными инфекциями верхних дыхательных путей. В периоде ремиссии клинических проявлений заболеваний не наблюдается, однако имеют место сдвиги в иммунной системе, астено-невротический синдром, гипертрофия лимфоидной ткани и т. д. (Б.Ф. Семенов, 1998; В.К. Таточенко, 2001; И.А. Тузанкина и др., 2001).

Большинство авторов основной причиной снижения реактивности организма, приводящей к частой заболеваемости, считают иммунологические нарушения, в частности, недостаточность фагоцитарного звена иммунитета, осуществляемого клетками системы полиморфноядерных лейкоцитов, в основном - полиморфноядерных нейтрофильных гранулоцитов. Известно, что общий итог их бактерицидной активности определяется суммой биоцидных и биостатических эффектов, среди которых выделяют зависимые и независимые от кислорода реакции. В связи с этим функциональный резерв фагоцитирующих клеток крови, связанный с кислород-зависимыми процессами, в значительной мере обуславливает их функциональную активность. Кислородзависимая агрессивность проявляется в ходе респираторного взрыва, связанного с процессами свободно-радикального окисления, ведущего к образованию радикалов кислорода (активных форм кислорода - АФК), радикалов хлора и азота (гипохлорит, пироксинитрил и др.). Появление радикалов в фагоцитирующих клетках сопровождается хемилюминесценцией (ХЛ), которая усиливается в присутствии лю-минола (Ю.А. Владимиров, 2001, 2001; Е.Б. Меньшикова, 2003).

Свободно-радикальное окисление - один из фундаментальных биологических процессов, обеспечивающих организма.

БНБЛНОТЕКА

ОЭ МО 7**УТ-' \

Свободные радикалы участвуют в регуляции метаболических реакций, в формировании неспецифической резистентности и иммунорегуляции, в клеточной пролиферации, выработке интерлейкинов, модуляции физико-химических свойств биомембран, регуляции сосудистого тонуса. В норме свободно-радикальное окисление поддерживается на постоянном уровне многоступенчатой системой регуляции, включающей в себя специфические и неспецифические механизмы (Н.К. Зенков, 1999; Ю.А Владимиров, 2002). При срыве механизмов регуляции нарушение свободно-радикальных процессов становится неспецифической причиной и молекулярной основой патогенеза различных по этиологии заболеваний (Ю.А. Владимиров, 1991-2002; Р.Р. Фархутдинов, 2003).

В периоде ремиссии дети с частыми заболеваниями респираторного тракта получают противорецидивную терапию в условиях поликлиники или санатория. Наиболее оптимальным является оздоровление таких детей в лечебно-реабилитационных центрах, где возможно использование как медикаментозного, так и других видов лечения под непосредственным наблюдением врача (Р.А. Кот-луков, 1998; М.П. Костинов, 2000; И.А Тузанкина и др., 2001 № P.L. Brandt, M.O. Hoerkstra, 1997). Вместе с тем известно, что многие лекарственные препараты и различные лечебные воздействия способны влиять на свободно-радикальные процессы, в том числе и на состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови, обуславливающего функциональную активность фагоцитов, оказывая про- или антиоксидантный эффект (Е.К. Алехин и др., 2003).

В связи с вышеизложенным, представляется актуальным разработка диагностических мероприятий, позволяющих получить объективную картину о состоянии функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного со свободно-радикальными реакциями, у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии, и обоснование патогенетической терапии при реабилитационном лечении.

Цель. исследования. Изучение функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, обусловленного кислород-зависимыми процессами, у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии и разработка способов его коррекции при реабилитационном лечении.

Задачи исследования:

1. Оценить состояние иммунологических показателей крови у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии, находящихся на лечении в условиях лечебно-оздоровительного центра.

2. Исследовать состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток, крови и их функциональный резерв.

3. Провести сравнительный анализ изучаемых показателей хемилюминес-ценции крови с данными иммунологического исследования.

4. Исследовать влияние гипохлорита натрия, фитосборов «Травы Башкирии», водного настоя эханацеи пурпурной и прополиса на процессы свободно-радикального окисления.

5. Разработать способы коррекции иммунологической реактивности детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии в условиях лечебно-оздоровительного центра с учетом характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови.

Научная новизна работы. Изучен функциональный резерв фагоцитирующих клеток крови, связанный с кислород-зависимыми процессами, у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии. Исследовано влияние галотерапии, водного настоя эханацеи пурпурной, прополиса, фитосборов «Лакричный», «Солнышко» и «Горец» фирмы «Травы Башкирии» на свободно-радикальное окисление, в том числе на состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток. Разработаны подходы к им-мунокоррекции детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии в условиях лечебно-оздоровительного центра с учетом характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами.

Практическая значимость работы. Использование метода люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови в комплексе обследования детей с заболеваниями респираторного тракта в условиях лечебно-оздоровительного центра позволяет оценить состояние функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами. Подбор лечебных процедур и лекарственных препаратов в зависимости от показателей люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови с учетом их про- или антиокси-дантных свойств позволяет оказывать влияние на состояние функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. Лечение с помощью галотерапии и фитопрепаратов с учетом их влияния на процессы генерации активных форм кислорода способствует повышению функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, влияя на патогенетические механизмы обострения и рецидивирования заболеваний респираторного тракта.

Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в практику работы лечебно-оздоровительного центра ЗАО «Каустик» г. Стерлитамака Республики Башкортостан (санаторий «Ольховка»).

Положения, выносимые на защиту:

1. У детей с хроническим и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии выявлены нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанные с ускорением или замедлением процессов свободно-радикального окисления.

2. Исследование спонтанной и стимулированной люминол-зависимой хе-милюминесценции цельной крови у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта позволяет оценить характер нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами.

3. Галотерапия способствует более интенсивной генерации активных форм кислорода, так как раствор гипохлорита натрия проявляет прооксидантный эффект, усиливая хемилюминесценцию цельной крови, и показана пациентам с нарушением функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, обусловленным замедлением свободно-радикальных процессов. Фитосбор «Горец» также увеличивает интенсивность генерации АФК. Настой Эхинацеи и фитосборы «Лакричный» и «Солнышко» ингибируют свободно-радикальные процессы в фагоцитирующих клетках крови и могут применяться для коррекции их функционального резерва при ускорении процессов генерации АФК.

4. Использование для лечения детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии галотерапии и фитопрепаратов с учетом их способности ускорять или замедлять процессы генерации активных форм кислорода в крови в зависимости от характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, способствует снижению частоты обострений и рецидивирования заболеваний.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 2 Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, июнь 2003г.); Международной конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 22-25 сентября 2003 года); 13 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2003).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материала и методов исследования, главы собственных исследований, выводов,

практических рекомендаций. Иллюстрирована 20 рисунками и 22 таблицами. Библиографический список литературы содержит 168 работ отечественных и 72 работы зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В соответствии с поставленными целью и задачами в работе были выделены основные этапы исследования, представленные в таблице 1.

Таблица 1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОВЕДЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Этапы и задачи исследования Объект и объем исследования Вид и методы исследования

Исследование детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии 80 детей с заболеваниями респираторного тракта и 30 здоровых детей Объективное обследовашеа общеклинический анализ крови, иммунологическое обследование, спирография.

Изучение состояния кис-лород-зависимого мета-болизма фагощпирую-щих клеток крови у здо-ровых детей и детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии. 80 детей с заболеваниями респираторного тракта и 30 здоровых детей Исследование люмгаюл-за-висимой спонтанной и стимулированной хемилюминес-ценции цельной крови. Сопо-ставление показателей XJI крови с данными имунологи-чсского и общеклинического исследования.

Исследование влияния галотсрапии и фиго-прспаратов на процессы генерации активных форм кислорода. Модельные системы, кровь здоровых доноров, фитопрепараты Регистрация хемияюмине-сценции модельных систем, крови здоровых доноров в эксперименте in vitro.

Лечение детей с заболеваниями респираторного тракта в условиях оздоровительного центра. Оценка эффективности методов коррекции функционатьного резерва фагоцитирующих клеток крови. 80 детей с заболеваниями респираторного тракта Галотерапия, фитопрепараты. Анализ результатов лечения (объективное обследование; общеклинический, иммунологический анализ крови, исследовашше люминол-зависимой XJ1 цельной крови).

Работа проведена в детском лечебно-оздоровительном центре ЗАО «Каустик» г. Стерлитамака Республики Башкортостан.

Под наблюдением находились 80 детей с заболеваниями респираторного тракта в возрасте от 6 до 14 лет (основная группа). Среди обследованных 42 мальчика, 38 девочек. Обследование проводили в периоде клинической ремис-

сии. Контрольную группу составили 30 здоровых детей, находящихся на отдыхе в том же лечебно-оздоровительном центре.

При обследовании были применены следующие методы: объективное обследование, изучение данных акушерского и аллергологического анамнеза, лабораторные и инструментальные методы: общеклинический анализ крови, иммунологические исследования I и II уровня, спирография, люминол-зависимая хемилюминесценция цельной крови спонтанная и стимулированная.

Для количественного определения иммуноглобулинов в сыворотке крови применяли метод радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя моноспецифические сыворотки против иммуноглобулинов человека. Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по способности поглощать частицы латекса.

Для числовой характеристики использовали показатель активности фагоцитоза (ФАГ) - процент фагоцитирующих клеток по отношению к общему числу нейтрофильных лейкоцитов, и индекс фагоцитоза - среднее количество частиц, поглощенных одной клеткой.

Проводили определение субпопуляций Т-клеток с преимущественным содержанием хелпер-индукторов и Т-цитотоксических лимфоцитов с вычислением иммунорегуляторного индекса. Для определения способности нейтрофилов к активации кислородзависимого метаболизма с накоплением микробицидных оксидантов использовали тест восстановления нитросинего тетразолия - НСТ-тест - (стимуляция взвесью латекса 50000 частиц/мкл).

Исследовали спонтанную и стимулированную люминол-зависимую хеми-люминесценцию (ХЛ) цельной крови. Капиллярную кровь в количестве 0,2 мл вносили в планшетку с 0,01 мл гепарина (50 ЕД гепарина на 1 мл крови). Добавляли 0,1 мл крови к 2,0 мл физиологического раствора рН=7,2 ед, при температуре 37°С, содержащего 10"6 М люминола (5-амино,2-3-дегидро-4-фталазиндион), регистрировали ХЛ в течение 5 минут. Рассчитывали максимальную амплитуду свечения в усл. единицах и светосумму -

Для исследования стимулированной ХЛ в кровь добавляли 0,01 мл иммуноглобулина человека, денатурированного при I 80°С, инкубировали 10 минут. Отбирали 0,1 мл, вносили в 2,0 мл физ. раствора, содержащего 10"6 М люмино-ла, регистрировали 5 минут. Рассчитывали максимальную амплитуду стимулированной ХЛ (Атахг) и светосумму стимулированной ХЛ (вг) в усл.ед. Сопоставляли цифровые показатели спонтанной и стимулированной ХЛ. Результаты выражали в условных единицах по отношению к эталону СФХМ- 1 ГОСТ 9411-81, световой поток которого составляет 5,1 х105 квант/сек (Владимиров Ю.А., 2002, 2003). Величину функционального резерва фагоцитирующих

клеток крови, обусловленного кислород-зависимыми механизмами, рассчитывали как разницу в показателях стимулированной и спонтанной ХЛ.

Спирографию проводили на прессотахоспирографе ПТС 14П-01 с определением жизненной емкости легких (ЖЕЛ), минутного объема дыхания (МОД), максимальной вентиляции легких (МВЛ).

Влияние галотерапии и фитопрепаратов на процессы генерации АФК проведены исследования в модельной системе цитрат-фосфат-люминол (КН2РО4 -20 mM, KC1 - 105 mM, рН=7,45, Na лимоннокислый - 45 тМ, люминол - 10 s -20 мл.) и в цельной крови здоровых доноров в эксперименте in vitro (гепаринизированная цельная кровь здоровых доноров). Препараты вносили в модельные системы и регистрировали ХЛ, учитывая следующие параметры: максимальную амплитуду и светосумму свечения (Владимиров Ю.А., 2002).

Для лечения детей применяли следующие методы и препараты:

Галотерапия. Использовали галокомплекс производства АО «Аэромед» (г. Санкт-Петербург), основным действующим фактором которого является аэродисперсная среда, насыщенная сухим аэрозолем хлорида натрия с размером частиц дисперсной фазы до 5 мкм при стабильной температуре среды 18-23°С и влажности 4555%. Галотерапию проводили в основном режиме с массовой концентрацией аэрозоля 1-3 мг/мЗ. Курс лечения состоял из 12-20 процедур длительностью 30 минут.

Ингаляции прополиса проводили с помощью ультразвукового аппарата «Арса». Курс лечения состоял из 7-10 процедур. Использовано 10% масло прополиса (производство Регионального научно-производственного центра «Башкирский мед». ГОСТ 28886; ТУ 9882-002-27307778-00).

Фитотерапия. Использовали фитопрепараты фирмы «Травы Башкирии» -«Солнышко», «Лакричный», «Горец», 5% водный настой листьев эхинацеи пурпурной.

Полученные результаты обрабатывали с помощью пакета программ «Sta-tistica» для MS Windous-97. В расчете использовались критерии Фишера и Стьюдента. Применяли корреляционный, дисперсионный анализ, изучали определение нормальности распределения анализируемых данных.

Результаты исследований и их обсуждение

В связи с различными возрастными нормами при иммунологическом обследовании, все дети были распределены на 3 подгруппы по возрастам: 6-9 лет, 10-11 лет и 12-14 лет.

В группе детей с частыми острыми респираторными инфекциями большинство детей (50,00%) болели острыми респираторными заболеваниями (ОРЗ) 4 раза в год, 36,36% - 5 раз в год, 13,64% - 6 и более раз в год.

По данным анамнеза 12 (27,27%) детей стали болеть частыми ОРЗ уже на 1 году жизни, 10 (22,72%) детей - с 1 года жизни, 6 (13,64%) детей - со второго года, 11 (25,00%) - с третьего года, 5 (11,36%) - с четырех лет.

Диагноз «хронический бронхит» был установлен при обследовании в специализированном отделении Республиканской детской клинической больницы с помощью инструментальных методов исследования. В соответствии с МКБ-Х у 12 детей был установлен диагноз хронического обструктивного бронхита, у 14 детей - хронического простого бронхита, у 5 детей - хронического слизисто-гнойного. В соответствии с поставленными задачами мы ограничивались термином «хронический бронхит».

По данным анамнеза, обострения хронического бронхита до 4 раз в год были у 12 детей (33,33%), у остальных - чаще.

При первичном осмотре 19 детей предъявляли жалобы на затрудненное носовое дыхание, частые выделения из носа; быстрая утомляемость отмечалась у 22 детей. Остальные дети жалоб со стороны общего состояния не предъявляли. Нарушение функции внешнего дыхания по обструктивному типу было выявлено у 6 (7,50%) детей с хроническим обструктивным бронхитом, у остальных показатели спирограммы были в пределах нормы.

При анализе данных общего анализа крови выявлено некоторое снижение, по сравнению с показателями у здоровых, количества эритроцитов и лейкоцитов в группе детей 6-9 лет.

При сравнении иммунограммы детей основной группы с иммунограммами детей контрольной группы выявлено достоверное снижение содержания во всех возрастных подгруппах, повышение содержания сниженное количество Т-лимфоцитов. Содержание Т-цитотоксических лимфоцитов также было снижено во всех возрастных подгруппах, однако отмечалось их повышение относительно содержания Т- хелпер-индукторов, в соответствии с этим имело место изменение иммунорегуляторного индекса (1,35±О,О2; 1,36+0,01 и 1,25±О,ОЗ соответственно в возрастных подгруппах). Отмечалось достоверное увеличение фагоцитарного показателя; показатели фагоцитарного числа достоверно не отличались от показателей в контрольной группе. Значения титров ЦИК, комплемента не превышали нормативные рамки, что согласуется с данными анамнеза (забор материала на анализ осуществлялся в период реконвалесценции). Обращали на себя внимание достоверно сниженные, по сравнению с контрольной группой, показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста.

У детей основной группы показатели как спонтанной, так и стимулированной хемилюминесценции цельной крови значительно отличались от показателей у здоровых детей контрольной группы.

По полученным данным, нормальные показатели спонтанной ХЛ были зарегистрированы у 7 детей (8,75%). У 50 детей показатели спонтанной ХЛ были повышены (62,50%), у 23 детей (28,75%) - снижены. Показателей стимулированной ХЛ цельной крови, соответствующих показателям у здоровых, не было ни у одного ребенка; у 23 детей (28,75%) они были повышены, у 57 детей (71,25%) - снижены.

Проанализированы соотношения значений показателей и соответствующих им кривых записи спонтанной и стимулированной ХЛ в каждом отдельном случае. Получено 3 варианта соотношений показателей люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови (рис. 1).

При первом варианте (рис. 1-а) обе кривые имели горизонтальную форму, располагаясь близко к изолинии. Светосумма спонтанной ХЛ - менее 3,8 усл.ед, стимулированной - менее 12,2 усл. единиц, величина функционального резерва, обусловленного кислород-зависимыми процессами - 7,12±0,03 усл. ед.

При втором варианте (рис. 1-6) кривые записи и спонтанной и стимулированной ХЛ располагались значительно выше, чем в норме. Светосумма спонтанной ХЛ была более 24,12 усл. ед., стимулированной ХЛ - более 56,22 усл. ед., величина функционального резерва - 6,44±0,02 усл. ед.

ЗП.%: N1«

1а 1б 1 в

Рис. 1. Варианты расположения кривых спонтанной (Л) и стимулированной (В) XЛ цельной крови у детей с заболеваниями органов дыхания

При третьем варианте (рис. 1-в) значения светосуммы спонтанной ХЛ были повышены (более 14,52 усл. ед.), стимулированной - снижены (менее

18,54 усл. единиц), величина функционального резерва - 5,04+0,02 усл. ед. При этом выделились два вида кривых стимулированной ХЛ.

Так как ни в одном случае не было отмечено нормального соотношения значений спонтанной и стимулированной ХЛ и расположения соответствующих им кривых, можно было сделать вывод о том, что у всех обследованных выявлялся недостаточный функциональный резерв фагоцитирующих клеток крови. В одних случаях его нарушение было связано с ускорением процессов генерации активных форм кислорода, в других - с ингибированием этих процессов.

При математической обработке полученных результатов существенных различий в показателях иммунограммы у детей с разными значениями показателей спонтанной люминол-зависимой ХЛ крови не выявлено.

Небольшие различия имелись в показателях иммуноглобулинов класса М -больше у детей с повышенными значениями ХЛ.

Существенных различий в показателях содержания сывороточных иммуноглобулинов, Т-лимфоцитов, их субпопуляций и В-лимфоцитов у детей с различными показателями ХЛ не отмечалось.

Таким образом, в результате обследования у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта периоде клинической ремиссии, были выявлены иммунологические нарушения, которые характеризовались дисгаммаглобулинемией с повышением концентрации в сыворотке крови и значительным снижением концентрации сывороточного ]^А, достоверным снижением содержания Т-лимфоцитов, в том числе Т-хелпер-индукторов и Т-цитотоксических лимфоцитов, с более выраженным снижением показателей Т-хелперной субпопуляции, увеличением содержания В-лимфоцитов. Также выявлены нарушения кислород-зависимых процессов в фагоцитирующих клетках крови, недостаточный функциональный резерв фагоцитирующих клеток, обусловленный, в одних случаях, ускорением свободно-радикальных процессов в крови, в других - их угнетением.

В связи с тем, что все эти нарушения являются патогенетическими звеньями развития хронического бронхита и частых острых респираторных заболеваний, лечение, проводимое в период ремиссии, преследовало следующие цели: коррекция выявленных нарушений, влияние на свободно-радикальные процессы.

Выбор лечебных препаратов был обусловлен их способностью к стимуляции Т-клеточного звена иммунитета и повышению функционального резерва фагоцитирующих клеток.

В модельных системах проведено экспериментальное исследование, позволившее определить способность выбранных препаратов изменять течение

процессов генерации АФК in vitro. По полученным данным, пшохлорит натрия в цельной крови доноров усиливал хемилюминесценцию, способствуя интенсивной генерации активных форм кислорода, проявляя прооксидантный эффект. Настои эхинацеи, прополиса и фитосбор «Лакричный» не изменяли ХЛ, не оказывая влияния на течение свободно-радикальных процессов в фагоцитах. Фитосбор «Солнышко» достоверно снижал ХЛ крови (83,59+3,48% от контроля), а фитосбор «Горец» достоверно повышал ХЛ.

При анализе влияния данных препаратов на функциональный резерв фагоцитирующих клеток и их функциональную емкость, получены данные, свидетельствующие о том, что ни один из исследованных препаратов, несмотря на то, что некоторые из них в модельной системе цитрат-фосфат-люминол проявили себя как ан-тиоксиданты, не снижал функциональной емкости фагоцитов.

Все дети были распределены на 4 группы. Первую группу составили 20 детей со сниженными показателями спонтанной ХЛ цельной крови, вторую группу - 44 ребенка с повышенными показателями ХЛ крови, третью группу - 6 детей с нормальными значениями спонтанной ХЛ, но сниженными значениями стимулированной ХЛ (показатель функционального резерва фагоцитирующих клеток 1,88+0,05 уел ед.). В четвертой группе (группа сравнения) было 10 детей с различными показателями ХЛ, но также сниженным функциональным резервом фагоцитирующих клеток крови (5,33+0,06 усл. единиц).

В качестве общеукрепляющей терапии в лечебно-оздоровительном центре применяли лечебную физкультуру, массаж, минеральную воду «Красноусоль-ская» внутрь, дозированные прогулки.

В дополнение к этому комплексу детям 1 группы в связи со значительно сниженными показателями ХЛ цельной крови, мы сочли необходимым применение га-лотерапии. Как следует из предыдущих исследований, действие галокамеры вызывает прооксидантный эффект. Одновременно назначали фитосбор «Горец», обладающий прооксидантными свойствами, 5% водный настой по 100,0 мл детям до 12 лет и по 200,0 мл детям старше 12 лет 1 раз в день в течение 20 дней.

Детям второй группы была необходима коррекция процессов генерации АФК клетками крови с целью снижения их активности. Назначали ингаляции прополиса, водный настой эхинацеи (1 раз в день в течении 24 дней), фитосбор «Солнышко» (5% водный настой по 100 мл детям 6-12 лет и по 200,0 мл детям 12-14 лет 1 раз в день после еды).

В лечении детей третьей группы был применен фитосбор «Лакричный» (5% водный настой по 100,0 мл детям до 12 лет и по 200,0 мл в день детям старше 12 лет в течение 20 дней).

Лечение детей четвертой группы проводили по стандартной методике, применяемой в оздоровительном центре. Оно включало лечебную физкультуру, массаж грудной клетки и шейного отдела позвоночника, дозированные прогулки, минеральную воду «Красноусольская» внутрь.

После лечения у всех детей. 1 группы показатели ХЛ цельной крови изменились. Они нормализовались у 12 детей, у остальных - повысились. Показатели светосуммы спонтанной ХЛ в среднем по группе увеличились с 2,24+8,83 усл.ед. до 6,74+8,12 усл. единиц, стимулированной ХЛ - от 8,55+8,13 усл. ед. до 16,22+1,86усл. единиц.

Достоверно значимо изменились и приблизились к норме показатели содержания Т-хелпер-индукторов, Т-цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов, спонтанного НСТ-теста. Показатели содержания ^М, стимулированного НСТ-теста достоверно изменились относительно исходных величин, но не приблизились к норме, отличаясь от нее (Р <8,85).

У детей 2 группы показатели ХЛ также имели положительную динамику. Показатели светосуммы спонтанной ХЛ приблизились к показателям у здоровых детей. Значения светосуммы стимулированной ХЛ после лечения отличались от показателей у здоровых, однако достоверно снизились относительно значений до лечения, то есть, имелась тенденция к нормализации. Изменились показатели соотношения значений спонгашюй и стимулированной ХЛ, свидетельствуя о нормализации функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. Разница в показателях спонтанной и стимулированной ХЛ, свидетельствующая о функциональном резерве, составила 9,32 усл. единиц.

Изменения показателей иммунограммы выражались в повышении содержания Т-лимфоцитов до 56,12+1,64%, Т-хелпер-индукторов до 33,32+1,14%, Т-цитотоксических клеток до 22,97+1,89%. Показатели НСТ-теста повысились до 8,34+8,82 усл. единицы.

У детей 3 группы наблюдалась положительная динамика иммунологических показателей. Повысилось содержание значения показателей Т-лимфоцитов, как Т-хелпер-индукторов, так и Т-цитотоксических, стимулированного НСТ-теста. Значения спонтанной ХЛ достоверно не изменились, показатели стимулированной ХЛ увеличились. Светосумма спонтанной ХЛ в среднем стала 8,82+8,24 усл. ед., светосумма стимулированной ХЛ - 17,81+1,35 усл. единицы, функциональный резерв - 8,99+8,83 усл. единиц.

В 4 группе после проведенного лечения наблюдалась незначительная динамика иммунологических показателей. Повысилось содержание однако значения показателей Т-лимфоцитов и их субпопуляций изменились незначительно.

Показатели ХЛ крови также претерпели незначительные изменения. Значения спонтанной ХЛ достоверно не изменились, показатели стимулированной ХЛ несколько увеличились. У троих детей со сниженными значениями спонтанной и стимулированной ХЛ показатели остались в тех же пределах. Среди шести детей с повышенными значениями спонтанной и стимулированной ХЛ у троих они остались без изменений, у троих наблюдалось некоторое снижение значений ХЛ. Эта динамика была положительной, однако нормализации функционального резерва в двух случаях не наблюдалось. Он составил соответственно 4,0 усл. единиц и 6,0 усл. единицы. Только в одном случае имело место нормальное соотношение показателей спонтанной и стимулированной ХЛ, функциональный резерв составил 10,2 усл. единицы.

Таким образом, в результате лечения детей 4 группы традиционными методами, без подбора лекарственных препаратов с учетом показателей ХЛ крови, результат коррекции функционального резерва фагоцитирующих клеток крови был удовлетворительным только в 10% случаев. В 40% случаев динамика была положительной, в 50% - динамики не наблюдалось.

Динамика показателей соотношения спонтанной и стимулированной ХЛ (величины функционального резерва фагоцитов) показана на рисунке 2, иммунологических показателей - на рисунке 3.

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа норма Я до леченияпосле лечения

Рис. 2. Динамика соотношения показателей спонтанной и стимулированной ХЛ цельной крови у пролеченных детей в сравнении с контрольной группой

Результаты лечения были проанализированы в группах детей с частыми острыми респираторными заболеваниями и хроническим бронхитом. Внутри всех групп произошли изменения показателей ХЛ крови.

У значительного числа детей показатели нормализовались. Так, если среди часто болеющих детей до лечения только у двоих были показатели спонтанной хемилюминесценции, близкие к норме, то после лечения, показатели, лежащие в границах нормы, были у 24 детей.

Среди детей с хроническим бронхитом показатели спонтанной люминол-зависимой ХЛ крови до лечения в норме были лишь у 12,90%, в процессе лечения он нормализовались еще у 64,52% детей. В обеих группах остались дети с повышенными или пониженными показателями спонтанной ХЛ, но, по анализу отдельных случаев, можно отметить, что значения ХЛ имели тенденцию к нормализации. До лечения ни у одного ребенка не было показателей стимулированной ХЛ, близких к норме, после лечения они нормализовались у 76,92% детей с частыми ОРЗ и у 77,42% детей с хроническим бронхитом. Результат лечения достоверно не различался в этих группах.

*дА. г'л

1вА.г'я

1 фуппа

2 фуппа

НСТ<1 у«.ед<-" > *~чг-Л9М.пп

1дА,г(п

'* Корма«* Домч«*тк * Поел«л«чапмк

3 группа

4 группа -

Рис. 3. Динамика иммунологических показателей у пролеченных детей (в % по отношению к норме)

Более выраженные изменения в сторону улучшения показателей были в группе детей, характеризующейся ускоренными процессами генерации активных форм кислорода клетками крови (2 группа).

При имевшемся замедлении процессов генерации АФК результат был менее выраженным. В этих случаях, вероятно, требуется более длительное лечение. Однако имеющаяся тенденция к нормализации показателей во всех случаях подтверждает необходимость проведения такого лечения в условиях оздоровительного центра.

Отдаленные результаты лечения были изучены на основании катамнестического исследования. Через 1 год были осмотрены 56 детей, проходивших лечение, у остальных 24 детей были изучены амбулаторные карты.

Их 44 детей, до лечения страдавших частыми острыми респираторными заболеваниями, 23 ребенка в течение года после лечения болели 2-3 раза в год, 19 детей болели 4 раза в год, двое детей болели 5 раз в год, более 6 раз за год не болел никто.

Из 36 детей, страдавших хроническим бронхитом, 2 детей не болели в течение года бронхитом, только перенесли по 2-3 раза в год ОРЗ, 18 детей болели 1 раз, 12 детей перенесли обострение бронхита 2 раза в год, 3 ребенка болели 4 раза за год, 1 ребенок болел 5 раз.

Таким образом, можно отметить, что через 1 год после лечения, проведенного в условиях оздоровительного центра, дети стали менее часто болеть ОРЗ и бронхитом. Оценивая отдаленные результаты лечения по клиническому эффекту, можно отметить, что результаты были удовлетворительными и стойкими.

Одной из причин снижения реактивности организма, приводящей к частым заболеваниям респираторного тракта, является нарушение гуморального и клеточного иммунитета, в том числе функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, обусловленного кислород-зависимыми процессами.

Выявленное нами нарушение соотношения показателей спонтанной и стимулированной люминол-зависимой хсмилюминесценции крови у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии, указывало на изменение функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. В одних случаях это было связано с ускорением процессов генерации активных форм кислорода, в других - с недостаточностью данного процесса.

В настоящее время многие авторы (Л.Б. Савельев, 1998; Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков, 1999; Л.В.Фархутдинова, Г.Р. Мадьярова, 2002) считают иммунологические нарушения, в основном недостаточность фагоцитарного звена иммунитета, осуществляемого клетками системы полиморфноядерных лейкоцитов, причиной возникновения рецидивирующих и хронических заболеваний

респираторного тракта. Выявленные нами изменения в периоде клинической ремиссии свидетельствовали о том, что функциональная активность фагоцитирующих клеток крови не восстанавливается с улучшением клинического состояния, а реакция на какое-либо воздействие в виде бактериального и вирусного инфицирования (дыхательный взрыв) может быть неадекватной в связи с нарушением кислород-зависимых процессов.

Полученные данные подтверждают положение С.К.В. Вирсбитски с соавторами (1997) и В.Ю. Деляна с соавторами (2888) о том, что заболевают респираторного тракта во многом являются отражением абсолютной или относительной функциональной недостаточности системы нейтрофильного фагоцитоза.

Вместе с тем литературные данные о характере процессов генерации активных форм кислорода при заболеваниях респираторного тракта достаточно противоречивы. По данным Е.Б. Меньшиковой (1997), реакция нейтрофилов на какой-либо агент сопровождается повышением продукции и высвобождением свободных радикалов, оказывающих прямой токсический эффект на клетки микроокружения и активирующих тучные клетки, что приводит к повышенной секреции биологически активных веществ. К.С. Дулин и А.Г. Чучалин (1998) и А.Б. Инса-нов (1996) выявили увеличение интенсивности генерации АФК у больных бронхитами, в то время как Б.Т. Величковский с соавторами (1998, 2888) отмечали достоверное снижение показателей хемилюминесценции нейтрофилов крови у больных как в фазе обострения, так и в фазе ремиссии заболевания.

Наши исследования показали, что в периоде клинической ремиссии в фагоцитирующих клетках крови может иметь место как ускорение, так и замедление свободно-радикальных процессов. И то и другое нарушает эффективность кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток. С одной стороны, активные формы кислорода при их избыточной продукции и несостоятельности защитной антиоксидантной системы способны непосредственно повреждать окружающие ткани и ускорять процессы ПОЛ. С другой стороны, подавление образования АФК может привести к незавершенности фагоцитоза и хронизации или рецидивированию воспалительного процесса, так как АФК определяют защитный микробицидный потенциал фагоцитов.

С нарушением процессов генерации АФК фагоцитирующими клетками в значительной степени связано и нарушение их функционального резерва. При снижении функционального резерва фагоцитирующая клетка при встрече с каким-либо негативным агентом не выполняет свою защитную функцию, к тому же воздействие вируса при острых респираторных инфекциях верхних дыхательных путей дополнительно оказывает иммуносупрессивное действие на функциональ-

ное состояние нейтрофилов, вызывает снижение их кислород-зависимого метаболизма. Усугублять иммунологические нарушения, по данным В.К. Котлукова с соавторами (1998), Р. Chanez с соавторами (1997) и Е. РиеИеИе (1997) может и пер-систенция вируса, которая, в свою очередь, замедляет реализацию эффекторной функции нейтрофилов, что может привести к рецидиву заболевания при присоединении какого-либо патологического агента

В развитии хронических и рецидивирующих заболеваний определенную роль играет и функциональное состояние организма, обуславливающее адаптацию к негативным воздействиям внешней среды. Иммунная система, деятельность которой непосредственно связана и в большой степени обусловлена состоянием свободно-радикальных процессов в крови, относится к системам, вносящим наибольший вклад в формирование защитно-приспособительных реакций, обуславливающих нормальную реакцию организма, в том числе, бронхиального дерева, на воздействие неблагоприятных влияний внешней среды, к числу которых можно отнести бактериальные и вирусные агенты. Состояние свободно-радикальных процессов в крови, по данным Л.В. Фархутдиновой (1999), вносит значительный вклад в формирование оптимального функционального состояния организма и реактивности детей. Выявленное нами нарушение процессов генерации АФК в крови, вероятно, и может быть одной из причин рецидивирования или хронизации заболеваний респираторного тракта при присоединении инфекции, вызывая, с одной стороны, нарушение микробицидного потенциала фагоцитирующих клеток крови, с другой - снижение адаптационных резервов организма вследствие нарушения его функционального состояния.

Все вышеперечисленные особенности нарушения кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови - как ускорение, так и замедление выработки АФК - требуют адекватной фармакологической коррекции, направленной на оптимизацию процессов генерации АФК, нормализацию функционального резерва фагоцитирующих клеток.

Результат проведенного лечения подтверждает необходимость использования лечебных средств в зависимости от состояния процессов свободно-радикального окисления, с учетом их про- или антиоксидантной направленности. Включение в комплексную противорецидивную терапию препаратов, способных корригировать продукцию АФК в крови активирует механизмы саноге-неза, устраняет нарушения в системе фагоцитоза. Исследование спонтанной и стимулированной люминол-зависимой ХЛ цельной крови позволяет дифференцированно подойти к назначению соответствующих профилактических и ле-

чебно-оздоровительных мероприятий, осуществлять мониторинг состояния пациентов в периоде клинической ремиссии.

Таким образом, результаты проведенного исследования подтверждают необходимость использования лечебных средств в зависимости от показателей хеми-люминесценции крови с учетом их про- или антиоксидантной направленности. Коррекция нарушений функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами, у детей с рецидивирующими и хроническими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии в условиях лечебно-оздоровительного центра с помощью галотерапии и фитопрепаратов с учетом их влияния на процессы генерации АФК, повышает эффективность реабилитационных оздоровительных мероприятий, являясь патогенетически обоснованной, так как позволяет снизить частоту обострений и рецидивов заболеваний респираторного тракта.

ВЫВОДЫ

1. У детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии выявлено достоверное снижение содержания повышение уменьшение содержания Т-лимфоцитов, Т-цитотоксических лимфоцитов наряду с их повышением относительно Т-хелпер-индукторов по сравнению со здоровыми детьми контрольной группы. Отмечается увеличение фагоцитарного показателя на фоне не измененного фагоцитарного числа, титров ЦИК, комплемента, достоверное снижение спонтанного и индуцированного НСТ-теста.

2. В периоде клинической ремиссии у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта выявлены нарушения процессов генерации активных форм кислорода в фагоцитирующих клетках крови, сопровождающиеся изменением показателей спонтанной и стимулированной хемилюминесценции крови. Показатели спонтанной хемилюминесценции были повышены в 62,5% случаев и снижены в 28,75% случаев, показатели стимулированной хемилюминесценции были повышены в 28,75% и снижены в 71,25% атучаев.

3. Изменение соотношения показателей спонтанной и стимулированной лю-минол-зависимой хемилюминесценции цельной крови указывало на нарушение функционального резерва фагоцитирующих клеток, обусловленного кислород-зависимыми процессами, связанное в одних случаях с ускорением генерации активных форм кислорода, в других - с ингибированием данного процесса, что требует соответствующей коррекции при реабилитационном лечении.

4. Галотерапия, фитосбор «Горец» ускоряют процессы генерации активных форм кислорода в крови; настой эхинацеи, фитосборы «Солнышко» «Лакричный» и прополис обладают антиоксидантными свойствами.

5. Подбор лечебных процедур и препаратов с учетом их про- или антиоксидантных свойств при реабилитационном лечении детей в периоде клинической ремиссии в зависимости от характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с процессами генерации АФК, является патогенетически обоснованным и позволяет повысить эффективность оздоровительных мероприятий, снизить частоту обострений и рецидивов заболеваний респираторного тракта.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки состояния функционального резерва фагоцитирующих клеток крови у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии рекомендуется, наряду с традиционными исследованиями показателей иммунитета, оценивать спонтанную и стимулированную люминол-зависимую хемилюминесценцию цельной крови.

2. При сниженных показателях спонтанной и стимулированной люминол-зависимой ХЛ крови рекомендуется в комплексное оздоровительное лечение детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде ремиссии включать галотерапию (15-20 процедур по 30 мин) и фитосбор «Горец» (5% водный настой по 100,0-200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней).

3. При повышенных показателях спонтанной и стимулированной люминол-зависимой ХЛ для уменьшения интенсивности генерации активных форм кислорода рекомендуется назначение настоя эхинацеи, фитосбора «Солнышко» (5% водные настои по 100,0-200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней), а так же ингаляций прополиса (10% масляный раствор), обладающих антиоксидантным действием.

4. При повышенных показателях спонтанной люминол-зависимой хемилюминесценции крови и сниженных значениях стимулированной ХЛ, рекомендуется назначение фитосбора «Лакричный» (5% водный настой по 100,0-200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. Использование фитопрепаратов «Травы Башкирии» для коррекции кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови у детей с хроническими бронхолегочными заболеваниями в условиях санатория // Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов / Материалы 2-й Российской науч.-практ. конф. - М, 2003. - С. 252-253.

2. Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. Использование фитопрепаратов для коррекции кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови у детей с хроническими бронхолегочными заболеваниями // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты / Сборник научных трудов РАЕН. - М., 2003. - С. 127-135.

3. Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. Application of phytopreparations «Bashkirian herbs» for oxygen- dependent phagocytizing blood cells metabolism correction in children with chronic bromchopulmonary diseases at sanatorium // Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты / Сборник научных трудов РАЕН. - М., 2003. - С. 215-216.

4. Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. Role of free - radical processes in blood in recurring obstructive bronchitis // Активные фомы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и болезни человека Международная конференция. - Смоленск, 2003,22-25 сентября. - Смоленск, 2003, - С. 72-73.

5. Фархутдинова Л.В., Хайбуллина Г.А. Коррекция функционального резерва фагоцитирующих клеток крови у детей с хроническими бронхолегочны-ми заболеваниями в условиях санатория // Здравоохранение Башкортостана. -2003. - Спецвыпуск № 4. - С. 47-52.

ХАИБУЛЛИНА ГУЗЕ ЛЬ АНВАРОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ РЕЗЕРВ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК КРОВИ У ДЕТЕЙ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ РЕСПИРАТОРНОГО ТРАКТА В ПЕРИОДЕ РЕМИССИИ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Издательская лицензия № 06788 от 01.11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450077, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3, тел. (3472) 22-73-50, факс 22-37-51.

Подписано в печать 29.04.2004 г. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,4. Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100. Заказ №108.

1-9315

Актуальность темы

По данным МЗ РФ, болезни органов дыхания стабильно занимают первое место в структуре заболеваемости детей и подростков. Разработке мер по снижению детской заболеваемости, поиску новых методов профилактики и лечения с целью формирования здорового общества призвана способствовать Федеральная целевая программа "Дети России" и отраслевая научно-исследовательская программа "Разработка новых медицинских технологий в педиатрии и детской хирургии" [152,158].

Простудные заболевания, повторные инфекции горла, носа, острые и хронические бронхолегочные инфекции составляют основной перечень болезней респираторного тракта в детском возрасте [63,65,75, 135,138,169,227]. Как свидетельствуют результаты многочисленных эпидемиологических исследований, в настоящее время наблюдается их повсеместный рост [65,169]. По разным данным, заболевания респираторного тракта составляют 75 - 250 случаев на 1000 детей в год [63,128]. Вместе с тем до 85% детей, проживающих в условиях экологического неблагополучия, составляют дети группы риска, которые имеют по 2-3 обострения в год хронических заболеваний верхних дыхательных путей или часто, более 4 раз в год, болеют острыми респираторными заболеваниям верхних дыхательных путей [169]. В период ремиссии клинических проявлений заболеваний не наблюдается, однако имеют место сдвиги в иммунной системе, астено-невротический синдром, гипертрофия лимфоидной ткани и т.д. [93, 124, 134,140, 156].

Среди причин, способствующих частым заболеваниям респираторного тракта, наибольшее значение приобретает ухудшающееся состояние окружающей среды, повышенный риск инфицирования вируснобактериального характера, аллергизацию, негативное влияние ряда генетических факторов [ 10,11,26,28,122,163,176].

Большинство авторов основной причиной снижения реактивности организма, приводящей к частой заболеваемости, в том числе заболеваниям респираторного тракта, считают иммунологические нарушения, в основном недостаточность фагоцитарного звена иммунитета, осуществляемого клетками системы полиморфноядерных лейкоцитов, в основном - полиморф-ноядерных нейтрофильных гранулоцитов. Известно, что общий итог бактерицидной активности нейтрофильных гранулоцитов определяется суммой биоцидных и биостатических эффектов, среди которых принято выделять зависимые и независимые от кислорода реакции. Кислородзависимая агрессивность проявляется в ходе респираторного взрыва, связанного с процессами свободно-радикального окисления [103,120].

Свободно-радикальное окисление - один из фундаментальных биологических процессов, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность организма. Свободные радикалы участвуют в регуляции метаболических реакций, в формировании неспецифической резистентности и иммунорегуляции, в клеточной пролиферации, выработке интерлейкинов, модуляции физико-химических свойств биомембран, регуляции сосудистого тонуса. В норме Свободно-радикальное окисление поддерживается в организме на постоянном уровне сложной, многоступенчатой системой регуляции, включающей в себя специфические и неспецифические механизмы. [30,31,32,33,34]. При срыве механизмов регуляции нарушение свободно-радикальных процессов становится неспецифической причиной и молекулярной основой патогенеза различных по этиологии заболеваний [30,105,145,146].

В респираторном тракте имеет место прямой контакт с кислородом атмосферного воздуха, являющегося мощным окислителем, высокие концентрации субстрата окисления - ненасыщенных жирных кислот, наличие катализатора окисления - ионов железа, входящих в состав гемоглобина эритроцитов и наконец присутствие альвеолярных макрофагов (АМ), продуцирующих в процессе фагоцитоза активные формы кислорода (АФК).

С одной стороны, при избыточной продукции АФК и несостоятельности защитной антиоксидантной системы, они способны непосредственно повреждать окружающие ткани и адаптационные механизмы, что в целом может явиться причиной неблагоприятного течения заболевания. С другой, АФК определяют защитный микробицидный потенциал фагоцитов. Подавление их образования может привести к незавершенности фагоцитоза и хро-низации и рецидивированню воспалительного процесса [44,100].

Состояние свободно-радикальных процессов и необходимость их коррекции при заболеваниях респираторного тракта показана в работах многих авторов. Вместе с тем известно, что нарушение кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови имеет место и в периоде клинической ремиссии у часто болеющих детей.

В периоде ремиссии дети с частыми заболеваниями респираторного тракта получают противорецидивную терапию в условиях поликлиники или санатория. Наиболее оптимальным является оздоровление таких детей в лечебно-реабилитационных центрах, где возможно использование как медикаментозного, так и других видов лечения под непосредственным наблюдением врача. В последние годы все более популярным становится применение различных видов физиолечения, растительных препаратов, релаксирующей гимнастики, лечебного массажа, кислородных ингаляций, галотерапии. Вместе с тем известно, что многие лекарственные препараты и различные лечебные воздействия способны влиять на свободно-радикальные процессы, в том числе и на состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови, обуславливающего функциональную активность фагоцитов, оказывая про- или антиоксидантный эффект [77,80,140,183].

В связи с вышеизложенным, представляется актуальным разработка диагностических мероприятий, позволяющих получить объективную картину о состоянии функционального резерва фагоцитирующих клеток крови у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии при реабилитационном лечении в оздоровительном центре, обосновать патогенетическую терапию и контролировать ее эффективность.

Цель исследования. Изучение функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, обусловленного кислород-зависимыми процессами, у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии и разработка способов его коррекции при реабилитационном лечении.

Задами исследования

1. Оценить состояние иммунологических показателей крови у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии, находящихся на лечении в условиях лечебно-оздоровительного центра.

2. Исследовать состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови и их функциональный резерв.

3. Провести сравнительный анализ изучаемых показателей хемилю-минесценции крови с данными иммунологического исследования.

4. Исследовать влияние гипохлорита натрия, фитосборов "Травы Башкирии", водного настоя эханацеи пурпурной и прополиса на процессы свободно-радикального окисления.

5. Разработать способы коррекции иммунологической реактивности детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии в условиях лечебно-оздоровительного центра с учетом характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. Научная новизна работы

Изучен функциональный резерв фагоцитирующих клеток крови, связанный с кислород-зависимыми процессами, у детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии. Исследовано влияние галотерапии, водного настоя эханацеи пурпурной, прополиса, фитосборов "Лакричный", "Солнышко" и "Горец" фирмы "Травы Башкирии" на свободно-радикальное окисление, в том числе на состояние кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток. Разработаны подходы к иммунокор-рекции детей с заболеваниями респираторного такта в периоде клинической ремиссии в условиях лечебно-оздоровительного центра с учетом характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами. Практическая значимость работы

Использование метода люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови в комплексе обследования детей с заболеваниями респираторного тракта в условиях лечебно-оздоровительного центра позволяет оценить состояние функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с кислород-зависимыми процессами. Подбор лечебных процедур и лекарственных препаратов в зависимости от показателей люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови с учетом их про- или антиок-сидантных свойств позволяет оказывать влияние на состояние функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. Лечение с помощью галотерапии и фитопрепаратов с учетом их влияния на процессы генерации активных форм кислорода способствует повышению функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, влияя на патогенетические механизмы обострения и рецидивирования заболеваний респираторного тракта.

Положении, выносимые на защиту

1. У детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии выявляются нарушения кислород-зависимого метаболизма фагоцитирующих клеток крови в виде ускорения или замедления в них процессов генерации активных форм кислорода и связанные с этим нарушения их функционального резерва.

2. Исследование спонтанной и стимулированной люминол-зависимой хеми-люминесценции цельной крови у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта позволяет выявить нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, что дает возможность выбрать оптимальную тактику иммунокоррекции в условиях оздоровительного центра в зависимости от про- или антиоксидантных свойств лечебного воздействия.

3. Применение галотерапии способствует более интенсивной генерации активных форм кислорода, так как раствор гипохлорита натрия проявляет прооксидантный эффект, усиливая хемилюминесценцию цельной крови, и показано пациентам с нарушением функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, обусловленным замедлением свободно-радикальных процессов; фитосбор «Горец» также увеличивает интенсивность генерации АФК. Пастой Эхинацеи и фитосбор «Солнышко» и «Лакричный» ингибируют свободно-радикальные процессы в фагоцитирующих клетках крови и могут применяться для коррекции их функционального резерва при ускорении процессов генерации АФК.

4. Использование для лечения детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии в условиях оздоровительного центра галотерапии и фитопрепаратов с учетом их способности ускорять или замедлять процессы генерации активных форм кислорода в крови в зависимости от характера нарушения функциональной активности фагоцитирующих клеток крови способствует снижению частоты обострений и рецидивирования заболевании респираторного тракта.

Внедрение. Работа выполнена в плане научных исследований Башкирского Государственного медицинского университета и лаборатории медико-биологических исследований ВЭГУ.

Результаты исследования внедрены в практику работы лечебно-оздоровительного центра ЗАО "Каустик" г. Стерлитамака Республики Башкортостан (Санаторий «Ольховка»).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на:

- 2 Российской научно-практической конференции "Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов" (Москва, июнь 2003г.);

- Международной конференции "Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и болезни человека" (Смоленск, 22-25 сентября 2003 года);

- 13 Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (СанктV

Петербург, 2003).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 печатных работ.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материала и методов исследования, главы собственных исследований, выводов, практических рекомендаций. Иллюстрирована 20 рисунками и 22 таблицами. Библиографический список литературы содержит 168 работ отечественных и 72 работы зарубежных авторов.

выводы

1. У детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии выявлено достоверное снижение содержания 1йА, повышение IgM, уменьшение содержания Т-лимфоцитов, Т-цитотоксических лимфоцитов наряду с их повышением относительно Т-хелпер-индукторов по сравнению со здоровыми детьми контрольной группы. Отмечается увеличение фагоцитарного показателя на фоне не измененого фагоцитарного числа, титров ЦИК, комплемента, достоверное снижение спонтанного и индуцированного НСТ-теста.

2. В периоде клинической ремиссии у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта выявлены нарушения процессов генерации активных форм кислорода в фагоцитирующих клетках крови, сопровождающиеся изменением показателей спонтанной и стимулированной хемилюминесценции крови. Показатели спонтанной хемилюминесценции были повышены в 62,5% случаев и снижены в 28,75% случаев, показатели стимулированной хемилюминесценции были повышены в 28,75% и снижены в 71,25% случаев.

3. Изменение соотношения показателей спонтанной и стимулированной люминол-зависимой хемилюминесценции цельной крови указывало на нарушение функционального резерва фагоцитирующих клеток, обусловленного кислород-зависимыми процессами, связанное в одних случаях с ускорением генерации активных форм кислорода, в других - с ингибированием данного процесса, что требует соответствующей коррекции при реабилитационном лечении.

4. Галотерапия, фитосбор "Горец" ускорюяют процессы генерации активных форм кислорода в крови; настой эхинацеи, фитосборы "Солнышко", "Лакричный" и прополис обладают антиоксидантными свойствами.

5. Подбор лечебных процедур и препаратов с учетом их про- или антиоксидантных свойств при реабилитационном лечении детей в периоде клинической ремиссии в зависимости от характера нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови, связанного с процессами генерации АФК, является патогенетически обоснованным и позволяет повысить эффективность оздоровительных мероприятий, снизить частоту обострений и рецидивов заболеваний респираторного тракта.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки состояния функционального резерва фагоцитирующих клеток крови у детей с хроническими и рецидивирующими заболеваниями респираторного тракта в периоде клинической ремиссии рекомендуется, наряду с традиционными исследованиями показателей иммунитета, оценивать спонтанную и стимулированную люминол-зависимую хемилюминесценцию цельной крови.

2. При сниженных показателях спонтанной и стимулированной люминол-зависимой ХЛ крови рекомендуется в комплексное оздоровительное лечение детей с заболеваниями респираторного тракта в периоде ремиссии включать галотерапию (15-20 процедур по 30 мин) и фитосбор "Горец" (5% водный настой по 100,0 - 200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней).

3. При повышенных показателях спонтанной и стимулированной люминол-зависимой ХЛ для уменьшения интенсивности генерации активных форм кислорода рекомендуется назначение настоя эхинацеи, фитосбора "Солнышко" (5% водные настои по 100,0 - 200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней), а так же ингаляций прополиса (10% масляный раствор), обладающих антиоксидантным действием.

При повышенных показателях спонтанной люминол-зависимой хемшпоминесценции крови и сниженных значениях стимулированной XJI, рекомендуется назначение фитосбора "Лакричный" (5% водный настой по 100,0 - 200,0 мл 1 раз в день в течение 20 дней).