Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Функциональное состояние нейтрофилов у недоношенных детей в периоде новорожденности

На правах рукописи

ч

ДОРОГОВА МАРИАННА МАГОМЕТОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ У НЕДОНОШЕННЫХ ДЕТЕЙ В ПЕРИОДЕ НОВОРОЖДЕННОСТИ

14.00.09 - педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискаиие ученой степени кандидата медицинских наук

СТАВРОПОЛЬ - 1998

Работа выполнена в Кабарднпо - Балкарском государственном университете.

11аучный руководитель - доктор медицинских паук.

профессор М.Н. Якушснко

Официальные оппоненты - ведущий научный сотрудник ¡11111 курортологии, доктор медицинских паук. В.М. Стенаненко - кандидат медицинских паук, доцент Ю.А. Филимонов

Ведущая организация - Российский государственный медицинский

университет

Защита состоится « ¿У » О^О^р_ 1998г. в 10м часов на заседании диссертационного совета К-08/61.01 в Ставропольской государственной медицинской академии (355017, г. Ставрополь, ул. Мира, 310)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольской государственной медицинской академии.

Ав тореферат.разослан « » О^Т&^Р'Л 1998 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета К-084.61.01, ^

кандидат медицинских наук, доцент ^^ ИсРхУР°|!а

/

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Борьба с инфекцией у недоношенных детей остается одной из наиболее актуальных проблем неонатоло-гии, так как данная патология занимает ведущее место в структуре заболеваемости и ранней детской смертности. Главной причиной частого развития инфекционно-воспалительных заболеваний у преждевременно родившихся детей является несовершенство иммунной системы (Е.Ю.Вельтищев, 1993).

Фагоцитоз, как наиболее древняя и филогенетически устойчивая система зашиты, лежит в основе защитной реакции высшего типа (I.Olson, et al., 1980; А.Н.Маянский с соавт., 1983). Нейтрофильные гра-нулоциты - микрофаги, первыми вступают в контакт с чужеродными продуктами, поступающими в организм. Особенно ярко их фагоцитарная функция проявляется в иммунном ответе на микробные агенты (В.А.Таболин с соавт., 1986; Т.Э.Пахальянц, 1989; М.Н.Якушенко с соавт., 1993). Она является первой линией иммунитета, от состояния которой зависит продукция гуморальных специфических антител и жизнеспособность организма в целом (И.В.Нестерова, 1980; Т.П.Цыганкова, 1987). Не подлежит сомнению важность, а в ряде случаев решающая роль нейтрофилов в обеспечении противоинфекционной резистентности организма (Б.С.Нагоев, 1986; И.П.Минков с соавт., 1989).

Процесс фагоцитоза в онтогенезе изучался некоторыми исследователями (Т.М.Мячкина, 1986; Т.К..Набухотный с соавт., 1989; M.E.Miller, 1979). Однако, их работы ограничивались изучением поглотительной способности, завершенности фагоцитоза и имели достаточно противоречивый характер.

Достаточная зрелость процессов адаптации на клеточном и мембранном уровне является одним из основных условий нормального роста и развития новорожденного. От интенсивности метаболической модификации мембран, их способности к быстрой перестройке во многом зависит становление функций органов и систем организма. Новым направлением в изучении функционального потенциала системы фагоцитоза явилось исследование специфической мембранной рецепции (А.Н.Маянский с соавт., 1993; S.M.Algarra et al., 1986). Рецепторный аппарат следует рассматривать как чувствительный показатель зрелости и потенциала реактивности фагоцитарных клеток (А.Н.Маянский с соавт., 1983). Специфическая рецепция может служить индикатором не только адгезивной способности гранулоцитов, но характеризует последующие стадии фагоцитоза - поглощение и внутриклеточный киллинг (С.М.Гордиенко, 1984; K.Kabayaski et al.,1984).

Влияние адренокортикотропного и глюкокортикоидных гормонов на иммунологические процессы представляет большой теоретический и практический интерес (С.И.Рябов с соавт., 1961; Г.А.Бассалыго,

1973). Хорошо изучено действие глюкокортикоидов на миграцию, пролиферацию и функции лимфоцитов и их отдельных популяций (Е.А.Корнева с соавт., 1978; В.Ф.Чебаторев, 1979). Значительно менее исследовано действие этих гормонов на функциональное состояние фагоцитирующих клеток - нейтрофилов и макрофагов, которые не только имеют значение эффекторов, но и играют ведущую роль в регуляции иммунных процессов.

Вегетативная нервная система способна регулировать активность поглотительной стадии фагоцитоза и приводить ее интенсивность в соответствие с изменениями условий внешней и внутренней среды организма (Г.А.Самсыгина, 1990). Обнаружено влияние медиаторов и веге-тотропных веществ на переваривающую стадию фагоцитоза лейкоцитов взрослого организма (А.Д.Адо, 1961; Илсккг, 1969). Влияние нервной системы на фагоцитарную деятельность осуществляется благодаря чувствительности лейкоцитов к адренергическим воздействиям, стимулирующим фагоцитарную функцию, за счет тормозящего влияния на освобождение лизосомальных энзимов, и к холинергическим воздействиям, оказывающим на фагоцитарную функцию тормозящее влияние, стимулируя освобождение энзимов (В.А.Алмазов, 1979; Ь.^пагто, 1974).

У недоношенных детей до настоящего времени недостаточно изучена функциональная активность нейтрофилов как наиболее важного клеточного фактора неспецифической резистентности орг анизма, в том числе функциональное состояние рецепторной активности клеток. Это явилось обоснованием для проведения настоящего исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ Целью работы явилась клинико-патогене-тическая оценка функционально-метаболической активности нейтро-фнльных гранулоцитов и становления специфической мембранной рецепции у недоношенных детей.

Для достижения указанной цепи были поставлены следующие задачи:

1. Выявить особенности функции микробицидной системы нейтрофилов у новорожденных детей в зависимости от степени недоношенности, воздействия на них неблагоприятных перинатальных факторов и некоторых патологических состояний и заболеваний.

2. Определить содержание нейтральных липидов и фосфолипидов в нейтрофилах у детей соответственно степени недоношенности, воздействия неблагоприятных перинатальных факторов, патологических состояний и заболеваний.

3. Сопоставить показатели функциональной активности нейтрофилов у недоношенных детей и их матерей.

4. Определить чувствительность нейтрофилов к глюкокортикоид-ным гормонам, (3-агонистам и (3-блокаторам у недоношенных новорожденных в зависимости от степени недоношенности и их возраста.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые проведено комплексное изучение функциональной и мегаболической активности ней-трофилов и становление специфической мембранной рецепции клеток у недоношенных детей. Выявлена зависимость изменений функционального состояния нейтрофилов от степени недоношенности новорожденного ребенка. Установлено влияние гестозов, анемий и острьис ресгшраторно-вирусных заболеваний, перенесенных во время беременности, длительного безводного периода, операции кесарево сечение, а также перинатальных поражений центральной нервной системы и коныогационных желтух; на функциональную и метаболическую активность гранулоцитов. При рождении функциональное состояние нейтрофилов недоношенного ребенка и матери находилось в тесной зависимости; с конца раннего неонатального периода начинается формирование самостоятельной системы защиты недоношенного ребенка. Впервые у недоношенных детей определено влияние гшококорткоидных гормонов, р-агонистов и Р-блокаторов на компоненты микробицидной системы, пластического и энергетического резерва нейтро-фила и выявлены особенности чувствительности клеток в зависимости от степени недоношенности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Нарушения функ ционалъной активности нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови, выявленные у недоношенных детей, родившихся у матерей с поздним гестозом, анемией и острыми респираторно-вирусными заболеваниями, перенесенными во время беременности, а также у детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы, врожденными пороками сердца и коныогационными желтухами 3 степени указывают на необходимость выделения их в группу "высокого" риска по развитию инфекционных заболеваний. Использованные в работе цитохимические методы исследования нейтрофилов могут быть рекомендованы для практического применения в качестве дополнительных критериев оценки функционального состояния недоношенных детей.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Результаты диссертационного исследования внедрены в практику Республиканской детской клинической больницы, г. Нальчик. Полученные данные используются в учебном процессе кафедры детских болезней, акушерства и гинекологии Кабардино-Балкарского государственного университета.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ. На первом месяце жизни у недоношенных детей происходят значительные изменения функционально - метаболической активности нейтрофилов в периферической крови, проявляющиеся снижением активности миелопероксидазы, содержания катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов к 10 дню жизни. Угнетение функциональной активности гранулоцитов находится в прямой зависимости от степени недоношенности. Нарушения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови

выявлены у недоношенных детей, родившихся у матерей с поздним гесто-зом, анемией и острыми респираторно-вирусными заболеваниями, перенесенными во время беременности, а также у детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы, врожденными пороками сердца и коньтогационньми желтухами 3 степени.

ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. По теме диссертации опубликованы 4 научные работы, отражающие ее основное содержание.

Результаты диссертационного исследования доложены на межвузовской научно-практической конференции молодых ученых, г.Нальчик, 1997; научно-практической конференции Республиканской детской клинической больницы, г. Нальчик, 1998; конференции молодых ученых Кабардино-Балкарского госуниверситета, 1998.

Диссертация апробирована на межкафедральной конференции ' кафедры детских болезней, акушерства и гинекологии и госпитальной терапии Кабардино-Балкарского госуниверситета, 1998.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 182 листах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя лищэатуры, приложения. Работа иллюстрирована 35 таблицами и 30 рисунками. Список, литературы включает 204 источников, го них 139 отечественных и 65 иностранных. Работа является частью общекафедральной темы "Патология женщин и здоровье детей: влияние национальных особенностей и факторов внешней среды на формирование преморбидных состояний; прогнозирование и ранняя профилактика болезней матери и ребенка".

Номер государственной регистрации 01.91.0044704.

Диссертация выполнена на кафедре детских болезней, акушерства и гинекологии (заведующий - доктор медицинских наук, профессор М.Н.Якушенко) Кабардино-Балкарского государственного университета (ректор - доктор технических наук, профессор Б.С.Карамурзов), на базе Республиканской детской клинической больницы МЗ КБР (главный врач - М.М.Эльчепаров) и Республиканского перинатального центра (главный врач - М.М.Темботова).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Под наблюдением находилось 185 новорожденных недоношенных детей. По степени недоношенности дети распределялись следующим образом: с I степенью недоношенности - 94 ребенка (50,8%), со II - 66 (35,7%), с III-IV степенью - 25 (13,5%). Всего обследовано 99 девочек (53,5%) и 86 мальчиков (46,5%).

Во время беременности 32 женщины (17,3%) перенесли острое респи-раторно-вирусное заболевание. Анемия беременной диагностирована в 25

случаях (13,5%). Настоящая беременность у 89 женщин (48,1%) протекала с токсикозом: из них в 49 случаях (26,5%) выявлена особо тяжелая степень нефропатии. Почти 90,0% преждевременных родов были осложненными; наиболее часто отмечались длительный безводный период (25,4), быстрые и стремительные роды (26,5%), кесарево сечение (10, 3%), слабость родовых сил (5,9%), тугое обвитие пуповины вокруг шеи (4,3%) преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты (3,2%), тазовое и ягодичное предлежание (3,8%), многоводье (2,2%).

С перинатальными поражениями центральной нервной системы было 154 новорожденных (83,2%), в 57 случаях (37,0%) отмечено сочетание поражений краниального отдела центральной нервной системы со спиналь-ными расстройствами. Поражение центральной нервной системы проявлялось синдромом нервно-рефлекторной гипервозбудимости у 56 детей (36,4%), внутричерепной гилертензией у 65 новорожденных (42,2%), гкпер-тензионно-гидроцефальным синдромом у 8 новорожденных (5,2%), судорожным синдромом в 5 случаях (3,25%), синдромом угнетения у 16 (10,39%) детей, синдромом прекоматозного состояния в 3 случаях (1,95%).

Из 117 детей (63,3%) с конъюгационной желтухой у 30 новорожденных (25,6%) отмечалась тяжелая форма, в 57 случаях выявлялась желтуха средней тяжести. У 24 (13,%) новорожденных диагностирован врожденный порок сердца. Локализованная гнойная инфекция выявлена у 58 (31,4%) детей.

Для контроля обследовано 28 здоровых доношенных новорожденных детей в первые сутки жизни. Из них 15 мальчиков и 13 девочек. Параллельно с 30 недоношенными новорожденными нами наблюдались их матери.

Состояние функции нейтрофилов выявлялось путем определения активности миелопероксидазы, содержания катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов. При этом использованы следующие методики: активность миелопероксидазы выявлялась по методике Гре-хема-Кнолтя; содержание катионных белков - по Шубичу; содержание нейтральных липидов определялось по методике Гольдмана, фосфолипидов - при окраске Суданом черным (В.В.Меньшиков, 1987). Содержание исследуемого ингредиента клетки, определяемого цитохимическим способом, выражалось в виде среднего цитохимического коэффициента по Astaldi и Verga (1957).

Новым направлением в изучении функционального потенциала системы фагоцитоза явилось исследование специфической мембранной рецепции, рассматриваемое как чувствительный показатель зрелости и потенциала реактивности фагоцитарных клеток (А.Н.Маянский с соавт.1983). С этой целью в цельную капиллярную кровь добавляли гидрокортизон, адреналин и обзидан в концентрации 1: 5000, инкубировали в термостате в течение 20 минут при температуре 37°С, после чего готовились мазки, которые окрашивались по вышеназванным методикам.

Полученные данные подвергнуты математической обработке методом вариационной статистики с вычислением коэффициента корреляции и построением гистограмм. Достоверность различия средних цитохимических коэффициентов оценивалась по критерию Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В первые сутки жизни активность миелопероксидазы нейтрофи-лов зависела от гестационного возраста и была достоверно выше (р < 0.05) у доношенных (средний цитохимический коэффициент составил 2.31 + 0.13) и у детей с I степенью недоношенности (2.20 ± 0.13), чем у глубоконедоношенных новорожденных (1.84 ±0.07). Количество пе-роксидазоотрицатеяьных клеток у детей с Ш-1У степенью недоношенности было более чем в 2 раза больше, а клеток с высоким содержанием значительно меньше и составило 24.0%. К 1 -ой декаде жизни у всех недоношенных отмечается снижение уровня фермента с последующим увеличением на 20 сутки. К концу периода ранней адаптации у новорожденных с I степенью недоношенности тенденция к увеличению активности миелопероксидазы сохранялась, тогда как у детей со II и Ш-ГУ степенями недоношенности отмечалось некоторое ее уменьшение, из-за увеличения пероксидазонегативных клеток.

Динамика активности миелопероксидазы у недоношенных детей свидетельствует об особенностях функции нейтрофилов, так как их поглотительная и переваривающая способность связана с содержанием в них данного фермента. Явный дефицит миелопероксидазы у глубоконедоношенных детей, как и отрицательная динамика ее к концу раннего неонатального периода, могут рассматриваться как одно из проявлений этимологической незрелости гранулоцитов (Н.М.Бережная, 1983, А.Н.Маянский, 1993, Л.С.Персианинов с соавторами, 1971, М.Е.ВеМи^ е! а1., 1979).

Угнетение активности миелопероксидазы (р < 0.05) в первые дни жизни наблюдалось у недоношенных детей, родившихся у матерей с токсикозом второй половины беременности (средний цитохимический коэффициент равен 1.50 ± 0.08) и путем кесарева сечения. Следовательно, эти осложнения беременности и родов неблагоприятно влияют на функциональное состояние нейтрофилов у плода и новорожденного недоношенного ребенка и являются причиной недостаточности интралей-коцитарной микробицидной системы.

Содержание катионного белка в первые сутки жизни было достоверно выше (р < 0.05) у доношенных (1.51 ± 0.08) и у новорожденных с I степенью (1.48 ± 0.11), чем у детей со И (1.16 ±0.07) и ИЫУ(1.12 ± 0.11) степенями недоношенности. В дальнейшем у недоношенных детей уровень содержания катионного белка претерпевал определенные изменения, выражающиеся в снижении его к 10 дням жизни, тем более значи-

тельнее, чем меньше степень недоношенности с последующим повышением исследуемого показателя на протяжении периода исследования. Динамика изменений содержания исследуемого показателя указывает иа напряженность процессов лизосомальной секреции в период адаптации к внеутробной жизни, так как переваривающая функция фагоцитов находится в прямой зависимости от его содержания (Б.С.Нагоев, 1982, В.Е.Пигаревский, 1982).

Значительное снижение (р < 0.05) содержания лизосомальных кати-онных белков, преимущественно за счет увеличения протеинотрицательных клеток, указывающее на морфо-функциональную незрелость нейтрофиль-ных гранулоцитов, наблюдалось на протяжении всего неонатального периода у детей, родившихся у матерей страдавших поздним токсикозом и анемией во время беременности, а также у детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы и врожденными пороками сердца.

Таким образом, бактерицидная система нейтрофилов новорожденных детей при рождении характеризовалась высокой активностью миеяо-пероксидазы и содержанием катионного белка у доношенных детей и у детей с I степенью недоношенности. В раннем неонатальном периоде основные компоненты микробицидной системы клеток уменьшались; к концу периода новорожденности их уровень вновь повышался, активность миелопе-роксидазы и содержание катионного белка в нейтрофилах становились одинаковыми независимо от степени недоношенности. На эти показатели неблагоприятно влияли токсикоз П половины беременности, анемия беременной, операция кесарево сечение, перинатальные поражения центральной нервной системы, врожденные пороки сердца.

У недоношенных детей выявлялись специфические признаки состояния энергетического и пластического резерва нейтрофилов. Наибольшее содержание нейтральных липидов выявлено в первые сутки жизни. При этом, у доношенных новорожденных содержание изучаемого показателя (2.23 ± 0.09) превышало его значения у недоношенных. Содержание нейтральных липидов снижалось с нарастанием степени недоношенности, однако, даже у детей с Ш-ГУ степенью недоношенности значительной разницы по сравнению с доношенными новорожденными не выявлено. К 10 дню у всех обследованных детей резко возросло число липидотрицательных клеток, средний цитохимический коэффициент содержания нейтральных липидов значительно уменьшатся (р < 0.05) с последующим его увеличением на 20 день жизни. У глубоконедоношенных новорожденных, как и у детей со II степенью недоношенности, после незначительного увеличения содержания нейтральных липидов к 20 дням, наблюдалось его снижение в возрасте 1 месяца. Средний цитохимический коэффициент содержания нейтральных липидов в нейтрофилах детей с I степенью недоношенности к концу неонатального периода составил 1.71+0.05, у детей со II степенью -

1.60 ± 0.06, а у глубоконедоношенных. - 1.57 ±0.11. Можно полагать, что в процессе адаптационной перестройки организма недоношенного ребенка развивается количественный дефицит энергетического и пластического потенциала клеток (Б.Я.Резник с соавт., 1990).

Содержание фосфолипидов в нейтрофилах в первые сутки жизни у глубоконедоношенных новорожденных было достоверно ниже, чем у доношенных детей, а также у детей с I и II степенями недоношенности (р < 0.01) за счет уменьшения числа нейтрофилов с высоким уровнем фосфолипидов примерно в 3 раза. К десятому дню жизни у всех обследованных детей уровень изучаемого показателя значительно снизился с последующей тенденцией к их увеличению на 20 сутки жизни и восстановлением первоначального значения к концу неонатального периода у всех детей. При этом, до 20 дней жизни в нейтрофилах детей с ПЫЛ' степенью недоношенности наблюдался наиболее низкий уровень фосфолипидов (средний цитохимический коэффициент фосфолипидов у глубоконедоношенных в 1 сутки жизни составил 1.84 ±0.07, на 10-й день - 1.48 ±0.10).

Снижение уровня фосфолипидов в нейтрофилах и в меньшей степени нейтральных липидов у детей с III-IV степенью недоношенности, являющихся главным источником энергетического и пластического резерва клетки и выполняющих транспортную роль, представляющих собой основной и главный компонент клеточных мембран, от состояния которых зависит жизнеспособность и функциональная активность клетки, свидетельствуют о функциональной недостаточности фагоцитов. Повышение уровня данных клеточных компонентов в неонатаяьном периоде является показателем приспособительной реакции организма ребенка (Ю.Е.Вельтшцев, 1982, С.Н.Пегрина, 1989, Ь.С.Мср1ш1 а а!., 1984).

Достоверно низкое (р < 0.05) содержание фосфолипидов в ней-трофильных гранулоцитах обнаружено у детей в возрасте 30 дней жизни, родившихся у матерей, страдавших анемией беременности (1.61 ± 0.13). Острые респираторно-вирусные инфекции, перенесенные во время беременности, вызывали уменьшение уровня фосфолипидов до 1.28 ± 0.10. Значительное снижение (р < 0.05) содержания изучаемого показателя отмечалось также и у новорожденных на фоне конъюгационной желтухи III степени (средний цитохимический коэффициент содержания фосфолипидов составил 1.35 ±0.08) с последующей его нормализацией по стиханию патологического процесса.

Таким образом, содержание пластического и энергетического материалов в нейтрофилах при рождении зависело от степени недоношенности новорожденных. В раннем неонатальном периоде уровень энергетического и пластического резерва нейтрофилов снижался с последующим его увеличением на протяжении периода исследования, более выраженным у новорожденных с I степенью, чем у детей со II и Ш-1У степенями недоношенности. К концу первого месяца жизни средние цито-

химические коэффициенты содержания фосфолипидов и нейтральных липидов значительно не отличались у всех обследованных детей. На эти показатели неблагоприятно влияют анемия беременной, острые респи-раторно-вирусные инфекции, перенесенные во время беременности, операция кесарево сечение, конъюгационная желтуха III степени.

Следовательно, на протяжении первого месяца жизни в нейтро-филах у недоношенных детей происходили определенные изменения содержания миелопероксидазы, катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов, характеризующие уровень адаптации этих детей к внеутробной жизни; они находились в прямой зависимости от степени недоношенности. При рождении ребенка с I степенью недоношенности функциональное состояние нейтрофила было таким же, как и у доношенных детей. С увеличением степени недоношенности содержание компонентов, характеризующих микробицидную систему и энергетический, пластический резерв нейтрофилов, уменьшалось, что указывало на снижение функционального состояния клеток, которые составляют основное эффекторное звено противоинфекционной защиты. Дефицит в клетке ферментов, катионных белков, липидов приводят к недостаточности противомикробной и противовирусной защиты (Е.Ю.Вельтшцев, 1993, А.Н.Маянский с соавт., 1983, М.Н.Якушенко, 1988).

Интенсивность внутриклеточного метаболизма лейкоцитов новорожденного определяется не только степенью недоношенности и состоянием здоровья ребенка, но и характером течения гестационного процесса (Р.Б.Верницкайте, 1983, Н.П.Шабалов с соавт., 1984, M.Luerti et al., 1984). На активность миелопероксидазы, содержание катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов в иейгрофилах детей при рождении, неблагоприятно влияли гестозы II половины беременности, анемия беременной, острые респираторно-вирусные заболевания, перенесенные во время беременности, операция кесарево сечение, перинатальные поражения центральной нервной системы, тяжелые конъюгационные желтухи. Восстановление показателей микробицидной и энергетической, пластической систем нейтрофила у этих детей было постепенным, уровень их не всегда достигал исходных величин к концу периода новорожденности.

Подтверждением функциональной полиморфности нейтрофилов в различных группах детей могут быть данные корреляционного анализа соотношения изучаемых параметров клетки. В первые сутки жизни у всех детей независимо от степени недоношенности активность миелопероксидазы прямо коррелировала с содержанием в этих клетках катионного белка. У детей с I степенью недоношенности отмечена тенденция к снижению силы связи с инверсией знака к 30 дням жизни. У детей со II и III-IV степенями недоношенности корреляционная зависимость между исследуемыми компонентами бактерицидной системы нейтрофилов в возрасте 10 дней отсутствовала с тенденцией, в последующем, к увеличению отрицательной связи.

Прямая положительная связь между содержанием нейтральных липидов и фосфолипидов в 1 -е сутки жизни была сильнее у доношенных детей и новорожденных с I степенью недоношенности. В дальнейшем сила связи ослабевала у детей с I и II степенями недоношенности, тогда как у глубоконедоношенных усиливалась. В результате корреляционная зависимость между исследуемыми показателями к 30 дням была тем значительнее, чем выше степень недоношенности, что возможно связано с напряжением метаболических процессов в клетках крови этих детей, в частности, с повышением энергетических затрат и развитием структурных мембранных перестроек и изменений в них.

Активность миелопероксидазы выявляло умеренную, прямую связь с содержанием нейтральных липидов у доношенных и детей с I степенью недоношенности в 1-е сутки жизни, тогда как у недоношенных со II и Ш-1У степенями взаимосвязь между исследуемыми значениями практически отсутствовала. В возрасте 10 дней у всех недоношенных детей появляется умеренная положительная связь с тенденцией к снижению до слабой у детей с I и II степенями недоношенности к 20 дням жизни. У глубоконедоношенных сила связи не изменяется и вероятно свидетельствует о происходящих сложных процессах перестройки метаболизма клегпси. В возрасте 1 месяца жизни у всех детей отмечается значительное уменьшение коэффициента корреляции с инверсией знака у новорожденных с I степенью недоношенности. Уменьшение корреляционной взаимосвязи, наблюдаемое у всех детей на протяжении первого месяца жизни, вероятно, связано с напряжением адаптационных процессов на клеточном уровне.

Между содержанием катионного белка и нейтральных липидов у новорожденных в 1-е сутки жизни выявлена отрицательная связь, умеренно выраженная у доношенных и глубоконедоношенных новорожденных и слабая у детей с I и II степенями недоношенности. Отмечаемая положительная связь между содержанием катионного белка и уровнем нейтральных липидов в возрасте 10 дней жизни была умеренной у детей с I степенью (г= +0.38) и слабой у новорожденных со II степенью недоношенности (г= +0.25). К 20 и 30 дням взаимное влияние между содержанием изучаемых показателей в нейтрофилах детей с I и II степенями недоношенности практически отсутствует. Изучение подобной зависимости у глубоконедоношенных новорожденных установило сохранение умеренной, обратной связи и при втором исследовании (г = - 0.46), с инверсией знака коэффициента корреляции на 20 сутки жизни. В возрасте 1 месяца, подобно новорожденным с I и II степенями недоношенности, корреляционная зависимость между наблюдаемыми показателями отсутствует.

Взаимная корреляция между активностью миелопероксидазы и уровнем фосфолипидов, отсутствовавшая в 1-е сутки жизни, была умеренно положительной у доношенных новорожденных. В возрасте 10 и 20

дней жизни у детей с I и II степенями недоношенности между исследуемыми показателями появилась слабая положительная корреляционная связь с увеличением силы взаимодействия до умеренной к 30 суткам жизни более выраженной у новорожденных с I степенью недоношенности (г= +0.54). Подобная корреляционная связь между изучаемыми компонентами нейтрофилов в группе детей с ПНУ степенями недоношенности практически отсутствовала на протяжении всего периода исследования и, вероятно, связана со слабой миелопероксидазной активностью у этих детей.

Следует полагать, что к концу первого месяца жизни происходила стабилизация функциональных и структурных связей между изучаемыми компонентами клетки, изменявшихся в процессе ранней адаптации к внеутробной жизни. Выявленные особенности количества, степени достоверности, направленности и знаковой принадлежности функциональных взаимосвязей характеризуют их потенциал в системе клеточной защиты.

Для объективной оценки функционального состояния нейтрофилов проведен сравнительный анализ цитохимических показателей гранулоци-тов в крови недоношенных детей и их матерей. В раннем неонаталыгом периоде у недоношенньгх детей активность миелопероксидазы была ниже (р < 0.01), чем у их матерей, в дальнейшем у детей с I степенью недоношенности выявлена четкая тенденция к повышению содержания фермента, что привело к концу первого месяца к сравнению этих значений. В группе новорожденных со II степенью недоношенности достоверная разница между активностью миелопероксидазы в нейтрофилах детей и их матд>ей сохранялась на протяжении неонатального периода.

Содержание катионного белка у новорожденных с I степенью недоношенности на протяжении всего периода исследования выявляло четкую тенденцию к повышению и не обнаруживало достоверной разницы с его значениями у матерей. У деггей со II степенью недоношенности в возрасте 10 дней жизни содержание катионного белка было значительно ниже (р < 0.05) (средний цитохимический коэффициент составил 0.86 ± 0.05), чем у матерей. Дальнейшее повышение уровня катионного белка у детей привело к сравнению этих показателей на 20 и 30 дни жизни новорожденных. Гистограмма содержания катионных белков характеризовалась наличием более, чем в два раза выше количества про-теинотрицательных клеток в нейтрофилах детей со II степенью недоношенности в возрасте 10 дней, чем у их матерей.

У детей с I и II степенями недоношенности содержание нейтральных липидов было достоверно ниже (р < 0.001), чем у их матерей. Тенденция к увеличению исследуемого показателя у детей с первой степенью недоношенности привела к его сравнению в возрасте 1 месяца жизни с уровнем нейтральных липидов у женщин. Гистограммы распреде-

ления нейтральных, липндов со II степенью недоношенности на протяжении периода исследования, а также у новорожденных с I степенью недоношенности до 30 дней жизни характеризовалось большим содержанием клеток с 0 и 1 степенью, а у матерей относительно высоким уровнем нейтрофилов со 2 и 3 степенью окраски.

Содержание фосфолипидов в крови детей с I степенью недоношенности соответствовало его уровню у женщин на протяжении всего периода наблюдения. Тогда как у новорожденных со II степенью недоношенности в возрасте 10 дней выявлено более низкое (р < 0.05) содержание фосфолипидов (1.60 ± 0.08) по сравнению с его содержанием у женщин.

Для оценки функциональных взаимосвязей между исследованными компонентами клетки проведено изучение их взаимной корреляции. Между активностью миелопероксидазы в нейтрофилах у недоношенных детей в раннем неонатальном периоде и у их матерей корреляционная связь отсутствовала.

Содержание катионного белка в нейтрофилах детей с I степенью недоношенности прямо коррелировало с его содержанием у матерей. В группе детей со II степенью недоношенности подобная зависимость обнаружила сильную отрицательную связь при I исследовании, свидетельствующую о напряженности процессов становления бактерицидной системы в раннем неонатальном периоде.

Корреляционная связь между содержанием нейтральных липидов у детей с I степенью недоношенности и у их матерей, отсутствовавшая при первом исследовании, увеличивалась на протяжении первого месяца жизни детей, что, вероятно, связано с адаптационными процессами, происходящими в нейтрофилах новорожденных, в частности с накоплением в клетках нейтральных липидов. Слабая обратная корреляционная связь между уровнями нейтральных липидов в крови со II степенью недоношенности и у их матерей при первом исследовании к концу неона-тального периода стала положительной.

Корреляционный анализ между содержанием фосфолипидов недоношенных детей и у их матерей выявил слабую положительную корреляционную зависимость при первом исследовании с возрастанием силы связи к концу I -го месяца жизни новорожденных.

Таким образом, корреляционная связь между основными компонентами микробицидной системы, а также пластическим и энергетическим резервом нейтрофилов у недоношенных детей и их матерей на протяжении периода наблюдения усиливается и находится в прямой зависимости от степени недоношенности, что является подтверждением возрастания резервных сил нейтрофилов, повышения активности бактерицидной системы и энергетического, пластического потенциалов нейтрофилов недоношенных детей и формированием самостоятельной системы защиты (Е.Ю.Вельтищев с соавт., 1982).

Состояние специфической мембранной рецепции определялось путем изучения влияния гидрокортизона, адреналина и обзидана на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов. Активность миелопфоксидазы у детей с I и II степенями недоношенности под влиянием гидрокортизона, адреналина и обзидана практически не изменялась. У детей с Ш-1У степенью недоношенности на протяжении всего неонатального периода выявлялась чувствительность нейтрофилов к гидрокортизону и обзидану, что проявлялось уменьшением в клетках содержания миеяопероксидазы.

Отсутствие заметного влияния гидрокортизона, адреналина и обзидана на пероксидазную активность нейтрофила у детей с I и II степ-нями недоношенности сопровождалось наличием умеренной и сильной положительной связи между исходной активностью миеяопероксидазы и ее содержанием в гидрокортизоновой пробе. Иные результаты получены у детей с Ш-1У степенью недоношенности, у которых определялась достоверная чувствительность глюкокортикоидных рецепторов и адре-норецепторов и их участие в регуляции миелопероксидазной системы. Полученные результаты могут свидетельствовать об особенностях функции миелопероксидазной. и адренорецепторной систем у плода в процессе внутриутробного развития и у недоношенного ребенка в зависимости от гестационного и постнатального возрастов (М.Н.Перцева, 1989, Р.КНай е1 а1., 1986), ■

У детей с I степенью недоношенности на 20 день жизни содержание катионных белков достоверно повышается (р < 0.05) в присутствии гидрокортизона и адреналина за счет увеличения числа протеинполо-жительных клеток, преимущественно с высоким и умеренным его уровнем, что, вероятно, связано с компенсаторной реакцией бактерицидной системы к воздействию глюкокортикоидного гормона и появление чувствительности исследуемого показателя к воздействию р-агониста. Увеличение уровня катионных белков отмечено в присутствии обзидана с 20 дня жизни, усиливающееся к первому месяцу жизни. Возрастание уровня катионного белка под влиянием гидрокортизона (р < 0.05) отмечено и у детей со II степенью недоношенности в возрасте 20 дней жизни. У глубоконедоношенных детей установлено снижение уровня катионных белков со значительным увеличением протеиннегативных нейтрофилов на фоне гидрокортизона, достоверное в возрасте 10 дней и под влиянием адреналина, достоверное в возрасте 30 дней жизни, что, вероятно, связано с морфо-функционалъной незрелостью бактерицидной системы у этих детей, ведущих к срыву адаптационных процессов. Содержание катионных белков у глубоконедоношенных новорожденных в присутствии обзидана за весь период исследования также сохраняло тенденцию к снижению.

Исходное содержание катионного бедка у недоношенных детей прямо коррелировало с его содержанием в присутствии обзидана. У всех детей независимо от степени недоношенности между уровнем катион-ных белков в адреналиновой и гидрокортизоновой, а также адреналиновой и обзидановой пробах выявляется разной степени выраженности прямая корреляционная связь.

Существенное влияние на уровень нейтральных липидов в ней-трофилах у всех детей независимо от степени недоношенности на первом месяце жизни оказывает гидрокортизон, вызывающий снижение их содержания. Изменения средних цитохимических показателей связано со значительным увеличением липидотрицательных клеток наряду со снижением числа нейтрофилов с умеренным его уровнем. Степень липоли-Тического эффекта гидрокортизона у всех недоношенных детей зависела от исходного уровня содержания нейтральных липидов в нейтрофилах. Можно полагать, что адреналин и обзидан не влияют на пластический резерв клетки: в наших пробах эти вещества не влияли на содержание нейтральных липидов в нейтрофиле.

Лилолитическое влияние на содержание фосфолипидов у детей независимо от степени недоношенности на протяжении 1-го месяца жизни оказывает гидрокортизон. Чувствительность Р-адренорецеп-торов нейтрофилов к адреналину, характеризующееся снижением уровня фосфолипидов (р < 0.05) отмечена только у детей с I степенью недоношенности, что возможно отражает степень морфо-функциональной зрелости нейтрофилов у этих детей. Следует полагать, что влияние обзидана, вызывающее падение уровня фосфолипидов (р < 0.05) у недоношенных детей, указывает на нарушение чувствительности адренорецеп-торной системы к р-блокатору.

Следовательно, можно полагать, что представленные данные свидетельствуют об особенностях регуляции бактерицидной системы ней-трофила у недоношенных детей; только при Ш-1У степени недоношенности выявлено влияние гидрокортизона на активность миелоперокси-дазы. Достоверного влияния на данную систему Р-агонистов и Р-блокаторов нами не выявлено. Существенное влияние на пластический и энергетический баланс клетки оказывал гидрокортизон: у всех недоношенных детей выявлено снижение содержания нейтральных липидов и фосфолипидов в нейтрофилах после инкубации с глкжокортикоидным гормоном. Наиболее выраженная степень липолитического эффекта обнаруживалась у детей с Ш-ГУ степенью недоношенности. Выявлено влияние на энфгетический и пластический резерв клетки адренерги-ческой системы в виде реакции нейтрофила на адреналин и обзидан.

Таким образом, на основании комплексного изучения функциональной и метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов выявлены существенные изменения неспецифической резистентности

организма недоношенного ребенка, более выраженные с нарастанием степени недоношенности. При этом, бактерицидная система нейтрофи-лов, а также морфологическая структура, включающая рецепторный аппарат у недоношенных детей в периоде новорожденности, характеризуется незрелостью, а в ряде случаев нарушением адекватной реакции на воздействие гидрокортизона, (5-агонистов и (3-блокаторов. Эти нарушения усугубляются перинатальными факторами: поздний токсикоз, анемия, острые респираторно-вирусные инфекции во время беременности, операция кесарево сечения, перинатальное поражение центральной нервной системы, врожденные пороки сердца, коныогационная желтуха 3 степени. Повышение резервных сил нейтрофипов, возрастание активности микробицидной системы и энергетического потенциала нейтро-филов к концу неонатального периода служат подтверждением произошедшей перестройки организма на клеточном уровне.

ВЫВОДЫ

1. Активность миелопероксидазы и содержание лизосомального ка-тионного белка, характеризующие бактерицидную систему ней-трофила, у детей при рождении находятся в прямой зависимости от степени недоношенности: у новорожденных с I степенью они соответствуют величине здоровых, при увеличении степени недоношенности - прогрессивно снижаются.

2. Величина активности миелопероксидазы и содержатся катионного белка в нейтрофилах у недоношенных детей в периоде новорожденности закономерно меняется: в раннем неонатальном периоде она снижается, в дальнейшем повышаясь, достигает исходных величин к концу периода новорожденности.

3. На функциональную активность нейтрофилов неблагоприятно влияют гестозы II половины беременности, анемия беременных, операция кесарево сечение, врожденные пороки сердца; активность миелопероксидазы и содержание катионного белка снижено при рождении ребенка, восстановление данных показателей идет медленно и не всегда они достигают исходных величин к концу периода новорожденности.

4. Содержание в нейтрофилах нейтральных липидов и фосфолипидов, характеризующих энергетический и пластический резерв клетки, при рождении зависит от степени недоношенности; уровень их снижается в раннем неонатальном периоде и не достигает исходного значения у большинства детей к концу первого месяца жизни.

5. На состояние энергетических и пластических процессов в нейтрофилах недоношенных детей неблагоприятно влияют гестозы II половины беременности, анемия беременной, острые респираторно-

вирусные заболевания, перенесенные во время беременности, рождение путем кесарево сечения, перинатальные поражения центральной нервной системы, тяжелые конъюгационные желтухи.

6. Наиболее неблагоприятные показатели микробицидной системы и энергетического резерва нейтрофилов выявлялось у детей с Ш-1V степенью недоношенности.

7. Активность миелопероксидазы, содержание катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов в нейтрофилах у недоношенных детей в раннем неонатальном периоде было ниже, чем у матерей, и находилось в прямой зависимости от степени недоношенности; к концу периода новорожденное™ наблюдалось повышение активности микробицидной системы и энергетического, пластического потенциала клетки, что характеризовало формирование самостоятельной системы защиты недоношенного ребенка

8. Выраженного влияния глюкокортикоидных гормонов, бета-агонистов и бета-блокаторов на содержание в нейтрофилах детей с недоношенностью 1 - II степени компонентов микробицидной системы не выявлено. У детей с Ш-ГУ степенью недоношенности определялась повышенная чувствительность клеток к гидрокортизону, что характеризовалось снижением в нейтрофиле активности миелопероксидазы и содержания катионного белка в первые 20 дней жизни ребенка.

9. Под влиянием гидрокортизона и обзидана выявлялось снижение содержания нейтральных лжщдов и фосфолипидов в нейтрофилах детей в периоде новорожденное™, независимо от степени недоношенности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение функционального состояния нейтрофилов у недоношенных детей может быть использовано для характеристики защитных сил организма.

2. Определение активности миелопероксидазы, содержания катионного бежа, нейтральных липидов и фосфолипидов у матерей является основой для прогноза состояния здоровья недоношенного ребенка.

3. Нарушения функциональной активности нейтрофильных грануло-цитов в периферической крови, выявленные у недоношенных детей, родившихся от матерей с поздним токсикозом, анемией и острыми респираторно-вирусными заболеваниями, перенесенными во время беременности, а ¡также у детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы, врожденными пороками сердца и конъюгационными желтухами 3 степени указывают на необходимость выделения их в группу "высокого" риска по развитию инфекционных заболеваний.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Цитохимические показатели нейтрофилов крови недоношенных детей // Сб. научных трудов "Актуальные вопросы педиатрии". -Нальчик, 1997.-С. 32 - 38.

2. Сравнительная характеристика цитохимических показателей нейтрофилов крови недоношенных детей и их матерей // Вестник КБГУ, серия медицинские науки, выпуск 3, - Нальчик, 1997. - С. 45 - 46.

3. Чувствительность нейтрофилов к гидрокортизону, адреналшгу и обзидану у недоношенных детей. // Тезисы докладов юбилейной научной конференции, посвященной 40-легию Кабардино-Балкарского госуниверситета "Вопросы теоретической и клинической медицины". -Нальчик, 1996.-С. 45 - 47.

4. Функцонально-метаболическая активность нейтрофильных гранулоцитов у недоношенных детей с коныогационными желтухами // Тезисы докладов юбилейной конференции, посвященной 40-летию Кабардино-Балкарского госуниверситета "Актуальные проблемы биологии, медицины и сельского хозяйства в исследованиях молодых ученых". - Нальчик, 1997. - С. 30.

В печать 25.09.98г. Печать офсетная. Гарнитура журнальная.

Формат 60x84 '/ц. Тираж 100 экз, Заказ > /2 е/0

Ротапринт КБГУ 360004, г. Нальчик, ул. Чернышевского, 173