Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Функциональное состояние нейроэндокринно-иммунной системы пациенток под влиянием гиперстимуляции в программе экстракорпорального оплодотворения

^ А. Минский ордена Трудового Красного Знамени

ч" государственный медицинский институт

#

^ УДК 618.177-089.888.11:616.43

Луцевич Наталия Евгеньевна

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙРОЭНДОКРИННО-ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПАЦИЕНТОК ПОД ВЛИЯНИЕМ ГИПЕРСТИМУЛЯЦИИ В ПРОГРАММЕ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ

14.00.01 - Акушерство и гинекология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Минск - 1997

Работа выполнена в Минском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте, Кильском университете (Германия).

Научный руководитель

Заслуженный деятель науки РБ, доктор медицинских наук, профессор, Академик Белорусской АМН, Герасимович Георгий Игнатьевич

Официальные оппоненты:

— заместитель по научной работе директора БелНИИ ОМД, доктор медицинских наук, профессор Зубович В. К.

— главный акушер-гинеколог РБ, кандидат медицинский наук, доцент, Михнюк Д. М.

Оппонирующая организация — Гродненский государственный

диссертаций Д.ОЗ. 18.01 в Минском государственном медицинском институте (220116, г. Минск, проспект Дзержинского, 83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Минского государственного медицинского института.

медицинскии институт

а

Защита состоится « / » июля 1997 г. в

на заседании совета по защите

Автореферат разослан «_» мая 1997 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций, доктор медицинских наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В каждой программе ЭКО-ПЭ отбор пациенток для гиперстимуляции, являющейся одним из важных звеньев этого метода лечения бесплодия, представляет собой важную проблему по трем причинам: 1. Отбор так называемых "poor responders" - пациенток, резистентных к терапии обычными дозами препаратов. Необходимость такого отбора до начала терапии диктуется высокой стоимостью препаратов, применяемых для гиперстимуляции, и в связи с этим нежелательностью применения пробных курсов терапии. 2. Отбор пациенток с гиперчувствительностью к обычным дозам препаратов для гипер-сгимуляции и риском возникновения потенциального опасного для жизни состояния - синдрома гиперстимуляции II и III степени, развивающегося в 4-23% всех циклов терапии. 3. Выбор надлежащей дозировки препарата в схеме гиперстимуляции для получения оптимального числа яйцеклеток (не более 9).

Поиску прогностических факторов для подобного отбора пациенток, прогнозированию исхода лечения, повышению эффективности терапии уделяется пристальное внимание (Аншина М.В., 1989).

В многочисленных работах указывается влияние возраста (Grosignani & Ragni, 1994, Segal & Casper, 1990), наличия аутоантител (Tung & Teuscher, 1995), латентной формы преждевременного истощения яичников (Tanbo et al., 1990), анатомических особенностей строения внутренних половых органов, в том числе "замороженного таза" (Imoedemhe, 1988), кист яичников (Thatcher et al., 1989), ожирения (Grosignani, 1994), курения на исход лечения. Непросто выделить единственный фактор, определяющий успех той или иной схемы стимуляции.

Пурификация в 1985 году ингибина-гликопротеина семейства трансформирующего фактора роста ß (TGF-ß) привело к целой серии исследований, посвященных использованию этого гормона в виде индекса прогноза (McLachlan et al., 1986, Buckler et al., 1991, Burger, 1993, Porchet et al., 1994). Однако, полученные данные были противоречивы, что связано, очевидно, с различием методов определения этого гормона в плазме крови (радиологический, биологический, иммунологический). В связи с разработкой в последние 3 года метода ELISA (Enzym-Linked-Sorbent-Immunoassay) для определения уровня ингибина, его относительной простотой и надежностью, появились новые перспективы для использования уровня ингибина в плазме крови в качестве прогностического индекса при отборе пациенток для терапии методом ЭКО-ПЭ.

Еще одной немаловажной проблемой не только технологии методов вспомогательной репродукции, но и терапии бесплодия в целом является проблема исследования канцерогенного эффекта препаратов, применяемых для лечения бесплодия, индукции овуляции и гиперстимуляции. Этой теме в последнее время посвящается возрастающее число работ в связи с расширением показаний для ЭКО-ПЭ, внедрением метода микроинъекций. Большинство исследований, од-

нако, носят характер эпидемиологических (Meirow & Schenker, 1996; Venn et al., 1995, Willemsem et al., 1993, Tarlatzis et ai., 1995).

Предположено, что персистирующая медикаментозная стимуляция яичников может иметь прямой канцерогенный эффект (Cohen, 1996). Данные, подтверждающие или опровергающие этот факт, являются крайне неоднозначными: так Whittemor (1994) определил риск развития пограничных опухолей яичников у женщин, принимающих препараты для индукции овуляции, равным 4. Относительный риск развития рака по данным Rössing et al. (1994) повышен у женщин, употребляющих кломифен цитрат более 12 циклов. Хотя Franzeschi et al.(l982) и Venn et al.(1995) не обнаружили подобного увеличения риска развития рака яичников при применении циклов стимуляции, во всех работах указывается на необходимость более детального изучения проблемы, а также на важность информирования пациенток, получающих препараты для терапии бесплодия.

Среди гипотез, объясняющих повышенный риск развития рака гениталий у пациенток, страдающих бесплодием (гормональная теория, генная теория, теория суперовуляции и индукции овуляции) в последнее время все большее внимание привлекает теория факторов роста. Вышеизложенное, а также тот факт, что гомеостаз яичников контролируется факторами роста, определяет изучение изменения уровня факторов роста под воздействием гиперстимуляции в качестве актуальной задачи.

Вследствие того, что проблема бесплодия является важной для Республики Беларусь (при резком падении рождаемости, одним из основных резервов улучшения демографической ситуации являются бесплодные пары), а Чернобыльская катастрофа наложила отпечаток на иммунный статус населения, изучение ней-роэндокринно-иммунного статуса пациенток под воздействием гиперстимуляции способствует решению одной из самых актуальных проблем репродуктивного здоровья населения Республики Беларусь.

Связь работы с крупнейшими научными программами и темами. В 1991 г. на VII Всемирном конгрессе по репродукции человека была введена концепция репродуктивного здоровья населения (Fatalla, 1991), дополняющая и расширяющая концепцию ВОЗ о здоровье человека, которая, в свою очередь, является основополагающей в глобальной программе ВОЗ "Здоровье для всех к 2000 году". В рамках этой программы действует важная подпрограмма "Безопасное материнство" (Sciarra, 1993), частью которой и является задача улучшения репродуктивного здоровья населения.

Поскольку метод ЭКО-ПЭ — это не только терапия бесплодия, но и возможность понимания процесса репродукции в целом, решение проблем, стоящих перед этой технологией, является частью решения глобальной программы ВОЗ.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилось выявление особенностей функционального состояния нейроэндокринно-иммунной системы пациенток, страдающих бесплодием, под воздействием медикаментозной гиперстиму-

J

ляции яичников в программе экстракорпорального оплодотворения, а также выявление прогностических показателей эффективности данного метода лечения.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи: 1. Изучить показатели состояния нейроэнокринно-иммунной системы в программе ЭКО у пациенток, резистентных к терапии, пациенток с риском гиперстимуляции и количеством извлеченных яйцеклеток более 9, а также у пациенток, адекватно отвечающих на гиперстимуляцию. 2. Изучить особенности состояния нейроэндок-ринно-иммунной системы пациенток при повторных циклах терапии в программе ЭКО. 3. Изучить показатели внутрифолликулярного гомеостаза яичников под воздействием гиперстимуляции и его влияние на качество яйцеклеток, развитие эмбриона и его последующую имплантацию. 4. Экспериментально проверить полученные in vivo результаты на модели клеток гранулезы in vitro.

Научная новизна результатов. На основании обследования 87 пациенток, страдающих бесплодием и находящихся на лечении методом ЭКО-ПЭ, дано дальнейшее развитие гипотезы о роли ингибина как индекса функции яичников, впервые установлено пороговое количество данного гормона в крови, позволяющее проводить отбор пациенток до начала терапии.

Исследование нейроэндокрино-иммунологического статуса 161 пациентки способствует уточнению теории о роли факторов роста в функции яичников. Впервые установлено содержание TGFfíi, TGFp2 в фолликулярной жидкости и плазме крови под воздействием режима гиперстимуляции. Анализ полученных данных выявил повышение количества TGFp2 в фолликулярной жидкости у пациенток, получающих второй цикл терапии.

Вышеуказанные исследования проливают свет на особенности иммунологического статуса пациенток в программе ЭКО-ПЭ, позволяют выявить изменения содержания факторов опухолевого роста под воздействием терапии, что является важным в свете вопроса о взаимозависимости рака гениталий и бесплодия. Кроме того, впервые экспериментально проверено влияние полученных концентраций TGFPi и TGFfh на гормонопродуцирующую функцию клеток гранулезы.

Практическая значимость полученных результатов. Определены показатели уровней ингибина, эстрадиола и ЛГ в плазме крови женщин, страдающих бесплодием до и на протяжении терапии ЭКО-ПЭ. Определено нормативное содержание ингибина как прогностического индекса для отбора пациенток до начала терапии, а также показано преимущество определения ингибина в плазме крови при проведении лечения как более чувствительного показателя по сравнению с применяемым в настоящее время эстрадиолом. Показано изменение показателей иммунологического статуса, в частности, факторов, контролирующих опухолевый рост, под воздействием циклов гиперстимуляции.

Экономическая значимость полученных результатов. Применение ингибина в качестве индекса прогноза и мониторинга при медикаментозной контролируе-

мой гиперстимуляции яичников в программе ЭКО-ПЭ позволит выделить группу пациенток, неадекватно отвечающих на стимуляцию, исключив их из дорогостоящего «длинного» протокола гиперстимуляции. Применение уровня ингиби-на в качестве мониторинга пациенток позволит раньше распознать синдром гиперстимуляции II степени, что позволит провести профилактику данного осложнения и исключить затраты на терапию данного синдрома.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту. Совокупность проведенных исследований и обобщение литературных данных позволяет сформулировать следующие положения:

- определение уровня ингибина в плазме крови пациенток при терапии методом экстракорпорального оплодотворения является более надежным для прогноза и мониторинга, чем определение эстрадиола;

- показатели иммунологического статуса изменяются под воздействием повторных циклов гиперстимуляции программы ЭКО-ПЭ;

- факторы, контролирующие опухолевый рост, играют важную роль в пара-и аутокринной регуляции функции яичников.

Личный вклад соискателя. Автором лично проведено обследование, терапия пациенток, пункция фолликулов и пересадка эмбриона в программе ЭКО-ПЭ, а также забор материалов для исследования, определение уровней ингибина, TGFßi, TGFß2 методом ELISA, оценка качества яйцеклеток и эмбриона. В соавторстве в профессором Lju (Китай) проведены эксперименты по культуре клеток гранулезы.

Опубликованность результатов. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи, тезисы 7 докладов.

Апробация результатов диссертации. Материалы диссертации доложены на всемирном конгрессе по репродукции человека (Филадельфия, 1996), ежегодном конгрессе ESHRE (Гамбург, 1995), Встрече трех стран пр проблеме бесплодия (Иннсбрук, 1995), Международной конференции по регуляции функции яичников (Флорида, 1996), Всемирном съезде по проблемам бесплодия (Париж, 1995), VI съезде акушерсЕ г;:;:сколоюв и неонатологов Беларуси.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов и указателя литературы, включающего 257 работ. Изложена на У// страницах текста, иллюстрирована 26 таблицами, 50 рисунками.

ОБЩАЯ МЕТОДИКА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В первую часть исследования было включено 87 пациенток, имеющих нор-моовуляторный цикл, возраст от 20 до 42 лет и находящихся в программе терапии ЭКО-ПЭ. Гормональная стимуляция всех пациенток проводилась согласно «длинному протоколу» программированного извлечения яйцеклеток.

1. Медикаментозная супрессия гипофиза («с!о\уп»-регуляция) достигалась путем подкожного ежедневного введения 100-500 мг DTRP-GL («Decapeptyl»,

Ferring, ФРГ) или путем трансназального применения нафарелина ацетата («Synarela», Syntex, ФРГ). 80 мг/сутки, которые назначались начиная с 21-го дня естественного менструального цикла до дня назначения хорионического гонадо-тропина (ХГТ) (Леонов и др., 1990).

2. Контролируемая гиперстимуляция проводилась препаратами фолликуло-стимулирующего гормона (ФСГ или человеческого менопаузального гонадо-тропина (ЧМГ) («Fertinorm», Serono, Швеция; «Menogon», Ferring, ФРГ), которые вводились со второго дня предполагаемого менструального цикла. Забор крови осуществлялся на 21-й день менструального цикла (до начала стимуляции), на 2-й день предполагаемого менструального цикла (день 0), а также 6-й, 10-й дни стимуляции, день назначения ХГТ и день пункции фолликула. Образцы крови центрифугировались (1400 g в течение 10 мин.) для удаления клеточных фрагментов и хранились при

Средняя доза ХГТ составляла 10000 ME, в случае угрозы развития синдрома гиперстимуляции - снижалась до 5000 ME.

Пункция яичников проводилась через 34-36 часов после инъекции ХГТ. Для пункции применялся влагалищный датчик 7,5-5 МГц, аппарат «Sonoline SL-1» («Siemens») с автоматической пункционной насадкой (Labotec, Gottingen, ФРГ)-Промывание фолликула производилось 1-10 раз раствором HAM'S F-10, подогретым до температуры тела. Процедура выполнялась под интравенозной анестезией.

Лабораторные процедуры поиска и инсеминации яйцеклеток, оценки качества яйцеклеток и эмбрионов производились согласно общепринятому стандарту для лабораторий ЭКО-ПЭ.

Перенос эмбриона осуществлялся при помощи катетера Wallace (Wallace Ltd.). Максимальное число пересаженных эмбрионов равнялось 3.

После манипуляции переноса эмбриона производился ультразвуковой и гормональный мониторинг, а также дополнительный забор крови в течение 14 дней: 4-й, 8-й, 14-й день. Уровень ß-ХГТ в плазме крови определялся на 14-й день после переноса эмбриона.

Было выделено 3 группы пациенток:

1. «Poor responden) (n=2I), соответствующие критериям: менее 3 извлеченных яйцеклеток; уровень Ег в момент назначения ХГТ < 1000 пг/мл.

2. Пациентки с нормальным уровнем ответа на стимуляцию (п=45).

3. Пациентки с риском гиперстимуляции и количеством извлеченных яйцеклеток > 10 (п=21), имеющие: уровень эстрадиола на момент назначения ХГТ > 2500 пг/мл; число фолликулов диаметром > 1,6 см — 20 и более (Schenker, 1993).

Вторая часть работы заключалась в исследовании плазмы крови в день ФП, фолликулярной жидкости, забор которой производился в течение пункции (без добавления промывной жидкости). При наличии яйцеклетки последняя помещалась в отдельную пробирку, в последующем регистрировалось наличие фертили-

зации и качество эмбриона (при этом яйцеклетки, подвергшиеся микроманипуляции, не исследовались).

Фолликулярная жидкость и кровь центрифугировались (1400 g, 10 минут) с целью удаления клеточных элементов и хранились при температуре -70°С до дальнейшего исследования уровней Е2 и ингибина. Для определения уровней TGFßi и TGFß2 образцы фолликулярной жидкости хранились при температуре -4°С в течение 12 часов, затем подвергались центрифугированию и дальнейшему хранению при температуре -70°С.

Исследование проводилось в группе, состоящей из 161 пациентки.

При анализе данных учитывались следующие параметры: возраст, количество предыдущих циклов стимуляции, диагноз, наличие или отсутствие яйцеклетки в фолликулярной жидкости, качество последующего эмбриона, наличие или отсутствие беременности (по данным показателей концентрации ß-ХГТ в плазме крови).

Проанализированы также взаимозависимость параметров нейроэндокрин-ной и иммунной системы в фолликулярной жидкости (Е:, Ингибин, TGFßi,

TGFßO-

Ингибин. При определении использовался метод EASIA (энзимосвязываю-щий иммуносорбентный метод). При этом употреблялся набор фирмы Medgenix (Бельгия), позволяющий измерять количество а-ингибина при минимальной концентрации 0,1 ЕД/мл, где 1 ЕД = 143 Е стандартного свиного ингибина MRC 86/690 (ВОЗ, 1989).

TGFßi. Метод определения (R&D System, США) также основан на применении ELISA технологии. Чувствительность метода 5 мг/мл, спектр исследования: от 5 до 2000 пг/мл.

TGFßj. Принцип метода (R&D System, США) не отличается от такового для TGFßi, дополнительной ступенью является диализ проб в течение 24-36 часов при температуре -4°С, для чего были использованы микропористые шланги, а жидкость для диализа (физиологический раствор) менялась каждые 4 часа. Чувствительность метода составляет 7,0 пг/мл, а границы находятся в пределах от 7 до 2000 пг/мл.

Эстрадиол. Измерение проводилось при помощи рутинной технологии радиоиммунологического исследования (Serono диагностика, Германия) в лаборатории радиоизотопных методов исследования. Чувствительность метода - 5 пг/мл.

Третья часть исследований заключалась в культивировании клеток грануле-зы. После пункции фолликула и извлечения яйцеклетки оставшийся пунктат немедленно центрифугировался (350 g, 10 мин.), супернатант удалялся, оставшаяся смесь подвергалась десуспензии в 5-10 мл среды HAM'S F-10 (Sigma, США) с добавлением глютамина (2 mM, Sigma, США), пенициллина (100 ЕД/мл, Sigma, США), стрептомицина (100 пг/мл, Sigma, США).

Для удаления эритроцитов суспензия клеток наслаивалась на 64% градиент Перколла (Sigma, США), 36% D-Hank's сбалансированный солевой раствор (DHBSS) до 5 мл суспензии на градиент. Полученная смесь подвергалась центрифугированию 450 g в течение 15 минут при комнатной температуре. Клетки удалялись с границы Перколла, дважды промывались с добавлением среды HAM'S F-10. Затем производилась дисперсия клеток при помощи коллагеназы (0,1%, Sigma, США) в течение 30 минут и последующее (дважды) промывание при добавлении HAM'S F-10.

К суспензии клеток в 30 мл DHBSS добавлялся CD45 (50 мл, Dynal Jnc), полученная смесь инкубировалась в течение 30 минут при -4°С в магнитной центрифуге с целью удаления макрофагов и лимфоцитов. Затем клетки промывались трижды со средой HAM'S F-10.

Количество и жизнеспособность клеток было исследовано при помощи Trypan blue. Жизнеспособность клеток составила 60-70% для культуры клеток.

Клетки культивировались при плотности 2104 / на микроемкость, в среде, не содержащей протеинов, при разведениях TGFPi и TGFPi, основанных на полученных in vivo данных: 500, 1000, 2000, 4000, 8000 пг/мл для TGF0i (Sigma, США) и 15, 30, 60, 120, 240 пг/мл дня TGF(32 (Sigma, США). После 72 часов культивирования среда хранилась при температуре -70°С для дальнейшего исследования содержания эстрадиола и ингибина.

Обработка статистических данных производилась при помощи программы EXCEL с применением t-Student теста, коэффициентов корреляции по Фишеру и Пирсону. Графические данные представлены с помощью компьютерных программ EXCEL, Paint Brush, Harward Grafic.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Динамика изменений уровня ингибина в плазме крови в течение фолликулярной и лютеиновой фаз гиперстимуляиии программы ЭКО-ПЭ fpuc. 1 ). Анализ полученных данных показал, что среди трех групп пациенток 1 - «poor responders», 2 - с нормальным ответом на стимуляцию, 3-е риском развития синдрома гиперстимуляции, лишь пациентки, плохо поддающиеся стимуляции, имели на 21-й день естественного менструального цикла, до начала терапии, достоверно более высокий уровень ингибина (2,75 ЕД/мл, р<0,05), чем пациентки двух остальных групп.

Подобная разница не была обнаружена после медикаментозной супрессии гипофиза, на 2-й день предполагаемого менструального цикла, а также на 5-й день гиперстимуляции. Достоверное (р<0,05) различие в уровнях ингибина на 10-й день стимуляции было обнаружено между группами «poor responders» и пациентками с риском гиперстимуляции.

В день назначения ХГТ уровень ингибина был достоверно (р<0,01) ниже в группе не отвечающих на стимуляцию пациенток по сравнению с группой риска

•I » 5 7 » I» ХГГ ФП ПЭ 4 7 8 13

Дик пакрстмыуляош в прочимые ЭКО-ПЭ

Рнс. I. Изменение уровня интбина в плазме крови трех групп пациентов при терапии ЭКО-ПЭ

развития гиперстимуляции.

В день пункции фолликулов все три группы имели достоверно различный уровень ингибина плазмы с более высоким уровнем в группе пациенток, плохо отвечающих на стимуляцию гонадотропинами.

После подсадки эмбриона (день 4, 8) уровни ингибина в плазме крови достоверно не отличались между тремя группами пациенток. Разница в концентрации гормона отмечена на 14-й день: у пациенток с риском гиперстимуляции концентрация была достоверно ниже (р<0,05), чем в группе нормально и слабо отвечающих на стимуляцию.

Динамика изменения уровня эстрадиола в плазме куови в течение фолликулярной и лютеиновой Фаз гиперстимуляиии программы ЭКО-ПЭ. Анализ данных показывает, что только в день назначения ХГТ и в день пункции яичников уровень эстрадиола в плазме крови трех групп пациенток был достоверно различен с более высоким уровнем у пациенток с риском развития синдрома гиперстимуляции (р<0,05).

Динамика изменений уровня эстрадиола и ингибина в процессе гиперстимуляиии программы ЭКО-ПЭ. Анализ данных привел к выделению двух основных форм взаимозависимости уровней эстрадиола и ингибина в процессе гиперстимуляции.

А. Синхронная форма (рис. 2), когда кривая изменения уровня эстрадиола при гиперстимуляции полностью совпадает с формой кривой изменения концентрации уровня ингибина.

Б. Асинхронная форма, при несовпадающих формах вышеуказанных кривых и делящаяся на 2 вида:

1) возрастающий уровень эстрадиола при понижающемся уровне ингибина (после назначения ХГТ) (рис. 3);

2) понижающийся уровень эстрадиола при повышающемся уровне ингибина (после назначения хорионического гонадотропина) (рис. 4).

Пациентки двух групп не отличались по количеству наступивших беременностей в цикл терапии, среди второй группы преобладали «poor responders», неадекватно отвечающие на стимуляцию.

Анализ уровня ингибина в фолликулярной жидкости циклов гиперстимуляиии программы ЭКО-ПЭ. Концентрация ингибина, установленная методом иммуно-сорбции, составила 3190,99±328,5 ЕД/мл. Анализ данных выявил отсутствие корреляции между возрастом пациенток и концентрацией ингнбина в фолликулярной жидкости, однако в группе пациенток 26-30 лет содержание гормона было достоверно ниже (р<0,05), чем в старшей возрастной группе.

Концентрация ингнбина не зависела от дозы ЧМГ, применяемого для гиперстимуляции, несмотря на это, уровень гормона был достоверно ниже в группе пациенток, получавших «чистый» ФСГ или менее 30 ампул ЧТГ в цикле.

Нами не обнаружено также зависимости между содержанием ингибина в фолликулярной жидкости и присутствием/отсутствием яйцеклетки, а также последующей способностью яйцеклеток к оплодотворению и качеством эмбриона. Фолликулярная жидкость, в которой содержались яйцеклетки, в последующем оплодотворившиеся (стадии 1, 2 или 3-х пронуклеусов - PN) или неоплодотво-рившиеся, не отличалась по концентрации ингибина. Не найдено различия между уровнями ингибина в фолликулярной жидкости, яйцеклетки которой развились в эмбрионы 1-2-4 клеточной стадии или дегенерировали.

Несмотря на вышеизложенное, концентрация гормона в фолликулярной жидкости была достоверно различна в группе пациенток с наступившей в последующем беременностью (3381,58±971,155 ЕД/мл) и отрицательным тестом Р-ХГТ (2836,77±1318 ЕД/мл, р<0,05).

Не обнаружена также корреляция между диаметром фолликула, содержанием ингибина в плазме крови и количеством гормона в фолликулярной жидкости.

Уровень TGFf3L в фолликулярной жидкости гиперстимулированных циклов. Концентрация TGF0I в фолликулярной жидкости при гиперстимуляции была обнаружена равной 2655,81+1216,93 пг/мл и зависела от возраста пациенток (г=-0,01). Для возрастной группы менее 25 лет концентрация TGF(3i составила 4012,09+1384,11, а дня возрастных групп от 25 до 35 лет и старше 35 лет -2339,42+708,13 и 3112,3±495,15 пг/мл соответственно. Уровень фактора роста в группе пациенток, не имевших попыток ЭКО-ПЭ в анамнезе, был равным 2342,17±814,42, с одной попыткой - 3152,99± 1709,85, с двумя попытками -2554,51+302,79, более, чем с тремя попытками - 2557,66+697 пг/мл. Различие в

Ингибин, ЕД/ыл

Лютсинизир.

гормон

Эстрядиол, пг/мл

Рис. 2. Синхронный ТИП ответа на стимуляцию

Рис. 3. Асинхронный тип ответа на стимуляцию с понижающимся уровнем ингибииа

> м

Дни ЦНКЛЖ

Рис. 4. Асинхронный тип ответа на стимуляцию с повышающимся уровнем ингибииа

13 14 22 28 Дин цикла

концентрации TGFPi между вышеуказанными группами не являлось достоверным. Концентрация фактора роста достоверно отличалась в группе пациенток с наступившей впоследствии беременностью (3238,28±354,39 пг/мл) от концентрации TGFPi у пациенток с отрицательным результатом терапии (2595,12±158,6 пг/мл).

Не было обнаружено корреляции между дозой гонадотропинов, употребляемой для гиперстимуляции, наличием или отсутствием яйцеклеток в фолликулярной жидкости, качеством последующего эмбриона.

Не выявлено связи между диагнозом бесплодия, а также уровнями ингиби-на, Ег, TGF02 в ФЖ и концентрацией TGF0I в последней.

Уровень TGFPi был достоверно (р<0,05) ниже в ФЖ пациенток, адекватно отвечающих на стимуляцию, чем у «poor responders». Для группы пациенток с риском гиперстимуляции различие не было достоверным.

Уровень TGFBZ в Фолликулярной жидкости гиперстимулированных циклов. Найденная концентрация TGFph находилась в пределах 17,15±9,2 пг/мл и не зависела от возраста пациенток, дозы ЧМГ, употребляемой для стимуляции.

Анализ данных выявил достоверное увеличение содержания TGFfh в фолликулярной жидкости пациенток, в анамнезе которых имелось 2 попытки ЭКО-ПЭ (25,74+12,85 пг/мл, р<0,05).

Не обнаружено прямой зависимости между уровнем ингибина и концентрацией TGFP:, однако при концентрации ингибина менее 2305 ЕД/мл уровень TGFfh был достоверно выше, чем при концентрации ингибина, превышающей вышеуказанную (р<0,05).

Исследования показали наличие достоверного содержания TGFP2 в плазме крови пациенток (70,37±51,44 пг/мл), причем эта концентрация не зависела от уровня TGFP2 в фолликулярной жидкости.

Не обнаружено различия в концентрации TGFP; в ФЖ с наличием и без наличия яйцеклетки.

При концентрации TGFP2 выше 17,8 пг/мл выявлена прямая (г=0,68) корреляция уровней эстрадиола и TGFP2 в ФЖ. Подобная корреляция не отмечена дня концентрации TGFpi и ингибина в фолликулярной жидкости.

Экспериментальная часть: влияние TGFBL и TGFB1 на продукцию эстрадиола и ингибина клетками гранулезы in vitro. Анализ полученных данных показал, что при концентрации TGFPi в питательной среде 8000 и 4000 пг/мл концентрация эстрадиола достоверно выше по сравнению с группой контроля, а также исходной концентрацией эстрадиола при уровне TGFPi 500 пг/мл.

Не выявлено влияния TGFPi на секрецию ингибина клетками гранулезы.

TGFp2 при возрастании концентрации также увеличивает продукцию эстрадиола данным видом клеток.

Показатели секреции ингибина достоверно не отличались при изменении концентрации TGFP', хотя имелась тенденция к супрессии продукции ингибина

при концентрации TGF02 15 и 30 пг/мл.

АНАЛИЗ И ОБОБЩЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изменение уровней ингибина и эстрадиола в плазме крови пациенток под воздействием гипеустимуляиии. Полученные данные, относящиеся к статистически достоверной корреляции между количеством полученных яйцеклеток и концентрацией ингибина в плазме крови пациенток, находящихся под воздействием режима гиперстимуляции в рамках программы ЭКО-ПЭ, находят свое подтверждение в экспериментальных работах Findley et al., 1989, Russel et al. (1994), сообщавших о снижении количества извлеченных ооцитов у овец и коров, иммунизированных против а-аминотерминала молекулы ингибина.

Различие в уровнях эстрадиола между тремя группами наблюдается только в день назначения ХГТ и день ФП, в то время как подобное различие для концентраций ингибина обнаружено уже на 9-10 день стимуляции. Такая разница объясняется тем, что средняя продолжительность промежутка времени между пиком концентрации ФСГ в плазме крови и теоретически ожидаемым эффектом составляет 2 дня для ингибина и 4 дня для эстрадиола. Таким образом, уровень ингибина более точно отражает динамику действия ФСГ, чем уровень эстрадиола (Hughes et al., 1990, Porchet et al., 1994).

Отсутствие синхронности в динамике концентраций ингибина и эстрадиола в течение стимуляции подтверждает данные McLachlan et al. (1987) и объясняется различием в участии клеток теки и гранулезы в продукции циркулирующих уровней ингибина и эстрадиола. В то время, как ингибин является секретом только клеток гранулезы, циркулирующий уровень эстрадиола - производное обоих типов клеток (Lenton et al., 1991).

Возможно, что высокий уровень ингибина связан со снижением концентрации ФСГ, необходимой для выборки следующей когорты созревающих фолликулов (как это имеет место при истощении яичников). Подобное объяснение частично подтверждается также нашими собственными наблюдениями о том, что у женщин с нормальной функцией яичников ( в случаях мужского бесплодия) уровень ингибина в плазме крови был достоверно ниже.(р<0,05) по сравнению с остальными пациентками.

В работах Wang et al. (1989) сообщается также о снижении количества рецепторов к рилизинг-гормонам (РГ) на гонадотропах в культуре крысиных клеток гипофиза, в частности, блокаде стимуляции РГ-рецепторов ими самими (Braden et al., 1989). При иммунонейтрализации эндогенного ингибина у крыс повышалась пульсовая частота выделения ЛГ и ФСГ (Rivier, 1989, Culler, 1992). Таким образом, по нашему мнению, пациентки с уровнем ингибина 2,7±0,5 ЕД/мл и выше должны быть исключены из "длинного" протокола гиперстимуляции (данные получены впервые).

«Концепция факторов роста» в гиперстимулированных яичниках. Одна из

наиболее важных концепций, разработанных в последние годы, так называемая "концепция факторов роста" (Erickson et al., 1994), заключается в том, что протеины с активностью факторов роста модулируют как амплитуду, так и скорость ответа фолликула на действие ЛГ и ФСГ, что в корне изменяет "концепцию двух клеток", долгие годы являющуюся основополагающей для объяснения секреции стероидных гормонов яичниками.

Данные, полученные в настоящей работе, указывающие на присутствие достоверных количеств TGF(3i и TGFpi в фолликулярной жидкости (2655,8± 1216,93 пг/мл и 17,2±9,2 пг/мл соответственно), подтверждают вышеуказанную гипотезу и являются, по-видимому, первым сообщением о конкретном уровне TGFp в фолликулярной жидкости (Ruegsengger & Assolan, 1988, определили лишь наличие TGF0S - подобной активности в фолликулярной жидкости).

Присутствие ингибина в фолликулярной жидкости также подтверждается рядом исследований (Killer et al., 1989, 1991; Roberts et^al., 1993, Marrs et al., 1984, McLachlan et al., 1987). Концентрация ингибина, полученная в настоящей работе (3190,99 ± 328,5 ЕД/мл), отличается от приведенной вышеуказанными авторами, что связано, очевидно, с различием использованных методов и относительной новизной примененного нами метода ELISA для определения концентрации ингибина (Bally et al., 1993).

Независимость содержания TGFfh и ингибина в фолликулярной жидкости от их концентрации в плазме крови может быть отражением того факта, что ци-токины действуют не эндокринно-, а пара- и аутокринно, влияя главным образом на внутрияичниковые процессы (Adashi, 1995).

Найденные достоверно более высокие уровни TGF(3i и ингибина (но не TGFp г) у пациенток с относительной резистентностью к медикаментозной стимуляции могут быть объяснены тем, что TGFpi и ингибин действуют на уровне рецепторов к гонадотропинам: TGF(3i снижает количество ЛГ рецепторов на поверхности клеток гранулезы (Ben-Rafael & Orvieto, 1992).

Более высокие концентрации TGFPi и ингибина в фолликулярной жидкости пациенток старше 35 лет подтверждают данные Tabizadeh (1995) о том, что TGFP может индуцировать процессы апоптоза (программированная смерть клеток) в яичнике. Приведенные результаты также подтверждают роль макрофагов в возникновении синдрома истощения яичников, тем более, что имеются также сообщения о положительной роли TGFP в хемотаксисе моноцитов (Wahl et al., 1987). Уровни в фолликулярной жидкости TGFP2 и эстрадиола не отражают возрастных изменений, происходящих в яичнике.

Уровни TGFPi, TGFP: и ингибина в фолликулярной жидкости не зависят от присутствия (отсутствия) яйцеклетки в данном фолликуле, а также способности ооцита к оплодотворению и качества последующего эмбриона. Эти данные подтверждают работу Demoluin et al. (1986) и опровергают данные Reichard et al. (1993) о роли ингибина в созревании и последующей фертилизации яйцеклеток.

Положительная корреляция, выявленная между уровнем TGFßi, ингибина и наступившей впоследствии беременностью, подтверждает гипотезу de Zieger & Fanchin (1994) о роли "третьего фактора", отличного от эстрадиола, также индуцируемого действием ЧМГ, использующегося для гиперстимуляции; "третьего фактора", отвечающего за рецептивность эндометрия в программе ЭКО-ПЭ. Данная корреляция согласуется также с работами Feinberg et al. (1994), McLachlan et al. (1986), Petraglia et al. (1987), о положительной роли TGFß и ингибина в процессе имплантации.

Полученные in vivo данные не показали влияния TGFßi, TGFß2 на гормо-нопродуцирующую способность клеток гранулезы.

При проверке этого положения на модели культуры клеток гранулезы in vitro выявлено, в противовес результатам in vivo, достоверное влияние возрастающих концентраций TGFßi и TGFß2 на продукцию эстрадиола, но не ингибина. Таким образом, внутриовариальные регуляторные механизмы намного сложнее указанных в "двуклеточной теории" и представляют собой комплекс взаимоотношений факторов нейроэндокринной и иммунной систем, которые изменяются под воздействием терапии ЭКО-ПЭ.

Риск возникновения рака яичников. Как сообщается в работах Berchuck et al. (1993), TGFßi-2, но не TGFß3 были единственными пептидами семейства факторов роста, которые секретировались клеточными клонами карциномы яичников. Дополнительно было установлено, что TGFß ингибирует пролиферацию нормальных клеток эпителия яичников в 40-70% (Berchuck et al., 1991), а также при определенных концентрациях нарушает морфологическую структуру клеток ме-зотелия (Ikubo et al., 1995).

Паракринные механизмы действия TGFß могут иметь особое значение именно для эпителия яичников, так как последний омывается фолликулярной жидкостью во время овуляции.

В приведенных исследованиях наблюдающаяся in vivo концентрация цито-кинов в фолликулярной жидкости установлена (как указывалось выше) 17,5±9,2 пг/мл и 2655,8±1216,93 пг/мл для TGFß2 и TGFßi соответственно, в плазме уровень трансформирующих факторов роста определен равным 32839,10±1529,361 пг/мл (TGFßi) и 70,37±51,44 пг/мл (TGFß2). Обычно TGFß: не определяется в достоверных концентрациях в плазме крови человека (R&D Investigation). Тот факт, что измеряемая концентрация TGFß2 присутствует в плазме крови пациенток, находящихся под воздействием гиперстимуляции, требует дальнейшего изучения проблемы.

Достоверно более высокий уровень TGFß2 в ФЖ пациенток с наличием двух циклов стимуляции в анамнезе может являться отражением изменений, происходящих в контрольных механизмах роста яичников под влиянием повторных циклов терапии, или же говорить о напряженной функции контроля опухолевого роста.

Позитивная корреляция in vivo между концентрацией TGF02 и уровнем эс-традиола (после достижения последним пороговой концентрации 3000 пг/мл), а также найденное in vitro прямое влияние возрастающих концентраций TGF|3i и TGFP2 на продукцию эстрадиола подтверждает и уточняет данные, опубликованные Nash et al. (1989) о том, что действие эстрогенов как митогенов модулируется секрецией TGFfh.

Полученные данные требуют дальнейшей разработки, проведения экспериментов in vitro с линиями клеток овариальной карциномы и полученными нами in vivo концентрациями TGFPi и TGFP2, что позволит также ответить на вопрос о риске возникновения рака яичников у женщин, страдающих бесплодием.

ВЫВОДЫ

1. Пациентки с уровнем ингибина более 2,7±0,5 ЕД/мл должны быть исключены из "длинного протокола" стимуляции в циклах экстракорпорального оплодотворения - переноса эмбриона как группа, резистентная к стимуляции подобным методом.

2. Вместо дорогостоящего, радиоактивного метода определения эстрадиола в качестве мониторинга пациенток, находящихся под воздействием гиперстимуляции в программе экстракорпорального оплодотворения - переноса эмбриона, целесообразно производить измерение ингибина в плазме крови пациенток, более точно отражающего динамику созревания фолликулов и реакцию яичников на стимуляцию.

3. Факторы трансформирующего роста Pi и Рг являются важными звеньями ауто-паракринной регуляции функции яичников под влиянием гиперстимуляции, свидетельствуя о вовлечении звеньев иммунной системы в эндокринные процессы.

4. Отмеченное повышение концентрации фактора трансформирующего роста Рг в фолликулярной жидкости после 2-х циклов гиперстимуляции может отражать функциональное напряжение системы контроля клеточного роста при повторных циклах стимуляции и требует дальнейших исследований.

5. Как фактор трансформирующего роста Pi, так и фактор трансформирующего роста Рг присутствуют в плазме крови и фолликулярной жидкости пациенток при гиперстимуляции, в отличие от естественных циклов.

6. Трансформирующие факторы роста Pi и Рг в концентрациях 500-800 пг/мл и 15-240 пг/мл соответственно оказывают стимулирующее влияние на секрецию эстрадиола, но не ингибина клетками гранулезы человека in vitro.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Луцевич Н.Е. Ингибин как индекс прогноза в программе ЭКО-ПЭ. // В кн.: Репродуктивная функция женщин Беларуси в современных экологических условиях. Минск. - 1997. - т. 2. - с. 789-794.

2. Луцевич Н.Е., Лю С., Герасимович Г.И. Влияние трансформирующих факторов роста (TGFßi и TGFß:) на секрецию ингибина и эстрадиола in vitro. // Там же. - с. 786-788.

3. Mettler L., Salmassi А., Brandenburg A., Lutzewitch N., 1995. Non- responsive patients: characteristic of patients. // In: Proceeding of 15th World Congress on Fertility and Sterility, Ed. Hedon В., Bringer J., Mares P. - p. 361-367.

4. Lutzewitch N.,Hauberg M., Schollmeyer Т., Ibrahim M., Salmassi A ., Mettler L., 1996. Is the proliferative index of human granulosa cells a function of cytokine activity. // Abstract book of a Conference: The Ovary Regulation and Dysunction Florida. - p.72.

5. Potrykus В., Lutzewich N.. Koch К., Buck S., Salmassi A ., Mettler L., 1996. The role of cytokine in paracrine regulation of ovarian function in hyperstimulated cycles. // Abstract book of a Conference: The Ovary Regulation and Dysfunction Florida, - p. 73.

6. Mettler L., Lutzewich N., Lesoine В., Koch K., Salmassi A . 1996. Transforming growth factor ß (TGFß) superfamily in hyperstimulated ovaries. // Abstract book of a Conference: The Ovary Regulation and Dysfunction Florida. - p. 73.

7. Lutzewich N., Koch K., Salmassi A ., Mettler L., 1996. Identification of in-hibin and TGFß-1, 2 in human follicular fluid, serum and granulosa cells. II Abstract book of a IXth World Congress on Human Reproduction, Philadelphia. - p. 17.

8. Lutzewich N., Salmassi A ., Mettler L., 1995. Charakteristika menschlicher Follikelfliissigkeiten im Rahmen einer IVF + ET - Stimulation. II Dreiländertagung Fertilität und Sterilität, Innsbruck. - p. 23.

9. Mettler L., Lutzewich N., Salmassi A ., 1995. Inhibin als Prognosefaktor für den Erfolg einer Stimulation bei der In-Vitro-Fertilisationsbehandlung beim Menschen. In Dreiländertagung Fertilität und Sterilität, Innsbruck. - p. 22.

10. Lutzewich N., Koch K., Salmassi A ., Mettler L., 1995. The role of Inhibin in patients, undergoing IVF-ET treatment. // Abstract Book ESHRE Congress, Hamburg. - p. 55.

ПЕРЕЧЕНЬ ОСНОВНЫХ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

TGFp - 1, 2, 3, 4 Фактор трансформирующего роста (Transforming growth factor)

ЭКО - ПЭ Экстракорпоральное оплодотворение и перенос эмбриона

ЧМГ Человеческий менопаузальный гонадотропин

ФП Пункция фолликула

«Poor responders» Пациентки со слабым ответом на стимуляцию

ФЖ Фолликулярная жидкость

ХГТ Хорионический гонадотропин

ФСГ Фолликулостимулирующий гормон

РЭЗЮМЭ

Луцэв1ч Наталля Яугеньеуна «Фукцыянальнае станов1шча нейраэндакрынначммуннай cicTOMM пацыентак над уплывам пперстымуляцьц у праграме экстракарпаральнага апладнення»

Ключавыя словы: экстракарпаральнае апладненне, шдэкс прагноза, ¡Hri6iH, эстрадзюл, фактары трансфармуючага росту, культура клетак гранулёзы, рызыка развщця пухлш яечшкау.

Аб'ектам гэтага даследавання з'явшася: I. Вывучэнне узроуняу ¡нпбша i эстрадзюла у плазме крыв! 87 пацыентак, як1я знаходзяцца пад уплывам T3panii ЭКА-ПЭ. 2. Даследаванне канцэнтрацьи ¡Hri6iHa, эстрадзюла, фактарау трансфармуючага росту (TGFPi i TGFfh) у фалшулярнай вадкасш 161 пацыенпа пры лячэшп бясплоднасш метадам ЭКА-ПЭ. 3. Работа з клеткамi гранулёзы ча-лавека in vitro.

Цэль работы заюпочалася у выяулешп прагнастычных паказчыкау эфек-тыунасщ медыкаментознай пперстымуляцьн яечшкау па праграме экстракарпаральнага апладнення, у выяуленш асабл1васцей функцыянальнага станов;шча нейраэндакрыннамммуннай астэмы пацыентак, яюя хварэюць бясплоднасцю, пад уплывам гэтага метада лячэння, а таксама праверцы атрыманых рэзультатау на мадэл1 in vitro.

Рэзультаты. Анал13 дынамш змен эстрадзюла i ¡нпбша у плазме Kpbrni на працягу медыкаментознай пперстымуляцьц выяв^у дакладна больш высок1 узровень iHri6iHa на 21-ы дзень натуральнага менструальнага цыкла, а таксама больш высокую адчувальнасць выяулення iHri6iHa у параунанш з эстрадзюлам у працэсе машторынга пацыентак, што дазваляе выкарыстоуваць канцэнтрацыю iHri6iHa 2,75+0,5 Ад/мл у якасш крытэрыя для адбора пацыентак для "доугага" пратакола пперстымуляцьн i прапанаваць выявщь узровень ¡нпбша, а не эстрадзюла, для машторынга у праграме ЭКА-ПЭ. Упершыню выяулена прысут-насць TGFPi (2655±1216,93 пг/мл) i TGFp2 (17,5±6,2 пг/мл) у фал1кулярнай вад-Kacui i плазме Kpbiei (32839,10+1529,36 пг/мл i 70,37±51,44 пг/мл, адпаведна) у пацыентак, слаба адказваючых на стымуляцыю. Колькасць TGFp2 у фалшулярнай вадкасш пацыентак, ятя маюць у анамнезе дзве спробы ЭКА-ПЭ, з'яулялася дакладна вышэй, чым у групе пацыентак, яюя мел) тольк1 адну спробу ui не мел1 спроб ЭКА-ПЭ у анамнезе, што патрабуе далейшых даследаванняу у гэтым на-прамку. Пры праверцы дзеяння атрыманых канцэнтрацый TGFpi i TGFP: на гармонапрадуцыйную функцыю (¡Hri6iH, эстрадзюл) клетак in vitro выяулена да-датнае уздзеянне вышэй памянутых цытакшау на сакрэцыго эстрадзюла (а не ¡Hri6iHa) клеткам! гранулёзы, упершыню эксперыментальна пацвярджае стэ-ращагеннасць актыунасш TGFPi i TGFPzy яечшках чалавека.

РЕЗЮМЕ Луцевич Наталия Евгеньевна «Функциональное состояние нейроэндокринно-иммунной системы пациенток под влиянием гиперстимуляции в программе экстракорпорального оплодотворения»

Ключевые слова: экстракорпоральное оплодотворение, индекс прогноза, ингибин, эстрадиол, факторы трансформирующего роста, культура клеток гранулезы, риск развития опухолей яичников.

Объектом настоящего исследования явилось: 1. Изучение уровней ингибина и эстрадиола в плазме крови 87 пациенток, находящихся под влиянием терапии ЭКО-ПЭ. 2. Исследование концентраций ингибина, эстрадиола, факторов трансформирующего роста (TFGpi и TGFP2) в фолликулярной жидкости 161 пациентки, при лечении бесплодия методом ЭКО-ПЭ. 3. Работа с клетками гранулезы человека in vitro.

Цель работы заключалась в выявлении прогностических показателей эффективности медикаментозной гиперстимуляции яичников в программе экстракорпорального оплодотворения, в выявлении особенностей функционального состояния нейроэндокринно-иммунной системы пациенток, страдающих бесплодием, под воздействием данного метода лечения, а также проверке полученных in vivo результатов на модели in vitro.

Результаты. Анализ динамики изменений эстрадиола и ингибина в плазме крови в течение медикаментозной гиперстимуляции выявил достоверно более высокий уровень ингибина на 21-й день естественного менструального цикла, а также более высокую чувствительность определения ингибина по сравнению с эстрадиолом в процессе мониторинга пациенток, что позволяет использовать концентрацию ингибина 2,75+0,5 ЕД/мл в качестве критерия для отбора пациенток для «длинного» протокола гиперстимуляции, и предложить определять уровень ингибина, а не эстрадиола, для мониторинга в программе ЭКО-ПЭ. Впервые установлено присутствие TGFPi (2655±1216,93 пг/мл) и TGFP2 (17,5±9,2 пг/мл) в фолликулярной жидкости и плазме крови (32839,10±1529,36 пг/мл и 70,37±51,44 пг/мл соответственно) у пациенток, слао отвечающих на стимуляцию. Содержание TGFP2 в фолликулярной жидкости пациенток, имеющих в анамнезе две попытки ЭКО-ПЭ, было достоверно выше, чем в группе пациенток, имевших лишь одну или же не имевших попыток ЭКО-ПЭ в анамнезе, что требует дальнейших исследований в этом направлении. При проверке действия полученных концентраций TGFPi и TGFp2 на гормонопродуцирующую функцию (ингибин, эстрадиол) клеток гранулезы in vitro, выявлено положительное влияние вышеуказанных цитокинов на секрецию эстрадиола (но не ингибина) клетками гранулезы, впервые экспериментально подтверждает стероидогенность активности TGFPi и TGFP2 в яичнике человека.

SUMMARY

Lutsevich Natalia Evgenievna «Functional Condition of Neuroendocrine and Immunologic System of Patients under

Influence of HyperStimulation in the Program of Extracorporal Fertilization»

Key words: extracorporal fertilization, forecast index, inhibine, estradiol, transforming growth factors, culture of cells of granulöse, risk of development of tumour of ovaries.

Object of the present investigation was: 1. Study of the levels of inhibine and estradiol in the blood plasma of 87 patients who are under influence of therapy IVF -ET. 2. Study of concentrations of inhibine, estradiol, transforming growth factors (TGFßi and TGFß2) in follicular liquid of 161 patients during treatment of sterility by the method IVF - ET. 3. Work with the cells of man granulöse a in vitro.

Aim of the work consisted in detection of forecast values of efficiency of medicamental hyperStimulation of ovaries in the program of extracorporal fertilization, in detection of peculiarities of the functional condition of neuroendocrine and immuno-Iogic system of the patients suffering sterility under influence of this method of treatment, as well as a check of results received in vivo on the model in vitro.

Results. The analysis of the dynamics of changes in estradiol and inhibine in the blood plasma during medicamental hyperStimulation detected a true more higher level of inhibine on the 21-st day of natural menstrual cycle, as well as a more higher sensitivity of determination of inhibine in comparison with estradiol in the process of monitoring of the patients, which allows to use the concentration of inhibine 2,75±0,5 Units/ml as a criterion for selection of the patients for the "long" protocol of hyperstimulation and to continue determination of the level of inhibine, but not estradiol, for monitoring in the program IVF - ET. It was ascertained for the first time a presence of TGFßi (2655+1216,93 pg/ml) and TGFß2 (17,5±92 pg/ml) in the follicular liquid and the blood plasma (32839,10±529,36 pg/ml and 70,37±51,44 pg/ml, accordingly) with the patients, responding weakly to stimulation. The content of TGFß2 in the follicular liquid of the patients have in anamnesis two attempts IVF - ET, which is truly higher than with the group of the patients having only one attempt or not having ones IVF - ET in anamnesis, which requires further investigations in this direction. During check of the action of the concentrations achieved TGFßi and TGFß2 on the hormone-producing function (inhibine, estradiol) of the cells of granulöse in vitro, a positive influence of the above mentioned cytocines was found out on the secretion of estradiol (but not inhibine) by the cells of granulöse, experimentally confirms for the first time a steroidgenesis of activity TGFßi and TGFß2 in the ovaries of a man.