Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Функционально-метаболическая активность лейкоцитов при диффузных болезнях соединительной ткани

На правах рукописи

ЦАГОВА Мадина Хамидбиевна

ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ДИФФУЗНЫХ БОЛЕЗНЯХ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ

14.00.11 - кожные и венерические болезни 14.00.46 - клиническая лабораторная диагностика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□ОЗ167043

Санкт-Петербург 2008

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х.М. Бербекова» Федерального агентства но образованию

Научные руководители:

доктор медицинских наук профессор Нагоев Беслап Сафарбиевич доктор медицинских наук профессор Самцов Алексей Викторович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Данилов Сергей Иванович доктор медицинских наук Молчанов Олег Леонидович

Ведущая организация - ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

Защита состоится <</.^>> У 2008 года в 10 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.01 при Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова

Автореферат разослан <ыР » марта 2008 года

Ученый секретарь совета доктор медицинских наук профессор Пономаренко Геннадий Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Основоположниками учения о коллагенозах - диффузных болезнях соединительной ткани, объединенных сходными юшнико-морфологическими изменениями явились в 1941 г Р Klemperer, А Pollack и G Bathr (Скрипкин Ю К , Мордовцев В Н, 1999) Из заболеваний этой группы наибольшее значение для дерматологов имеют красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит

Повсеместно отмечается рост заболеваемости красной волчанкой, особенно ее системной формой (Скрипкин ЮК, Мордовцев ВН, 1999) Заболеваемость красной волчанкой по данным различных авторов составляет от 4 до 250 новых случаев на 100 тыс населения в год (Насонова В А, Бунчук НВ, 1997, Мазуров В И, 2001) Красная волчанка встречается во всех климато-географических зонах Отмечаются возрастные и расовые различия в частоте заболевания Более 70% больных с системной красной волчанкой заболевают в возрасте 14-40 лет, а «пик» заболеваемости приходится на 14-25 лет (Насонова В А, Бунчук НВ, 1997) Встречается системная красная волчанка чаше всего у молодых женщин Соотношение мужчин и женщин, заболевших системной красной волчанкой, составляет от 1 8 (Насонова В А, БунчукНВ, 1997) до 1 10-15 (Мазуров В И, 2001), а среди детей соотношение мальчиков и девочек составляет 1 3 Склеродермия - второе по частоте, вслед за красной волчанкой, заболевание из группы диффузных болезней соединительной ткани Ее распространенность составляет 32-45 случаев на 100 тыс населения (Скрипкин Ю К, Мордовцев В Н, 1999)

Этиология и патогенез красной волчанки и склеродермии остаются не выясненными Однако одной из основных гипотез в патогенезе склеродермии является роль иммунных нарушений, а системная красная волчанка согласно исследованиям В А Насоновой, А И Сперанского и N Sonmchsen признана классическим примером аутоиммунной болезни, характеризующейся широким спектром нарушений иммуного гомеостаза (Скрипкин Ю К, Мордовцев В Н, 1999) Р В, Петров считает эталоном неорганоспецифических аутоиммунных болезней не только системную, но и дискоидную красную волчанку, склеродермию, дерматомиозит (Скрипкин Ю К, Мордовцев В Н, 1999)

Несмотря на многочисленные исследования по изучению патогенеза диффузных болезней соединительной ткани, многие вопросы остаются не решенными В связи с этим значительный интерес представляет изучение иммунного статуса, включающего в себя оценку клеточных факторов неспецифической защиты организма Одним из показателей неспецифической резистентности организма является функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов, ответственных за процесс фагоцитоза в очаге воспаления и опосредованное участие в В-клеточном иммунитете (Пигаревский В Е , 1978, Нагоев Б С, 1986, Покровский В И с соавт, 1987, Klebanoff S J , Clark R А, 1978) Состояние микробицидной активности нейтрофилов оценивается по содержанию и активности в цитоплазме азурофильных и специфических гранул (миелопероксидазы, катиошых белков, кислой и щелочной фосфатаз, липидов,

гликогена и др) Комплексному исследованию интралейкоцитарных компонентов нейтрофилов при диффузных болезнях соединительной ткани не уделялось достаточного внимания Поэтому, изучение активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, а также катионных белков, лигоэдов, гликогена нейтрофильных лейкоцитов и показателей активности спонтанного тетразолиевого теста в динамике течения диффузных болезней соединительной ткани с различными клиническими формами является актуальным в процессе изучения неспецифической резистентности организма при этой группе заболеваний

Цель работы. Провести клинико-цитохимическую оценку нспедифической резистентности организма при диффузных болезнях соединительной ткани с помощью изучения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов

Задачи исследования.

1 Изучить у больных диффузными болезнями соединительной ткани с помощью цитохимических методов исследования функциональную активность лейкоцитов по изменению уровня катионного белка, липидов, гликогена, активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы

2 Установить закономерности изменения интралейкоцитарных компонентов у больных диффузными болезнями соединительной ткани в зависимости от клинической формы, тяжести и распространенности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний

3 Оценить метаболическую и фагоцитарную активность лейкоцитов в динамике у больных диффузными болезнями соединительной ткани путем проведения НСТ-теста

4 Установить значение функционально-метаболической активности лейкоцитов в патогенетических механизмах диффузных болезней соединительной ткани, а также показать клинико-диагностическую информативность и практическую значимость Комплексного определения основных биологически активных интралейкоцитарных компонентов

5 Провести сопоставление цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов (миелопероксидазы, катионного белка, липидов, кислой фосфатазы, гликогена и НСТ-теста) с данными гемограммы (количеством лейкоцитов, палочкоядерным сдвигом, СОЭ).

Научная новизна. Проведено комплексное динамическое изучение основных компонентов интралейкоцитарной микробицидной системы нейтрофилов и их функционально-метаболической активности у больных диффузными болезнями соединительной ткани в зависимости от периода, клинической формы, тяжести и распространенности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний

Установлено, что у пациентов диффузными болезнями соединительной ткани происходит угнетение ферментативной активности миелопероксидазы, снижение уровня цитоплазматических катионных белков, липидов и

повышение активности кислой фосфатазы, содержания гликогена, возрастание показателей спонтанного теста с нитросиним тетразолием

Установлено, что у больных с ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани в стадии разгара заболевания отмечается умеренное снижение уровня миелопероксидазы, катионного белка, липидов и повышение уровня кислой фосфатазы, спонтанного НСТ-теста, а также гликогена с постепенной нормализацией данных показателей по мере исчезновения клинических проявлений кожного процесса. У пациентов с системной красной волчанкой в стадии разгара заболевания и на начальных этапах лечения зарегистрированы выраженные отклонения показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов Восстановление показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у данной категории больных не происходит.

У больных диффузными болезнями соединительной ткани с сопутствующими хроническими заболеваниями выявлены более выраженные и стойкие изменения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов, проявляющиеся угнетением активности миелопероксидазы, катионного белка, липидов и нарастанием активности кислой фосфатазы, спонтанного НСТ-теста, а также уровня гликогена Стойкие изменения показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов свидетельствуют о снижении резервных возможностей организма и указьшают на неблагоприятный прогноз заболевания

Практическая значимость. Определение уровней цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани может быть использовано для оценки глубины патологического процесса

Установлено, что степень выраженности цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов зависит от клинической формы и стадии диффузных болезней соединительной ткани, наличия сопутствующих заболеваний Показано, что длительные и стойкие нарушения показателей основных компонентов микробицидной системы и метаболической активности лейкоцитов могут свидетельствовать о развитии затяжных форм заболевания и возникновении ранних рецидивов

Выявленные закономерности показателей микробицидной системы организма могут быть использованы в качестве дополнительных критериев для диагностики тяжести процесса, эффективности лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов

Личное участие автора в получении результатов. Автор осуществил планирование исследования, выполнял весь объем цитохимических исследований на различных стадиях заболевания Автором лично сформирована база данных, проведены статистическая обработка и обобщение полученных данных

Основные положения, выносимые на защиту

1 Изменения функциональной активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани проявляются угнетением активности миелопероксидазы, катионного белка, пипидов на фоне повышения активности кислой фосфатазы и уровня гликогена.

2 У больных диффузными болезнями соединительной ткани происходят изменения метаболической активности нейтррфильных гранулоцитов, что проявляется усилением тетразолиевой активности

3 Комплексное определение уровней показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани является эффективным и доступным способом оценки глубины патологического процесса, что позволяет использовать полученные в ходе исследований закономерности в качестве дополнительных критериев для оценки распространенности, формы течения и степени тяжести патологического процесса, эффективности проведенного лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов

Реализация и внедрение полученных результатов исследования. Работа выполнена в соответствии с комплексным планом НИР ГОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный университет им ХМ Бербекова» Федерального агентства по образованию по программе «Фундаментальные исследования Университеты России», раздел II «Медицина» по проблеме «Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов и среднемолекулярных пептидов сыворотки крови в норме и лри инфекционных заболеваниях различной этиологии» (зарегистрирована в ВНТИ-центре, государственная регистрация за № 01990 004250) Результаты диссертационной работы доложены на многих научно-практических конференциях и опубликованы в печати Материалы диссертационной работы внедрены в практику работы ГУЗ Кожно-венеролсгический диспансер МЗ КБР и используются в учебном процессе на кафедрах и курсах дерматовенерологии, ревматологии, инфекционных болезней, микробиологии и иммунологии Кабардино-Балкарского госуниверситета при изучении тем «Красная волчанка», «Склеродермия», «Инфекция, инфекционный процесс», «Неспецифическая реактивность и иммунитет»

Апробация и публикация материалов исследования. Основные положения диссертационной работы обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников медицинского факультета Кабардино-Балкарского госуниверситета (г. Нальчик, 2003-2007), на научно-практических конференциях Республиканского филиала Всероссийского научно-медицинского общества дерматовенерологов (г Нальчик, 2003-2007), на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов (Москва, 2005), на научной конференции «Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению» (г Нальчик, 2005), на IX Всероссийской конференции дерматовенерологов (г Екатеринбург, 2006), на Всероссийской научной

конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2006», «Перспектива-2007» (г Нальчик, 2006,2007)

По материалам диссертационной рЕ'.боты опубликовано 12 научных работ, в том числе 1 работа в реферируемом ВАК журнале «Клиническая лабораторная диагностика»

Структура и объем диссертации. Диссертационный материал изложен на 172 страницах текста компьютерного набора, содержит введение, 5 глав, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 247 отечественных и Е9 ирубежных авторов Диссертационная работа иллюстрирована 47 таблицами, 32 рисунками и 9 клиническими наблюдениями

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Под наблюдением находилось 118 больных с различными клиническими формами диффузных болезней соединительной ткани (ДБСТ) Обследовано с бляшечной склеродермией (БС) - 32 больных в возрасте от 16 до 75 лет, дискоидной красной волчанкой (ДКВ) -36 больных в возрасте от 20 до 71 лет, системной красной волчанкой (СКВ) -50 больных в возрасте от 17 до 53 лет

Наибольшее количество больных ДБСТ в целом по группе составили женщины (64%) В группах больных с БС и СКВ женщины составили 81% и 82% соответственно В группе больных с ДКВ женщины составили 22% в возрасте от 21 до 45 лет, в то время как в этой труппе 78% больных составили мужчины в возрасте от 20 до 71 лет Следовательно, можно предположить, что ДКВ у женщин быстрее трансформируется в СКВ, чем у мужчин Наибольшее количество-(66% больных ограниченными формами ДБСТ (БС, ДКВ) и 60% пациентов СКВ) находились в возрастной категории от 31 до 50 лет Таким образом, подавляющее количество больных ДБСТ находились в молодом, детородном и трудоспособном возрасте

Основными клиническими проявлениями больных ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани являлись высыпания на различных участках тела Наиболее часто у больных БС высыпания располагались на коже спины (68,8%), груди и молочных желез (68,8%), живота (31,3%). У больных ДКВ поражались кожа лица (100% случаев) в виде «крыльев бабочки», ушных раковин (33,3%), волосистой части головы (22,2%), тыльной поверхности кистей (16,6%) Встречалось как изолированное, так и сочетанное поражение кожи В результате анализа анамнестических данных выявлено, что наибольшее количество больных ограниченными формами ДБСТ (58% больных ДКВ и 44% больных БС) заболели в возрасте от 20 до 40 лет При объективном исследовании больных ограниченными формами ДБСТ на пораженных участках кожи выявлялись изменения, соответствующие форме и стадии патологического процесса

Все больные СКВ поступали в активную фазу заболевания I (легкая) степень активности патологического процесса отмечена у 11 больных, II

(средней тяжести) - у 33 и 1П (тяжелая) - у 6 пациентов Острое течение заболевания зарегистрировано у 8, подострое - у 12 и хроническое - у 30 больных При этом общее состояние больных СКВ и данные объективного исследования соответствовали форме течения заболевания, степени активности патологического процесса Состояние отягощалось при наличии сопутствующих заболеваний

Больные с острым течением СКВ предъявляли жалобы на повышение температуры тела до 39-40°С, слабость, головную боль, расстройство сна и аппетита, боль в суставах, мышцах, адинамию, высыпания на различных частях тела У больных этой группы наиболее часто выявлялись поражения кожи в виде классической «бабочки» и рожистоподобной формы высыпаний (87,5%), сочетанные поражения суставов, сердца и почек (75%), сосудистой (50%) и кроветворной системы (12,5%), слизистой полости рта (37,5%), ЖКТ (12,5%)

У больных с подострым течением СКВ общая симптоматика была выражена слабее, лихорадка не превышала субфебридьных цифр, экссудативный компонент в кожных высыпаниях не проявлялся Выявлены поражения кожи (91,7%), патологические изменения суставов (75%), сердца (75%), почек (66,7%), ЖКТ (16,7%), слизистой полости рта (16,7%), красной каймы>губ (8,3%), сосудов головного мозга (8,3%), ЦНС (8,3%)

У больных с хроническим течением СКВ обострения протекали без острых воспалительных явлений, с преимущественным поражением кожи и суставов Для поражения кожи было характерно классическое поражение на открытых участках кожи Выявлены поражения суставов (90%), кожи (63,3%), сердца (56,7%), почек (46,7%), красной каймы губ (33,3%), слизистой полости рта (23,3%), сосудов головного мозга (16,7%), ЖКТ (6,7%), легких (6,7%) Среди обследованных больных с хроническим течением СКВ выявлены 2 сестры -однояйцевые близнецы, одна из Которых заболела СКВ в 43 года, другая — в 46 лет Наличие волчанки у однояйцевых близнецов подтверждает роль наследственного фактора в патогенезе данного коллагеноза

У 27 из 118 находившихся под наблюдением больных ДБСТ были выявлены сопутствующие хронические заболевания (хронический бронхит, хронический гастрит, хронический холецистит, хронический панкреатит и т д ) Всем больным проводились дополнительные лабораторные исследования У больных с красной волчанкой выявлены патологические изменения показателей гемоглобина, СОЭ, фибриногена, общего белка, альбуминов, глобулинов различной степени выраженности ЬЕ-клетки выявлены у 5,5% 'больных с ДКВ, у 25% больных с острым течением СКВ, у 8,3% больных с подострым течением СКВ и у 13,3% больных с хроническим течением СКВ

Диагноз БС не вызывал затруднений благодаря характерному виду проявлений Выявлялись единичные или множественные, округлые или овальные пягна на различных участках тела (слегка отечные, розового цвета с лиловым или сиреневым оттенком - в стадии отека, цвета старой слоновой кости кожа, гладкая и уплотненная, не собирающаяся в складку, без волос и выраженного пото- и салоотделения - в стадии уплотнения, истонченная наподобие папиросной бумаги, легко собирающаяся в складку и западающая кожа вследствие атрофии подлежащих

тканей - в стадии атрофии) ДКВ диагностировали на основании таких признаков, как эритема, фолликулярный гаперкератоз и атрофия Вспомогательное значение имели указания на повышенную фоточувствительность, провоцирующие факторы (инсоляция, УФ-облучение, отморожение, травма), а также лабораторные данные (анемия, лейкопения, лимфопения, высокая СОЭ, гивергаммоглобулинемия, гипергаптоглобулинемия, положительные ревматоидные пробы, наличие антиядерных антител и LE-клеток) В целях верификации диагноза СКВ использовались критерии, предложенные подкомитетом Американской ревматологической ассоциации в 1971 г, пересмотренные и дополненные иммуносерологаческими тестами в 1982 г. (Скрипкин ЮК, Мордовцев ВН, 1999) При характеристике процесса учитывали его активность по классификации В.А Насоновой

Больным БС назначали пенициллинотерапию, вазоактивные средства, ферментные препараты, витамины А, Е, группы В и С, инъекции АТФ или ганглиоблокаторы Из наружных средств применялись диметилсульфоксид, физиотерапевтические процедуры Больным ДКВ назначались амгнохинолиновые препараты, витамины группы В, С, а также Е, иммунокорригирующие средства, при нарушении липидного обмена с патологией печени назначался эссенциале Основными средствами для лечения СКВ являлись глюкокортикостероиды (ГКС) и цитостатики (внутрь и парантерально) Для повышения эффективности лечения использовались симптоматические средства После купирования острого периода СКВ проводили комбинированное лечение ГКС (в сниженных или поддерживающих дозах) и аминохинолиновыми препаратами При кожно-суставном варианте хронической СКВ нередко бывало достаточным лечение пресоцилом или аминохинолиновыми препаратами Из наружных средств применялись кортикостероидные мази При наличии сопутствующих заболеваний проводилось соответствующее лечение

Цитохимические и иммунологические методы исследования. С целью решения поставленных задач использовался комплекс цитохимических и цитоиммунологаческих методов исследования лейкоцитов Для цитохимического изучения активности МП была использована методика Graham-Knoll (1920), КФ нейтрофилов исследовали методом азосочетания по Goldberg А et Barka Т (1962) в модификации Дудецкого В И (1970), неферментные КБ выявляли по Шубичу М.Г (1974) в модификации Нагоева Б С (1983), ГЛ - в ШИК-реакции по Шабадащу АЛ (1947) с применением Шифф-реактива в прописи Грауманна, выявление ЛПД в лейкоцитах производилось суданом III по методу Гольдмана (пропись Раскина Г И и Левинсона Л Б, 1957)

Исследование метаболической активности нейтрофилов проводилось методом реакции «спонтанного» поглощения и восстановления нитросинего тетразолия. НСТ-тест выполнялся по методике Stuart J с соавт (1975) в модификации Нагоева Б С (1983) Количественную оценку цитохимических

реакций давали основываясь на принципах Kaplow L S (1955) и выражали конечный результат в условных цитохимических единицах (уел ед )

С целью объективизации оценки полученных количественных данных, а также для определения степени достоверности диссертационной работы весь цифровой материал подвергался математической обработке Она проводилась на персональном компьютере с использованием статистических функций редактора электронных таблиц Excel из пакета Microsoft office

Степень достоверности определяли согласно критериям Стьюдента, которые позволяют работать с относительно небольшой выборкой клинического материала (Каминский JIС., 1964, Бирюкова РН, 1965, Урбах Б Ю, 1975) Об однородности нейтрофилов по ш ферментативной активности судили по изменению коэффициента вариации Как известно, в однородном материале этот коэффициент не превышает 5-10% (Рокитцкий П Ф , 1973)

При определении сопряженности цитохимических коэффициентов с основными гематологическими показателями (лейкоцитозом, лейкоформулой, СОЭ) использовался критерий х2» при необходимости с поправкой Йетса (Сепетлиев ДА, 1968, Шевченко ИТ с соавт, 1970, Рокитцкий ПФ, 1973, Урбах Б Ю, 1975, АвтандиловГ Г, 1990)

Функционально-метаболическая активность лейкоцитов у здоровых людей. Для оценки цитохимических изменений ферментативной активности МП и КФ, содержания ГЛ, ЛПД, КБ, а также фагоцитарной активности лейкоцитов при помощи показателей НСТ-теста нейтрофилов при диффузных болезнях соединительной ткани необходима стандартизация физиологических показателей внутриклеточных компонентов у здоровых людей Это сводится к определению цитохимических показателей в выборке, которую составляют клинически здоровые лица

В медицинских исследованиях норму рассматривают как некоторую количественную меру, характеризующую частоту проявления данного признака или свойства у практически здоровых людей Известно, что даже у одного человека «нормальные» показатели могут иметь определенные пределы колебаний Для установления этих пределов нормы были применены известные законы и приемы статистики (Сепетлиев ДА, 1968, Рокитцкий ПФ, 1973, Кабатов Ю.Ф, Славин М.П, 1976)

Цитохимическое изучение ахтивности МП, КФ, содержания КБ, ГЛ и ЛПД, а также показателей НСТ-теста проведено у 61 практически здоровых .людей в возрасте от 16 до 57 лет (29 мужчин и 32 женщины) Обследованные лица предварительно прошли клиншо-лабораторное обследование Лица, у которых в процессе наблюдений выявлены патологические сдвиги, исключены из разработки Основную массу составили доноры станции переливания крови (табл 1)

Таблица 1

Уровни исследуемых показателей у лиц контрольной группы (усл. ед.)

Показатель п Хтш-Хщах X±m ¿S X±2S

Миелопероксидаза (МП) 61 186-219 204±0,9 6,9 190-218

Катионный белок (КБ) 61 88-149 116±1,9 14,5 87-145

Липиды (ЛПД) 61 216-306 261 ±2,9 2Í,2 217-305

Кислая фосфатаза (КФ) 57 32-83 55±1,6 12,0 31-79

Гликоген (ГЛ) 61 154-215 184±1,7 13,0 158-210

НСГ-тест 61 2-32 13±0,8 6,1 1-25

Величины, полученные нами при комплексном цитохимическом и цито-иммунологическом обследовании контрольной группы, совпадают с показателями, выявленными другими авторами у здоровых лиц (Нагоев Б С , 1985, Гулиев М 0 , 2000, Тхазаплижева М М, 2005, Канокова Я В , 2006 и др ) Достаточный объем исследования, общепризнанность, специфичность и воспроизводимость методов позволили расценивать полученные результаты как критерии нормы при проведении дальнейших исследований и клинико-цитохимических сопоставлений при диффузных болезнях соединительной ткани

Содержание компонентов микробицидной системы нейтрофильных лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Комплексное изучение цитохимических показателей в динамике патологического процесса у больных ДБСТ в целом по группе выявило весьма важные закономерности (табл 2)

Обнаружено достоверное угнетение ферментативной активности МП, уровня КБ и внутриклеточных ЛПД В го же время констатирована высокая активность КФ, высокие цифры интралейкоцитарного ГЛ Максимальные отклонения от нормы показателей микробицидных компонентов зарегистрированы в стадии разгара заболевания, с тенденцией к восстановлению в последующих периодах исследования В стадии ремиссии, через 1-1,5 месяца после выписки из стационара показатели интралейкоцитарных компонентов приближаются к показателям здоровых лиц

При этом степень изменения цитохимических показателей у больных ДБСТ находилась в зависимости от распространенности патологического процесса

Та&лица 2

Показатели функциональной и метаболической активности лейкоцитов в динамике у больных диффузными болезнями соединительной ткани в целом по группе (усл. ед.)

Исследуемые компоненты Пери -оды иссл п Ххпш'Хщах Х±т Р ра

МП I 118 113-189 151±1,3 <0,001 -

П 118 102-199 155±1,8 <0,001 >0,05

П1 118 146-213 179±1,3 <0,001 <0,001

IV 113 167-219 196±0,9 <0,001 <0,001

КБ I 118 20-69 54±0,8 <0,001 -

II 118 16-77 60±1,4 <0,001 <0,001

III 118 49-114 91±0,8 <0,001 <0,001

IV 115 78-134 112±0,9 >0,05 <0,001

лцд I 118 149-203 185±0,8 <0,001 -

II 118 345-234 200±2,0 <0,001 <0,001

III 118 178-258 228±1,5 <0,001 <0,001

IV 114 219-276 255±0,9 >0,05 <0,001

КФ I 118 98-149 118±0,7 <0,001 -

II 118 75-127 93±0,8 <0,001 <0,001

Ш 116 56-112 7б±0,9 <0,001 <0,001

IV 114 38-88 59±0,8 <0,05 <0,001

гл I 118 203-270 233±1,1 <0,001 -

II 118 190-275 229±1,5 <0,001 <0,05

III 118 174-251 207±1,2 <0,001 <0,001

IV 115 163-224 190±0,9 <0,001 <0,001

НС1 -тест I 118 23-86 44±0,9 <0,001 -

II 118 19-65 32±0,7 <0,001 <0,001

III 118 13-41 22±0,4 <0,001 <0,001

IV 116 5-26 14±0,3 >0,05 <0,001

Примечание п - количество обследованных, стадии заболевания I - разгара заболевания, П - стихания островоспалительных явлений, III - регресса клинических проявлений, IV - клинико-лабораторной ремиссии, Р - достоверность различия по отношению к группе здоровых, Р1 - достоверность различия по отношению к цредыдущему периоду болезни

У больных ограниченными формами ДБСТ показатели1 исследуемых компонентов максимально отклонены от нормы при поступлении в стационар, с тенденцией к восстановлению в последующих периодах исследования Однако в конце стационарного лечения нормализации уровня микробицидных компонентов не произошло Достоверное восстановление уровня изучаемых

и

показателей у больных БС и ДКВ наступило в стадии клинико-лабораторной ремиссии (рис 1)

Рис 1 Динамика показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани в зависимости от периода исследования

У больных СКВ выявлены более выраженные изменения показателей компонентов мшфобицидной системы в I и П периодах исследования в сравнении с показателями больных ограниченными формами ДБСТ При этом наибольшие отклонения показателей МП, КБ, ЛГЩ и ГЛ от физиологической нормы наблюдаются на фоне начатого лечения, чем при поступлении в стационар В то же время показатели КФ имеют максимальные значения при поступлении в стационар с тенденцией к снижению на фоне начатого лечения Изменения показателей компонентов микробицидной системы во П периоде исследования, возможно, обусловлены системным применением глюкокортикостероидов и цитостатиков, действие которых было направлено на подавление иммунокомплексной патологии В последующих периодах исследования происходят разнонаправденные изменения уровня компонентов микробицидной системы в сторону восстановления Однако в конце стационарного лечения нормализации показателей изучаемых компонентов не происходит В стадии клинико-лабораторной ремиссии уровни изучаемых показателей (МП, КБ, ЛГЩ, КФ и ГЛ) достоверно отличаются от показателей здоровых лиц (рис 2) Возможно, это является неблагоприятным прогностическим критерием в плане развития затяжных форм заболевания, а также укорочения периода ремиссии

300

шлпд

200

250

100

150

50

0

а нсг

гиоровые I

II

IV

гест

Рис 2 Динамика показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных системной красной волчанкой в зависимости от периода исследования

Изучение содержания микробицидных р омпонентов в нейтрофилах проведено у больных СКВ с различными формами течения заболевания

Более существенные изменения цитохимических показателей обнаружены у больных с острым течением Менее выраженные отклонения от нормы отмечены у больных с подострым и хроническим течением Более выраженные изменения показателей МП, КБ, ЛПД и ГЛ наблюдаются на фоне начатого лечения, а показателей КФ - при поступлении в стационар Дальнейшие исследования показали тенденцию к восстановлению изучаемых показателей В стадии регресса клинических проявлений нормализации показателей микробицидных компонентов не наступило В стадии клиаико-лабораторной ремиссии достоверное восстановление уровня КФ наступило у больных с хроническим течением СКВ, в то время как у остальных больных показатели МП, КБ, ЛГЩ, КФ и ГЛ достоверно отличались от показателей здоровых лиц Хотя у некоторой части больных с хроническим и подострым течением СКВ уровень изучаемых показателей находился е предела* нормальных величин, что предполагает более высокую активность защитно-приспособительных механизмов организма у данных пациентов и позволяет судить о продолжительности периода ремиссии

Исследования в 1рулпе больных СКВ с различными степенями активности патологического процесса показали значительные изменения цитохимических показателей в I и II периодах исследования

Более существенные изменения показателей микробицидных компонентов выявлены у больных с III и II степенью активности Менее выраженные сдвиги

изучаемых показателей отмечены у больных с I степенью активности. Более выраженные изменения показателей МП, КБ, ЛПД и ГЛ наблюдаются на фоне начатого лечения, а показателей КФ - при поступлении в стационар. Дальнейшие исследования в этих группах показали тенденцию к восстановлению исследуемых показателей. Однако в стадии регресса клинических проявлений показатели вышеперечисленных компонентов значительно отлетались от физиологической нормы. В стадии хлинико-лабораторной ремиссии у больных с I степенью активности СКВ показатели КФ находились в пределах колебаний здоровых лиц. У остальных пациентов значения компонентов микробицидной системы достоверно отличались от показателей физиологической нормы. Хотя у некоторой части больных с I и II степенью активности СКВ, в стадии клинико-лабораторной ремиссии показатели изучаемых компонентов достигали показателей здоровых лиц.

Изучение цитохимических показателей у больных ДБСТ в зависимости от наличия сопутствующих хронических заболеваний внутренних органов (бронхит, холецистит, панкреатит, гастрит и т.д.) выявило определенные закономерности. У больных с сопутствующими заболеваниями выявлены более существенные изменения цитохимических показателей в сравнении с группой больных без сопутствующей патологии (рис. 3).

300 250 200 150 100 50 0

Ш МП

здоровые I

и ЛПД

Н ГЛ

В КБ

Рис. 3. Динамика основных компонентов микробицидной системы и метаболической активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани с сопутствующими заболеваниями

При этом значения изучаемых показателей имеют более выраженный характер при поступлении в стационар, с тенденцией к восстановлению к

стадии клинико-лабораторной ремиссии. Однако изменения показателей микробицидных компонентов в сторону восстановления в группе больных с сопутствующими заболеваниями происходили медленнее, чем в группе больных без сопутствующей патологии а соответствующих периодах (рис, 4).

Рис. 4. Динамика основных компонентов микробицидной системы а метаболической активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани без сопутствующих заболевший

В стадии клинико-лабораторной ремиссии цитохимические показатели больных с сопутствующими заболеваниями значительно отличались от показателей здоровых лиц, а также от показателей больных без сопутствующей патологии. Более длительные и стойкие изменения микробицидных компонентов у больных с сопутствующей патологией, видимо, связаны с дополнительным влиянием хронических воспалительных очагов на состояние функциональной и метаболической активности лейкоцитов.

Состояние метаболической функции нейтрофилов у больных диффузными болезнями соединительной ткани Спонтанный НСТ-тест. Цитохимический тест восстановления нитросинего тетразолия является общепризнанным для выявления дефектов метаболической и фагоцитарной функций нейтрофильных гранулоцитов. НСТ-тест позволяет выявлять наличие т.н. «респираторного взрыва», который возникает в нейтрофилах в связи с процессами фагоцитоза (ВаеЬпег 11.Ь. й а!., 1967,1974).

Проведенное исследование и изучение функционально-метаболической активности лейкоцитов методом спонтанного НСТ-теста у больных ДБСТ в целом по группе выявило значительное повышение тетразолиевой активности с максимальным значением при поступлении в стационар, с постепенным снижением в последующих периодах исследования и достоверным восстановлением в стадии клинико-лабораторкой ремиссии {см табл 2)

Изучение тетразолиевой активности у больных ДБСТ, в зависимости от распространенности патологического процесса, выявило более выраженное повышение исследуемого показателя при поступлении в стационар у больных СКВ (53±1,4 уел ед, р<0,00"), чем у больных ограниченными формами ДБСТ (37±0,7 уел ед, р<0,001) В стадии стихания островоспалительных явлений отмечена тенденция к снижению показателей НСТ-теста, что составляет 39±1,1 уел ед, р<0,001 - у больных СКВ и 28±0,5 уел ед, р<0,001 - у больных ограниченными формами ДБСТ Однако, в стадии регресса клинических проявлений показатели тетразолиевой активности у больных СКВ и у больных ограниченными формами ДБСТ не достигают физиологической нормы, составляя 24±0,8 уел ед (р<0,001) и 20±0,4 уел ед (р<0,001) соответственно Хотя, в исследованных группах с БС и ДКВ имелись больные, у которых значения активности НСТ-теста в данной стадии находились в пределах нормальных физиологических величин У данных больных отмечена быстрая положительная динамика патологического процесса, что предполагает высокую активность защитно-приспособительных механизмов организма В стадии клинико-лабораторной ремиссии полное восстановление показателей НСТ-теста происходит у больных ограниченными формами ДБСТ (13±0,4 уел ед, р>0,05), в то время как у больных СКВ показатели тетразолиевой активности остаются достоверно выше показателей здоровых лиц (16±0,4 уел ед, р<0,001) При этом степень повышения тетразолиевой активности у больных СКВ находилась в тесной зависимости от формы течения и степени активности патологического процесса

Исследование тетразолиевой активности у больных СКВ в зависимости от формы течения заболевангя выявило значимое повышение исследуемого показателя в стадии разгара заболевания, более выраженное у больных с острым и подострым течением и менее выраженное у больных с хроническим течением Дальнейшие исследования в этих группах больных выявили постепенное снижение тетразолиевой активности При этом в стадии клинико-лабораторной ремиссии уровень спонтанного НСТ-теста у больных с острым и подострым течением заболевания оставался достоверно выше показателей здоровых лиц, а у больных с хроническим течением приближался к норме

Исследование спонтанного НСТ-теста у больных СКВ в зависимости от степени активности патолошческого процесса также выявило существенное повышение показателей НСТ-теста в стадии разгара заболевания, более выраженное у больных с III степенью Дальнейшие исследования выявили постепенное снижение показателей НСТ-теста При этом в стадии клинико-лабораторной ремиссии уровень спонтанного НСТ-теста у больных с Ш и II

степенью активности оставался достоверно выше показателей здоровых лиц, а у больных с I степенью активности достиг пределов нормы

Также, у больных ДБСТ с сопутствующими заболеваниями зарегистрированы более высокие показатели тетразолиевой активности, чем у больных без сопутствующей патолоши, с максимальными значениями в стадии разгара заболевания с тенденцией к снижению в последующих периодах Однако в стадии клинико-лабораторной ремиссии уровень НСТ-теста у больных с сопутствующими заболеваниями оставался достоверно выше показателей здоровых лиц (см. рис 3), в то время как, у больных без сопутствующих заболеваний достиг физиологической нормы (см рис 4)

Таким образом, комплексное исследование цитохимических показателей микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов в динамике патологического процесса у больных диффузными болезнями соединительной ткани выявило важные закономерности. Результаты проведенных нами исследований показали, что изменения количественной и функциональной активности компонентов в лейкоцитах у наблюдавшихся нами больных диффузными болезнями соединительной ткани с различными клиническими вариантами оказались неоднородны и разнонаправлены Анализ изучаемых параметров по всей труппе больных диффузными болезнями соединительной ткани выявил угнетение активности миелопероксидазы, содержания катионного белка и лигшдов на фоне повышения активности кислой фосфатазы. а также концентрации инпралейкоцитарного гликогена, имеющие наиболее выраженный характер в стадии разгара заболевания В динамике патологического процесса, в ходе лечения, параллельно клиническому улучшению наблюдаются закономерные последовательные и разнонаправленные изменения уровня цитохимических показателей в нейтрофилах, в сторону восстановления В стадии ремиссии, через 1-1,5 месяца после выписки го стационара показатели ингралейкоцитарных компонентов приближаются к показателям здоровых лиц

При анализе динамики количественного содержания компонентов микробицидной системы нейтрофилов при различных клинических разновидностях диффузных болезней соединительной ткани выявлены статистически значимые закономерные различия Проведенные исследования выявили, чгго у больных с ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани наблюдалось умеренное подавление миелопероксидазы, катионного беякаи липидов, имеющее более выраженный характер в стадии разгара заболевания В то же время, также, в стадии разгара заболевания, у обследованных пациентов обнаружены максимально высокие показатели активности кислой фосфатазы и накопление гликогена При этом в динамике патологического процесса, наблюдалось более заметное и быстрое восстановление указанных компонентов с нормализацией их в стадии клинико-лабораторной ремиссии, что предполагало благоприятное течение диффузных болезней соединительной ткани с ограниченными формами с длительным безрецидивным периодом

Вместе с тем, у больных системной красной волчанкой выявлены более выраженные изменения показателей компонентов микробицидной системы при поступлении в стационар и на начальных этапах лечения в сравнении с показателями

больных ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани При этом наибольшие отклонения показателей миелопероксидазы, катионного белка, липвдов и гликогена от физиологической нормы наблюдаются на фоне начатого лечения, чем при поступлении в стационар В то же время показатели кислой фосфатазы имеют максимальные значения при поступлении в стационар с тенденцией к снижению на фоне начатого лечения В последующих периодах исследования происходят разнонаправленные изменения уровня компонентов микробицидной системы в сторону восстановления Однако в стадии клинико-лабораторной ремиссии нормализации изучаемых показателей не происходит Изменения показателей компонентов микробицидной системы во втором периоде исследования, возможно, обусловлены системным применением глюкокортикостероидов и цитостатиков, действие которых было направлено на подавление иммунокомплексной патологии

Исследование и изучение метаболической активности лейкоцитов методом спонтанного НСТ-теста у больных диффузными болезнями соединительной ткани в целом по группе выявило усиление показателей восстановления ншросинего тетразолия в период разгара заболевания с постепенной динамичной нормализацией к периоду клинического выздоровления При этом степень повышения тетразолиевой активности нейтрофююв закономерно коррелировала с клиническими разновидностями диффузных болезней соединительной ткани, тяжестью патологического процесса у больных системной красной волчанкой, сопутствующими хроническими заболеваниями При этом НСТ-тест имел тенденц ию к нормализации в стадии клинико-лабораторной ремиссии

Следовательно, выявленные в нашей работе цитохимические изменения микробицидной системы нейтрофююв подтверждают и расширяют представление о диффузных болезнях соединительной ткани, как о хронических, рецидивирующих заболеваниях, в патогенезе которых существенную роль играют процессы нарушения внутриклеточного метаболизма нейтрофююв Следует отметить, что закономерные изменения важнейших биологически активных компонентов лейкоцитов и выраженные сдвига активности НСТ-теста - показателя фагоцитарной и метаболической активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани позволяют оценить степень напряженности эффекторного звена иммунитета. Установлена их связь с течением болезни, эффективностью лечения, формированием затяжных форм, а также готовностью к нозым рецидивам Учитывая выявленные закономерности, простоту выполнения и воспроизвод имость, цитохимические и цитоиммунологйческие тесты можно рекомендовать к применению в практике в качестве клинико-лабораторных тестов с целью диагностики и прогноза, для оценки состояния эффекторного звена иммунитета у больных диффузными болезнями соединительной ткани

Сопряженность клинико-лабораторных и цитохимических показателей у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Для выяснения вопроса о диагностической ценности описанных выше изменений микробицидных компонентов лейкоцитов при диффузных болезнях

соединительной ткани была поставлена задача определить, дают ли цитохимические компоненты самостоятельную новую информацию или они дублируют гематологические показатели

По Гублеру В Е (1970) информативность признака зависит от частоты, с которой он встречается при данном заболевании и сходных болезнях, подлежащих дифференциальной диагностике Другой важной оценкой информативности может служить сопряженность интересующего признака с другими симптомами, обычными для данного заболевания, особенно близкими по генезу с изучаемьгм признаком Для интралейкоцитарных компонентов такими близкими признаками можно считать лейкоцитоз, палочкоядерный сдвиг лейкоцитарной формулы и скорость оседания эритроцитов (СОЭ) Учитывая, что указанные параметры являются неотъемлемой частью традиционного общего анализа крови, необходимо было объективно решить вопрос, имеется ли какая-либо сопряженность между ними и микробицидными компонентами нейтрофилов.

Для решения поставленной задачи был использован статистический метод, позволяющий установить объективную взаимосвязь между указанными показателями (Сепетлиев Д А, 1968, Рокитцкий П Ф , 1973, Урбах В Ю , 1975, Кабатов Ю Ф, Славин М Б , 1976) С этой целью составлялись четырехпольные таблицы, в которые вносили частота двух альтернативных распределений сравниваемых признаков наличие или отсутствие лейкоцитоза, повышение активности МП, КФ, содержания КБ, ГЛ, ЛПД с выходом за пределы нормы или отсутствие такового, наличие или отсутствие палочкоядерного сдвига, повышения СОЭ и повышения количества внутриклеточных компонентов с выходом за пределы нормы или отсутс твие такового и т д

Согласно данным ДМ Гольдберга, Е Д Гольдберга (1970), В В Соколова, А И Грибовой (1975) и Г.Б Берлингера (1994), за норму было принято число лейкоцитов, равное 8х109/л Ядерным сдвигом влево считали содержание палочкоядерных нейтрофилов более 5%, а повышенным считали СОЭ выше 15 мм /ч. За верхнюю границу нормы внутриклеточных показателей нейтрофилов принимали величины, полученные при обследовании здоровых людей Обработка табличного материала проводилась по формуле, включающей поправку Йетса (Рокитцкий П Ф, 1973, Урбах В Ю , 1975)

При установлении наличия сопряженности признавался достаточным 5% уровень значительности, а вероятность последней определялась по таблице % -распределения при одной свободе Результаты, полученные при выяснении сопряженности между степенью активности МП,' КФ нейтрофилов, содержанием КБ, ГЛ, ЛПД, значениями НС'Т - теста и показателями гемограммы у больных диффузными болезнями соединительной ткани представлены в табл. 3

Таблица 3

Сопряженность цитохимических и гематологических показателей у больных диффузными болезнями соединительной ткани

Цитохимические показатели п Лейкоцитоз Палочкоядерный сдвиг СОЭ

X4 Р х2 Р Р

Миелопероксидаза 118 3,117 <0,001 4,363 <0,001 2,754 <0,01

Кислая фосфатаза 118 12,692 <0,001 11,482 <0,001 3,385 <0,001

Катионный белок 118 4,861 <0,001 3,470 <0,001 7,466 <0,001

Гликоген 118 9,272 <0,001 5,077 <0,001 6,844 <0,001

Лшиды 118 3,551 <0,001 3,232 <0,001 5,670 <0,001

НСТ-тест 118 3,108 <0,001 4,440 <0,001 4,518 <0,001

Таким образом, сравнение цитохимических показателей не выявило сопряженности со значениями лейкоцитоза, процентом палочкоядерных нейтрофилов и СОЭ у больных диффузными болезнями соединительной ткани Следовательно, сравниваемые показатели не дублируют друг друга Представленный материал свидетельствует о том, что цитохимические исследования компонентов микробицидной системы лейкоцитов дают обширную дополнительную информацию о развитии патологического процесса в динамике воспалительного процесса и могут использоваться для оценки эффекторного звена иммунитета

ВЫВОДЫ

1 У больных диффузными болезнями соединительной ткани наблюдаются изменения в состоянии функциональной активности лейкоцитов, что проявляется угнетением содержания кагионного белка, липидов и активности миелопероксидазы на фоне повышения значений содержания гликогена и активности кислой фосфатазы, носящие неспецифических характер и являющиеся объективными критериями для оценки состояния резистентности организма

2 Закономерные и разнонаправленные сдвиги интралейкоцитарных компонентов у больных диффузными болезнями соединительной ткани характеризуются угнетением содержания катионного белка, липидов и активности миелопероксидазы на фоне повышения значений содержания гликогена и активности ¿кислой фосфатазы, зависящие от характера, клинической формы, распространенности и выраженности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний

3 У больных диффузными болезнями соединительной ткани выявлено достоверное возрастание тетразолиевой активности гранулоцитов в спонтанном

НСТ-тесте, степень которого зависит от клинической формы и степени тяжести заболевания, наличия сопутствующей патологии

4 Степень и длительность изменения внутриклеточных компонентов микробицидной системы и показателей НСТ-теста лейкоцитов зависят от клинической формы, стадии, степени тяжести, длительности патологического процесса, а также полноты выздоровления Резко выраженные и длительные изменения исследуемых показателей свидетельствуют о возможности развития затяжных форм заболевания и наличия сопутствующих заболеваний

5 У больных диффузными болезнями соединительной ткани не выявлено достоверной сопряженности между изученными показателями (миелопероксидаза, катионный белок, липиды, кислая фосфатаза, гликоген и НСТ-тест) и результатами анализа крови (лейкоцитоз, палочкоядерный сдвиг, СОЭ) Следовательно, исследования цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов дают дополнительную информацию о развитии патологического процесса у больных различными клиническими формами диффузных болезней соединительной ткани

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 У больных ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани (дискоидная красная волчанка, бляшечная склеродермия) и системной красной волчанкой следует проводить исследование состояния функциональной (миелопероксидаза, кислая фосфатаза, катионный белок, липиды и гликоген) и метаболической (спонтанный НСТ-тест) активности лейкоцитов для определения стадии заболевания, глубины патологического процесса, наличия сопутствующих заболеваний, эффективности лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов

2 Длительные и стойкие нарушения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных системной красной волчанкой свидетельствуют о развитии затяжных форм заболевания, а также о возможности возникновения ранних рецидивов

3 Полученные результаты изученных показателей у здоровых людей могут быть использованы в качестве исходных критериев для оценки результатов исследований функциональной и метаболической активности лейкоцитов в клинической практике и научных исследованиях (МП - 204±0,9 уел ед , КФ -55±1,6 уел ед , КБ - 116±1,9 уел ед, ЛПД - 261±2,9 уел ед , ГЛ - 184±1,7 уел ед , спонтанный НСТ-тест - 13±0,8 уел ед)

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Цагова М X Клинико-лабораторная характеристика больных коллагенозами / М X Цагова УУ Вестник КБГУ, серия «Медицинские науки» -Нальчик,2004 -№8 -С 29-30

2 Цагова М X Состояние метаболизма нешрофилов у больных коллагенозами / МХ Цагова, МО Гулиев УУ Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины УУ Тез научн работ IX Всеросс съезд дерматовенерологов - М , 2005 - Т 1 - С 42-43

3 Цагова МХ Миелопероксидазная активность лейкоцитов у больных дискоидной красной волчанкой и бляшечной склеродермией / М X Цагова УУ Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению УУ Матер научно-практ конф - Нальчик, 2005 -С 125

4 Цагова М X Цитохимия гликогена нейтрофилов у больных коллагенозами У М X Цагова УУ Достижения медицинской науки -практическому здравоохранению УУ Матер научно-практ конф — Нальчик,

2005 -С 126

5 Цагова М.Х Состояние активности липидов у больных коллагенозами У М X Цагова УУ Вестник КБГУ, серия «Медицинские науки» - Нальчик, 2006 -№9 -С 42-44

6 Цагова М X Ферментативная активность лейкоцитов у больных коллагенозами У М X Цагова УУ Вестник КБГУ, серия «Медицинские науки» -Нальчик,2006 -№9 -С 44-45

7 Цагова М X Функционально-метаболическая активность нешрофильных гранулоциюв у здоровых людей У М X Цагова УУ Перспектива - 2006 УУ Матер Всеросс научной конф студентов, аспирантов и молодых ученых - Нальчик,

2006 -Т 3 -С 83-84

8 Цагова МХ Активность кислой фосфатазы лейкоцитов у больных коллагенозами У М X Цагова УУ Диагностика и терапия дерматозов УУ Тез научн работ IX Всеросс конф дерматовенерологов - Екатеринбург, 2006 - с 3

9 Цагова М X Показатели активности спонтанного НСТ-теста у больных коллагенозами У М X Цагова УУ Диагностика и терапия дерматозов УУ Тез научн. работ IX Всеросс конф дерматовенерологов - Екатеринбург, 2006 - с 5

10 Нагоев Б С Энергетический запас лейкоцитов у больных дискоидной красной волчанкой, системной красной волчанкой и бляшечной склеродермией У Б С Нагоев, М X Цагова УУ Доклады АМАН. - Нальчик, 2006 - Т 8, №2 - С 146-150

11 Цагова МХ Функционально-метаболическая активность нейтрофильных гранулоцитов у больных красной волчанкой У М X Цагова УУ Перспектива -

2007 // Матер Междунар конгр. студентов, аспирантов и молодых ученых -Нальчик,2007 -Т 4 -С 144-146

12 Нагоев Б С Функционально-метаболическ<м активность нейтрофильных гранулоцитов у больных системной красной волчанкой / Б С Нагоев, MX Цагова//Клиническая лабораторная диагностика - М,2008 -№1 -С 47-49

Подписано в печать 24,03 08

Объем 1 п л_ Тираж 100 экз

Формат 60x84 '/16 Заказ № 26 5

Типография ВМедА, 194044, СПб, ул Академика Лебедева, 6

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Основоположниками учения о кол-лагенозах - болезнях соединительной ткани, объединенных сходными клинико-морфологическими изменениями явились в 1941 г. P. Klemperer, A. Pollack и G. Bathr [89]. Из заболеваний этой группы наибольшее значение для дерматологов имеют красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит.

Повсеместно отмечается рост заболеваемости красной волчанкой, особенно ее системной формой [89]. Заболеваемость красной волчанкой по данным различных авторов составляет от 4 до 250 новых случаев на 100 тыс. населения в год [85, 179]. Красная волчанка встречается во всех климато-географических зонах. Отмечаются возрастные и расовые различия в частоте заболевания. Более 70% больных с системной красной волчанкой заболевают в возрасте 14-40 лет, а «пик» заболеваемости приходится на 14-25 лет [179]. Соотношение мужчин и женщин, заболевших системной красной волчанкой, составляет от 1:8 [179] до 1:10-15 [85]. Однако среди детей соотношение мальчиков и девочек составляет 1:3 [179]. Склеродермия - второе по частоте, вслед за красной волчанкой, заболевание из группы диффузных болезней соединительной ткани. Ее распространенность составляет 32-45 случаев на 100 тыс. населения [89].

Этиология и патогенез красной волчанки и склеродермии остаются не выясненными. Однако, одной из основных гипотез в патогенезе склеродермии является роль иммунных нарушений, а системная красная волчанка согласно исследованиям В.А. Насоновой, А.И. Сперанского и N. Sonnichsen признана классическим примером аутоиммунной болезни, характеризующейся широким спектром нарушений иммунного гомеостаза [89]. Р!В. Петров считает эталоном неорганоспецифических аутоиммунных болезней не только системную, но и дискоидную красную волчанку, склеродермию, дерматомиозит [89].

Несмотря на многочисленные исследования в области изучения патогенеза диффузных болезней соединительной ткани, многие вопросы остаются не решенными. В связи с этим значительный интерес представляет изучение иммунного статуса, включающего в себя оценку клеточных факторов неспецифической защиты организма. Одним из показателей неспецифической резистентности организма является функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов, ответственных за процесс фагоцитоза в очаге воспаления и опосредованное участие в В-клеточном иммунитете [112, 133, 168, 174, 297]. Состояние микробицидной активности нейтрофилов оценивается по содержанию-и активности в цитоплазме азурофильных и специфических гранул (миелопе-роксидазы, катионных белков, кислой и щелочной фосфатазы, липидов, гликогена и др.). Комплексному исследованию интралейкоцитарных компонентов нейтрофилов при диффузных болезнях соединительной ткани не уделялось достаточного внимания. Поэтому, изучение активности катионных белков, липидов, гликогена, а также миелопероксидазы, кислой фосфатазы нейтрофильных лейкоцитов, содержания в них и определение показателей спонтанного тетразолиевого теста в динамике течения диффузных болезней соединительной ткани с различными клиническими формами является актуальным в. процессе изучения неспецифической резистентности организма при этой группе заболеваний.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Провести клинико-цитохимическую оценку неспецифической резистентности организма при диффузных болезнях соединительной ткани с помощью изучения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить у больных диффузными болезнями соединительной ткани с помощью цитохимических методов исследования функциональную активность лейкоцитов по изменению уровня катионного белка, липидов, гликогена, активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы.

2. Установить закономерности изменения интралейкоцитарных компонентов у больных диффузными болезнями соединительной ткани в. зависимости от клинической формы, тяжести и распространенности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний.

3. Оценить метаболическую и фагоцитарную активность лейкоцитов в динамике у больных диффузными болезнями соединительной ткани путем проведения HGT-теста.

4. Установить значение функционально-метаболической активности лейкоцитов в патогенетических механизмах диффузных болезней соединительной ткани, а также показать клинико-диагностическую информативность и практическую значимость комплексного определения основных биологически активных интралейкоцитарных компонентов.

5. Провести сопоставление цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов (миелопероксидазы, катионного белка, липидов, кислой фосфата-зы, гликогена и НСТ-теста) с данными гемограммы (количеством лейкоцитов, палочкоядерным сдвигом, СОЭ).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Проведено комплексное динамическое- изучение основных компонентов интралейкоцитарной микробицидной системы нейтро-филов и их функционально-метаболической активности у больных диффузными болезнями соединительной ткани в зависимости от периода, клинической формы, тяжести и распространенности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний.

Установлено, что у пациентов диффузными болезнями соединительной ткани происходит угнетение ферментативной активности миелопероксидазы, снижение уровня цитоплазматических катионных белков, липидов и повышение активности кислой фосфатазы, содержания гликогена, возрастание показателей спонтанного теста с нитросиним тетразолием.

Установлено, что у больных с ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани в стадии разгара заболевания отмечается умеренное снижение уровня миелопероксидазы, катионного белка, липидов и повышение уровня кислой фосфатазы, спонтанного НСТ-теста, а также гликогена с постепенной нормализацией данных показателей по мере исчезновения клинических проявлений кожного процесса. У пациентов с системной красной волчанкой в стадии разгара заболевания и на начальных этапах лечения зарегистрированы выраженные отклонения показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов. Восстановление показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у данной категории больных не происходит.

У больных диффузными болезнями соединительной ткани с сопутствующими хроническими заболеваниями выявлены более выраженные и стойкие изменения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов, проявляющиеся угнетением активности миелопероксидазы, катионного белка, липидов и нарастанием активности кислой фосфатазы, спонтанного НСТ-теста, а также уровня гликогена. Стойкие изменения показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов свидетельствуют о снижении резервных возможностей организма и указывают на неблагоприятный прогноз заболевания.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Определение уровней цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани может быть использовано для оценки глубины патологического процесса.

Установлено, что степень выраженности цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов зависит от клинической формы и стадии диффузных болезней соединительной ткани, наличия сопутствующих заболеваний. Показано, что длительные и стойкие нарушения показателей основных компонентов микробицидной системы и метаболической активности лейкоцитов могут свидетельствовать о развитии затяжных форм заболевания и возникновении ранних рецидивов.

Выявленные закономерности показателей микробицидной системы организма могут быть использованы в качестве дополнительных критериев для диагностики тяжести процесса, эффективности лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов.

ЛИЧНОЕ УЧАСТИЕ АВТОРА В ПОЛУЧЕНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ. Автор осуществил планирование исследования, выполнял весь объем цитохимических исследований на различных стадиях заболевания. Автором лично сформирована база данных, проведены статистическая обработка и обобщение полученных данных.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Изменения функциональной активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединительной ткани проявляются угнетением активности мие-лопероксидазы, катионного белка, липидов на фоне повышения активности кислой фосфатазы и уровня гликогена.

2. У больных диффузными болезнями соединительной ткани происходят изменения метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов, что проявляется усилением тетразолиевой активности.

3. Комплексное определение уровней показателей функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных диффузными болезнями соединич тельной ткани является эффективным и доступным способом оценки глубины патологического процесса, что позволяет использовать полученные в ходе исследований закономерности в качестве дополнительных критериев для оценки распространенности, формы течения и степени тяжести патологического процесса, эффективности проведенного лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов.

РЕАЛИЗАЦИЯ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Работа выполнена в соответствии с комплексным планом НИР ГОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х.М. Бербекова» Федерального агентства по образованию по программе «Фундаментальные исследования. Университеты России», раздел II «Медицина» по проблеме «Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов и среднемолекулярных пептидов сыворотки крови в норме и при инфекционных заболеваниях различной этиологии» (зарегистрирована в ВНТИ-центре, государственная регистрация за № 01.990.004250). Результаты диссертационной работы доложены на многих научно-практических конференциях и опубликованы в печати. Материалы диссертационной работы, внедрены в практику работы ГУЗ Кожно-венерологический диспансер МЗ КБР и используются в учебном процессе на кафедрах и курсах дерматовенерологии, ревматологии, инфекционных болезней, микробиологии и иммунологии Кабардино-Балкарского госуниверситета при изучении тем «Красная волчанка», «Склеродермия», «Инфекция, инфекционный процесс», «Неспецифическая реактивность и иммунитет».

АПРОБАЦИЯ И ПУБЛИКАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Основные положения диссертационной работы обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников медицинского факультета Кабардино-Балкарского госуниверситета (г. Нальчик, 2003-2007), на научно-практических конференциях Республиканского филиала Всероссийского научно-медицинского общества дерматовенерологов (г. Нальчик, 2003-2007), на IX Всероссийском съезде дерматовенерологов (Москва, 2005), на научной конференции «Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению» (г. Нальчик, 2005), на IX Всероссийской конференции дерматовенерологов (г. Екатеринбург, 2006), на Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2006», «Перспектива-2007» (г. Нальчик, 2006, 2007).

По материалам диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, в том числе 1 работа в реферируемом ВАК журнале «Клиническая лабораторная диагностика».

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационный материал изложен на 172 страницах текста компьютерного набора, содержит введение, 5 глав, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 247 отечественных и 89 зарубежных авторов. Диссертационная работа иллюстрирована 47 таблицами, 32 рисунками и 9 клиническими наблюдениями.

140 ВЫВОДЫ

1. У больных диффузными болезнями соединительной ткани наблюдаются изменения в состоянии функциональной активности лейкоцитов, что проявляется угнетением содержания катионного белка, липидов и активности миелопероксидазы на фоне повышения значений содержания гликогена и активности кислой фосфатазы, носящие неспецифический характер и являющиеся объективными критериями для оценки состояния резистентности организма.

2. Закономерные и разнонаправленные сдвиги интралейкоцитарных компонентов у больных диффузными болезнями соединительной ткани характеризуются угнетением содержания катионного белка, липидов и активности миелопероксидазы на фоне повышения значений содержания гликогена и активности кислой фосфатазы, зависящие от характера, клинической формы, распространенности и выраженности патологического процесса, а также наличия сопутствующих заболеваний.

3. У больных диффузными болезнями соединительной ткани выявлено достоверное возрастание тетразолиевой активности гранулоцитов в спонтанном НСТ-тесте, степень которого зависит от клинической формы и степени тяжести заболевания, наличия сопутствующей патологии.

4. Степень и длительность изменения внутриклеточных компонентов микроби-цидной системы и показателей НСТ-теста лейкоцитов зависят от клинической формы, стадии, степени тяжести, длительности патологического процесса, а также полноты выздоровления. Резко выраженные и длительные изменения исследуемых показателей свидетельствуют о возможности развития затяжных форм заболевания, а также о возникновении ранних рецидивов.

5. У больных диффузными болезнями соединительной ткани не выявлено достоверной сопряженности между изученными показателями (миелопероксидаза, катионный белок, липиды, кислая фосфатаза, гликоген и НСТ-тест) и результатами анализа крови (лейкоцитоз, палочкоядерный сдвиг, СОЭ). Следовательно, исследования цитохимических показателей нейтрофильных гранулоцитов дают дополнительную информацию о развитии патологического процесса у больных различными клиническими формами диффузных болезней соединительной ткани.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У больных ограниченными формами диффузных болезней соединительной ткани (дискоидная красная волчанка, бляшечная склеродермия) и системной красной волчанкой следует проводить исследование состояния функциональной (миелопероксидаза, кислая фосфатаза, катионный белок, липиды и гликоген) и метаболической (спонтанный НСТ-тест) активности лейкоцитов для определения стадии заболевания, глубины патологического процесса, наличия сопутствующих заболеваний, эффективности лечения и полноты наступившей ремиссии, а также для прогнозирования развития затяжных форм заболевания и возникновения ранних рецидивов.

2. Длительные и стойкие нарушения состояния функциональной и метаболической активности лейкоцитов у больных системной красной волчанкой свидетельствуют о развитии затяжных форм заболевания, а также о возможности возникновения ранних рецидивов.

3. Полученные результаты изученных показателей у здоровых людей могут быть использованы в качестве исходных критериев для оценки результатов исследований функциональной и метаболической активности лейкоцитов в клинической практике и научных исследованиях (МП — 204±0,9 усл. ед.; КФ - 55±1,6 усл. ед.; КБ - 116±1,9 усл. ед.; ЛПД - 261±2,9 усл. ед.; ГЛ — 184±1,7 усл. ед.; спонтанный НСТ-тест - 13±0,8 усл. ед.).