Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Функциональная и метаболическая активность клеток иммунной системы в патогенезе аллергического риносинусита

На правах рукописи

Коленчукова Оксана Александровна

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ В ПАТОГЕНЕЗЕ АЛЛЕРГИЧЕСКОГО РИНОСИНУСИТА

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология (биологические науки)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

1 г СЕН 2013

005532900

Новосибирск, 2013

005532900

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательском институте медицинских проблем Севера» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Смирнова Светлана Витальевна Савченко Андрей Анатольевич

Официальные оппоненты:

Аутеншлюс Александр Исаевич - доктор биологических наук, профессор, заведующий лабораторией физико-химической индикации иммунных процессов, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт молекулярной биологии и биофизики» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук;

Куртасова Людмила Михайловна - доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры клинической иммунологии, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздрава России;

Филатов Олег Юрьевич - доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры патологической физиологии лечебного факультета, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Томск).

Защита состоится «03» октября 2013 г. в 14-00 часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 в ФГБУ «НИИ клинической иммунологии» СО РАМН по адресу: 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

иммунологии» СО РАМН. .

Автореферат разослан СЦ£уС<4СЯ 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

ФГБУ «НИИ клинической

С. Н. Белогородцев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы/Полость носа (начальный отдел респираторного тракта) - первичный фильтр для вдыхаемого воздуха, содержащего аллергены и/или не иммунологические активаторы, являющиеся причиной развития аллергического воспалёния. По данным различных исследований, аллергическим риносинуситом (АРС) страдает 10-30% населения планеты (М. Rachmiel et al., 2006; T. Shirai et al., 2006; E.B. Kern et al., 2007; W. Chen et al., 2009; Г.З. Пискунов, 2009). Существующие классификации APC в большинстве своем противоречивы, смешивающие этиологические, патогенетические, морфологические и клинические подходы, что затрудняет их практическое применение. Понятие АРС собирательное, отражающее как самостоятельную нозологическую форму, так и псевдоаллергический синдром, объединенный общностью диагностических критериев со стороны носа и его придаточных пазух, но различающихся по этиологии и патогенезу (C.B. Смирнова, 1998; В.И. Пыцкий и соавт., 1999). При этом если истинная аллергия является специфическим (иммунологическим) процессом, то в основе развития псевдоаллергии лежат неспецифические (не иммунологические) механизмы, вовлекающие в патологический процесс те же органы-мишени, что и при истинной аллергии, но без предварительной сенсибилизации организма (отсутствие иммунологической стадии) - «аллергия без иммунологии» (А.Д.Адо, 1983). Иммунологическая стадия является основным пусковым механизмом истинного аллергического риносинусита (ИАРС), после которой развивается ряд изменений, связанных с высвобождением медиаторов воспаления (патохимическая стадия) и их действием на различные органы и ткани, приводящих к их повреждению и развитию клинических проявлений заболевания (патофизиологическая стадия). Следует предположить, что иммунопатологической основой запуска ИАРС, может быть любой из четырех классических типов аллергических реакций (Р. Gell & R. Coombs, 1968). Следовательно, изучение иммунореактивности при аллергическом риносинусите требует дифференцированного подхода с учетом специфических и неспецифических механизмов аллергических реакций.

Иммунный ответ при аллергии сопровождается повреждением собственных тканей организма, а характер аллергического воспаления во многом определяется причиной, вызвавшей его. Инициация иммунного ответа индуцируется цитокиновым профилем, влияющим и определяющим тип иммунного реагирования (А.И. Аутеншлюс и др., 2008; В.А. Козлов и др., 2009). Цитокины выполняют роль универсальных регуляторов межклеточных взаимодействий: регуляцию иммунных реакций, процессов пролиферации, миграции и дифферен-цировки клеток, координации функционирования иммунной системы. В основе развития аллергической реакции лежит комплекс иммунопатологических механизмов, приводящих к избыточной продукции антител или пролиферации Т-лимфоцитов. Многочисленные клинико-иммунологические исследования подтвердили, что системное аллергическое воспаление в основном обусловлено дисбалансом между Thl- и Th2-лимфоцитами, гиперпродукцией ИЛ-4, актива-

цией эозинофилов, тучных клеток и др. На данный момент внутриклеточная экспрессия ИФН-у и ИЛ-4 является наиболее достоверными маркерами Thl- и ТЪ2-клеток, соответственно. Формирование этих двух типов клеток из «наивных» CD4+-лимфоцитов (ThO) зависит от сочетания некоторых факторов: тип и доза антигена, природа антигенпредставляющих клеток, контактные взаимодействия, растворимые факторы (цитокины). Активация Thl-лимфоцитов, сек-ретирующих ИЛ-2 и ИФН-у, ведет к стимуляции, главным образом, функций Т-лимфоцитов и макрофагов и развитию клеточного типа иммунного ответа, тогда как синтез ТЪ2-клеток в основном через ИЛ-4 и ИЛ-6 стимулирует преимущественно гуморальное звено иммунной системы (S.L. Seneviratne et al., 2006; A. Matsuda et al., 2007; В.А. Козлов и др., 2009; Р.М. Хаитов и др., 2010; А.А. Ярилин, 2010).

На сегодняшний день установлено, что функциональные свойства лимфоцитов, например, такие как дифференцировка, пролиферация, синтез рецепторов и цитокинов, тесно связаны с активностью внутриклеточных ферментов (Р. Diaz Vivancos et al., 2010; A.A. Савченко и др., 2012). Клетки иммунной системы имеют богатый набор рецепторов, что делает их высокочувствительными к разнообразным нарушениям системы гомеостаза организма. Индикаторами внутриклеточного метаболизма являются НАД(Ф)-зависимые дегидрогеназы в связи с тем, что, во-первых, основными переносчиками электронов в клетках являются пиридиновые нуклеотиды, а отсюда - активное участие оксидоредук-таз в биоэнергетических процессах; во-вторых, НАД(Ф)-зависимые дегидрогеназы, участвуя в направленной координации сопряженных метаболических потоков, в значительной степени обусловливают адаптивные изменения клеточного обмена веществ (N. De Holone et al., 2000; JI.M. Куртасова и др., 2003; М. Bulbul и др., 2008). Следовательно, одним из перспективных направлений, позволяющих охарактеризовать нарушение иммунореактивности при аллергическом воспалении, является изучение внутриклеточного метаболизма клеток иммунной системы.

Функциональное состояние фагоцитирующих клеток можно охарактеризовать через уровень «респираторного взрыва», при котором наблюдается резкое увеличение потребления кислорода за счет преобразования его в активные формы. Способность нейтрофильных гранулоцитов образовывать нужное количество активных форм кислорода (АФК) может служить прогностическим признаком для оценки дальнейшего хода воспалительного процесса, а уровень ответа на индуктор «респираторного взрыва» может характеризовать активность защитных сил организма. При стимуляции нейтрофилов происходит увеличение потребления кислорода, усиление окисления глюкозы в пентозофос-фатном цикле (ПФП) и, как результат этого, - продукция АФК, обладающих бактерицидным действием (О.Ю. Филатов, 1999; М. Graf et al., 2001; F. H. Igney et al.,2004; H.A. Маянский и др., 2004; И.Н. Швыдченко, и др., 2005; Н.Г. Пле-хова и др., 2006; Л.М. Куртасова и др., 2006; Б.В. Пинегин и др., 2007; Е.Г. Моисеева и др., 2007).

Естественная микрофлора человека играет важную пусковую роль в механизме формирования иммунитета и неспецифических защитных реакций организма человека. Существует связь аллергических заболеваний с персистирова-нием отдельных представителей условно-патогенной микрофлоры (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Nesseria, spp.). Наличие дисбактериоза ведет к нарушению функционального состояния иммунной системы. Тип иммунного реагирования зависит от изменения микробного пейзажа - степени и характера дисбактериоза (A.B. Семенов, 2006; А.Б. Туровский, 2008; В.Г. Мельников, 2010). Естественно, при аллергическом риносинусите персистирующая условно-патогенная бактериальная микрофлора может модифицировать патогенетические механизмы заболевания и служить основой формирования хронического аллергического воспаления.

Проведение комплексного исследования, включающего изучение функционального состояния иммунной системы, активности окислительно-восстановительных ферментов лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов крови, а также микробиоценоза слизистой оболочки носа в зависимости от ге-неза аллергического воспаления, позволит не только получить новые сведения о патогенезе аллергических риносинуситов, но и разработать новые патогенетически обоснованные методы дифференциальной диагностики и прогноза заболевания.

Цель работы:

на основании изучения функциональной и метаболической активности клеток иммунной системы, микробиоценоза слизистой оболочки носа доказать гетерогенность аллергического риносинусита и выделить его патогенетические типы с целью оптимизации дифференциальной диагностики. Задачи исследования:

1. Оценить состояние гуморального и клеточного звеньев иммунитета при аллергических риносинуситах в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа. , " ,

2. Изучить роль цитокиновой регуляции межклеточных взаимодействий при риносинуситах в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции.

3. Определить активность НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови при риносинуситах в зависимости от формы и типа аллергической реакции.

4. Исследовать функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов крови при аллергических риносинуситах в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа.

5. Изучить микробиоценоз слизистой оболочки носа при аллергических риносинуситах с учетом патогенетических форм, ...

6. Выявить характер взаимосвязи микробиоценоза слизистой оболочки носа с уровнем иммунологической реактивности и внутриклеточным метаболизмом клеток иммунной системы при' риносинуситах в зависймостй от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакций.

Научная новизна

Выявлен разнонаправленный дисбаланс соотношения Т-хелперов в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергического риносинусита: при истинной аллергии (атопический, цитотоксический и иммунокомплексный типы) наблюдается сдвиг Т-хелперных клонов в сторону активации ТЪ2-лимфоцитов и сопровождается повышением концентрации ИЛ-4 и ИЛ-6; для псевдоаллергического воспаления (полипозный PC) и гиперчувствительности замедленного типа характерен дисбаланс Т-хелперов в сторону Thl-типа и повышение концентрации ИФН-у и ИЛ-2.

Впервые установлено, что метаболическая активность лимфоцитов крови при аллергических риносинуситах характеризуется нарушением равновесия энергетических и пластических процессов, происходящих на фоне дисфункции иммунной системы. При истинной аллергии отмечается усиление пластических процессов, интенсификация липидного катаболизма и увеличение скорости как анаэробного, так и аэробного окисления. При цитотоксическом типе риносинусита активируются гликолитические процессы и анаболизм липидов, приводящие к повышению энергетики лимфоцитов. Иммунокомплексный тип характеризуется повышением липидного анаболизма и азотного обмена при снижении синтеза аминокислот, а также активацией малат-аспартатно-водородного шунта митохондрий. Гиперчувствительность замедленного типа истинного аллергического риносинусита сопровождается угнетением пластических процессов и повышением энергетики клетки за счет интенсификации цикла трикарбоновых кислот. Псевдоаллергия (полипозный PC) характеризуется интенсификацией аэробных процессов и липидного анаболизма при снижении анаэробных процессов и аминокислотного обмена.

Впервые выявлены разнонаправленные изменения функциональной и метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов при риносинуситах истинного и псевдоаллергического генеза как при суммарной хемилюминесцен-ции, так и при образовании отдельно супероксидного аниона. Дополнительная стимуляция «дыхательного взрыва» опсонизированным зимозаном и бактериями рода Staphylococcus показывает различные резервные метаболические возможности нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергического риносинусита.

Впервые установлено, что характер нарушения микробного пейзажа слизистой оболочки носа зависит от патогенетической формы риносинусита и определяется иммунологическими и метаболическими особенностями лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов.

Микробный пейзаж различается по составу в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергического риносинусита, что обусловлено различными патогенетическими механизмами аллергического воспаления. При истинном аллергическом риносинусите наблюдается увеличение количества штаммов S.aureus, S.epidermidis, S.haemolyticus. Для всех иммунопатологических типов истинного аллергического риносинусита выявлено увеличение количества стафилококков, при атопии обнаружено повышение

КОЕ штаммов Б.аигеш, З.ергс^егтгсИз, 8.кагто1уИст. При цитотоксическом и иммунокомплексном типах наблюдается рост стрептококковой микрофлоры и штаммов М.сШаггкаШ, а для гиперчувствительности замедленного типа характерно увеличение количества микрококков относительно атопии и контроля. Псевдоаллергический риносинусит (полипозный РС) характеризуется увеличением количества высоковирулентных стафилококков, стрептококков, энте-робактерий и нейссерий.

Установленные различия в иммунологической реактивности клеток иммунной системы показывают гетерогенность аллергического риносинусита и доказывают необходимость выделения патогенетических форм и иммунопатологических типов.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическая значимость работы состоит в углублении знаний об имму-нопатогенезе аллергического риносинусита на основании изучения иммунного статуса, метаболической активности лимфоцитов и нейтрофилов крови и микробиоценоза слизистой оболочки носа. Результаты, полученные при комплексном исследовании, дополняют представления об общих (типовых) и характерных патогенетических особенностях в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергического риносинусита.

Практическая значимость работы состоит в том, что полученные результаты свидетельствуют о гетерогенности аллергического риносинусита и в качестве дифференциально-диагностических маркеров можно рекомендовать оценку показателей, отражающих приоритетную направленность иммунного ответа и метаболическую активность клеток иммунной системы.

В результате проведенных исследований получены новые данные о закономерностях изменений функциональной и метаболической активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от генеза аллергического воспаления, что расширяет и углубляет фундаментальные представления об иммунопатогенезе аллергического риносинусита.

Высокая информативность показателей активности НАД- и НАДФ- зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах и нейтрофильных гранулоцитах, а также функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов крови позволили разработать способы прогноза бактериальных осложнений риносинуситов (пат. №№ 1Ш2438134 С1;1Ш2431837 С2).

Результаты проведенных исследований внедрены в учебный процесс кафедр клинической иммунологии и физиологии ГБОУ ВПО Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России, кафедрах медицинской биологии и биотехнологии ИФБиБТ ФГАОУ ВПО Сибирского федерального университета, а также в клинику ФГБУ «НИИ медицинских проблем Севера» СО РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Иммунологическая реактивность при аллергическом риносинусите зависит от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции и проявляется разнонаправленным дисбалансом Т-хелперов и цитоки-новой регуляции межклеточных взаимодействий: при атопическом, цитотокси-ческом и иммунокомплексном типах - девиация в сторону ТЬ2-лимфоцитов, при псевдоаллергии (полипозный РС) и гиперчувствительности замедленного типа - ТЫ-клеток.

2. Активность внутриклеточных ферментов в лимфоцитах крови при аллергическом риносинусите зависит от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции и характеризуется нарушением равновесия энергетических и пластических процессов, происходящих на фоне дисфункции иммунной системы: при атопическом, цитотоксическом и иммунокомплексном типах - активация пластических процессов и при псевдоаллергии (полипозный РС) и гиперчувствительности замедленного типа - повышение энергетических процессов.

3. Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при аллергическом риносинусите зависит от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции и определяется особенностями их метаболического статуса: при атопии - снижение активности НАДФН-оксидазы за счет низкого уровня пластических процессов, при псевдоаллергии (полипозный РС) г повышение уровня выработки супероксидного аниона.

4. Микробный пейзаж слизистой оболочки носа при аллергическом риносинусите зависит от патогенетической формы аллергии и характеризуется дисбиотическими нарушениями видового состава бактериальной микрофлоры: при истинной аллергии - увеличением количества стафилококков, при псевдоаллергии (полипозный РС) - увеличением количества стафилококков, стрептококков и энтеробактерий.

5. Характер взаимосвязей микробиоценоза слизистой оболочки носа с параметрами функциональной и метаболической активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов доказывает гетерогенность аллергического риносинуси-та и обосновывает выделение его патогенетических форм и иммунопатологических типов.

Апробация материалов диссертации

Основные результаты диссертации представлены на 5-й Всероссийской научно-практической конференции «Наука и практика в оториноларингологии» (Москва, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летнему юбилею НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН и 25-летнему юбилею НИИ клинической иммунологии СО РАМН «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск, 2006); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Томск, 2009; Красноярск 2010; Иркутск 2012); на итоговой научно-практической конференции с международным участием «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Красноярск, 2009, 2010,

2011, 2012), на Всероссийских форумах с международным участием имени академика В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкгг-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007, 2008, 2009, 2011); на X международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии й иммунофармакологии», посвященные 100-летию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо (Казань, 2009); на 3 Международном конгрессе по респираторной поддержке (Красноярск, 2009); на19Й1 ERS Annual Congress (Vienna, Austria, 2009, 2013); на научно-практической конференции Российского общества ринологов (Курск, 2009; Ярославль, 2010); на 4-й Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010); на 7-м Сибирском съезде физиологов (Красноярск, 2012), 15th International congress on Circumpolar Health Fairbanks (Alaska, USA, 2012).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 108 печатных работ из них 24 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для докторских диссертаций, и 1 монография; получено 3 патента на изобретение.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 328 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы, содержащей результаты собственных исследований и их обсуждение, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 80 рисунками и 37 таблицами. Список литературы содержит 226 отечественных и 104 иностранных источников.

Личный вклад

Все исследования, формирование базы данных, статистическая обработка полученных результатов, а также написание диссертации, статей и монографии проведены лично автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа проводилась в ФГБУ «НИИМПС» СО РАМН в ЛОР-отделении (зав. отделением к.м.н. Т.И. Ким), в ЛОР отделении НУЗ Дорожной клинической больницы на станции Красноярск ОАО «РЖД» (гл. врач Т.А. Иокст) и лаборатории молекулярно-клеточной физиологии и патологии (зав. лабораторией А.А. Савченко) с 2008 по 2013 год в рамках НИР ФГБУ «НИИМПС» СО РАМН №№0120.0601520,0120.0950339.

Обследовано 454 больных аллергическим риносинуситом (АРС) в возрасте от 21 до 50 лет (Ме=27,5, С25==18, C7J=49,7): в возрасте 21-34 лет составили 38,7% (п=176), 35-50 лет - 61,3% (п=278). Среди них было 186 мужчин (40,9%) и 268 женщин (59,1%). В структуре патологии выделены: истинный аллергический РС (ИАРС, п=310) - 68,2% и псевдоаллергический РС (полипоз-ный риносинусит - ПАРС, п=58) - 12,7%. На первом этапе в группе ИАРС выделены: АРС с доказанным атопическим механизмом (поллиноз, п=98); АРС с диагностированной хламидийной инфекцией (Chlamydophila pneumoniaé) на слизистой оболочке носа (п=91) и группа АРС с другими патогенетическими механизмами (п=121). Группа контроля состояла из практически здоровых до-

норов крови ГБУЗ Красноярского краевого центра крови №1 (п=87), сопоставимых по полу и возрасту.

Диагностика аллергического риносинусита основывалась на комплексном обследовании больных оториноларингологом и аллергологом-иммунологом. При постановке диагноза аллергического риносинусита использованы стандартные общеклинические методы и методы специфической аллергологической диагностики: аллергологический анамнез, кожное тестирование с неинфекционными аллергенами; определение уровней общего и специфических IgE методом ИФА.

Для верификации хламидийной этиологии АРС применялись два метода прямого выявления хламидийных структур Chlamydophila pneumoniae: полиме-разно-цепная реакция с использованием тест-систем "ВектоХлами-ДНК-амли" ("Вектор-Бест", г. Новосибирск) и прямой иммунофлюоресцентный анализ с использованием тест-систем "Хламислайд" ("Лабдиагностика", г. Москва). Также определяли специфические антитела классов M и G к Chlamydophila pneumoniae в сыворотке крови иммуноферментным анализом с использованием иммуноферментных тест-системы "ХламиБест-стрип" ("Вектор-Бест", г. Новосибирск).

Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов крови оценивали с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CD56, CD19, CD25, CD95, HLA-DR (ТОО «Сорбент», г. Москва). Для дополнительной характеристики Т-клеточного звена иммунной системы вычисляли соотношение CD4+/CD8+, индекс активации Т-лимфоцитов (HLA-DR+/CD19+).

Определение иммуноглобулинов A, M и G проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Состояние гуморального иммунитета характеризовали также уровнем относительного синтеза IgA (IgA/CD19+), IgM (Ig M/CD194) и IgG (IgG/CD19+). Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли турбидиметрическим методом. Концентрацию цитокинов (ИЛ-lp, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а, ИФН-а и ИФН-у) и иммуноглобулинов (IgE и slgA) определяли иммуноферментным методом.

Определение активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови и нейтрофильных гранулоцитах проводили биолюминесцентным методом (А.А. Савченко, 1989, 1991). Активность нейтрофильных гранулоцитов исследовали с помощью хемилюминесцентного метода.

Микробиоценоз слизистой оболочки носа изучали с помощью стандартных микробиологических методик.

Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью пакета прикладных программ Statistica 7.0 (StatSoft, Inc., 2004). Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (Me) и интерквартильного размаха в виде 25 и 75 процентилей (С25 и С75). Нормальность распределения проверялась методом Колмагорова-Смирнова. Достоверность различий между показателями независимых выборок оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни с поправкой Бонферрони, связанных групп - Фридмана (S) и

Вилкоксона (Т) с поправкой Бонферрони. Для исследования силы взаимосвязей показателей проведена корреляция по Спирмену (р) (О.Ю. Реброва, 2002). Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез S данном исследовании принимался равным 0,05. Для решения системного анализа использовался нейросетевой анализ (А.Н. Горбань, 1990). Нейронные сети созданы с помощью программы «Panalyzer-2004» (Д.А. Россиев, 2004).

Работа проводилась с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации и была одобрена комитетом по биомедицинской этике ФГБУ «НИИМПС» СО РАМН.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе изучения патогенеза аллергического риносинусита нами были выделены две патогенетические формы заболевания: истинный аллергический (ИАРС) и псевдоаллергический PC (ПАРС). В структуре ИАРС выделены: атопический риносинусит (АтРС), АРС с верифицированной хламидийной инфекцией слизистой оболочки носа (АРС с XJI), а также группа АРС с другими патогенетическими механизмами (АРС неясного генеза).

В результате исследования обнаружено нарушение микробиоценоза у больных аллергическим риносинуситом (табл. 1,2). Выявлено увеличение общей микробной численности условно-патогенных микроорганизмов вне зависимости от патогенетической формы. При истинной аллергии несомненным этиологическим фактором либо фактором, предрасполагающим к развитию патологического процесса, являлись в большей степени стафилококки. В результате анализа видовой принадлежности стафилококков, было установлено увеличение общей численности коагулазопозитивного - золотистого, а также коагула-зонегативных - эпидермального и гемолитического стафилококков в исследуемых группах.

В группе с ИАРС выявлены такие представители стафилококков, как S.aureus, S.epidermidis, S.haemolyticus S.hominis S.cohnii S.capitis S.hyicius S.xylosus. В группе ПАРС - S.aureus, S.epidermidis, S.haemolyticus, S.hominis, S.capitis, S.xylosus. При ПАРС было обнаружено значительное преобладание микроорганизмов, принадлежащих к родам не только Staphylococcus, но и Streptococcus (повышении КОЕ S.pneumoniae), а также к семейству Enterobacte-riaceae.

Увеличение представительства условно-патогенных бактерий семейства Enterobacteriaceae на слизистой носа свидетельствует о дисбиотическом изменении и их несомненной роли в развитии аллергического воспаления. При АРС на фоне респираторного хламидиоза в составе микробного пейзажа слизистой оболочки носа преобладали стафилококковая и стрептококковая микрофлора, а также грамотрицательные кокки семейства Neisseria и M.catarrhalis. Установлено, что при аллергическом риносинусите имеет место выраженный дисбиоз, а существующие особенности в составе микробиоценоза слизистой оболочки носа в зависимости от патогенетической формы заболевания обусловлены различными патогенетическими механизмами.

Таблица 1

Состав микрофлоры слизистой оболочки носа при разных патогенетических формах АРС, Ме (С25- С75)

Показатели (КОЕ/мл) Контроль (n=87) ИАРС (атопия) (n=98) ПАРС (полипозный PC) (n=58) APCc XJI инфекцией (n=91) АРС неясного генеза (n=121)

1 2 3 4 5

Staphylococcus spp. 5550 (100 -105050) 150000 (2000 - 150000) P,<0,001 900000 (2100 - 1020000) P,=0,040 300100 (11000-1000000) Pi=0,014P2=0,003 6500000 (5000-5000000) P,<0,001

S. aureus 200 (0-200) 15500 (40- 17000) P,<0,001 52550 (100-500000) 10000 (800 - 10000) 1050000 (100-5000000) Pi.z4<0,05

S.epidermidis 1000 (100- 100000) 10000 (1000 - 10000) P,<0,001 5000 (1000 - 100000) P,=0,021 10000 (10000 -100000) 600000 (1000-1000000)

S.haemolyticus 100 (10-100) 10000 (100- 100000) Pi=0,039 55000 (7500 - 2550000) P i=0,023 10000 (10000 -100000) Pi=0,032 1000000 (5500 - 3000000) Pl.2.4<0,05

Sreptococcus spp. 1000 (100 - 1000) 10000 (100-1000000) 8500000 (500000 - 9000000) Pi=0,029 Pz=0,032 1000000 (100 - 5000000) P,=0,026 3000000 (100 - 5000000) P,=0,006

Str.pneumoniae 1000 (0 - 1000) 8000 (100 - 2500) 2500000 (10000-3000000) P,=0,012 150000 (4500 - 2000000) 120000 (1000-150000) Pi.2<0,001

Str. haemolyticus 0 1500 (1000 - 2000) 10000 (1000- 15000) 72000 (1000-150000) 3000 (100 - 53000) P4<0,05

Здесь и в таблице 2: статистически достоверные различия с контрольной группой (Pi); с группой ИАРС (Р2); с группой ПАРС (Р3); с группой АРС с XJI инфекцией (Р4).

Таблица 2

Состав микрофлоры слизистой оболочки носа при разных патогенетических формах APC, Me (С25 - С75)

Показатели (КОЕ/мл) Контроль (n=87) ИАРС (атопия) (n=98) ПАРС (полипозный PC) (n=58) APCc XJI инфекцией (n=91) APC неясного генеза (n=121)

1 2 3 4 5

Enterobacteriaceae spp. 5500 (55 - 10000) 10000 (100-10000) 100000 (100000 - 100000) P,=0,032 550 (100-10000) 3000000 (10000-5000000) P,.2.4<0,001

Micrococcus spp. 1000 (550- 1000) 1000 (100 -10000) 50500 (1000 - 100000) 1000000 (1000000-1000000) Pi=0,009 P2=0,003 350000 (1000 - 500000) P,=0,026 P2=0,03

Nesseria spp. 1000 (1000 - 1000) 5050 (10 -10000) 5000 (5000 - 5000) 505000 (10000 -1000000) P,<0,001 P3=0,026 150000 (5000 - 5000000) P,<0,001

M.catarrhalis 1000 (0- 1000) 10000 (100-15000) 15000 (1000 - 42000) 850000 (1000 - 900000) P,<0,001 10000 (1000-15000) P,<0,001

H.influertzae 0 280000 (1200 - 300000) 0 200000 (4500 - 600000) 2000 (1200 - 3000) P2.4<0,001

Характерной особенностью иммунного реагирования при ИАРС является наличие иммунного дисбаланса по Т-клеточному типу при повышенной активности гуморального звена иммунитета. Т-лимфоциты играют центральную роль в механизмах развития аллергического воспаления (табл.3).

Уровень В-лимфоцитов при ПАРС значительно возрастает. При этом общее количество лимфоцитов, цитотоксических лимфоцитов, В-лимфоцитов, а также маркеров поздней активации Т-лимфоцитов значительно выше в группе ПАРС, чем в группе ИАРС (табл.3,4). Состояние повышенной активности Т-лимфоцитов документируется повышением экспрессии молекул СБ25 и отношением НЬА-Ог+ к С019+ при ИАРС (табл.4).

Таблица 3

Показатели клеточного звена иммунитета при разных патогенетических формах

АРС, Ме С25 - С75)

Показатели Контроль, ___оп 11—О ! ИАРС (атопия) /___ло1* ПАРС (полипозный РС) /___с о\

1 2 3

Лейкоциты (10%) 5,75 (4,25 - 7,25) 6,40 (5,00-8,00) Р,=0,003 6,75 (4,75 - 8,50) Р,=0,02

Лимфоциты (%) 39,0 (34,0-45,0) 31,0(17,0-39,0) Р,<0,001 35,0(22,0-44,0) Р,=0,01 Р2=0,029

Лимфоциты (107л) 2,16(1,60-3,00) 1,65(1,11 -2,47) Р!<0,001 1,99(1,23-2,96)

СБЗТ (%) 67,0 (62,0-73,0) 64,0 (59,0 - 68,0) Р,<0,001 61,0 (56,0-70,0) Р,=0,008

СОЗ+(Ю7л) 1,48(1,08-2,04) 1,07 (0,70-1,60) Р,<0,001 1,28 (0,74-1,70)

СБ4+ (%) 42,2(36,0-47,3) 38,0 (30,0-43,0) Р!<0,001 36,0(25,0-40,0) Р,<0,001

СБ4+(107л) 0,81 (0,64-1,24) 0,56 (0,39-0,91) Р,<0,001 0,70(0,42-0,86) Р,=0,005

СБ8+ (107л) 0,57 (0,35 - 0,79) 0,44(0,27-0,63) Р,=0,007 0,59 (0,32 - 0,82) Р2=0,043

СБ47СБ8+ 1,67(1,20-2,10) 1,45(1,00-2,00) 1,30(0,94-1,78) Р,=0,025

СБ19+(%) 15,0(11,0-21,0) 17,0(13,5-20,0) 19,0(14,0-21,0) Р1=0,011

СБ19+(107л) , 0,33 (0,23 - 0,46) 0,27(0,17-0,45) 0,36(0,21-0,54) Р2=0,04

Здесь и в таблицах 4, 5,6,7,8: статистически достоверные различия с контроль-

- ной группой (РО; с группой ИАРС (Р2).

Таблица 4

Состояние маркеров ранней и поздней активации лимфоцитов при разных

патогенетических ( >ормах APC, Me (С25 - С75)

Показатели Контроль, п=87 ИАРС (атопия) (п=98) ПАРС (полипозный PC) (п=58)

1 2 3

CD25+ (%) 17,5(14,5-23,0) 39,5 (29,0 - 43,0) Р!=0,003 21,0(13,0-69,0)

CD25+ (10у/л) 0,45 (0,32 - 0,62) 0,92 (0,69- 1,65) Р,=0,024 1,01 (0,30 - 1,57)

HLA-DR+ (%) 24,0 (19,0 - 28,0) 19,0(15,0-23,5) Рг=0,014 27,5 (20,0 - 29,0) Р2=0,015

Секреторная составляющая иммунитета занимает центральное место в неотложной защите слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Активность иммунной системы слизистых оболочек носа при ИАРС определяется главным образом продукцией IgA и slgA. Полипозный риносинусит является классическим проявлением псевдоаллергии. В результате чего концентрация IgE при данном заболевании значительно ниже, чем при атопии (табл.5).

Таблица 5

Показатели гуморального звена иммунитета при разных патогенетических формах APC, Me (С25 - С75)

Показатели Контроль, ИАРС ПАРС

(атопия) (полипозный PC)

п=87 (п=98) (п=58)

1 2 3

IgA 1,30(0,78 -2,80) 1,70(1,10-3,10) 1,76(1,09-3,10)

(г/л) Р,=0,044

IgE 35,00 (10,00 - 58,00) 178,00(110,00-220,00) 45,00 (45,00 - 52,00)

(МЕ/мл) Р,<0,001 Р2=0,043

slgA 20,00 (10,00 - 47,00) 92,50 (23,00 - 125,00) 62,50 (17,50 - 87,50)

(МЕ/мл) Р,<0,001

ЦИК 6,00 (3,00 - 9,00) 16,00(11,00-45,00) 16,00 (10,50-45,00)

(о.е.) Pi<0,001 Р,<0,001

Патогенетические механизмы развития аллергических заболеваний обусловлены нарушениями функционального состояния иммунной системы, определяющими тип иммунного реагирования: дисрегуляцией цитокиновой сети, активизацией аллергенспецифических клонов Т-лимфоцитов,

Показатели цитокинового профиля, соотношение регуляторных коэффициентов отражают механизмы реализации воспаления, расширяют спектр биомаркеров многофакторных аллергических заболеваний. В основе патогенеза атопи-

15

ческих заболеваний лежит системное аллергическое воспаление, обусловленное нарушением баланса Т-хелперов 1-го и 2-го типов, гиперпродукцией ИЛ-4, активацией эозинофилов и тучных клеток.

Нами проведено исследование содержания ТЫ- и ТЬ2-типов цитокинов и хемокинов (ИЛ-1р, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИФН-а, ИФН-у и ФНО-а) как в сыворотке крови, так и в назальном секрете у больных ИАРС и ПАРС. Преобладание цитокинов, продуцируемых ТЫ- или ТЬ2-лимфоцитами, определяет направленность развития иммунного ответа по клеточному или гуморальному пути.

Таблица 6

Показатели концентрации цитокинов в сыворотке крови при разных

Показатели (пг/мл) Контроль, п =87 ИАРС (атопия) (п=98) ПАРС (полипозный РС) (п=58)

1 2 3

ИФН-а 2,00 (0,00-24,00) 12,00 (11,00-21,00) 0,00 (0,00-2,00) Р,=0,026

ИФН-у 3,00 (0,00-5,00) 5,00 (0,00-7,00) Р,=0,026 24,00 (2,00-76,00) Р,=0,036

ИЛ-10 2,00 (0,00-5,00) 5,00 (3,00-5,00) 6,00 (4,00-33,00) Р,<0,001 Р2=0,017

ИЛ-2 2,00 (0,00-20,00) 3,00 (0,00-30,00) 50,94 (28,17-52,94) Р,=0,022 Р2<0,05

ИЛ-4 0,50 (0,00-2,00) 11,00 (0,00-23,50) Р,<0,001 0,50 (0,00-0,50) Р2=0,014

ИЛ-6 2,00 (0,00-3,00) 31,00 (14,00-38,00) Р,<0,001 3,85 (0,00-10,00)

ИЛ-8 12,00 (5,00-75,00) 15,00 (4,50-19,00) 103,00 (25,00-190,00) Р,<0,001

ФНО-а 5,00 (0,00-20,00) 2,00 (0,00-17,00) 10,50 (0,00-27,50)

Установлено, что в группе ИАРС концентрация цитокинов (ИФН-а и ИЛ-8) в назальном секрете значительно выше чем в сыворотке крови, что может быть связано с активизацией местного адаптивного иммунитета. Исследование цитокинового профиля при ПАРС показало значительное повышение концен-

16

трации ИФН-у, ИЛ-2 и ФНО-а в сыворотке крови наряду с возрастанием уровня ИЛ-1(3 относительно контроля. Иммунный спектр продукции ИЛ-1 определяется в отношении ТЬ2-клеток усилением пролиферации, индукцией экспрессии рецептора к ИЛ-2 и увеличением содержания ИЛ-4, ИЛ-6. Подобная картина наблюдалась и при исследовании цитокиновой регуляции местной системы иммунитета. Индукция цитокинов ИЛ-4, ИЛ-6 приводит к повышению синтеза ^Е. Вместе с тем, высокий уровень ИЛ-1р - цитокина, который индуцирует на клетках эндотелия сосудов очага воспаления экспрессию молекул адгезии, обеспечивая тем самым остановку нейтрофилов кровеносного русла в зоне воспаления, говорит об активации фагоцитарного звена иммунитета, что доказывается наличием лейкоцитоза и высокой концентрации ЦИК при ПАРС (табл.6,7).

Таблица 7

Показатели концентрации цитокинов в назальных смывах при разных

патогенетических формах АРС, Ме (С25 - С75)

Показатели (пг/мл) Контроль, п =87 ИАРС Сатопия) (п=98) ПАРС (полипозный РС) (п=58)

1 2 3

ИФН-а 16,00 (0,00-70,00) 26,00 (0,00-88,00) 37,00 (0,00-120,00)

ИФН-у 2,00 (0,00-0,50) 2,00 (0,00-0,20) 21,00 (7,00-12,00) Р,=0,012

ИЛ-1р 5,00 (0,00-7,00) 5,00 (4,00-9,00) 58,50 (22,00-390,00) Р1<0,001

ИЛ-2 2,00 . (0,00-0,20) 5,00 (0,00-30,00) 97,07 (45,00-97,07) Р,<0,001 Р2<0,001

ИЛ-4 0,50 (0,00-8,00) 8,00 (1,00-26,00) 0,50 (0,00-0,50) Р,<0,001

ИЛ-6 2,00 (0,00-3,50) 25,0 (13,75-35,50) Р,<0,001 2,50 (0,00-9,00)

ИЛ-8 67,00 (15,00-235,00) 70,00 (19,00-75,00) 253,50 (185,00-270,00) Рг=0,004

Таким образом, изменение цитокинового профиля при ПАРС отражает активацию ТЫ зависимого иммунного ответа на фоне увеличения концентрации провоспалительных цитокинов и уровня хемокинов, регулирующих активность нейтрофилов. Концентрация ФНО-а находится на уровне контроля, при этом наблюдается положительная корреляционная взаимосвязь между ФНО-а,

ИЛ-6 и ИЛ-1р. Известно, что ИЛ-1 по своим биологическим эффектам близок к ФНО-а и ИЛ-6, тандем этих цитокинов практически неразрывно действует в очаге воспаления.

Было выявлено увеличение активности малик-фермента, прямой и обратной реакцией МДГ (рис.1.г, и З.б) во всех исследуемых группах (рис.1 г; рис.2 а; рис.3 б). Доказано, что НАДФМДГ является ключевой реакцией в системе липидного анаболизма. Наблюдаемое повышение активности НАДФМДГ, возможно, необходимо в целях компенсации недостаточности метаболических реакций в цикле Кребса в качестве шунтирования ряда ферментативных реакций лимонного цикла. Энергетические реакции клеток иммунной системы осуществляются не только за счет анаэробного окисления глюкозы, но и за счет кислородозависимых процессов. Уровни Г6ФДГ, прямой и обратной реакции ЛДГ (рис. 1 в, 3 а) и НАФИЦЦГ выше при ИАРС, наряду со снижением активности НАДФН-ГДГ относительно контроля (рис.1 а; рис.2 в; рис.3 в). Активность фермента НАДИЦДГ в лимфоцитах статистически достоверно выше при истинном аллергическом риносинусите, чем при псевдоаллергическом риноси-нусите (рис. 1 д). При этом наблюдается увеличение активности фермента Г6ФДГ в лимфоцитах крови при разных патогенетических формах АРС. В лимфоцитах крови при ИАРС было обнаружено увеличение активности НАДН-ЛДГ (рис.3 а) и снижение уровня активности НАДФГДГ (рис.2 б).

В лимфоцитах крови при истинной аллергии и псевдоаллергии повышается уровень пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Следовательно, в лимфоцитах крови при атопическом риносинусите выражена активация мито-хондриальных окислительно-восстановительных реакций. Следует отметить, что развитие иммунопатологических реакций при ИАРС сопровождается напряжением метаболизма лимфоцитов, заключающимся в усилении пластических процессов, интенсификацией липидного катаболизма и увеличением скорости как анаэробного, так и аэробного окисления.

При псевдоаллергии в лимфоцитах крови выявлено увеличение активности НАДН-ГДГ (рис. 3 г) и снижение НАДФГДГ (рис.2 б) относительно контрольной группы. Таким образом, наблюдается интенсификация цикла Кребса. Цикл трикарбоновых кислот не только определяет интенсивность дыхательной цепи митохондрий (за счет наработки необходимых интермедиатов), но и является связующим звеном между белковым, углеводным и липидным обменами.

Повышение уровня малатдегидрогеназы при ПАРС свидетельствует об активности фермента в малат-аспартатном водородном шунтировании митохондрий, определяя высокую энергетическую способность клетки.

Таким образом, в лимфоцитах крови при псевдоаллергии выявлена интенсификация аэробных процессов и липидного анаболизма при снижении анаэробных процессов и аминокислотного обмена. По-видимому, при активации лимфоцитов повышается роль пентозофосфатного цикла, тогда как при снижении уровня реактивности клеток синтез его продуктов понижен. Повышенная работа пентозофосфатного пути вызывает отток глюкозо-6-фосфата из гликолиза.

В)

120

щ 105

а

г 90

U

s 75

| 60

S

1 45

< 30

15

0

F ,=0.018 ï 7-0,039

^ ' : ! l +f+H

P1=0,029

„, i ■ i' ' "V

Рисунок 1. Активность НАД-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов крови при разных патогенетических формах АРС

Примечание: 1 - контроль; 2 - ИАРС (атопия); 3 - ПАРС (полипозный PC).

Однако в случае истинной аллергии наблюдается активация гликолитиче-ских процессов. Уровень терминальных стадий гликолиза при ИАРС значительно выше, чем при ПАРС.

При этом в лимфоцитах крови при ИАРС и ПАРС происходит увеличение активности ферментов, участвующих в реакциях липидного анаболизма, что,

возможно, необходимо в целях компенсации недостаточности метаболических реакций в цикле Кребса в качестве шунтирования ряда ферментативных реакций лимонного цикла.

Образование активных форм кислорода зависит от функционирования сложного мультимолекулярного комплекса, объединенного общим названием НАДФН-оксидазной ферментативной системы и миелопероксидазного комплекса, который играет немаловажную роль в обезвреживании токсичных продуктов.

а)

б)

25 22,5 20 17,5 1$ 12,5 10 7,5 5 2,5 0

Pi- 0,001

р2= 0,023

р,<( .001

1

|!2,5

I

Я 1,5

3 1 1

< 0,5

о

Р,<0,001

,035

...es и_ 1

в)

35

ы

I 30

s

е 20

В 15

ё

| 10 к

I 5

pi~0 и р2=0,015

1

Ш iii 11ТПТД

Рисунок 2. Активность НАДФ-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови при разных патогенетических формах АРС

Примечание: 1 - контроль; 2 - ИАРС (атопия); 3 - ПАРС (полипозный РС).

При ИАРС и ПАРС обнаружено повышение базовой продукции АФК и увеличение количества АФК, выделенных при стимуляции «респираторного взрыва» опсонизированным зимозаном и живыми суспензиями бактерий Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus aureus (табл.8).

Использование нагрузочных тестов in vitro позволяет смоделировать условия патологического процесса и оценить характер реагирования нейтрофи-лов на стимуляцию, их мобилизационный потенциал и интеграцию внутриклеточных процессов. Значимые различия показаны при стимуляции нейтрофиль-ных гранулоцитов зимозаном или живой бактериальной суспензией в хемилю-минесцентном процессе с различными активаторами реакции в группе контроля и их отсутствие при ИАРС и ПАРС. При индукции нейтрофильных гранулоцитов бактериальной культурой процесс распознавания бактерий происходит значительно активнее при ИАРС и ПАРС по сравнению с контролем, вместе с тем имеет значение, насколько вирулентными являются бактерии.

Рисунок 3. Активность НАДН-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови при разных патогенетических формах АРС

Примечание-. 1 - контроль; 2 - ИАРС (атопия); 3 - ПАРС (полипозный PC).

Можно утверждать, что при атопии основную функцию формирования активных радикалов кислорода в нейтрофильных гранулоцитах берет на себя миелопероксидазный комплекс (МПК), поскольку наблюдалась активизация

только общей хемилюминесценции, тогда как люцигенинзависимая реакция была на уровне контроля. Спонтанная и стимулированная активность супероксидного аниона значительно повышена при ПАРС относительно ИАРС.

Таблица 8

Показатели люминолзависимой хемилюминесценции гранулоцитов крови

при разных патогенетических формах АРС» IV [е (с25-с75)

показатели Контроль, п=87 ИАРС (атопия) (п=98) ПАРС (полипозный РС) (п=58)

1 2 3

Спонтанная хемилюминесценция

1шахх Ю3 (о.е) 7,55(3,11-14,99) 14,91(4,82-37,51) Р,=0,027 15,27(2,61-37,31)

БтаххЮ'' (о.е) 240,5(110,0-565,5) 671,0(115,0-3330,0) Р,=0,002 1170,0(103,95-2225,0) Р,=0,029

Хемилюминесценция, индуцированная зимозаном

ЬпаххЮ3 (о.е) 16,13(6,22-26,55) 45,28(16,44-66,85) Р,<0,001 33,29(10,65-73,82) Р,=0,006

БтаххЮ"* (о.е) 462,0(171,0-971,0) 2220,0(665,0-4710,0) Р1<0,001 1405,0(497,5-4220,0) Р1<0,001

ИА (о.е) 1,64(1,27-2,37) 2,24(1,35-4,59) Р,=0,01 2,09(1,49-2,82) Р,=0,044

Хемилюминесценция, индуцированная эпидермальным стафилококком

1таххЮ3 (о.е) 8,29(3,50-12,04) 31,99(13,30-54,86) Р,<0,001 27,36(17,54-52,79) Р,<0,001

БтаххЮ" (о.е) 286,5(135,5-393,5) 1330,0(311,0-2840,0) Р,<0,001 1660,0(521,0-2840,0) Р1<0,001

ИА (о.е) 1,03(0,64-1,54) 2,15(1,09-6,40) 1,65(1,19-5,27) Р,<0,001

Хемилюминесценция, индуцированная золотистым стафилококком

Ттах (сек) 1262,0(850,0-1559,0) 1889,0(1346,0-2800,0) Р,<0,001 1455,5(1046,0-2351,5)

1таххЮ3 (о.е) ■ 9,34(4,04-17,85) 29,98(18,15-60,31) Р,<0,001 31,37(15,35-55,23) Р,=0,002

БтаххЮ3 (о.е) 276,5(129,5-505,0) 842,0(497,0-2490,0) Р,<0,001 1275,0(651,5-2610,0) Р,<0,001

ИА (о.е) 1,27(0,62-2,10) 3,93(1,63-9,18) Р,<0,001 1,90(1,26-4,58) Р,=0,027

Таким образом, дисбактериоз микробного состава слизистой оболочки носа при аллергическом риносинусите сопровождается дисфункцией фагоцитарного звена иммунитета на фоне цитокиновой дисрегуляции.

Изучение иммунологических показателей при истинном аллергическом риносинусите выявило как общие изменения, так и изменения связанные с иммунопатологическим типом запуска аллергической реакции.

Общими изменениями, характерными для истинной аллергии, являются: снижение количества Т-хелперов и, соответственно, понижение величины соотношения С04+/01>8", возрастание концентрации э^А в назальных смывах. В структуре патологии ИАРС было выделено 4 группы в зависимости от уровня концентрации общего ^Е и кожных тестов: гиперчувствительность немедленного типа или атопический тип (АтРС - кожные реакции, имеющие до 1111 плюсов и развивающиеся чаще всего до 30 минут и высокая концентрация 1§Е); гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ - кожные реакции, имеющие до ++++ плюсов и развивающиеся чаще всего через 24 часа, и низкой концентрацией ^Е); верифицированной хламидийной инфекцией на слизистой оболочке носа и низким уровнем ^Е; группа с низкой концентрацией ^Е.

Исследование иммунного реагирования в выделенных группах ИАРС показало ряд существенных различий. При атопии выявлена недостаточность СВ8+-лимфоцитов, в результате чего поддерживается дисбаланс ТЫ/ТЬ2 в пользу ТЬ2 иммунного ответа, активация В-лимфоцитов и как следствие гиперпродукция ^Е-антител - реагинов, играющих основную роль при развитии гиперчувствительности немедленного типа.

Для ИАРС с гиперчувствительностью замедленного типа характерен лейкоцитоз и лимфоцитоз. При этом уровень Т-лимфоцитов значительно возрастает за счет высокого содержания ЦТЛ, однако концентрация иммуноглобулинов А, М, О и Е при исследуемом типе была значительно ниже относительно атопии (табл. 9, 10). Патогенетически в развитии реакций замедленного типа ведущее значение имеют клеточные механизмы с участием макрофагов сенсибилизированных Т-лимфоцитов, эозинофилов с соответствующим спектром ци-токинов. Исследование иммунного статуса при ИАРС с ГЗТ выявило повышение С08+-лимфоцитов. Содержание КК-лимфоцитов и СБ25+-клеток - маркеров рецептора для ИЛ-2 при ГЗТ повышено относительно контроля, что говорит о сохранении активированного статуса Т-лимфоцитов. При этом ферментативная активность лимфоцитов характеризуется повышением энергетических и снижением пластических процессов.

При изучении иммунологических особенностей при ИАРС, имеющих низкие значения ^Е, была выделена группа с высокой концентрацией циркулирующих иммунных комплексов.Низкий уровень 1§Е исключающий атонические механизмы, высокая концентрация ЦИК позволили выделить иммуноком-плексный тип ИАРС. Высокое содержание НЬА-ОЫ+- и С025+-клеток при этом характеризует состояние повышенной активности Т-лимфоцитов. Снижение уровня НЬА-011+-клеток и индекса активации Т-лимфоцитов может указывать на перераспределение субпопуляций лимфоцитов: в воспаленной ткани накапливается большое число активированных форм, при этом их содержание в периферической крови становится ниже.

Таблица 9

Показатели клеточного звена иммунитета при разных иммунопатологических типах ИАРС, Ме (С25 - С75)

Показатели Контроль, п=87 (1) ГНГ(атопия), п=98(2) ЦТ, 11=91(3) ИК, п=62 (4) ГЗТ, п=59 (5)

Лейкоциты (107л) 5,75 (4,25 - 7,25) 6,40(5,00-8,00) Р,=0,003 6,10(4,90 - 7,73) 6,85(5,75 - 8,50) Р!<0,001 7,75(6,15-9,50) Рш<0,001 Р4=0,002

Лимфоциты (%) 39,0(34,0-45,0) 31,0(17,0-39,0) Р]<0,001 26,0(15,0-37,0) Р(<0,001 Р2=0,003 22,5(16,0-36,0) Р,<0,001 Р2=0,005 42,0(36,0 - 53,0) Р, =0,012 Р2.з,4<0,001

Лимфоциты (107л) 2,16(1,60-3,00) 1,65(1,11 -2,47) Р,<0,001 1,44(0,91-2,21) Р,<0,001 Р2=0,007 1,68(1,11-233) Р,=0,002 3^4(2,64-435) Рщ.4<0,001

СЭЗ+ (%) 67,0(62,0-73,0) 64,0 (59,0 - 68,0) Р,<0,001 64,0(58,0-70,0) Р!<0,01 64,5(59,5-70,5) Р2=0,015 65,00(59,0 - 71,0) Р2=0,011

СБЗ+(109/л) 1,48(1,08 - 2,04) 1,07 (0,70 - 1,60) Р,<0,001 0,86(0,61-134) Р,<0,001 Р2=0,014 1,06(0,70-1,54) Р1<0,001 2,14(1,70-2,71) Рш.4<0,001

С1Э4+ (%) 42,2 (36,0 - 473) 38,0(30,0-43,0) Р,<0,001 37,0(30,0-42,0) Ри<0,001 41,0(35,0-47,0) Р2<0,001 34,0(26,0-40,0) Ри<0,001

СШ+(109/л) 0,81(0,64-1,24) 0,56(0,39-0,91) Р!<0,001 0,47(034-0,80) Р,<0,001 Р2=0,036 Р3=0,022 0,62(0,43-1,08) Р1=0,005 1,13(0,71-1,67) Р (=0,008 Р2,4<0,001

СЭ8+ (%) 25,7(22,0 - 29,4) 25,0 (21,0 - 32,0) 27,0(21,0-31,0) Р3=0,027 22,0(19,0-29,0) Р,=0,032 30,0(25,0-36,0) Р,^<0,001 Р4=0,002

С08+(109/л) 0,57(035-0,79) 0,44 (0,27 - 0,63) Р,=0,007 037 (0,25 - 0,56) Р,<0,001 Р2=0,021 0,40(0,23 - 0,56) Р,<0,001 1,00(0,84-134) Рш.4<0,001

Здесь и в таблицах 10, 11, 12, 13: статистически достоверные различия с контрольной группой (Р|); с группой ГНТ (Р2); с группой ЦТ ((Р3); с группой ИК (Р4).

Таблица 10

Иммунологические показатели при разных иммунопатологических типах ИАРС, Ме (C2s - С75)_

Показатели Контроль, п=87 (1) ПНТ (атопия), п=98(2) ЦТ, п=91 (3) ИК, п=62 (4) гзт, п=59 (5)

CD56+ (107л) 035(0,23 - 0,54) 0,32 (0,19-0,47) 0Д6 (0,15 - 0,43) Р,=0,011 Р2=0,022 0,28(0,18-0,40) Р,=0,018 Р2=0,035 0,55(0,44-0,91) Рш,4<0,001

CD19+ (%) 15,0(11,0-21,0) 17,00 (13,50-20,00) 16,0(12,0-21,0) Р2=0,018 17,0(13,0-20,0) Р2=0,025 17,0(11,0-20,0) Р2=0,028

С019+(107Л) 0^3 (0,23 - 0,46) 0,27 (0,17 - 0,45) 0,21 (0,13 - 0,36) Рц<0,001 0Д5 (0,15-0,42) Р]=0,023 Р2=0,036 0,51(039-0,71) Рш,4<0,001

CD25+ (107л) 0,45(0,32 - 0,62) 0,92 (0,69 - 1,65) Р,=0,024 1,03(0,75 - 2,70) Р,=0,019 1,53(0,61-237) 1,65(0,92-1,86) Р,д<0,001

HLA-DR+ (109/л) 0,53(0,37 - 0,72) 0,44 (0,33 - 0,60) 0,48(033-0,60) 030(0,11-0,41) Р,=0,010 Р2 3=0,047 0,78(0,56- 1,06) Р,=0,006 Р2.з.4<0,001

IgACr/л) 13(0,8-2,8) 1,70(1,10-3,10) Р,=0,044 1,9(1,5-3,4) Ри<0,001 1,5(1,1-1,8) Р3<0,001 1,5(1,1-23) Р3=0,009

IgM (г/л) 1,0(0,4-2,1) 1,10 (0,80 - 1,60) 1,4(1,0-1,6) 13(1,Ы,7) Pi=0,041 Р2=0,043 1,1(0,7-1,4) Р4<0,001 Р3=0,017

IgG (г/л) 11,4(5,4-17,5) 11,00(8,00-14,40) 14,0(11,8-16,1) Р2.з<0,001 10,4(7,1 -13,6) Р3<0,001 9,6(7,0-14,1) Рз <0,001

IgE (МЕ/мл) 35,0(35,0-58,0) 178,00(16,00-220,00) Р,<0,001 30,5(11,0-56,0) Pi.2<0,001 34,5(16,0 - 53,5) Р,,<0,001 15,0(5,0-35,0) Ри<0,001

slgA (МЕ/мл) 20,0(10,0 - 47,0) 92^50 (23,00-125,00) Р,<0,001 60,0(5,0-125,0) Р,<0,001 87,5(15,0-125,0) Р|23<0,001 67,5(10,0 - 92,5) Pi.40,001

ЦИК, (o.e.) 6,00(3,00 - 9,00) 16,00(11,00-45,00) Р,<0,001 14,00(8,00-18,00) Pi<0,001 84,00(60,00- 114,00) Pli3<0,001 20,25 (11^0-38,00) Pi>4<0,001 Р3=0,009

Активность оксидоредуктаз в лимфоцитах крови при иммунокомплекс-ном типе ИАРС характеризуется увеличением липидного анаболизма и активности как азотного обмена, так и работы малат-аспартатно-водородного шунта митохондрий при снижении синтеза аминокислот.

Группа ИАРС с низкой концентрацией IgE и ЦИК имела ряд сходных признаков: значительное повышение уровня NK-лимфоцитов и активированных лимфоцитов, при низком содержании Т-клеток, в частности С08+-клеток. При этом обнаружен повышенный уровень B-лимфоцитов, что доказывается высоким содержанием иммуноглобулинов (IgA, IgM и IgG) и уровней их синтеза. Также в исследуемой группе на слизистой оболочке носа верифицировано носительство Chlamydophila pneumoniae. Хламидии являются внутриклеточными паразитами, проникая в организм воздушно-капельным путем, вызывают поражение клеток эпителия слизистой оболочки дыхательных путей. После инфицирования развивается цитотоксическая реакция, выражающаяся в антите-лообразовании. Антигены хламидий, связанные с мембраной клетки, взаимодействуют с антителами класса G и М. В процессе активации образуются цито-токсический мембраноатакующий комплекс, разрушающий клетку-мишень. Больные с выявленными иммунологическими показателями были отнесены к цитотоксическому типу.

Для определения роли цитокинов при разных иммунопатологических типах аллергических реакций нами исследованы концентрации цитокинов в сыворотке крови и назальном секрете при ИАРС. Под действием аллергенов активируются и пролиферируют ТЪ2-лимфоциты, что приводит к повышенной продукции ИЛ-4 и ИЛ-6 и определяет направленность иммунного ответа преимущественно по гуморальному пути. В результате исследования обнаружено наиболее выраженное повышение концентрации ИЛ-4 в сыворотке и в назальных смывах, наряду с достоверным увеличением содержания ИЛ-6 в назальном секрете при ИАРС атопического, цитотоксического и иммунокомплексного типах.

Специфика цитокинового профиля при ИАРС с иммунокомплексным типом заключается в значительном повышении ФНО-а в сыворотке крови.

Для группы ИАРС с ГЗТ характерно повышение ИЛ-2, ИФН-а и ИФН-у в сыворотке крови. Продукция ИФН-у и ИЛ-2 способствует Thl иммунному ответу на аллергены, одновременно подавляющих образование ТЪ2-клеток. Thl-ответ стимулирует продукцию IgG и формирование Т-клеточного иммунитета.

Исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов методом хемилюминесцентного анализа у больных ИАРС выявило повышенную базовую и резервную фагоцитарную активность при атопии; при АРС с хламидийной инфекцией, а также при ГЗТ только при индукции зимозаном. При ИАРС иммунокомплексного типа функциональная активность нейтрофи-лов, характеризующая суммарную фагоцитарную активность, находилась на низком уровне, что указывает на функциональную недостаточность нейтрофи-лов в реакции «кислородный взрыв», которая характеризует «переваривающий» потенциал клетки.

Таблица 11

Показатели люминолзависимой хемилюминесценции гранулоцитов 1фови при разных иммунопатологических типах __,_,_ИАРС Ме(С25-С75) __

Показатели Контроль, п=87 (1) ГНТ (атопия), п=98 (2) ЦГ,п=91 (3) ИК, п=62 (4) ГЗТ,п=59 (5)

Спонтанная хемшпоминесценция

Тшах (сек) 1006,0 (636,0-1545,0) 1295,5 (732,0-1740,0) 797,0 (604,0-1604,0) 614,0 (360,0-1463,0) Р2=0,03 1062,0 (471,0-2024,0)

ЬпаххЦ)3 (о.е) 7,55(3,11-14,99) 14,91(4,82-37,51) Р 1=0,027 22,18(5,30-39,34) Р 1=0,047 9,04(2,23-20,41) 10,30(2,19-3,044)

БтаххЮ3 (о.е) 240,5 (110,0-565,5) 671,0 (115,0-3330,0) Р,=0,002 1050,0 (101,0-2020,0) Р,=0,016 309,0 (134,0-1170,0) 529,0; (84,6-2410,0)

Хемилюминесценция индуцированная зимозаном

Ттах(сек) 1126,0 (814,0-1526,0) 1216,0 (1031,0-1578,0) 819,0 (480,0-1207,0) Р,=0,009 Р2=0,014 697,0 (435,0-1375,0) 1444,0 (1009,0-2057,0) Р3=0,006

1тахх103 (о.е) 16,13 (6,22-26,55) 45,28(16,44-66,85) Р,<0,001 41,52 (7,13-71,25) Р,=0,024 14,31 (8,59-36,18) Р2=0,002 18,43(12,46-57,03) Р,=0,003

БтаххЮ3 (о.е) 462,0 (171,0-971,0) 2220,0 (665,0-4710,0) Р,<0,001 1680,0 (192,0-4790,0) Р,=0,008 732,0 (307,0-2000,0) Р2=0,023 1320,0 г (448,0-4560,0) Р,=0,003

ИА 1,64(1,27-2,37) 2,24(1,35-4,59) Р,=0,01 1,35(1,06-2,07) Р2=0,032 1,54(0,96-2,77) 1,95(0,95-3,98) Р,=0,003

Функциональная недостаточность фагоцитарной системы является одним из важнейших факторов, способствующих развитию иммунокомплексного типа гиперчувствительности. Снижение функциональной активности можно рассматривать как защитный механизм организма на постоянную антигенную стимуляцию. Функционирование фагоцитарного звена зависит от согласованности деятельности иммунной системы, начиная от продукции провоспалительных цитокинов, обеспечивающих запуск иммунного ответа на аллерген, и заканчивая продукцией специфических антител, облегчающих фагоцитоз. Недостаточность количественная или функциональная хотя бы одного из участников иммунного реагирования способствует развитию неадекватного иммунного ответа. Исследование активности миелопероксидазного комплекса и НАДФН-оксидазной системы в ответ на стимул в виде живых бактериальных культур установило повышенную активность показателей суммарной базовой хемшпо-минесценции нейтрофильных гранулоцитов и стимулированной эпидермаль-ным или золотистым стафилококками при ИАРС иммунокомплексного типа и гиперчувствительности замедленного типа. Образование супероксидного аниона при индуцировании бактериями находится на уровне контроля во всех исследуемых группах (табл.11).

Повышение концентрации условно-патогенных бактерий в исследуемых группах говорит о снижении неспецифического иммунитета, так и общей иммунной резистентности организма. Это документируется наличием отрицательных корреляционных взаимосвязей между представителями условно-патогенной микрофлоры, клеточным и гуморальным звеньями иммунитета, при истинном аллергическом и псевдоаллергическом процессах.

Исследование видового состава микрофлоры слизистой оболочки носа при аллергическом риносинусите выявило как общие изменения, так и изменения, связанные с иммунопатологическим типом запуска аллергической реакции. Общими изменениями, характерными для истинной аллергии, является многообразие микробного спектра слизистой оболочки носа. Количественный состав грамотрицательной микрофлоры имеет тенденцию к увеличению. Появление несвойственных для этого биотопа микроорганизмов позволяет предположить дисбиотические изменения. Не совсем обычная локализация грамотри-цательных бактерий может привести к развитию воспалительного процесса, а, согласно данным литературы, эти бактерии обладают выраженной сенсибилизирующей активностью. Изучение микробного пейзажа слизистой оболочки носа при ИАРС обнаружило некоторые различия в составе микрофлоры в зависимости от иммунопатологического типа. При атопическом и цитотоксическом типах преобладали стафилококки и стрептококки, а также грамотрицательные кокки семейства Neisseria и M.catarrhalis. При иммунокомплексном типе выявлена повышенная концентрация энтеробактерий. В микробиоценозе слизистой оболочки носа при ГЗТ преобладают стафилококки, энтеробактерии и микрококки, а также выявлен высокий процент бактерий Mxatarrhalis. Внутри рода Staphylococcus при ИАРС с гиперчувствительностью немедленного и замедлен-

ного типов доминировали золотистый, эпидермальный и гемолитический стафилококки.

Заключение.: Результаты исследования, изложенные в настоящей работе подтвердили, что аллергический риносинусит является гетерогенным заболеванием, в основе патогенеза которого могут лежать как истинные аллергические, так и псевдоаллергические механизмы. С учетом иммунопатологической основы запуска аллергической реакции (Gell Р. & Coombs R., 1968) нами выделены патогенетические варианты истинного аллергического риносинусита. Установлены характерные особенности состояния клеточного и гуморального звеньев иммунной системы и концентрации цитокинов в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергического риносинусита. Для риносинуситов истинного аллергического генеза характерно повышение содержания CD25+- и НЬА-011+-лимфоцитов, IgA и slgA. При гиперчувствительности замедленного типа в отличие от других типов истинной аллергии наблюдается снижение количества CD4+- и повышение CD8+- клеток. Для псевдоаллергии (полипозный PC) характерно высокое содержание CD 19+-лимфоцитов. Риносинуситы, в основе патогенеза которых превалируют гуморальные механизмы (атопический, цитотоксический, иммунокомплексный), характеризуются девиацией иммунного ответа в сторону ТЬ2-лимфоцитов и сопровождаются повышением концентрации ИЛ-4 и ИЛ-6 относительно псевдоаллергии (полипозный PC) и контроля. При ИАРС, в основе патогенеза которого превалирует гиперчувствительность замедленного типа, и при псевдоаллергии (полипозный PC) отмечена активация Thl-лимфоцитов, сопровождающаяся повышением концентрации ИФН-у и ИЛ-2 относительно риносинусита атопического генеза и контроля.

Выявлены особенности внутриклеточного метаболизма лимфоцитов и нейгрофильных гранулоцитов при аллергическом риносинусите в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции, что оправдывает целесообразность дифференцированного подхода к изучаемой проблеме. Для атопии характерно повышение уровня Г6ФДГ и НАДФМДГ и, таким образом, усиление пластических процессов, интенсификация липидного катаболизма и увеличение скорости анаэробного и аэробного окисления. При псевдоаллергии (полипозный PC) низкая активность ферментов НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ обуславливает снижение анаэробных процессов и аминокислотного обмена, при интенсификации аэробных процессов и липидного анаболизма. При цитотоксическом типе истинного аллергического риносинусита происходит активация гликолитических процессов и анаболизма липидов, повышение энергетики клетки. Иммунокомплексный тип ИАРС характеризуется повышением липидного анаболизма и азотного обмена при снижении синтеза аминокислот, а также активацией малат-аспартатно-водородного шунта митохондрий. Гиперчувствительность замедленного типа при ИАРС сопровождается снижением Г6ФДГ, угнетением пластических процессов и повышением энергетики клетки за счет интенсификации цикла трикарбоновых кислот.

Результаты исследования микробиоценоза слизистой оболочки носа подтверждают гетерогенность аллергического риносинусита. Обнаружено нарушение количественного состава микрофлоры, при этом характер и видовая направленность' микробного пейзажа зависят от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции. Микробный пейзаж слизистой оболочки носа даже при минимальных отклонениях может быть индикатором дисбиотических нарушений. Дисбактериоз слизистой оболочки носа сопряжен с изменением функциональной и метаболической активности клеток иммунной системы.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что риносинусит истинного аллергического генеза вне зависимости от иммунопатологического типа аллергической реакции характеризуется повышением содержания С025+- и НЬА-Б11+-лимфоцитов, 1§А и б^А. При гиперчувствительности замедленного типа в отличие от других типов истинной аллергии наблюдается снижение количества СБ4 - и повышение С08 -клеток. Для псевдоаллергии (полипозный РС) характерен высокий уровень СБ19+-клеток.

2. Определен дисбаланс концентрации цитокинов при аллергических рино-синуситах в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции. Истинный аллергический риносинусит атопи-ческого, цитотоксического, иммунокомплексного типов характеризуется девиацией иммунного ответа в сторону ТЬ2-лимфоцитов и сопровождается повышением концентрации ИЛ-4 и ИЛ-6. При псевдоаллергии (полипозный РС) и гиперчувствительности замедленного типа ИАРС происходит активация ТЬ1-лимфоцитов и повышение концентрации ИФН-у и ИЛ-2.

3. Установлены разнонаправленные изменения активности внутриклеточных процессов в лимфоцитах крови при аллергических риносинуситах в зависимости от патогенетической формы аллергической реакции. При истинном аллергическом риносинусите (атопия) происходит усиление пластических процессов (повышение уровня Г6ФДГ), интенсификация липидного катаболизма (увеличен уровень НАДФМДГ) и увеличение скорости как анаэробного, так и аэробного окисления. Псевдоаллергия (полипозный РС) характеризуется интенсификацией аэробных процессов и липидного анаболизма при снижении анаэробных процессов и аминокислотного обмена (НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ).

4. Определены изменения активности внутриклеточных ферментов в лимфоцитах крови при аллергических риносинуситах в зависимости от иммунопатологического типа аллергической реакции. При цитотоксическом типе риносинусита выявлена активация гликолитических процессов (Г6ФДГ) и анаболизма липидов (ГЗФДГ) и как следствие - повышение энергетики клетки. Им-мунокомплексный тип характеризуется повышением липидного анаболизма и азотного обмена, при снижении синтеза аминокислот (НАД-ГДГ и НАДН-ГДГ), а также активацией малат-аспартатно-водородного шунта митохондрий (МДГ и

НАДФ-МДГ). Гиперчувствительность замедленного типа сопровождается угнетением пластических процессов (Г6ФДГ) и повышением энергетики клетки за счет интенсификации цикла трикарбоновых кислот.

5. Для аллергического риносинусита характерно повышение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, сопряженное с изменением активности дегидрогеназ. При истинном аллергическом риносинусите (атопия) определено снижение активности НАДФН-оксидазы за счет низкого уровня пластических процессов (снижение Г6ФДГ), что приводит к низкой хемилюми-несцентной реакции. Псевдоаллергия (полипозный PC) и иммунокомплексный тип истинной аллергии характеризуются повышенным уровнем выработки супероксидного аниона (Ог~), при этом для иммунокомплексного типа характерно снижение спонтанной хемилюминесценции относительно других иммунопатологических типов ИАРС.

6. Выявлено, что при аллергическом риносинусите хемилюминесцентная активность нейтрофильных гранулоцитов зависит от вирулентности антигена. Степень активации ферментов более выражена при контакте со слабовирулентным штаммом S.epidermidis, чем S.aureus. Выработка АФК в результате индукции нейтрофильных гранулоцитов живой бактериальной культурой при рино-синуситах истинного аллергического и псевдоаллергического генеза происходит значительно активнее по сравнению с группой контроля.

7. При аллергических риносинуситах обнаружено нарушение количественного состава микрофлоры - дисбакгериоз слизистой оболочки носа, в зависимости от патогенетической формы и иммунопатологического типа аллергической реакции. Установлено увеличение количества стафилококков при АРС истинного и псевдоаллергического генеза. При ИАРС выявлено повышение КОЕ штаммов S.aureus, S.epidermidis, S.haemolyticus. Для псевдоаллергии (полипозный PC) характерно увеличение количества стафилококков, стрептококков и энтеробактерий. При цитотоксическом и иммунокомплексном типах ИАРС происходит повышение концентрации стрептококковой микрофлоры и штаммов M.catarrhalis, а для гиперчувствительности замедленного типа ИАРС характерно увеличение количества микрококков.

8. Направленность иммунологических, метаболических и микробиологических взаимосвязей в зависимости от иммунопатологических типов аллергического риносинусита указывает на общую иммунодепрессию, которая выражается нарастанием фенотипического дисбаланса клеток и их ареактивностью за счет нарушения регуляторных механизмов. При истинном аллергическом риносинусите (атопия) отсутствуют положительные корреляции между цитокинами и показателями функциональной активности нейтрофилов, что отражается в нарушении работы фагоцитарного звена иммунной системы. Дисфункции в работе фагоцитарного звена иммунитета на фоне цитокиновой дисрегуляции при риносинуситах истинного аллергического (атопия) и псевдоаллергического (полипозный PC) генеза сопровождаются нарушением микробиоценоза слизистой оболочки носа.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Коленчукова O.A. Особенности взаимосвязи между микрофлорой полости рта и иммунным статусом у лиц, проживающих в разных антропогенных зонах / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко // Медицина труда н промышленная экология. - 2005. - № 9. - С. 9-13.

2. Коленчукова O.A. Особенности иммунного статуса у лиц, проживающих в районах с различной техногенной нагрузкой / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко // Вестник КрасГУ. - 2005. - JYs5. - С.25-30.

3. Коленчукова O.A. Состояние иммунного статуса и нормальной микрофлоры зева у лиц, проживающих в районе техногенного влияния алюминиевого завода / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко // Гигиена и санитария. - 2006. - №6. - С.8-11.

4. Капустина Т.А. Характеристика иммунопатологических нарушений у больных с хронической патологией носа и его придаточных пазух, ассоциированной с хламидийной инфекцией / Т.А. Капустина, О.В. Парилова, O.A. Коленчукова // Иммунология. - 2007. - №1. Т.28. - С.42-46.

5. Коленчукова O.A. Микробиоценоз слизистой оболочки носа при аллергической риносинусопатии / O.A. Коленчукова, C.B. Смирнова, Т.А. Капустина, Т.И. Кин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2007. - №1. - С.62-64.

6. Парилова О.В. Хронические гаймориты хламидийной этиологии:частота выявления, клинико-иммунологические особенности / О.В. Парилова, Т.А. Капустина, O.A. Коленчукова // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2007. - №4. - С.54-57.

7. Капустина Т.А. Иммунопатологические особенности проявления хронической патологии носа, ассоциированной с хламидийной инфекцией / Т.А. Капустина, О.В. Парилова, O.A. Коленчукова // Бюллетень РАМН. -2007. - №6. - С.19-25.

8. Коленчукова O.A. Особенности полирезистентности у мецитиллино-устойчивых штаммов стафилококка выделенных при ЛОР-заболеваниях / O.A. Коленчукова, Т.А. Капустина, Н.М. Чижмотря // Антибиотики и химиотерапия. - 2007. - №1 - 2. - Т.52. - С.21-23.

9. Белова Е.В. Эпидемиологическая и клинико-патогенетическая характеристика хронического аденоидита, ассоциированного с хламидийной инфекцией / Е.В. Белова, В.Т. Манчук, O.A. Коленчукова // Бюллетень РАМН. - 2008. - №1. - С.101-105.

10. Капустина Т.А. Хроническая инфекция у детей, страдающих хроническим аденоидйтом / Т.А. Капустина, Е.В. Белова, В.Т. Манчук, O.A. Коленчукова // Вестник оториноларингологии.-2008.-№2.-С.23-2б.

11. Коленчукова O.A. Состояние иммунного статуса и метаболизма лимфоцитов у больных острым и хроническим гайморитами / O.A. Колен-

чукова, A.A. Савченко, А.Г. Борисов // Сибирский медицинский журнал. -

2008. - №3. - С.23-26.

12. Капустина Т.А. Особенности иммунитета у больных с патологией верхнего респираторного тракта хламидийной этиологии / Т.А. Капустина, A.A. Савченко, O.A. Коленчукова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2008. - №3. - С.94-96.

13. Коленчукова O.A. Активность НАДФ Н- оксидазы в нейтрофильных гра-нулоцитах при остром и хроническом гайморите / O.A. Коленчукова, С.А. Кузнецов, H.A. Бородина // Материалы 12 Всероссийского научного форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге».- Санкт-Петербург.- 2008 // Российский иммунологический журнал. - Т.2.-№2-3.-С.-250.

14. Коленчукова O.A. Микрофлора слизистой оболочки носа у больных гайморитом / O.A. Коленчукова, C.B. Акчебаш, Н.М. Чижмотря // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2008. - №3. - С.77-79.

15. Коленчукова O.A. Особенности микрофлоры слизистой оболочки носа у больных аллергическим риносинуситом / O.A. Коленчукова, Т.А. Капустина, C.B. Смирнова // Вестник оториноларингологии. - 2008. - №5. -С.33-35.

16. Коленчукова O.A. Сравнительная характеристика стафилококкового пейзажа слизистой оболочки носа при синусите и рините / O.A. Коленчукова, C.B. Акчебаш, О.В. Парилова // Вестник оториноларингологии. -

2009. - №2. - С.7-9.

17. Kolenchukova O.A. The activity of NAD(P)-dependent dehydrogenases in blood lymphocytes in rhinosinusitis / O.A. Kolenchukova, S.V. Smirnova, A.A. Savchenko // European Respiratory Journal: abstracts 19th ERS Annual Congress -Vienna, Austria, September 12-16, 2009 - V.34, Suppl. 53. - Abs. (E2852), 500s.

18. Добрецов К.Г. Роль местной антибактериальной терапии после ри-нохирургических вмешательств / К.Г. Добрецов, В.Ю. Афонькин, O.A. Коленчукова. // Российская оториноларингология. - 2009. - № 5. - С. 146-150.

19. Афонкин В.Ю. Целесообразность использования местной антибактериальной терапии в послеоперационном периоде при ринохирургиче-ских вмешательствах / В.Ю. Афонкин, O.A. Коленчукова, К.Г. Добрецов // Вестник оториноларингологии.- 2009.-№ 4.- С.60-62.

20. Коленчукова O.A. Особенности иммунного статуса и активности НАД(Ф)зависимых дегидрогеназ у лиц с хроническим аллергическим риносинуситом в период обострения / O.A. Коленчукова, С.А. Кузнецов, C.B. Смирнова, A.A. Савченко // Материалы 3 Международного конгресса по респираторной поддержке 25-27 августа 2009.-Красноярск,2009.-С.102-104.

21. Коленчукова O.A. Особенности функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов крови и гнойного отделяемого гайморовых пазух у больных риносинуситом // Материалы 13 Всероссийского научного Форума с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в

Санкт-Петербурге»:-Санкт-Петербург, 2009. - Медицинская иммунология. -Т.П. - №4-5.-С.З86-387. , 22. Коленчукова O.A. Сравнительная характеристика люминол и люцигенин зависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных аллергическим риносинуситом / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко, Н.С. Корасте-лева // Материалы 3 Международного конгресса по респираторной поддержке. -Красноярск, 2009.-С.44-47.

23. Коленчукова O.A. Микробные сообщества слизистой оболочки носовых ходов у больных аллергической риносинусопатией / O.A. Коленчукова, И.А. Игнатова, C.B. Смирнова // Материалы 10 международного конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармокологии» посвященные 100-леттию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо.-Казань,

2009.-С.87.

24. Коленчукова OA. Особенности функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов в зависимости от активатора хемилюми-несцентной реакции у больных хроническим риносинуситом / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко, C.B. Смирнова // Медицинская иммунология. -

2010. - №4-5. - Т .12. - С.437-440.

25. Коленчукова O.A. Изучение состава микробной флоры и местного иммунитета у больных с острым риносинуситом при лечении новой формой биопарокса / O.A. Коленчукова, К.Г. Добрецов, A.B. Сипкин // Российская оториноларингология. - 2010. - №6(49). - С. 107-112.

26. Коленчукова O.A. Особенности иммунно-метаболического статуса и функциональной активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов у больных полипозным риносинуситом / O.A. Коленчукова, С.А. Кузнецов // Материалы 4 Международной научной конференции молодых ученых-медиков.-Курск, 2010-С.82-84.

27. Капустина Т.А. Иммунопатологические нарушения у больных хроническим риносинуситом сопряженным с хламидийной инфекцией / Т.А. Капустина, O.A. Коленчукова, Е.В. Лапатникова // Якутский медицинский журнал. - 2010. - №3(31). - С.31-35.

28. Коленчукова O.A. Особенности микрофлоры слизистой оболочки носа у больных с острым и хроническим воспалительных процессах верхних дыхательных путей с выявленной хламидийной инфекцией / O.A. Коленчукова, Т.А. Капустина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2010. - №5. - С.75-79.

29. Коленчукова O.A. Особенности взаимосвязи уровней концентрации ин-терлейкинов 1 и 4 и фактора с показателями функциональной активности фагоцитирующих клеток анекроза опухоли - при остром гнойном гайморите / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко, C.B. Смирнова, А.Г. Борисов // Материалы Всерос. науч. конф. «Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии», Новосибирск, 15-17 сент. 2010. -Цитокины и воспаление - Том 9.- №3.- 2010. - С. 66-67.

30. Коленчукова О.А. Активность НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах крови у больных риносинуситами / О.А. Коленчукова, С.В. Смирнова, А.А. Савченко, С.А. Кузнецов // Материалы 10 международного конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармокологии», посвященные 100-леттию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо.-Казань, 2009.-С.288-289.

31. Коленчукова О.А. Особенности иммунного статуса и метаболической активности лимфоцитов больных полипозным риносинуситом / О.А. Коленчукова, А.А. Савченко, С.В. Смирнова // Материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 20-летнему юбилею Красноярского краевого центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями.- Красноярск, 1-3 марта 2010.-С.293-295.

32. Коленчукова О.А. Особенности иммунометаболического статуса у лиц, подверженных техногенному влиянию промышленного производства / О.А. Коленчукова, А.А. Савченко // Гигиена и санитария. - 2011. - №2. -С.19-23.

33. Коленчукова О.А. Микробиоценоз слизистой оболочки носа и риносину-ситы / О.А. Коленчукова, А.А. Савченко, С.В. Смирнова.- Красноярск, 2011.-180с.

34. Коленчукова О.А. Особенности состояния иммунного статуса и уровней активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ лимфоцитов у детей с хроническим аденоидитом / О.А. Коленчукова, А.А. Савченко, О.А. Рож-кова // Сибирское медицинское обозрение. - 2012. - №3. - С.14-18.

35. Коленчукова О.А. Особенности иммунитета у больных аллергическим риносинуситом в зависимости от иммунопатологической основы запуска аллергической реакции / О.А. Коленчукова, С.В. Смирнова, А.А. Савченко // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012. - №3. - С.83-87.

36. О. Kolenchukova The peculairities of neutrophil granulocytes activity in patients with polypous rhinosinusitis / O. Kolenchukova, A. Savchenko, S. Smirnova // 15th Interational congress on circumpolar health.- Alaska, august 8,2012.-p.203-204.

37. O. Kolenchukova The peculairities of immune, metabolic and cytokine status in rhinosinusitis of allergy genesis / O. Kolenchukova, A. Savchenko, S. Smirnova O. Kolenchukova, A. Savchenko, S. Smirnova// 15й1 Interational congress on circumpolar health.- Alaska, august 8,2012. -p.204.

38. Коленчукова О.А. Изменение иммунологических показателей периферической крови у жителей восточной Сибири в онтогенезе / О.А. Коленчукова, С.В. Смирнова, А.А. Савченко // Материалы 7 Сибирского съезда физиологов.-Красноярск, 2012.- С.234-236.

Патенты:

1. Пат. №RU2438134C1. Способ прогноза эффективности лечения острого риносинусита / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко.- Заявлено 11.05.2010; Опубл. 27.12.2011, бюл.№36.

2. Пат. №RU243183 7С2. Способ определения бактериальной резистентности организма человека / O.A. Коленчукова, A.A. Савченко.- Заявлено 29.06.2009; Опубл. 10.01.2011, бюл.№29.

3. Пат. №RU2445626C1. Способ определения функциональной способности фагоцитирующих клеток / О.В. Теплякова, Ю.С. Винник, A.A. Савченко, O.A. Коленчукова и др. - Заявлено 28.02.2011; Опубл. 20.03.2012, бюл.№8.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АтРС - Атопический риносинусит

АФК - Активные формы кислорода

ГЗФДГ - Глицерол-З-фосфатдепщрогеназа

Г6ФДГ - Глюкоза-6-фосфатдегидрогеназа

ГДГ - НАД-зависимая глутаматдегидрогеназа

ГЗТ - Гиперчувствительность замедленного типа

ГНТ - Гиперчувствительность немедленного типа

ГР - Глутатионредуктаза

ИАРС - Истинный аллергический риносинусит

ИК - Иммунокомплексный тип

ИЛ - Интерлейкин

ИФН - Интерферон

КОЕ - Колонеобразующие единицы .".',.

ЛДГ - НАД-зависимая лактатдегидрогеназа

МДГ - НАД-зависимая малатдегйдрогеназа

МПО - Миелопероксидазный комплекс

НАД - Никотинамидадениндинуклеотид

НАДИЦДГ - НАД-зависимая изоцитратдегидрогеназа

НАДФ - Никотинамидадениндинуклеотидфосфат

НАДФГДГ - НАДФ-зависимая глутаматдегидрогеназа

НАДФИЦДГ - НАДФ-зависимая изоцитратдегидрогеназа

НАДФМДГ - НАДФ-зависимая малатдегйдрогеназа

ПАРС - Псевдоаллергический риносинусит

ПРС - Полипозный риносинусит

ПФП - Пентозофосфатный путь окисления глюкозы

ФНО - Фактор некроза опухоли

ХЛ - Хемилюминесценция

ЦТ - Цитотоксический тип

ЦТЛ - Цитотоксические лимфоциты

Подписано в печать 23.07.2013. Печать ризограф. Бумага офс. 80 гр/м2 Формат 84х108'/зг Усл. печ. л. 2,09. Тираж 120 экз. Заказ № 2195 Отпечатано в типографии ООО «Версона». 660079, г. Красноярск, ул. А. Матросова, ЗОк. Тел.: 235-05-89, 235-04-89.