Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Функциональная характеристика эпителиально-гладкомышечных взаимодействий в стенке воздуховодных путей и кровеносном сосуде

f I D U'l

mm» ^

WîffiîCimTrEO ЗДРАВООХРАНЕНИЯ il МШПИНСКСЯ ПРСМЫШЕШОСТЯ р р g Q Д РОССИПСХСЛ ФЕДЕРАЦИИ

сибирсш государственный , шэдикскиа университет

2 2 haîî ís05

На правах рукописи У2К: 616.231-0Î8.73

йлляеея zsc:^ ssy^reisri

«ЗУККСК-ЛАЛк'Ш ХДРАКТЕР5'СТТГ.А оГПГГ^Ь^ГЗ-ГХ^Х^ГЕЧК:™

вздкзйв^ггкй s стзсз- юкзякгхггх ílteí И СОСЛАЛ

14.00.17. - пор>'зльная ф-гаколегга

л п - a ? s о g ? л г

дпссертаи:;:: яа со:гс;-гч:-;е у\ег:с.: степени лсглсрп. î'csir-rrjîcrarx нзу-1:

Работа выполнена е СкЗ; греком гссударстве кноу ыедкцинскзы университете KS и ЫГ1 PS ( г .Teuer. ).

НАУС^с m^&XiiTTÜ:

Аглдеми": РАМН и РАЕН, доктор

медицинских наук, профессор П. А.1Щ2ЕЕЕВ

член-корреспондент АН ED, доктор

медицинских наук, профессор &2.B.EACS»i02

CS25iAZH2E СППШЕШ15:

Доктор цэдшюнеких наук, профессор В.П.Ш^ЕЕВ

Лектор кедкцкпегая наук, профессор Zioicrcp кедкдапаотх наук, профессор А.П.БД£К0В

ES^Ji ОГГАИ^ЗЛЦИЯ:

н;ш Обсей патологии к патологической физиологи! РАМН (г.ЬЪсква).

Задета состоится "_" _ 13_ г. в _

часов на заседании Специализированного Ученого Совета £.084.28.02 при Скбкрском Государственном медицинской университете (634050 г.Томск. ккскзг.скж тракт, Г:).

С диссертацией ытесно ознакомиться с каучаой С.юлиотеке Скбкрского Г0сударствен!!0г0 медицинского университета (г.Томск, проспект Ленина, 107).

Автореферат разослан "_"__19_ г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доктор цедацлнекях наук,

профессор S.A. ЕРАП22Э2А

ОКМЯ ХАРАКТЗЕЙЗТПССА РЛГСГПЗ

актуальность ПРОБЛЕМ

В обшей структуре заболеваемости населения раззитих стран одно из ведущих мест принадлежит патологическим состояниям, связанном о нарусеиием функции гладко?,-гьсючных образований [Г.П.Федосеев с соавт., 19S-1; L.Dnffounchinc o.a. ,1980-, F. Handy, 19ЯЗ; R.Zeli3,19«31. Поэтому изучение механизмов регуляции эдектричесгах и со1фатителънш: свсйстз гладких мгстд внутренних органов, кровеносных и лимфатических сосудов, вы-лспение механизмов развития заболеваний и разработка способов коррекции нарунений двигательной функции гладксмкаечных органов является актуальней проблемой современней физиологии и медицины СБ.Я.Зонис, 1985; Т.В.Падун,И.П.Прохорова, 1937; E.Adelrcth, 1990; M.Leon s.a., 1985].

Особое значение названная проблема нмэет для систем дыхания и кровообращения. Значительная часть заболеваний этих ерганоз связана с нарушением регулягорних механизмов гладто-мииечных клеток (ГМК) стенш; воздухоносных путей и кросенсс-яи сосудов (гипертон:г;ес;сля болезнь, бронхпальшы ас™-(з) М.Д.Адо, 1S89; Л.В.Прокслитина, 1986; T.Bai, 1990; C.Wioi-dicinbe, 1939].

• Практически все исследования ь этой области бмли посвя-дены механизмам регуляции сократительной и электрической активности ГЖ при воздействии различии/. биологически активных геа;еств CP.MJAöyena, 1939; 3.0. Аскаров, 1983; ZLf'-.Уэст, 1933; :.А.Ялкут, 1989; K.Larscon, 1939; C.Renbcld, 1992]. В ГМК кровеносных сосудов эти мохачиз'-и исследованы достаточно по-Зробно. В работах M.i>.Üiy6u с соавт. [1581-19913 рассмотрен-?. Zsr f-кзльмедулин зависимая регуляция электрической и сократительной активности, участие аденглатщя'лазной системы и лембрашшх фосфоинозитидоз. Для веек основных кедка-геров известны механизмы воздействия на сскратитсльпую и электркч-;с:~/:о активность сосудист!,« Г!(К СС. В.Сергеев,Н.Л.ЕимсвюбокпЯ ,1987; R.Whiute.ü.Carrler, 19663.

В меньшей степени отражены в литературе вопросы регуляции сократительной и электрической активности глалгак ныгц

трахеи к бронхов. Хотя эффекты, оказываемые на ГМК стенки воздухоносных путей ыедиатсрами, изучены подроОно, механизмы 1Я реализации на иеыбраанс!; уровне во многой остаются не выясненными [L.Daffounchlno е.а., 1987; E.Daniel е.а.. 1992; J.Jonystle е.а.,1987].Практически не изучена роль сигнальной систем, связанной с метаболизмом иеыбраяных фосфоинозитк-дое. а регуляции сократительной и электрической "активности ГЫК бронхов.

При "интенсивной изучении физиологических' особенностей ГНК длительное время вне зоны внимания исследователей оставался эпителиальный слой, выстиланий внутренний поверхность кровеносных сосудов и воздухоносных путей. Еыу отводилась «¡¡сто кехгнкческая роль Ш. Munokata е. а. , 1939; C.Vrints, ."..Herman. 10913.Липь сравнительно недавно Село установлено, что эвдотелиггьные клетки способны вырабатывать целую группу веществ, оказывавших влияние на ГЫК н модулирующих воздействие других эндогенных регуляторов-медиаторов и горио-noaCL.Jedafcoby е.а.,1989; U.Ohyanaql е.а. ,1992 ; R.Stahl. 1639; C.V.'u, 1991].' Активация исследований в этой области привода к тому, что был;* списаны вазоконстриеторные пепгк-до-андотэляаы [F.Ang£ard е.а., 1990; I.Uasak 1 е.а. ,1990 ; R.Mlnker, P.Kadovltz, 1989]. Их а-яшогсислоткзя последовательность расшифрована; механизм действия известен. Выделено три типа зздотеашюв, для кагдого из которых описачы спеш:-ф;гчас;с?,е рецепторы. В ГУХ преимущественно представлены рецептора к зндотел::ну-1ГТ.Мзза,Ч1 е.а. ,19903.Оккупация эвдоте-лкпэтмх рецепторов инициирует еход внеклеточного кальция по рецепторупразляеьааг кзналгы и ыетгОолизм (гидролиз) ыемйрак-Енх фосфошюзнтидов, которые способствуют мобилизации кальция из ке^тжоядргальных депо [Y.Kasuyva, 1В89; A.Mir е.а.,1989; К.Sakata е.а.,1939; C.Wagner Mann,M.Sturek,19913.

Другая группа зндотегнаяьных факторов - релакскрукше (HPÏÏJ). Прлрода их на ясна, установлено лишь, что они связаны с узтгЗол:-1з:,га!.*. внасп азота и/кгк арахкдогювой кислоты £Н.А.12здзедееа.О.С.^гдаздев, 1CSS; R.Palmer, 1987; S.Snyder,

1992]. Механизм редактирующего влияния ЭРФ на сосудистые Г!.5Ч так .те пе изучен до настоящего времени, некоторое исследоза- • тели полагают, что он связан с активацией гуанилатциклазы [О.В.Базклск, 1988: M.Borlnaga, 1991; E.Buga е.а., 1939; S. Greenwerg е.а., 1990]. Позднее тачая активна? регуляторнад роль была обнаружена и у эпителия воздухоносных путей.Он такпе синтезирует релаксирупвде Факторы, природа и механизм действия которых остается не Еыяскентл.'.и CA.McLarty е.а.,1983; H.Panltch е.а.,1993; D.Pavlovlch е.а., 1989; U. Sparncw,H.Mithel1, 1991].

Есть отдельное сообщения, указывающие на сходство эндо-телиальных и эпителиальных релаксируияих факторов и на возм-ояюсть перекрестных реакций £К.Morrison е.а. ,1990-, K.Stuart -Smit. 1990; Z.Xle е.а.,1992]. Практически нет данных о влиянии ЗРФ на мембранный потенциал ГМК,на проводимость плазма-леи\а для отдельных ионов. Не исследовалось и участие внутриклеточных сигнальных систем в реализации эффектов ЭР5, а тгк .те взаимодействие излстриктсрня: и релаксируккщк овдоте-лий-продушфуеиьк вецестз.

В литературе практически не рассматривается везкс^гости участия эпителиальных к знг.отелиальных рел&ксиругаих факто- . ров в патологических реакциях ГМК сосудистой и бронхиальной стенки. Ослабление релакскруЕ2.его влияния эпителия при вос-палителыплс заболеваниях бронхов и эндотелия - при • атероск-херсгтических изменениях сосудистой стенки - вполне межет способствовать усиленна сократительной активности ГИК. Весьма вероятно участие c:tCTe!ü SP3 в патогенезе таких заболеваний, как гипертоническая болезнь и бронхиальная астма Ш. В.Бобры-сев.Г.Г.Вабускина. 1988; О.И.Стенина с соавт., 1989; L.Cohn, K.Adler. 1992; D.Dederlch е.а., 1992; Y.Engllnnz, М. Ilhsn. 19923.

Названные пройлемы, имеппиз важное значение для пепимэ-riicrr клеточные механизмов рзгулягоя: функций Сронхоз и сосудов, а такг.э создания теоретика-31сспер:гйентгльно;г базы длл рзлразотки повыл прптсягоз ксррегаси, патологически скндро- "

- а -

ков, связанных с нарушением функции гдэдкоыкшечных образовании, выдвигают данное направление г^к одну из насущных 8адач фиикодох'ии и медицины.

ЦЕЛЬ ЕХВД$£ШПШ1:

Выяснить механизмы зпителиально-гладкоштечных взаимодействий в стенке кровеносных сосудов и воздухоносных путей, их роль в реализации физиологических и патологических реакций систем кровообращения и дыхапия. ■

ЗАДАЧИ:

1. Изучить участие эндотелия кровеносных сосудов и эпителия трахеи и бронхов в регуляции сократительных реага&й гладкомышечных клеток на различные воздействия.

2. Исследовать перекрестные реакции эпителиального и зн-дотелиального редамзйрувада факторов на гладкешпечные каст- ■ ки кровеносных сосудов и воздухоносных путей, оценить степень их органоспецкфичности.

3. Изучить иехапизш регуляции продукции кле-пкиха эндотелия сосудов и звителйл воздухоноспых путей ре^язирутдазс факторов.

4. Изучить кзханкзны реализации эффекта зпктелкагьшас релаксирузивдх фангоров на гладкоиыязчные клетка, участка внутр'.клеточпых сигнальных систем в этой процессе.

2. Исследовать возрастные особенности зпктслиалъко-глад-комыпечных взаимодействий.

О. Выяснить воекокностъ участия эпителиальных рслакскру-Ю7Д1Х факторов в некоторых патологических реакциях систем халкя и кровообращения.

НАУЧНАЯ ШЕЩЦА:

В работе впервые проведено сравнительное изучепка характера зпителиалько-гладгаэшшечшх взаимодействий в снстешх дыхания и кровообращения. Доказано наличие модулкруэк-его влияния эндотелия сосудов на сокращение ГШ< при деполяркза-

щи кэубракы. адрензргкчесгасо н пур:поргпчосягаг павдейстпзс. • Изучен кехазтам реализации .гскагьЕсЛ сСрлтгсй св.тзп иа уроз- ■ не эндотелий-ШХ: продуцируемый зддстэл:;?;.! вгзокпистрггсгор эндотелия-1 кшасшрует выработку л в шязкях кспЕептрсгп-ях способен вызывать развитие ргссгЕЗдсшя. .

Впервые доказана способность эпителия брслхов модуяфо-вать сократительные рейсом П.К. От целостности эяителиагз-иого слоя мстпет гавкезть ве толы» гкрггепгссть реакция, г.о !1 ее направленность.

Впервые исследовал характер перекрестного влияния-эпителиального к зндотелизльиого реяансирукин фзггсрсз, оценена-степень их органоспецифичностя.

Впервые изучена возрастная динамита зпиталЕадьЕЭ-гхадко-ммзечных взаимоотпспгепнй в воздухоносных путах. До;<аза:-:о-. что возрастные ивмэпешп реактивности бронхоз связгш: кгк с ¡¿орфофушашокаяьной деструкцией зшгтелия; так и с ¡гз^екепнсм активности циклазных систем гладких мн^зг.

Впервые изучено участие впутрксгетсппсг с:тяслькнх систем в регуляции продукции ЗР2. В згсспергс'.ептач с каскадной перфузкгй дказаяо, что з регуляции выработай 5РЗ- приникает участив казы.«здул:а-полобпуэ Са^-сгзсывгггпа балстя прота-' иккинзза типа С.

ВлсрЕые показано, что в реагкагдяи г^гета Е?Э и петро-соедияенкй з Г.\<к наряду с гуагасяатцяагсззеой прда?£зе? участие щяслическяЛ адскоггааеокофосфгт и протекикглаза тепа Д. Взая-юдейстаие цШЗ я цД?'2Ь разисгаых систем- осуществляется на уровне фос$одизстерагч циклически нукгеотггдся.

Впервые показано участке калиевой пролога «зек« • кембрзтл П.СК в механизмах эпителий- агзисииого ргсслг&:отат. Прэдо-нопстрировапо участия ки??дкшш-чувствительного входа-ш«г и депогяр:гза:7:п кгеточнсй кекбрагы з рвзлазацжг згг.-с,!:-:— лин-1- княуцпрсЕаш'сго со.чрг^гннл,

Вп?ГР«е изучена еа^/с—гссть учасс^гт Э1п!телкзгьпогл»д!зо-»апгачных азгтпюдейстой з рсзлпзашл некоторых патслсппес-кях рег:щ:г5 сясгеи дыхгягя я крагосбрг^гша, В тгатгсстг,-

впервые доказано, что одной из причин снижения чувствительности бронхов к катехоламинак является повреждение эпителия.

Впервые устанс.зено, что при нарушении целостности эпителиального слоя возможно извращение реакции ГМК на локальные вазодилятаторы - пурины; изучена роль эпителия и свойств кальциевых каналов сарколеммы в резистентности ГМК трахеи крыс к гисташну.

НДУЧН0-ПРАКГ.1ЧЕСКАЯ аЧАЧЗЗ^ОСПЬ:

Полученные результаты вносят вклад в развитие фундаментальных представлении о механизмах регуляции функции гладких шц бронхов и кровеносных сосудов в норме и их нарушении при патологических состояниях систем дыхания и кровообращения.

Доказана важная роль эпителиально гладкомышечного взаимодействия в регуляции сократительной активности ГМК. Влияние эпителиальных факторов необходимо учитывать при исследовании реакций ГМК на воздействие различных ФАВ, так как после удаления эпителия может изменяться не только амплитуда ответа, но к его направленность. В частности, катехоламины в присутствии эпителия вызывают расслабление ГМК трахеи и бронхов, а после дезпителизации не оказывая? оронходилятиру- ■ ющего эффекта. Пуриновые основания -локальные регулятора тонуса кровеносных сосудов - в отсутствии эндотелия теряют ва-зодшятирувщеег действие и индуцируют сокрааение сосудистых сегментов. В отсутствии эпителия усиливается так хе Сронхо-кокстрикторное действие гкстамина и хслиноикметиксв. Многие -ФАВ, стимулируя сократкгелыгую активность ГНК, одновременно инициируют продукцию редаксируюдих Факторов эпителиальными клеткам;!.

Данные о возможности перекрестных реакций релаксирувдих факторов, продуцируе«£К эпителием бронхов и эндотелием сосудов, неполной сргааоспецифичности их, позволяют рассматривать эпителиальпо-глапкомьвечкые взаимоотношения как единую смстену вокальной регуляции, универсальную для основных

гладкомыпечных образований.

Выявленные возрастные изменения в характере эпителиально -гладкомыиечных взаимодействий позволяют объяснить некоторые особенности физиологии системы дыхания в различных возрастных группам, а так же служить осноеой для ноык подходов к коррекции патологических состояний.

Полученные в работе дачные сб участии кальмодулика к протеинкиназы С в регуляции продукции 2Р1> и о роли цЛ!.№ и цГ1.Я> в реализации его эффекта позволили построить схему взаимодействия внутриклеточных сигнальных систем в процессе регуляции эпителий-зависимого расслабления. Полученные зкспе-- риментальние данные могут бить использованы для разработки средств и способов фармакологической коррекции патологических состояний, связанных с нарушением функции исследуемых глазкомькечных образований, а также слу.тать теоретико-экспериментальной базой для целенаправленного поиска ноеых модуляторов передачи сигнала в ГМК.

Основные положения работы включены в курсы лекций по нормальней физиологии и биофизике для студентов медико-биологического и врачебных факультетов, спецкурсы "Системы внутриклеточной сигнализации", "Клишпеская биофизика", читаемые в Сибирском государственном медицинском университете. Очи могут быть использованы - при чтении учебных курсов по Ф;!31:олсгки, биофизике и фармакологии в других ВУЗах биологического и медицинского профиля.

ПОЛОГЕСИ, ЕаЮСТП.СУЕ !1А ЗЛ^ГП,'-.

1. Эпителий воздухоносных путей и эндотелий кровеносных сосудов способны активно ыс-дулировагь сократительные реакции ГМК, вырабатывая релаксируюдие факторы. Ъ эндотелии вырат.ена и>; "фоновая" продукция и влияние на базатькый тонус сосудое, тогда как эпителий преимущественно влияет ка реактивность бронхов.

2. Респираторный эпителий способен белее интенсивно продуцировать релаксирукдай фактор в ответ на воздействие

ФАВ, в то время как гладкие мышцы кровеносных сосудов более чувствительны к дилятаторному влиянию эндотелия.

3. Между релаксирукщими факторами, продуцируемыми эпителием бронхов и эндотелием сосудов, возможны перекрестные реакции вследствие их неполной органоспецифичности. Это позволяет рассматривать эпителиально-гладкомышечные взаимоотношения как универсальную систему локальной регуляции функций гладкомышечных образований.

4. Продукция релаксирующих факторов эпителием кровеносных сосудов является кальций-зависимым процессом и регулируется при участии кальмодулин-подобных Са2+-связыватаяих белков и протеинкиназк С.

5. Механизмы релаксируювдго эффекта ЭРЕ на гладкие мы-ецы связаны со взаимодействием двух циклических нуклеотидов-цАШ> и ЦГЩ>, осуществляющимся при участии фосфодизстеразы.

6. Эпителий-зависимые реакции ГМК связаны с изменением ионной проводимости мембраны. Констрикторные воздействия (ЭТ -1) опосредуются изменением кальциевой проводимости, релак-сирутошие (ЭРФ) - калиевой.

7. Релаксирующее влияние респираторного эпителия наиболее выражено у гшвотных репродуктивного возраста. Возрастные-особенности связаны как с изменением активности гуанилатциклазы гладких мышц, так и с морфофункциональной деструкцией эпителия.

8. Нарушение целостности эпителиального слоя либо сни-■ женпо его функциональной активности может привести к возрастанию сократительной активности ГМК н явиться причиной развития патологических реакций систем дыхания и кровообращения, а так же изменения их чувствительности к фармакологическим препаратам.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ:

Диссертация изложена на 236 страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, главы "Материалы и методы", четырех глав собственных результатов и

- и -

их обсуждения и заключения. Библиография включает 443 ссылка, в том числе 94- на работы отечественных авторов и 349- зарубежных. Работа иллюстрирована 72 рисунками и 4 таблицами.

АПРОБАЦИЯ РЛЕОТЫ:

Основные результаты диссертации обсуждены на международной научной школе "Нервные и гуморальные механизмы регуляции кровообращения" (Москва. 1993); съезде Всероссийского Физиологического Общества (Москва, 1993); на Всероссийской конференции "Молекулярные и клеточные ссноеы кислотно-щелочного и температурного гсмеостаза" (Сыктывкар, 1994); на конференциях "Медико-биологические аспекты нейро-гуморального гсмеостаза" (Томск, 1994); "Ритмы пищеварительной системы и гомеостаз" (Томск, 1994); па региональной совесании "Современные проблемы фтизиатрии и пульмонологии в CirCirpn" (Томск, 1994); на региональных конференциях "Актуальные проблемы медицинского обеспечения войск" (Томск, 1992); "Экология и здоровье детей" (Томск, 1994); на совещаниях "Охрана здоровья работников нефтехимических производств" (Томск, 1993, 1994,1995); опубликованы в материалах международных симпозиумов "United Europlan Gastroenterology Week" (Oslo, 1994,. Horsvay); "2-nd International congres of pathophysiology" (Kyoto, 1994, Japan).

'ifATEPT'JUTU Г1 MSJOSH !:CCS£GSAIi:n

В работе использовались экспериментальные кнвотные-белые крысы- самцы массой £50-300 грамм,а так г.е кролики- са-гды породы "шинсилла" весом 1,0-1,5 кг. Для изучения сократи--тельной активности приготавливались кольцевые сегменты аср-ти, трахеи и бронхов толкотней 3-4 ми. При необходимости эндотелий (эпителий) удалялся механически, вращением деревянного Епателя в просвете в течении 1 мин.

Для установки каскадной перфузии кроме денудирозанпого сегмента приготовлялся трубчатый препарат длиной 2 см с сох-

ракенной интимой.

Сохранность или полкота удаления эпителия контролирова- • лась гистологически, приготовленные срезы окрашивались гематоксилином-эозином. Аналогичным образом изучались морфологические особенности эпителия трахеи крыс в разных возрастных группах.

Для метода двойного сахарозного мостика дезндотелизиро-ванный участок аорты разрезался по спирали, приготовлялась подоска шириной 0,5 мм и длиной 10-12 мм .

ШОМ 4-Х КАНАЛЬНОЙ МЕХАНОГРАФШ

Метод позволяет исследовать сократительную аетивность (механическое напряжение) гдадкомьиечных сегментов и полосок' г условиях, близких к изометрическим. Установка состоит из станины с теплообменником, в крыпке которого размещена кювета объемом 2 ш. Сегменты или полоски крепятся в кювете и после растяжения нагрузкой 0,5-1г фиксируются на штоке меха-ноэлектрическэго преобразователя-• лампового механотрона 6МХ2Б . В етвете либо перфузируется термостатируемый раствст Кребса (0,6 ыл/ыин), либо каждые 15 мин производится полная смзна раствора. Регистрирующие устройства- осциллоскопы С1 -83„сгхоптуте приборы типа "Recoder". KCD, Н-338.

¡ •ПОЛ КАСКАДНОЙ ПЕМУЗЯИ

В основу метода положена принципиальна» схема "со-axial bloassay", предложенная J.Cacici е.а.С1993]. Метод позволяет пространственно разделить продукцию ЭР? и реализацию его эффекта.

Установка оригинальной конструкции, собственного изготовления. В териосгатируешй камере находятся два трубчатых препарата - "доноры" SPS - с сохраненным эпителием, через просвет которых со скоростью 0,5 ил/кии прокачивается аэрируемый рсствср Кребса. После этого он поступает в камеру с декудированккм сегментом - "акцептором" 3РФ - сократительная активность которого регистрируется вьше описанным способом.

ЭРЗ> сохраняет свои свойства в течении 30 сек. В наши экспериментах время прохождения раствора от "донора" к "акцептору" не превышало 15 сек.

МЕТОД ДВОПНОГО САХАРОЗНОГО ЫОСТХКА

Метод, предложенный М.С.Шубой [19643 для одновременной регистрации электрической и сократительной активности ГМК в покое и в условиях их стимуляции. Основное преимущество этого метода перед микроэлектродным состоит в возможности длительной регистрации электрической и сократительной активности гладкой шяцы при действии физиологически активных веществ или электрического тока.

Для отведения электрических потенциалов использовали хлорсеребрянные электроды. С электродов сигнал подавался на усилитель , а затем - на регистрирующее устройство. Регистрация сократительной активности осуществлялась методом, аналогичным описанным Еызе.

,'г ГЕлхттгк.'

1. Нормальный рзствор Кребса 1 ОАО:

NaCl - 120,4; KCl - 5,9; НгНгРО« - 1,2; МгС1г - 1.2; СаС12 - 2,5; МаЧСОз - 15,5; глюкоза - 11,5.

2. Нормальный раствор Кребса 2 (мМ):

Состав тот ке, но вместо МаЧСОэ кспользозался органический буфер НЕРЕЗ б той же концентрации.

3. Бескальциевый раствор приготовлялся путем замещения в нормальном растворе Кребса всего СаС1г соответствуешь количеством NaCl и добавлением ЭГТА (1,5-2 ¡.й>0. В ряде экспериментов в раствор добавлялся 1/дС1г в концентрации 10 iH.

4. "Гиперкачиевый" раствор (мМ):

NaCl - 100,4-37,7; KCl - 20-120; НаНгРО* - 1,2; MgCla -1.2; СаС12 - 2.5; КаНСОз - 15.5; глюкоза - П,5.рН растворов поддерживался в пределах 7,3-7,55,температура - 36,5-37° С. Растворы аэрировались воздухом, кислородом либо карбогелоы (смесь 02- 957. и СО->- 52).

5. Раствор сахарозы:

332,7 Ш. сахарозы (удельное сопротивление не менее 2 ГОы х см).

ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРЕПАРАТЫ:

Трифторперазин, хлорпроыазин. гистамин, адреналин, ими-прамин, фенилзфрин (Минмедпрсм, PS); метиловый синий, фтористый натрий, хлористый алюминий, сахароза ХЧ (Реахим, И»; А23187, ЭГТА, тетразтшшымоний, Н-9, HEPES, дибути-рил-цАМФ, изопротеренол, карбохолин, пропранолол, стауроспо-рин, теофилин, фентоламин, GTP-r-S (Sigma,США); верапа-ыил (ФРГ), нифедишм (Япония), нитропруссид натрия (Serva, ФРГ); зндотелин-1, дихлорбенза'лш (Nova Biochem, Франция); аденозин (Merk,ФРГ), АТФ (Lachema,Чехия).

Все соли ддя приготовления раствора Kpeöca - ХЧ (Реа-хим, РФ). Производные фенотиазина, А23187, H-S, дибутирил цАШ.стауроспорин растворяли в этиловом спирте, эндотелии-1 и дихлорбен'замил - в диметилсульфоксиде (Sigma, США). Конечная концентрация растворителей в экспериментальном растворе составляла не öotfee 0,5Х и. не влияла на сократительные свойства гладких мьищ.

Полученные-результаты обрабатывались методами вариационной статистики с использованием персонального компьютера типа IBM PC 286 по программе S7ATGRAPHIC 3.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЕССЛЕЙОЗМШ

роль эпителия воздухоносных путей и эндотелия кровеносных сосудов.в регуляции сократительной

активности гладких мышц

Как эндотелий аорты, так и эпителий трахеи способны продуцировать релзксируюадо факторы, существенно модулирующие сократительную активность гладких кыпц. Однако эндотелий сосудов в интактном состоянии оказывает выраженное релаксирую-

- 15 - . ■:

йЗЕЩА 1

ВЕЛИЧИНЫ МАКСИМАЛЬНЫХ ОТВЕТОВ СЕГМЕНТОВ ТРАХЕИ И АОРТЫ КРЫС НА КОНСТРИКТОРНЫЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ И КОНЦЕНТРАЦИИ, ВЬВЫВЖЩИЕ ПОЛУМЛКСШАЛЬНЫЯ эиект

Шт, Р<0,05

Агяах, мН ЕС50, КМ Агаах, мН ЕС50. МИ?.?

КСЬ - АДРЕНАЛИН

А О Р т А эндотелий сохранен 130,5±9,9 п=10 33,2±2,7 'П-10 251,3±9,8 П-Э 0,75±0,0з{ П=9 |

эндотелий удален 163,4±12,б п-а 30,1±2,1 П=8 320,5±12,4 п=8 ' О,32±0,01| П=8 1

эндотелий сохранен +А23187 71,7±3,1 П=8 42,4±2,0 П=8 144,7±7,6 П-7 0,54±0,03

КО. КАРБОХОЛИН | _1

Т Р А X Е Я эпителий сохранен 54,¿±3,1 П=10 42,2±2,4 П-10 92,5±4,3 П-10 0,91±0.07) П-10 ' | Я

эпителий удален 5б,8±2,4 П=8 44,6±3,1 П-8 ез,7±5,2 п=8 О,79¿0,04! П=8 1

эпителий сохранен +А23187 ЗЭ,7±:2,5 П=7 39,7±2,8 П=7 52,б±2,9 П*8 1,£о±0,Сз| П-В" 1 \ ...

(п-чксло згссперг^гентоз)

щее воздействие, а эпителий трахеи - нет. Поэтому после удаления эндотелия амплитуда сократительных ответов сегментов аорты на гиперках.гевый раствор Кребса и адреналин увеличивалась. а сегментов трахеи на хлорид калия и карбохорлин- не изменялась (таблица 1). Кальциевый ионофор А23187, стимулирующий продукцию ЗВГ, угнетал сократительные реакции на все названные воздействия как в аорте, так и в трахее.

Кроме ионофора, модулировать релакоирущее влияние ин-тимального слоя способны многие физиологически активные вещества. При этом наблюдается общая для сосудов и воздухоносных путей закономерность: констрикторные воздействия усиливают продукции релаксирующих факторов, реализуя локальный механизм отрицательной обратной связи. Эндотелии-1, вазо-констрикторкый полипептид. синтезируемый эндотелиальными клетками, в низких концентрациях вызывал расслабление сегментов аорты, зависящее ог сохранности эндотелия.

Механизмы сократительного эффекта зндотелина-1 свяааны

Ркс.1. Зависимость механического напряжения сегментов аорта крыс от концентраций зндотеяина-1 в присутствии эндотелия (1), после его механического удаления (2) и при добавления 0,5 мкМ конофора А23187 (3).

с открыванием кальциевых каналов клеточной мембраны и мобилизацией кальция из внутриклеточных депо. Верапачял- антагонист входа кальция, частично подавлял сокращение при добавлении зндотелина, но полностью угнетал сопровождающую его деполяризацию мембраны. После удаления эндотелия амплитуда сократительных ответов на все концентрации зндотелика увеличивалась, а в присутствии кальциевого ионофора- угнетались (рис.1). Изменялась и.величина концентрации, вызывающей полумаксимальный эффект. Важно заметить. что в данном случае обратная связь замыкается на уровне эндотелия - вырабатываемый эндотелием вазоконстрикторный пептид ослабляет свой эффект In situ.

На сегиентах трахеи сходные результаты были получены в экспериментах с гистачином. Интактные сегменты не изменяли исходное напряжение при воздействии гкстамина, однако в присутствии гиперкалиеЕого раствора Кребса приобретали возможность отвечать на него дозозависшси сокращением. Амплитуда сокращения при отси существенно зависела от сохранности эпителия.

Была изучена зависимость гнстагкнзргических отвратительных реакций сегиентоэ трахеи iíp'jc от степени деполяризации ыембраки. Близкая к линейной зависимость ме!,йргиного потенциала от концентрации хлорида калия во внеклеточном растворе наблюдается в диапазоне концентрации KCl 20-80 !.<М. Для удобства анализа дачные приводятся в "обратных" осях - как зависимость механического напряжения,генерируемого сегментами трахеи крыс, от концентрации хлорида калия в перфузионном растворе. Из рисунка 2 видно, что полученные зависимости »«ют двухфазный характер. При низких концентрациях KCl (£0-40 ыМ) амплитуда гистаминзргическйх сокращений возрастает, а при высоких (cEUse 60 мМ) вновь снижается.

Очевидно, что реакция на воздействие гкстамина вблизи потенциача покоя зависит от степени деполяризации мембраны. Смешение его до -ЗОмЗ (при концентрации KCL до 40 иМ) потен-

Рис.2. Зависимость амплитуды гистаминэргического сокращения сегментов трахеи крыс от концентрации хлорида калия в растворе,

Гистамин: 1- 10нМ, 2- 0,1 мкМ, 3- 1 мкМ, 4-10 мкМ. МН- в У. от амплитуды сокращения, вызываемого гиперкалиевым (30 м!,() раствором Кребса.

циирует вход ионйв кальция по рецептороперируемым каналам. В литературе имеются указания на существование потетенциалоза-висимого воротного.механизма.у некоторых типов рецепторопе-рируемых,кальциевых каналов. При дальнейшем смещении мембранного потенциала развивается оокращение ГМК, обусловленное входом Са2+ по потенциалозависимым ¡каналам, что снюглет амплитуду ответа на воздействия различных БАВ. С этим связано появление второй фазы на полученных кривых "доза-эффект".

Влияние респираторного эпителия на гистачинзргические сократительные реакции сегментов трахеи крыс было изучено на деполяризованных (40 мМ КС1) препаратах. В присутствии эпителия сегменты отвечали на воздействие гистамина дозозависи-мым сокращением. После механического удаления эпителия сократительные ответы на высокие концентрации гистамина усиливались. Амплитуда максимального сокращения увеличивалась вдвое, ЕС50 значительно уменьшалась.

Гистамин,вызывая сократительные реакции ГМК трахеи крысы, одновременно стимулирует продукцию релакскрумдего факто-

ра эпителиоцятами. Судя по оущэствеяной разнице в амплитуде сокращений интактных и деэпителизкрованпых сегментов, которая превшает таковую для холиношагетиков более чей втрое, чувствительность ЗпРФ- продуцирующих систем эпителия к гиста-мину особенно высока. Очевидно, резистентность гладких юсц трахеи крыс к гистамину обусловлена двумя факторами: чувствительностью рецептсрупрззляемого входа кальция к ведячипэ мембранного потенциала и способностью гкстаздша значительно потенцировать продукция эпителиального ре£акспрувщего фактора.

Дилятаторные воздействия физиологически активных веществ в значительной степени опосредуются инпашмам слоем. Особенна зто выражено в аорте: эффекты карбохолина и гиста-мина полностью зависели от сохранности эндотелия. Интактные сегменты отвечали на воздействие названных ФАВ дозозависишы расслаблением, а сегменты с удаленным эндотелием не изменяли при этом генерируемое механическое напряжение.

Концентрационная зависимость влияния аденозина на сегменты с сохраненным эндотелием имела двухфазный характер (рис.3). В концентрация 1 1!кЧ аденозии вызывав снижение не-ханического напряжения, а в более высоких концентрациях - до' 0,1 мМ - сокращение. Эффект АТФ такте юге л две фазы, но последовательность га была иной. В низких концентрациях (0,1 -•1 мкМ) АТФ вызывал сокращение интактннх сегиектсв аорти крысы, а в более высоких - расслабление. Дезндотелизированные сегменты отвечали дозозависимым сокращением па воздействие как аденозина, так и АТФ. И хотя амплитуда С0!фатит9льных ответов была сравнима, аденозин оказывал свое влияние з существенно Солее высоких концентрациях. Эффект 1 мкм АТО составлял 85 % максимальной амплитуды сокращения, а 1 мкМ аденозииа - ЛКЕЬ 151.

В сегментах трахеи кокс эффект'адреналина не зависел с? сохранности эпителия, если сегменты предсокраязяксь гнтерка-лиэвым раствором Кребса. Если г.е предсскращелие ссущестзля-

Рис.3. Зависимость механического напряжения сегментов аорты крыс от концентрации аденозкна и АТФ в присутствии эндотелия (1) и после его механического удаления (2). Ш- в 1 от анплитуды ответа на гиперкалиевый (30 кМ) раствор Кребса.

лось карбохолинои, адрензргическое расслабление существенно угнеталось после удаления эпителия (рис.4).

На первый взгляд, полученные данные противоречат друг другу. Эффект адреналина является эпителийкезависимым, когда реализуется на фоне "гкперкалиевой контрактуры", и приобретает выраменнуи зависимость от эпителия на сегментах, пред-сокргценпых кгрбохоликсм. Для объяснения этого парадокса необходимо рассмотреть в комплексе эффекта используемых £АВ на гладкие мыпцы трахеобронхиалъной системы.

"Гиперкалиевая контрактура'1 связана с деполяризацией клеточной мембраны и входом кальция в клетку по потенциало-зависимым ионным каналам. Адреналин взаимодействует с в- ад-рецорецепторамя саргллеил^, и при посредстве Бз-белка повы-оает активность адекидатшклазы. Вклад эпителия в эти реакции еэ регистрируется.

Воздействие карбоходика на Г Ж воздухоносных путей реа-

ЕЭ

Е9

д

153

я

Н--1—ь

Ч—I-н

-Ьд[С]

Рис.4. Зависимость ыехачипеского напряжения сегментов трахеи крыс от концентрации адреналша. 1- эпителий сохранен; 2- эпителий удален. Предсокращепие гиперкалкесии (30 >¿0 растворе! Кребса (А) либо карбохолиноы (В). 1-Я- в 2 от амплитуды пред-сокращения.

дивуется по принципиально иному механизм и связано с ыоди-фккацвей свойств многих мембранных иен- транспортируют, систем и ферментов. Оккупация М1-холинорецепторов приводит к развитии сокращения ГМК. В реализации этого эффекта участвуют преимущественно рецепторуправляемыэ кальциевые каналы и сигнальная систем, связанная с метаболизмом мембранных фос-фоинозэтидоз. Имеются также сообщения о том, что холиномиме-тики подавляют активность АД р ГМК респираторного тракта. Вероятно, это связано с оккупацией Мг-холинорецепторов сарколеммы, сопряхенных с АЦ посредством выбелка Ингкбкруи-" цее действие белка осуществляется за счет конкурентного связывания освобоэдаюпзшися при его активации а- субъедкнн-

цами «-субъединиц (Зз-белка. Поэтому активация б^белка приводит к снижению способности АЦ отвечать на стимуляцию, опосредованную бз-белками. В таких условиях механизм реализации эффекта катехоламинов с участием в- адренорецепторов и АЦ теряет своп эффективность, и на первый план выдвигается эпителий-зависимый путь.

Очевидно, что на мембране респираторного эпителия присутствуют адренорецепторы, стимулирующие выработку ЭпРФ. В экспериментах с селективным атомистами а- и в- адрекэрги-ческих рецепторов фенилзфрином и изопротеренолом были получены результаты, свидетельствующие, что стимуляция катехола-минаыи продукции ЭнРФ опосредуется преимущественно а- адре-норецепторами мембраш респираторного эпителия.

Таким образом, в организации эпителиально-гладкомьш.ч-ных взаимодействий в системах дыхания и кровообращения отмечается значительное сходство. В пользу этого свидетельствует и возможность перекрестных реакций в экспериментах "донор-акцептор" (рис.5). В том случае, когда "донором" и "акцептором" ЭТО служила аорта крысы, амплитуда эндотелий-зависимого расслабления, стимулированного 0,5 мкМ А23187, превышала таковую при использовании в качестве донора трубчатого препарата трахеи крысы. Величина перекрестной реакции ГМК аорты составляла 63,ЗХ прямой. В экспериментах, в которых и "акцепторам" ЭпРФ служила трахея крысы, величина перекрестной реакции составляла лишь 27,27. прямой.

Из приводимых результатов следует вывод о сходной природе релаксируюшдх факторов, так как между ними возможны перекрестные воздействия. Однако различия в амплитуде прямых и перекрестных реакциях указывают на некоторые различия в свойствах ЭРФ и ЭпРФ. Имеет место частичная органоспецифич-ность механизмов эндотелиально- и эпителиально -гладкомьппеч-ных взаимодействий в кровеносных сосудах и. респираторном ,тракте.

Величина эпителий-зависимых реакций претерпевает возрастные изменения: опосредованное эпителием расслабление

1/23107' 1э,5 en -<Ш>

•iras» - mur

I/231S? QZZD

SEL îî LÎ

| (ШШ7 : |g,5 sa <ГП>

Ш.13Й

"(Рг'ХГгГ.тЦ*...

[¿23Й? cr-

in 22 гП ■

JI3 ¡Я Ш

Ркс.5. "Перекрестило решает*" сегментов аорты и трахеи крыс на стинуляцгзэ выраЗоткн зндо (эпителиального рслак-скругадего фактора гапофороч А23187 (0,c;/:i.î). Екизу-"кадкбгхзвочный сигнал и отметка времени.

сегментов трахеи при воздействии адреналина вырэ.т.ено у крыс половозрелого возраста, и незначительно у молодых и старых животных (рис.б).

В »гадодоч возрасте у крыс ояитеяий-завкстсе расслабление гладких шлщ трахеи не выражено из-за особенностей гуа-кшатщгклазы гладкое мышц. Ее способность отвечать на воздействие активируюа'к агентов существенно спгкена, что подтверждаете.! Результатами зкеяержектэз с питропруссндсм ."атрия (рис.б). Эта способность развивается после 10 -12 подерг

2 |1

3

н-

н

н-—I—вшда

13-12 22-24 пща (Щ.)

Ркс.6. Величина расслаблена сегментов трахеи крыс трех возрастных групп при воздействии 1 ыкМ адреналина в присутствии эпителия (1) и после его механического удаленна (2). 3- при воздействии ннтропруссида натрия (1 мкУ).

Предотвращение - Б ккМ карбохолгаа (1,2) либо гиперкалиевый (30 гД!) раствор Кребса (3). Величина ответа - в X от гглтлитуды предсокраценкя.

гисни, и у арелых крыс аишжтуда эпителий-зависимых реакций максимальная. В процессе стгретга, после выхода из репродуктивного возраста (после 24 недели жизни) рззвивавтся деструктивные изменения со стороны респираторного эпителия и амплитуда эпителий-зависимого расслабления вновь снижается.

Полученные данные интересны как указывавшие на одну из возтю&к причин повышенного риска развития Сронхоспастичес-ких реа;здий в молодой к старческом возрасте.

РОЛЬ ВТОРИЧНЫХ ПОСРЕДНИКОВ В РЕГУЛЩИИ ЕИЯТЕЛИАЛЬНО - ГЛАДКСШШЕЧНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

Во второй части работа изучалась роль внутриклеточных сигнальных систем в регуляции эпителиально-гладксуыаечных взаимодействий. На основании полученных результатов предло-яена схема взаимодействия вторичных посредников, участвующих в регуляции выработки эпителиального релаксирующего фактора и реализации его эффектов на гладкие къида (рис.7).

Рис. 7. Взаимодействие внутриклеточных сигнальных систем, возлекае!!ьк в эпителий- зав кси-гуп регуляща сократительной активности гладких кьпц (пояснения в тексте).

ЗпителиЗ-ззвисииэз расслабление стимулируется при повы-Езнкя цитозольной концентрации кальция в зпителиошггах добавлением конофора Д23187, а нз сегментах трахеи- и при воздействии агониста альфа-адренорецепторов фенплзфрина,

ты которого опосредуются активацией кальций-зависимой сигнальной системы и метаболизма мембранных фосфоинозитидов.

Участие кальмодулин-подобных кальций-связывающих белков убедительно показано в экспериментах с антагонистами кальыо-дулина - трифторперазином, хлорпроыазином и имипраминоы. После предобработки названными соединениями препаратов-"доноров" дозозависимо угнеталась амплитуда опосредованных эпителием реакций на воздействие ионофора А23187 и фенилзфрина. Величины ЕС50 составляли ряд, совпадающий с рядом сродства их к кальмодулину (табл. 2).:

т«п > хп > кп.

Полученные результаты, по данным М.В.Баскакова С1980], свидетельствуют об участии кальмодулин-подобных кальшк-свя-зывагащих белков в регуляции выработки эпителиального релак-сируюадго фа!сгора.

Участие ПК-С в регуляции продукции релаксирующего фактора доказано в экспериментах с ее ингибитором стауроспори-. ном. После прединкубации препаратов-"доноров" с 10 нМ стау-роспорина эпителий-зависимые реакции существенно угнетались.

Эпителиальный релансирующий фактор, проникая в цитоплазму гладкомышечных клеток, активирует растворимую фра-щнз гуанидатциклазы. Это подтверждено экспериментами'с ингибитором гуанилагциклазы меткленовым сини,!, который эффективно угнетал эпителий-зависимые эффекты кальциевого' ионофора и фенилзфрина после предобработки сегментов-"доноров". Нечувствительность названных эффектов к модуляторам Б1-подобных белков- 6ТР-т-2 (0,1 мкМ) и комплексной соли фторида аллзомп-ния позволяет исключить участие мембраносвязакой фракции гу-анилатциклазы в этом процессе.

. Механизмы реализации релаксирующего эффекта цШ5 в гладких мылцах до сегодняшнего дня не выясненны. В то же время было обнаружено, что эпителий- зависимые реакции, как и расслабление ГМК при воздействии агитатора ГЦ нитропрус-

та£2т.ца 2

ХАРАКТЕРИСТИКИ АНТАГОНИСТОВ ШЫЮДУЛКНЛ И ЛХ ВЛИЯНИЕ НА ЭПИТЕЛИЙ-ЗАВИСИМОЕ РАССЛАБЛЕНИЕ СЕГШНТСЗ ТРАХЕИ КРЫС

М±л, Р<0,05

Ко.5 вытеснения сИБ-Сз-б КЗ комплекса с КМ ЕСбо для угнетения | ЭП-зависимых | реакций ГНХ |

трифторпергзия 4,0 !.'кМ 3,2 i 0,2 ьскМ I п=? | «

хлорпро!1аз!ш 17,0 1 23,5 ± 1,3 | п>5 |

¡дсптрз.'пн 0 ,15 к"! 0,35 ±0.07 ММ | |

п - количества зкслэргаг^птсз

сига натрия, угкетазтся шггпбиторс^ цДУЗ-згзпс1г.'оЯ прогеяг-ккназы- соединением Н-9 (2 :г.1!). Косвенным свидетельство« з пользу участия цАМ5- зависимой сигнальной систем сгукаг г: данные о способности блокатора калкепих ка!галоз тетрззтияач-шнкя (10 «¿.у ингябкровать зшгаедй- завкси«ое расслабленно сегментов-акцепторов я эффекты ттрэпруссида натрия.

Наиболее вероятной точкой вгаклиейстакя цЛМЗ я цШ> зависимых процессов является фосфодгастсргга. Это цн-топлазмагаческнй Фермент, антивирусный калыядакагсн 'л спз--собкый осуществлять гидролиз обо;"'. ш:кл;г-:ес;т:сх нуклсст^сз. Причем сродство нативксЗ фсс^одкзстеразн к цП'З пресса? сродство к «АЮ более, чэи на порядок. Подобного рода дк::д:з к.'сзтся и относительно гладких !2сц рзссрагорного тракта. Б

работе Л.Ро1гоп [16823 приводятся значения констант сродства очищенной ФДЭ. полученной из ГМК трахеи собаки - 0,14 1Лй! к цгш и 6 изСА к цАКГ Однако е интактных клетках основным субстратом фссфодиэстеразы является цАМ®, так как его содержание в цитозоле намного выше. Концентрация же цГШ не превышает нескольких наноыоль. При усилении синтеза ЦГМФ происходит конкурентное кнгнбирование гидролиза цАМ2 и расслабление ГМК. Аргумент-ом в пользу предложенной гипотезы является способность ингибитора ФДЭ теофкл!гаа угнетать эпителий- зависимое расслабление, стимулируемое кальциевым ионофо-ром А23187 и аффекты ннтропруссида натрия.

Такиа образом, в регуляции зпетелиально-гладкомышечных взаимодействий участвуют все внутриклеточные сигнальные системы, . причем продукция релакскрушего фактора регулируется "каЕьмодулки-подобными кальций-свявываащмк бедкаыи и проте-ишагаазой с, а его эффекте-щкгкчеамми нуклеоткдаии.

аДКгВЧЕАЕЕ

Сизиологическая близость эпителиально-гдадкомьшечных взаимодействий в бронхах и сосудах обуславливает аналогию их участия в патологических реакциях систем дыхания и кровообращения. Патологические состояния , сопровождавшиеся повреждением иптюа, проявляются прение всего усилением спастичес-

реакций сосудов к бронхов. Гда гипертонической болезни характерно снияение чувствительности гладких кашц к воздейс-твкэ релаксирунцпх факторов вгдотелиалького происхождения, для атеросклероза к бронхиальной астмы - цорфофуккциональкое повреждение эпителия и снесение его дилятатспного влияния. Характерной чертой является так гге уменьшение чувствительности как сосудоз, так и бронхов к определенным группам фар-макопрепаратоБ.

Регидгруя изложенное, необходимо отметить, что значительное сходство в характере и ыеханизмач влияния респираторного оплтедиа к зкдогодкя кравеноскнх сосудов на фязиоло-

гкческие реакции ГМХ лает основания рассматривать эпителиально-гладксмызечныв взаимодействия как универсальную систему локальной регуляции жизнедеятельности внутренних органов. Ее вклад в поддержание гомеостаза наряду с системными- уровнями регуляции обеспечивает оптимизация функций органов дыхания и кровообращения. Заслуживает пристального внимания .не только физиологическое значение.этих взаимодействий, но и возможная роль в патогенезе различных функциональных расстройств.

ВЫВОДЕ!

1. Эндотелий кровеносных сосудов и эпителий воздухоносных путей модулируют сократительную активность гладких шла, ЕыраОатывая релаксируютдае и констрикторные факторы. Продукция релаксирувдих факторов стимулируется при воздействии биологически активных соединений различных групп.

В эндотелии выражена "фоновая" продукция релаксирующего фактора и влияние на Сазальный тонус кровеносных сосудов. Респираторный эпителий преимущественно модулирует сократительные реакции бронхов на различные воздействия.

2. Возможность перекрестных реакций между эндотелиаль-ными и эпителиальными релаксирувдими факторами свидетельствует об их неполной органоспецифичности.

Респираторный эпителий способен более интенсивно продуцировать релаксируюэдм фактор в ответ на стимуляция, в то время как в кровеносных сосудах вше чувствительность ГМК к дилятаторнаму влиянии эндотелия.

3. Продукция эпителием релаксирующего фактора является кальций-зависимым процессом и регулируется с участием каль-модулин-подобных кальций-связываадах белков и протеинкина-зы С.

4. В регуляции эпителий-зависимого расслабления гладких мыац участвуют гуанилатциклаза и протеинкиназа А. Взаимодействие цШЗ>- и цГШ>- зависших сигнальных путей осуществляется на уровне фосфсдиэстеразы циклических нуклеотидов.

5. Влияние ■ продуцируемых эндотелием и респираторным эпителием фа'сторсв на гладкие мывиу в значительной степени обусловлено изменениями ионной проницаемости мембраны: эндотелия-1 увеличивает кальциевую, а релаксирункдо факторы -калиевую проводимость сарколемлы.

О. Возрастные особенности эпитзлиагвпа-глалтаиьгечнкх -взаэюдействиЯ в воздухоноснйх путях обусловлена ках низкой активностью циклазиых систем гладких иашц у нолодцх гзгот-ных, так и норфофункцкональной деструкцией зпктелия з старее и возрастай"! группе. Релаксирукцее влияние эпителия ка::са-мально выражено у хивотных репродуктивного вовраста.

7. Нарунешга зшиелкально-гладкегастечкнх зсагеотдейстпкй вносит существенный вклад в механизмы реалнзнсп: патологических реакций систеи дыхании и кроЕсоЗрсгсгпп.

сашс сшга££-лздк2к работ

1. Эпителий-зависимые сократительные реакции ГМК воздухоносных путей// Актуальные вопросы мед.обеспечения войск, подготовки и усовершенствования кадров.-Томск,1992.-вып. 5.- С.166-168. (Соавт. И.В.Ковалев,М.Б.Баскаков).

2. Роль эндотелия в аденозинэргических сократительных реакциях аорты крысы//Тау ке.- С.169-171.(Соавт.Е.Ю.Петров).

3. Исследование влияния эндотелия на адренэргические сократительные реакции сегментов аорты крысы // Акт. вопросы кардиологии.-1993.- вып.7.- С.44-46.(Соавт.М.Б.Баскаков. К.В.Ковалев,Н.П.Ларионов).

4. Влияние эндотелина-1 на электрические и сократительные свойства ПК аорты крысы// Акт.вопросы кардиологии.-1993 .-вып.7.- С.47-50.(Озавт.К.В.Ковалев,М.Б.Арланик,М.Б.Баскаков ,Н.П.Ларионов).

5. Некоторые механизмы регуляции тонуса гладких ьашц воздухоносных путей в ¡гарые и патологии // Проблемы и перс-пекгкЕЫ развития ГО ТНХК.- Тонек, 1993.- С.71-72.(Соавт. (Е.О. Петров,И.В. Ковалев,В.О. Ткьюфеев).

6. Участие эндотелия в регуляция сократительной активности гладкк ыыац // Ыат-лы це^зду нар. научной школы "Нервные и гуморальные механизмы регуляции кровообращения".-Москва, 1993.-С.42.

7. Влияние экдогелия на сократ; ггедьнуа активность гладких (.чпц воадухоноагых путей // Актуальные проблемы медицины годного транспорта.- Одесса,1993. -С.52-53. (Соавт.М.Б.Ба-скаков).

8. Ба:-;гелий оронхов участвует с адрензргической регулнции гладких ¡-аглц // Зкологня и здоровья детей.- Тои:ск,1994,-С.32-33.(Соавт.Ы.Б.Бееканов, Ы.В.Кусков. Е.В.Петров.И.В. .Ковалев,М.А.Медведев).

0. Эшггелн:.' способен опосредовать брокхсраспкряюсее действие адоенайагстгкзв // Пройиекы и перспективы развития

ТНХК.- Томск,1994.-С. 147-148. (Соавт.М.В.Кусков,Е.Ю.Петр-

ов, В. ЮЛ имофеев, И. В. Ковалев, М. Б. Баскаков, М. А. Медведев).

10. Modulation of electrical and contractile activity of taenia coli // United Europian Gastroenterology Week.-Oslo .1994,- P.12/79.(M.B.Baskakov,I.V.Kovalev,D.V.Zagulova).

11. Эпителий-зависшая регуляция тонуса бронхов // Молекулярные и клеточные основы регуляции кислотно-щелочного и температурного гомсостаза.- Сыктывкар,1994.-С.62-65. (.Со-авт. М.Б.Баскаков,М.А.Медведев, И.В.Ковалев, М.В.Кусков, Е.Ю.Петров).

12. Исследование бронходилятаторной активности эпителия воздухоносных путей // Российский медико-биологический вестник. - 1994.-ill.-С.32-35. (Соавт.М.Б.Баскаков,И.В.Ковалев, М.А.Медведев.Е.Ю.Петров).

13. Модулирующий эффект эпителия в сократительных реакциях гладких мыгац воздухоносных путей // Медико-биологические аспекты нейро- гуморальной регуляции.-Томск,1994.-С.13-14.(Соавт.".В.Ковалев.М.В.Баскаков,М.Л.Медведев,Е.Ю.Петров ,М.В.Кусков, В. Ю.Тимофеев).

14.- Эпителий-зависимые мэхенкзни бронхоратвиряггмго действия адреналина // Современные проблей* фтизиатрии и пульмо-'нологии в Сибири.-Томск,1994.- С.157-158.(Соавт.Е.Ю.Петров, В. Ю. Тимофеев,М.В. Кусков,И.В. Ковалев,М.Б.Баскаков).

15. Исследование эпителий-зависимой регуляции гладких мышц воезухоносних путей // Там .т.е.- С. 158-159. (Соавт.М.В.Кусков, Е.С.Петров,В.Ю.Тимофеев,И.В.Копалез,М.Б. Басклкоз).

16. Airways epithelium dar^ae decreas of norepynephrin- dependence relaxation of rat's trachea // 2-nd Intern.Congress cf patcphyslolcsy--Kyoto(Japan),1994.-P.A24.fM.Med-vedev, M. Baskakov, M. Kuskov, I. Koval ev).

17. Roule cf cyclic nucleotide In effects cf nltrcprusside and EpDi?F on airways smooth muscles // 2-nd Intern.Cong--rees cf patophyslolcjy.-KyotoUapan),1994.-P.C05.(M.Med-vedev ,M.-Baskakov, E. Petrov, I. Kcvalev).

1G. Исследование мембранных механизмов регуляции спонтанной

электрической и сократительной активности гладких мышц кишечника//Биоритмы пищеварительной системы и гомеостаз. - Томск,1994.- С.133-135.(Соаат.М.Б.Баскаков, И.В.Ковалев,М.А.Медведев).

19. Сравнительный анализ факторов расслабления,синтезируемых эпителием воздухоносных путей и эндотелием сосудов крысы // Там же.- С.137-140.(Соавт.Е.Ю.Петров,М.Б.Баскаков).

20. Исследование механизмов резистентности трахеи крысы к ■гистачину // Там ке.-С.200-203.(Соавт.М.В.Кусков,М.Б.Баскаков ,И.В.Ковалев).

21. Исследование роли эпителия в регуляции сократительной активности гладких мькпц воздухоносных путей // Успехи физиологических наук.-1994.-Т.25,N1.-0.51-52.(Соавт.М.Б. Баскаков, М. А.Медведев,И.В.Ковалев,Е.Ю.Петров,М.В.Кусков, В.Ю.Тимофеев,И.В.Петрова).

22. Повреждение респираторного эпителия как фактор риска развития бронхолегочной патологии // Прсблеш и перспективы развития АО ТНХК.- Томск,1995.- С.97 - 98. (Соавт. М.В.Баскаков,И.В.Ковалев,Е.Ю.Петров,М.В.Кусков.Я.Д.Лкфи-ногенова). ■ '

23. Возрастные особенности эпителий-опосредованной регуляции тонуса воздухоносных путей ¿/ Там ж.-С. 99 - 100. (Соавт. М.Б.Бйскаков,И.В.Ковалев,Е.Ю.Петров,М.В.Кусков).

24. Эпителиально-гладкоыьшечкое взаимодействие в регуляции тонуса воздухоносных путей // Физиологический журнал им. И.М.Сеченова.-1995. (Соавт..Б.Ы.Баскаков, М.А.Медведев, И.В.Ковалев,Е.Ю.Петров,М.В.Кусков,В.Ю.Тимофеев).

25. Механизмы влияния основного медиатора бронхоспазма при бронхиальной астма у человека // Клиническая иммунология и аллергология.-Тсыск,1095.-С.63-64.-(Соазт.М.В.Кускоз).