Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Функциональная активность нейтофилов периферической крови при иерсиниозах

ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ

На правах рукописи

НИКУЛИН Вячеслав Николаевич

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ИЕРСИНИОЗАХ

14.00.10-Инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва -1992

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте им.Н. А.Семашко.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор Ющук Н.Д.

Научный консультант:

доктор медицинских наук,профессор Пинегин Б.В. Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,профессор Машилов В.П. доктор медицинских наук Бродов Л.Е.

Ведущая организация-Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова.

Защита состоится " на заседании специализированного совета Д 074". 19.01 при Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии (111123,г.Москва,ул.Новогиреевская, 3 а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии.

Автореферат разослан " ^^ » 199-^г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат, медицинских наук

Пименова М.Н.

росetnwxAZ } omi |

БИБЛИОТЕКА " - 3 -

Актуальность проблема. В последние годы отмечается рост заболеваеностн иерсиниозами во многих странах мира. По данным ВОЗ в ряде стран Скандинавии и Северной Америке иерсини-озы в группе кияечных инфекций прочно заняли второе место после сальмонеллезов [Kollaret Й.Н.1988;ИН0 1983J. В намей стране наряди с ростом спорадической заболеваемости иерсиниозаии. регистрируются и крупные вспики данной болезни [Именно Г .В. 1984.19S6 ¡Дмитровский A.M. 1984;Соиов Г.II.и соавт.19ЭОЗ.

История изучения иерсиниоэов насчитывает около 100 лет.За это время достигнуты значительные успехи в исследовании клиники и лечения данной патологии [Покровский В.И.и соавт.1985:Юяук Н.Д.и соавт.1989;lenlo R.et.al i987;Mollaret Н.Н.19831.Однако развитие обострений и рецидивов,формирование вторично-очаговых форм [Сомов Г.П. и соавт.1985,1390:Малое И.В.1988:Georgescu 6.et.al.19851.отсутствие подходов к прогнозировании исходов иерсиниозов диктует необходимость углубледного изучения отдельных сторон патогенеза данного заболевания.

Данные литературы показывашт.что ремение этой задачи момет быть основано на функциональном зондировании нейтрофи-лов периферической крови [Бериная Н.М. 1988;Нагоев Б .С.1985;Falloon Л.et.al.1986].Нейгрофилы великолепно отвечают задачам клинико-лабораторного анализа:они чувствительны к вирокому спектру эндогенных медиаторов,обладапт мо<ным зф-фекторным потенциалом и готовы к его немедленной реализации [Маянский Д.Н..Маянский fl.H.1989;Klebanoff S.J..Clark R.A.i978:Solbers С.et.al.1977).Это делает их универсальной мивеньи и соответственно индикатором различных нарушений го-меостаза и гомеокинеза.

Вместе с тек известно,что иерсиниозн сопровождаются внутриклеточных персистированием возбудителя в нейтрофилах и моноцитах периферической крови и тканевых макрофагах.т.е. процесс фагоцитоза носит незавершенный характер [Авцын Й.П.1990:СомовГ.П.и соавт.1990:НагШ1а К.Т.е1.а1.1989].Учитывая.что течение инфекционных заболеваний наряду с рядок других причин зависит от функциональной активности нейт-рофильных лейкоцитов (Билибин А.Ф.исоавт.1986;Белоцкий С.М. 1988:й11еп R.CЛ982: Вепс11х-Нап5епК.. Н1е15еп Н.1983J комлексное исследование основных систем бактерицидности и адгезивной способности нейтрофильных лейкоцитов является актуальным для уточнения некоторых сторон патогенетических механизмов, определения полноты выздоровления и исходов при иерсиниозах.

Цельработы.

Клинико-патогенетическая оценка функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных иерсиниоза-ми в зависимости от клинических форм и стадии патологического процесса,с целы) уточнения отдельных сторон патогенеза этого заболевания и поиску объективных критериев для прогнозирования его исходов.

Основные задачи:

1.Изучить у больных генерализованной и гасгроинтести-нальной формами иерсиниозов в динамике заболевания активность основных бактерицидных систем нейтрофилов периферической кров и:МПО.КФ,КБ,ЙФИ.

2.Изучить показатели активности МПО,КФ,КБ,АФК нейтрофи-лов периферической крови у больных вторично-очаговыми формами иерсиниозов.

3.Изучить в динамике инфекционного процесса адгезивную способность нейтрофилов периферической крови,как одну из клвчевых функций фагоцитирутих клеток у Сольных различными формами иерсиниозов.

4.Установить диагностическая и прогностическув информативность,полученных критериев функционального состояния нейтрофилов периферической крови.

Научная новизна.

1.Впервые изучены основные системы бактерицидности нейтрофилов периферической крови и их адгезивная способность у больных различными Формами иерсиниозов в динамике патологического процесса.

2.Доказана прогностическая ценность определения функциональной активности нейтрофилов периферической крови в установлении возмомности формирования рецидивов и вторично-очаговых форм у больных иерсиниоэами.

3.Остановлена дифференциально-диагностическая ценность определения функциональной активности нейтрофилов у больных иерсиниозом с яелтумным синдромом и у больных вирусными гепатитами "Я" и "В".

Практическая значимость работы.

1.3становлено прогностическое и дифференциально-диагностическое значение определения функциональной активности

нейтрофилов периферической крови и больных различными формами иерсиниозов.

2.Показано,что показатели функциональной активности нейтрофилов отражают степень выздоровления организма и могут быть использованы в качестве дополнительного критерия для установления сроков выписки больных.

Положения,выносимые на зациту.

1.Состояние функциональной активности нейтрофилов периферической крови является одним из факторов,который определяет течение и прогноз заболевания.

Длительно сниженные показатели функциональной активности нейтрофилов периферической крови указывают на возможность формирования вторично-очаговой формы,возникновение обострений и рецидивов.

2.Линаиика показателей функциональной активности нейтрофилов у больных иерсиниозами зависит от формы заболевания.

3.Определение показателей функциональной активности нейтрофилов может быть использован как один из дифференциально-диагностических тестов при проведении дифференциальной диагностики между вирусными гепатитами и иерсиниозом с жел-тувным синдромом. Б острый период (6-10 день болезни) при иерсиниозах и вирусных гепатитах наблюдается снижение показателей кислородзависииого метаболизма нейтрофилов периферической крови,достоверно ниже при вирусных гепатитах.

4.Люминол-зависимая хемилюминесценция является рефе-ренс-тестои оценки функциональной активности нейтрофилов периферической крови.Подчеркивая значимость комплексного подхода к оценки функциональной активности нейтрофилов перифе-

- ? -

рической крови.необходимо отметить.что у кавдого конкретного больного имеются разнонаправленные изменения активности мие-допероксидазы.кислой фосфатазы и катионных белков. В тояе время ЛЗХЛ имеет четко выраяеннуп направленность.снимаясь в острый период болезни и повышаясь с тенденцией к нормализации в период реконвалесценции.что мо«ет слумить одним из дополнительных критерием выздоровления больного.

Апробация работы

Материалы диссертации доловенн и обсуждены на Научно-практической конференции по хемилвминесценции I Москва.1991),совместной клинино-лабораторной конференции Института иммунологии Минздрава СССР С19Э1),Научно-практической конференции клинического отдела ЦНИЙЗ РФ.кафедры инфекционных болезней ННСИ им.Н.Й.Семаако и Клинической инфекционной больницы N 2 г.йосквы (1991),Научно-практической конференции инфекционистов Язербайдвана (Баку,1991).Московской обществе инфекционистов (1992).

Внедрение результатов работы

Предлагаемые методики комплексного исследования функциональной активности нейтрофилов периферической крови применяется при обследовании больных в отделениях Клинической инфекционной больницы Н 2 г.Москвы.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и стдктдра диссертации

Диссертация излоаена на 138 страницах иаиинописного

текста и состогт из введения,обзора литературы,раздела собственных исследований.заклвчения,выводов и практических рекомендаций.Библиографический указатель содернит 1У5 источников литераторы (92 отечественных и УВ зарубемных ).Работа иллюстрирована 20 таблицами и 10 рисунками.Приводятся 5 выписок из историй болезни.

ШЕРШ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под наблюдением находилось 108 больных иерсиниозом и псевдотуберкулезом (45 больных псвдотуберкулезом,61 иерсини-озом) в возрасте от 18-45 лет.из них 7Ь (7?.5%) мувчин и 31 (22.53!) мениин.

Диагноз иерсиниоза и псевдотуберкулеза был поставлен на основании характерных клинико-эпидемиологических данных,результатов бактериологического и серологического исследований. Анализ клинической картины иерсиниоза и псевдотуберкулеза проведен на основе методических рекомендации МЗ СССР Иерсиниоз "( клиника,диагностика,лечение) [[¡окровский Ь.И.и соавт.1985].

На основании эпидемиологических данных,анамнеза заооле-вания.клинико-лабораторных показателей и исходя из классификаций иерси:;коза и псевдотуберкулеза,приведенных б вы«е указанных методических рекомендациях , среди каолвдав«ихся больных были выделены следувиие клинические формы:

I.генерализованная форма ( смеманный вариант )- 81 I 76.4%) больных.

II.гастрскнтестинальная фориа-14 ( 13.2%) больных.

III.вторично-очаговая форма-11 с 10.42} больных I 8-ар-триткческий вариант. 3- дзловатая эритема).

Из 81 больных с генерализованной формой инфекции у /о диагноз иерсиниоза и псевдотуберкулеза был поставлен впервые. 3 пациентов были госпитализированы повторно с рецидивом заболевания.Среди больных вторично-очаговой формой впервые диагноз был поставлен у 8 больных, а 3 были выявлены при ка-тамнестическом обследовании.

Абсолютное больвинство составили больные с средне-тяяе-лым течением заболевания -96 человек ( 90.62).у 8 ( '/,5%ь заболевание протекало легко.

Лечение больных иерсиниозаыи проводилось в соответствии с вывеуказанными методическими рекомендациями, и включало в себя диету ( стол N 13.а при наличии клинико-лаоораторных данных поражения печени-стол N 5),антибактериальную, десенсибилизирующую,витаминотерапию.

Пребывание больного на койке при генерализованной форме иерсиниозов составило 22,2*1.4 дня; при гастроинтестинальной форме- 15+2.1: при вторично-очаговой 28+3,6 дня (Р < 0,05;.

Методы исследования:

-адгезия на пластик Лейкоцитарная суспензия с концентрацией нейтрофилов 2 млн/мл вносилась в лунки плоскодонного планвета для иммунологических реакций по 100 мкл в лунку,в триплетах для каждого больного.После 60 мин.инкубации на-досадок забирался, а образовавшийся клеточный монослой трижды отмывался PBS (рН 7.2-7.4).Клетки фиксировали на пластике 96 У. этанолом в течение 30 мин, а затем окрамивали по Рома-новскому-Гимзе в течение 30 мин.Окрашенный клеточный монослой отмывали от невклвчивжегося красителя P8S трижды, высуживали и растворяли расположенный внутриклеточно краситель 40 нК раствором НС1 в изопропаноле.Измеряли оптическую плотность раствора на микропроцессоре Ellsa-11

("Behrine") при длине волны 650 им и референсной волне 405 ни.По величине оптической плотности определяли количество и процент адгезированных клеток./Y=exp I 1п(Х) * 2,0971856-9.78437829 ].где Y-количество адгезированных к пластика клеток,а Х-оптическая плотность в п*10.

-тест восстановления нитросинего тетразолия

(НСТ-тест):к адгезированным на пластик и отмытым клеткам добавляется по 100 мкл раствора НСТ (1мг/мл)на PBS ipH 7.2-?.4).В контрольные ланки добавляет по S0 мкл раствора Хенкса без фенолового красного.а в опытные - по 50 мкл суспензии опсонизированного зимозана 20 мг/ мл. Планиет инкубируется 30 мин при 37 С.После инкубации клеточный монослой с образовавшийся зернами диформазана осторохно.но тдательно отмывается от зимозана и раствора НСТ тримды.План-вет высуиивается и,затек,образовавшийся диформазан растворяется предварительно разогретым до 83 С ДМСО.Оптическая плотность измеряется при 540 ни на спектрофотометре Titertek Kultiscan Р1из,бланкируя по ДМСО.Как спонтанный (контроль),так и индуцированный (опыт) НСТ-тест ставится в триплетах. Вычисляется средняя оптическая плотность для контроля и опыта и индекс стимуляции равный отношении опыта к контро-лп.Уровень спонтанного НСТ-теста соответствует оптической плотности контроля,а индуцированного - опыта.

-определение активности миелопероксидазы:К адгезированным на пластик и отмытым клеткам добавляли 100 мкл субстратной скеси.состоящей из 0.04 Т. ортофенилендиамина ("Slsia") и 0.014% ' перекиси водорода на фосфатно-цитратном буфере (рН 5.0). По истечении 10 мин.реакции останавливали 100 мкл 10 Z серной кислоты.Интенсивность оптической плотности измерялась в многоканальном спектрофотометре "Multlscan Titertek Plus"

- il -

("Flow lab.") при ддине волны 492 ни. в виде единиц оптической плотности.умиоаенных на 1000.

-определение активности кислой фосфатазн:к адгезирован-нам на пластик и отмытым клеткам добавляли 50 нкл субстратной смеси,состоявей из 0.24 % паранитрофенилфосфата ("Boehrlne") и 0.84 X NaCl на натрий-цитратном 1 M буфере (рН 5.5).После 30 минутной инкубации при 3? С реакции останавливали добавляя 100 мкл 0.2 M NaOH.Интенсивность оптической плотности измерялась в многоканальном спектрофотометре "Multiscan Titertek Plus" ("Flow lab.") при длине волны 405 нм. в виде единиц оптической плотности.умнояенных на 1000.

-определение изменения активностимиелопероксидазы и кислой фосфатазы при стимуляции оагоцитирувяих клеток in vitro:K адгезировакныы на пластик и отмытым клеткан добавляли по 30 мкл суспензии опсонизированного зииозана 20 нг/мл.После 30 мин инкубации при 3? С клетки повторно отмывали триады PBS (рН ?.2-7.4) от знкозана и выделившегося при стимуляции фермента.Затем определяли активность аиелопе-роксидазы и кислой фосфатазы,как описано Dane.

-определение количества нефераентных катионких белков в Фагоцитирувяих клетках:к адгезированнна на пластик и отинтна клеткам добавляли 50 якл 0.1 X раствора золеного прочно-roC'Serva") на аетаноловом трис-буфере (рН 3.2).После 30 минутной инкубации при 3? С клетки повторно отанвали триады от невклвчиввегося красителя,а внутрикяеточно располоаенный краситель растворяли DMS0 ("Serva") по 100 мкл «а лунку. Интенсивность оптической плотности фиксировалась в нногока-нальном спектрофотометре "Hultiscan Titertek Plus" ("Flow lab.") при длине волны 620 нм. в виде единиц оптической

- 12 -

плотности.укноменных на 1000.

-расчет полученных показателейна 100 тысяч клеток:0че-виднс.что адгезивная способность фагоцитирдщих клеток мо»ет суцественно колебаться у разных людей.Соответственно, и полученные величины оптической плотности в НСТ-тесте, тестировании активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы, а так-«е количества катионных белков будут зависить не только от Функционального состояния клетки.но и от их количества, прилип мих к пластику.Чтобы стандартизировать получаемые в различных тестах показатели и сделать сравнимыми результаты получаемые у разных лидей. проводили пересчет полученных показателей на определенное количество клеток,в данной случае на 100 тыс клеток.Для этого полученная при тестировании того или иного параметра функциональой активности клеток величина оптической плотности умномается на 100 тысяч и делится на количество прилипиих клеток определяемое при тесте адгезии Фагоцитирущих клеток на пластик.

-исследование лвнинолзависимой хеиилюминесценции Фаго-цитируших клеток периферической крови человека проводили на приборе 1251 Luilnoaetr (LKB) по методике Земскова в.М.,1986 г..регистрируя пик спонтанной и индуцированной хемилвми-несценцин и вычисляли индекс стимуляции.

Контрольную группу составили 42 практически здоровых донора,в возрасте от 18 до 50 лет.Полученный материал был обработан методом вариационной статистики на ПЭВМ " flppel " с пококьп пакета программ Basic Statistic.

РЕЗУЛЬТАТЫ И 0БС5ЛДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. При обследовании 106 больных с острыми формами иерсини-

оза получены результаты касавжиеся дефектов функциональной активности нейтрофилов периферической крови, наблвдавжихся в динамике развертывания основных периодов болезни.Так у 45 больных с генерализованной формой иерсиниоза в острый период ( 8-10 день болезни ) наблюдается снижение адгезивной способности нейтрофилов ( 31.3+5,0% ; у доноров 52,08+З.Ш)с частотой встречаемости 70,5% .Другой дефект,выявленный в эти se сроки, связан с фукционированием кислородзависимого метаболизма нейтрофилов (выработка активных Форм кислорода).Несмотря на то,что спонтанная ЛЗХЛ достоверно не отличается от нормы (Р > 0,05),при стимуляции клетки in vitro не происходит суяественного усиления образования ЙФК С ЛЗХЛ инд - 19,5+6,51; у доноров 41,32+8.87. Р < 0,05).Так как нагрузочные тесты вскрывает резервные возможности фагоцитирувцих клеток!Иаянский fl.H..Маянский Д.Н.1989],можно констатировать снижение резерва функционирования кислородзависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови СЙС ЛЗХЛ при иерсиниозе-10,4+1,01;при норме 21,52 +3, 55. Р <0,05).Частота встречаемости данного дефекта составляет 37.8Z .ЛЗХЛ отражает выработку ЙФК зкскретируемых во внеклеточное пространство для киллинга внеклеточно расположенных патогенных возбудителей!De Sole P.et.al.1982;Cheson B.D.et.al.19?7:Horan T.et.al,1SB2].B острый период болезни у больных с генерализованной формой иерсиниоза выявлен переход Функционирования нейтрофилов периферической крови на более низкий уровень в внутриклеточной продукции ЙФК,выражением чего является НСТ-тест.Имеется снижение как спонтанного НСТ-теста(57,5+11,1;Норма-89,77+9, З.Р<0,05),так и стимулированного (115,8+7,5; Норма-141,1+12,26.Р<0,05).В тоже время индекс стимуляции НСТ-теста достоверно не отличался от нормы

(Р > 0.05).Частота встречаемости данного дефекта составила

43.2- 54,ОХ .Следовательно дефект кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных иерсиниозом в острый период связан с снижением продукции ЙФК как внеклеточно, так и внут-риклеточно. Так как ЙФК обладает моцной бактерицидной активностью [Осипов А.Н.и coaBT.1990:Rossi F.1982],можно предположить, что одним из возможных механизмов внутриклеточной персистенции иерсиний в фагоцитирувдих клетках является выявленный дефект продукции АФК.

Важные. на нав взгляд.данные получены об активности основных ферментов бактерицидности нейтрофилов (ИПО.КФ) у данной категории обследуемых больных в острый период болезни.В 62,17. случаев наблвдается повыиение активности спонтанной И10 ( 1193+156,1;Норма-698+101.Р < 0,05).и в ^-недостоверное повышение КФ CP > 0,05).Известно,что содержащиеся в гранулах нейтрофильных лейкоцитов ферменты,в том числе мие-лопероксидаза и кислая фосфатаза,расходуются на подавление активности фагоцитированных бактерий (Ляценко ID.И.и coaBT.1988;Ryter fl.et.al.1983].Однако в навих исследованиях снияенив спонтанной активности НПО и КФ наблвдалось в

25.3-322,что позволяет думать о слабой вараненности секреторной дегрануляции. По-видимому,это связано с нарувениеи процесса слияния содержимого секреторных гранул нейтрофильных лейкоцитов с фагосомой под влиянием токсических продуктов, выделяемых иерсиниями,подтверждением чему является повыиение активности МП0 и КФ при стимуляции клетки in vitro опсонизированным зимозаном (Р < 0.05). Это может,по всей вероятности являться еве одной причиной незавериенности фагоцитоза при сохранении поглотительной функции нейтрофилов при иерсиниозе.Полученные данные согласуются с исследованием

функциональной, активности полиморфно-ядерных лейкоцитов при псевдотуберкулезной инфекции g кроликов 1Исачкова Л.М.,Плеханова Н.Г.1989]. С другой стороны повипение показателей активности НПО и КФ как в спонтанном состоянии.так и при стимуляции клеток in vitro могут носить компенсаторный характер.

По данный литературы обострения и ранние рецидивы при иерсиниозе чаще всего наблвдаптся на 16-18 день болезни [Дмитровский A.M. 1984; Покровский В.И. и соавт.1Ш.1.Как правило у больных в этот период не отмечается существенных отклонений от нормы в общеклинических анализах,данных ооьек-тивного осмотра, и определить прогноз заболевания по этим параметрам не представляется возмокныи.6 Toie время нормализация функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных генерализованной формой иерсиниоза наступала на 22- 24 день болезни,с тенденцией к нормализации в динамике болезни.Сленение за динамикой показателей функциональной активности нейтрофилов периферической крови,на наш взгляд,подтверядает мнение исследователей Швдк Н.Д.,Карет-кина Г.Н.19881 о необходимости госпитализации больных генерализованной формой иерсиниоза сроком на 3 недели.

Исследование функциональной активности нейтрофилов у 36 больных генерализованной Формой псевдотеберкулеза позволило установить аналогичные дефекты фагоцитоза.как и при генерализованной форме ирсиниоза.Ингибирование отдельных звеньев Фагоцитоза больвинством авторов [Сомов Г.П. и соавт.1990;Наг11а1а К.Т. et.al.1989] связывается с действием на фагоцитирувяив клетки поверхностных субстанций иерсиний псевдотуберкулеза.Эти сустанции парализуют переваривающую функции лейкоцитов,что ведет к беспрепятственному размнояе-

нии возбудителя в клеточных элементах макроорганизма.Это подтверждается и в навих исследованиях Лак снижение кисло-родзависимого метаболизма отмечено нами у 42,4* больных,на-рувение секреторной дегрануляции-у 65,82.Кроме нарувения пе-реваривапвей функции нейтрофилов.нами установлено нарувение и адгезивной функции,которое регистрировалось в 65,5* случаев. Разница этих показателей с донорской группой была статистически достоверной (Р < 0,05), различия же с показателями при генерализованной форме иерсиниоза были недостоверны (Р > 0,05).Сходная клиническая картина болезни,близость Фактров патогенности Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia еп1егосо1Шса[|увалова E.n.i985;Mollaret H.H.I983J,одинаково действущих на фагоцитирувщие клетки подтверждает мнение исследователей о сходстве основных патогенетических звеньев при иерсиниозе и псевдотуберкулезе [Южук Н.Д.и соавт.1987,19883.Нормализация показателей функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных генерализованной формой псевдотуберкулеза наступала на 16-19 день болезни.У 3 больных (8,3%) на фоне выраженных дефектов фагоцитоза на 18-28 день после клинического выздоровления развился рецидив болезни с преобладанием а клинической картине поражения суставов.

У наблюдаемых 14 (13,6%) больных гастроинтестинальной формой иерсиниоза в острый период болезни (6-8день'отмечается угнетение кислородзависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови,хотя и достоверно менее выраженное,чем при генерализованной (ЛЗХЛинд-26,5 ±3,3; ЛЗХЛинд-19,5 + 6, 51-при генерализованной форме.Р < 0,05),а индекс стимуляции ЛЗХЛ и НСТ-теста не отличался от донорской группы (Р > 0,05).Уровень активности ферментов Ш10 и КФ не отличался от

показателей а больных генерализованной форммой ( Р > 0,05). В тоже время угнетение адгезии фагоцитирующих клеток наблюдалось только у 5 (33,72) больных.Следовательно,и у больных гастроинтестинальной формой иерсиниоза имеется переход функционирования нейтрофилов на более низкий уровень,и имеются дефекты связанные с выработкой ЙФК,и секреторной дегрануля-цией.Данные функциональные дефекты носят скоропреходящий характеру исчезают на 12-14 день болезни. Вместе с тем .наличие таких клинических симптомов,как быстроисчезающая экзантема.наличие увеличения печени (50.ОХ больных), сходные /с генерализованной формой/ изменениния в функциональном облике нейтрофилов говорят о возможности кратковременной оактерие-мии при гастроинтестинальной форме иерсиниоза. Это совпадает с взглядами ряда исследователей,что при любой клинической Фоме иерсиниозов имеется бактериемия в той,или иной степени выраженности 1Иаз1егз Й.Р,еЪ.а1.1968:РоЬегд lJ.et.al.19861.

Изучение функциональной активности нейтрофилов периферической крови у 11 больных (10,4%) вторично-очаговой формой иерсиниоза / 8(72,7%)- артритический вариант,3(27,3%^узловатая эритема/ выявило следующие дефекты функционирования фагоцитирующих клеток,в некоторых деталях количественно и качественно отличающиеся от дефектов фагоцитирующих клеток при генерализованной и гастроинтестинальной формах.Так количественные изменения касаются впервув очередь нарумения адгезивной способности нейтрофилов,которая наблюдается у 81,8% больных (38,4 ± 2.4%; Норма -52,08 +3,612 Р < 0,05),и снижения внеклеточной продукции АФК - у 92% больных (ЛЗХЛ инд-10,5+2,12: Норма- 41.32 + 8,8?. Р < 0,05).Качественные отличия касаются дефектов в деятельности ферментов бактери-цидности / МП0 и КФ / и внутриклеточной продукции ЙФК.Так у

больных вторично-очаговой формой иерсиниоза показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста не отличались от донорской группы (Р > 0.05).в отличие от генерализованной формы, в тохе время показатели индекса стимуляции НСТ-теста были достоверно различны ( ИС НСГ-1,28 + 0,3-при вторично-очаговой форме: ИС НСТ-1,69 ± 0.09' при генерализованной форме Р < 0.05).Наибольший интерес,на наа взгляд,представляют данные об активности миелопероксидазы,кислой фосфатазы и катионных белков.Во-первыху 63,62 больных имелось снижение как спонтанной ( Ш10сп-535,01 + 89,5; Норма-698 + 101.Р < 0,05; КОсп-125/4 + 19,6; Норма- 151,5 + 21,9. Р < 0,05).так и стимулированной активности ( МПОинд-420,5 + 94, 8;Норма- 730 + 99.1.Р < 0,05; КФинд-87,78 + 18,4; Норма131,0 + 20,1. Р < 0,05) миелопероксидазы и кислой фосфатазы.Индекс стимуляции данных ферментов такие был достоверно снивен ( Р < 0,05).Во-вторых - у 4 больных ( 36,42) несмотря на то,что показатели спонтанной активности Ш10 и КФ достоверно не отличались от нормы СР > 0,05),при стимуляции клетки не происходил адекватный синтез активных форм этих ферментов,и индекс стимуляции был снивен.Не исключено,что одним из возмов-ных дефектов фагоцитирующей клетки мовет являться не явное снижение активности того или иного фермента,участвующего в бектериальноы киллинге.а нарувение синтеза активных форм его при активации клетки.и связанная с этим функциональная недостаточность ферментативной активности.

Таким образом,у больных вторично-очаговой формой иерсиниоза происходит,возмонно в результате длительной персистен-ции иерсиний в организме,перестройка всего клеточного метаболизма фагоцитирующей клетки на другой уровень Функционирования. Это прежде всего касается деятельности ферментов бак-

терицидности.Обращает на себя внимание снивение активности НПО и КФ.и в тоже время повывение активности катионных белков ( КБ-102.5 + 8,6: Норма-85,3 + ?.З.Р < О,OSКнаблвдающе-еся у ?2.77. больных.Учитывая,что нейтрофилы периферической крови обладавт больной компенсаторной возмошностьв за счет деятельности независимых систем батерицидности.и блокада одного или нескольких звеньев этих систем не приводит к полнома выключение дефектных фагоцитирующих клеток из раооты CKlebanoff SJ.,Clark 0.19781 ],моино предположить,что повывение активности КБ в нейтрофилах у данных больных носит компенсаторный характер.Различий в показателях функциональной активности нейтрофилов при исследуемых вариантах вторично -очаговой Формы не выявлено.

Анализ деятельности функциональной активности нейтрофи-лов периферической крови у больных генерализованной и гаст-роинтестинальной формами с одной стороны,и вторично-очаговой формой с другой.выявил два разнонаправленных способа функционирования Фагоцитирувпих клеток.Если при генерализованной и гастроинтестинальной формах имеется угнетение кислородза-висимого метаболизиа при повывении активности НПО и КФ и снияений КБ,то при вторично-очаговой форме при угнетении кислородэависимого метаболизма повняается активность КБ,при снивении активности НПО и КФ.Возмо1но переход на другой уровень Функционирования связан с длительным присутствием иерсиний в организме и действием их токсических структур на метаболизм нейтрофилов.Общее для всех форм иерсиниозов.это выравенное угнетение адгезивной способности нейтрофилов периферической крови.

Практика работы показывает,что в целом ряде случаев возникают значительные трудности в дифференциальной диаг-

ностике иерсинноэов от вирусных инфекций,в частности от вирусных гепатитов.По данным литературы у 4,5-9% больных с генерализованной формой иерсинноэов заболевание протекает с желтушным синдромом [Парков И.О.1991;3убицкий П.К. и соавт.1986].Учитывая имевшиеся в литературе указания на сниженную выработку ЙФК нейтрофилами периферической крови при вирусных инфекциях [\Jerhoef З.еЬ а1.1982] мы провели сравнение кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у 30 больных острыми формами иерсиниоза(генерализованная-16(53.3%),гаст-роинтестинальная-14 С 47.7%),из них 3 больных (10%) с желтув-нын синдромом и 18 больных вирусными гепатитами (10 гепатитом "А" и 8 гепатитом "В").Диагноз вирусного гепатита подтвержден -обнаружением НВзйв.анти-НВс, анти-НШаМ,

Полученные данные показывают высокую эффективность метода ЛЗХЛ,как одного из информативных критериев при проведении дифференциальной диагностики между вирусными гепатитами и желтухой при генерализованной бактериальной инфекции /ирсиниозы/. В острый период (В-10 день болезни) показатели ЛЗХЛ были достоверно различны при вирусных гепатитах и нерсиниозах с нелтупным синдромом ( ИС ЛЗХЛ -вирусные гепа-титн-3,77+0,52; ЙС ЛЗХЛ -иерсиниозы -10,5+0,54. V < 0,001. ИС ЛЗХЛ - доноров-21,52+3,55).

ВЫВОДИ.

1.В острый период у больных с генерализованной и гастроинтестинальной сормамя иерсиниоза и псевдотуберкулеза имеется снижение функциональной активности нейтрофилов периферической крови за счет угнетения адгезии и перехода кисло-родзависийого нетаболизиа оагоцитируввих клеток на более

- 21 -

низкий уровень функционирования.

2.Активность миелопероксидазы и кислой фосфатазы у больных иерсиниозами в острый перид снижается только в 25.3 -32 7. случаев сответственно,что позволяет думать о слабо выравенной секреторной дегрануляции фагоцитируювих клеток.

3.Однонаправленные измененйя функиональной активности нейтрофилов периферической крови у больных генерализованной Формой иерсиниоза и псевдотуберкулеза свидетельствуют о наличии обеих механизмов патогенеза данных инфекционных болезней.

4.У больных с вторично-очаговой формой иерсиниозов имеются более выравенные нарушения в функциональной активности нейтрофилов периферической крови,чем при генерализованной и гастроинтестинальной,которые связаны не только с нарунением адгезии и кислородзависимого метаболизма,но и с снивением активности ферментов бактерицидности / миелопероксидаза и кислая фосфатаза /.

5.Нормализация показателей функциональной активности нейтрофилов периферической крови при генерализованной форме иерсиниозов наступает на 22-24 день болезни,при гастроинтестинальной на 12-14 день.Длительное снивение данных показателей при отрицательной тенденции к нормализации в динамике заболевания характерно для Формирования вторично-очаговых форм,

6.Тест лпминолзависииой хемилвминесценции в комплексе с другими клинико-лабораторными данными достаточно информативен в дифференциальной диагностики вирусного гепатита "й'и "В" и иерсиниозах с 1елту»ным синдромом.

- 22 -

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1.Исследование функциональной активности нейтрофилов периферической крови мовет быть использовано для прогнозирования течения патологического процесса при иерсиниозах.Длительной снижение показателей функциональной активности характерно для рецидивов заболевания и формирования вторично-очаговых форм.

2.Показатели кислородзависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови / НСТ-тест и лвиинолзависимая хеыилвми-несценция / могут быть использованы в качестве дополнительного критерия при проведении дифференциальной диагностики между вирусными гепатитами и иерсиниозами с желтуоным синдромом в трудных для диагностики случаях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1.Кузнецов В.Ф.,Никулин В.Н. Прогностическое значение некоторых иммунологических показателей при иерсиниозах // Тез. докл. III Всеросс. сьезда инфекционистов " Синдром интоксикации в инфекционной патологии ".- М., 1989.-С.420-421.

2. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных вирусными гепатитами /В.Н.Никулин,Л.Г.Ков-денко, В.Ф.Кузнецов,И.В.Вестакова // Тез. докл. 2-ой межреспубликанской конференции " Актуальные проблемы инфекционной патологии,клинической иммунологии и медицинской генетики." И.-Луганск.1990.-С.2Р-28.

3.Кузнецов В.Ф..Никулин В.Н.,Бутаков A.A. Хемилвми-несценция а больных острыми бактериальными и вирусными ин-

фекциями.// Тез. докл. научно-практич. конф. " Актуальные вопросы кивечннх инфекций." Тавкент, 1990.- С. 114-115.

4.Клинико-диагностические особенности вспывки иерсинио-за / В.Ф.Кузнецов .В.Н.Никулин.Д.А.Валивин .В.Т.Абубакиров // Тез. докл. в сборнике " Острые кивечные инфекции и инвазии человека".- Кемерово, 1990.- С.70-72.

5.Бурая Т.Л..Бутаков A.fl..Никулин В.Н. Применение теста восстановления нитросинего тетразолия для иммунологического скрининга. // Тез.докл. UI Всеросс. сьезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов.- П..1991.-Т '¿.- С.21 У—218.

6. Изменение активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах периферической крови человека при стимуляции клеток In vitro / Т.Л.Бурая ,А.й.Бутаков,

B.А.Дровенников.В.Н.Никулин и др. // Еурн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1991.-N 10.- С. 52-55.

7.Никулин В.Н..Бурая Т.Л.,Бутаков ft.А, Изменение количества катионных белков в фагоцитирующих клетках при различных патологиях. /f Тез. докл. 1-ой научно-практич. конф. " Многопрофильная больница-сегодня и завтра ".-П.. 1991.-

C.158-160.

8.Показатели кислородэависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови для дифференциальной диагностики бактериальной и вирусной инфекции / Н.Д.Ввук,В.Ф.Кузнецов,В.м.Никулин и др. // Советская медицина.- 1991.- N 12.- С.37-39.

9.Функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных острой бактериальной и вирусной инфекцией / Н.Д.Ювук.В.Ф.Кузнецов,В.Н.Никулин и др. // Тез.докл. научно-практич. конф. инфекционистов Азербайдаана. баку, 1391.-С.15-17.

- 24 -

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ,УПОТРЕБЛЯЕМЫХ В ТЕКСТЕ

ЙФК - активные формы кислорода

ис - индекс стимуляции

инд - индуцированный / стимулированный / тест

КФ - кислая фосфатаза

КБ - катионные белки

ЛЗХЛ - лвминолзависимая хемилвминесценция

НПО - миелопероксидаза

мв - милливольт

НСТ-тест - реакция восстановления нитросинего тетразолия

сп - спонтанный тест

РВЭ - фосфат-цитратннй буфер