Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Функциональная активность фагоцитов у больных с инфекцией вызванной вирусом простого герпеса

На правах рукописи

Г" Г41 Г~1

□□ЗОВЭЭ17

ХИТРИК НАДЕЖДА МАРКОВ1

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ С ИНФЕКЦИЕЙ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ ПРОСТОГО ГЕРПЕСА.

14 00 36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА, 2007 г

003069917

Работа выполнена в ФГУ «Наушо-исследовательский институт физико-химической медицины Росздрава» (директор - академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор В И Сергиенко)

Научный руководитель

Доктор медицинских наук, профессор

Дидковский Николай Антонович

Официальные оппоненты

Доктор биологических паук, профессор

Захарова Людмила Алексеевна

Доктор медицинских наук, профессор

Кашожин Олег Витальевич

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение Московский Государственный медико-стомагологический Университет Росздрава

Защита диссертации состоится «_» мая 2007 года

В_часов на заседании диссертационного совета Д 208 057 02 при

ФГУ «НИИ физико-химической медицины Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 119992, Москва, ул М Пироговская, 1А

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ФГУ «НИИ физико-химической медицины Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Реферат разослан «_»_апреля_2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Л Л Васильева

Акгуалытость темы

В настоящее время наблюдается тенденция к широкому распространению различных заболеваний, вызванных герпес - вирусами Рецидивирующие герпетические инфекции наблюдаются у 9-15% жителей разных стран (Drake AL,et al, 2007 Xu F, Sternberg MR, et al, 2006, Bunzli D, et al, 2004, Tran, T et al ,2004 ) Эти инфекции, передаваемые воздушно-капельным путем, через предметы обихода, половым путем, а также от матери к ребенку (во время родов) и тд, называют "инфекциями цивилизации" По данным ВОЗ, заболевания передаваемые вирусами герпеса занимают 2-е место (15,8%) после гриппа (35,8%), как причина тяжелых осложнений от вирусных инфекций На территории России и в странах СНГ от хронической герпетической инфекции страдает более 25 миллионов человек. Число лиц, вновь инфицированных генитальным герпесом, ежегодно в РФ возрастает более чем на 10% (Мокеева МБ , 2006 )

Клинически герпесвирусная инфекция, вызванная вирусами простого герпеса (ВПГ1,2) проявляется в виде поражения кожи, полости рта, глаз (Bauer D, et al, 2001), гениталыюго тракта и генерализованного i ерпеса новорожденных (Xu F, Markowitz LE, et al, 2007) Доказано, что у больных с хроническими герпетическими инфекциями значительно чаще развиваются онкологические заболевания (Гребешок ВН и соавт, 1981), аутоиммунные заболеващм, бесплодие, патология плода (Рахманова А Г, и соавт, 2001) Вирусы герпеса индуцируют процессы атеросклероза, влияют на процесс психического развития человека, могут вызывать патологию нервных клеток (Деконенко Е П, 2002, Livicova НЕ et al ,1985) Патогенез герпетической инфекции является иммуноопосредованным (Verjans GM, et al 2007, Kuok WW et al, 2000, Кунгуров IIВ, и соавт , 2001 ) Хроническая герпесвирусная инфекция, представляет собой трудную проблему, все еще далекую от своего решения Это объясняется широкой распространенностью заболевания, недостаточной эффективностью, длительностью и дороговизнои существующих методов лечения Установлено что около 90% городского населения во всех странах мира, инфицировано одним или несколькими серовариантами герпесвирусов Причем антитела к ВПГ-1 выявляются у 99%, а к ВПГ-2 у 73% населения (Devillechabrolle A et al , 1985 , Ross JD ct al ,1993 ) Клинические проявления имеют 10-25%

инфицированных, а рецидивирующими формами страдают от 2 до 12% (Козлова В И, и соавт, 1995 , Масюкова CA, и соавт, 2000 )

В научной литературе имеется ряд работ, посвященных исследованию состояния клеточного и гуморального звена иммунитета у больных ВПГ-иифекциеи (Rouse ВТ, et al, 2006, Robertson SJ, et al ,2006, Sarnz В Jr, et al, 2002) Однако недостаточно работ с анализом состояния иммунной системы у больных ВПГ инфекцией с частыми рецидивами (более 7 раз в год) Крайне мало работ, посвященных комплексной оценке функциопальпой активности нейтрофичов при этих инфекциях В экспериментах на животных была показана важная роль нейтрофилов периферической крови в прогивовирусной защите (Araki-Sasaki К, et al, 2006, Yan XT, et al, 1998) Комплексное изучение функциональной активности нейтрофилов у больных ВПГ, имеет значение для выяснения роли этих нарушений в патогенезе заболевания Кроме того, полученные результаты, могут быть использованы для повышения эффективности терапии таких больпых На данный момент, в лечение ВПГ используются много иммулотропных препаратов, однако их назпаченне, как правило, эмпирическое и часто недостаточно эффективно Практически нет работ по изучению методов подбора препаратов и прогнозированию их воздействия на систему нейтрофилов

Таким образом, изучение функционального состояния и особенностей патологии нейтрофилов, у больных, страдающих герпетической инфекцией, вызванной вирусом простого герпеса 1 и 2 типов тяжелого течения (ГИ ВПГ1,2), а также разработка тестов индивидуального подбора иммуномодуляторов in vitro, представляет значительный научный и практический интерес

Медико-биологическая и социальная значимость проблемы герпетической инфекции, недостаточная изученность мпогих вопросов патогепеза, необходимость повышения эффективности лечения, послужили основанием дай проведения данной работы

Цель исследоваппя

Изучить состояние основных функций нейтрофилов и особенности их нарушения у больных, страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелою течения, и оценить влияние иммуномодулятора и

индуктора синтеза интерферона - циклоферон в тесте in vitro, и после курса терапии, для возможного применения с целью коррекции дисфункций нейтрофилов у данной категории больных

Задачи исследования-

1 Изучить кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения по уровню активных форм кислорода в НСТ-тесте

2 Изучить состояние активности миелопероксидазы нейтрофилов у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа при тяжелом течении заболевания

3 Изучить состояние кислороднезависимой бактерицидности нейтрофилов у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, путем оценки уровня катионных белков

4 Изучить фагоцитарную и переваривающую способность нейтрофилов у больных, страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1и 2 типа тяжелого течения

5 Оценить влияние курсового лечения циклофероном на состояние функциональной активности нейтрофилов у больных, с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения

Научная повизпа

Впервые было проведено комплексное исследование бактерицидной функции нейтрофилов, выявлены нарушения их функциональной активности у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения Показано модулирующее действие курса терапии препаратом циклоферон на измененные показатели функциональной активности нейтрофилов

Практическая значимость

Выявлены значительные нарушения функциональной активности нейтрофилов у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения В процессе работы была показана

5

возможность и целесообразность коррекции выявленных нарушений функции нейтрофилов препаратом циклоферон

Внедрение результатов исследования в практику.

Результаты исследования используются в повседневной работе в Городской клинической больнице №7 г Москвы

Структура и объем рабо ты.

Диссертация изложена на 132 страницах, иллюстрирована 40 таблицами и 23 рисунками Диссертация состоит из введения и глав обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследовании, обсуждение и результаты, выводы Библиографический указатель включает 126 источников

Апробация работы

Диссертация апробирована на межкафедральной и межлабораторной научной конференции лаборатории клинической иммунологии ФГУ НИИ ФХМ Росздрава и кафедры клинической иммунологии ФППО ММА им И М Сеченова Материалы диссертации были представ чены

• На П всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергологии (Москва, 14-17 мая2004г)

• На II международной научной конференции «Современные аспекты реабилитации в медицине» ( Ереван, 2005г)

• На итоговой научной конференции 2005 года в ФГУ «НИИ ФХМ Росздрава»

Осповпые положения выпоснмые па защиту: 1 В большинстве случаев у больных страдающих инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, выявлены нарушепия в кислородзависпмой и кислороднезависимой бактерицидных системах нейтрофилов

2 Установлено существенное снижение поглотительной и переваривающей способности нейтрофилов, у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа

3 Курсовое применение индуктора синтеза интерферона препарата циклоферон оказывает нормализующее влияние на функциональнцю активность нейтрофилов

Публикации

По теме диссертации опубликованы 11 печатных работ 2 статьи в центральной печати и 9 тезисов

Статистическая обработка данных

Данные, полученные в результате исследования, были статистически обработаны общепринятыми методами на ПК с использованием стандартных программ «Statgraphics for Windows 2000», «Microsoft Exel» В качестве статистических тестов использовали

- t-критерий Стьюдента для нормального распределения коэффициент корреляции Пирсона

- критерий Вилкосона-Мана-Уитни, для небольших групп Критическим уровнем значимости при проверке статистических гипотез

считали р<0,05

Содержание работы

Общая характеристика собственных наблюдений и методов исследования

Проведено проспективное открытое исследование В исследование включались больные с установленным диагнозом герпетическая инфекция, вызванная вирусами простого герпеса 1 и 2 типов тяжелого течения

Обследовали 65 больных (27 мужчин, 38 женщин), страдающих герпетической инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа (ГИ

ВПГ1,2) тяжелого течения с частотой от 6 до 20 рецидивов в год (не менее 2-х лет) Критериями включения пациентов в исследование являлось

• наличие клинических проявлений ГИ ВПГ1,2 типа поражения кожи, полости рта, слизистой носа, глаз, уро-генитального тракта,

• длительность течения заболевания ГИ ВПГ1 р. типа не менее 2 лег,

• возраст от 18 до 65 лег,

• отсутствие тяжелых сопутствующих заболеваний и других состояний изменяющих параметры иммунного статуса

• количество рецидивов не менее б в год Характеристика больных представлена в таблице 1

Таблица 1

Характеристика обследованных больных с диагнозом хроническая ВПГ инфекция

первого и второго типа и пациентов контрольной группы

Основная группа (65 чел) Контрольная группа (60 чел)

Возраст 35 ±1,5 лет 32 + 1,6 лет

Мужчины 27 чел 27 чел

Женщины 38 чел 33 чел

Длительность заболевания 8,5+0,42 лет пет

Частота рецидивов ВПГ в год

6-8 реп/год 20 чел нет

9-11 рец/год 20 чел нет

12 и более рец/год 25 чел пег

Локализация ВПГ высыпаний

Лабиальный герпес 18 чет нет

Генитальпый герпес 24 чел нет

Сочетанный (гепитальньш и лабиальный) герпес 23 чел нет

Дизайн исследования

Больным, которые соответствовали критериям включения, исходно было проведено исследование функциональной активности нейтрофнлов (НФ) (спонтаппой активности и проба с препаратом цшслоферон in vitro) После курсового лечения циклофероном (циклоферон принимали в таблетированной

форме в дозе 5 мг/кг один раз в 3 дня, всего 10 приемов) проводили повторное обследование

Очевидно, что адгезивная способность фагоцитирующих клеток у людей индивидуальна Соответственно, полученные величины оптической плотности в НСТ-тесте, при тестировании активности миелопероксидазы и количество катиопных белков зависят не только от функционального состояния клеток, но и от их количества прилипших к пластику Для стандартизации полученных в тестах показателей и сравнения полученных результатов у разных людей, проводили перерасчет показателей на 100 тысяч клеток

Методы оценки функциональной активности нейтрофплов-

• Определение количества адгезированых клеток

Для каждого больного определяли количество адгезированных в лунке клеток Для этого в лунку плоскодонного планшета вносили 50 мкл цельной крови, кровь инкубировали в течение 60 мин при 1=37 и непрерывном встряхивании (условия инкубации как при определении НСТ, МПО и КБ) далее пробу отмывали, прилипшие клетки «отщепляли» раствором уксусной кислоты и подсчитывали в камере Горяева Проводили перерасчет показателей на 100 тысяч клеток - величина оптической плотности умножается па 100 тысяч клеток и делится на количество адгезированных клеток

уел ед = оптич плотн х 100 000

количество адгезированных клеток в лунке

Полученный результат использовался при обработке результатов данного исследования

• Определение восстановления нитросинего тетразолия фагоцитирующими клетками спеюпрофотометрически (НСТ-тест) Тест отражает суммарную продукцию активных форм кислорода нейтрофилами В основе метода лежит способность восстановления поглощенного фагоцитом красителя нитросинего тетразолия в нерастворимый диформазан под влиянием активных форм кислорода Измерения проводили в цельной крови В

9

плоскодонные планшеты вносили 50 мкл цечьной крови и 20 мкл раствора НСТ па лунку и инкубировали 60 мин при 37°С с 20 мкл. st aureus для определения индуцированной продукции кислородных радикалов или 20 мкл PBS, для определения спонтанной продукции После клетки троекратно отмывали и фиксировали 96% этиловым спиртом, ЮОмкл на луку, в течение 30 мин остатки спирта удаляли декантированием, плашпет высушивали Растворяли осадок в 250 мкл ДМ СО Оптическую плотность измеряли при Я,=450им

Индекс стимуляции рассчитывали как отношение индуцированной активности к спонтанной Для индукции использовали культуру st aureus (в концентрации 1 млн /мл, убитых автоклавироваиием) (Модификация метода Р М Хаитов 1995г )

• Определение активности Миелопероксидазы (МПО) спектрофотометрически. Тест позволяет судить о кислородзависимой бактерицидной активности фагоцитов, изменение активности миелопероксидазы при стимуляции клеток косвенно свидетельствует о способности клеток к дегрануляции и возможностям компенсировать потери фермента за счет его внутриклеточного новообразования Измерения проводили в цельной крови В плоскодонные планшеты вносили 50 мкл цельной крови на лунку и инкубировали 60 мин при 37°С с 20 мкл st aureus для определения индуцированной продукции миелопероксидазы или 20 мкл PBS, для определения спонташюй активности После клетки троекратно отмывали, в лунку вносили 100 мкл субстратной смеси, состоящей из 0,04% ортофенилендиамина и 0,014 Н2Ог на фосфатноцитратном буфере Реакция останавливалась добавлением ЮОмкл 10% H2SO4 Интенсивность оптической плотности фиксировали в многоканальном спектрофотометре При длине волны Х=492нм Индекс стимуляции рассчитывается как отношение индуцированной активности к спонтапной Для индукции использовали культуру st aureus (в концентрации 1 млн /мл. убитых автоклавироваиием) (Модификация методов Р Мбайтов 1995г )

• Определение количества неферментативнъгх катионных белков (КБ) спектрофотометрически КБ характеризуют кислороднезависимую бактерицидную систему нейтрофилов, способность к внутриклеточному и экстрацеллюлярному Киллингу Измерения проводили в цельной крови Для определения количества катионных белков использовали 96-луночиые

плоскодонные планшеты 50 мкл цельной крови инкубировали 60 мин при 37°С с 20 мкл st aureus для определения индуцированнои продукции катионных белков или 20 мкл ФБС для определения спонтанной активности После клетки троекратно отмывали и фиксировали 96% этиловым спиртом, ЮОмкл на луку, 30 мин остатки спирта удаляли декантированием, планшет высушивали Клетки окрашивали зеленым прочным - ЮОмкл на лунку 30 мин t 37°С Краску удаляли, клетки троекратно отмывали PBS Далее растворяли в 200 мкл ДМСО Оптическую плотность измеряли при Х=540нм

Для индукции использовали культуру st aureus (в концентрации 1 млн /мл, убитых автоклавированием) (Модификация метода Р M Хаитов 1995г )

• Определение фагоцитарной активности нейтрофилов Для изучения поглощения использовали культуру st aureus (в концентрации 1 млн /мл, убитых автоклавированием), подсчет фагоцитирующих клеток и поглощенных частиц осуществлялся с помощью светового микроскопа

• Пробы с циклофероном m vitro, проводили с часовой инкубацией цельной крови с препаратом, в концентрации 0,05мг/мл

Результаты исследования и их обсуждение

Состояние функциональной активности НФ у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа

Обследованные бочьные были разделены на группы в зависимости от исходного значения спонт НСТ-теста (низкие, нормальные и высокие) Результаты представлены в табтице 2

У 31 чел (47,7%) больных с тяжелым ГИ ВПГ1,2, показатели спонтанного IICT-теста были выше нормы и составили в среднем 144 0±4 85 услед, что достоверно (р<0,01) отчичается от группы контроля - 88.22±5,23усл ед Оказалось что, в группе с высокими показателями спонт НСТ-теста у 25 человек (80,6%) больпых Индекс Стимуляции (ИС) был значительно ниже нормы

Таблица 2

Средние значения НСТ-теста и ИС у больных с тяжелым течением инфекции, вызвашюй вирусами простого герпеса 1 и 2 типа с различным уровнем спонтанного ИСТ теста (п=65) и в контрольной группе

Подгруппы Количество человек Спопт HCT Услед Стим HCT Услед ИСНСТ

Контрольная группа 60 чел 88,2215,23 146,3719,50 1,6510,15

Б-е с уровнем спонт HCT менее 70 уел ед 21 чел (32,3%) 48,0013,31** 47,5315,70** 0,9910,10*

Б-е с уровнем спонт HCT 70-110услед 13 чел (20%) 93,3014,20 91,5615,60* 0,9810,10*

Б-е с уровнем спонт HCT более 110 уел ед 31 чел (47,7%) 144,00+4,85** 137,00110,30 0,9510,05*

* P <0,05, достоверность отличий от показателя контрольной группы

** р <0,01, достоверность отличий от показателя контрольной группы

Нормальные показатели спонт НСТ-теста выявлены у 13 (20%) больных с тяжелым течением инфекции вызванной ВПП ,2типа, в среднем составил 93,3±4,2 услед, индуцированный - 91,56+5,6 услед, ИС - 0,9810,10, что говорит о наличии гипореактивности пейтрофилов к синтезу активных форм кислорода (АФК) в ответ па стимуляцию Staph aureus

Сниженные показатели спонтанного НСТ-теста (в среднем - 48,0+33 Усл ед ) наблюдались у 21чел (32,3%), индекс стимуляции у них составил 0,99±0,10, а индуцировашгыи показатель - 47,53±5,7усл ед В группе с низкими показателями НСТ-теста у 15 чел (71,4%) выявлен низкий ответ на стимуляцию Staph aureus Это может свидетельствовать о выраженном снижении способности к синтезу АФК у больных этой группы

Среди обследованных пациентов (п=65) низкий ИС в НСТ-тесте был выявлен у 47 больных (72,3%) и в среднем составил 0,67+0,03 Это означает, что у больных ГИ В1ТГ1,2-типа, тяжелого течения в ответ на стимуляцию Staph aureus продукция АФК пе возрастает, а существенно угнетается У 27,7% - 18 человек

выявлен адекватный ответ НФ на стимуляцию (ИС у пих в среднем был 1,64±0,05 при показателе в группе контроля -1,65+0,15)

• Таким образом, у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, количество АФК снижено в 32,3% случаев или находится в пределах нормы практически здоровых людей у 20% больных, несмотря на наличие активной вирусной инфекции Низкий индекс стимуляции выявлен у 72,3%, что свидетельствует о гипореактивности и снижении кислородзависимой бактерицидной функции нейтрофилов

При исследовании миелопероксидазной системы были получены следующее данные (таблица 3) Среднее значение спонт МПО у обследованных больных составляло 554,53+23,26 уел ед Больные были разделены на группы по уровню спонт активности МПО (низкий, нормальный, высокий уровень)

Таблица 3

Средние значения стимулированной активности миелопероксидазы и ИС МПО у больных с герпетической инфекцией, вызванной ВПГ1,2-типа тяжелого течения с различной спонтанной активностью МПО (п=65)

Кол-во человек Спонт МПО Уел ед Стим МПО Уел ед ИСМПО

Контрольная группа 60 чел 509,2+12,40 843,06+24,85 1,66+0,08

Б-е с уровнем активности спонт МПО до 500 уел ед 32чел 493% 322,17± 14,80 ** 508,67 +9,25 #* 1,58 ±0,16

Б-е с уровнем активности спонт МПО 500-700 уел ед 19чел 29.2% 583,63±14,41 * 833,25±40,05 1,43 ±0,08

Б-е с уровнем активности спонт МПО более 700 уел ед 14чел 21,5% 969,17 ±18,9 *» 755,75 ±49,56 0,78 +0,08 **

* р <0,05, достоверность отличий от показателя контрольной группы ** р <0,01, достоверность отличий от показателя контрольной группы

У больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 тина у 46 человек (70,7%), были выявлены достоверные отличия от показателя спонт МПО группы здоровых лиц Так, у 32 чел (49,3%) определялось резкое снижение активности спопт МПО (в среднем 322,17 ±14,80 услед, при показателе группы здоровых лиц 509,2±12,40 уел ед, р< 0,01), а у 14 чел (21,5%) -существенное повышение активности спонт МПО (среднее значепие 969,17 ±18,90 услед, р<0,01) У 19 больных (29,2%) значение активности спопт МПО находилось в пределах нормы (500-700 уел ед) В норме активность МПО после индукции Staph aureus повышается по отношению к исходному уровню в 1,3-1,8 раза Однако, как показали полученные нами данные, у 14 больных (21,5%), с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, стимуляция НФ стафилококками приводила не к повышению, а существенному снижению активности МПО, что отражалось в крайне низком ИС МПО (в среднем 0,59±0,02, при показателе кот рольной группы 1,66 + 0,08, р< 0,01) У 22 больных (33,8%) ИС МПО находился в пределах от 0,9 до 1,2 (среднее значите 1,08 ±0,02), что свидетельствует о слабом ответе НФ на дополнительные стимулы (явление гипореактивности) Более чем у половины больных (56,9% - 37 чел) было выявлено снижение стимулированной активности МПО У 18 из 65 больных (27,7%) ИС МПО находился в пределах нормы и составил в среднем 1,51+0,03, у 10 чел. (15,4%) был повышен до 2,90+0,21, р < 0,01

• Таким образом, у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, наблюдается гипореактивность миелопероксидазной системы снижение в 49,3% случаев и показатели соответствующие норме у 29,2% больных. Несмотря на паличие активной герпетической инфекции лишь у 21,5% бочьных повышенная активность МПО Причем у больных с высокой активностью МПО ИС как правило меньше 1,0 Состояние кислороднезависимой бактерицидности у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной ВПГ 1 и 2 типа исследовали по уровню катионных белков (КБ) При анализе данных (таблица 4) больные были разделит на группы в зависимости от спонтанного уровня КБ (низкий, нормальный и высокий)

Таблица 4

Показатели Катионных Белков у больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, тяжелого течения п=65

Группа КБ спонт Уелед КБиндуцир Уел ед Индекс Стимуляции

Контрольная группа (п=60) 85,5123 90Д5±4,81 1,2+0,05

Больные с уровнем КБ до 75 уелед (п=33 50,8%) 51,58±2,62* 39,17+2,78* •** 0,76±0,06*

Больные с уровнем КБ 75-98 уел ед (п=20 30,7%) 81,64+1,15 61,64+4,7* " 0,75+0,06*

Больные с уровнем КБ более 98 уел ед (п=12 18,5%) 115,0+3,5* 83,0±4,4" 0,72±0,04*

* - достоверность отличий от показателей контроля, р<0,05

достоверность отличий от спонтанного показателя КБ, р<0,01 Выявлено, что 33 чел - 50,8% обследованных больных имеют низкий уровень КБ (51,58+2,62 уелед), что свидетельствует о снижении кислороднезависимой бактерицидности ИС в этой группе низкий и составляет 0,75+0,06

Среди обследованных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, 30,7% - 20 больных с неизмененным уровнем КБ (81,64±1,15 уелед), у которых так же отсутствуют резервные возможности увеличения КБ (ИС в среднем 0,75+0,06)

У 12 чел (18,5%) выявлено повышение КБ (115,0±3,5 уелед) Индекс стимуляции в этой группе также низкий (0,72+0,04), что свидетельствует об истощении резервных механизмов

При оценке Индекса Стимуляции у 50 чел (76,9%) обследованных больных наблюдалось резкое снижение КБ в ответ на стимуляцию бактериальными агентами У 15,4% (Ючел) обследованных ИС КБ находился в пределах от 0,9 до 1,1 (среднее значение 0,96±0,02) что свидетельствует об отсутствии адекватного ответа НФ на стимуляцию бактериальными агентами (явление гипореактивности)

Т.е. 92,3''» (60 чел) больных с тяжелым течением инфекции, вызванной ВПГ1Д типа имеет низкие показатели ИС КБ (р <0.01).

» Таким образом, снижение уровня катионных белков наблюдается у 50,8% больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 тина. Причем, низкий и пшорешаивныЙ ИС выявлен у 92,3% обследованных, что свидетельствует об истощен ни кислороднезависимых бактерицидных механизмов НФ.

Для оценки фагоцитарной функции НФ определяли фагоцитарное число и фагоцитарный индекс на 30 и 60 минуте.

Рисунок 1.

Среднее количество микробощадных тел поглощенных нвйтрофилом у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа к 30 минуте инкубации (п -65).

7,70%

О фагоцитарный индекс менее 4 И фагоцитарный индекс а-7 □ фагоцитарный индекс более 7

При рассмотрении ФИ 30' получили следующее распределение поглотительной способности НФ у больных ВПГ1,2-инфекцией тяжелого течения (рисунок 1, таблица 5).

У 60% - 39 больных НФ поглощают менее 4 микробоцидных частиц, в среднем 2,87+0,09, что значительно ниже нормы, р<0,01 32,3% - 21 больной В1ТГ1,2 инфекцией тяжелого течения имеют ФИ 30' равный 5,22±0,17 И 7,7% - 5 больных имеют ФИ 30' 7,37±0,19, что незначительно превышает верхнюю грапицу нормы р<0,01

Переваривающую способность НФ оценивали на 60 минуте Фагоцитарное число у большинства больных к 60 минуте достоверно возрастало (в среднем по груше с 43,87+1,96% до 50,96+1,83%, р<0,05)

При рассмотрении ФИ мы разделили больных в зависимости от величины ФИ на 30 минуте (менее 4,4-7, более7) таблица 5

Таблица 5.

Распределение показателей фагоцитарной функции нейтрофилов у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа в зависимости от количества поглощенных микробоцидных тел к 30 минуте (п=65)

Чел/% ФЧЗО' % ФИ 30' ед/пф ФЧ60' % ФИ 60' ед/пф ИЗ

Контропьная группа 11=60 п=60 74,26±1,4 5,62±0,22 37,5±0,87 2,35+0,06 2,4+0,09

ФИ 30' менее 4 п=38 58,5% 35,78+1,96 ** 2,87+0,09 ** 45,96+2,01 * ** 3,4±0,14 * ** 0,89±0,04 **

ФИ 30' 4-7 11=22 33,8% 54,38+3,22 ** 5,22+0,17 54,94±2,63 ** 4,16±0,21 * ** 1,33±0,06 **

ФИ 30' более 7 п=5 7,7% 56,5±2,24 ** 7,37±0,19 ** 67,05±3,92 ** 6,28±0,14 # ** 1,19+0,05 **

* - достоверность отличий от показателя на 30 минуте в этой подгруппе р <0,05

**- достоверность отличии от показателей контрольной группы, р <0,01

Во всех группах наблюдается достоверное (р<0,05) изменение ФИ к 60 минуте Так же во всех группах наблюдалось снижение переваривающей фупкции нейтрофилов ИЗ достоверно отличался от ИЗ группы контроля (р <0,01)

Индекс Завершенности фагоцитоза рассчитывали как ФИ ЗО'/ФИ 60' В норме он более 2 Несмотря на наличие переваривающей способности НФ у 33,8%

(22 чел) больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1и2 типа, завершенного фагоцитоза практически не происходит • Таким образом, у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, наблюдается снижение фагоцитарной функции нейтрофилов, как поглотительной (у 58,5% обследованных), так и переваривающей (снижение индекса завершенности фагоцитоза у большинства больных)

Действие препарата циклоферон на показатели функциональной активности НФ.

В последние годы серьезной проблемой для практического здравоохранения стало увеличение рецидивирующих тяжелых форм инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, и появление резистентности к специфической терапии аномальными нуклеотидами

Препарат циклоферон - низкомолекулярный индуктор выработки эндогенных интерферонов НФ и макрофаги являются одними из клеток мишеней для данного препарата Препарат рекомендован Росздравом для терапии инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа

Мы провели исследование влияния терапии циклофероном (циклоферон принимали в таблетированной форме в дозе 5 мг/кг один раз в 3 дня, всего 10 приемов) на показатели бактерицидности НФ у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной ВПГ-1,2 типа Результаты НСТ-теста полученные при обследовании больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения представлены на рисунке 2

В группе с исходно низкими значениями спонт НСТ-теста (14 чел, 38,9%), в тесте in vitro циклоферон оказывал достоверное стимулирующее действие р<0,05 (с 41,88±6,5 услед до 60,6+12,45 услед,), после проведения курса терапии циклофероном показатель так же достоверно увеличивался (102,13+9,2 уел ед) р<0,01 В повторной пробе с циклофероном после курса лечения продукция АФК была в 2 раза выше исходных показателей (81,2915,84 уел ед)

Рисунок 2.

Показатели НСТ-теста спонтанного и индуцированаога циклоферонсм до и после терапии двгкпофершом у больных с тяжелым Течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа. (¡1=36)

*- достоверность отличий показателей до й после терапии от слонт НСТ-теста до лечения, р<0,05

В труппе с нормальными нскодныш значениями НСТ-теста (6 чел, 16,7%) ЭТИ значения в пробе jn vitro до лечения и курса терапии Цйклофероном оставались $ пределах нормы (соеяяегетвеязо 68,0+3,64 усдед ;] 10,0+¡3^6 усл. сд.; p<O,0J) см. рис.2. Проба с цйклофероном in vitro после лечения давала достоверный рост показателя (! 67рЗ±11,2 усл.ед). Это свидетельствует о возможности гиперактивации синтеза АФК при продолжении данной терапии.

В группе с исходно высокими показателями НСТ-теста (16 чел., 44,4%) под влиянием препарата in vitro наблюдалось незначительное снижение показателя (!34,14±7,48 усл.ед)., а после курса терапии спонт. НСТ достоверно снизился и находился в пределах нормы (100,62+6,18 усл.ед). Повторная Проба с никлоферопом показала некоторое повышение АФК (119,0±10,25 усл.ед).

• Таким образом, лечение циклофероном у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа приводит к нормализации показателей НСТ-теста и практически не влияет на исходно нормальные его значения У большинства больных после терапии сохраняется ответ па стимуляцию циклофероном в тесте m vitro

Влияние курса терапии циклофероном па активность миелопероксидазы у больных с тяжечым течением инфекции, вызванной ВПГ 1 и 2 типа, представлено на рисунке 3

В группе с исходно низким показателем МПО (п=17, 295,0±16,9 услед) циклоферон достоверно увеличивает активность МПО in vitro (383,4+15,98 уел ед р<0,05), после проведения терапии показатель становится достоверно выше исхода (661,15+5036 услед) Проба с циклофероном после курса терапии, снижает уровень МПО (440,22i26,27ycn ед), что может свидетельствовать о неадекватном ответе НФ при продолжении терапии

В группе с показателем МПО в пределах нормы (п=10, 570,83±46,49усл ед) в тесте m vitro циклоферон не оказывал достоверного влияния (581,11±56,46 уел ед) После курса терапии уровень спонт МПО достоверно увеличился (в среднем до 836,33±78,48усл ед), а реакция на циклоферон в тесте in vitro достоверно не отличалась от таковой до лечения(573,67+48,43 уел ед)

В группе с высокими значениями активности МПО (п=9, 978,88+58,17 уел ед) в пробе с циклофероном in vitro получено достоверное снижение показателя (429,17±23,87 услед) и после терапии показатель так же достоверно снижался р<0,01, по сравнению с исходом (552,63±49,07 услед) Проба с циклофероном после терапии оставалась в пределах нормы

Корреляционный анализ выявил достоверную корреляцию активности МПО в пробе in vitro с циюгофероном до лечения с показателем спонт МПО после курса терапии циклофероном (г=0,76)

Рисуй ок 3.

Показатели активности МПО спонтанной и индуцированной циклофероном у больных с тяжелым течением инфекции, вызнанной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, до и после терапии цикяофершом (п=36).

О споит. МПО до лечения □ МГТО икдуц. ЦФ до лечения

И споит. МПО после лечения □ МПО инДуц. ЦФ после печения

*-достоверность отличий показателей МПО до и после терапии от споит. Ml Ю до лечения, рй0,05.

• Таким образом, определение активности МПО in vitro при инкубации с циклофороном, может быть использовано в качестве прогностического критерия влияния курсового лечения циклофервдом на активность этого фермента.

При исследовании уровня КБ у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, после курса терапии циклофероном получены следующие данные (рисунок 4).

В группе с исходно низкими катионными белками (п=18 человек -50% 54,91+3 Л X усп.ед) достоверного ответа на препарат б пробе in vitro до лечения ire

21

выявлено (52,0±7,74 усл.сд), однако после курса терапии циклофероном наблюдается достоверный рост показателя (80,00+3,76 усл.ед).

Рису ник 4.

Влияние терапии циклофероном на показатель катионпых белков, у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, с исходно низкими, нормальными и высокими значениями КБ (п=36).

1 оо J——.——-—-—----—- .---------I

до 75 усл.ед 75-93 усл.ед болееЭВ усл.ед

□ споит КБ до лечения о КБ индуц. ЦФ до лечения

Ш споит К& после лечения о КБ индуц ЦО после лечения

""-достоверность отличий показателей до и после лечения от спонт КБ до лечения, р£0,05.

Группа больных с тяжелым течением инфекции, вызванной ВПГ1,2 типа, с нормальными показателями КБ (n=l 1 человек - 30,5%; 85,33 ±3,8 У усл.ед), не давала достоверных изменений как на пробу с препаратом in vitro (8235±6,18 усл.ед), так и на курс лечения циклофероном (83.5+11,84 усл.ед).

В группе с высоким исходным значением КБ (п= 7 чел- 19,5% ; 111,17±3,89 усл.ед) п пробе in vitro до лечения нет достоверных изменений (78,17±8,3 усл.ед). После курса терапии циклофероном наблюдается достоверное снижение показателя КБ (64,5±8,84 усл.сд).

После лечения циклофероном индекс стимуляции КБ достоверно возрастает в группах с низкими и высокими значениями исходных показателей КБ.

22

• Таким образом, терапия циклофероном оказывает модулирующее, нормализующие действие на уровень КБ у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной иирусами простого герпеса 1 и 2 типа.

При оценке фагоцитарной функции НФ у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной ВПГ1,2-типа, после курса терапии циклофероном были получены следующие результаты (ем. рисунок 5).

Фагоцитарное число, характеризующее количество активных фагоцитирующих нейтрофилов, в груше с исходно нормальными значениями фагоцитарного индекса после терапии ЦФ достоверно я с изменяется (52,57±3,02%).

В грутше с исходно низкими значениями Фагоцитарного Числа (ФЧ) (37.87±2,77%) ФЧ достоверно растет, как в тсстс т viíгo (48,8±1,85%), так и после курса лечения(48,15±2,15%).

Рисунок 5.

Изменение фагоцитарного числа у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, после курса циклоферояа, в зависимости от исходного уровня Фагоцитарного Индекса.

ФИ 30' менее 4 ФИ 30' 4-7 ФИ 30' более 7

ОФЧЗО1 исход

□ ФЧ 30' гроба сЦФ до лечения — В ФЧ 30'после лечения

ЕЗФЧЗО1 гроба с ЦФ после лечения

52,57

*- достоверность отличий показателей до и после лечения от исходного ФИ 30', р<0,05

Как видно из рисунка 5, в группе с исходно высоким показателем ФИ ФЧ (56,0±0,01%) на стимуляцию препаратом m vitro наблюдается достоверный рост показателя (76,1 ±0,03%), после лечения показатель также достоверно растет, по сравнению с исходом (63,01±2,51%), и по сравнению с контрольной группой

В группе с исходно низким ФИ показатели фагоцитарного индекса достоверно растут, как в тесте m vitro так и после приема препарата Исходно высокий показатель ФИ под действием цнклоферона спижается in vitro и также достоверно падает после курса терапии препаратом В контрольной группе ФИ достоверно уменьшается, а ИЗ равен 2,4±0,09

• Таким образом, курсовой прием циклоферона достоверно увеличивает Фагоцитарное Число на 30 минуте, у больных тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, приближая его к нормальным показателям

Выводы

1 У большинства больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, нарушен синтез активных форм кислорода - в 52,3% случаев выявлена гипореактивность этой системы (нормальный или сниженный уровень НСТ-теста несмотря на наличие активной вирусной инфекции) У 72,3% больных (47 чел) выявлено снижение индекса стимуляции НСТ-теста, что свлдетс.гьствует о снижении резервной способности кислородзависимой бактерицидности нейтрофилов У 47,7% (31чел) больных наблюдалось чрезмерное повышение образования активных форм кисчорода, что свидетельствует о недостаточности у них антиоксидантной системы

2 У большинства больных -78,5% (51чел) с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, выявлена гипореактивность миелопероксидазной системы (нормальная или сниженная активность миелопероксидазы, несмотря на наличие активной вирусной инфекции) Только у 21,5% (14 чел) больных активность миелопероксидазы повышена

Более чем у половины Сотый,тх - 56,9% (37чел) было выявлено снижение стимулированной активности миелопероксидазы

3 У больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 тина тяжелого течения в большинстве случаев (81,5%) выявлено нарушение в системе кислороднезависимой бактерицидности нейтрофилов у 50,8% (ЗЗчел) обнаружено снижение уровня спонтанных катионных белков, у 92,3% (60 чел) снижение индекса стимуляции, что свидетельствует о выраженной супрессии этой системы

4 У большинства больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа наблюдаются нарушения фагоцитарной функции нейтрофилов снижено количество фагоцитирующих нейтрофилов (фагоцитарное число) у 96,9% (бЗчсл), количество поглощенных микробоцидных тел (фагоцитарный индекс) у 58% (39чел), и переваривающая способность нарушена у 33,8% (22 чел) обследованных больных,

5 В большинстве случаев циклоферон оказывает модулирующее действие на показатели функциональной активности нейтрофилов у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, в тестах in vivo и in vitro и в большей степени циклофероп влияет на кислородзависимую бактерицидпость нейтрофилов

Практические рекомендации

1 У больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, Тяжелого течения, для достоверной оценки ответа иммунной системы на инфекционный процесс и назначения адекватной терапии, а так же контроля за ее эффективностью, кроме исследования клеточного и гуморального звеньев иммунитета необходимо проведение исследования функциональной активности нейтрофилов с тестах in vitro с циклофероном до начала курса лечепия

2 При выявлении дисфункции нейтрофилов с целью коррекции этих нарушений может быть рекомендован курс терапии циклофероном

Работы опубликованные по теме диссертации

1 Дидковский Н А, Малашенкова И К , Танасова А Н , Зуйков И А , Зуйкова И Н, Хитрик Н М, Сарсания Ж1П «Патогенетические аспекты герпетической инфекции тяжелого течения» Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2007, прил 2, с 76-81

2 Дидковский НА, Малашенкова И К , Танасова А Н, Зуйкова И Н Зуйков И А , Хитрик НМ, Сарсания ЖЛ1 Актуальные вопросы тяжелой герпетической инфекции у взрослых//Лечащий врач2006 №2 -С 4-11

3 Малашенкова И К , Дидковский Н А , Хитрик Н М Индивидуальный подбор иммунокорректоров методом хемилюминесценции// Тезисы П Всемирного конгресса по иммунопаточогии и аллергии Москва, Россия, 14-17 мая 2004 Аллергология и иммунология т 5, №1 ,2004, стр 43

4 ДидковскийН А Малашенкова И К, Азизова О А , Ледов А В , Левко А А , Хитрик Н М, Сарсания Ж Щ, Танасова А Н , Чистова Л А Тезисы П всемирного конгресса по иммунопатологии и аллергочогии Москва, Россия14-17 мая 2004г Ачлергология и иммунология т 5 №1,2004, стр 128

5 Малашенкова И К Хитрик НМ, Паджев АМ, Нарушение показателей кислородзависимой бактерицидносш у больных ВПГ Материалы II международной научной конференции «Современные аспекты реабилитации в медицине» Ереван 2005 с 222

6 Хитрик И М, Малашенкова И К Состояние фагоцитарной функции неитрофилов у больных вирусом простого герпеса Материалы II международной науччой конференции «Современные аспекты реабилитации в медицине» Ереван 2005 С375

7 Малашенкова И К Хитрик НМ Танасова А Н , Паджев А М , Дидковский Н А Нарушение показателей кислородзависимой бактерицидности у бочьных ВПГ Материалы ГГ международной научной конференции «Современные аспекты реабилитации в медицине» Ереван 2005 С-140

8 Хитрик Н М , Малашенкова И К , Танасова А Н, Дидковскии Н А , Состояние фагоцитарной функции нейторфилов у больных вирусом простого герпеса

Материалы П международной научной конференции «Современные аспекты реабилитации в медицине» Ереван 2005 С-240

9 Зуйков ЙЛ, Танасова АН , Жарова М А , Хитрик Н.М , Малашснкова И К , Дидковский НА Уровень провоспалителышх цитокинов у больных с тяжелым течением герпетической инфекции// Аллергология и иммунология - 2006 Том7 -№3 -С396

10 Танасова АЛ, Дидковский НА, Малашенкова ИК, Зуйков ИА, Хитрик Н М, Малиновская В А. Интерферонотерапия хронической герпетической инфекции тяжелого течения//Аллергология и иммунология -200бг Том7 -№3 -С396

11 Хитрик НМ, Малашснкова ИХ, Танасова АН, Зуйков И А, Дидковский НА, Малиновская В А Влияние интерферона-альфа и его индуктора на функциональную активность пейтрофилов при тяжелой герпетической инфекции // Аллергология и иммунология -2006г Том 7 -№3 - С397

Список сокращений

АФК - активные формы кислорода ВПГ1,2 - вирус простого герпеса 1 и 2 типа

ГИ ВПГ1,2 - герпетической инфекцией, вызванной вирусами простого

герпеса 1 и 2 типа

ИЗ - индекс завершенности

ИС - индекс стимуляции

Индуц - индуцированный тест

КБ - катионные белки

МПО - миелопероксидаза

НСТ-теста

Споит - спонтанный тест ФИ - фагоцитарный индекс ФЧ - фагоцитарное число PBS- фосфатно-солевой буфер

Подписано в печать 12 04 2007 г Исполнено 13 04 2007 г Печать трафаретная

Заказ К» 297 Тираж. 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56 www autoreferat.ru

Цель исследования.7

Задачи исследования.7

Практическая значимость.8

Апробация работы.8

Внедрение результатов работы.9

выводы

1. У большинства больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, нарушен синтез активных форм кислорода - в 52,3% случаев выявлена гипореактивность этой системы (нормальный или сниженный уровень НСТ-теста несмотря на наличие активной вирусной инфекции). У 72,3% больных (47 чел.) выявлено снижение индекса стимуляции НСТ-теста, что свидетельствует о снижении резервной способности кислородзависимой бактерицидности нейтрофилов. У 47,7% (31чел) больных наблюдалось чрезмерное повышение образования активных форм кислорода, что свидетельствует о недостаточности у них антиоксидантной системы.

2. У большинства больных -78,5% (51чел) с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения, выявлена гипореактивность миелопероксидазной системы (нормальная или сниженная активность миелопероксидазы, несмотря на наличие активной вирусной инфекции). Только у 21,5% (14 чел) больных активность миелопероксидазы повышена. Более чем у половины больных - 56,9% (37чел) было выявлено снижение стимулированной активности миелопероксидазы.

3. У больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа тяжелого течения в большинстве случаев (81,5%) выявлено нарушение в системе кислороднезависимой бактерицидности нейтрофилов: у 50,8% (ЗЗчел) обнаружено снижение уровня спонтанных катионных белков, у 92,3% (60 чел) снижение индекса стимуляции, что свидетельствует о выраженной супрессии этой системы.

4. У большинства больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа наблюдаются нарушения фагоцитарной функции нейтрофилов: снижено количество фагоцитирующих нейтрофилов (фагоцитарное число) у 96,9% (бЗчел), количество поглощенных микробоцидных тел (фагоцитарный индекс) у 58%) (39чел), и переваривающая способность нарушена у 33,8% (22 чел) обследованных больных;

5. В большинстве случаев циклоферон оказывает модулирующее действие на показатели функциональной активности нейтрофилов у больных с тяжелым течением инфекции, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, в тестах in vivo и in vitro и в большей степени циклоферон влияет на кислородзависимую бактерицидность нейтрофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У больных с инфекцией, вызванной вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, Тяжелого течения, для достоверной оценки ответа иммунной системы на инфекционный процесс и назначения адекватной терапии, а так же контроля за ее эффективностью, кроме исследования клеточного и гуморального звеньев иммунитета необходимо проведение исследования функциональной активности нейтрофилов с тестах in vitro с циклофероном до начала курса лечения.

2. При выявлении дисфункции нейтрофилов с целью коррекции этих нарушений может быть рекомендован курс терапии циклофероном.