Фотодинамическая терапия гнойных ран комплексом фотодитазин - амфифильный полимер

Сорокатый, Алексей Андреевич

Диссертации по медицине → Хирургия

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.17) на тему:Фотодинамическая терапия гнойных ран комплексом фотодитазин - амфифильный полимер

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Сорокатый, Алексей Андреевич Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.17

Автореферат диссертации по медицине на тему Фотодинамическая терапия гнойных ран комплексом фотодитазин - амфифильный полимер

005007641

СОРОКАТЫЙ АЛЕКСЕЙ АНДРЕЕВИЧ

ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ГНОЙНЫХ РАН

КОМПЛЕКСОМ ФОТОДИТАЗИН - АМФИФИЛЬНЫЙ ПОЛИМЕР

14.01.17-хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2 Я Н В 2012

Москва-2011 г.

005007641

Работа выполнена в ФГУ «Государственный научный центр лазерной медицины Федерального медико-биологического агентства»

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор

Толстых Петр Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Богданов Дмитрий Юрьевич доктор медицинских наук, профессор

Нуриев Илья Михайлович

Ведущее учреждение - ГОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России»

Защита диссертации состоится «_» _ 2012 г. в часов на

заседании диссертационного Совета Д 208.022.01 при ФГУ «Государственный научный центр лазерной медицины» Федерального медико-биологического агентства по адресу:

121165, г. Москва, ул. Студенческая, д.40, строение 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ГНЦ лазерной медицины Федерального медико-биологического агентства: 121165, г. Москва, ул. Студенческая, д.40, строение 1.

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, Дербенев

доктор медицинских наук, профессор Валентин Аркадьевич

Список сокращений

АП - амфифильные полимеры ДМ-димегин

КМЦ - карбоксиметилцеллюлоза

КОЕ - колониеобразующая единица

ПВП - поливинилпирролидон

ПВС - поливиниловый спирт

ПФС - порфириновые фотосенсибилизаторы

ПФС-АП - комплекс фотосенсибилизатор - амфифильный полимер

ТСФП - тетранатриевая соль 5,10,15,20-тетра (пара- сульфофенил)порфирина

ТФФП - тетрацезиевая соль 5,10,15,20-тетракиф-( 1'-карба-клозо-додекарборан-1'ил)тетрафторфенил]порфирина

ФД(ФЗ) - фотодитазин

ФДТ - фотодинамическая терапия

ФС - фотосенсибилизатор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования.

Одним из современных и перспективных методов лечения гнойных ран является фотодинамическая терапия (ФДТ) (Корабоев У.М., 2001; Азимшоев A.M., 2008; Макоев С.Н., 2009).

В последние годы появились сообщения, что ФДТ не только не замедляет заживление ран, а возможно даже вызывает их ускоренную регенерацию (Adili F. et al., 1996; Parerh S.B. et al., 1999). Проведенные исследования доказывают, что фотодинамическое воздействие оказывается губительным не только для резидентной микрофлоры (Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus spp., Sarcina spp., коринеформные бактерии, Propionibacterium spp. и др.), которая вызывает заболевания только при определенных условиях, но и даже для антибиотико-резистентных штаммов золотистого стафилококка, кишечной палочки и других микроорганизмов (Malik Z. Et al., 1986). Известно, что даже при длительном применении лазерной ФДТ, резистентности у патогенных микроорганизмов не развивается (Malik Z. et al., 1986; Wilson M. et al., 1994).

Ha сегодняшний день наиболее эффективным фотосенсибилизатором является фотодитазин. Фотодитазин мало токсичен, имеет полосу поглощения 661 нм (при этом фотодинамический эффект может развиваться в тканях на глубине до 1,7-2 см) с достаточно высоким квантовым выходом синглетного кислорода (Капинус В.Н. с соавт., 2005; Евтушенко В.А. с соавт., 2009). Обладает высокой способностью к накоплению в опухолевых и бактериальных клетках. При этом фотосенсибилизация кожи настолько мала, что исключает ожоги от воздействия солнечного света (Странадко Е.Ф. 2001; 2008 и др.; Solovieva А.В. et al., 2008).

В тоже время, несмотря на высокую эффективность Фотодитазина в качестве фотосенсибилизатора для ФДТ, он имеет целый ряд недостатков, связанных с высокими дозами лекарственного препарата, которые приводят к ряду побочных эффектов и увеличению стоимости лечения.

В этой связи перспективным оказалось использование фотосенсибилизатора в виде комплекса с нетоксичными водорастворимыми амфифильными полимерами, иммобилизованными на наночастицах гидроксиапатита (Соловьева А.Б. с соавт., 2008).

В Институте химической физики имени H.H. Семенова РАН была предложена лекарственная форма препарата для ФДТ гнойных ран, предусматривающая локальное использование ФС - в виде комплекса фотодитазина с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, представляющего собой гель. Это позволило значительно снизить лекарственную дозу ФС и улучшить лечебный эффект, повышая биологическую доступность препарата. Но влияние данного комплекса на репаративные процессы в клинической практике не исследовались.

В связи с этим сформулировали цель исследования: улучшить результаты лечения пациентов с гнойными ранами мягких тканей при помощи лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

Задачи исследования:

1. В модельных условиях провести сравнительный анализ фотокаталитической активности неиммобилизованных порфириновых фотосенсибилизаторов и в комплексе с амфифильными полимерами.

2. С помощью клинических, морфологических, микробиологических и планиметрических методов дать сравнительную оценку течения раневого процесса у пациентов с гнойными ранами при использовании фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, и у пациентов при традиционном лечении.

3. Оценить ближайшие клинические результаты лечения пациентов с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в

комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

4. Разработать и внедрить в хирургическую практику метод комплексной терапии гнойных ран с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

Научная новизна

Впервые разработан и внедрен в клиническую практику новый метод (патент №2396994) лечения пациентов с гнойными ранами мягких тканей с применением фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, который является высокоэффективным и патогенетически обоснованным.

По данным клинических, гистологических и микробиологических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, позволяет добиться сокращения сроков всех стадий раневого процесса и полного заживления в среднем на 6,6 суток по сравнению с традиционной терапией.

Фотодинамическая терапия гнойных ран с использованием фотодитазина в комплексе с водоастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, позволяет на порядок снизить бактериальную обсемененность ран, купировать микроциркуляторные нарушения в тканях ран, стимулировать репаративные процессы и сократить сроки заживления гнойных ран, по сравнению с традиционным лечением на 25%.

Практическая значимость работы

Применение лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, при лечении гнойных заболеваний мягких тканей различной локализации и различной этиологии позволяет снизить количество осложнений, уменьшить число повторных оперативных вмешательств и добиться сокращения сроков заживления гнойных ран, в среднем на 25%, по сравнению с традиционным лечением.

Лазерная фотодинамическая терапия с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, является патогенетически обоснованной, высокоэффективной и может быть рекомендована для широкого клинического применения в лечебных учреждениях, оказывающих помощь пациентам с гнойными ранами мягких тканей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Водорастворимый амфифильный полимер усиливает фотосенсибилизирующую активность фотосенсибилизатора. Причем, иммобилизованный комплекс на пленке является более эффективным, чем аналогичный комплекс в водном растворе полимера.

2. Разработанный метод лечения пациентов с гнойными заболеваниями мягких тканей с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, позволяет добиться сокращения сроков всех стадий раневого процесса, по сравнению с традиционной терапией; способствует уменьшению бактериальной нагрузки в ране, увеличению фагоцитарной активности, ускорению организации лейкоцитарного вала, а затем и скорейшему созреванию грануляционной ткани, что и приводит к сокращению сроков заживления и эпителизации ран на 25%.

Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на: X Всероссийской научной конференции с международным участием "Отечественные противоопухолевые препараты" , г.Москва, 22-23 марта 2011г.; Научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию ФГУ "ГНЦ лазерной медицины ФМБА России" "Инновационные технологии в лазерной медицине", г.Москва, 8-9 июня 2011г.

Публикации по материалам диссертации. Опубликовано 5 научных работ по материалам представленной к защите диссертации, из них 5 публикаций в ведущих рецензируемых научных журналах из перечня ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 113 страницах компьютерного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, имеет 10 таблиц, 25 рисунков, 8 фото. Список литературы содержит ссылки на 51 отечественных и 80 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

С целью улучшения результатов лечения пациентов с гнойными ранами мягких тканей нами выполнена работа, состоящая из экспериментальной и клинической части. Экспериментальная часть состояла из изучения фотокаталитической активности комплекса ПФС-АП на примере реакции фотоокисления триптофана в модельных условиях. В качестве фотосенсибилизатора использовали водорастворимый порфирин -N-метил-ди-D-глюкаминовую соль хлорина Еб (фотодитазин, ФД). Фотокаталитическую активность ПФС изучали в присутствии следующих амфифильных полимеров: поливинилпирролидон (ПВП) с Mw = 25000 производства фирмы «Dr. Theodor Schuchardt» (Германия), поливиниловый спирт (ПВС) с Mw = 30000 производства фирмы «Sigma-Aldrich» (США).

В работе в качестве субстрата использовался L,D-триптофан производства фирмы «Sigma- Aldrich» (США). К раствору триптофана в воде (2,5* Ю^М) добавляли водные растворы ПФС и полимеров, затем перемешивали в течение 10 минут и начинали отсчет времени реакции, освещая

реакционную смесь светом фототерапевтического светодиодного аппарата (АФС) производства ООО «Полироник» (А,=400нм, мощность 210 мВт) при перемешивании реакционной смеси на магнитной мешалке. За кинетикой процесса следили по изменению концентрации триптофана, которую определяли по уменьшению оптической плотности полосы поглощения (к = 280 нм) в УФ спектре триптофана, окисляющегося до эндоперекиси триптофана. Константу скорости процесса определяли по линейному участку кинетической кривой в начальные моменты времени. Эффективная константа скорости фотоокисления триптофана рассчитывалась согласно: кэфф [л/(моль-с)]=ДCs/(CphCsAt),

где Cph-концентрация ПФС, Cs и ДС5 - концентрация субстрата и изменение этой концентрации за время At, соответственно. УФ- и электронные спектры поглощения (ЭСП) растворов снимали на спектрофотометре Сагу50 (Varían, Австрия). Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью спектрофлуориметра CaryEclipse (Varían, Австрия).

Следующим этапом было исследование воздействия комплекса ПФС-АП на культуры опухолевых клеток. Экспериментальные исследования проводились на культурах клеток аденокарциномы молочной железы человека HBL-100 (JIAK-фаза 20-22 часа) и карциномы яичника человека Skov-3 (J1AK-фаза 26-30 часов) в Институте химической физики им. H.H. Семенова. В качестве фотосенсибилизатора также использовали Фотодитазин (разрешенный к применению в медицине). В эксперименте использовали низкотоксичный полимерный носитель, также разрешенный к применению в Министерстве здравоохранения РФ - карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Данный комплекс представлял собой полимерную пленку. В качестве контрольной группы исследования использовали исходный ФС, а также во всех случаях контрольными экспериментами подтверждали отсутствие собственной цитотоксичности КМЦ.

Методика исследования заключалась в нанесении 0,2 мл суспензии опухолевых клеток в иммунологические плашки, на дно которых диаметром 5 мм предварительно помещалась пленка, содержащая в своем составе разные

концентрации комплекса фотосенсибилизатор - амфифильный полимер (в интервале соотношений от 1:150 до 1:1900), затем плашки помещались в темное помещение, для предотвращения преждевременной фототоксической реакции. После инкубации опухолевых клеток на пленке в течение 30-40 мин при комнатной температуре проводили освещение плашек светом низкоинтенсивного лазера в дозах от 10 до 40 Дж/см2. Для оценки эффективности комплекса использовали метод определения параметра 1С50 -50% гибели клеток, как отношение цитотоксического эффекта.

Клиническое исследование основано на результатах комплексного обследования и лечения 100 пациентов с гнойными ранами мягких тканей, находившихся на лечении в 1-ом хирургическом отделении Городской клинической больницы №51 Департамента здравоохранения г. Москвы 20092012г. В зависимости от метода лечения все пациенты были разделены на две группы: основную группу составили 50 пациентов, которым наряду с традиционным лечением проводилась фотодинамическая терапия с комплексом фотодитазин - амфифильный полимер, иммобилизованный на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля. Контрольную группу составили также 50 пациентов, получавших традиционную терапию. В обеих исследуемых группах преобладали женщины (58% в основной группе и 62% в контрольной), средний возраст которых составил 53±6,5 года в основной группе и 55±5,7 лет в контрольной. По нозологическим формам преобладали флегмоны, абсцессы, ушибленные раны и нагноившиеся гематомы. По локализации гнойного очага в обеих группах преобладали поражения нижних конечностей и туловища. В среднем площадь раневой поверхности у пациентов в начале лечения составляла от 10 см2 до 300 см2. В основной группе пациентов средняя площадь ран составила - 97±7,3 см2, а в контрольной группе пациентов - 88±9,5 см2.

Помимо основного заболевания, почти все пациенты контрольной и опытной групп имели компенсированные и декомпенсированные сопутствующие заболевания. Нередко они сочетались друг с другом. Наибольшее число пациентов страдали заболеваниями сердечно-сосудистой

системы (58% в опытной группе и 48% в контрольной) и сахарным диабетом, преимущественно II типа (20% в опытной группе и 22% в контрольной).

В основную и контрольную группы включались пациенты обоих полов, близких возрастных групп, сопоставимых по тяжести, локализации и распространенности гнойного процесса, а также сходных по характеру и тяжести сопутствующей патологии. Все пациенты были прооперированы в экстренном порядке под общим обезболиванием. Всем пациентам выполняли первичную хирургическую обработку гнойного очага по общепринятой методике.

На следующие сутки после операции выполняли перевязку, во время которой удаляли фибринозно-гнойные наложения, детрит. Пациенты контрольной группы 50(50%) получали традиционное лечение, которое заключалось в воздействии на все фазы раневого процесса. В фазу гидратации применялись протеолитические ферменты (трипсин, химотрипсин, химопсин и др.), а также различные виды химических антисептиков: перекись водорода, борная кислота, препараты йода (йодопирон) и марганцевокислый калий и др. Из физических методов применялись УФО, ультразвук и другие виды физиотерапии. Перевязки, в этот период, проводились ежедневно.

В фазу дегидратации, соответственно, применялись различные мази на жировой основе и эмульсии (диоксидиновая, татрациклиновая, фурацилиновая мази, а также синтомициновая эмульсии и др.), так как основной принцип лечения ран в этой фазе - это максимально защитить грануляции от травматизации, а также способствовать их быстрому росту. Перевязки выполняли 1 раз в 2-3 дня.

Пациентам, входящим в опытную группу, на раневую поверхность наносили комплекс - фотодитазин с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля. Рану укрывали стерильной полиэтиленовой повязкой на 40-50 минут, после чего раневую поверхность облучали низкоинтенсивным лазерным излучением с длиной волны 661±0,03 нм, плотностью мощности 1,0 Вт/см2, плотностью энергии 25-30 Дж/см2. Процедуру заканчивали наложением повязки с 1%

водным раствором йодопирона. Общее количество сеансов ФДТ зависело от течения репаративного процесса. Время сеанса зависело от площади раневой поверхности и рассчитывалось по формуле: Т= Е х 8\Р, где Б - раневой поверхности, Е - заданная доза в Дж/см2, Р - мощность лазерного излучения в Вт.

Показаниями к проведению ФДТ являлось наличие гнойной раны, с участками некрозов, фибринозно-гнойными наложениями и налетом фибрина в дне раны, а также выраженное перифокальное воспаление.

Противопоказаниями к выполнению ФДТ считали декомпенсированные сопутствующие заболевания (дыхательная, сердечная недостаточность), перенесенные инфаркт и инсульт менее одного года назад, вторую стадию раневого процесса (фаза дегидратации, эпителизации).

В работе использовали комплекс фотосенсибилизатор (фотодитазин)-амфифильный полимер, иммобилизованный на наночастицах гидроксиапатита, используемый в виде геля. Данный комплекс разработан сотрудниками Института химической физики им. Н.Н.Семенова. Фотосенсибилизатор "Фотодитазин", разработанный в Научно-производственной фирме ООО "ВЕТА-ГРАНД". В комплексе использовали нетоксичные амфифильные полимеры, исследуемые в экспериментальной части. Все используемые амфифильные полимеры разрешены к применению в медицине и применяются для приготовления гелей и мазей. Комплекс содержал также гидроксиапатит кальция Саю(Р04)6(0Н)2, синтетический, марки ОбИш, размеры частиц 20-500 нм. Гидроксиапатит - биоактивный и биосовместимый минерал, основной компонент зубов и костей человека. Наноразмерные частицы гидроксиапатита в последнее время успешно используются для иммобилизации ДНК и других биологически активных соединений в процессах направленной доставки в клетки. Наночастицы гидроксиапатита также разрешены к использованию в медицинской практике.

В качестве источника низкоинтенсивного лазерного излучения использовали полупроводниковый лазерный аппарат "Аткус 2" фирмы ЗАО "Полупроводниковые приборы" г. Санкт-Петербург. С целью контроля

выходной мощности на конце оптического волокна использовали интегральный измеритель мощности (ИИМ-1П), изготовленный Научно-производственной фирмой "ПОЛИРОНИК", Россия.

Для научной аргументации и подтверждения эффективности воздействия методики на течение раневого процесса, наряду с клинико-лабораторным методом, использовались морфологический, микробиологический и планиметрический методы исследования.

Результаты экспериментальных исследований фотоокисления триптофана в модельных условиях

В результате исследования фотокаталитической активности ПФС в присутствии АП в модельных условиях, на примере модельной реакции фотоокисления триптофана, получены следующие результаты. На рис.1 представлены зависимости эффективной константы кэфф окисления триптофана, катализируемого неиммобилизованным Фотодитазином и в комплексе с водораствроимым амфифильным полимером. Фиксируемое для всех порфиринов уменьшение величины кэфф с увеличением концентрации ПФС естественно связывать с процессами ассоциации молекул порфиринов и образованием агрегатов (димеров и более крупных частиц), которые обладают меньшей (удельной, приходящейся на одну молекулу) каталитической активностью. Введение амфифильных полимеров в реакционную систему приводит к разрушению таких ассоциатов и, соответственно, увеличению скорости реакции фотоокисления триптофана в присутствии ФЗ. Наиболее сильное влияние на кэфф оказывает добавление ПВП, который обладает, очевидно, лучшей способностью к связыванию с ПФС.

Очевидно, об эффективности влияния полимера на активность порфиринов и степень их агрегации можно судить по молярным соотношениям полимер/порфирин, при которых наблюдается максимальные значения кэфф. Наибольший эффект «разагрегации» наблюдается при введении в систему ПВП, причем в случае ФЗ молярное соотношение ПФС-ПВП, при котором величина кэфф максимальна составляет 1:10.

Рис.1. Зависимость эффективной константы кЭфф окисления триптофана, катализируемого неиммобилизованным Фотодитазином и в комплексе с водораствримым амфифильным полимером, иммобилизованным на

наночастицах гидроксиапатита. Такая разница в молярных соотношениях полимер - ПФС для ФЗ, возможно, объясняется различной степенью агрегированное™ молекул ПФС. При дальнейшем увеличении концентрации полимеров в системе к3фф падает, что связано, очевидно, с уменьшением числа каталитически активных центров.

Таким образом, можно полагать, что амфифильные полимеры, в том числе, ПВП и ПВС, которые не обладают собственной фотохимической активностью, способны увеличивать фотокаталитическую активность водорастворимых порфириновых фотосенсиблизаторов, вследствие диссоциации агрегатов молекул порфиринов.

Результаты экспериментальных исследований на культурах опухолевых

клеток

В ходе первых же опытов на культурах опухолевых клеток с образцами комплекса ФЗ-КМЦ, стало ясно, что происходит резкий сдвиг цитотоксичности в сторону ее увеличения. В частности, 50%-ая гибель клеток наблюдалась при концентрациях ФЗ 10"7-410"7 моль/л (для сравнения, в случае неиммобилизованного ФЗ эта величина составляла ~10"5моль/л). При этом в части экспериментов 20-40%-ое ингибирование клеточной пролиферации

начиналось уже с доз 5 10"8 моль/л (рис. 2). Проведенные эксперименты показали, что иммобилизованный на КМЦ ФЗ обладает в 15-20 раз более высокой фотоцитостатичеекой активностью по сравнению с неиммобилизованным ФЗ. Были проведены две серии экспериментов по изучению влияния иммобилизации на активность фотодитазина. Из рис.2 видно, что 1С5о для НВЬ-ЮО и Бкоу-З в случае исходного ФЗ составляет 10~5-1,5 10"5 моль/л, (рис.2, кривые 1,2). В случае полимерных комплексов ФЗ с КМЦ 1С50 уменьшается до (10~7 ~ 2,510'') моль/л (рис.2, кривые 3, 4). Приведенные результаты были получены в разных сериях испытаний. Из приведенных данных следует, что для достижения максимально возможного фотоцитотоксического эффекта необходим подбор оптимальных соотношений концентраций фотодинамического агента и полимера.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об усилении фотосенсибилизирующей активности ФС при иммобилизации ФС на пленки полимеров, использующихся в качестве носителей.

133.00% 111.00% 110.00% 1С0.00% 90.00% Е0.00% Л.00% Ю.00% 3100% 4].00% 30.00% 23.00% 10.00% 0.00%

л НВЫ00 ФЗ _»...- 2 Экт-З ФЗ 3 нвыоо ФЗ-КМЦ 4 Экоу-З ФЗ-КМЦ

я/

-*- -ЩЬ

\ «

V \ \ ]

V. л V IV ♦

4 «ч

¡к -к

щ р ^

(Ч 1Л N.

С! си о о си

г я я я а

Концентрация ФЗ, мкМ

Рис.2. Фотоцитотоксичность исходного фотодитазина (кривые 1-2) и иммобилизованного на КМЦ (кривые 3-4) по отношению к культурам НВЬ-100 (кривые 1,3) и вкоу-З (кривые 2, 4).

Результаты клинических исследований

Клинические исследования показали, что динамика течения раневого процесса у пациентов опытной и контрольной групп была различной в зависимости от проводимого лечения (таблица 1). При традиционном методе лечения сроки очищения ран от гнойно-некротических масс и появление грануляционной ткани составили 7,2±0,6 суток и 7,4±0,5 суток, соответственно. Появление краевой эпителизации выявлено на 8,1±0,5 сутки после первичной хирургической обработки раны. В тоже время, использование традиционной терапии в сочетании с лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля, привело к быстрому уменьшению воспалительных проявлений. В среднем, очищение ран от гнойно-некротических масс и фибрина произошло на 3,4±0,8 сутки (р<0,05). Появление грануляционной ткани отмечено на 3,6±0,8 сутки, а краевая эпителизация выявлена на 4,7±0,9 сутки, что достоверно лучше, чем при традиционном методе лечения (р<0,05).

Таким образом, лечение пациентов с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, сокращает сроки очищения ран от гнойно-некротических масс в 2,11 раза по сравнению с традиционной терапией, в 2,05 раза ускоряет появление грануляционной ткани ив 1,72 раза ускоряет появление краевой эпителизации. У пациентов со сниженными регенеративными способностями (диабет и т.д.) антибиотикотерапию проводили курсом до 7 дней, в сочетании с антимикотическими препаратами. В контрольной группе 42 (84%) пациенты получали антибактериальную терапию препаратами широкого спектра действия (до получения результатов посева).

В опытной группе использование лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля, позволило назначить антибиотики меньшему количеству пациентов - 18 (36%).

Таблица 1.

Динамика течения раневого процесса в опытной и контрольной группах, в зависимости от методов лечения

Группа Количество пациентов Средние сроки (сутки)

Очищение ран Появление грануляционной ткани Появление краевой эпителизации

Основная 50 3,4±0,8* 3,6±0,8* 4,7±0,9*

Контрольная 50 7,2±0,6 7,4±0,5 8,1±0,5

* При уровне значимости (р<0,05) по сравнению с контрольной группой

Следует отметить, что в основной группе пациентов получавших, помимо традиционного лечения, сеансы лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля, таких случаев не отмечено. Тогда как, в контрольной группе пациентов, повторные вмешательства выполнены у 3(6%) пациентов. Двоим, выполнена некрэктомия, а одному пациенту произведено вскрытие гнойного затека. Следовательно, применение лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля позволило избежать повторных оперативных вмешательств.

Показатели пребывания пациентов на стационарном лечении в группах значительно различались. В контрольной группе при традиционном лечении средние сроки пребывания пациентов в стационаре составили 14,8±1,2 дней, а в опытной достоверно меньше 9,2±1,2 дня (р<0,05). Для определения сроков полного заживления гнойных ран, пациентов вызывали на контрольный осмотр через 1 мес., 6 мес., 1 год. В контрольной группе пациентов среднее количество дней полного заживления гнойных ран составило 26,4±3,2 дней, а в основной группе с использованием лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, в виде геля, составило 19,8±2,9 дней. Что оказалось

достоверно короче по сравнению с традиционной терапией на 6,6 суток или 25%. При контрольном осмотре через 1мес., 6 мес., 1 год рубцы у всех пациентов опытной группы были мягкими, эластичными и не деформировали окружающие ткани. Тогда, как у половины контрольной группы пациентов были выявлены грубые келоидные рубцы, деформирующие окружающие ткани. Сравнительная оценка течения раневого процесса гнойных ран по данным морфологических исследований

Во время операции гистологическая картина была одинакова в обеих исследуемых группах. Стенки и дно раны представлены деструктивными некротическими тканями, обильно инфильтрированными

полиморфноядерными лейкоцитами. На границе с неизмененными тканями обнаруживаются демаркационный лейкоцитарный вал и выраженные расстройства гемо- и микроциркуляции в виде полнокровных сосудов, повышение проницаемости их стенок для плазменных белков и форменных элементов крови, стазов, фибриноидного некроза стенок сосудов с периваскулярными и очаговыми кровоизлияниями.

На 3-е сутки в контрольной группе в области раны сохраняется фибринозно-гнойный экссудат. В области дна и стенок раневого канала появляются островки формирующейся грануляционной ткани в виде беспорядочно расположенных новообразованных капилляров с большим количеством клеточных элементов макрофагального и фибробластического ряда. Характерно наличие периваскулярных и очаговых нейтрофильных инфильтратов. Тогда как, в опытной группе гистологическое исследование биоптатов гнойных ран после ФДТ показало значительно большее очищение раневой поверхности от гнойно-некротических масс, чем при традиционном способе лечения. Раневая поверхность представлена фибринозно-лейкоцитарным слоем без бактериальных колоний, под которым выявляется широкий слой грануляционной ткани с большим количеством новообразованных полнокровных беспорядочно расположенных капилляров. Между капиллярами выявляются многочисленные клеточные элементы макрофагального ряда, фибробласты, полиморфноядерные лейкоциты. На

границе с подкожной клетчаткой выявляются сформированные пучки фуксинофильных коллагеновых волокон, свидетельствующие о начальных процессах трансформации грануляционной ткани в фиброзную.

На 7-е сутки в контрольной группе отмечается сокращение раневого канала, уменьшение объема фибринозно-некротических масс и степени нейтрофильной инфильтрации. На границе с неизмененными тканями выявляется грануляционная ткань с большим количеством новообразованных сосудов, макрофагов, фибробластов и многочисленных полиморфно-ядерных лейкоцитов. Через 7 суток после ФДТ происходит уменьшение объема фибринозно-лейкоцитарного слоя. Отмечается созревание грануляционной ткани с перестройкой сосудистой архитектоники. Между полнокровными капиллярами клеточный состав характеризуется увеличением количества макрофагов, фибробластов, а так же полиморфно-ядерных лейкоцитов. На границе с фиброзным слоем формируется слой горизонтальных фибробластов. При окраске толуидиновым синим выявляется метахромазия межуточного вещества грануляционной ткани, свидетельствующая об усилении синтеза гликозоаминогликанов (ГАГ).

На 10-е сутки традиционного лечения обнаруживается краевая эпителизация под струпом, в области краев и дна раны сформирована грануляционная ткань типичного гистологического строения с выраженными слоями вертикальных сосудов и горизонтально расположенных фибробластов. Обнаруживаются пучки фуксинофильных коллагеновых волокон, что свидетельствует о начинающейся дифференцировке грануляционной ткани в фиброзную. А в опытной группе на 10-е сутки происходит более полная эпителизация раневой поверхности в виде многорядного эпителиального пласта, дифференцирующегося на слои и четко выраженной базальной мембраной. В фиброзной ткани сохраняются островки грануляционной ткани с небольшим количеством сосудов, однако, основная масса ее представлена зрелыми фуксинофильными коллагеновыми волокнами. Среди клеточных элементов преобладают фиброциты и фибробласты, встречаются

периваскулярные лимфоидные инфильтраты, свидетельствующие о нарастании иммунных процессов.

Динамика степени микробной обсемененности гнойных ран

Монокультуры были выделены у 38 (38%) пациентов и у 62 (62%) микробные ассоциации. Основные штаммы, высеваемые при микробиологическом исследовании патологического отделяемого из гнойных ран в монокультуре и в микробных ассоциациях представлены: S. Aureus (73,6% и 58,1% соответственно) и Streptococcus spp. (13,2% и 12,9% соответственно). Остальные культуры микроорганизмов (Р. aeruginosa, Enterococcus spp., S.epidermidis, E.coli) встречались в небольшом количестве в монокультуре или микробных ассоциациях. Наиболее резистентными к антибактериальной терапии оказались штаммы S.aureus. Наиболее результативным оказалось лечение этой микробной группы препаратами трициклических гликопротеидов - Ванкомицином - 94,6±2,0%. Остальные же микробные ассоциации хорошо поддавались лечению - Ципрофлоксацином -88,5±2,1%'; Амоксиклавом - 83,4±2,2%; Цефазолином - 75,3±3,1%; Линкомицин - 75,3±3,1%.

Изначально у всех пациентов при отсутствии лечения отмечался высокий уровень микробной обсемененности до Ю7"10. Однако, уже в 1-е сутки после сеанса лазерной фотодинамической терапии обсемененность 1 г. такни раны снизилась с Ю7'10 до 106"9 КОЕ/г, тогда как в контрольной группе оставалась на прежнем уровне. Данные количественного метода исследования приведены в таблице 3.

На 3-е сутки после сеанса ФДТ содержание микробных тел в 1г. ткани снизилось до Ю5"8КОЕ/г, по сравнению с контрольной группой 107'9 КОЕ/г, а на 5-е сутки составило 104'6 КОЕ/г в основной и 106"8 КОЕ/г в контрольной группах. На 7-е и 10-е сутки в основной группе уровень обсемененности составил 102"3 КОЕ/г и 102 КОЕ/г, соответственно, что способствовало скорейшему заживлению гнойных ран. В свою очередь в контрольной группе на 7-е сутки количество бактерий составило 106'8 КОЕ/г, а на 10-е 106"7 КОЕ/г, что препятствовало заживлению и регенерации ран.

Таблица 3.

Содержание микробных тел в 1г. ткани в процессе лечения (КОЕ)

Группы День Сутки, после операции

операции 1 3 5 7 10

Основная ю'мо 106"9 105"8 104"6 10" ю2

Контрольная 10''"10 ю'-10 Ю7-9 106"8 106"8 Ю6-7

Результаты планиметрических исследований гнойных ран

В среднем площадь раневой поверхности у пациентов в начале лечения составляла от 10 см2 до 300 см2. В основной группе пациентов средняя площадь ран составляла - 97±7,3 см2, а в контрольной группе пациентов - 88±9,5 см2. Результаты планиметрических исследований представлены в таблице 4. Среднесуточная скорость уменьшения площади гнойных ран в контрольной группе составила за 10 суток - 6,2%, тогда как при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на ночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, скорость заживления оказалась выше и составила -7,1%. Использование лазерной ФДТ с данным комплексом позволило увеличить скорость заживления гнойных ран, по сравнению с традиционной терапией на 15,1%.

Таблица 4.

Результаты планиметрических исследований

Группы пациентов Площадь раневой поверхности (см2 и %)

Сразу после операции 5-е сутки 7-е сутки 10-е сутки

Опытная 97±7,3* см2 10 0% 51±4,8* см2 52,5% 42±3,1* см2 43,2% 28±1,5* см2 28,8%

Контрольная 88±9,5 см2 100% 58±6,1 см2 65,9% 49±4,4 см2 55,6% 33±2,1 см2 37,5%

*При уровне значимости (р<0,05) по сравнению с контрольной группой

ВЫВОДЫ

1. Проведенный в модельных условиях сравнительный анализ фотокаталитической активности неиммобилизованных порфириновых фотосенсибилизаторов и фотосенсибилизаторов в комплексе с амфифильным полимером показал, что фотосенсибилизатор в комплексе с амфифильным полимером обладает в 15-20 раз более высокой фотоцитостатической активностью по сравнению с неиммобилизованным фотосенсибилизатором, а также, иммобилизованный комплекс на пленке является более эффективным, чем аналогичный комплекс в водном растворе полимера.

2. По данным клинических и планиметрических исследований установлено, что применение лазерной фотодинамической терапии гнойных ран мягких тканей с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, сокращает сроки очищения ран от гнойно-некротических масс в 2,11 раза, в 2,05 раза ускоряет появление грануляционной ткани ив 1,72 раза ускоряет начало краевой эпителизации, и уменьшает сроки полного заживления гнойных ран на 6,6 суток (25%) но сравнению с традиционной терапией.

3. Результаты морфологических и микробиологических исследований показали, что лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран мягких тканей с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, по сравнению с традиционным лечением способствует увеличению фагоцитарной активности, ускорению организации лейкоцитарного вала и ускорению созревания грануляционной ткани, эффективному снижению бактериальной обсемененности тканей, формирующих рану.

4. Разработанный метод лечения пациентов с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, является патогенетически

обоснованным, высокоэффективным и может быть рекомендован к внедрению в широкую клиническую практику.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать к широкому применению метода лечения гнойных ран мягких тканей с использованием лазерной ФДТ с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

1. Пациентам с гнойными заболеваниями мягких тканей, требующим хирургического лечения, выполнить хирургическую обработку гнойного очага по общепринятой методике.

2. На следующие сутки выполнить перевязку, во время которой удалить все фибринозно-гнойные наложения, детрит. При наличии участков влажных некрозов, фибрина, на раневую поверхность нанести фотодитазин в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля. Рану укрыть стерильной полиэтиленовой пленкой и асептической повязкой на 40-50 минут.

3. После снятия повязки раневую поверхность равномерно засветить лазерным излучением с длиной волны 661±0,03 нм, плотностью мощности 1,0 Вт/см2, плотностью энергии 25-30 Дж/см2. Время воздействия будет зависеть от площади раневой поверхности.

4. Процедуру закончить наложением повязки с антисептиком (1% водным раствором йодопирона или др.).

5. При сохранении фибринозно-гнойных наложений, участков некрозов сеанс лазерной ФДТ повторить.

6. При очищении раны от гнойно-некротических масс необходимости в повторном воздействии нет. Дальнейшее лечение раны проводить стандартным способом (наложение швов на рану, аутодермопластика или заживление ран вторичным натяжением).

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Луцевич О.Э., Тамразова О.Б., Толстых П.И., Дербенев В.А., Медушева Е.О., Авагян A.A., Сорокатый A.A. Современные биологически активные раневые покрытия и окклюзионные повязки в комплексном лечении больных с трофическими язвами нижних конечностей венозного генеза. -Хирург-2011.-№1.-стр13-18.

2. Луцевич О.Э., Тамразова О.Б., Кулешов И.Ю., Сорокатый A.A., Шикунова А.Ю., Усмонов У .Д., Старичков И.Г. Воздушно-плазменные потоки в режиме коагуляции и NO-терапии в комплексном лечении хронических и длительно незаживающих ран (язв) нижних конечностей. - Московский хирургический журнал,- Москва.- 2 (18) 2011.-е. 9-13.

3. Соловьева А.Б., Толстых П.И., Сорокатый A.A., Глаголев H.H., Иванов А.И., Исмаилов Г.И. ФДТ обширных гнойных ран и ожогов с комлексами амфифильный полимер - порфирин, иммобилизованными на наночастицах гидроксиапатита. - Российский биотерапевтический журнал. - Москва. -2011. - №1 Том 10. -с.81-82.

4. Толстых П.И., Ширинский В.Г., Мамонтов П.Г., Шехтер А.Б., Романова A.C. Сравнительная оценка методов стимуляции заживления линейных асептических ран.-Лазерная медицина-2009.-Т. 13, вып. 1, стр. 34.

5. Толстых П.И., Соловьева А.Б., Тамразова О.Б., Аксенова H.A., Кулешов И.Ю., Сорокатый A.A. Современные аспекты фотодинамической терапии гнойных и хронических ран фотодитазином, комплексированным с амфифильными полимерами. Обзор литературы. - Московский хирургический журнал.- Москва,- 3(19) 2011. - с. 69-72.

Подписано в печать:

14.12.2011

Заказ № 6402 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Оглавление диссертации Сорокатый, Алексей Андреевич :: 2012 :: Москва

Страницы

Введение.4 стр.

Глава 1. Современные аспекты фото динамической терапии гнойных и хронических ран (обзор литературы) .11 стр.

Глава 2. Общая характеристика экспериментальных и клинических исследований.24 стр.

1.1 Характеристика экспериментальных исследований.24 стр.

1.2 Характеристика клинических наблюдений.29 стр.

1.3 Методы исследования.40 стр.

1.3.1 Клинико-лабораторные методы исследования.40 стр.

1.3.2 Морфологические методы исследования ран.41 стр.

1.3.3 Микробиологические методы исследования ран.42 стр.

1.3.4 Планиметрический метод исследования ран.43 стр.

1.3.5 Статистическая обработка полученных результатов.44 стр.

Глава 3.Результаты исследований комплексного лечения гнойных ран с использованием лазерной фотодинамической терапии.45 стр.

3.1 Результаты экспериментальных исследований.45 стр.

3.2 Результаты клинических исследований.57 стр.

3.3 Результаты морфологических исследований.68 стр.

3.4 Результаты микробиологических исследований.78 стр.

3.5 Результаты планиметрических исследований.81 стр.

Введение диссертации по теме "Хирургия", Сорокатый, Алексей Андреевич, автореферат

Среди многочисленных проблем хирургии, лечение гнойных ран занимает особое место. За последние несколько десятков лет в решении этого вопроса достигнуты немалые успехи. Появилось множество средств и методов, которые ускоряют регенеративные процессы в ранах и предотвращают их вторичное инфицирование, но, несмотря на достигнутые успехи, данная проблема в целом остается весьма далекой от своего разрешения [8, 9, 50].

Одним из перспективных методов лечения гнойных ран является фото динамическая терапия (ФДТ) [1, 19, 27, 41, 54].

По мнению целого ряда авторов лазерная ФДТ гнойных ран мягких тканей оказывает положительное воздействие на течение раневого процесса, что проявляется в выраженном антибактериальном действии, сокращении сроков очищения раны от гнойно-некротических масс и скорейшем заживлении гнойной раны [11, 13, 18, 20].

В последние годы появились сообщения, что ФДТ не только не замедляет заживление ран, а возможно даже вызывает их ускоренную регенерацию [1, 41, 52, 106]. Проведенные исследования доказывают, что фотодинамическое воздействие оказывается губительным не только для резидентной микрофлоры (Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Micrococcus spp., Sarcina spp., коринеформные бактерии, Propionibacterium spp. и др.), которая вызывает заболевания только при определенных условиях, но и даже для антибиотико-резистентных штаммов золотистого стафилококка, кишечной палочки и других микроорганизмов [95]. Известно, что даже при длительном применении лазерной ФДТ, резистентности у патогенных микроорганизмов не развивается [42].

На сегодняшний день наиболее эффективным фотосенисибилизатором является фотодитазин - препарат отечественной разработки на основе производных хлорофилла А и представляет собой N-диметилглюкаминовую соль хлорина Е6. Его получают из биомассы микроводоросли Спирулины платензис - Spirulina platensis.

Фотодитазин мало токсичен, имеет полосу поглощения 661 нм (при этом фотодинамический эффект может развиваться в тканях на глубине до 1,7-2 см) с достаточно высоким квантовым выходом синглетного кислорода [62, 77]. Обладает высокой способностью к накоплению в опухолевых и бактериальных клетках. При этом фотосенсибилизация кожи настолько мала, что исключает ожоги от воздействия солнечного света [7, 85, 106].

Использование таких комплексированных систем позволяет на порядок увеличить эффективность ФДТ и тем самым значительно снизить концентрацию используемых ФС, что ведет к снижению терапевтической дозы препарата и побочных токсических осложнений, а также значительно снижает его стоимость [33, 129, 130]. Но влияние данного комплекса на репаративные процессы в клинической практике не исследовались.

В связи с этим, были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования

Улучшить результаты лечения пациентов с гнойными ранами мягких тканей при помощи лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

Задачи исследования

2. С помощью клинических, морфологических, микробиологических и планиметрических методов исследования дать сравнительную оценку течения раневого процесса у пациентов с гнойными ранами при использовании фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, и у пациентов при традиционном лечении.

3. Оценить ближайшие клинические результаты лечения пациентов с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля.

Научная новизна

Впервые разработан и внедрен в клиническую практику новый метод (патент РФ№2396994 от 02.03.2009г.) лечения пациентов с гнойными заболеваниями мягких тканей, с применением фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, который является высокоэффективным и патогенетически обоснованным.

По данным клинических, морфологических и микробиологических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотодитазином в комплексе с водорастворимым амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, позволяет добиться сокращения сроков всех стадий раневого процесса в среднем на 6,6 суток по сравнению с традиционной терапией.

Фотодинамическая терапия гнойных ран с использованием фотодитазина в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, позволяет на порядок снизить бактериальную обсемененность, купировать микроциркуляторные нарушения в тканях ран, стимулировать репаративные процессы и сократить сроки полного заживления гнойных ран, по сравнению с традиционным лечением на 25%.

Практическая значимость

Положения, выносимые на защиту

Внедрение в практику

Разработанный метод лечения пациентов с гнойными заболеваниями мягких тканей применяется в отделении хирургической инфекции ФГУ ГНЦ лазерной медицины ФМБА России на базе Государственного Учреждения здравоохранения Городской клинической больницы №51 Департамента здравоохранения г. Москвы.

Апробация работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на: X Всероссийской научной конференции с международным участием "Отечественные противоопухолевые препараты" , г.Москва, 22-23 марта 2011г.; Научнопрактической конференции с международным участием, посвященной 25-летию ФГУ "ГНЦ лазерной медицины ФМБА России" "Инновационные технологии в лазерной медицине", г.Москва, 8-9 июня 2011г.

Публикации

Опубликовано 5 научных работ по материалам представленной к защите диссертации, из них 5 публикаций в ведущих рецензируемых научных журналах из перечня ВАК РФ. Получены 2 патента на изобретение.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 113 страницах компьютерного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, имеет 10 таблиц, 25 рисунков, 8 фото. Список литературы содержит ссылки на 51 отечественных и 80 зарубежных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фотодинамическая терапия гнойных ран комплексом фотодитазин - амфифильный полимер"

Выводы

2. По данным клинических и планиметрических исследований установлено, что применение лазерной фотодинамической терапии гнойных ран мягких тканей с фотодитазином в комплексе с амфифильным полимером, иммобилизованным на наночастицах гидроксиапатита, используемым в виде геля, сокращает сроки очищения ран от гнойно-некротических масс в 2,11 раза, в 2,05 раза ускоряет появление грануляционной ткани и в 1,72 раза ускоряет начало краевой эпителизации, и уменьшает сроки полного заживления гнойных ран на 6,6 суток (25%) по сравнению с традиционной терапией.

Практические рекомендации

3. После снятия повязки раневую поверхность равномерно засветить лазерным излучением с длиной волны 661±0,03 нм, плотностью мощности

2 2 1,0 Вт/см , плотностью энергии 25-30 Дж/см . Время воздействия будет зависеть от площади раневой поверхности.

4. Процедуру закончить наложением повязки с антисептиком (1% водным раствором йодопирона или др.).

5. При сохранении фибринозно-гнойных наложений, участков некрозов сеанс лазерной ФДТ повторить.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Сорокатый, Алексей Андреевич

1. Азимшоев A.M. Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизаторами хлоринового ряда //Автореф. дисс. на соискание уч. степени канд. мед. наук-Москва.2008.-23с

2. Бахшиев Н.Г. Спектроскопия межмолекулярных взаимодействий. JL, 1972. 263 с.

3. Венедиктов Е.А., Красновский А.А.мл. // Ж. прикл. спектр. 1982. Т. 36. № 1.С. 152.

4. Волгин В.Н., Старандко Е.Ф. Изучение фармакокинетики фотодитазина при базально-клеточном раке кожи// Лазер, мед.- 2011.- Т. 15.-Вып. 1.-С.33-37

5. Волкова А., Лощенов В., Ершова Е. и др. Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века / Материалы международной конференции. СПб., 2001. С. 414

6. Ганжа В.А., Гуринович Г.П., Джагаров Б.М. и др. // Ж. прикл. спектр. 1989. Т. 50. №4. С. 618.

7. Гейниц A.B., Сорокатый А.Е., Ягудаев Д.М., Трухманов P.C. Фотодинамическая терапия. История создания метода и ее механизмы// Науч.-практ. журнал Лазерная медицина. М.- Том 11.-выпуск 3,-2007.-С.44

8. Гельфонд М.Л., Арсеньев А.И., Барчук A.C. Фотодинамическая терапия с Фотодитазином в комбинированном лечении трахеобронхиального рака и рака пищевода // Рос. биотерапевт, ж-л. 2004. Т. 3. № 2. С. 49-50.

9. Горюнов C.B., Ромашов Д.В., Бутивщенко И.А. Гнойная хирургия: Атлас / — М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2004. — С. 9.

10. П.Гостищев В.К. Оперативная гнойная хирургия.- Монография.-М., Медицина.-1996.-415с

11. Дербенев В.А. лазеры, низкочастотный ультразвук и иммобилизованные протеиназы в комплексном лечении гнойных заболеваний мягких тканей/ Автореферат дисс. на соискание уч. степени док. мед. наук.-М. 1990.-30с;

12. Дербенев В.А., Морозенков И.А., Якубов Э.Ш., Шарифов А.Д. Фотодинамическая терапия осложненных форм рожи// Росс. Био-тер. жур.- 2007.- Т.6.-№1.- С.14

13. Дуванский В.А., Толстых М.П., Юсубалиев М.К. Способ лечения заболеваний мягких тканей с использованием фотосенсибилизатора "Фотосенс" и источника света лазерного и нелазерного источника // лазерная медицина.- 1999.Т.З, вып. 3-4.-С.80-82

14. Евтушенко В.А., Чойнзонов Е.Ц., Ашмаров В.В. с соавт. Фотодинамическая терапия рака с отечественным сенсибилизатором "Фотодитазин". Инновации РАН 2009: Материалы ежегодной научно-практической конференции.-Томск, 18-20 ноября 2009 Г.-С.480-485

15. Евтушенко В.А., Льготина Е.В, Ашмаров В.В. с соавт. Решение проблемы тяжелых кожных заболеваний с помошью фотодинамической терапии. Инновации РАН 2009: Материалы ежегодной научно-практической конференции.-Томск, 18-20 ноября 2009 г.-С.526-529

16. Кирш Ю.Э. Поли-1Ч-винилпирролидон и другие поли-К-виниламиды. М.: Наука, 1998. 252 с.

17. Клебанов Г.И., Сташкевич И.В., Чичук Т.В., Модестова Т.М., Владимиров Ю.А.// Влияние эндогенных фотосенсибилизаторов на лазер-индуцированный прайминг лейкоцитов крови// Биол. Мембраны.-1998.-Т.15.-№3.-С.273-285

18. Корабаев У.М. Фотодинамическая терапия гнойных, длительно незаживающих ран и трофических язв // Автореф. дисс. на соискание уч. степени док. мед. наук-М. 2000- С.33

19. Корабоев У.М., Толстых М.П., Дуванский В. А. Изучение антибактериальной активности ФДТ на заживление ран// Лазерная медицина.-2001.-Том 5.- Вып. 2.-С.23-27

20. Корабаев У.М., Толстых М.П., Гейниц A.B., Уринов А.Я. Фотохимическая терапия гнойных ран и трофических язв // Андижан-2005-С. 127

21. Красновский А. А. мл., Егоров С. Ю., Назаров О. В. и др. // Биофизика. 1987. Т. 32. № 6. С. 982.

22. КрасиовскийА.А. Итоги науки и техники. Сер.Современные проблемы науки и техники. ВИНИТИ, 1990, №3, с.63-135

23. Красновский A.A. Фотодинамическое действие и синглетный кислород. М.: Биофизика, 2004.-Т.49.-№2.-С.305-321

24. Кузин М . И ., Колкер И.И., Костюченок Б.М. Количественный контроль микрофлоры гнойных ран. Хирургия 1980; 11: 3-7

25. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция.-М., 1990.-С.592.

26. Макоев С.Н. Лазерная фотодинамическая терапия ожоговых ран// Автореф. дисс. на соискание уч. степени канд. мед. наук-Москва.2009.-22с.

27. Миронов А.Ф. Разработка сенсибилизаторов второго поколения на основе производных хлорофилла// Рос. хим. Журнал. 1998.-Т. XLIL-№5.-С.23

28. Миронов А.Ф. // Успехи Химии Порфиринов. СПб, НИИ Химии СпбГУ, 1997. Т. 1.С. 357

29. Общая хирургия // Под ред. С.И. Емельянова, М.Д. Дибирова, A.B. Федорова. М.: Медицинское информационное агентство, 2003. - 179181 с.

30. Ольшевская В.А., Зайцев A.B., Калинин В.Н. и др. // Положительное решение по заявке №2008129321/04.

31. Странадко Е.Ф. Современные возможности, проблемы и перспективы фотодинамической терапии в онкологии // Лазер-маркет.-1993- №7-8.-С.22-23

32. Странадко Е.Ф. Экспериментально-клиническая разработка метода лазерной фотодинамической терапии злокачественных опухолей с использованием отечественных фотосенсибилизаторов первого и второго поколения // Лазер-маркет.-1994.-№11-12.-С.20-26

33. Странадко Е.Ф., Толстых П.И., Тепляшин A.C., Корабаев У.М. Перспективы применения фотодинамической терапии для лечения гнойных ран // Проблемы неотложной хирургии // Сб. науч. тр.-М.-1998.-Том IV.-C.108-109

34. Странадко Е.Ф., Толстых П.И., Корабаев У.М. Фотохимическое воздействие на патогенные микроорганизмы, вызывающие гнойно-воспалительные заболевания мягких тканей // Материалы III Всероссийского симпозиума 11-12 ноября 1999г. Москва, 1999, стр. 8391

35. Толстых М.П. Комплексная оценка нового раневого покрытия дальцекс-трипсином-серебро в лечении экспериментальных гнойных ран // Дисс. на соискание уч. степени канд. мед. наук-М.-1999.-С.131

36. Толстых П.И., Клебанов Г.И., Шехтер А.Б. и др. Антиоксиданты и лазерное излучение в терапии ран и трофических язв. // Издательский дом "Эко"-М.-2002.-С. 13

37. Толстых П.И., Клебанов Г.И., Шехтер А.Б., Толстых М.П. Антиоксиданты и лазерное излучение в терапии ран и трофических язв // Издательский дом "Эко"-М.-2002.-С.234

38. Толстых П.И. Перспективные способы лазерной фотохимии для лечения некоторых онкологических и хирургических заболеваний // Медицинский вестник-2 мая.-2008.-С.15

39. Фотосенсибилизатор и способ его получения патент № 2276976 с приоритетом от 10.08.2004. Пономарев Г.В., Тавровский Л.Д., Зарецкий

40. A.M., Ашмаров В.В., Баум Р.Ф. Открытое акционерное общество Труппа компаний TP АНД".

41. Чиссов В.И., Скобелкин O.K., Миронов А.Ф., Смирнов В.В., Соколов

42. Шехтер А.Б., Кабисов Р.К., Пекшев A.B., Козлов Н.П., Перов Ю.Л. Экспериментально-клиническое обоснование плазмодинамической терапии ран оксидом азота// Бюллетень экспериментальной биологии медицины.-l 998.-Т. 126.-№8.-С.210-215

43. Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., и др. Влияние фотодинамической терапии на состояние иммунной системи и антиоксидантного статуса у онкологических больньїх// Рос. онкол. Жур.-1997.-№2.-С.27-32

44. Adili F., Statins Van Eps R.G., Karp S. J., Watkins M.T. et al. Diferential modulation of vascular endothelial and smooth muscle celi function by photodynamic therapy of extracellular matrix // J. Vase. Surg.-1996.-V23.-P.698-705

45. Agawal R., Athar M., Bickers D.R., Mukhtar H. Evidence for the involvement of singlet oxygen in the photodestruction by chloroaluminum phthalocyanine tetrasulfonate. Biocytm biophys res commun 173: 34-41 (1990)

46. Agarwal M.L., Clay M.E., Harvey E.J., Evans H.H., Antunez A.R., Olenick N.L. Photodynamic therapy induces rapid cell death ba apoptosis in L5178 mouse lymphoma cells. Cancer res 51: 5993 (1991)

47. Alexandridis P., Holzwarth J.F., Hatton T.A. // Macromolecules. 1994. V. 27. № 9. P. 2414.

48. Baxter C .R., Curreri P. W. the control of burn wound dy use guantitative bacteriologic studies and subbecher clysis with antibiotics // Surg. Clin. N. Amer. 1973. Vol. 53, № 7. - P. 1500-1519

49. Bernardi P.: Modulation of the mitochondrial cyclosporine A-sensitive permeability transition pore by the proton electrochemical gradient. Evidence that the pore can be opened by membrane depolarization. J Biol Chem 267: 8834-8839 (1992)

50. Bernardi P., Scorrand L., Colonna R., Petronilli V., Di Lisa F. Mitichondria and cell death. Mechanistic aspects and methodological issues. Eur. J Biochem 264: 687-701 (1999)

51. Bertoloni G., Salvato B., M. DallAcqua., Vazzoler M. and Jori G. Hematoporphyrin-sensitised photoinactivation of Streptococcus faecalis. Photochem. Photobiol.-1984.-V.39.-P.811-816

52. Bertoloni G., Rossi F., Valduga G., Jori G. et al. Photosensitising activity of water- and lipid-soluble phthalocyanine on prokaryotic and eukaryotic microbial calls. Microbios.-1992.-V.71.-P.33-46

53. Bertoloni G., Sacchetto R., Jori G., Vernon D.I. and Brown S.B. Protoporphyrin photosensitization of Enterococcus hirae and Candida albicans cells. Laser Life Sci.-1993.-V.5.-N4.-P,267-275

54. Boyle R.W., Dolphin D. Structure and biodistribution relationships of photodynamic sensitizers. J. Photochem. Photobiol. 1996; 64: 469-485

55. Capella M., Menezec S. // Int. J. Radiat. Biol. 1992. - Vol. 62 (3). - P. 321326.

56. Cal J., Yang J., Jonts D.P. Mitochondrial control of apoptosis: the role of cytochrome. Biochim Biophys Acta 1366: 139-149 (1998)

57. Castedo M., Ferri K., Roumier T., Metivier D., Zamzami N., Kroemer G. Quantization of mitochondrial alterations associated with apoptosis. J Immunol Methods 265: 39-47 (2002)

58. Daugas E., Nochy D., Ravagnan L., Loeffler M., Susin S.A., Zamzami N., Kroemer G. ApoptosisOinduction factor (AIF): a ubiquitous mitochondrial oxidoreductase involved in apoptosis. FEBS Lett 476: 118-123 (2000)

59. Devanathan S., Dahl T., Midden W. et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. -1990. Vol. 87. - P. 2980-2984

60. Dougherty T.J., Kaufman J.E., Goldfarb A. et al. Photoradiation therapy for the treatment of malignant tumors. Cancer Res. 1978; 38: 2628-2635

61. Dougherty T.J., Thoma R.E., Boyle D.G. et al. photoradiation therapy for the treatment of malignant tumors; role of the laser. In: Pratesi R., Sacchi C.A. ed. Lasers in photomedicine and photobiology. New York: SpringerVerlag, 1980:67-75

62. Dougherty T.J., Potter W.R., Weishaupt K.R. The structure of the active component of hematoporphyrin derivative. In: Dorion D.R., Gomer C.J., editors. Porphyrin localization and treatment of tumors. New York: Alan R Liss Inc. 1984: 301-314

63. Dougherty T.J., Gomer C.J., Henderson G. et al. Photodynamic therapy // J. Nat. Cancer Inst.-1998.-V.90.-P.889-905

64. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrates and functions during apoptosis. Annu. Rev. Biochem. 68: 383-424 (1999)

65. El-Mofy A.M. Vitiligo and Psoralens. Oxford: Pergamon Press, 1968. -147 p.

66. Figge F.H.J., Weiland G.S., Manganiello L.O.J. Cancer detection and therapy: affinity of neoplastic, embryonic and traumatized tissue for porphyrins and metalloporphyrins. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1948; 68: 181-188

67. Freitas I. Lipid accumulation: the common feature to photosensitizer-retaining normal and malignant tissue. J. Photochem. Photobiol. B. 1990; 7: 359-361

68. Giri U., Sharma S.D., Abdulla M. et al. Biochem. and Biophys. Res. Communs. 1995. V. 209. P. 698.

69. Gross A., McDonell J.M., Korsmeyer S.J. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis. Genes Dev 13: 1899-1911 (1999)

70. Grosserode M.H., Wenzel R.P. The continuing importance of staphylococci as major hospital pathogens // J. Hosp. Infect.-1991.-Vol.19.-p.3-17

71. Hamblin M.R., Newman E.L. On the mechanism of the tumor localising effect in photodynamic therapy. J. Photochem. Photobiol. B. 1994; 23: 3-8

72. Hausmann W.H. Die sensibilisierende Wirkung des Hamatoporphyrins // Biochem Z. 1910. - Vol. 30. - P. 276-316.

73. Hausmann W.H. Die sensibilisierende Wirkung tierischer Farbstoffe und ihre physiologische Bedeutung // Wien. Klin. Wochenschr. 1908. - Vol. 21. -P. 1527-1529

74. Hebeda K.M., Huizing M.T., Brouwer P.A. et al. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retrovirol. 1995. V. 1. P. 61.

75. Heier S.K., Heier L.M. Tissue sensitizers. Gastrointest Endoscopic Clin N Am 4: 327-352 (1994)

76. Henderson B.W., Fingar V.H. Relationship of tumor hypoxia and response to photodynamic treatment in an experimental mouse tumor. Cancer Res. 1987;47:3110-3114

77. Henderson B.W., Bellnier D.A. Tissue localization of photosensitizers and the mechanism of photodynamic tissue destruction (discussion 125-130). Ciba Found Symp. 1989; 146: 112-125

78. Hengartner M.O. The biochemistry of apoptosis. Nature 407: 770-776 (2000)

79. Iesce M.R., Cermola F., Temussi F. // Current Org. Chem. 2005. V. 9. № 2. P. 109.

80. Jonson P.G., Bellnier D.A., Henderson B.W. // Photochem. and Photobiol. 1993. V. 57. P. 50.

81. Jori G., Reddi E. The role of lipoproteins in the delivery of tumor-targeting photosensitizers. Int J. Biochem. 1993; 25 (10): 1369-1375

82. Kaplan M.J., Somers R.G., Greenberg R.H. et al. Photodynamic therapy in the management of metastatic cutaneous adenocarcinomas: case reports from phase V2 studies using tin ethyl etiopurpurin (SnET2). J. Surg. Oncol. 1998; 67 (2): 121-125

83. Kelly J.F., Snell M.E. Hematoporphyrin derivative: a possible aid in the diagnosis and carcinoma of the bladder//J. Urol. 1976; 115: 150-151

84. Kessel D. HPD: structure and determinants of localization . In: Kessel D., edit. Photodynamic therapy of neoplastic diseases. Boca Raton: CRC Press, 1990: 1-14;

85. Kessel D., Luo Y., Deng Y. et al. The role of subcellular localization in initiation of apoptosis by photodynamic therapy. J. Photochem. Photobiol. 1997; 65 (3): 422-426

86. Korbelik M. Induction of tumor immunity by photodynamic therapy. J Clin Laser Med Surg 14: 329-334 (1996)

87. Lenaz G. Role of mitochondria in oxidative stress and ageing. Biochim Biophys Acta 1366: 53-67 (1998)

88. Lipson R.L., Baldes E.J. The photodynamic properties of a particular hematoporphyrin derivative. Arch. Dermatatol. 1960; 82: 509-516

89. Lipson R.L., Baldes E.J., Olsen A.M. Hematoporphyrin derivative: a new aid of endoscopic detection of malignant disease. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 1961;42:623-629

90. Lipson Gray M.J., Baldes E.J. Hematoporphyrin derivative for detection and management of cancer. Proc. of IXth Internat. Cancer Cong. 1966: 323

91. MacMillan J.D., Maxwell W.A., Chichester C.O. Lethal photosensitization of microorganisms with light from a continuous-wave gas laser. Photochev. Photobiol.-1966.-V.5.-P.555-565

92. Malik Z., Hanania J. and Nitzan Y. Bactericidal effects of photoactivated porphyrins. An alternative approach to antimicrobial drugs // J. Photochem. Photobiol. B: Biol.-1990.-Vol.5.-p.281-293

93. Malik Z., Ladan H., Ehrenberg B., Nitzan Y. Bacterial and viral photodynamic inactivation // In "Photodinamic therapy medical applications". Ed. B.W.Henderson and T.J.Dougherty. Buffalo, Marcel Dekker Inc. N.Y.-1992.-p.97-l 13

94. Malik Z., Ladan H., Nitzan Y., Smetana Z. Antimicrobial and antiviral activity of porphyrin photosensitization. In Photodinamic therapy of cancer. G. Jori, J.Moan, W. Star, editors, Proc. SPIE. 2078.-1994.-p.305-312

95. Meyer-Betz F. Untersuchung über die biologische (photodynamische) Wirkung des Hamatoporphyrins und anderer Derivate des Blut- und Gallenfarbstoffs // Dtsch. Arch. Klin. Med. 1913. - Vol. 112. - P. 476-503

96. Mills J.C., Stone N.L., Pitman R.N. Extranuclear apoptosis. The role of the cytoplasm in the execution phase. J. Cell Biol. 146: 703-708 (1999)

97. Moan J., Petterson E.O., Christensen T. The mechanism of photodynamic inactivation of human cells in vitro in the presence of hematoporphyrin. Brit. J. Cancer. 1979; 39: 398-407

98. Musser D.A., Wagner J.M., Weber F.J., Datta-Gupta N. The binding of tumor localizing porphyrins to a fibrin matrix and their effects following photoirradiation. Res. Commun Chem. Pathol. Pharmacol. 1980; 28: 505-525

99. Nseyo U.O., Shumaker B., Klein E.A. et al. Photodynamic therapyusing porfimer sodium as an alternative to cystectomy in patients with refractory transitional cell carcinoma in situ of the bladder. J.Urol. 1998; 160 (1): 39-44.

100. Parerh S.B., Trakner K.B., Berlran Zacine et al. Laser in surgery and medicine // Photodinamic modulation of wound healing with BPD-Ma and CASP. 1991. Vol. 24. - P. 375-381.

101. Policard A. Etudes sur les aspects offerts par des tumeur experimentales examinee a la lumiere de woods // CR Soc Biol 1924; 91: 1423-1428

102. Raab O. Über Wirkung fluorescierender Stoffe auf Infusorien Biol. 1900; 39: 524-529

103. Rossi E., Van de Vorst A., Jori G. // Photochem.PhotobioL.1981. V. 34. № 4. P. 447.

104. Rasmussen D.S., Ward G.E., Figge F.H.J. Fluorescence of human lymphatic and cancer tissues following high doses of intravenous hematoporphyrin // Cancer. 1955. - Vol. 1. - P. 78-81.

105. Shikowitz M., Abramson A., Freeman A. et al. // Laryngoscope. 1998. -Vol. 108 (7).-P. 962-967

106. Schlegel R.A., Williamson P. Phosphatidylserine, a death knell . Cell Death Differ 8: 551-563 (2001)

107. Schneider J., Quentin P., Floyd R. // Photochem. Photobiol. 1999. - Vol. 70 (6). - P. 902-909

108. Soukos N. et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - Vol. 42, № 10. -P. 2592-2601

109. Specht K.G., Rodgers M.A. Depolarization of mouse myeloma cell membranes during photodynamic action. J. Photochem. Photobiol. 1990; 51: 319-324

110. Stennicke H.R., Salvesen G.S. Properties of caspases. Biochem. Biophys. Acta 1387: 17-31 (1998)

111. Stewart F., Baas P., Star W. What does photodynamic therapy have to offer radiation oncologists (or their cancer patients)? Radiother. Oncol. 48: 233-248 (1998)

112. Schwartz S., Absolon K., Vermund H. Some relationships of porphyrins, X-rays and tumors // Bull. Minn. Univ. School Med. 1955. - Vol. 27. - P. 7-13

113. Tadjiri H., Hayakawa A., Matsumoto Y., Yokoyama I., Yoshi-Da S.•J ,

114. Changes in intracellular Ca concentrations related to PDT-induced apoptosis in photosensitized human cancer calls. Cancer Lett 128: 205-210 (1998)

115. Tappeiner H., Jodlbauer A. Die sensibilizierende Wirkung fluorescierender substanzen. Leipzig: FCW Vogel 1907

116. Tappeiner H., Jesionek H. Therapeutische Versuche mit fluoreszierenden Stoffen // Munch. Med. Wschr. 1903. - Vol. 50. - P. 2042-2044

117. Tappeiner H., Jodlbauer A. Uber die Wirkung der photodynamischen (fluoreszierenden) Stoffen auf Protozoen und Enzyme // Dtsch. Arch. Klin. Med. 1904. - Vol. 80. - P. 427-437

118. Tsujimoto Y., Shimizu S. Bcl-2 family: life-or-death switch. FEBS Lett 466: 6-10 (2000)

119. Wilson M., Pratten J. Sensitisation of staphylococcus aureus to killing by low-power laser light. J. Antimicrob. Chemother.-1994.-V.33.-P.619-624

120. Wilson B.C. Photodynamic therapy for cancer: principales. Can. J. Gastroenterol. 16: 393-396

121. Wyld L., Reed M.W., Brown N.J. Differential cell death response to photodynamic therapy is depended on dose and cell type. Br J Cancer 84: 1384-1386 (2001)

122. Wyss P. History of Photomedicine // Wyss P., Tadir Y., Tromberg B.J., Haller U. (eds): Photomedicine in Gynecology and Reproduction. Basel: Karger, 2000.-P. 4-11

123. Wainwright M. // J. Antimicrob. Chemother. 1998. - Vol. 42. - P. 13-28

124. Пономарев Г.В., Решетников A.B., Гусева-Донская Т.Н., Швец В.И., Баум Р.Ф., Ашмаров В.В. Закрытое акционерное общество "Вета". Способ получения водорастворимых хлоринов патент № 2144538 с приоритетом от 22.11.1998.

125. Институт химической физики им. H.H. Семенова РАН (ИХФ РАН); ФГУ Государственный научный центр лазерной медицины Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию; ООО "Вета-Гранд".