Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Противоспалительные эффекты извлечений из листьев ивы корзиночной

На правах рукописи

КУЗЬМИН ВИКТОР ЮРЬЕВИЧ

ПРОТИВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗВЛЕЧЕНИИ ИЗ ЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск- 2004

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН и Томском военно-медицинском институте МО РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ

Пашинский

Виталий Глебович

Официальные оппоненты :

доктор биологических наук, профессор Зуева

Елена Петровна кандидат медицинских наук, доцент Чернова

Евгения Николаевна

Ведущая организация - Кемеровская государственная медицинская академия

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН по адресу: 634028 г. Томск, пр. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН.

Автореферат разослан « 12 » февраля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Защита состоится «

»

2004 года в

часов на

кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

Актуальность проблемы

Воспаление, как основной типический патологический процесс, составляющий основу большинства болезней человека, является центральной проблемой медицины (Дыгай А.М.,Клименко Н.А., 1992). Значительный прогресс в лечении воспалительных заболеваний был достигнут благодаря внедрению в клинику противовоспалительных средств стероидной и нестероидной структур (Кучеров В.Е., Лазарева Д.Н., 1993, Тринус Ф.П., Клебанов Б. М. и др., 1987). Однако, несмотря на создание большого арсенала современных противовоспалительных препаратов и их широкое использование в клинической практике, в настоящее время проблема изыскания новых эффективных и малотоксичных лекарственных средств, способных регулировать течение воспалительного процесса, остаётся весьма актуальной. Это связано с тем, что применение синтетических препаратов противовоспалительного действия в эксперименте и клинике сопровождается развитием выраженных побочных явлений и осложнений, недостаточной эффективностью и безопасностью их использования (Гребнева Л.С., Насонова СВ. и др., 1997, Гринько А.В., Муравьев Ю.В., 1998). Кроме того, современные противовоспалительные средства третьего поколения не всегда доступны широкому кругу людей вследствие своей высокой стоимости.

В связи с вышесказанным становится весьма перспективным поиск и разработка новых эффективных антифлогистиков среди препаратов растительного происхождения, обладающих достаточной активностью, низкой токсичностью, мягкостью действия, отсутствием депримирующего влияния, широким спектром фармакологических эффектов и возможностью длительного использования без опасности развития побочных эффектов (Барнаулов О.Д., 1999,3инченко Т.В., Стахив И.В. и др., 1990).

Большой интерес для исследования представляет салицилсодержащее растение — представитель семейства ивовых - ива корзиночная (Salix viminalis L.) Следует отметить, что основные С

препаратов из коры ивы: Кора ивы широко используется в народной медицине при множестве различных заболеваний в качестве противоязвенного, противовоспалительного, ранозаживляющего, антимикробного и седативного средства (Горбунова-Т.А., 1996; Корсун В.Ф. и др., 1998; Кучеров В.Е., Лазарева Д.Н., 1993; Пастушенков Л.В. и др., 1990). Большая сырьевая база, доступность сырья; высокая продуктивность, повышенная регенерационная способность, устойчивость к промышленным загрязнителям и широкие возможности культивирования делают иву перспективным объектом исследования.

Цель исследования -

Целью настоящей работы явилась оценка противовоспалительной эффективности извлечений из листьев ивы корзиночной.

Задачи исследования

1. Провести сравнительное изучение противовоспалительной активности водных и спиртовых извлечений из листьев ивы корзиночной и кислоты ацетилсалициловой (КАС) на разных моделях острого и хронического воспаления.

2. Оценить ранозаживляющие свойства вытяжек из листьев ивы корзиночной.

3. Исследовать гастрозашитные свойства извлечений из листьев ивы корзиночной на разных моделях патологии;

4. Изучить обезболивающую активность вытяжек из листьев ивы корзиночной в сопоставлении с анальгином и кислотой ацетилсалициловой.

5. Изучить стресспротективное действие вытяжек из листьев ивы корзиночной на разных моделях патологии (воспаление, язвообразование, острый стресс).

Научная новизна

Впервые экспериментально показано, что водные и спиртовые извлечения из листьев, ивы корзиночной обладают выраженной противовоспалительной и обезболивающей активностью, не уступая по своей эффективности КАС. Выявлено, что водные и спиртовые вытяжки из листьев растения проявляют ранозаживляющие и гастрозащитные свойства. Установлено, что извлечения из листьев ивы корзиночной обладают выраженными стресспротективными свойствами. Практическая значимость работы

Результаты экспериментальных исследований служат основанием для разработки лекарственных препаратов из листьев ивы корзиночной в качестве профилактического и терапевтического средства при заболеваниях, в основе которых лежит воспаление, а также при патологических состояниях пищеварительной системы.

Апробация работы

Основные положения и результаты работы доложены на VH Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2001), на 12-й международной конференции молодых учёных "Человек. Природа. Общество. Актуальные проблемы" (Санкт-Петербург, 2001), на юбилейной научно-практической конференции "Фитотерапия и фитореабилитация сердечно-сосудистых заболеваний" (Москва, 2002), на 4-й конференции молодых учёных СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2002), на научно-практической конференции "Достижения современной гастроэнтерологии" (Томск, 2001, 2002), на научно-практической конференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (Томск, 2001,2002).

В ходе исследования получены патенты Российской Федерации № 2187322 от 20 августа 2002 года "Противоязвенное средство" и № 2189828 от 27 сентября 2002 года "Противовоспалительное средство"

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 6 печатных работ, в том числе 1 — в центральном журнале, получено 2 патента РФ на изобретение.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 121 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 249 источников, из них 81 на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 3 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования являлись настойка, настой листьев* ивы корзиночной. Настой листьев ивы готовили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания (1989) . Настойку готовили методом мацерации (настаивания), в качестве извлекателя использовали 40 % этанол. Листья исследуемого растения были собраны в окрестностях г. Томска вдали от автомобильных, железнодорожных магистралей и промышленных предприятий в июне 2000 г. Собранное сырьё подвергали сушке в хорошо проветриваемом помещении, влажность высушенного сырья определяли по методике, описанной в Государственной фармакопее XI издания (1989).

Для оценки значимости основных действующих веществ листьев ивы корзиночной использовали кислоту ацетилсалициловую (ТаЬи1ейае Ас1Ш асе-1укаНсуНс1), которую вводили внутрижелудочно в терапевтической дозе для крыс 200 мг/кг, для мышей — 300 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали нестероидное противовоспалительное средство индометацин (1п-ёотеШастит рИагтасЫт) внутрижелудочно в дозе 5 мг/кг. Как препарат

сравнения использовали также плантаглюцид (Granule plantaglucidi) внут-рижелудочно в дозе 250 мг/кг, применяемый при лечении гипоацидных гастритов, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки с нормальной и пониженной кислотностью в период обострения и для профилактики рецидивов болезни; метилурацил (Methyluracilum) внутрижелудочно в дозе 360 мг/кг и сок алоэ (Succus aloes) внутрижелудочно в дозе 2,4 мл/кг, используемые в медицинской практике в качестве средств, стимулирующих метаболические процессы и ускоряющих процессы регенерации. Все вышеперечисленные дозы соответствуют таковым для человека с учётом коэффициентов пересчета для лабораторных животных.

Эксперименты проведены на 325 беспородных мышах обоего пола с исходной массой 18—20 г, 131 беспородных крысах обоего пола с исходной массой 150-180 г. Животные первой категории, полученные из отдела экспериментального биомоделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г.Страсбург, 1986). Для исключения сезонных колебаний изучаемых показателей все эксперименты проведены в осенне-зимний период.

Моделирование острого экссудативного воспаления проводили по методу С. A. Winter etal. (1962) субплантарным (под плантарный или подошвенный апоневроз) введением в правую заднюю лапку мыши 0,05 мл 1 % раствора каррагенина на изотоническом растворе хлорида натрия. Введение исследуемых препаратов осуществляли профилактическим курсом внутрижелудочно через зонд в течение 5 дней однократно, в последний день — за 1 час до индукции воспаления. Противовоспалительный эффект, оцениваемый по уменьшению отёка, выражали в процентах к контролю. Об интенсивности воспаления судили по проценту прироста и угнетения отёка.

Формалиновый отёк вызывали субплантарным (под плантарный или подошвенный апоневроз) введением в правую заднюю лапу крысам 0,1 мл 2% раствора формалина. Введение препаратов начинали за 1 час до инокуляции воспалительного агента и проводили на протяжении всего развития воспалительного процесса. В качестве критерия оценки противовоспалительной активности препаратов использовали выраженность гиперемии в условных единицах. Величину отёка определяли с помощью плетизмометра, измеряющего объём жидкости, вытесненной при погружении в нее конечности. Отёк и гиперемия фиксировались в динамике каждые 2 дня.

Иммунное воспаление вызывали полным адъювантом Фрейнда (фирма изготовитель ГС^ — взвесь БЦЖ в масле вазелиновом. Флогоген вводился крысам под плантарный апоневроз задней правой лапы крыс однократно в дозе 0,1 мл . Исследуемые препараты начинали вводить внутрижелудочно за сутки до инокуляции адъюванта и продолжали применять на протяжении всего развития воспалительного процесса. В качестве критерия оценки, так же как и при формалиновом воспалении, использовали выраженность гиперемии, а также процент прироста отека.

Влияние извлечений из листьев ивы корзиночной на хроническую фазу воспаления изучали на модели "ватной гранулемы". Стерильный ватный тампон весом 13 мг имплантировали с помощью иглы для взятия крови ^1-20x40-117 И25) крысам под кожу спины между лопатками. Исследуемые препараты вводили внутрижелудочно ежедневно (со дня имплантации) в течение 7 дней. Эффективность препаратов оценивали по степени угнетения пролиферации, выраженной в процентах к контролю. Пролиферативную реакцию оценивали по разнице между массой высушенной гранулёмы и исходной массой ватного тампона. Экссудативную реакцию оценивали по разнице между массой сырой и высушенной гранулёмы.

Регенераторную активность фитопрепарата исследовали на модели «лоскутной раны» . На депиллированном участке спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10x10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп с раны регулярно (через сутки) снимали. Исследуемые препараты ивы вводили внутрижелудочно, начиная с первого дня после нанесения раны, до полного заживления. Срок заживления ран служил критерием эффективности препаратов.

Исследование влияния водного извлечения из листьев ивы корзиночной на течение острого стресса.

Настой листьев ивы корзиночной в дозах 0, 35; 0,7; 1,25 мл/кг вводили через зонд в желудок ежедневно однократно в течение 5 дней, последний раз за 1 час до воздействия. В контрольной группе мыши получали эквивалентный объем дистиллированной воды. Острый стресс моделировали путем подвешивания животных за шейную складку. Оценку стресс орного состояния животных проводили по бальной системе Ю.И. Добрякова (1978). Антистрессорный эффект засчитывали, если разница в оценке стресса в опытной и контрольной группах составляла 2 и более баллов. Исследование гастрозащитных свойств. Для этого животных

декапитировали под наркозом и определяли степень изъязвления. Желудки извлекали, вскрывали по большой кривизне, промывали и макроскопически определяли число точечных (менее 1 мм), крупных (более 1 мм) и полосовидных деструкции; степень изъязвления желудка - общее количество язв, приходящееся на одно животное в группе, процент животных с язвами; индекс Паулса, как интегральный показатель количества деструкции .

Противоязвенную активность препаратов из листьев ивы определяли как соотношение индекса Паулса в контрольной группе к индексу Паулса в опытной группе. Исследуемые препараты из листьев ивы обладали гастрозащитным действием, если коэффициент противоязвенной активности был равен 2 и более баллов.

Обезболивающее действие вытяжек из листьев ивы корзиночной пределялось на модели «уксусных корчей». Мышам внутрибрюшинно вводили 0,75 % раствор кислоты уксусной из расчета 300 мг/кг массы тела. При этом у животных возникали «корчи» - судорожные сокращения брюшных мышц, сопровождающиеся вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины. Изучаемые препараты вводились мышам орально предварительным курсом в течение 5 дней, последний раз - за 1 час до введения альгогена. Эффективность действия препаратов из листьев ивы оценивалась по способности уменьшать количество «корчей» в течении 15 минут по сравнению с контрольными животными.

С этой же целью проводилось исследование контактно-тепловым методом на модели «горячей пластины», когда определялась исходная реакция мышей (время начала облизывания задних лапок) при помещении их на стеклянную пластинку с температурой 55 градусов С. Затем скорость этой реакции учитывалась после введения животным изучаемых препаратов. из листьев ивы. Контрольные животные получали в эквивалентном объеме дистиллированную воду. Анальгезирующий эффект определяли через 1 и 2 часа после последнего введения препаратов из листьев ивы корзиночной.

Обработка результатов экспериментов

Статистическую обработку полученных результатов проводили путём расчёта средней (X) и средней квадратичной ошибки (т). О достоверности различий судили, используя параметрический (критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий» Вилкоксона-Манна-Уитни) методы. Для сравнения результатов экспериментов, где показатели выражались в долях, достоверность определяли с помощью метода углового преобразования Фишера. Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu, Pep < 0.05. Результаты экспериментов на острую токсичность обработаны по Litchfield и Wilcoxon.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние вытяжек из листьев ивы корзиночной на развитие острого воспалительного отёка, вызванного каррагенином

Оценка влияния изучаемых препаратов на развитие воспалительной реакции у мышей показала, что в группе контрольных животных на пике каррагенинового воспаления (через 3,5 часа после действия флогогена) развившийся прирост отёка составлял 23,6 % от исходного уровня, превышая таковой у мышей, получавших кислоту ацетилсалициловую и исследуемые фитопрепараты. При этом наибольший антиэкссудативный эффект проявлялся у животных, получавших аспирин (снижение экссудации на 31,3 %) Спиртовое извлечение из листьев ивы в дозах 10,0; 5,0; 2,5 мл/кг достоверно снижало экссудацию на 22,5 - 25,8 % (табл.1).

Таким образом, водные и спиртовые извлечения из настойки листьев ивы корзиночной практически во всех исследуемых дозах угнетали экссудативную фазу воспаления, не уступая по активности синтетическому препарату сравнения — кислоте ацетилсалициловой.

Влияние настойки листьев ивы корзиночной на развитие формалинового воспаления.

Настойку листьев ивы в дозах 0,7; 1,25 и 2,5 мл/кг вводили лечебным курсом до полного исчезновения воспалительной реакции повреждённой конечности. Максимальное развитие отёка зафиксировано у животных всех групп на 1-е сутки после введения флогогена. В группе контрольных животных на пике воспаления (1-е сутки) формалиновый отёк достигал 162,0% от исходного уровня. При этом у животных, получавших кислоту ацетилсалициловую, наблюдался самый большой объём лапы, достоверно превышающий таковой в контроле в 1,4-1,5 раза (через 3 часа, на 1-е, 2-е и 5-е сутки эксперимента). В последующие дни показатели прироста объёма В последующие дни показатели прироста объёма конечности у этих крыс не отличались от контрольных значений. Анализируя полученные данные,

можно говорить об отсутствии противоотёчной эффективности КАС на данной модели воспаления. Настойка листьев ивы в дозах 1,25 и 2,5 мл/кг сдерживала развитие отёка, начиная уже со 2-х суток в 1,2 - 1,7 раза по сравнению с контролем, в 3 - 4 раза - в последующие сутки. У крыс, получавших исследуемые фитопрепараты, уже на 9-11-е сутки наблюдалась нормализация объёма конечности до уровня фона, в то время как в контроле отёк полностью ликвидировался только к 15-м суткам (рис. 1).

Таблица 1

ВЛИЯНИЕ НАСТОЙКИ ЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ НА РАЗВИТИЕ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТЕКА ЛАП У МЫШЕЙ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ КАРРАГЕНИНА (Х±Ш )

Группа наблюдения Доза (мг/кг, мл/кг) Количество' животных Прирост массы лапы (мг) Прирост отека конечности (%) Угнетение отека (%)

Контроль - 10 31,4+2,7 23,6+1,6 -

КАС 300,0 5 20,6+1,7 16,2+1,3 * 31,3

Настойка 15,0 5 24,2+2,1 20,3+1,7 14,0

Настойка 10,0 5 22,5+3,9 18,3+3,3 ** 22,5

Настойка 5,0 5 24,8+3,4 17,5+0,9 * 25,8

Настойка 2,5 5 21,6+3,6 17,0+3,2 28,0

Настойка 0,7 5 27,4+3,4 21,2+3,2 10,2

ПРИМЕЧАНИЯ: * различия достоверны по сравнению с контролем при Рк0,05: **Ри<0,05.

75

50

25

3 часа

Рис. 1 Влияние настойки листьев ивы корзиночной на развитие отека конечности у крыс после введения формалина. I - кошроль; 2- ацетилсалициловая кислота; 3 - настойка в дозе 2,5 мл/кг; 4 - настойка в дозе 1,25 мл/кг. По оси абсцисс - сроки наблюдения, сутки. По оси ординат - прирост отека конечности, %. -у- достоверное отличия от контрольных животных при Р1 < 0,05; Ри<_0,05.

Влияние вытяжек из листьев ивы корзиночной на развитие иммунного воспаления

При проведении эксперимента фиксировали только первичную реакцию развития артрита, которую наблюдали в течение 27 суток. Проведённые исследования показали, что прирост объёма воспалённой конечности крыс был выражен у контрольных животных уже через 3 часа после введения адъюванта с последующим нарастанием в первые сутки эксперимента (рис. 2). Из рисунка видно, что стабильным и выраженным противовоспалительным действием обладали спиртовые извлечения из листьев ивы в дозе 10,0 мл/кг. Это выражалось в достоверном снижении до 7-х суток наблюдения отёка конечности в 1,2 - 2,7 раза, а начиная с 16-х суток эксперимента - в 2 - 6 раз по сравнению с группой контрольных животных. Аналогичным образом тормозила развитие иммунного воспаления и> кислота ацетилсалициловая. Полное исчезновение воспалительной реакции под влиянием кислоты ацетилсалициловой и настойки листьев ивы корзиночной в дозах 5,0 и 10,0 мл/кг происходило на 27-е сутки эксперимента, в то время как в контроле мы так и не зафиксировали нормализации объёма конечности (рис. 2).

Влияние извлечений из листьев ивы корзиночной на развитие «ватной гранулемы»

Наряду- с исследованиями противоэкссудативных свойств была проведена серия экспериментов по изучению влияния извлечений из листьев ивы корзиночной на пролиферативную фазу хронического воспаления. Для

воспроизведения хронического пролиферативного воспаления использовали модель «ватной гранулёмы». Сравнительная оценка противовоспалительной активности показала, что развитие гранулематозной ткани тормозили все исследуемые извлечения из листьев растения. Так, настойка в дозах 1,25; 5,0 и 10,0 мл/кг угнетала пролиферацию гранулематозно-фиброзной ткани на 15,7-31,8% по сравнению с контрольной группой. При этом под действием

3 часа 1 3 7 11 16 18 23 27

Рис. 2. Влияние настойки листьев ивы корзиночной на развитие отека конечности у крыс после введения адъюванта Фрейнда. 1 - контроль; 2 - ацетилсалициловая кислота; 3 - настойка в дозе 10,0 мл/кг; 4 - настойка в дозе 5,0 мл/кг. По оси абсцисс - сроки наблюдения, сутки. По оси ординат - прирост отека конечности, %. + - достоверное различие с контролем при 14 <.0,05.

спиртовых извлечений из листьев ивы в 1,6 раза снижалась масса экссудата в очаге хронического воспаления (табл. 2). Таблица 2

ВЛИЯНИЕ НАСТОЙКИ ЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ НАРАЗВИТИЕ «ВАТНОЙ _ГРАНУЛЕМЫ» УКРЫС ( X + т)_

Группа наблюдения Доза (мг/кг, мл/кг) Число животных Масса сырой грануля-ционно-фиброзной ткани (мг) Масса сухой грануля-ционно-фиброзной ткани (мг) Масса экссудата (мг) Угнетение пролиферации (%)

Контроль - 9 151,4+8,6 39,6+1,6 111,8+7,0 -

Индометацин 5,0 5 120,9+13,4 30,8+2,5 + 90,1+11,3 22,2

Настойка 10,0 5 132,9+14,4 33,4+2,1 * 99,5+12,3 15,7

Настойка 5,0 5 95,4+8,5 * 27,0+0,9 * 68,4+8,0 * 31,8

Настойка 2,5 5 143,0+11,6 34,2+1,9 * 108,7+9,7 13,6

Настойка 1,25 5 118,0+5,6 * 30,6+0,9 * 87,4+4,8 * 22,7

ПРИМЕЧАНИЯ: * различия достоверны по сравнению с контролем при РЮ.Об.

Таким образом, извлечения из листьев ивы корзиночной оказывали выраженное действие на пролиферативную фазу хронического воспаления, замедляя развитие гранулём, проявляя при этом наиболее значительное антипролиферативное, противоотёчное действие.

Итак, на каждой из исследованных моделей воспаления отчётливо видно влияние изучаемых извлечений из лекарственного растения на различные стороны патологического процесса. В совокупности это даёт представление о действии биологически активных веществ листьев ивы корзиночной на разнообразные факторы, участвующие в воспалении, на характер протекания его отдельных фаз, что позволит в дальнейшем изучить

закономерности действия данного растительного средства на важнейшие патогенетические звенья воспалительного процесса.

Влияние извлечений из листьев ивы корзиночной на заживление раневого повреждения

Так как одним из фармакологических эффектов многих фитопрепаратов является способность усиливать процессы регенерации, интерес представляло исследование влияния вытяжек из листьев ивы корзиночной на заживление раневого повреждения у мышей на модели «лоскутной раны». Спиртовые извлечения из листьев ивы корзиночной вызывали значительное укорочение срока заживления раны у мышей (рис.3). Так, у животных, получавших вытяжки в широком диапазоне доз (0,35; 0,7; 1,25; 2,5; 5,0, 10,0 мл/кг), уже через 2-е суток достоверно уменьшался средний диаметр раны соответственно на 10,1 - 20,1 %, а через 9 суток этот показатель сокращался на 26,6 - 51,1 % и продолжал снижаться вплоть до 17-х суток, когда у 100% исследуемых животных происходило полное заживление раны. Настойка листьев ивы корзиночной в дозе 1,25; 2,5; 5,0 и 10,0 мл/кг оказалась наиболее эффективной - полная регенерация раны наступала уже на 15-е сутки, тогда как в группе контрольных животных она наблюдалась только на 22-е сутки.

При введении метилурацила и сока алоэ полное заживление раневого повреждения происходило на 17-е сутки. Под действием настойки листьев ивы корзиночной сроки заживления раневого повреждения укорачивались на 31,8 %, метилурацила и сока алоэ - на 22,7 % (рис. 3).

Таким образом, исследование показало, что спиртовые вытяжки из листьев ивы корзиночной оказали более выраженное влияние на заживление раневого процесса, чем препараты сравнения метилурацил и сок алоэ. Выявленная активация регенераторных процессов под действием спиртовых извлечений из листьев ивы корзиночной, вероятно, обусловлена наличием в них разнообразных биологически активных веществ, которые оказывают поливалентное действие на разные звенья раневого процесса.

Рис.3 Влияние настойки листьев ивы корзиночной на средний диаметр (мм) раневого повреждения у

мышей. 1 - контроль; 2 - сок алоэ; 3 - метилурацил; 4 - настойка в дозе 2,5 мл/кг. По оси абсцисс -сроки исследования, сутки. По оси ординат - диаметр раневого повреждения (мм). * - достоверные отличия от контрольных животных при Р1 < 0,05.

Изучение влияния водного извлечения из листьев ивы корзиночной на течение острого стресса

Целью исследования явилось изучение влияния настоя из листьев ивы корзиночной на течение острого стресса в эксперименте. Так как стресс -воздействие оказывает выраженное ульцерогенное действие, то исследовали влияние изучаемого препарата на язвообразование на модели нейрогенной язвы.

Результаты исследования противоязвенной активности водных извлечений из листьев ивы корзиночной представлены в таблице 3. Экспериментальные данные, полученные на модели нейрогенного язвообразования, показали, что у всех контрольных животных происходило значительное повреждение слизистой желудка, изменения во внутренних органах - инволюция селезёнки (в 2,5 раза), тимуса (в 2,2 раза), гипертрофия надпочечников (в 1,4 раза) (табл.4), то есть весь комплекс изменений, характерных для триады Селье. Предварительное курсовое введение мышам водных извлечений из листьев ивы предупреждало возникновение большей части изменений, вызванных стрессом, в основном за счёт снижения повреждений в слизистой желудка (табл. 3). Из таблицы видно, что настой листьев проявлял выраженный гастрозащитный эффект. Исследуемый фитопрепарат в дозах 0,35; 0,7 и 1,25 мл/кг в 3,2 - 30 раз снижал общее количество деструкции в желудке и в 2 - 5,9 раза уменьшал процент животных с повреждениями слизистой желудка. В условиях стресса препарат сравнения плантаглюцид не снижал общее число деструкции по сравнению с контролем.

Антистрессорное действие настоя листьев ивы корзиночной отмечено во всех исследуемых дозах, что проявлялось в значительном снижении общего количества деструкции в желудке и тенденции к возрастанию массы селезенки. Препарат сравнения плантаглюцид в дозе 250,0 мл/кг, оказывал антистрессорный эффект (глубина стресса понижались на 3 балла) в основном за счёт меньшей инволюции тимуса (табл. 4).

Таблица 3

ВЛИЯНИЕ НАСТОЯ ЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ НА ОБРАЗОВАНИЕ ЯЗВ ЖЕЛУДКА У МЫШЕЙ НА ФОНЕ ОСТРОГО СТРЕССА

Количество деструкций(Х +_т)

Группа наблюдения Доза (мг/кг, мл/кг) | Число животных точечные крупные общее количество Количество животных с деструкциями (% Индекс Паулса Противоязе нная активность

Контроль - 10 17,4 +0,6 0,8 ±0,7 18,2 + 3,15 100 18,2 -

Планта-глюцид 250,0 5 12,2+1,2 1,4 + 0,8 13,6 ±5,55 100 13,6 1,3

Настой 0,35 6 0 * 0 0,6 ±0,6 * 17 0,10 182

Настой 0,70 5 0 * 0 2,7 ±1,9 * 40 1,2 15,2

Настой 1,25 5 0 * 0 5,7 ±3,5 * 60 3,4 5,4

ПРИМЕЧАНИЯ: * различия достоверны по сравнению с контролем при Р1 < 0,05.

Таблица 4

ВЛИЯНИЕ НАСТОЯ ЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ НА ИЗМЕНЕНИЕ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ У МЫШЕЙ НА ФОНЕ ОСТРОГО СТРЕССА (X ±т)

Группа наблюдения Доза (мл/кг, мг/кг) Число животн _ых___ Масса органов, (мг) Глубина стресса (баллы)

селезенка тимус надпочечники

Интактные - 5 96,2 + 10,8 53,2 _± 7,3 5,6 + 0,4 0

Контроль - 10 38,0 ±2,45 24,6 ±1,8 7,7 + 0,6 19

Плантаглюцид 250,0 5 38,8+ 1,65 34,5 ± 5,1 7,4 ±0,3 16

Настой 0,35 5 40,9 + 2,4 23,8 + 3,7 7,1 ±0,4 14

Настой 0,7 5 53,7 ±7,4 * 24,0 ±.3,4 6,4 ±0,4 14

Настой 1,25 5 55,5 ¿4,8 * 22,5 ±.2,9 6,4 ±0,4 15

ПРИМЕЧАНИЯ: 'различия достоверны по сравнению с контролем при Р1 < 0,05,

Таким образом, водные извлечения из листьев ивы корзиночной обладали гастропротективной активностью. Наиболее выраженное защитное действие проявляла водная вытяжка в дозе 0,35 мл/кг. Стресспротективная активность присуща водным вытяжкам из листьев ивы корзиночной во всех исследуемых дозах, в основном за счёт предотвращения изъязвления слизистой желудка. Взятый в качестве препарата сравнения плантаглюцид на модели нейрогенного язвообразования не защищал слизистую желудка от повреждения. Назначение данного препарата приводило к снижению глубины стресса за счет меньшей инволюции тимуса (табл. 3,4).

Полученные данные позволяют констатировать, что извлечения из листьев ивы способны сочетать такие свойства как противовоспалительные, ранозаживляющие и антиульцерогенные, что несвойственно нестероидным противовоспалительным средствам, угнетающим и процесс репарации, и процесс заживления язвенных повреждений слизистой желудка.

Изучение обезболивающего действия вытяжек из листьев ивы корзиночной

Так как одним из основных компонентов воспалительной реакции является боль, то интерес представляло исследование обезболивающего действия извлечений из листьев ивы корзиночной на моделях «уксусных корчей» и «горячей пластины». Спиртовые вытяжки из листьев ивы и препараты сравнения анальгин и кислоту ацетилсалициловую вводили профилактическим курсом в течение 5 дней, последний раз - за 1 час до введения уксусной кислоты. Данные экспериментов представлены в таблице 5. Из таблицы видно, что анальгетическая активность проявлялась при назначении фитопрепаратов во всех исследуемых дозах, уменьшая количество «корчей» на 38,8 - 65,4 %. Анальгин и кислота ацетилсалициловая уменьшали аналогичный показатель на 56,4 - 59,6 % соответственно по сравнению с контролем.

На модели «горячей пластины» настойка листьев ивы в исследуемых дозах 0,35; 0,7 и 5,0 мл/кг через 1 час после введения достоверно увеличивала латентный период болевой реакции в 2,0 - 3,2 раза. Анальгин повышал данный показатель в 1,6 раза - через 1 час после введения и в 1,4 раза - через 2 часа. Кислота ацетилсалициловая через 1 час после назначения достоверно увеличивала время спокойного пребывания животных на горячей пластине в 1,4 раза по сравнению с животными контрольной группы. В то же время через 2 часа кислота ацетилсалициловая не увеличивала изучаемый показатель относительно животных контрольной группы. Через 2 часа после введения препаратов у контрольных, животных наблюдалось некоторое удлинение латентного периода болевой реакции по сравнению с первым тестированием. Настойка изучаемого растения в дозах 2,5; 1,25; 0,7; 0,35 мл/кг достоверно увеличивала период болевой реакции по сравнению с контрольной группой животных.

Таблица 5

АНАЛЬГЕЗИРУЮШАЯ АКТИВНОСТЬ НАСТОЙКИЛИСТЬЕВ ИВЫ КОРЗИНОЧНОЙ

(Х+т)

о .. Время на горячей пластине, (сек) Число «корчей»

Группа наблюдения Доза (мг/кг, мл/кг) Количеств животных Через 1 час после введения препаратов Через 2 часа после введения препаратов Через 1 час после введения препаратов

Контроль - 10 9,2+1,0 21,7 + 2,6 37,6 ±2,3

Анальгин 300,0 5 14,4+1,1 * 30,2 ±6,3 ** 15,2 ±3,3 *

КАС 300,0 5 12,8 + 0,05 * * 12,8 + 3,3 16,4 ±4,0 *

Настойка 10,0 5 18,0 + 3,8 * 23,2 ± 10,5 13,6 ±3,3 *

Настойка 5,0 5 21,4 + 5,7 * 23,4 + 9,9 15,4 ±4,6 *

Настойка 2,50 5 18,8 + 5,4 * * 44,6 ±9,0 * 23,0 ±6,1 *

Настойка 1,25 5 19,6 + 4,2 * 39,2 ±9,8 * * 20,0 ±2,1 *

Настойка 0,70 5 29,6 + 9,6 * 46,0 ±5,7 * 25,2 ±3,6 *

Настойка 0,35 5 28,6 + 8,1 * 33,0 ±7,3 *» 13,0 ±2,3 *

ПРИМЕЧАНИЯ: * различия достоверны по сравнению с контролем при Р1 < 0,05: ** Ри<0,05.

Таким образом, спиртовые извлечения из листьев ивы корзиночной во всех дозах оказывали выраженное обезболивающее действие при раздражении тканей уксусной кислотой, сравнимое с действием анальгина и кислоты ацетилсалициловой. При термическом раздражении болеутоляющий эффект наблюдался под действием настойки в дозах 0,35; 0,7; 1,25 и 2,5 мл/кг и не уступал по своему действию анальгину и превышал эффект от применения кислоты ацетилсалициловой.

Итак, в результате проведенных исследований было показано, что водные и спиртовые вытяжки из листьев ивы корзиночной, с одной стороны, оказывали значительное противовоспалительное,

антипролиферативное, анальгетическое действие, с другой - ускоряли заживление раневого повреждения и существенно защищали слизистую оболочку желудка. При этом настои и настойки этого лекарственного растения на фоне различных патологических процессов и экстремальных воздействий уменьшали глубину стресса. Широкий Л спектр фармакологической активности экстрактов из листьев ивы обусловлен богатым химическим составом изучаемого растения и связан с действием как салициловых гликозидов, так и флавоноидов и полифенольных соединений, дубильных веществ и витаминов, входящих в состав растения. Содержащиеся в растении биологически активные вещества оказывают антибактериальное, спазмолитическое, антиоксидантное,

мембраностабилизирующее действие, ингибируют синтез структурных компонентов коллагена, уменьшают проницаемость сосудов, улучшают микроциркуляторные процессы, энергетическое и пластическое обеспечение тканей.

ВЫВОДЫ

1. Спиртовые извлечения из листьев ивы корзиночной проявляют выраженную противовоспалительную активность (препятствуют

развитию отёка, вызванного каррагенином, формалином, адъювантом Фрейнда, уменьшают выраженность гиперемированности конечности, угнетают воспалительное разрастание гранулематозно-фиброзной ткани).Водные извлечения из листьев ивы корзиночной также проявляют противовоспалительную активность(препятствуют развитию отёка, вызванного каррагенином, формалином, угнетают воспалительное разрастание гранулематозно-фиброзной ткани) , не уступая по своей эффективности кислоте ацетилсалициловой.

2. Вытяжки из листьев растения ускоряют заживление раневого повреждения.

3. Извлечения из листьев ивы корзиночной обладают выраженным гастрозащитным эффектом (снижают количество деструкции на слизистой желудка, уменьшают число животных с повреждениями слизистой оболочки желудка) на фоне как острого, так и хронического воспаления. Водные извлечения, кроме того, уменьшают число животных с повреждениями слизистой оболочки желудка на модели нейрогенного язвообразования.

4. Вытяжки из листьев ивы корзиночной проявляют обезболивающие свойства (уменьшают восприятие болевых раздражений на моделях «уксусных корчей», «горячей пластины», в том числе на фоне воспалительного процесса конечности), сопоставимые с эффектами анальгина и кислоты ацетилсалициловой.

5. Извлечения из листьев ивы корзиночной проявляют существенную стресспротективную (препятствуют инволюции тимико-лимфатического аппарата, уменьшают гипертрофию надпочечников, сокращают количество деструкции на слизистой оболочке желудка) активность.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации

1. Противоязвенный эффект настоя ивы //Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии.-2000, сентябрь.-№10.-С.77-78.(соавторы Аксиненко С.Г., Зеленская И.Л., Поветьева Т.Н., Нестерова Ю.В., Пашинский В.Г.).

2. Влияние настоя ивы на течение острого стресса // Проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2000. - С. 3 - -4. (соавторы Аксиненко С.Г., Зеленская И.Л., Н., Нестерова Ю.В., Горбачёва А.В.).

3. Противовоспалительные свойства вытяжек ивы // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск,2001.-С.З-

4.(соавторы Аксиненко С.Г., Кузьмин В.Ю., Горбачёва А.В.).

4. Рациональная фармакотерапия: синтетические и природные средства // Восьмой Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». — Москва, 2-6 апреля 2001. - С. бОЦсоавторы Пашинский В.Г., Аксиненко С.Г., Горбачёва А.В., Зеленская И.Л., Н., Нестерова Ю.В., Поветьева Т.Н., ПершинаО.В.).

5. Противоязвенные свойства ивы корзиночной // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. - 2001, - № 12,13. - С. 65- 66.( соавторы Аксиненко С.Г., Зеленская И.Л., Нестерова Ю.В., Горбачёва А.В., Пашинский В.Г.).

6. Противовоспалительные свойства Salix viminalis L. // Растительные ресурсы. - 2002. - Т. 38. Вып. 1. — С. 108 — 111. ( соавторы Аксиненко С.Г., Зеленская И.Л., Поветьева Т.Н., Нестерова Ю.В., Пашинский В.Г.).

Патенты

1. Патент Российской Федерации на изобретение № 2187322 «Противоязвенное средство» от 20 августа 2002 года (соавторы

Аксиненко С. Г., Пашинский В. Г., Зеленская К. Л., Нестерова Ю. В., Поветьева Т. Н.,).

2. Патент Российской Федерации № 2189828 «Противовоспалительное средство» от 27 сентября 2002 года (соавторы Аксиненко С. Г., Пашинский В. Г., Зеленская К. Л., Нестерова Ю. В., Горбачева А.В.).

S -3 8 10