Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Ферментативная активность ротовой жидкости человека как показатель бактериального дисбаланса полости рта при патологии пародонта

п

На правах рукописи

ГАВРИКОВЙ ЛЮДМИЛ/! МИХАЙЛОВА!

ФЕРМЕНТАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ РПШОИ падкости ЧЕаовш КПК ПОКАЗАТЕЛЬ БАКТЕРИАЛЬНОГО ДИСБАЛАНСА ППЯОСТИ РТА ПРИ ПАТОЛОГИИ ЛАРОДОПТА

14,00.21 - Стоматологии;

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ывдицинсних наук

ТВЕРЬ - 19%

Работа выполнена в Волгоградской ыедицинской академии Научные руководители:

доктор биологических каик, профессор В.й.Храмов кандидат иедицинских наук, доцент Й.Т.Сегень

Официальные оппоненты: доктор медицинских нацк, профессор, заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наци, профессор

П.Б.Ьорооский П.! .Пстрикас

Ведущее учреждение - Смоленский государственный мединский институт

С) Л ¿>

Защита диссертации состоится " __1330 г

в ______ часов на заседании диссертационного Совета

К 004.38.01 при Тверской государственной медицинский

академии по адресу:

170000, Тверь, ул.Советская, 4

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тверской государственной медицинской академии

Автореферат разослан г

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских нацк,

доцент . fi.fi.3xTo

I I

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕИН. Актуальной задачей современной стоматологии является изучение патогенеза заболеваний пародонта Среди множества факторов, влияющих на развитие пародонтитов, особое место занимает бактериальная флора ротовой жидкости. Очевидно, что имеется причинно-следственная связь между развитием патологического процесса в тканях пародонта и нарушением бактериального баланса в полости рта в сторону преобладания патогенных форм микроорганизмов, которые характеризуется своими особенностями обмена веществ и, следовательно, своим специфическим набором ферментов. Таким образом, при воспалительных процессах в полости рта можно ожидать изменения активности тех или иных бактериальных ферментов, содержащихся в смеманной слвне [Р.Д.Барабам, 1901, Т.П.Вавилова с соавт., 19911. Другими словами, изменение ферментативной активности ротовой жидкости может служить показателем микробного дисбаланса в полости рта.

К сожалении, ферменты микроорганизмов.населявщих полость рта, изучены весьма фрагментарно; как правило, нсследовате-ли-стоматологи больве внимания уделяли ферментам, катализи-рувщим процессы разрушения тканей пародонта (протеазам, фос-фатазам, коллагеназе и т.д.) 1Р.Д.5араба1, 1975, К.Н.Вереме-енко с соавт., 1976, Л.В.Енемкова, 19821. Бактериальные ферменты, вяиявщие на кислотно-щелочное равновесие в полости рта, и нгравщие, по-видимому, некаловажнув роль в патогенезе пародонтитов и кариеса, изучены недостаточно. Среди таких типично бактериальных ферментов сланы, на нам взгляд, наиболее интересным является уреаза (КФ 3.5.1.5). Интерес к ее изучение вызван:

1) распространенностью в биологическом мире; '"

2) влиянием на'кислотно-мелочное равновесие - она смещает рН слюны в щелочною'Сторону; "

3) образованней аКвйака; который является предпочтительным источников'азот'А для питания бактерий полости рта:

4) субстрат (мочевина) в норме присутствует в слюне.

Ионимо уреазы, на кислотно-щелочное равновесие слюны: оказывают значительное влияние гликолитические ферменты, которые сме*ают рН ротовой жидкости в кислую сторону, ферментируя сахара до органических кислот. В отношении кислотно-щелочного равновесия в полости,,рта уреаза и гликолитические ферменты выступают как антагонисты, поэтому наг заинтересовал вопрос их совместного.изучения. Сведения об активности этих ферментов в смежанной слюне при патологии пародонта малочисленны, несистематизированы, носят противоречивый характер. Применяемый"методы исследования бактериальных ферментов в слюне, как правило, трудоемки и не учитывают специфики этой биологической жидкости. Поэтому актуальной является проблема поиска простых методов определения бактериальных ферментов в слюне, которые могли.¿ш быть применены в практике клинической стоматологии. '''

Принимая во внимание актуальность проблемы, была поставлена цель: совершенствование.мето|;а оценки тяжести патологического процесса в пародонте и возможности его прогнозирования на основании исследования.ь активности бактериальных ферментов смеяашшй слюны человека как показателя микробного дисбаланса полости рта. ' " '

В соответствии с поставленной цельи были определена сведущие задачи:

1. Изучить содержание мочевины и аммиака смешанной слоны в норне и при патологии пародонта.

2. Выявить корреляции между изменением уровня мочеаинн и аммиака в ротовой жидкости и степеньи тяаести пародонтита.

3. Исследовать активность уреазы и гликолитических ферментов слинн в норме и при патологии пародонта.

4. Выявить корреляции между изменением уреолитической и гликолитической активности смеванной слипы и степеньи тяжести пародонтита.

.1. Изучить динамику мочевины, аммиака, уреазы и гликолитических ферментов слюны в ходе лечения пародонтита.

б. Определить возможность применения анализа мочевины и аммиака смеванной слвны в качестве диагностических показателей при патологии почек.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Научная новизна заключается в той, что впервые определен уровень мочевины, аммиака, активность уреазы и гликолитических ферментов в ротовой жидкости у больных пародонтитом. Доказано, что изменение уровня мочевины и аммиака в смеяанной слюне больных пародонтитом служит показателем тяаести воспалительного процесса в пародонтв, а такжз имеет прогностическое значение в ходе лечения заболевания. Определено диагностическое значение анализа мочевины и аммиака в смеванной елвне при заболеваниях почек.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТ!

Практическое значение работы заклвчается в том, что был разработан и внедрен в учебный процесс акспресг.-метод определения уреолитической и гликолитической активности .ротово)*, жидкости, основанный на изменении вреиени смещения рН слюны при ее инкубации с соответствующими субстратами (мочевина, углевода) - акт внедрения от 25 октября 1995 г. Волгоградская медицинская академия. Было предложено применение данного метода для объективной оценки степени тяжести пародонтита и для прогнозирования лечения воспалительного процесса в наро-донте акт внедрения от 1 ноября 1995 г, городская стоматологическая поликлиника N 1 г.Волгоград. Разработан и. внедрен в практику здравоохранения метод определениЯ|.уровня мот . чевины и аммиака смешанной слины как диагностический тест на хроническув почечную недостаточность - акт внедрения от 21 ноября 1994 г, городская клиническая больница скорой медицинской помощи, г.Волгоград. Разработаны, методические рекомендации по определении ферментативной активности слины для студентов и врачей-стоматологов г'Чэисхимия.-слины", 1995 г.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ ...

Основные положения диссертации доложены на Межреспубликанской научно-технической конференции "Проблемы азотистого метаболизма" (Волгоград, 1990), на научных итоговых конференциях Волгоградской сельскохозяйственной академии (1991, 1992, 1993), на научных итоговых сессиях Волгоградской медицинской академии (1991, 1992, 1993), на заседаниях Волгоградского отделения Всероссийского биохимического об-

«¡ества С1931, 1995). По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 - в центральной научной печати.

ОСНОВНЫЕ ШИЕНИЯ, ВВНОСИМНЕ НР. ЗйЩИТН

1. Изменение содержания мочевина и аммиака в слвпе больных пародонтитои коррелирует с тяжестьп воспалительного процесса и связано с увеличением доли уреолитических микроорганизмов в ротовой жидкости.

2. Исследование уреолитической и гликолитической активности смеванной слюны может применяться в качестве диагностического теста для клинической оценки тяжести пародонтита,

3. Лечение пародонтита нормализует уровни ночевшш, аммиака, уреазы и ферментов гликолиза в ротовой жидкости пациентов пародонтитом, что служит объективным показателем купирования воспалительного процесса в пародонте.

4. Диагностическое значение анализа мочевины и аммиака смеванной елвны при заболеваниях ночек.

СТРУКТНРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 125 страницах мавинописного текста, состоит из введения» обзора литература, четырох глав собственных исследований с обсуждением, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 11 рисунками. Библиографический указатель включает 186 источников (в ток числе отечественных -83, зарубежных - 103).

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И ИЕТОДН ИССЛЕДОВАНИЯ

Дла решения поставленных задач нами проведено комплексное обследование и лечение 156 пациентов в возрасте от 16 до 60 лет, из них мужчин - 61, женщин - 95. Всех обследуемых мы разделили на 3 группы в зависимости от степени тявести воспалительного процесса в пародонте:

1-я группа - контрольная' - ее составили 35 практически здоровых лиц с интактным пародонтом,

2-я группа состояла из 42 больных генерализованным паро-донтитоа легкой и средней степени тяжести вне обострения,

3-я группа включала 79 пациентов с генерализованным па-родонтитом средней и тяжелой степени в стадии обострения 1в том числе абсцедирование).

Обследуемые больные не имели выраженной фоновой патологии. Всем пациентам проводилось обследование по определенному плану, который вкличал; 1) оценку стоматологического статуса по общепринятой методике и 2) биохимический апализ образцов смешанной слипы.

). Общестоматологическое обследование.

Для объективной оценки состояния тканей пародонта в процессе первичного осмотра и лечения больных использовали следующие специальные тесты: определение гигиенических индексов

• , .! -I »

по Федорову-Володкиной и по Greene-Ueraillion, проба 1иллера-Писарева, определение глубину пародонтального кармана по методике ВОЗ, папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (РКА) по Рагва и пародонтального индекса (ПИ) по Russell и рентгенологическое обследование.

2. Биохимический анализ смешанной слюны. Материалом для навих исследований слдмила ротовая яид-кость, кпторуш получали натощак, либо через 2-3 часа после приема пив;и путем обычного оплевывания в стеклякую пробирку. Среди мнояества других методов сбора цельной слины, данный способ привлек нас своей простотой и физиологичностьп, Для анализа не требовалось больвого объема слюны - всего 0,5 ьгл, поэтому стимуляция не применялась.

В сненанной слпне больных парсдонтитом, а такяе лиц контрольной группы определяли уровень мочевины с помощью тиосеми-карбазидной ыодификации реакции Фирона-Прчибальда к содеряэ-ние аммиака методом Несслера. Активность уреазы и скорость ферментации углеводов исследовали с помощью разработанной нами простой экспресс-методики, основанной на изменении цвета некоторых кислотно-щелочных индикаторов при инкубации слюны с соответствующими субстратами (иочевина, углеводы). Для работы использовали фарфоровые пластинки с углублениями (лунками). В лунку вносится по 0,1 мл слюны и раствора субстрата и сразу яе 0,02 мл раствора индикатора. Для сравнения результатов в одной из лунок ставится контрольная проба (по 0,1 мл слипы и воды и 0,02 мл раствора индикатора). Пластинки с заполненными лунками инкубируются в теркостате при 37 С и через десятиминутные интервалы читаются результаты опыта (есть пи изменение окраски пробы),

В образцах с мочевиной под действием микробной уреазы идет реакция гидролиза мочевины,накапливается аммиак, и цвет пробы изменяется до красного (в случае с феноловым красным и бромкрезолоЕыа пурпурным) или синего (в случае с бромтимоло-внм синим).

В образцах с углеводами за счет каскада гликолитических

реакций накапливается лактат и другие органические кислоты, смешащие рН слпны в кислув сторону - цвет .проб со всеми индикаторами желтый.

Предложенный способ определения уреолитической и глико-литической активности смешанной слпны человека прост в исполнении, экономичен и воспроизводим, и может бить выполнен непосредственно на стоматологическом приеме.

Кроме того, активность уреазы количественно определялась по приросту аммиака, определяемого реакцией Несслера,

Статистическая обработка полученного материала проводилась в соответствии с требованиями медицинской статистики с использпзанием вычисления средних величин и среднеквадрати-ческих овибок.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБАЛДЕНИЕ

Для ревения поставленных задач нами проведена оценка стоматологического статуса обследуемых пациентов. Клинические данные сопоставлялись с индексами гигиены и воспаления. И больных пародонтитом легкой и средней степени тяжести вне обостренна наблюдалось увеличение значений индексов гигиены по Федорову-йилодкиной и по Егеепе-иегшППоп по сравнении с контролем в 2,1 и 3,4 раза соответственно. Индекс РИА составил 33, ?Л ± 1,-812, а ИИ - 2,12 ± 0,53, что в 2,0 ив 10,В -раз превыаает контрольные показатели соответственно. Проба Виллера-Писарева была положительной у всех пациентов данной группы,

После проведенного противовоспалительного лечения выявлялось достоверное снижение индексов гигиены по Федорову-Волод-киной и по Егеепе-исгвПНоп до -.1,42 ± 0,21 и 0,82 + 0,10

соответственно, Индекс РМЙ уменьвился после лечения на 32,5%, индекс ПИ - на 50,92.

При поступлении в клинику больные 3 группы - пародонтит средней и тяжелой степени в стадии обострения - имели следующие показатели: проба Киллера-Писарева была положительной у всех пациентов. Гигиенический индекс пп Федорову-Володкипой был равен 4,13 ± 0,42, по Ёгеепе-УегаППоп - 2,18 ± 0,61, индекс РИА - Ь'1,0а ± 2,04, индекс ПИ - и,03 ± 0,41, т.е. у больных 3 групп» отмечается значительное ухудшение гигиены полости рта и рост показателей индексов воспаления десны.

После проведенного лечения у больных пародонтитом 3 группы отмечалось значительное цменьвение значений индексов гигиены ¡та Оедорову-йолодкиной до 1,54 + 0,00 и по Егеепе-КегаППоп до 0,95 ± 0,15. Индекс РЫй снизился на 21,1 7. но сравнении с таковым до лечения, а индекс ПИ - на 51,3%,

С целью выявления роли мочевины и аммиака смежанной слюны а патогенезе заболеваний пародонта, мы определали их содержание я ротовой «гщкости больных пародонтитом различной степени тяжести. Уроееио мочевин:* у лиц контрольной группы поставил 3,0! л 0,10 имель/л. У больных 2-й группы содержание мочевины в слюня снижалось ка 192 и составляло 2,43 ± 0,11 ммояь/л. 3 пациентов 3-й группы концентрация мочепинн уменьжалась до 1,12 ± 0,21 ныоль/л, что было в 2,? раза ниже контроля. Следовательно, выявлено достоверное укеньвение концвнтрации мочевины слюны в зависимости от степени тяжести пародпктита.

Уровень аммиака в скежанной слюне у лиц контрольной группы составил 3,82 1 0,21 ммоль/л, а у больных пародонтитом легкой и средней степени тяжести вне обострения количест-

во аммиака в слюне увеличилось до 5,23 +0,61 ммоль/л, что в 1,4 раза больае контроля. Но самые высокие значения аммиака ,в ротовой жидкости наблюдались при обострении пародон-тита в рольных З-й' Группы - 3,43 1 0,21 миаяь/л, что в 2,6

раза преяыаает показатели здоровых лиц. Таким образом, выяв-

- , , | • . , • 1

лено достоверное увеличение концентрации аммиака в смешанной слюне пациентов пародонтитом соответственно стенени та*ести воспалительного процесса в тканях пародонта. ;

Гак«е мн исследовали динамику.уровней мочевины и аммиака ротовой еидкости в процессе лечения больных пародонтитом. Содераание мочевины слюны после лечения у больных пародонтитом легкой и средней степени тягести вне обострения составила 2,Й2 ± 0/22 ммоль/л, а у болышх пародонтитом средней и тявелой степени в стадии обострения концентрация мочевины розовой жидкости после лечения увеличилась до 2,7! ± 0,09 ._;ммоль/л, т.е. наблюдается тенденция к нормализации количества мочевины в слвне после лечения.

9 пациентов 2-й Группы в результате проведенного лечения происходит снижение аРовня анвиака; в смееанной сляне до 4,01 ± 0,31 ыиоль/л, т.е. в 1,3 раза по сравнении с исходным показателе*. И больных пародонтитом 3-й группы концентрация аммиака в слюне уменьшается с 9,43 £ 0,21 ммоль/л до 4,21 + 0,52 миоль/л, т.е. почти возвращается, к уровню контрольной группы.

Таким образом, выявлено, что лечение пародонтита нормализует уровни мочевины и аммиака в рохо^ой^мидкости пациентов и, следовательно, определение содерзания мочевины и аммиака п слнше больных пародонтитом в ходе лечения мовет служить объективным показателем купирования воспалительного процесса.

Представленные данные показывэят, что у всех больных па-родонтитом происходит уменьаение содерЕаняа ыочевипы и увеличение уровня аммиака в ротовой жидкости по мере ухудаения течения заболевания, что связано, по-видимому, с изменениями в количестве и составе . микрофлоры слены, выражающимися в увеличении микроорганизмов - продуцентов урказы, которые ис-пользуат мочевину слины.в качестве субстрата.

Для подтверждения данного предположения мы исследовали активность уреаза ротс?рй жидкости больных пародонтитом. йреазнад активность смешанной сланы здоровых лиц составила Г'.34 + 0,2!5 йкмоль а»ниака/л*нин. Я больных 2-й группы уреаз-ная активность с ляпы колебалась в пределах от ?,31 ± 0,12 мямоль эймийкз/д*мин до 9,54 ± 0,32 мямиль аикиакл/ля-мин, составляя в среднем 8,12 + 0,?3 мкиоль анниака/лкнин, т.е. в 1.3 раза'выяе,-чем в :-к£ЩРо.|2Ьной группе. У больных пародонтитом средней и тякеяой степени в стадии обострения, активность фермента в ротовой жидкости возрастала примерно в 4,? раза ио отношении к контроля, и составляла 30,02 + 3,01 акиоль аимиака/л*миц, т.е. отмечено рпзноо-увеличение активности уреазн у Сольных дри обострении воспалительного процесса в (ирод'шге,

Аналогичные результаты получена и при определении времени смешения рН слшш в челочнуп сторону при инкубации слены с мочевиной. Э лиц контрольной группы время заметного смещения рН слипы в чолоччув сторону при ее инкубации с мочевиной равнялось 21,0 + 2,0 шш. 9 больных пародонтитом 2-й группы это'йреия сокращалось до 15,0 ± 1,0 мин., т.е. в 1,4 раза по сравнению с контроле». 3 пациентов 3-й группы этот показатель снижался до 10,0 ± 1,0 мин., т.е. было почти .. вдвое меньве, чем у здоровых ив !,5 раза ниже,чем у больных 2-й

группы, Таким образов, выявлено укеньненне времени, требуемого для смещения рН слвнн при инкубации ее с мочевиной, в соответствии со степенью тяжести пародонтита.

Исходя из представлений о том, что активность уреазы смеванной сланы может определять тяжесть воспалительного процесса в тканях пародонта, мы сочли целесообразным сопоставить активность этого фермента в ротовой жидкости с количественными показателями воспаления пародонта, определяемыми с помощью индексов Plift и Пй. Результаты представлены в таблице 1

Таблица 1

Взаимосвязь пародонтальных индексов и активности уреазы смеаанной слен.ч у больных пародонтитом (М ± а)

Группы ! РКА, ! ПИ ! Зреаза, !Бремя сиеце-обследо! 7. ¡ ¡мкмольНН^/лжм^.ия рН слшш,

ванных ! í ! ¡ мин

1-я : 12,50+1,50 ! 0,20+0,04 ! 5,25 ± 0,25 ¡ 21,0 ± 2,0

2-я I 33,24+1,80 ! 2,12+0,53 ! В,02 ± 0,71 ! 15,0 + 1,0

3-я ! 61,08+2,01 ¡ 5,03+0,41 130.0Я ± 3,58 ! 10,0 ± 1,0

Iii i

■ ti i

Данные таблицы 1 убедительно показывакт, что у обследованных всех.групп имеется положительная корреляция мевду ак-тивностьв уреазы в ротовой жидкости и индексом РМА, т.е. наблвдается статистически достоверное Ср < 0,01) повышение активности уреазы по мере увеличения значений РИА, Была выявлена также прямая корреляция между активностью уреазы и значениями индекса ПИ. Анализ полученных данных показывает, что

с развитием воспалительных и деструктивных процессов в паро-донте, о чем свидетельствует повышение индекса ПИ с 1,5 до 5,0 и более, активность уреазы ротовой жидкости возрастает примерно з 1,5 - 5.0 раз.

Представляет интерес и сравнение скорости изменения рН слены при ее инкубации с мочевиной я данных РНЯ и ПИ. Как видно из таблицы 1, наблюдается отрицательная корреляция неяду значениями РЙЙСг -- - 0,89, р с 0,01), ' ПИ(г = - 0.72, р < 0,001) и временем смоления рН едини.

Р процессе исследования динамики уровня уреазы до и после лечения выязлечо снияение цреазной активности ротовой яидкости у больных яародонтнтпн. У больных 2-й группы данный показатель уменызился в 1,2 раза, а а пациентов 3-й группы - в 3,3 раза па сравнению с исходным уровнен.

После лечения время изменения рН сланы увеличивается на 5,0 минут у больных пародонтитоы как во 2-й, так и в 3-й группах и составляет 20,0 ± 1.0 и 15,0 + 1,0 минут соответственно.

Наблюдение, что многие пародпнтипатпгэннне микробы обла-дант высокой уреолитической активностью, привело к предположению, что увеличение активности уреазы в ротовой яидкости мохет слувить индикаторов развития и прогрессированиа заболеваний пародонта. Представленные данные показнвавт, что оп-редчвейкс-й стадии развития воспалительного процесса в паро-донта соответствует достоверное возрастание активности преа-зы в ротовой жидкости больных пародонтитиа, что хорошо согласуется с представлениями о роли уреазн в механизме развития заболеваний пародонта. Значительное увеличение уреаз-ний активности сланы у больных пародонтитом средней и тяжелой степени в стадии обострения объясняется тем, что на зтой

стадии заболевания наблюдается наибольший дисбаланс микрофлоры полости рта в сторону увеличения числа уреолитических бактерий, По мнению некоторых авторов (Е.В.Боровг.кий с соавт. 1931) при гнойном воспалении народонта в слюне резко увеличивается количество таких микроорганизмов, как пептострепто-кокки, вейлонеллы, бактероиды, актиномицеты, которые обладают значительной уреолитической активностью.

На следующем этапе исследования определяли активность глиЕолнтических ферментов слюны, инкубируя глюкозу с ротовой жидкостью больных пародонтитом. 9 лиц контрольной группы время смещения рН слюны в кислую сторону составляет, в среднем, 20,0 + 2,0 мин. Н больных пародонтитом 2-й группы время изменения окраски пробы увеличивалось в 1,2 раза по сравнении с контролен и составляло 25,0 * 1,0 мин. 9 пациентов 3-й группы при обострении воспалительного процесса в тканях паро-донта изменение цвета индикатора при инкубации слюны с глюкозой начиналось только через 40,0 ± 2,0 иин, что в 2 раза пребывает контрольные цифры и в 1,6 раза больве показателей 2-й группы.

Таким образом, у всех больных пародонтитом выявлено увеличение времени, необходимого для сиещения рН слюны в кислую сторону при инкубации с глюкозой в соответствии со степенью тяжести воспалительного процесса. Однако, эти показатели наиболее выражены у больных 3-й группы, что объясняется, по-видимому, тем, что при обострении воспаления в пародсште сниаается активность микроорганизмов, ферментирующих глюкозу 3 больных 2-й группы в стадии ремиссии эти цифры незначительно отличаются от контрольных, т.к. при хронических воспалительных процессах.в полости рта не происходит существенных изменений в количестве и составе микрофлоры слюны и.

следовательно, они не могут оказывать влияния на рН слюны ротовой жидкости, что согласуется с.данными литературы.

Для подтверждения данных предположений мы провели сравнительна» оценку показателей вре.ченн изменения рН слшиы при инкубации с мочевиной и глшозс-й. Результата показали, что у лиц контрольной группы происходит почти однивр^асниое изменение окраски кйслотно-велочиаго индикатора прд инкубации сланн с мочевиной и глюкозой (21.0 ± 2,0 и 20.0.1 2.0 иин, соответственно), И больных пзродонтягоа обеих грдпл эиззлена обратила корреляция каждц арекзнен смещения рИ сланы кра ае инг;дбации с ночавино^ и глюкозой, причем пациента 3-й группы с высокий уровня* воспаления яародзага нзизненно локазываят иаиоолче быстрее изазаение цнзтй в пробе с »пчеванэй. у. на-.иболев аедлииноб •! пробе с глакэзой.

Ингоресзк вопрос взаимосвязи показателей пророста ферментации углеводое и егшчпо ислользузмнх клинических индексов оценки уровня воспалительк'зг« процесса л тканях пародои-,та - РИй, и Пй. Сравнение скорости изменения чеете ийхдЗкруч--мнх о.Оуазцов, садаш с. г-жозеЗ.я ззапах , РИй и Пй показало взаимосвязь этих яараиетрои.. Наня бала заявлена голавитель-ная корреляция между значениями РЯР. и ПИ и заж>д.с-?внзх -к»-щеназ рЛ слюна в кислее сторону.

С целый изучения возможности применения данного аетода определения г^иколитической активности сиеданной слеяы а условиях контроля за течением Йолезки тл определили изменения окраски индхяатора о прг.бах елгнк с гхякозоа в ходе лечения яародонтнта. У больных паридонтитом 2-Л группы после лечения происходило незначительное снижение времени, необходимого для смещения рН слипы, до 21,0 ±1,0 кин, 'Л пациентов 3-й группы отмечалось после лечения уменьжение. времени изке-

нениа окраски индикатора в пробе слпнк с глюкозой с 40,0 ± 2,0 мин. до 24,0 ± 2.0 мин., т.е. почти в 2 раза.

Следовательно, определение скорости ферментации углеводов в ротовой мидкости больных пародоптиток, как и определение актизности уреазы, мовет иметь и определенное прогностическое значение е ходе лечения.

Предложенный способ определения ферментативной активности смеианной слюна человека имеет рад преимуществ", он прост в исполнении, не требует какого-либо приборного обеспечения и мовет быть выполнен не отходя от стоматологического кресла, т.е. экономичен ко времени, воспроизводим. Он находится в русле неинЕазивнкх экспресс-методик, к которым всегда проявляет интерес практическая стоматология. Все это предполагает его потенциал в качестве клинического и исследовательского метода.

Простота и доступность забора смеяанной слюны делает возможным использование последней в качестве диагностического объекта не только при патологии полости рта, но и при обчей патологии организма. Например, при уремических состояниях следует овидать повыиения уровня мочевины и в слане. Действительно, при обследпяании 23 пациентов нефрологической клиники с разной степенью хронической почечной недостаточности мы обнаружили заметное повыяение уровня мочевины и аммиака в смеванной слюне, хорошо коррелирующее с содерванием мочевины в крови и степенью почечной дисфункции. Процедура гемодиализа нормализовала концентрации мочевина в ротовой нидкости. Таким образом, определяя содергание аочепинк и аммиака а ротовой видкости, мы мсвем, в известкой степени, оцепить нару-вение функции почек, не прибегая к процедуре взятия крови из вены или из пальца, что весьма привлекательно в детской нефрологической клинике.

Итак, нави исследования показали несоиненнуп роль бактериальных ферментов ротовой жидкости в патогенезе заболеваний пародонта. В отнояении уреазы хотелось бы отметить два обстоятельства. Во-первых, действие уреазк ног.чо, в известной степени, рассматривать как нейтрализуйте кислотообразующий эффект гликолитическизг ферментов. Во-вторых, иреаза. превращая ночевинд в аммиак, выполнлет вавпуш функции производителя легкоусвсяемого азота для питания микробов полости рта, т.к. именно аммиак является предпочтительным источником азота для бактерий и моает сыть ассимилирован в разнообразные соединения. Содержание аммиака в ротовой жидкости примерно на три порядка выве, чек его уровень в крови и тканях организма. Очевидно. что в полости рта ':уэ»ествуят достаточно активные ферментные систем« синтеза аммиака, одной из которых является,бактериальная урезза.

Проведенные исследования позаоляат рекомендовать определение активности уреазы и глаколитических фермэнтов слипы в качестве показателя микробного дисбаланса в полости рта при патологии пародонта.

выводи

1. Выявлено достоверное уменьшение содержания мочевины и увеличение уровня аммиака в ротовой жидкости у больных наро-донтитом, коррелирующее с т.чжестьЕ патологического процесса,

2. Наблащаемые изменения связаны с увеличением доли уреолитических микроорганизмов в ротовой жидкости лиц с заболеваниями пародонта.

3. Установлено достоверное увеличение уреазной активности слюны с 6,34 -ь 0,23 мкмоль КИ^/л^мин у лиц контрольной группы до 30,02 + 3.61 мкмоль Ш^/л+мин в слшне больных с тякелой форыой пародонтита.

4. Показатели клинических индексов РМй и 1!й находятся в прямой корреляции с активностью уреазк слины и в обратной корреляции со скоростью ферментации углеводов.

5. Показатели дреолитической и гл.чколитической активности смеианной сльны могут служить объективным тестом для клинической оценки тяаести воспалительного процесса в паро-донте, а тачке использоваться для подтверждения эффективности лечения л определения прогноза заболевания,

В. Анализ мочевины и аммиака смеианной слюны иивет применяться как неинвазивннй метод клинической оценки хронической почечной недостаточности в нефрологической практике.

» <

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1, Предложено применение полуколичественного способа определения уреоли:тической и гликолитической активности смешанной слюны человека, основанного на изменении рН слшны при инкубации последней с соответствующими субстратами Сыочевина, углеводы) в качестве показателя микробного дисбаланса в полости рта, ' . г

2. Данный метод определения ферментативной активности ротопой жидкости рекомендуется использовать для клинической оценки степени тяжести пзродонтита, а также для прогнозирования его течения,

3. Рекомендовано применение метода пш)оделенйя мочевины и амуиака слюнн в качестве -и^гро^тичвского теста ча хпони1?ес ■ кую почечнуа недостаточность.

СПИСОК

печатных работ, опубликованных по теме диссертации

1. йыкиак слики и возможные источники его образования (Храмов Б.Й.) // Межреспубликанская научно-техническая конференция "Проблемы азотистого метаболизма": Тез.докл, - Волгоград.1990. - С.5Э-Б0.

2. К вопросу об уровне мочевины в слюне млекопитающих (Храмов В.П.) // Селекционные и технологические основы повы-вения продуктивности животных и птицы: Сб,науч.трудов,- Волгоград,1992. - С.91-92.

3. Количественное определение креатииина в слоне (йгев-ва Е.М.) // XII конференция молодых ученых: Тез.докл. - Волгоград,1392. - С,14-15.

4. Азотсодержащие компоненты ротовой жидкости человека // XIII конференция молодых ученых: Тез.докл. - Волгоград, 1393. - С?18—19.

5. Мочевина и аммиак в слюне больных при заболеваниях почек ГХрамов В.Д., Коваль fi.fi.) // Зрологиа и нефрология. -1994. - К 5. - С.41-43.

6. Ь'реазная активность сжеванной слены человека при заболеваниях пародокта (Храмов В.Й., Сягень И,Т.) // Юбилейный сб.науч.трудов ВИЙ. - Волгоград.1995. - С.170-171.

7. Биохимия слоны (Закревский В.И., Пименона Е.И.) //Метод.рекомендации для студентов. - Волгоград,1995. - 25 с.

8. Простой экспресс-метод определения уреолитической и гликолитической активности ротовой жидкости человека (Храмов В.А.) // Стоматология. - 1990. - N 1.