Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Фенотип лимфоцитов и состояниеопсонофагоцитарной системы, их коррекция при некоторых бактериальных инфекциях (ангина, сальмонеллез)

На правах рукописи

¿Я

Мустафин Ильшат Ганисвич

Фенотип лимфоцитов и состояние опсонофагоцитарной системы, их коррекция при некоторых бактериальных инфекциях (ангина, сальмонеллез)

14.00.36 - "Аллергология и иммунология "

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва -1999

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета.

Научные руководители: Заслуженный деятель науки и техники России, доктор медицинских наук, профессор А.Ю.Барышников доктор медицинских наук, профессор В.Х.Фазылов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор З.Г.Кадагидзе кандидат медицинских наук В.В.Свиридов

Ведущее учреждение — Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского

Защита состоится "21 " октября 1999 г. в 14 часов на заседании специализированного совета Д 001.38.01 при научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН по адресу: 103064, Москва, ул. Малый Казенный пер., д. 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН

Автореферат разослан % " 20" октября 1999 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

кандидат медицинских наук Н.Г.Кудрявцева

/1 А? _>.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Проблемы инфекционной иммунологии на сегодняшний день не менее актуальны, чем в предшествующие периоды научных исследований. Это связано прежде всего со стремительным развитием теоретической иммунологии и методических подходов к оценке иммунной системы человека. Новые данные в области клеточной иммунологии, в частности, механизмы межклеточного взаимодействия, процессы активации и пролиферации иммунокомпетентных клеток, роль рецептор-лигандных взаимодействий лимфоцитов, требуют нового подхода к оценке иммунных реакций при инфекционных заболеваниях (Ковальчук JI.B., Чередеев А.Н., 1990, 1995; Петров Р.В., Хаитов М.Р. и соавт., 1994, 1997; Покровский В.И., 1994).

Ангина и сальмонеллез являются инфекционными заболеваниями с вовлечением в патологический процесс лимфоидных образований ротоглотки и желудочно-кишечного тракта, относящимся к периферическим органам иммунной системы и участвующим в формировании местных и системных иммунных реакций. Высокая заболеваемость ангиной и сальмонеллезом, склонность к хронизации инфекционного процесса, частое развитие постангинозных осложнений и метатонзиллярных заболеваний, высокий процент формирования сальмонеллезного бактерионосительства способствовали исследованию роли иммунной системы в патогенезе данных заболеваний (Ляшенко Ю.И., 1982,1985; Ющук Н.Д. и соавт., 1991, 1993). Большое количество работ по оценке иммунной системы при ангине и сальмопеллезе посвященны лишь изучению количественных показателей основных популяций и субпопуляций лимфоцитов, не позволяющие судить о функциональном состоянии иммунокомпетентных клеток (ИКК) (Бабич Н.Ф., 1992; Мельников О.Ф., 1991; Пак С.Г., Турьянов М.Х., 1988; Рашидова P.A., 1981; Фролов В.М., Ющук Н.Д. и соавт., 1992, 1997). При этом данные исследования иммунной системы при сальмонеллезе и ангине остаются на сегодняшний день неполными и противоречивыми. Развитие гибридомной технологии позволило получить широкую панель моноклоналъных антител к дифференцировочным антигенам лейкоцитов (Барышников А.Ю., 1990, 1994, Филатов A.B., 1992; Lanier L.L., 1983, Barclay A.N. et al, 1993), что дает возможность изучения активационных процессов в лимфоцитах при помощи моноклональных антител (Legendre С., 1988; Van Seventer G.A. et al., 1991;; Павлюк A.C. и соавт., 1993; Ковальчук JI.B. и соавт., 1994). Однако для

исследования иммунного ответа при ангине и сальмонеллезе эти возможности не использовались.

Наличие иммунных дисфункций при ангине и сальмонеллезе способствовали разработке корригирующей терапии и поиску оптимальных иммунотропных препаратов (Фролов В.М. и соавт., 1992, 1997; Ющук Н.Д. и соавт., 1993; Волощук М.И. и соавт., 1989; Гурарий H.H. и соавт., 1985; Даминов Т.А., 1985; Зуева B.C. и соавт., 1991; Константинова Н.П. и соавт., 1985;; Мельников О.Ф.,1991; Павелкина В.Ф., 1995; Куликова И.Н. и соавт., 1998). Вместе с тем, создание новых препаратов с иммуномодулирующими свойствами создает основу дальнейшего совершенствования терапии инфекционных заболеваний, протекающих с иммунными дисфункциями. В Институте органической и физической химии им.акад.А.Е.Арбузова КФАН РФ синтезирован препарат пиримидинового ряда - ксимедон, обладающий широким спектром биологической активности (Цибулькин А.П. и соавт., 1986; Ибрагимов O.E., 1994; Хафизьянова Р.Х и соав., 1996) и системным иммунотропным действием (Слабнов Ю.Д., 1998). Опыт применения препарата в клинике инфекционных заболеваний (Гилмуллина Ф.С., Фазылов В.X.,1996; Кравченко И.Э., 1997; Фазульзянова А.И., 1997) в качестве иммуномодулирующего препарата позволили нам включить его в комплексную терапию ангины и сальмонеллеза.

Исходя из вышеизложенного определены цель и задачи наших исследований.

Цель исследования:

Выяснение диагностической значимости фенотипирования лимфоцитов с применением широкой панели моноклональных антител к активационным и дифференцировочным антигенам лейкоцитов, факторов опсонофагоцитарной системы в оценке иммунного ответа при некоторых бактериальных инфекциях (ангина, сальмонеллез) с обоснованием иммунотропной терапии.

Задачи исследования:

1 .Изучить фенотип лимфоцитов и факторы опсонофагоцитарной системы у больных ангиной в зависимости от кратности болезни и характера местного патологического процесса в динамике заболевания.

2.Определить фенотип лимфоцитов и состояние опсонофагоцитарной системы при гастроинтестинальном сальмонеллезе в зависимости от тяжести болезни и фазы инфекционного процесса.

3.Оценить клинико-иммунологическую эффективность нового отечественного иммунотропного препарата "ксимедон" при ангине и сальмонеллезе.

Научная попита исследования

1.Впервые дана характеристика фенотипа лимфоцитов по актнвационным и дифференцировочным антигенам лейкоцитов во взаимосвязи с факторами опсонофагоцитарной системы при ангине и гастроинтестинальиой форме сальмонеллеза в динамике заболевания.

2.Впервые установлено дифференцированно корригирующее влияние отечественного препарата "ксимедон" на клинико-иммунологические параметры у больных ангиной и сальмонеллезом.

Теоретическая значимость

1.Обоснована значимость фенотипирования лимфоцитов по маркерам активации в оценке иммунного ответа при ангине и сальмонеллезе в зависимости от активности и фазы инфекционного процесса.

2.На основании углубленного клшшко-иммунологического исследования установлен иммунокорригирующий эффект ксимедона при ангине и сальмонеллезе.

Практическая ценность

1.Рекомендовано включение в комплексное иммунологическое обследование определения маркеров активации лимфоцитов у больных ангиной и гастроинтестинальиой формой сальмонеллеза в динамике заболевания.

2.Представлено клинико-иммунологическое обоснование включения ксимедона в комплекс патогенетической терапии больных ангиной и сальмонеллезом.

Внедрение результатов исследования.

Разработанные практические рекомендации нашли применение в клинических инфекционных больницах N 1 и N 2 г.Казани, лаборатории клинической иммунологии Республиканского Центра по профилактике и борьбе со СПИД Республики Татарстан.

Материалы диссертации используются в преподавании темы "Ангина -диагностика, лечение и профилактика", "Особенности иммунной системы при кишечных инфекциях" на кафедре инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета.

Положения, выносимые на защиту

1.Применение метода поверхностной иммунофлуоресценции с моноклональными антителами к активационным и дифференцировочным маркерам лейкоцитов позволяет выявить особенности иммунного ответа у больных ангиной и сальмонеллезом в зависимости от тяжести, кратности

заболевания, характера местных воспалительных проявлений и фазы инфекционного процесса.

2.Иммунопатогенез бактериальных инфекций (ангина, сальмонеллез), протекающих с активным вовлечением лимфоидных органов, определяется не столько изменением количественного состава основных популяции лимфоцитов периферической крови, сколько изменением поверхностно-мембранных структур иммунокомпетентных клеток, характеризующих их функциональное состояние в различные фазы развития инфекционного процесса.

3.Включение отечественного лекарственного средства "ксимедон" в комплекс патогенетической терапии больных ангиной и оказывает положительное влияние на динамику клинических синдромов болезни с проявлением иммунотропного эффекта.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на конференции молодых ученых, посвященной 70-летию кафедры инфекционных болезней КГМУ (Казань, 1994), на научно-практической конференции молодых ученых КГМУ (1997), на обществе инфекционистов Республики Татарстан (Казань, 1997), на Всероссийской научно-практической конференции в г.Пензе (1997), на V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" в г.Москве (1998), на предметно-проблемной комиссии КГМУ по эпидемиологии, микробиологии и инфекционным болезням (г.Казань, 1998).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 11 научных работ.

Структура и обьем диссертации

Диссертация написана на русском языке, состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы (134 отечественных и 97 иностранных источников).

Объем диссертации - лраниц машинописного текста, содержит 17 рисунков, 20 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Клиническая характеристика больных и методы исследования.

В течение 1994-1998 гг. на базе клинических инфекционных больниц N 1 и N 2 г.Казани под наблюдением находилось 102 больных различными формами ангины и 157 больных с гастроинтестинальной формой сальмонеллеза. Контролем служили параметры иммунограмм практически здоровых обследованных без синдромов иммунологической недостаточности

(51 человек), проживающих на территории г.Казани. Клинические наблюдения проводились совместно с сотрудниками кафедры инфекционных болезней Казанского государственного медицинского университета к.м.н. Кравченко И.Э., к.м.н. Карповым С.Г.

Под наблюдением находилось 102 больных различными формами ангины в возрасте от 15 до 56 лет, из них 68,4% пациентов были в возрасте 1530 лет, 19,0% - 31-40 лет, 8,9% - 41-50 лет и 3,7% - старше 51 года. Заболевание регистрировалось одинаково часто у мужчин (51%) и у женщин (49%).

В своей работе мы использовали клиническую классификацию Ю.И.Ляшенко (1985), Солдатова И.Б. (1994) и Преображенского Б.С.(1970) и выделили группы больных по кратности заболевания, по выраженности местного патологического процесса. По кратности заболевания больные распределились следующим образом: 48 пациентов с первичной, 26 - с повторной и 28 - с часто рецидивирующей формой ангины. По выраженности местного патологического процесса были выделены группы больных с лакунарной (68 чел.) и язвенно-пленчатой ангиной (19 чел.).

Для определения этиологии заболевания было проведено бактериологическое исследование микрофлоры миндалин у больных ангины. В 64,4% случаев высевался пиогенный (ß-гемолитический) стрептококк в виде монокультуры, в 24,4% - ассоциация стрептококка со стафилококком и другой условно-патогенной флорой, в 11,2% - золотистый стафилококк. Стафилококк высевался, преимущественно, у лиц с повторной ангиной

Диагноз "сальмонеллез" ставили на основании клинико-эпидемиологических и лабораторных данных в соответствии с приказом МЗ СССР К» 475 от 16.05.1989 г. Диагноз был подтвержден выделением сальмонелл из фекалий в 90,2% случаев, в 9,8% случаях он ставился на основании клинико-эпидемиологических и серологических данных. В высеве доминировал серовар Salm, enteritidis (97,3%), в 2,7% высевалась Salm. derby. Больные поступали в стационар равномерно в течение года. В первые три дня от начала заболевания поступило в стационар 98,8% больных сальмонеллезом.

Среднетяжелая форма заболевания наблюдалась у 93 чел.(59,2%) и тяжелая форма у 64 чел.(40,8%). Возраст наблюдаемых больных составлял от 16 до 60 лет, причем в 65,7% случаев - старше 30 лет.

Гастроэнтеритический вариант течения преобладал и наблюдался у 112 (70,4%) больных, гастроэнтероколитический лишь у 47 (29,6%) человек. С гастритическим и энтероколитическим вариантом течения заболевания больных не было.

Обследование больных ангиной проводили в острый период заболевания, при поступлении больного в стационар (1-4 дни заболевания), в периоде ранней реконвалесценции (7-10 день от начала заболевания) и в периоде поздней реконвалесценции (20-25 день от начала заболевания). Обследование больных сальмонеллезом проводили в острый период заболевания, при поступлении больного в стационар (1-3 дня заболевания) и в периоде ранней реконвалесценции (7-9 день от начала заболевания)

Исследование фенотипа лимфоцитов и опсонофагоцитарной системы (ОФС) проводилось в иммунологической лаборатории Центра по профилактике и борьбе со СПИД МЗ Республики Татарстан.

Для исследования иммунного статуса больных осуществляли забор венозной крови из локтевой вены натощак в утренние часы. В работе использовалась гепаринизированная кровь (12-15 ЕД гепарина на 1 мл крови) и цельная венозная кровь. Мононуклеарные клетки выделяли из гегтринизированной крови по методу A.Boum (1968) на одноступенчатом градиенте фиколл-верографина. После выделения клетки отмывали раствором Хенкса и доводили концентрацию до 2х10б/мл.

Иммунофенотипирование лимфоцитов. Определение популяций и субпопуляций лимфоцитов проводили в непрямой реакции иммунофлуоресценции с моноклональными антителами серии ИКО НПЦ "Медбиоспектр' ' (г.Москва) по методике разработчиков (А.Ю.Барышников и соавт.,1993). В работе использованы моноклональные антитела ИКО-90 (CD3), ИКО-86 (CD4), ИКО-31 (CD8), ИКО-116 (CD16), ИКО-Ю5 (CD25), ИКО-1 (HLA-DR), ИКО-91 (CD72), ИКО-Ю8 (CD18), ИКО-166 (CD45RA), ИКО-20 (CD38), ИКО-GMl (CDlib), ИКО-92 (CD71), ИКО-147 (CD26), IPO-4 (CD95), ИКО-150 (CD24). В качестве вторых антител применяли Р(аЬ)2-фрагменты кроличьей антисыворотки против иммуноглобулинов мыши, меченных флуоресцеинизотиоционатом (FITC).

Двухцветное маркирование лимфоцитов проводили в цельной крови в прямой реакции иммунофлуоресценции с мкАТ ИКО-86 (CD4), ИКО-31 (CD8), меченными FITC и ИКО-160 (CD95), меченными фикоэритрином (РЕ). Лизирование эритроцитов проводили раствором "FACS Lysing Solution" (Becton Dickinson, USA) после окрашивания клеток мкАТ.

Определение экспрессии CD38 антигена на CD4+ лимфоцитах проводили методом трехэтапного маркирования клеток, включающего на первом и втором этапах окраску в непрямой реакции иммунофлуоресценции с мкАТ к CD38 и Е(аЬ)2-фрагментами-НТС с последующим маркированием клеток прямо меченными мкАТ анти-С04 (ИКО-86)-РЕ.

Учет реакции иммунофлуоресценции проводили на проточном цитофлуориметре "FACScan" (Becton Dickinson, USA) в программе LYSYS II. В каждой пробе анализировали 10.000 клеток. При анализе лизированной цельной крови по боковому и малоугловому светорассеиванию выделяли гейты "лимфоцитов", "гранулоцитов" я "моноцитов". В гейте "лимфоцитов" регистрировали сигналы по FL1 и FL2, соответствуюшуе флуоресценции FITC и РЕ. Для получения раздельного сигнала по флуоресценции FITC и РЕ устанавливали режим компенсации по FL1 и FL2 с помощью частиц "CalyBRITE" "Becton Dickinson,USA" в программе AutoCOMP.

Сывороточные иммуноглобулины А, М, G определяли методом турбидиметрии на биохимическом анализаторе ФП-901М по методике Т.И.Лукичевой и соавт. (1991), Н.М.Кудряшовой и соавт.(1993).

Комплементарную активность сыворотки крови изучали по 50% гемолизу эритроцитов барана по E.A.Kabat, M.Mayer (1977).

Циркулирующие иммунные комплексы исследовали методом преципитации полиэтиленгликолем - 6000 но M.Dygeon et al. (1977).

Фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) оценивали по способности клеток захватывать St. aureus. При этом определяли ФАН -процент нейтрофилов, фагоцитировавших стафилококк, ФЧ (фагоцитарное число) - среднее число St.aureus., захваченных одной клеткой, АФП (абсолютный фагоцитарный показатель) - общее количество частиц St.aureus, фагоцитированных нейтрофилами.

Метаболическую активность нейтрофилов определяли в HCT- тесте спонтанном и индуцированном вариантах по методу В.Н.Рас et al.(1968) в модификации М.Е.Виксмана и А.Н.Маянского (1979).

Статистическая обработка материала проводилась общепринятыми методами вариационной статистики с помощью пакета программ MSTAT для персональных компьютеров по методу "Hypotesis test for means" для парных значений и с помощью критерия Стыодента для несвязанных пар с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel 97. В случаях графического изображения материала использовалась программа Microsoft Excel 97.

Результаты собственных исследовании и их обсуждение

Результаты исследования показали, что у больных ангиной изменения показателей иммунной системы зависели от кратности болезни, характера местных воспалительных проявлений и фазы инфекционного процесса.

В острый период ангины отмечалось разнонаправленное изменение содержания субпопуляций лимфоцитов в зависимости от кратности

s

заболевания (табл.1): при первичной ангине наблюдалось достоверное снижение СВ4+лимфоцитов (р<0,05) на фоне увеличения СБ8+клеток (р<0,05), при рецидивирующей форме заболевания - тенденция к снижению С04+клеток на фоне достоверного повышения С08+клеток (р<0,05), при повторной ангине - достоверное повышение С04+лимфоцитов (р<0,05).

Показатели, единицы измерения Здоровью лица Первичная ангина Повторная ангина Рецидивир. ангина Достоверность

П=51 п=48 (1=26 п=28

1 2 3 4 р2-3 р2-4 рЗ-4

Лейкоциты -107л 4,83±0,18 7,95±0,35"* 7,0810,42*" 8,1810,42"*

Лимфоциты -107л % 1,84±0,0Э 38,70±1,38 1,72±0,07 25,17±1,09™ 1,6510,14 24,6411,52*** 1,6510,10 21,87+1,53***

CD3 107л % 1,36±0,05 73,07±1,23 1,19±0,05* 68,60±1,04" 1,1710,11 70,7111,28 1,1110,08* 66,9111,79"

CD4 -107л % 0,78±0,04 43,09±0,S9 0,6б±0,03" 38,66±1,33* 0,78+0,10 46,3611,32* 0,6610,04* 40,1311,68 ••

CD8 .107л % 0,56±0,02 29,84+1,06 0,58±0,04 32,94±1,09* 0,4710,03* 28,8210,98 0,5610,04 33,3511,94* •

Tx/Ts 1,54±0,08 1,2810,07" 1,74+0,11 1,3010,09*

CD16 -107л % 0,27±0,02 14,42±1,04 0,32+0,02* 18,2211,21* 0,29+0,02 18,0411,11* 0,3110,03 18,4511,40*

HLA-DR -107л % 0,2310,02 12,7410,81 0,2810,03* 18,9411,28*** 0,2710,04 16,40+1,14** 0,3010,02* 17,3511,91*

CD25-107n % 0,19±0,02 10,6210,94 0,2510,03* 15,0010,97** 0,2310,03 14,0411,11* 0,2410,03 14,86 11,52*

СР72-107л % 0,16±0,01 8,79±0,96 0,17+0,02 9,8910,65 0,1410,01 8,6410,54 0,1410,01 8,9610,52

С071-107л % 0,15±0,02 7,96±0,74 0,1710,01 10,1910,60* 0,1510,02 9,2510,51 0,1210,01 7,8310,93 ••

С038 -107л % 0,99±0,08 52,4811,66 0,9010,08 60,8812,05** 0,7910,06 52,95+1,64 0,9110,07 49,3811,78 -

CD18-107n % 1,65+0,08 93,14±0,81 1,67±0,10 94,4610,84 1,8410,21 96,60^0,62" 1,5310,11 96,0010,52" •

CD11b-107n % 0,45±0,04 24,20±1,35 0,5910,04** 35,9710,93*** 0,5610,074 37,38±2,65*** 0,45±0,06 30,2512,27* • •

CD45RA Ю7п % 1,79±0,18 90,00±1,25 1,23+0,08" 79,2912,15*** 1,3310,20 84,2513,04* 1,10+0,08" 83,0411,24***

CD24 Ю7л % 0,17±0,02 9,44±1,07 0,2210,02 12,4810,71* 0,1310,01 8,5210,50 0,15+0,02 9,3310,67 ... «

CD26 -107л % 0,90±0,08 52,00±2,62 0,7210,04* 42,98+1,61* 0,7710,09 47,0712,23 0,7210,05* 43,06+1,69"

CD95 -107л % 1,27±0,13 64,25±4,79 1,0110,08 64,1911,56 0,9710,07 64,0011,91 1,0110,10 55,6712,77 •• •

CD38+/C04+7n CD38+/CD4+% 0,49J:0,06 24,88+1,89 0,3410,04 22,0011,04 0,2710,03" 19,2910,95" •

Таблица 1 .Фенотип лимфоцитов в острой фазе ангины в зависимости от кратности заболевания. Знаки: *(р<0,05); **(р<0,01); ***(р<0,001)-достоверность по сравнению с группой здоровых лиц, п - количество человек в группе.

Результаты фенотипирования лимфоцитов по маркерам активации показали, что острый период ангины, независимо от кратности заболевания, сопровождался увеличением содержания лимфоцитов с экспрессией НЬА-011 антигена и рецептора к 1Ь-2 (С025), свидетельствующим об активации

иммунокомпетентных клеток. При этом лишь первичная форма ангины сопровождалась достоверным повышением экспрессии рецептора к трансферрину (С071+лифоциты), являющегося ранним маркером активации и пролиферации лимфоцитов

Определение фенотипа лимфоцитов по CD38 антигену также показало достоверную разницу в содержании позитивных по данному маркеру клеток в сравниваемых группах. Только при первичной ангине наблюдалось увеличение С038+лимфоцитов в острый период заболевания с последующим значительным снижением в динамике болезни. При этом необходимо учитывать, что С038+лимфоциты включают NK-клетки, В-лимфоциты и активированные Т-лимфоциты (Malavasi F. et al., 1994). При всех трех формах ангины мы наблюдали увеличение содержания С016+лимфоцитов, которые авторы относят к NK-клеткам (Lanier L.L. et al., 1983; Perussia В. et al., 1984). Следовательно, при повторной и рецидивирующей ангине наблюдается снижение количества Т-лимфоцитов, позитивных по CD38 антигену. Определение экспрессии CD38 антигена на субпопуляции СВ4+лимфоцитов при повторной ангине показало снижение С04+/С038+клеток, что подтвердило наше предположение о снижении позитивных по данному антигену Т-лимфоцитов. Эти данные, в определенной мере, показали наличие нарушений активационных процессов в иммунокомпетентных клетках в острый период заболевания при повторной и рецидивирующей ангине.

Отмеченное выше повышение содержания С016+лимфоцитов является, на наш взгляд, одной из первых реакций со стороны иммунной системы на ранних этапах развития инфекционного процесса. Известно, что NK клеткам некоторыми авторами придается большая роль в раннем периоде инфекции не только вирусной, но и бактериальной этиологии (Ломакин М.С., 1990; Покровский В .И. и соавт., 1994).

Среди известных на сегодняшний день активационных маркеров антиген CD26 (дипептидилпептидаза IV) экспрессируется преимущественно на СБ4+лимфоцитах и его активность увеличивается при активации Т-клеток (Stein Н. et al., 1989; Kubota Т. et al, 1992; Fleischer В, 1994). По данным Schel D.et al. (1995) с экспрессией CD26 антигена связана активность Т-хелперов 1 типа при гранулематозных инфекциях. При ангине мы наблюдали снижение содержания С026-Ьлимфоцитов при первичной и рецидивирующей ангине, тогда как при повторной ангине отмечалась тенденция к уменьшению их количества. Но при этом необходимо отметить разнонаправленное изменение С04+популяции лимфоцитов. При первичной ангине наблюдается одновременное снижение уровней CD4+ и С02б+лимфоцитов, тогда как при

повторной ангине увеличение СВ4+клеток сопровождается снижением С02б+лимфоцитов. Это может, в определенной мере, свидетельствовать о снижении экспрессии С026 антигена на субпопуляции С04+лимфоцитов при повторной ангине, что является показателем нарушения активации соответствующих лимфоцитов.

В динамике заболевания отмечалось существенное увеличение содержания НЬА-ОЮ-клеток (рис.1) к периоду ранней реконвалесценции при первичной и повторной ангине, а к периоду поздней реконвалесценции -

35

зо

25 20 15 10 5 О

острый период ранняя реконв. поздняя реконв.

а здоровые

□ первичная ангина

□ повторная

О рецидивирующая

Рис.1. Содержание НЬЛ-ВЯ+лимфоцитов у больных ангиной в зависимости от кратности заболевания. (Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001) - достоверность по сравнению со здоровыми лицаими). дальнейшее повышение при повторной и рецидивирующей ангине, при первичной - снижение. Первичная ангина сопровождалась снижением, а повторная ангина увеличением экспрессии активационного маркера С025 в динамике заболевания (рис.2). При рецидивирующей ангине изменение содержания С025+лимфоцитов характеризовалось снижением к периоду ранней реконвалесценции с последующим достоверным повышением на 20-25 день болезни. К периоду поздней реконвалесценции содержание С025+лимфоцитов нормализовалось при первичной ангине, а при повторной и рецидивирующей отмечалось высокое содержание лимфоцитов с экспрессией рецептора к ИЛ-2.

Содержание С071+лимфоцитов (рис.3) достоверно снизилось при первичной и повторной ангине к периоду поздней реконвалесценции, а при рецидивирующей ангине отсутствовало изменение их содержания в динамике заболевания. Независимо от кратности заболевания на 20-25 день болезни у больных ангиной наблюдалось достоверное снижение популяции В-

лимфоцитов, определенной по маркерам С072 или СБ24 (р<0,05 при первичной ангине, р<0,001 при повторной и рецидивирующей).

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

□ здоровые

П первичная ангина

□ повторная

а рецидивирующая

острый период ранняя реконз. поздняя реконв.

Рие.2. Содержание С025+лимфоцитов у больных ангиной в зависимости от кратности заболевания. (Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001) -достоверность по сравнению со здоровыми лицаими).

□ здоровые

□ первичная ангина

□ повторная

□ рецидивирующая

острый период

ранняя реконв. поздняя реконв.

Рис.3. Содержание С071+лимфоцитов у больных ангиной в зависимости от кратности заболевания. (Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001) -достоверность по сравнению со здоровыми лицаими).

Таким образом, проведенное фенотипирование лимфоцитов по маркерам активации позволило выявить особенности иммунного ответа у больных ангиной в зависимости от кратности заболевания и фазы инфекционного процесса. Изменение фенотипа лимфоцитов в динамике заболевания свидетельствует о значительной перестройке иммунной системы у больных ангиной, сопровождающейся с одной стороны активацией иммунокомпетентных клеток (увеличение экспрессии НЬА-ОЯ антигена, рецептора к 1Ь-2), с другой стороны - наличием элементов иммунносупрессии (снижение экспрессии рецептора к трансферрину).

Особенности фенотипа лимфоцитов в зависимости от кратности болезни были отмечены и для показателей ОФС: первичная и рецидивирующая ангина сопровождались увеличением уровня IgA, повторная ангина -незначительным его повышением. При этом, независимо от кратности заболевания, отмечалось повышенное содержание IgG и ЦИКов. Мы считаем, что в острый период заболевания иммунный ответ протекает по типу вторичного с быстрым переключением синтеза антител на IgG, а высокая связывающая способность стрептококка с Fc-фрагментом антител обуславливает образование большого количества ЦИКов. Отмечалось значительное увеличение спонтанной метаболической активности нейтрофилов по НСТ-тесту, свидетельствующее о значительной активации фагоцитарного звена. При этом рецидивирующая ангина сопровождалась наиболее высоким повышением показателя спонтанного НСТ-теста, а повторная - самым низким. Отмечалось также неоднозначное изменение фагоцитарной активности нейтрофилов: при повторной ангине -достоверное повышение (р<0,05), тогда как при рецидивирующей форме отмечалось ее угнетение.

Изучение фенотипа лимфоцитов и показателей опсонофагоцитарной системы у больных ангиной в зависимости от выраженности местного патологического процесса (группы больных с лакунарной и язвенно-пленчатой ангиной) позволило выявить ряд значительных особенностей в содержании отдельных популяций ИКК. Так, исследование лимфоцитов на наличие маркеров активации у больных ангиной в сравниваемых группах показало достоверную разницу по большинству изученных показателей фенотипирования клеток (таб.2). При этом лакунарная ангина сопровождалась увеличением экспрессии HLA-DR, CD25, CD71 антигенов, тогда как при язвенно-пленчатой ангине увеличивалось содержание лишь HLA-DR+лимфоцитов.

Исследования по CD26, CD45RA, CD95 маркерам показали достоверное снижение СВ26+лимфоцитов в обеих группах больных; при лакунарной ангине определялось снижение CD45RA+, СВ95+лимфоцитов, тогда как при язвенно-пленчатой ангине уменьшение их уровня было незначительным. В результате активации лимфоцитов наблюдается смена фенотипа ИКК с CD45RA+, которые относят к "наивным, непримированным", на CD45RO+ (клетки памяти) (Thomas M.L, Lefrancois L, 1988). Это позволяет считать возможным наиболее быстрое вовлечение ИКК лимфоидного ряда в иммунные реакции при лакунарной ангине в отличие от язвенно-пленчатой формы заболевания. Однако двухцветное маркирование CD4+ и CDS+лимфоцитов по

Показатели, Здоровые Лакунарная Яззенно- Р по срав.с

единицы лица ангина пленчатая ангина лакун.анг.

измерения п=51 п=68 п=19

Лейкоциты -10э/л 4,88±0,18 7,6310,24*" 8,8810,77*" р>0,05

Лимфоциты-Ю'/л 1,84+0,09 1,59±0,07* 1,9110,17 р>0,05

% 39,70±1,38 23,70+0,80*" 23,2012,30"* р>0.05

CD3 10% 1,3610,05 1,1010,06* 1,33+0,12 р>0,05

% 73,07+1,23 68,9411,01* 69,3011,76 р>0,05

CD4 10а/л 0,78±0,04 0,67+0,05 0,7810,08 р>0,05

% 43,09±0,99 42,0910,87 40,9512,00 р>0,05

CD8 -10у/л 0,56+0,02 0,5110,03 0,6210,07 р>0,05

% 29,84±1,06 31,7110,74 32,75+1,39 р>0,С5

ТхЯз 1,54±0,08 1,47±0,06 1,30i0,10* р>0,05

С016 -10а/л 0,27+0,02 0,2710,01 0,36±0,04 р<0,05

% 14,42±1,04 16,9910,84" 19,05+2,12* р>0,05

HLA-DR Ю^/л 0,23±0,02 0,2410,02 0,4010,04"* р<0,01

% 12,74+0,81 17,1210,92" 20,44+1,24*" р<0,05

СЮ25Юа/л 0,1910,02 0,2410,01* 0,22+0,03 р>0,05

% 10,62±0,94 15,4910,70"* 11,7511,09 р<0,01

С072Юа/л 0,16±0,01 0,1510,01 0,1810,02 р>0,05

% 3,79±0,96 9,4810,44 9,1510,79 р>0,05

СР71-10а/л 0,15±0,02 0,1510,01 0,1610,02 р>0,05

% 7,9б±0,74 9,6810,41* 8,65+1,03 р>0,05

CD38 -10а/л 0,99±0,08 0,7810,03* 1,0610,09 р<0,01

% 52,48±1,66 49,9011,43 58,2012,45* р<0,01

С018Юа/л 1,65±0,08 1,6810,10 1,8310,25 р>0,05

% 93,14+0,81 95,00+0,60 97,0010,45* р<0,05

CD11Ь-10а/л 0,45+0,04 0,5310,02 0,5910,08 р>0,05

% 24,20+1,35 35,5310,76"* 33,2012,31"* р>0,05

CD45RA -Ю'/п 1,79±0,18 1,1810,05*** 1,4210,24 р>0,05

% 90,00±1,25 77,0011,59*** 85,6012,18 р<0,01

CD24 Юа/л 0,17±0,02 0,1610,01 0,1610,03 р>0,05

% 9,44±1,07 10,0310,47 9,4311,30 р>0,05

CD26 -10"7л 0,9СЬ0,03 0,7310,05" 0,7710,08& р>0,05

% 52,00±2,62 46,32+1,21*** 41,0013,73" р>0,05

CD95 -10а/л 1,27±0,13 0,80+0,03"* 1,3010,14 р<0,01

% 64,25±4,79 56,8811,61* 65,3012,57 р<0,01

CD95+/CD4+.10a 0,63±0,07 0,3910,02"* 0,63+0,04 р<0,001

CD95+/CD4+% 32,43±1,43 36,6711,37* 32,3311,11 р<0,05

CD95+/CD8+-10a 0,30±0,04 0,1910,01" 0,3310,04 р<0,001

CD95+/CD8+% 15,57±0,76 17,0010,64* 16,6711,22 р>0,05

CD38+/CD4+-10a 0,49+0,06 0,1810,01"* 0,4210,05 р<0,001

C038+/CD4+% 24,88±1,89 20,8310,60*** 21,0012,18" р>0,05

Таблица 2. Сравнительная характеристика фенотипа лимфоцитов при лакунарной и язвенно-пленчатой ангине в острый период заболевания. Знаки: *(р<0,05); **(р<0,01); ***(р<0,001) - достоверность по сравнению с группой здоровых лиц, п - количество человек в группе.

СВ95 антигену показало увеличение экспрессии СБ95 антигена на обеих субпопуляциях лимфоцитов при лакунарной ангине, тогда как при язвенно-пленчатой содержание двойных позитивных клеток СЕ>4/СП95 и С08/С095 не отличалось от показателей здоровых лиц, что свидетельствует об активном

вовлечении в иммунный ответ субпопуляций лимфоцитов при лакунарной форме заболевания.

Изменения со стороны ОФС в сравниваемых группах больных носили свои особенности, характеризующиеся достоверно более высоким содержанием IgG, ЦИКов, показателя стимулированного НСТ-теста при язвенно-пленчатой ангине на фоне снижения показателя ФЧ. Снижение фагоцитарного числа нейтрофилов видимо связано с блокадой Fc-рецепторов нейтрофилов ЦИК.

Таким образом, определение фенотипа лимфоцитов по маркерам активации позволило выявить особенности активационных процессов ИКК в группах больных с лакунарной и язвенно-пленчатой ангиной.

Результаты исследования фенотипа лимфоцитов (табл.3) и показателей ОФС у больных гастроинтестинальной формой садьмонеллеза в зависимости от тяжести инфекционного процесса показали, что острый период заболевания сопровождался снижением CD3+, CD4+, Сй8+лимфоцитов на фоне повышения С072+клеток. При тяжелой форме заболевания отмечалось более выраженное снижение CD3+, С04+лимфоцитов, отмечаемое большинством авторов (Рашидова P.A., 1981; Ющук Н.Д. и соавт, 1991). Исследование фенотипа лимфоцитов показало значительную активацию ИКК у больных сальмонеллезом средней тяжести, проявившуюся увеличением содержания клеток с экспрессией CD25, HLA-DR, CD38 антигенов. У больных тяжелой формой сальмонеллеза отсутствовало увеличение CD25+ и HLA-DR+ лимфоцитов, а содержание CD38+ и СБ26+лимфоцитов — достоверно снижалось. Одним из наиболее мощных индукторов экспрессии HLA-DR антигена на лимфоцитах является у-ИФН (Наумов Ю.Н. и соавт., 1993). Сальмонеллезный эндотоксин стимулирует выброс простогландина Е2 (Abu-Lawi K.I, Sultzer B.M, 1994), блокируя синтез у-ИФН, что, возможно, является причиной нарушения экспрессии активационных маркеров HLA-DR и CD25 у больных тяжелой формой сальмонеллеза.

Проведенный двухцветный анализ субпопуляций лимфоцитов CD4+ и CD8+ по экспрессии CD95 и CD38 антигенов показал достоверное снижение двойных позитивных лимфоцитов CD4/CD95 и CD8/CD95 у больных сальмонеллезом независимо от тяжести заболевания. В отношении С04+лимфоцитов, экспрессирующих CD38 антиген, отмечалось тенденция к увеличению данной популяции клеток при средней тяжести заболевания, тогда как при тяжелой форме регистрировалось достоверное снижение С04+/С038+лимфоцитов. Активация лимфоцитов является обязательным компонентом иммунного ответа на антигенное воздействие (Ляшенко В.А. и соавт., 1988). Одним из ранних проявлений активации ИКК является

Показатели, Здоровые лица Средней тяж. Тяж. течение Достоэерность

единицы п=51 п=95 п=64

измерения 1 2 3 Р2-3

Лейкоциты Ю®7л 4.88±0.18 5.83+0.29" 6 0110.33** р>0,05

Лимфоциты • 10в/л 1.84+0.09 1.5710.09* 1.37+0.06*** р>0,05

% 38.70±1.33 27.94+1.14*" 27.04i1.34*** р>0,05

CD3 .10а/л 1.3610 05 0 9710.08**" 0.7610.04*** р<0,05

% 73.07±1.23 60.95+1.43*" 56.4611.74*** р<0,05

С 04 -Ю'/л 0.7810.04 0.53+0 04*** 0.46±0.02*** р<0,01

% 43.0910.99 39.3211.12" 34.13+1.19*** р<0,01

CDa -юаУл 0,56±0,02 0.4410 04** 0.3910.03"* р>0,05

% 29.84±1.06 27.1410.88* 28.8411.23 р>0,05

Tx/Ts 1.54±0.08 1.6510.06 1.39+0.06 р<0,01

CD1S-10а/л 0.27±0.02 0 23+0.02 0.2010.02" р>0,05

% 14.42±1.04 18.73t1.02" 14.3410.96 р>0,05

HLA-DR -Ю'/л 0.23±0.02 0 ЗОЮ 07 0.1610 01" р>0,05

% 12.74+0.81 19.5511.75*" 12.2010.91 р<0,001

С025-10"/л 0.19±0.02 0.2210.03 0.1410.01* р>0,05

% 10.62±0.94 16.0611.09* 10.38Ю.70 р<0,001

CD72 10а/л 0.16+0.01 0.16+0.01 0.1510.01 р>0,05

% 8.79+0.96 10.95+0.57* 10.4710.65 р>0,05

CD7M0"/n 0.15+0.02 0.1910.02* 0.1710.01 р>0,05

% 7.96±0.74 9.8911.01 12.1910.98"* р>0,05

CD38 -107л 0.99±0.08 0.9710.11 0.6710.07" р<0,05

% 52.48±1.66 59.6012.48" 46.4712.07* р>0,05

CD18 Ю^/л 1.65±0.08 1.3710.28 1.2410.11" р>0,05

% 93.14±0.81 93.6711.07 86.0011.52*** р<0,001

CD11b-10a/n 0.45±0.04 0.65+0.05" 0.32+0.03* р<0,001

% 24.20±1.35 41.9212.44*" 23.0611.86 р<0,001

CD26 -10а/л 0.90±0.08 0.8110.04 0.3710.06*** р<0,001

% 52.00±2.62 50.33l2.56 29.5711.82"* р<0,001

CD95 -10у/л 1.27±0.13 0.8510.07* 0.6910.09"" р>0,05

% 64.25±4.79 58.9311 66 7310.51* р<0,001

CD95+/CD4+-103/n 0.63±0.07 0.4110.04" 0 2510.03"" р<0,01

CD95+/CD4+% 32.43±1.43 25.5611.43" 26 0010.25*** р>0,05

С095+/С08+а/л 0.30+0.04 0.1510.01*" 0.0910.02"* р<0,05

CD95+/C08+% 15.5710.76 10.56+0.71*" 8.0011.01"* р<0,05

CD38+/CD4+s/n 0.4910.06 0.40+0.03 0.1910.03"* р<0,001

CD38+/CD4+% 24.8811.89 27.0010.35 20.00l0.25" р<0,001

Таблица 3. Фенотип лимфоцитов при сальмонеллезе в острый период болезни в зависимости от тяжести заболевания. Знаки: *(р<0,05); **(р<0,01); ***(р<0,001) - достоверность по сравнению с группой здоровых лиц, п - количество человек в группе.

модификация поверхностных структур в виде экспрессии лейкоцитарных антигенов. Следовательно, отсутствие экспрессии маркеров активации при тяжелой форме сальмонеллеза можно рассматривать как супрессию иммунного ответа.

Со стороны ОФС отмечалось снижение фагоцитарной активности нейтрофилов на фоне высокой спонтанной метаболической активности нейтрофилов (по НСТ-тесту). Тяжелая форма сальмонеллеза сопровождалась

более глубоким угнетением фагоцитарной активности нейтрофилов на фоне повышения уровня ^А.

Проведеное исследование в динамике заболевания показало нормализацию основных популяций лимфоцитов в группе больных сальмонеллезом средней степени тяжести. Отмечалась также нормализация содержания лимфоцитов с экспрессией активациоиных маркеров С025 и НЬА-ОЛ. Однако, содержание СВ71+лимфоцитов значительно снизилось. У больных сальмонеллезом тяжелой формы изменение фенотипа лимфоцитов носило иной характер. Содержание популяции СОЗ+лимфоцитов и субпопуляции СБ4+ на 7-9 день заболевания осталось на достоверно низком уровне (р<0,05). Для популяций лимфоцитов СБ25+ и НЬА-!Ж+ не было отмечено изменения относительного содержания в динамике заболевания, что свидетельствует об отсутствии активации Т-лимфоцитов. В отношении экспрессии активационного маркера СБ26 наблюдалось значительное снижение позитивных по данному антигену лимфоцитов при сальмонеллезе средней тяжести. На 7-9 день от начала заболевания относительное содержание С026+лимфоцитов оказалось на достоверно низком уровне как при среднетяжелой (р<0,01), так и при тяжелой форме форме заболевания (р<0,001).

Со стороны ОФС в динамике заболевания показатели фагоцитарной активности характеризовались незначительными изменениями. ФАН осталась на достоверно низком уровне при высокой спонтанной метаболической активности нейтрофилов и повышенном содержании ^А. При тяжелой форме сальмонеллеза отмечалось достоверное снижение сывороточного 1§М (р<0,05), что свидетельствует об угнетении синтеза антител данного класса у больных сальмонеллезом.

Таким образом, фенотипирование лимфоцитов по активационным маркерам лейкоцитов и определение факторов ОФС позволило выявить особенности иммунного ответа у больных сальмонеллезом в зависимости от тяжести заболевания и фазы инфекционного процесса.

Наличие существенных изменений в показателях фенотипирования лимфоцитов и опсонофагоцитарной системы у больных ангиной и сальмонеллезом определили нашу следующую задачу: оценить клинико-иммунологическую эффективность иммунотропного препарата ксимедон.

Больные ангиной были разделены на две группы: основная группа (51 челове) и контрольная (51 чел.). Контрольная группа получала общепринятую терапию, основной группе на фоне общепринятой терапии назначался ксимедон по 0,5 г. 3 раза в день до еды в течение 7 дней.

Включение ксимедона в комплексную терапию больных ангиной способствовало достоверному сокращению сроков интоксикационного синдрома и купирования местного воспалительного процесса в среднем на 2,5±0,2 дня. Положительный клинический эффект ксимедона сопровождался выраженным воздействием на экспрессию ряда активационных антигенов лимфоцитов. Так, в основной группе больных лакунарной ангиной к периоду поздней реконвалесценции наблюдалось нормализация содержания НЬА-ОЯ+лимфоиитов, а при язвенно-пленчатой - повышение НЬА-ОК+ клеток (рис.4). В контрольной группе больных сохранялось высокое содержание НЬА-ОЯ+лимфоцитов при лакунарной и язвено-пленчатой формах заболевания на фоне низких показателей СОЭ8+, СШ6+, СВ45ЯА+, С095+лимфоцитов. У контрольной группы больных лакунарной ангине в период ранней реконвалесценции сохранялось высокое содержание лимфоцитов с экспрессией СБ25, С071 антигенов (рис.5,6), тогда как при язвенно-пленчатой ангине регистрировалось повышение только НЬА-ОГ1+клеток.

□ здоровые о лак. ангина-контроль

□ лак. ангина-основная □ язв-пленчатая-контроль

□ язв-пленчатя ангина-основная

Рис.4. Влияние ксимедона на содержание НЬА-ОК+лимфоцитов при лакунарной и язвенно-пленчатой ангине в динамике заболевания.Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001) - достоверность по сравненю со здоровыми лицами 1- острый период, 2 - ранняя реконв., 3 - поздняя реконв.

□ здоровые Р лак. ангина-контроль

□ лак. ангина-основная □ язв-пленчатая-контроль

□ язв-пленчатая ангина-основная

Рис.5. Влияние ксимедона на содержание СБ25+лимфоцитов при лакунарной и язвенно-пленчатой ангине в динамике заболевания. Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001)- достоверность по сравцешо со здоровыми лицами 1- острый период, 2 - ранняя реконв., 3 - поздняя реконв.

ЕЗ здоровые И лак. ангина-контроль

□ лак. ангина-основная □ язв-пленчатая-контроль

□ язв-пленчатая -основная

Рис.6. Влияние ксимедона на содержание С1Э71+лимфоцитов при лакунарной и язвенно-пленчатой ангине в динамике заболевания. Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001) - достоверность по сравнсшо со здоровыми лицами 1- острый период, 2 - ранняя реконв., 3 - поздняя реконв.

К периоду поздней реконвалесценции под влиянием ксимедона нормализовалось содержание С025+лимфоцитов при лакунарной ангине, тогда как при язвенно-пленчатой отмечалось их увеличение.

В основной группе больных лакунарной ангиной содержание С071+лимфоцитов соответствовало показателю здоровых лиц к периоду поздней реконвалесценции, при язвенно-пленчатой форме - значительное их увеличение, тогда как в контрольной группе было отмечено достоверное снижение экспрессии С071 антигена (р<0,05) независимо от характера местного воспалительного процесса. Было отмечено различное влияние ксимедона на экспрессию молекулы апоптоза С1395 на СЭ4+ и С08+лимфоцитов больных лакунарной и язвенно-пленчатой ангиной. У больных лакунарной ангиной отмечалась нормализация содержания С04+/С095+лимфоцитов в отличие от больных язвенно-пленчатой формой заболевания, у которых регистрировался высокий их уровень при снижении количества С08+/С095+клеток.

Таким образом, действие иммуномодулирующего препарата ксимедон на фенотип лимфоцитов у больных ангиной оказало неоднозначный эффект в группах больных с лакунарной и язвенно-пленчатой ангиной. Модулирующий эффект ксимедона при лакунарной ангине проявился нормализацией содержания популяций лимфоцитов и экспрессии активациошшх маркеров, тогда как при язвенно-пленчатой форме отмечалась значительная активация иммунокомпетентных клеток.

Результаты исследований по влиянию ксимедона на ИКК в зависимости от кратности заболевания ангиной показали, что под его воздействием повышенная экспрессия активационного маркера НЬА-ОЛ снижается до нормы к периоду поздней реконвалесценции. В контрольной же группе больных весь период наблюдения оставалось высоким содержание 11ЬА-1Ж+лимфоцитов. При первичной и повторной ангине отмечалось нормализация содержания СЭ71+лимфоцитов, тогда как в контрольной группе количество С071+лимфоцитов на поздних сроках исследования снизилось ниже уровня здоровых лиц (р<0,05). Влияние ксимедона на фенотип лимфоцитов характеризовалось значительным изменением экспрессии рецептора к ИЛ-2 на лимфоцитах больных ангиной. К периоду ранней реконвалесценции содержание СЭ25+лимфоцитов в основной группе больных достигло уровня здоровых лиц, тогда как в контрольной группе при первичной и повторной ангине сохранялось их повышенное количество. К периоду поздней реконвалесценции только при первичной ангине отмечалась нормализация

содержания С025+клеток, а при повторной и рецидивирующей наблюдалось повышенная экспрессия СБ25 антигена.

Больные сальмонеллезом были разделены на две группы: основную (14 чел) и контрольную (37 чел). Больным контрольной группы проводилась общепринятая терапия, включающая сальмонеллезный бактериофаг и регидратационную терапию адекватную водно-электролитным потерям. Больным основной группы помимо общепринятой терапии назначался ксимедон в дозировке по 0,5 г. 3 раза в день до еды в течение 7 дней.

Включение ксимедона в комплексную терапию больных сальмонеллезом средней степени тяжести оказало положительный клинический эффект в виде сокращения продолжителности диарейного и интоксикационного синдромов в среднем на 1,6±0,2 дня и снижения случаев повторного бактериовыделения в 2,8 раза. Выздоровление больных сальмонеллезом леченных ксимедоном, сопровождалось изменением фенотипа лимфоцитов, отличающимся от показателей контрольной группы. Если основные популяции и субпопуляции лимфоцитов к периоду ранней реконвалесценции нормализовались и достоверно не отличались в основной и контрольной группах больных, то в отношении содержания лимфоцитов с экспрессией маркеров активации наблюдалась существенная разница в динамике заболевания (рис.7). Под действием ксимедона изменение фенотипа лимфоцитов характеризовалось повышенным содержанием С038+, НЬА-ВЯ+лимфоцитов и сохранением экспрессии антигенов С1371, С026, С095 на уровне здоровых лиц.В контрольной же группе больных

% 25

10

15

5

О

Н1А-0Я+ СР25+ С071

%

С038+ С026+ С0Э5+ □ здоровые а контрольная группа О основная

Рис.7. Влияние ксимедона на экспрессию активационных маркеров при среднетяжелом салмонеллезе в периоде ранней реконвалесценции. Знаки *(р<0,05), **(р<0,01), ***(р<0,001)-

достоверность по сравнению со здоровыми лицами.

отмечалось снижение содержания НЬА-ОШ-, С025+лимфоцитов до нормы при угнетении экспрессии рецептора к трансферрину (уменьшение ниже уровня здоровых лиц СВ71+лимфоцитов) и значительном уменьшении СБ26+ и С095+клеток.

Таким образом, комплексная терапия, включающая ксимедон, оказало положительное влияние на клиническое состояние больных ангиной и сальмонеллезом, сопровождающееся достоверными изменениями фенотипа лимфоцитов и показателей опсонофагоцитарной системы.

ВЫВОДЫ:

1 .Определение фенотипа лимфоцитов периферической крови по активационным и дифференцировочным антигенам лейкоцитов методом проточной цитофлуориметрии во взаимосвязи с факторами опсонофагоцитарной системы выявило особенности иммунного ответа при ангине, характеризующиеся:

- повышением экспрессии активационного маркера НЬА-ОК независимо от кратности заболевания и характера местного воспалительного процесса;

- повышением экспрессии С025, С071 антигенов при первичной и лакунарной ангине;

- отсутствием увеличения экспрессии СБ71 маркера при повторной, рецидивирующей форме заболевания и С071, СБ25 антигенов при язвенно-пленчатой ангине;

снижением фагоцитарной активности нейтрофилов при рецидивирующей ангине и повышением — при повторной;

- отсутствием повышения сывороточного ^А на фоне высокого уровня при повторной и язвенно-пленчатой ангине.

2.У больных ангиной в периоде поздней реконвалесценции выявлены изменения активационных процессов и дифференцировки лимфоцитов, характеризующиеся высокой экспрессией НЬЛ-ОЯ антигена на фоне снижения экспрессии рецептора к трансферрину, уменьшения содержания В-лимфоцитов (СЭ72+) при высоком уровне ЦИКов независимо от кратности заболевания и характера местного воспалительного процесса.

3.Фенотип лимфоцитов и факторы опсонофагоцитарной системы у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза в остром периоде заболевания указывают на активацию ИКК периферической крови при средней степени тяжести (повышение экспрессии НЬЛ-БЯ и С025 антигенов) и нарушение активационных процессов при тяжелой форме заболевания

(снижение экспрессии С026, С038 антигенов при отсутствии повышения НЬА-БИ. и С025 антигенов) на фоне угнетения фагоцитарной активности нейтрофилов.

4.У больных сальмонеллезом средней степени тяжести на ранних сроках реконвалесценции при нормализации содержания основных популяций лимфоцитов (СБЗ+, СБ4+, С08+, СЭ16+, СБ72+) отмечается снижение экспрессии активационных маркеров С071, С026, СБ95, а при тяжелой форме заболевания сохраняется дисбаланс в содержании основных популяций лимфоцитов (низкие показатели СШ+, С04+, СП16+клсток) с нарушением экспрессии С026, СБ38 антигенов.

5.Включение ксимедона в комплексную терапию больных ангиной оказывает положительное влияние на динамику клинических проявлений (сокращение длительности интоксикационного синдрома и сроков купирования местного воспалительного процесса и регионарного лимфаденита), проявляя иммуномодулирующее действие (нормализация содержания основных популяций и субпопуляций лимфоцитов, активационных процессов иммунокомпетентных клеток при первичной, повторной и лакунарной ангине, повышение экспрессии маркеров активации при язвенно-пленчатой форме заболевания).

6.Ксимедон в комплексной терапии больных сальмонеллезом средней степени тяжести сокращает продолжительность интоксикационного, диарейного синдромов заболевания и снижает частоту повторного бактериовыделения в периоде ранней реконвалесценции на фоне нормализации содержания основных популяций лимфоцитов, повышения экспрессии НЬЛ-БЯ антигена и сохранения экспрессии активационных маркеров СБ26, С071 на уровне здоровых лиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1.При оценке иммунной системы больных ангиной и сальмонеллезом гастроинтестинальной формы рекомендуется включение в комплекс иммунологических методов исследования определение активационных маркеров лимфоцитов НЬА-ОК, С025, С071, С026.

2.В целях купирования основных клинических синдромов и коррекции выявленных иммунологических изменений у больных ангиной и сальмонеллезом рекомендуется включение в их комплексную терапию отечественного лекарственного средства пиримидинового ряда "ксимедон".

Список публикаций по теме диссертации

1 .Клинико-иммупологическая характеристика больных сальмонеллезом на фоне комплексной терапии. //Материалы Республиканской научно-практической конференции "Новые методы диагностики и лечения", - Казань, 1994.-С.243-245. (совместно с С.Г.Карповым).

2.Влияние низкоэнергетического инфракрасного лазерного излучения на клинико-иммунологические параметры при сальмонеллезе. //Материалы научно-практической конференции молодых ученых, посвященной 70 - летию кафедры инфекционных болезней КГМУ. - Казань, 1995.- С.3-4 (совместно с С.Г.Карповым).

3.Низкоинтенсивное инфракрасное лазерное излучение в комплексном лечении сальмонеллеза (клинико-иммунологические параллели). //Тезисы докладов Республиканской научно-практической конференции "Новые методы диагностики и лечения" - ч.-2. -Казань, 1996. -С.40-42 (совместно с С.Г.Карповым, Д.Ш.Еналеевой, Э.И.Хайрутдиновой).

4.Влияние низкоэнергетического инфракрасного лазерного излучения на бактерионосительство при сальмонеллезе. //Сборник тезисов докладов научно-практической конференции молодых ученых КГМА. - Казань, 1996.-С.46-48 (совместно с С.Г.Карповым, Э.И.Хайрутдиновой).

5. Лазеропунктура в комплексной терапии больных сальмонеллезом. //Физическая медицина. -1996. - т.5 - N1-2. - С. 14-16 (совместно с С.Г.Карповым).

6.Влияние ксимедона на клинические и иммунологические показатели при ангине. //Научно-практическая конф. молодых ученых КГМУ. - Казань - 1997 -С.22 (совместно с Кравченко И.Э., Фазыловым В.Х.).

7.Ксимедон в комплексной терапии стрептококковой ангины. //Всероссийск. науч.-практ. конф. "Акт. вопросы инф. патологии и совр. методы лечения". -Пенза. - 1997. - С.38 (совместно с Фазыловым В.Х., Кравченко И.Э., Гилмуллиной Ф.С.).

8.Состояние клеточного иммунитета у больных ангиной. //Сб. тезисов научной конференции, посвящ. 35-летию ЦНИИЛ КГМУ "Современные методы исследования в клинике и эксперименте". - Казань. — 1997. - С. 35 (совместно с Кравченко И.Э., Фазыловым В.Х.).

9.Влияние препарата пиримидинового ряда на иммунологические показатели у больных ангиной стрептококковой этиологии. //V Российский Национальный конгресс "Человек и лекарство". - Москва. - 1998. - С.116 (совместно с Лапиным A.A., Кравченко Н.Э., Фазыловым В.Х.).

10. Фенотип лимфоцитов при сальмонеллезе. //Материалы Всероссийской научной конференции "Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней." - С-Петербург. - 1999. - С.33.

11.Фенотип лимфоцитов при ангине. //Казанский медицинский журнал - в печати (совместно с Фазыловым В.Х., Барышниковым А.Ю.). ; _ , .

(и

1У'