Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Фенилкарбоновые кислоты при бактериальных воспалительных процессах

На правах рукописи

Бедова Александра Юрьевна

ФЕНИЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005570768

2 г июл 2015

Москва-2015

005570768

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт общей реаниматологии имени В.Л. Неговского» (ФГБНУ «НИИОР»).

Научные руководители:

заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАН, профессор, доктор медицинских наук, директор ФГБНУ «НИИОР» - Мороз Виктор Васильевич; доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией метаболизма критических состояний ФГБНУ «НИИОР» - Белобородова Наталья Владимировна.

Официальные оппоненты:

Бапякин Юрий Викторович - доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой общей патологии медико-биологического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н.И. Пирогова.

Акаев Эльдар Хусеевич — доктор медицинских наук, профессор, Ученый секретарь Федерального государственного учреждения «Научно-исследовательского института пульмонологии» ФМБА России.

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии".

Защита состоится «оо" » 2015 г. в « часов на заседании

диссертационного совета Д 001.051.01, созданного на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт общей реаниматологии имени В.А. Неговского» по адресу: 107031, г. Москва, ул. Петровка, д. 25, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «НИИОР» по адресу: 107031, г. Москва, ул. Петровка, д. 25, стр. 2 и на сайте mvw.niiorramn.ru

Автореферат разослан« -{0 » УЦ^Ьй. 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.051.01, доктор медицинских наук, профессор

Решетняк Василий Иванович

Актуальность

Актуальность проблемы инфекции в отделениях реаниматологии остается стабильно высокой, несмотря на прогресс в области медицины и техники. По данным эпидемиологических исследований у 30-50% больных в критическом состоянии документируется инфекционный процесс [Alberti С., 2002; Vincent J.L., 2009], в основном бактериальной этиологии [Vincent J.L., 2009; Руднов В.А., 2011]. Повышенный риск развития инфекции у больных в критических состояниях связан с высокой степенью бактериальной контаминации окружающей среды, использованием большого количества инвазивных процедур [Хорошилов С.Е., 2013], проведением длительной искусственной вентиляции легких [Голубев А.М., 2015], ослаблепием защитной функции организма, нарушениями метаболизма на фоне стрессовой реакции организма [Заржецкий Ю.В., 2014] и риском развития стрессовых язв и транслокации микробиоты кишечника [Мороз В.В., 2004; Vincent J.L., 2009]. Нейтрофилы являются первой линией защиты организма от бактериальных агентов [Косицкий Г.И., 1985; Borregaard N., 2010]. Несостоятельность первичного звена иммунитета приводит к развитию инфекционных процессов и их длительному течению [Vento S., 2003; Сурков А.Н., 2012]. Данные литературы свидетельствуют о нарушении защитной функции нейгрофилов у больных в критическом состоянии, что связано с неблагоприятным исходом [Черневская Е.А., 2008; Danikas D.D., 2008].

Бактериальная этиология жизненно опасных осложнений [Vincent J.L., 2009; Мороз В.В., 2013] указывает на необходимость поисковых исследований, в том числе направленных на изучение роли микробных метаболитов. В последние годы растет число публикаций, в которых особое внимание уделяется фенилкарбоновым кислотам - производным фенилаланина и тирозина, а также полифенолов растительного происхождения, продуцируемым бактериями из состава микробиоты человека [González-Barrio R.,2011; Russell W.R-, 2013]. Наибольший интерес привлекают фенилмолочная, фенилуксусная, фенилпропионовая, п-гидроксифенилуксусная и п-гидроксифенилмолочная кислоты (ФМК, ФУК, ФПК, п-ГФУК и п-ГФМК соответственно), так как их уровень значительно изменен у больных с сепсисом по сравнению с нормой [Kbodakova А., 2007; БелобородоЕа Н.В., 2009]. Существует связь между метаболическим профилем фенилкарбоповых кислот и исходом

заболевания, а также их участием в развитии полноргашгой недостаточности [Белобородова Н.В., 2012].

В ряде исследований отмечается повышенное содержание некоторых фенилкарбоновых кислот у больных с хронической почечной и печеночной недостаточностью различного генеза, что свидетельствует о накоплении этих веществ в организме больных при нарушении их связывания и выведения [Leibich Н.М., 1985; Scholze А., 2007; Aronov P.A., 2011]. Экспериментальные и клинические исследования подтверждают наличие биологической активности у фенилкарбоновых кислот, особый интерес вызывает их способность влиять на: функции митохондрий [Fedotcheva N.I., 2008], нейтрофилов [Cohen G., 2013], транспортные белки [Jankowski J., 1998] и вегетативную нервную систему [Beppu Y., 2013].

В связи с вышеизложенным представляется актуальным изучение роли фенилкарбоновых кислот в развитии бактериальных инфекционных процессов.

Цель исследования Установить взаимосвязь уровня ароматических метаболитов фенилкарбоновых кислот и тяжести гнойно-воспалительного процесса для обоснования использования количественного анализа фенилкарбоновых кислот в клинической практике.

Задачи

1. Модифицировать и адаптировать методику газохроматографического определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови человека к использованию в условиях клинических лабораторий

2. Изучить качественное и количественное содержание фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых людей (доноров)

3. Изучить закономерности изменения уровня фенилкарбновых кислот (ФКК) в сыворотке крови больных в зависимости от степени тяжести гнойно-воспалительного процесса

4. Выявить способность ключевых фенилкарбоновых кислот влиять на фагоцитарную функцию нейтрофилов человека в исследовании in vitro.

Научная новизна работы Впервые показано, что фенилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в сыворотке крови здоровых людей.

Установлено, что уровень фенилкарбоновых кислот отражает тяжесть течения гнойно-воспалительного процесса, повышается при легком течении инфекции и может достигать значений, превышающих норму более чем в 100 раз при крайне тяжелом течении бактериального воспалительного процесса.

Установлено, что фенилкарбоновые кислоты в клинически значимых концентрациях способны подавлять фагоцитарную активность иейтрофшгов.

Практическая значимость

Определение уровня фенилкарбоновых кислот методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием (ГХ-ПИД) применяется в научно-исследовательской работе ФГБНУ «НИИОР» и МГУ им. М.В. Ломоносова.

Установлены нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых доноров, что будет использовано в дальнейшем при проведении научно-исследовательских и прикладных работ.

Результаты настоящего исследования использованы для разработки «Способа лабораторной оценки эффективности лечения интоксикации у реаниматологических больных» (получен Патент РФ № 2522877) и «Способа лабораторной оценки эффективности антибактериальной терапии» (получен Патент РФ № 2543335).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Фенилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в сыворотке крови человека и в норме поддерживаются организмом в стабильно низких концентрациях.

2. Уровень фенилкарбоновых кислот повышается при развитии неспецифического гнойно-воспалителыюго процесса и связан с его тяжестью.

3. Некоторые фенилкарбоновые кислоты (фенилуксусная, фенилмолочная, п-гидроксифенилуксусная, н-гидроксифенилмолочная кислоты) способны подавлять фагоцитарную активность нейтрофилов.

Публикации

Материалы данной работы были представлены в докладах на российских и международных конференциях, в том числе: на XV Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях» Москва, 2013г., XVII форуме «Национальные дни лабораторной медицины Россию) Москва, 2013г., Научно-практических конференциях молодых ученых «Современные методы диагностики и лечения в реаниматологии», Москва, 2013 и 2014 гг., IX и X

Ежегодных конференциях с международным участием «Проблема инфекции при критических состояниях», Москва, 2013 и 2014 гг., Fifth Congress of the European Shock Society, Vienna, Austria, 2013 г., 24th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Barcelona, Spain 2014 г., 34th International Symposium on Intensive Care and Emergency Medicine, Brussels, Belgium 2014 г. и др.

По теме диссертации опубликовано 27 научных работ, из них 3 статьи в российских рецензируемых журналах, включенных в перечень ВАК, получено 2 Патента на изобретение.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 93 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, представляющей материалы и методы исследования, 3 глав с изложением и обсуждением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрировала 22 таблицами и 13 рисунками. Библиографический список включает 181 источник (из них 57 работ отечественных авторов и 124 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследоваиия

Основное оборудование. В работе при модификации методики определения фенилкарбоновых кислот и для анализа образцов сыворотки крови использовали газовый хроматограф Российского производства «Кристалл 5000.2» (Хроматэк), оснащенный пламенно-ионизационным детектором.

Пробоподготовка. Образцы сыворотки крови размораживали непосредственно перед анализом при комнатной температуре. В стеклянную пробирку объемом 10 мл помещали 800 мкл воды для инъекций, 200 мкл сыворотки крови, 100 мкл раствора внутреннего стандарта в ацетоне, содержащего 400 нг 3,4-дигидроксибепзойной кислоты. К полученному объему добавляли 0,3 - 0,5 г хлорида натрия до образования насыщенного раствора и концентрированную серную кислоту до рН 2. После денатурации белка проводили экстракцию органических соединений (3*1 мл) диэтиловым эфиром. Полученный эфирный раствор упаривали досуха при 40°. Для получения триметилсклильных производных остаток обрабатывали 20 мкл N,0-

бис(триметилсилил)трифторацетамида при 80° в течение 15 мин. Полученный препарат разбавляли 80 мкл гексана.

Образцы сыворотки крови.

На этапе модификации и оценки показателей качества методики определения феннлкарбоновых кислот использовали сыворотку крови здорового добровольца.

Для оценки уровня фенилкарбоновых кислот у здоровых людей (норма) и у больных с бактериальной инфекцией разной степени тяжести использовали образцы остаточной сыворотки при заборе крови по назначениям для клинических и биохимических исследований. Образцы сыворотки замораживали и хранили при -20 °С. Повторного размораживания-замораживания не допускалось.

Набор образцов здоровых доноров (п=72) осуществлялся в Отделении трансфузиологии, заготовки и процессинга гемопоэтических стволовых клеток ФГБУ «ФНКЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» МЗ РФ. Образцы сыворотки крови от больных с локальным течением инфекции кожи и мягких тканей (п=15) получены от пациентов, находящихся на амбулаторном лечении в городской поликлинике г. Москвы. Образцы сыворотки крови от больных с тяжелым течением инфекции (п=42) получены в Отделении реаниматологии и интенсивного лечения ГКБ им. С.П. Боткина ДЗ г. Москвы.

У амбулаторных больных регистрировались общеклинические признаки воспаления: температура тела, уровень лейкоцитов в крови, частота сердцебиения и частота дыхания. Для больных отделения реаниматологии и интенсивной терапии (ОРИТ) из медицинских карт дополнительно выписывались показатели оценки тяжести общего состояния по шкалам APACHE II [Knaus W.A., 1985] и SOFA [Vincent J.L., 1996], артериального давления и результаты биохимических исследований - общего билирубина и креатинина. Наличие абдоминального гнойно-воспалительного очага инфекции подтверждено в протоколе операции, наличие пневмонии — рентгенологическим исследованием. При создании коллекции сывороток для исследования не включались образцы от больных моложе 18/старше 80 лет, со сведениями о хронической почечной/печеночной недостаточности в анамнезе, больных, получающих терапию, подавляющую резистентность к инфекции т.е. иммуносупрессию.

Экспериментальное исследование фагоцитарной активности нейтрофилов. Поглотительную функцию нейтрофилов периферической крови оценивали модифицированным методом [Гордненко Г.И., 2003; Черневская Е.А., 2008] в цельной гепаринизированной крови здоровых добровольцев - мужчин (п=30). Оценивали исходные показатели фагоцитарной активности, влияние добавок индукторов фагоцитарной активности и фенилкарбоновых кислот в разных концентрациях. В конической пробирке при 37°С в течении 30 мин инкубировали смесь: 0,1 мл гепаринизированной крови; 0,1 мл суспензии латекса (частицы латекса d=l,5 мкм); 10 мкл добавки физиологического раствора или раствор индукторов / ФКК. Готовили мазки инкубационной смеси на стекле, которые после высыхания фиксировали в пламени горелки. Окрашивали 1% раствором метиленового синего, микроскопия - под иммерсией при увеличении х 100. Просматривали не менее 10 полей зрения, осуществлялся подсчет 100 полиморфноядерных лейкоцитов. Определяли два показателя: фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) -количество лейкоцитов, поглотивших за время инкубации больше 3 частиц латекса и фагоцитарное число (ФЧ>10) -количество нейтрофилов, поглотивших за время инкубации больше 10 частиц латекса.

Статистическая обработка результатов исследования выполнялась с использованием прикладного программного обеспечения Microsoft Excel и STATISTIC А 10, StatSoft. Inc. При описании полученных результатов и групп исследования использованы функции нормальной и непараметрической статистики (приведены средние значения и показатели среднеквадратичного отклонения, или медианы и показатели 25-75 квартилей). Сопоставление результатов выполнялось с использованием критериев Манна-Уитни, Знаков, и Места.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Адаптация методики определения фенилкарбоновых кислот к применению в условиях клинических лабораторий

В данной работе была поставлена задача по адаптации методики определения ФКК в сыворотке крови для использования в условиях клинических лабораторий, а следовательно, переход от дорогостоящего оборудования, требующего обслуживания высококвалифицированным персоналом (газовых хромато-масс-спектрометров - ГХ-

МС), к более доступным приборам, позволяющим проводить большое число анализов (газовый хроматограф с пламенно-ионизационным детектором - ГХ-ПИД). Вышеизложенным обусловлено изменение ряда инструментальных параметров анализа в методике - табл. 1.

Таблица I

Изменение инструментальных параметров анализа______

Параметр ГХ-МС ГХ-ПИД

Хроматограф Agilent Technologies 6890 - «Кристалл 5000.2», СКБ

Agilent Technologies 5973 «Хроматэк», Россия

Хроматографи- Кварцевая капиллярная Кварцевая капиллярная

ческая колонка колонка HP-5ms колонка СР SIL 5СВ

(неподвижная фаза - 95% (неподвижная фаза - 100%

диметилполисилоксан, 5% диметилполисилоксан длина -

дифенилполисилоксан, длина 30 м , диаметром 0,25 мм,

- 30 м, внутренний диаметр - толщина неподвижной фазы -

0,32 мм, толщина 0,25 мкм)

неподвижной фазы - 0,25

мкм)

Температурный 400 320 320 300 270 270

режим анализа 300 200

200 ^240

100 100

"во 80 80 80

1 4 7 101316192225283134 0 1 4 7 10 13 16 19 22 25 28

Время анализа 35 мин 30 мин

В процессе адаптации пробоподготовки подобран внутренний стандарт (3,4-дигидроксибензойная кислота), подходящий для метода детектирования, и добавлена процедура высаливания, позволяющая повысить степень экстракции исследуемых аналитов. На основе анализа модельных растворов ФКК в диапазоне концентраций 0,3-7 цМ, по относительному отклику (отношение площади пика определяемого вещества к площади пика внутреннего стандарта - Si/Sst) в Microsoft Excel 2010 построены градуировочные графики. Для всех пяти ФКК в исследуемом диапазоне концентраций выявлена линейная зависимость относительного отклика от содержания компонентов (табл. 2).

Таблица 2

Уравнения регрессии, значения коэффициентов корреляций градуировочных графиков ФКК в эфире (п = 12, Р = 0,95), х - концентрация, у - относительный __отклик.

Определяемое соединение Уравнение регрессии Коэффициент корреляции

ФУК у = 0,062х Я2 = 0,993

ФПК у = 0,054х Я2 = 0,996

ФМК у = 0,063х Я2 = 0,993

п-ГФУК у = 0,063х Я2 = 0,996

п-ГФМК у = 0,050х Я2 = 0,987

В процессе апробации методики измерения ФКК на реальных образцах выявлены случаи неполного разделения хроматографических пиков ФПК и ФУК с примесями пробы. При этом у больных содержание ФПК зачастую было ниже предела обнаружения, а неполное разделение пика ФУК и посторо1гаего пика не позволяло проводить точную количественную оценку содержания этой кислоты. На основании полученных данных предложено проводить качественное определение ФПК для клинических образцов от больных людей, а оценку содержания ФУК предложено проводить полуколичествепно.

Для ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК проведена оценка метрологических характеристик методики измерения ФКК в сыворотке крови здорового донора в диапазоне концентраций 0,5-50 цМ (методом добавок). При измерении этих кислот среднеквадратичное отклонение повторяемости стг и воспроизводимости ац не превышает 5% и 13%, соответственно.

Таким образом, благодаря оптимизации инструментальных параметров, модификации стадий пробоподготовки и проведению экспериментальных исследований для аттестации и внедрения в клинико-лабораторную практику предложена методика качественного и количественного определения ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК в сыворотке крови.

Сывороточные концентрации фенилкарбоновых кислот в норме.

С целью выявления концентраций ФКК, встречающихся у здоровых людей, в исследование включено 72 образца сыворотки крови от здоровых доноров крови (42 мужчин и 30 женщин) старше 18 лет. Средний возраст доноров составил 30 (±8) лет.

Число обследованных в возрасте до 21 года составило 13 человек (18%), старше 40 лет - 8 человек (11%).

В табл. 3 приведены данные об уровнях ФКК у всех доноров и для мужчин и женщин раздельно. Сравнительный анализ позволил выявить тендерные различия, здоровые мужчины и женщины отличались по уровню ФМК (р=0,046, Мест) и п-ГФМК (р=0,012, Мест).

Таблица 3

Сравнение уровней фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых мужчин

(п=42) и женщин (п=30), мкМ

Показатель Ме ИР (25-75%) ИР (5-95%) ПИП шах Р

ФУК все 1,41 0,95—2,15 0,48—4,91 0,37 14,61 *

муж. 1,47 0,99—2,37 0,55—4,17 0,50 5,69 0,226

жен. 1,19 0,87—1,67 0,38—11,24 0,37 14,61

ФПК все 0,55 0,25—1,17 0,06—3,34 0,00 6,61 *

муж. 0,66 0,30—1,24 0,93—2,54 0,07 2,67 0,251

жен. 0,41 0,18—0,74 0,00—5,16 0,00 6,61

ФМК все 0,63 0,46—0,82 0,27—1,04 0,21 1,32 **

муж. 0,65 0,50—0,89 0,31—1,04 0,28 1,32 0,046

жен. 0,59 0,33—0,74 0,22—1,07 0,21 1,14

п-ГФУК все 0,98 0,68—1,48 0,50—2,27 0,26 3,00 *

муж. 1,02 0,74—1,64 0,51—2,32 0,26 2,53 0,280

жен. 0,90 0,63—1,08 0,45—2,54 0,39 3,00

п-ГФМК все 1,47 1,09—1,78 0,87—2,53 0,70 3,47 **

муж. 1,59 1,32—2,02 0,97—2,55 0,83 2,81 0,012

жен. 1,27 1,01—1,56 0,72—2,63 0,70 3,47

Примечание: * - критерий Манна-Уитни, ** - /-тест

Сывороточные концентрации фенилкарбоновых кислот при бактериальных воспалительных процессах разной степени тяжести.

В исследование включено 57 образцов сыворотки крови от 57 больных с документированными очагами инфекции различной локализации и степени тяжести. Из них 15 образцов от больных с локальными гнойными инфекциями кожи и мягких тканей (группа ИКМТ) - амбулаторное хирургическое лечение; и 42 образца от реаниматологических больных с пневмониями и перитонитами (группа ОРИТ).

В группе ИКМТ обследовано 7 мужчин и 8 женщин, медиана возраста составила 48 (ИР 31-64) лет. В группу включены больные со следующими заболеваниями: абсцедирующий фурункул (п=9), абсцесс мягких тканей (п=5), абсцедиругощий гидраденит (п=1).

В группе ОРИТ обследован 21 мужчина и 21 женщина, медиана возраста составила 67 (ИР 57-75) лет. У больных документированы следующие очаги инфекции: пневмония (п=25), перитонит (п=12), перитонит в сочетании с пневмонией (п=5).

В табл. 4 отражены основные клинико-лабораторные показатели, зафиксированные в группах. У больных с локальным инфекционным процессом, не нуждающихся в госпитализации, выявлено значительное повышение каждой из четырех представленных ФКК (в сравнении с нормой, рис 1). У больных с тяжелым течением инфекции (группа ОРИТ) уровни фенилкарбоновых кислот, содержащих гидроксильную группу, были значительно выше, чем в группе с локальной инфекцией. Полученные результаты позволяют утверждать, что гидроксилированные фенилкарбоновые кислоты (ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК) лучше отражают тяжесть течения бактериального воспалительного процесса.

Таблица 4

Показатель Ме (ИР 25-75) Р

1-Доноры (п=72) 2-ИКМТ (п=15) 3-ОРИТ (п=42) 1 УЭ.2 1 УБ. 3 2уб. 3

ФУК, цМ 1,4 (0,9-2,2) 2,5(1,6-3,1) 2,2 (0,8-5,3) 0,017 0,045 0,993

ФМК, цМ 0,6 (0,5-0,8) 0,9 (0,7-1,6) 2,9 (1,6-9,9) 0,005 <0,001 <0,001

п-ГФУК, рМ 1,0 (0,7-1,5) 2,9 (2,3-3,4) 11,0 (3,2-43,0) <0,001 <0,001 0,002

и-ГФМК, цМ 1,5(1,1-1,8) 3,2 (2,3-4,1) 7,4 (3,3-23,3) <0,001 <0,001 0,006

WBC, х10"9/л 6,2(5,3-7,5) 11,4(10,1-12,3) 13,7(9,2-19,3) <0,001 <0,001 0,117

Т,°С 36,6 37,3(37,2-37,5) 37,7(37,0-39,2) <0,001 <0,001 0,332

ЧСС, уд в мин н/д 78 (72-82) 100(84-111) — — <0,001

Сопоставление клинико-лабораторцых показателей между группами

(!М 12

ФУК

1,4

2,5

I I

2,2

л.....-.....и .....-.......

Доноры ИКМТ ОРИТ

ФМК

Доноры ИКМТ ОРИТ

10,0 8,0 6,0 4,0 2,0 0,0

п-ГФУК

цМ 12,0 -г

2,9

1,0

* **

шр

Доноры ИКМТ ОРИТ

п-ГФМК

|1М 12

**

7,4

*

3.2

1,5

н »

Доноры ИКМТ ОРИТ

Примечание:р<0.05 * - в сравнении с донорами, ** - в сравнении с ИКМТ, достоверность отличия по критерию Манна-Уитни Рис. 1. Сопоставление показателей фенилкарбоновых кислот между группами

Наличие фенилпропионовой кислоты было выявлено: практически у всех здоровых доноров в 70 из 72 случаев - 97%, реже в группе ИКМТ в 12 из 15 случаев -80%, в группе ОРИТ в 5 из 42 случаев — 12%. Отсутствие ФПК в образцах сыворотки крови больных с тяжелыми инфекционными процессами согласуется с результатами, полученными ранее с использованием ГХ-МС [Белобородова Н.В., 2012], и, возможно, свидетельствует о серьезных нарушениях в гомеостазе.

ФКК при разной степени органных нарушений

В отделениях реаниматологии самым опасным осложнением при наличии инфекции является развитие полиорганной недостаточности. Поэтому для разделения больных группы ОРИТ на подгруппы по степени тяжести инфекционного процесса были использованы показатели шкалы SOFA - Sepsis-related Organ Failure Assessment (шкала оценки органной недостаточности, связанной с сепсисом) [Vincent J.L., 1996], зафиксированные в медицинских картах больных.

Подгруппа SOFA 0-2 балла - бактериальный воспалительный процесс средней степени тяжести. Включено 10 больных - 4 женщины и 6 мужчин, медиана возраста составила 59 (ИР 50-76) лет. Тяжесть состояния обусловлена течением гнойно-воспалительного процесса, оценка по шкале APACHE II составила 6 (ИР 4—9) баллов. У больных верифицированы следующие очага бактериальной инфекции: пневмония (п=3), перитонит (п=6), перитонит в сочетании с пневмонией (п=1).

Подгруппа SOFA 3-7 баллов - тяжелое течение бактериального воспалительного процесса. Включено 14 больных — 7 женщин и 7 мужчин, медиана возраста в группе составила 69 (ИР 63-77) лет. Оценка тяжести состояния больных по шкале APACHE II составила 14 (ИР 9-16) баллов. Документированные очаги бактериальной инфекции: пневмония (п=8), перитонит (п=4), перитонит в сочетании с пневмонией (п=2).

Подгруппа SOFA > 8 баллов - крайне тяжелое течение бактериального воспалительного процесса. В группу включено 18 больных - 9 женщин и 9 мужчин, медиана возраста в группе составила 63 (ИР 57-74) года. По шкале APACHE II оценка тяжести состояния больных на момент забора образца крови составила - 26 (ИР 24-29) баллов. Верифицированы следующие очаги инфекции: пневмония (п=14), перитонит (п=2), перитонит в сочетании с пневмонией (п=2).

Подробная характеристика подгрупп представлена в табл. 5. По возрасту подгруппы не различались, показатели лейкоцитоза оказались значительно выше в подгруппе SOFA > 8, чем в подгруппах SOFA 0-2 и 3-7. По показателям температуры тела и частоты сердечных сокращений достоверное повышение обнаружено в подгруппе SOFA > 8, в сравнении SOFA 0-2. Подгруппы значительно различались по значению шкалы APACHE II, характеризующей общую тяжесть состояния, что подтверждает адекватность разделения выборки на подгруппы. Концентрации ФУК, ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК в каждой последующей подгруппе были значительно выше, чем в предыдущей: так в группе SOFA 3-7 концентрации всех ФКК были в 2 и более раз выше, а в подгруппе SOFA 8-15 в 10 и более раз выше, чем в подгруппе SOFA 0-2 (рис.2).

Таблица 5

Сопоставление клинико-лабораторных показателей между подгруппами больных ОРИТ

Показатель Ме (ИР 25-75) Р

1 - SOFA 0-2 2 - SOFA 3-7 3 - SOFA 8-15 1 vs.2 2 vs. 3 1 vs. 3

Возраст, годы 59 (50-76) 69 (63-77) 63 (57-74) 0,412 0,296 0,755

APACHE II, баллы 6(4-9) 14(9-16) 26 (24-29) 0,006 <0,001 <0,001

WBC, х10*9/л 11,1 (9,7-14,7) 11,6 (8,5-14,9) 19,5(12,9-21,7) 0,930 0,012 0,017

Т,°С 37,2 (36,7-37,7) 37,4 (36,9-38,5) 39,4 (37,3-40,8) 0,279 0,081 0,017

ЧСС, уд в мин 85 (79-92) 95 (81-115) 104 (99-115) 0,254 0,124 0,002

ФУК, цМ 0,5 (0,3-0,6) 1,6(1,1-2,0) 4,8 (2,8-10,7) 0,001 0,001 <0,001

ФМК, цМ 1,0 (0,6-1,6) 1,9(1,6-3,3) 8,7 (5,8-13,3) 0,007 0,001 <0,001

п-ГФУК, цМ 2,2 (0,6-4,7) 5,3 (2,6-26) 39,7 (16,6-77,7) 0,043 0,008j <0,001

п-ГФМК, цМ 2,3(1,4-3,3) 5,9 (4,0-7,8) 26,9 (10,4-44,4) 0,002 <0,001 <0,001

ФМК

8,7

1,0.......- 1,9.................■........

с=5......., . .Е2!.......... И .....

SOFA 0-2 SOFA 3-7 SOFA 8-15

цМ 40

35

30

25

20

15

10

5

О

п-ГФУК

39,7

|........_.........................5,3.......

t i.. в

SOFA 0-2 SOFA 3-7 SOFA 8-15

цМ 40 т

п-ГФМК

26,9

2,3-

SOFA 0-2 SOFA 3-7 SOFA 8-15

* -р<0.05 в сравнении с другими подгруппами, достоверность отличия по критерию Манна-Уитни Рис. 2. Сопоставление показателей фенилкарбоновых кислот между подгруппами

В группе ОРИТ (п=42) проведена оценка корреляционной взаимосвязи уровней ФКК с традиционными клинико-лабораторными показателями, результаты отражены в

табл. 6.

Таблица б

Корреляционная взаимосвязь с клинико-лабораторными показателями, (п=42)

Показатель Значение показателя Ме(25-75%) Коэффициент корреляции

ФУК ФМК п-ГФУК п-ГФМК

WBC, х10*9/л 13,7(9,2-19,3) 0,276 0,313 * 0,348 * 0,386 *

Т,°С 37,7(37,0-39,2) 0,403 ** 0,560 *** 0,258 0,414 **

ЧСС, уд в мин 100 (84-111) 0,328 * 0,589 *** 0,249 0,475 **

Количество общеклинически х признаков воспаления, абс. 3 (1-4) 0,465 ** 0,724 *** 0,479 ** 0,663 ***

Креатинин, мкМ 118 (83-257) 0,689 *** 0,643 *** 0,674 *** 0,754 ***

Общий билирубин, мМ 14,6(10,6-25,0) 0,202 0,386 * 0,037 0,302

Систолическое артериальное давление,мм рт.ст. 121 (112-130) -0,460 ** -0,484 ** -0,228 -0,588 ***

Диастолическое артериальное давление,мм рт.ст. 68 (60-73) -0,489 ** -0,338 * -0,349 * -0,555 ***

APACHE И, баллы 16 (9-26) 0,758 *** 0,740 *** 0,733 *** 0,872 ***

SOFA, баллы 7(3-12) 0,740 *** 0,810 *** 0,668 *** 0,834 ***

Примечание: коэффициент корреляции Спирмена *-р<0,05\ **-р<0,01; ***-p<0,00¡

В соответствии со шкалой Чеддока коррелляционная взаимосвязь в диапазоне от 0,1 до 0,3 интерпретируется как слабая; 0,3 - 0,5 - умеренная; 0,5 - 0,7 - заметная; 0,7 - 0,9 -высокая; 0,9 - 0,99 - весьма высокая.

В работе, посвященной диагностике и прогнозированию течения деструктивного

панкреатита, ФКК описаны как показатели возможности развития системной

воспалительной реакции организма [Хизирев Э.А., 2007]. Проведенный нами

корреляционный анализ подтверждает наличие взаимосвязи ФКК с клинико-

лабораторными показателями, характеризующими течение воспалительной реакции (лейкоцитоз, температура тела, ЧСС). Для ФМК обнаружена высокая корреляция с количеством зафиксированных общеклинических признаков воспаления (табл. 6).

Ряд работ свидетельствует о повышении уровня ФУК в крови и моче больных с хронической почечной недостаточностью [Scholze А., 2007; Aronov P.A., 2011]. Креатинин является одним из маркеров, используемых в клинике для оценки функции почек. Для ФУК, ФМК и п-ГФУК выявлена умеренная корреляция с уровнем креатинина, а для п-ГФМК - высокая. Полученные данные свидетельствуют о прямой взаимосвязи уровня ФКК с уровнем креатинина (табл. 6).

В связи с наличием в литературе данных о повышенной экскреции ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК с мочой у больных с циррозом печени [Leibich Н.М., 1985; Muting D., 1985] проведена оценка связи сывороточных уровней ФКК и общего билирубина - косвенного маркера печеночной недостаточности. Умеренная взаимосвязь обнаружена с уровнем ФМК. На данном этапе полученные результаты не позволяют делать выводов о взаимосвязи уровней ФКК с функцией печени (Табл. 6).

В эксперименте Beppu Y. и соавторов показано снижение артериального давления у крыс при трансдуоденальном введении ФМК [Beppu Y., 2013]. С учетом известного факта, что критически низкие показатели артериального давления фиксируются у больных с инфекцией в состоянии септического шока, нами проведен корреляционный анализ, который выявил обратную взаимосвязь уровней ФКК с показателями систолического и диастолического артериального давления. При этом заметная обратная корреляция обнаружена для показателей артериального давления с уровнем п-ГФМК (табл. 6).

С целью выявления взаимосвязи уровня фенилкарбоновых кислот и тяжести гнойно-воспалительного процесса проведен корреляционный анализ с показателями шкал SOFA и APACHE II, характеризующих тяжесть состояния больных. Выявлена высокая прямая корреляция уровней ФКК с показателями шкал оценки тяжести состояния больных (табл. 6).

Влияние фенилкарбоноеых кислот на фагоцитарную функцию нейтрофилов

Экспериментальное исследование выполнено на 30 образцах крови от здоровых добровольцев - мужчин старше 18 лет, медиана возраста составила 22 (18-30) года. В каждом образце оценивалась исходная фагоцитарная активность нейтрофилов (ФАН) - количество лейкоцитов, поглотивших за время инкубации больше 3 частиц латекса; и фагоцитарное число (ФЧ) - количество нейтрофилов, поглотивших за время инкубации больше 10 частиц латекса - в 18 образцах. Исходно низкой считали ФАН п < 30, как средняя расценивалась активности фагоцитов 30 > п < 60, высокой ФАН считали при п > 60. Так в 9 случаях исходная ФАН была сниженной, в 15 случаях средней и в 6 случаях высокой. Известно, что здоровые люди могут иметь индивидуальный показатель ФАН и ФЧ - как высокий, так и низкий. Для каждого образца выполнялось по 19 исследований (в соответствии с количеством добавок табл. 7), общее число определений составило

912.

Таблица 7

Добавки в образцы цельной крови каждого донора

Фаз.

Зимозан ЛПС ФУК ГФУК ФМК ГФМК ФПК

раствор

мкг/мл мкг/мл цМ цМ рМ цМ рМ

мкл

(п=5) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2) (п=2)

0,1 0,1 0,7 0,7 0,6 0,5 0,6

Добавки 10

0,01 0,01 7,3 6,6 6 5,5 6,7

Добавки были подобраны с учетом диапазона концентраций ФКК, фиксируемых у здоровых и больных людей.

Для оценки результатов исходную ФАН и исходное ФЧ (среднее пяти определений) принимали за 100%, при этом экспериментальные ФАН и ФЧ рассчитывали как процент от исходных показателей.

Контроль поглотительных функций нейтрофилов подтверждали параллельным исследованием ФАН и ФЧ под действием индукторов фагоцитарной активпости - исиользовали зимозан и ЛПС (липополисахарид Klebsiella pneumoniae

- SIGMA, Германия), достигаемая концентрация которых в образце составила - 0,1 и 0,01 мкг/мл. Под действием ЛПС 0,1 и 0,01 мкг/мл, и Зимозана 0,1 мкг/мл выявлено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов с р<0,0005, а при более низкой концентрации Зимозана - 0,01 мкг/мл рост ФАН с р<0,021 (Критерий знаков). Под действием ЛПС в обеих концентрациях отмечена тенденция к росту количества клеток, поглотивших более 10 частиц латекса.

Результаты экспериментального исследования эффектов ФКК на ФАН и ФЧ отражены на рис. 3 и 4 в табл. 8 и 9

Важным результатом данного эксперимента является обнаружешюе снижение количества фагоцитирующих нейтрофилов под влиянием ФУК, п-ГФУК и ФМК в среднем на 11%. Для двух кислот (ФПК и п-ГФМК) такого эффекта не наблюдалось. На интенсивность поглотительной способности нейтрофилов (ФЧ) статистически значимо оказывали влияние п-ГФУК, ФМК и п-ГФМК - в среднем снижение на 26%. Несмотря на то, что п-ГФМК не оказывала воздействие на количество фагоцитирующих клеток, качество их поглотительной способности резко снижалось, причем с дозозависимым эффектом (рис. 3 и 4). При добавлении ФУК наблюдалась лишь тенденция к снижению ФЧ.

Так результаты проведенного эксперимента подтвердили, что клинически значимые ФКК в концентрациях, характерных для больных людей с бактериальными воспалительными процессами, способны неблагоприятно влиять на фагоцитарную функцию нейтрофилов, что особенно характерно для гидроксилированных кислот (ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК). Возможно, способность к продукции ФКК является одним из приспособительных механизмов бактерий в защите от эффекторных клеток иммунной системы человека.

При сопоставлении с клиническими данными важно отметить, что именно гидроксилированные фенилкарбоновые кислоты многократно повышаются у больных с инфекционными процессами. Эти же кислоты в большей степени коррелируют с тяжестью состояния больных. В результате исследований установлено, что в патофизиологических механизмах снижения иммунореактивности, а именно - первого звена иммунитета - фагоцитоза, могут участвовать гидроксилировагашые фенилкарбоновые кислоты. Таким образом,

% 120

Ф - р<0.05 — достоверность отличи» по Критерию знаков

Рис. 3. Влияние фенилкарбоновых кислот на фагоцитарную активность нейтрофилов здоровых добровольцев, п=30

Таблица 1

ФУК п-ГФУК ФМК п-ГФМК ФПК

Добавка, цМ 0,7 7,3 0,7 | 6,6 0,6 6,0 0,5 5,5 0,6 6,7

Исходная ФАН, % 100

Экспериментальная ФАН, % 89 94 87 1 85 99 85 100 93 93 106

р (Критерий Знаков) 0,0005 0,3613 0,1859 1 0,0376 0,4576 0,0376 0,8501 0,3613 0,4414 0,4576

ФУК

ГФМК

ГФУК

ФМК

*

«Л мМ

ФПК

(1М

ФУК

ГФУК

ФМК

86

I

♦ - р<0.05 достоверность отличия по Критерию знаков Гис. 4. Влияние фенилкарбоновых кислот на фагоцитарное число (количество нейтрофилов поглотивших больше 10 частиц

латекса), п=18

Таблица 9

ФУК п-ГФУК ФМК п-ГФМК Ф1ТК

Добавка 0,7 | 7,3 0,7 | 6,6 0,6 | 6,0 0,5 | 5,5 0,6 1 6,7

Исходное ФЧ, % 100

Экспериментальное ФЧ, % 78 78 69 70 73 77 86 69 88 100

р (Критерий Знаков) 0,0990 0,0990 0,0095 0,0244 0,0153 0,0523 0,0389 0,0339 0,4533 0.8026

повышение концентрации любой из трех гидроксилированных ФКК (ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК) может способствовать тяжелому течению бактериальной инфекции и развитию неблагоприятного исхода у больных в критическом состоягаш.

ВЫВОДЫ

1. Для клинических исследований существующая методика ГХ-МС измерения фешикарбоновыч кислот в сыворотке крови модифицирована и адаптирована, что позволяет использовать метод газовой хроматографии с пламешю-ионизационным детектированием для внедрения в практику (при измерении ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК среднеквадратичное отклонение повторяемости стг и воспроизводимости aRHe превышает 5% и 13%, соответственно);

2. Определены нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых людей методом газовой хроматографии с пламенно-иошоационным детектированием. Показано, что клинически значимые фепилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в крови здорового человека и поддерживаются организмом на стабильном низком уровне. Установлены медианы нормальных показателей фенилкарбоновых кислот: ФМК 0,63 цМ; ФУК 1,41; п-ГФУК 0,98 цМ; п-ГФМК 1,47 цМ;

3. Развитие локального гнойно-воспалительного процесса мягких тканей сопровождается повышением уровня фенилкарбоновых кислот (ФУК, ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК) в сыворотке крови по сравнению со здоровыми донорами (р<0,02);

4. Уровень фенилкарбоновых кислот отражает тяжесть бактериального воспалительного процесса, достигая максимальных значений при крайне тяжелом течении инфекции. Обнаружена высокая корреляционная взаимосвязь концентраций ФКК с общей тяжестью состояния (APACHE II, rs от 0,733 до 0,872, р=0,001) и степенью органных нарушений (SOFA, rs от 0,668 до 0,834, р=0,001) при бактериальных инфекционных процессах;

5. Фепилкарбоновые кислоты обладают иммунотропной активностью, снижая фагоцитарную активность нейтрофилов (в эксперименте in vitrai). Увеличение концентрации ФУК, п-ГФУК, ФМК приводит к уменьшению количества фагоцитирующих клеток. Повышение концентрации п-ГФУК, ФМК, п-ГФМК снижает поглотительную способность нейтрофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Получепные результаты могут быть рекомендованы для аттестации модифицировашюй методики измерения фенилкарбоновых кислот в метрологической службе;

2. Установленные нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых доноров могут быть использованы в научно-исследовательских работах для изучения роли этих метаболитов в различных патологических процессах, а также в клинических исследованиях с лечебно-диагностической целью.

3. Модифицированная методика определения фенилкарбоновых кислот может быть основой для разработки новых медицинских технологий;' •<

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Белобородова Н.В. Лабораторная диагностика бактериальной интоксикации методом газохроматографического анализа крови / Белобородова Н.В., Возиян А.Ю., Осипов A.A. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - №9. - с. 79.

2. Белобородова Н.В. Биологические свойства некоторых низкомолекулярных ароматических микробных метаболитов, ассоциированных с сепсисом / Белобородова Н.В., Осипов A.A., Бедова А.Ю. // Антибиотики и химиотерапия. - 2013. - №7-8. - с. 36-49.

3. Осипов A.A. Участие метаболитов микробиоты в развитии критического состояния у пострадавших с черепно-мозговой травмой / Осипов A.A., Власенко A.B., Черневская Е.А., Бедова А.Ю., Гецина М.Л., Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В. // Медицинский алфавит. - 2013. - Т.26. - №4. - с. 12-15.

4. Sarshor Y.N. New criteria of bacterial load in critically ill patients / Sarshor Y.N., Beloborodova N.V., Bedova A.Y., Osipov A.A., Chernevskaya E.A., Getsina M.L. // SHOCK. - 2013. - Vol.40. - Suppl.l. - p. 31.

5. Бедова А.Ю. Адаптация газохроматографических методик определения сепсис-ассоциировшгаых ароматических микробных метаболитов в сыворотке крови / Бедова А.Ю., Белобородова Н.В., Гецина М.Л., Осипов A.A., Оленин А.Ю. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2013. - №9. - с. 60.

6. Осипов A.A. Диагностика эндогенной интоксикации у больных в критических состояниях по уровню фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови / Осипов A.A., Бедова А.Ю., Гецина М.Л., Иванов Д.А., Белобородова Н.В. // Сборник тезисов Научно-практическая конференция молодых ученых «Совремешше методы диагностики и лечения в реаниматологии». - М.: 2013. -с.35-37.

7. Бедова А.Ю. Новые биомаркеры микробного происхождения в мониторинге бактериальной интоксикации при критических состояния / Бедова А.Ю., Осипов A.A., Саршор Ю.Н., Гецина M.JI. // Сборник научных работ Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки». —Ярославль: 2013. с. 252.

8. Гецина М.Л. Оптимизация методики пробоподготовки сыворотки крови для анализа на содержание фенилкарбоновых кислот методом газовой хроматографии с целью внедрения в клиники / Гецина М.Л., Бедова А.Ю., Осипов A.A., Ревельский А.И, Оленин А.Ю., Белобородова Н.В. // Сборник трудов Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез». — Краснодар: 2013. - с. 109.

9. Бедова А.Ю. Динамика сепсис-ассоциированных микробных метаболитов у больных в критических состояниях / Бедова А.Ю., Осипов A.A., Саршор Ю.Н, Гецина M.JL, Белобородова Н.В. // Сборник публикаций IX Ежегодной

всероссийской конференции с международным участием «Гнойно-септические заболевания и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.: 2013.-с. 138-140.

10. Иванов Д.А. Динамика ароматических микробных метаболитов (амм) у кардиохирургических больных, оперированных в условиях искусственного кровообращения, с неосложненным течением послеоперационного периода / Иванов Д.А., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Гецина М.Л.// Сборник публикаций IX Ежегодной всероссийской конференции с международным участием «ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 172-173.

11. Саршор Ю.Н. Новый критерий бактериальной нагрузки у больных в отделении общей реанимации / Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Черневская Е.А., Гецина М.Л. // Сборник публикаций IX Ежегодной всероссийской конференции с международным участием «ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 210.

12. Бедова А.Ю. Адаптация газохроматографического метода определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови к использованию в клинике / Бедова А.Ю., Осипов А.А., Гецина М.Л., Оленин А.Ю., Белобородова Н.В. // Труды « Второго съезда аналитиков России». - М.: 2013. - с. 248.

13. Белобородова Н.В. Нарушение биотрансформации ароматическихметаболитов при критическом состоянии макроорганизма / Белобородова Н.В., Иванов Д.А.,Осипов А.А., Бедова А.Ю., Гецина М.Л. // Сборник тезисов 15-й Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 17-18.

14. Саршор Ю.Н. Оценка микробной нагрузки по уровню фенилкарбоновых кислот у реанимационных больных / Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Черневская Е.А., Гецина М.Л. // Сборник материалов Первой конференции Российского национального общества по изучению шока. - М.: 2013.

- с. 59-60.

15. Иванов Д.А. Мониторинг микробной нагрузки по уровню ароматических микробных метаболитов (АММ) у кардиохирургических больных с неосложненпым течением послеоперационного периода // Иванов Д.А., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Гецина М.Л. // Сборник материалов Первой конференции Российского национального общества по изучению шока. - М.: 2013.

- с. 26-28.

16. Moroz V. Microbial phenylcarboxylic acids as potential participants of sepsis-induced organ dysfunction / Moroz V., Beloborodova N., Osipov A., Vlasenco A., Sarshor Y., Chernevskaya E., Getsina M., Bedova A. // 24th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Spain. On-line library ECCMID 2014: R003.

17. Sarshor Y. Value of microbial metabolites in blood serum as criteria for bacterial load in the pathogenesis of hemodynamic disorders in critically ill patients / Sarshor Y., Beloborodova N., Moroz V., Osipov A., Bedova A., Chernevskaya E., Getsina M. // Critical Care.-2014,- 18(Suppl l).-p. P208.

18. Хорошилов C.E. Элиминация низкомолекулярных ароматических метаболитов во время экстракорпоральной детоксикации у больных ОПН при сепсисе / Хорошилов С.Е., Белобородова Н.В., Никулин А.В., Бедова А.Ю., Гецина

М.Л., Осипов АЛ. II Сбориик материалов Девятой международной конференции «Актуальные аспекты экстракорпорального очищения крови в интенсивной терапии». - М.: 2014. - с. 44-45.

19. Алексашкина Т.Н. Ароматические метаболиты отражают тяжесть гнойно-воспалительных заболеваний / Алексашкина Т.Н, Бедова А.Ю., Белобородова Н.В. // Сборник публикаций X Ежегодной конференции с международным участием «Проблема инфекции при критических состояниях». - М.: 2014. - с. 48-49.

20. Белобородова Н.В. Интеграция метаболизма человека и его микробиоты / Белобородова Н.В., Мороз В.В., Бедова А.Ю., Осипов A.A., Черневская Е.А., Дмитриева И.Б., Федотчева Н.И., Ревельский А.И., Оленин А.Ю.// Инфекция и иммунитет. - 2014. - Сентябрь, Специальный выпуск. - с. 67.

21. Бедова А.Ю. Новый способ оценки микробной нагрузки в реаниматологии / Бедова А.Ю., Алексашкина Т.Н., Черневская Е.А., Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В. // Сборник тезисов докладов. XVI Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.: 2014. - с. 16.

22. Белобородова HB., Взаимосвязь артериальной гипотепзии и микробной нагрузки у больных, поступающих в отделение реаниматологии. Белобородова Н.В., Мороз В.В., Карпун H.A., Саршор Ю.Н., Бедова А.Ю., Черневская Е.А. Сборник тезисов докладов XVI Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.: 2014. - с. 17.

23. Beloborodova N. Tyrosine metabolism disorder and the potential capability of anaerobic microbiota to decrease the value of aromatic metabolites in critical ill patients / Beloborodova N., Moroz V., Osipov A, Bedova A., Sarshor Y., Vlasenko A., Olenin A. //Critical Care, - 2014. - 18(Suppl 2). - p. P60

24. Патент на изобретете «Способ лабораторной оцепки эффективности лечения интоксикации у реаниматологических больных» № 2522877 получен 21.05.2014 Белобородова Н. В., Возиян А.Ю., Оленин А.Ю., Осипов A.A., Прядко Ю.Н, Ревельский А.И. Опубликован 20.07.2014 г. Бюллетень № 20

25. Патент на изобретение «Способ лабораторной оценки эффективности антибактериальной терапии» № 2543335 получен 27.01.2015 Мороз В.В., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов A.A., Саршор Ю.Н., Иванов Д.А. Опубликовал 27.02.2015 Бюллетень № 6

.26. Мороз В.В. Разработка и адаптация к условиям клинической лаборатории методик газо-хроматографического определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови / Мороз В.В., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Рсвельскнй A.IL, Гецина МЛ., Осипов A.A., Саршор Ю.Н., Бучннская A.A., Оленин АЛО. // Журнал аналитической химии. - 2015. - Т.70. - №4. - с. 418-425.

27. Белобородова Н.В. Нормальный уровень сепсис-ассоцннрованных фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови человека / Белобородова Н.В., Мороз В.В., Осипов A.A., Бедова АЛО., Оленин А.Ю., Гецина MJL, Карпова О.В., Оленина Е.Г. // Биохимия. - 2015. - Т.80. - №3. - с. 449-455.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БСТФА — (N.O-бис-триметилсилил) трифторацетамид ГХ-МС - газовая хромато-масс-спектрометрия

ГХ-ПИД- газовая хроматография с пламенно-ионизационным детектированием ИКМТ - инфекция кожи и мягких тканей ИР - интерквартильный размах JIITC — липополисахарид

ОРИТ - отделение реанимации и интенсивной терапии

п-ГФМК - пара-гидроксифенилмолочная кислота

п-ГФУК - пара-гидроксифенилуксусная кислота

ФАН — фагоцитарная активность нейтрофилов

ФКК - фенилкарбоновые кислоты

ФМК - фенилмолочная кислота

ФГ1К- фенилпропионовая кислота

ФУК — фепилуксусная кислота

ФЧ - фагоцитарное число

ЧСС — частота сердечных сокращений

APACHE II - Acute Physiology and Chronic Health Evaluation

SOFA — Sepsis-related Organ Failure Assessment

WBC - white blood cells

Подписано в печать:

06.07.2015

Заказ № 10828 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autorererat.ru