Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапия нарушений высшей нервной деятельности при дисбалансе эстрогенов (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

ФЕДОТОВА Юлия Олеговна

ФАРМАКОТЕРАПИЯ НАРУШЕНИЙ ВЫСШЕЙ НЕРВНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПРИ ДИСБАЛАНСЕ ЭСТРОГЕНОВ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14,00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой ртрпрчи докто]

□03166043

Волгоград - 2008 г

003166043

Работа выполнена в Отделе нейрофармакологии им С В Аничкова ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН (Санкт-Петербург)

Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Сапронов Николай Сергеевич

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Игнатов Юрий Дмитриевич

доктор биологических наук, профессор Хоронько Владимир Владиленович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Воронина Татьяна Александровна

Ведущая организация:

Военно-медицинская академия им С М Кирова (Санкт-Петербург)

Защита состоится Диссертационного

«0/» 2008 совета 'Д 208 008 02

часов на заседании ВПО «Волгофадский государственный медицинский университет Росздрава» (400131, г Волгоград, пл Павших борцов, д 1

г в ГОУ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А Р. Бабаева

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы В последнее время накоплен большой объем экспериментальных данных, свидетельствующих о роли половых стероидов не только в репродуктивном поведении, но и в модулирующем влиянии на другие, не связанные с половым, формы поведения (McEwen, Alves, 1999, Toran-Allerand et al, 1999) Действительно, исследования последних лет убедительно показали, что мозг гораздо более чувствителен к действию половых стероидов, чем предполагалось ранее (Falkenstein et al, 2000, McEwen, 2001) Установлено, что эстрогены проявляют контролирующее влияние на пренатальный и ранний постнатальный периоды развития головного мозга, а также в течение всей жизни при различных нарушениях в гипофизарно-овариальной системе (Vnes, 2004) Органами-мишенями для эстрогенов являются передний мозг, гипоталамус, гиппокамп и ядра шва мозга (McEwen, 2001)

При этом, гормональные сдвиги, обусловленные аномальным функционированием гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы, глубоко изменяют высшую нервную деятельность (McEwen, Alves, 1999, McEwen, 2001) Кроме того, исследования последних лет показывают, что эстрогены оказывают многогранное влияние на взаимодействие различных нейромедиаторных систем между собой (McEwen, Alves, 1999, McEwen, 2001, 2002, Бабичев, 2005) Это взаимодействие осуществляется посредством геномного и негеномного механизмов действия эстрогенов (McEwen, 2001) Доказано влияние эстрогенов за счет обоих механизмов действия на следующие нейромедиаторные системы норадренергическую, ацетилхолинергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, ГАМКергическую и опиоидергическую (McEwen, Alves, 1999, Toran-Allerand et al, 1999) Такое множественное влияние эстрогенов на медиаторную нейропередачу в головном мозге позволяет предполагать их участие в патофизиологических механизмах целого ряда когнитивных и психических расстройств (Lmdamer et al, 1999, Sherwm, 2000, 2005, Amin, Epperson, 2005) He случайно, что когнитивные и нервно-психические расстройства чаще встречаются у женщин по сравнению с мужчинами (Amin, Eppeison, 2005)

Для коррекции обмена веществ при возникающих гормональных сдвигах в гипофизарно-овариальной системе у женщин, как правило, назначают стандартную заместительную гормонотерапию При этом, положительный результат нередко сопровождается рядом побочных явлений, весьма губительных для отдельных пациенток Так, длительное применение эстрогенсодержащих препаратов в качестве заместительной терапии в большинстве случаев приводит к резким нарушениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах, а также к появлению новообразований (Сметник, 2003, Wang-Cheng, Rosenfeld, 2003) Следует отметить, что в эти схемы лечения не входит оптимальная нормализация мнестических процессов пациента, а сведения о какой-либо фармакологической коррекции нарушений высших функций мозга при патологич

функционировании гипофизарно-овариальной системы, кроме заместительной гормональной терапии, отсутствуют

Принимая во внимание многомерность влияния эстрогенов на ЦНС, а также широкий спектр воздействия эстрогенов на функциональную активность нейромедиаторных систем, особенно важным представляется вопрос об изучении роли эстрогенов в реализации эффектов различных фармакологических нейротропных веществ, действующих на нейромедиаторные рецепторы Анализ данных литературы показывает, что эстрогены могут оказывать существенное влияние на развитие эффектов лекарственных веществ как при остром, так и при хроническом применении препаратов (Арушанян, 2005) Следовательно, детализация эффектов нейротропных препаратов при дисбалансе эстрогенов является необходимым условием как для поиска оптимальных подходов к терапии, так и для разработки новых лекарственных препаратов Кроме того, установлено, что введение 17(3-эстрадиола в очень низких дозах, обеспечивающих уровень эстрадиола в крови, близкий к физиологическому, выраженно улучшает когнитивные процессы у овариоэктомированных крыс при исследовании в различных поведенческих тестах по сравнению с введением других препаратов эстрогенов в высоких дозах (Wise et al, 2005)

В связи с этим, разработка новых подходов фармакокоррекции, при которых используемые различные нейротропные препараты или их комбинация с эстрогенами в минимальных дозах прямо или опосредованно модулируют функциональную активность нейромедиаторных или гормональных систем, приводя к улучшению или полной нормализации процессов высшей нервной деятельности мозга, является актуальной

Целью настоящей работы являлось изучение возможности фармакологической коррекции нарушений высшей нервной деятельности мозга в условиях аномального функционирования гипофизарно-овариальной системы, а также в ключевые периоды полового цикла у самок крыс, с помощью сочетанного введения нейротропных веществ и гормонального агента в низких дозах

Задачи исследования:

1 Оценить эффекты низкого или высокого уровня эндогенных эстрогенов, тотального дефицита эндогенных эстрогенов и экзогенного введения 17(3-эстрадиола на мнестические процессы, уровень половых гормонов в крови, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов в структурах головного мозга у самок крыс

2 Провести сравнительный анализ влияния серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на условнорефлекторную деятельность и эмоциональные формы поведения, гормональный и нейромедиаторный статус, а также экспрессию генов рецепторов в головном мозге в условиях физиологических колебаний уровня эндогенных эстрогенов у нормально циклирующих самок

3 При экспериментальном дефиците эстрогенов провести сравнительное изучение действия серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных

веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17Р-эстрадиолом в минимальных дозах, на поведенческий, гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов в головном мозге

Научная новизна. Проведенное исследование позволило уточнить характер взаимодействия моноаминергических и холинергической систем с гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой, нарушения которых определяют развитие когнитивных расстройств при аномальном функционировании указанной гормональной системы Впервые проведено комплексное сравнительное изучение роли нейромедиаторных систем в патогенезе развития нарушений высшей нервной деятельности в условиях естественного колебания уровня эстрогенов в крови в течение полового цикла и при экспериментально созданном дефиците эстрогенов у самок крыс Обоснован новый подход к фармакотерапии когнитивных нарушений при дисбалансе эстрогенов, который заключается в минимизации доз нейротропных препаратов и 17р-эстрадиола при их комбинированном использовании

В процессе исследования было впервые установлено, что

1/ стимуляция 5-ГТ1А-подтипа или блокада 5-ГТ2А/2с-подтипа серотониновых рецепторов корректирует мнестические процессы у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17|3-эстрадиол,

2/ стимуляция Дгтипа или Д-типа дофаминовых рецепторов нормализует высшую нервную деятельность и уменьшает выраженность тревожного поведения у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17(3-эстрадиол,

3/ блокада Дд-типа дофаминовых рецепторов восстанавливает мнестический статус и оказывает антидепрессивный эффект у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17(3-эстрадиол,

4/ повышение уровня ацетилхолина, стимуляция М- или блокада Н-холинорецепторов корректирует условнорефлекторную память у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17|3-эстрадиол,

5/ блокада 5-ГТ1А-подтипа серотониновых рецепторов или Дгтипа дофаминовых рецепторов нарушает мнестические функции мозга у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17Р-эстрадиол

Приоритетный характер носят потученные в работе данные об эффектах серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на гормональный статус, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и рецептора 17Р-эстрадиола в структурах головного мозга, вовлеченных в механизмы реализации высших функций мозга

Научно-практическое значение работы Представленная работа, посвященная анализу важнейшего аспекта проблемы взаимодействия нейромедиаторных и гормональной овариальной систем при дисбалансе эстрогенов в патогенезе мнестических расстройств, носит фундаментальный

характер Основное теоретическое значение работы состоит в раскрытии нейро-эндокринных взаимодействий, включающих модуляцию гормонального статуса, обмена биогенных аминов и экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17р-эстрадиола Полученные в работе данные позволяют говорить о существовании конкурентных или синергичных взаимоотношений в ряде случаев между эстрогенами и нейромедиаторами в контроле высшей нервной деятельности при дефиците эстрогенов в эксперименте

Вместе с тем, проведенное исследование создает экспериментальный базис для разработки и внедрения новых подходов к фармакотерапии когнитивных расстройств при дефиците эстрогенов в клинической практике Предложен способ лечения нарушений мнестических функций при гипоэстрогенном синдроме (патент № 2268726) Полученные в работе результаты могут быть использованы и в разработке новых подходов для коррекции гормонального статуса при различных эндокринных патологиях, сопровождающихся дисфункцией гипофизарно-овариальной системы

Результаты исследования способствуют выбору оптимальной терапии конитивных расстройств при дефиците эстрогенов с учетом всех негативных и позитивных эффектов монотерапии нейротропными веществами в низких дозах или комбинированной терапии нейротропными препаратами совместно с 17(3-эстрадиолом в низкой дозе и создают необходимые условия для разработки специальных тендерных схем назначения веществ с целью повышения их эффективности и ограничения побочных реакций

Проведенный в работе анализ эффектов комбинированной терапии нейротропными веществами с 17(3-эстрадиолом открывает перспективы для создания новых фармакологических препаратов, сочетающих в себе одновременно гормональной и нейромедиаторный агенты На основе экспериментальных данных могут быть предложены новые подходы к применению нейротропных средств и/или их комбинациий с гормональными препаратами для эффективной фармакокоррекции расстройств высших функций мозга при дисбалансе эстрогенов в организме

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Направленность фармакологических эффектов нейротропных веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17(3-эстрадиолом в низкой дозе, зависит от типа расстройств высших функций мозга и функционального состояния гипофизарно-овариальной системы

2 При выборе оптимальной схемы фармакокоррекции мнестических нарушений при дисфункции гипофизарно-овариальной системы в эксперименте следует учитывать гормональный фон и тип патологии высшей нервной деятельности

3 Фармакологические воздействия на холинергическую, дофаминергическую или серотонинергическую системы могут потенцировать или ингибировать

поведенческие эффекты экзогенно введенного 17р-эстрадиола в зависимости от стимуляции или блокирования типа нейромедиаторных рецепторов

4 Использование холинотропных веществ, активирующих М-холинореактивные структуры или блокирующих Н-холинореактивные структуры головного мозга, оказывает универсальное корректирующее влияние при нарушениях высшей нервной деятельности независимо от гормонального статуса самок крыс

5 Нормализация эмоциональных форм поведения при применении нейротропных средств, стимулирующих 5-ГТ]А-подтип серотониновых рецепторов или блокирующих З-П^ддс-подтип серотониновых рецепторов, не детерминируется состоянием гипофизарно-овариальной системы

6 Позитивные эффекты дофаминотропных веществ на мнестические процессы и тревожно-депрессивное поведение зависят от гормонального статуса и характера нарушений высших функций головного мозга

Личный вклад автора. Автором лично проведены все опыты с использованием различных поведенческих методик, выполнены биохимические исследования по определению уровня тропных и периферических половых гормонов в крови m vitro и оценке обмена биогенных аминов в структурах головного мозга Часть исследований, посвященных изучению экспрессии генов рецепторов в разных образованиях головного мозга, проделана совместно с Н А Платоновой, Н В Цымбаленко и Л В Пучковой (Отдел молекулярной генетики ГУ НИИЭМРАМН)

Апробация работы Результаты работы докладывались на различных международных и всероссийских конгрессах и конференциях Из числа важнейших форумов, на которых были представлены материалы диссертации, следует отметить Пленум правления Российского научного общества фармакологов «Фармакология и современная медицина» (Санкт-Петербург, 1999), 1-ый, 2-ой и 3-ий Региональные конгрессы Международного общества психонейроэндокринологов (Санкт-Петербург, 2001, Бухарест, Румыния, 2002, Капподокия, Турция, 2004), 33-ий и 35-ый Ежегодные конгрессы Международного общества психонейроэндокринологов (Пиза, Италия, 2003, Глазго, Шотландия, 2004), 2-ой Съезд Российского общества фармакологов (Москва, 2003), Всероссийская конференция с международным участием «Нейроэндокринология -2003» (Санкт-Петербург, 2003), 1-ый Международный экологический форум (Санкт-Петербург, 2003), 24-ый конгресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Париж, Франция, 2004), Региональный кошресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Брно, Чехия, 2004), 17-ый, 18-ый и 20-ый конгрессы Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Стокгольм, Швеция, 2004, Амстердам, Нидерланды, 2005, Вена, Австрия, 2007), 8-ой Региональный конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Москва, 2005), 8-ой Всемирный конгресс биологической психиатрии, (Вена, Австрия, 2005), 3-ий Съезд фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), а также

на научных заседаниях отдела нейрофармакологии НИИЭМ РАМН (Санкт-Петербург (2004 - 2007 гт)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 53 работы, из них 22 статьи в центральных отечественных и зарубежных реферируемых журналах

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 342 страницах машинописного текста, включая 36 таблиц и 83 рисунка Диссертация содержит разделы «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», «Результаты», «Обсуждение результатов» и «Выводы» Список литературы насчитывает 344 источника, из них 28 работ на русском языке, 316 - на иностранном

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 3800 половозрелых самках крыс линии Вистар массой 180-200 г, получаемых из питомника «Рапполово» Все исследования проводились в утренние часы (10 00 - 13 00) Для выполнения каждой методики крыс разделяли на группы по 8-10 особей в каждой

Операция удаления яичников. Операционное вмешательство осуществляли с соблюдением правил асептики В качестве наркоза использовали диэтиловый эфир Методические особенности и детали операции подробно описаны у Я Д Киршенблата (1969) Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента

Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов нами были выбраны три наиболее характерные фазы полового цикла диэструс, проэструс и эструс (Розен, 1994) Определение фаз полового цикла (диэструс, проэструс, эструс) у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я Д Киршенблата (1969)

Вещества

Серотонинотропные вещества 8-OH-DPAT ([±]-8-гидрокси-2-дипропиламинотетралина гидробромид) - селективный агонист 5-ITia-рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили подкожно в дозе 0,05 мг/кг NAN-190 (1-(2-метоксифенил)-4-(4-фталимидобутил) пиперазина гидробромид) - селективный антагонист 5-ГТ1А-рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей пропиленгликоля и 1 части 96% этилового спирта, и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг ш-СРР (1-(3-хлорфенил)пиперазина гидрохлорид) - селективный агонист 5-ГТ2в/2с-рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг Кетансерин (R 41468/3-[2-[4-(4-флюоробензоил)-1-пиперидинил]этил]-2,4[1Н,ЗН] -квиназолинэдиона тартрат) — селективный антагонист 5-ГТ2а/2С~ рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг

Дофаминотропные вещества. SKP-38393 ([±]-1-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-(1Н)-3-бензазепин-7,8-диол гидробромид) - агонист Д,-типа рецепторов

растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 1,0 мг/кг SCH-23390 (Р1]-(+)-7-хлор-8-гидрокси-3-метил-1-фенил-2,3,4,5-тетрагидро-1Н-3-бензазепин гидрохлорид) - антагонист Д,-типа рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей диметилсульфоксида и 1 части 96% этилового спирта, и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг Квинпирол ([4а-транс]-4,4а,5,6,7,8,8а,9-октагидро-5-пропил-1Н-пиразол[3,4^]квинолина гидрохлорид) - агонист Д2-типа рецепторов растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,1 мг/кг Сульпирид ([К8]-(±)-5-аминосульфонил-Ы-[(1-этил-2-пирролидинил]-2-метоксибензамид) - антагонист Дг-типа рецепторов растворяли в смеси, состоящей из 5 частей дистиллированной воды, 4 частей диметилсульфоксида и 1 части 96% этилового спирта и вводили внутрибрюшинно в дозе 10,0 мг/кг

Холинотропные вещества Галантамина гидробромид растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 1,0 мг/кг Метамизил растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутрибрюшинно в дозе 0,5 мг/кг Ганглерон растворяли в 0,9% растворе NaCl и вводили внутримышечно в дозе 5,0 мг/кг При сочетанном введении метамизила и галантамина, последний вводили через 20 минут после введения метамизила

Гормональный препарат. 17Р-Эстрадиол (17(3-Е2) растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное Необходимо отметить, что в данном исследовании была использована низкая доза 17(3-эстрадиола (Wise, 2000)

Необходимо подчеркнуть, что все нейротропные вещества были использованы в низких поведенческих дозах, полностью соответствующих данным литературы (Díaz-Veliz et al, 1995, 1997, 1999, Лосев, 2001, Bethea et al, 2002) Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения фармакологических веществ

Поведенческие тесты Условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) вырабатывали на основе однократного электрокожного подкрепления в установке, состоящей из двух камер - большой (освещенной) и малой (темной) с электрифицированным полом, сообщающихся между собой круглым отверстием (Любимов, 1965) Методическая особенность эксперимента заключалась в использовании высоких значений электрического тока (6 мА) для выработки прочно сформированного навыка пассивного избегания (Sandi, Rose, 1997) Регистрировали латентный период захождения животного в темную камеру Воспроизведение УРПИ определяли через 24 часа Незахождение в темную камеру расценивали как воспроизведение навыка пассивного избегания, а укорочение времени нахождения в освещенной камере - как амнезию навыка

Водный лабиринт Морриса. Для выявления способности животных к пространственной ориентации в работе использовали бассейн диаметром 130 см

и высотой 50 см, заполненный водой на глубину 35 см (Пономарев, Виноградова, 2000) В течение 7 дней животных обучали поиску этой платформы, которая располагалась на периферии бассейна в 15 см от борта В день тестирования (8-ой день эксперимента) животному предоставлялись две попытки — тренировочная и опытная, интервал между которыми составлял 60 с В течение 3 мин регистрировали время обнаружения платформы в течение тренировочной и опытной попыток

Уровень тревожности у животных определяли с использованием общепринятого теста приподнятого «крестообразного» лабиринта (Воронина, Середенин, 2000) Поведение животных регистрировали в течение 5 мин и оценивали следующие параметры время нахождения в открытых и закрытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава

Тест Порсолта. Суть метода состоит в том, что крыс помещают в сосуд 30-40 см в диаметре и глубиной 60 см, заполненный водой с температурой 25 ± 2°С Животные, попадая в воду, стараются выбраться из сосуда Убедившись в тщетности своих попыток, крысы оставляют их и зависают в воде в характерной позе (Porsolt et al, 1978) Показателем выраженности депрессивноподобного состояния по данному тесту является длительность неподвижности, которую оценивали визуально Через 24 часа проводили тестирование выраженности депрессивноподобного состояния Животное снова помещали в сосуд с водой и в течение 5 мин регистрировали время неподвижности

Биохимические методы Определение метаболизма моноаминов в структурах головного мозга. Выделенные структуры мозга (гипоталамус, гиппокамп и миндалина) размельчали в гомогенизаторе стекло-тефлон при 4°С и скорости вращения пестика 3000 об/мин с использованием в качестве среды выделения 0,1 н НС104 После этого пробы центрифугировали при 14000 g в течение 7 мин при 4°С, после чего супернатант был профильтрован через 0 2 мм Milhpore фильтр Концентрацию дофамина (ДА), норадреналина (НА), серотонина (СА) и их метаболитов - МГФГ, ДОФУК и 5-ГИУК в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине определяли методом высокоэффективной жидкостнои хроматографии (ВЭЖХ) на «Beckman System Gold» с электрохимическим детектором LC-4C Разделение пиков проходило в хроматографической колонке SperoClone 5ц ODS 2 (250 mm х 4,60 mm) с предколонкой Security Guard (ODS 4,0 mm L x 3,0 mm ID) производства «Phenomenex» В состав подвижной фазы входил 0,1 М цитратно-фосфатный буфер, содержащий 0,3 мМ октансульфоната натрия, 0,1 мМ ЭДТА и 8% ацетонитрила (рН = 3,2) (Андреев и соавт, 2002) Идентификацию и чистоту хроматографических пиков, а также их количественную оценку осуществляли по отношению к пикам, полученным о г внешних стандартов с использованием пакета компьютерных программ

Определение уровня половых тройных и периферических гормонов в сыворотке крови. Уровень половых гормонов (лютеинизирующий гормон — ЛГ, фолликулостимулирующий гормон - ФСГ, эстрадиол - Э, прогестерон - П)

определяли в сыворотке крови с помощью гормональных тест-наборов для твердофазного иммуноферментного анализа in vitro у человека (DRG -Германия, Adultis — Италия, Biochimmak - Германия, Хема-Медика - Италия-Россия) согласно прилагаемой инструкции, но с предварительной раститровкой всех наборов и подбором оптимального разведения сывороток крови крыс, выполнением теста на удвоение и теста внутреннего стандарта для каждого набора Подсчет результатов производился автоматически с помощью многоканального плашечного спектрофотометра «Униплан» (Россия) при длине волны 450 нм

Определение уровня экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17Р-Е2-рецептора в структурах головного мозга. Характер экспрессии 5-ГТ|А-рецептора, 5-ГТ2С-рецептора, Д, -рецептора, Д2-рецептора, М-холинорецептора, Н-холинорецептора и 17Р-Е2-рецептора в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине определяли методом полуколичественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 5-ГТ|А-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank AcN NM 012585, Rattus norvegicus 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor lA(Htrla), mRNA, 1269 bp Длина ПЦР-продукта для 5-ГТ1А-рецептора составляла 362 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 5-ГТ2с-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank AcN NM_012765, Rattus norvegicus 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 2C(Htr2c, mRNA, 1383 bp) Длина ПЦР-продукта для 5-ГТ2с-рецептора составляла 170 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Дгрецептор, были подобраны по последовательности Genbank AcN NM O 12546, Rattus norvegicus dopamine receptor 1A (Drdla), mRNA, 3715 bp Длина ПЦР-продукта для Дгрецептора составляла 202 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Дд-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ас N NM_012547, Rattus norvegicus dopamine receptor 2 (Drd2), mRNA, 2750 bp Длина ПЦР-продукта для Д^-рецептора составляла 399 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих М-холинорецептор, были подобраны по последовательности Genbank AcN NM_031016, Rattus norvegicus cholinergic receptor, muscarinic 2 (Chrm2), mRNA, 2483 bp Длина ПЦР-продукта для М-холинорецептора составляла 200 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих Н-холинорецептор, были подобраны по последовательности Genbank AcN NM_031016, Rattus norvegicus cholinergic receptor, nicotinic, alpha, polypeptide 2 (neuronal) (Chrna2), mRNA, 1931 bp) Длина ПЦР-продукта для Н-холинорецептора составляла 201 п н Последовательности прямого и обратного праймеров, кодирующих 17Р-Е2-рецептор, были подобраны по последовательности Genbank Ас N RNU57439, Rattus norvegicus estrogen receptor beta mRNA, 2555 bp Длина ПЦР-продукта для ПР-Ег-рецептора составляла 332 пн Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей ДНК проводили с использованием программы «BLAST»

(http //www nebí nlm mh gov/BLASTA Тотальную РНК выделяли из -25-30 мг ткани с помощью QiuckPrep Total RNA Extraction kit™ (AmershamPharmaciaBiotech, UK Limited) в полном соответствии с протоколом производителя Обратную транскрипцию проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 1,0 мкг полирибосомной РНК, 200,0 ед РНК-зависимой ДНК-полимеразы (M-Mlv обратная транскриптаза, 200,0 Ед/мкл, АмплиСенс, Россия), 1,0 мкМ random-праймера (АмплиСенс, Россия), эквимолярную смесь четырех dNTP по 500,0 мкМ каждого (Promega, США), 5ХОТ-буфер Полимеразную цепную реакцию проводили в 30,0 мкл смеси, содержащей 1 мкл синтезированной кДНК, 1,5 ед рекомбинантной Диа Taq-полимеразы (5,0 Ед/мкл, АмплиСенс, Россия), 1,5 мМ MgCb, эквимолярную смесь четырех dNTP по 200,0 мкмолей каждого, 6,0 мкл 5-кратного ПЦР-буфера (АмплиСенс, Россия) и по 0,5 мкМ специфических праймеров (Синтол, Россия) Начальную денатурацию проводили при 94°С в течение 5 мин, синтез состоял из 30 циклов, включавших этапы денатурации (94°С, 1 мин), отжига (60°С для 5-TTia-рецептора, 55°С для 5-ГТ2с-рецептора, 57°С для Дгрецептора, 59°С для Д2-рецептора, 55°С для М-холинорецептора, 59°С для Н-холинорецептора, 1 мин) и элонгации (72°С, 1 мин) Заключительный цикл элонгации длился 7 мин Протокол амплификации для 17 ß-E2-peuernopa начальная денатурация при 94°С в течение 5 мин, 35 циклов 94 °С 1 мин, 53°С 1 мин, 68°С 1 мин, и последний цикл элонгации 7 мин 68°С В качестве контроля синтезированных кДНК проводили ПЦР с праймерами к ß-актину Были использованы следующие праймеры прямой 5'-GA AG ATCCTGACCG AGCGTG-3' и обратный 5'-AGCACTGTGTTGGCATAGAG-3' Длина ПЦР-продукта составляла 327 пн Электрофоретический анализ ПЦР продуктов проводили в 1% агарозном геле В качестве маркеров использовали ДНК-маркеры фирмы Сибэнзим (от 1000 пн до 100 пн, отличающиеся друг от друга на 100 пн) Определение относительного содержания ЦП-мРНК проводили следующим образом ПЦР-продукты подвергали электрофорезу в 1% агарозном геле, гели окрашивали бромистым этидием, цифровые фотографии геля денситометрировали посредством программы Scion Image и результаты выражали как отношение количества образовавшегося ПЦР-продукта данной мРНК к количеству ß-актина

Статистическая обработка результатов

Результаты экспериментов обрабатывали с применением интегрированного пакета статистических программ SPSS 9 0 (StatSoft, Inc) Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием двухфакторного дисперсионного анализа (General Linear Model) при Р<0 05 Данные, не удовлетворяющие критериям нормального распределения и не прошедшие тест на равенство дисперсий, обрабатывали с применением теста Краскалла-Уоллиса В таблицах и графиках результаты экспериментов представлены в виде М ± ш, где М — среднее арифметическое, ш — среднеквадратичная ошибка среднего арифметического, число животных в группах (N) было 8-10 особей

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние серотонинотропных веществ на высшую нервную деятельность у

интактных самок крыс

Было выявлено, что при стимуляции 5-ГТ1А-подтипа или при блокаде 5-ГТ2а/2С-подтипа серотониновых рецепторов независимо от уровня эндогенных эстрогенов в организме нарушалась способность к воспроизведению условной реакции пассивного избегания '(УРПИ) и существенно угнеталась способность самок к пространственному обучению (рис. 1 и 2).

150 100

Л к

диэструс проэструс эструс

□ контроль Об-ОН-ЭРАТ □ МАМ-190 Окетансерин

Рисунок 1. Влияние серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

тренировочная попытка » *

ВО 50 40 30 -20 10 -

опытная попытка

1Й

диэструс проэструс эструс

□ контроль Ов-ОН-ОРАТ Нт-СРР Пкетансерин

диэструс проэструс эструс

□ контроль П8-ОН-ОРАТ Нт-СРР 0кетансерин

Рисунок 2. Влияние на пространственное обучение в водном тесте Морриса (8-ой день тестирования) у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. \.

В то же время, блокада 5-ГТ|А-подтипа серотониновых рецепторов как при низком уровне эндогенных эстрогенов, так и при их высоком уровне приводила к восстановлению процесса воспроизведения УРПИ у крыс (рис. 1). С другой стороны, стимуляция 5-ГТ2в/2С-подтипа серотониновых рецепторов выражение улучшала пространственное обучение у крыс независимо от уровня эндогенных эстрогенов в организме (рис. 2).

В тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт у самок крыс при среднем или низком уровне эндогенных эстрогенов на фоне блокады 5-ГТ|А-1Юдтипа серотониновых рецепторов регистрировался анксиогенный эффект, тогда как при высоком уровне эстрогенов, напротив, проявлялся анксиолитический эффект (табл. 1). При стимуляции 5-ГТ2вдсгПОдтапа серотониновых рецепторов при низком или среднем уровне эндогенных эстрогенов уровень тревожности снижался, а при их

Таблица 1

Влияние ЫАЫ-190, т-СРР и кетансерина на тревожное поведение _йнтаюгных самок крыс___

Фаза цикла Время в Время в Количество Количество

«открытых «закрытых заходов в заходов в

рукавах», сек рукавах», сек «открытые рукава», раз «закрытые рукава», раз

ИНТАКТНЫЕ САМКИ

ДИЭСТРУС 86,4 ± 6,2 213,6 ±2,4 1,8 ±0,2 2,1 ±0,4

ПРОЭСТРУС 36,4 ± 3,4* 263,6 ± 8,6* 0,4 ±0,1* 4,5 ± 0,2*

ЭСТРУС 42,6 ±4,2* 257,4 ± 2,2* 0,3 ±0,1* 4,0 ± 0,6*

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + ИАМ-190

ДИЭСТРУС 41,2 ±3,4"' 258,8 + 8,6* 1,2 ±0,2 2,2 ± 0,2

ПРОЭСТРУС 90,3+3,4* 209,7 ± 6,2* 0,4 + 0,2 4,0 + 0,4

ЭСТРУС 23,7 ± 2,2" 276,3 + 3,8" 0,3 + 0,1 4,1 ±0,6

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + т-СРР

ДИЭСТРУС 153,4 + 3,2" 146,6 + 4,2" 4,2 + 0,4" 0,8 ± 0,2"

ПРОЭСТРУС 13,8 ±0,8* 286,2 ± 5,6 0,1 ±0,02" 3,9 ±0,8

ЭСТРУС 86,8 + 5,2* 213,2 ±7,2* 3,6 ±0,2* 1,6 ±0,4*

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + КЕТАНСЕРИН

ДИЭСТРУС 83,5 + 4,2 216,5 + 2,4 1,6 ±0,2 2,0 ± 0,6

ПРОЭСТРУС 84,0 ± 4,8" 216,0 + 5,6" 2,8 ± 0,2* 0,6 ± 0,2"

ЭСТРУС 92,0 ± 6,2" 208,3 ± 4,6" 2,6 ± 0,2" 0,5 ±0,2"

Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

высоком уровне - степень тревожности у самок крыс увеличивалась. Однако блокада 5-ГТ2А/2с-подтипа серотониновых рецепторов однонаправлено вызывала аяксиолитический эффект в условиях как низкого, так и высокого содержания эндогенных эстрогенов.

В тесте Порсолта стимуляция 5-ГТ]д- или 5-ГТ2вдс-подтипов серотониновых рецепторов в условиях низкого или высокого уровня эндогенных эстрогенов оказывала антидепрессивный эффект у самок (рис. 3).

Рисунок 3. Влияние серотонинотропных веществ на депрессивноподобное поведение у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 1.

Таким образом, можно говорить о наличии избирательного влияния серотонинотропных веществ на условнорефлекторную деятельность и депрессивноподобное поведение в течение полового цикла. Действие

серотонинотропных веществ на тревожное поведение во многом определяется фазой полового цикла

Согласно данным литературы, 8-OH-DPAT в низких дозах (0,1 - 0,3 мг/кг, подкожно) улучшает кратковременную рабочую память у самцов крыс, тогда как введение 8-OH-DPAT в высокой дозе (1,0 мг/кг, подкожно), напротив, нарушает кратковременную рабочую память и удлиняет латентный период появления рефлекса (Cole et al, 1994, Menenses, Hong, 1995) Это связано с тем, что в низких дозах 8-OH-DPAT действует на пресинаптические рецепторы, а в высоких дозах -на постсинаптические 5-ГТ1А-рецепторы (Bethea et al, 2002) Выявлено, что NAN-190 (1,0 мг/кг, внутрибрюшинно) улучшал различные виды памяти у самцов крыс (Ohno, Watanabe, 1996, Souza et al, 2001) Работы Diaz-Veliz и соавторов (1997) показали, что однократное введение кетансерина (3,0 мг/кг, подкожно) за 30 минут до тестирования проявляло анксиолитический эффект в фазу диэструса, но анксиогенный эффект - в фазы эструса и проэструса, при этом кетансерин в данной дозе не оказывал какого-либо влияния на тревожное поведение у самцов крыс У самок, получавших кетансерин, не было выявлено воспроизведения УРПИ в фазы диэструса и метэструса, но в фазу эструса при введении этого препарата отмечалось воспроизведение УРПИ На УРАИ кетансерин оказывал позитивное влияние в фазу эструса, однако нарушал способность у животных к этой форме обучения в фазу диэструса (Díaz-Veliz et al, 1997)

Влияние серотонинотропных веществ на уровень тропных и периферических

половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17Р-эстрадиола в головном мозге у интактных

самок крыс

При изучении нейрохимических механизмов действия серотонинотропных препаратов на мнестические функции мозга было выявлено, что данные гормонального и нейромедиаторного статуса, а также результаты экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17Р-Е2 у самок в фазу эструса или проэструса, получавших исследуемые вещества, не коррелируют отчетливо с результатами, обнаруженными в поведенческих тестах Можно говорить только о существовании модуляции протекания биохимических процессов в зависимости от фазы полового цикла под действием серотонинотропных веществ, что в конечном итоге выражается и в модуляции условнорефлекторной деятельности Вместе с тем, нельзя недооценивать те биохимические и поведенческие эффекты, которые оказывают серотонинотропные вещества при их применении в течение полового цикла в эксперименте, поскольку эти нейротропные вещества глубоко изменяют функциональное состояние всей гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы

Влияние серотонинотропных веществ на высшую нервную деятельность у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших

17р-эстрадиол

Изолированное или комбинированное с низкой дозой 17(3-Е2 хроническое введение агониста 5-ГТ1А-подтипа серотониновых рецепторов - 8-OH-DPAT или

антагониста 5-ГТ2А/гсгГЮДтипа серотониновых рецепторов - кетансерина ОЭ самкам оказывало позитивное влияние на процессы обучения и памяти как на модели непространственного обучения — модель УРПИ, так и на модели пространственного обучения - водный тест Морриса (рис. 4, 5, 6 и 7). При этом, введение 8-ОН-БРАТ или кетансерина ОЭ самкам, получавшим 17(3-Е2 и без него, сопровождалось снижением уровня тревожности в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт ([Т(7,36) = 3,40, р<0,05] и [Т(5,72) = 21,95, р<0,01], соответственно) и степени депрессивности в тесте Порсолта ([Т(7,36) = 2,88, р<0,01] и ^(5,72) = 5,97, р<0,01], соответственно).

Рисунок 4. Влияние серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок крыс. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или эструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса или эструса, получавших серотонинотропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок.

диэструс ЗСТруС ОЭ

□ контроль £3 8-OH-DPAT П т-СРР ¡Шкетансерин

тренировочная попытка

3

диэструс эструс 03

□ контроль Q8-OH-DPAT fflNAN-190 Вкетансерин

SO 50 -40 -30

20 10 о

опытная попытка

й

диэструс эструс ОЭ

□ контроль Q8-OH-DPAT я MAN-190 £3 кетансерин

Рисунок 5. Влияние серотонинотропных веществ на пространственное обучение (8-ой день тестирования) в тесте Морриса у ОЭ самок крыс. Примечание: см. как на рис, 4.

В то же время, изолированное или сочетанное с 17р-Е2 хроническое введение антагониста 5-ГТ1А-подтипа серотониновых рецепторов — NAN-190 вызывало антиамнестический эффект у ОЭ самок на разных моделях обучения и не оказывало какого-либо влияния на эмоциональные формы поведения. Необходимо также отметить, что позитивные поведенческие эффекты самого 17(В-Е2 у ОЭ самок на фоне введения NAN-190 полностью блокировались. Вместе с тем, введение агониста 5-ГТ2В/2с-подтипа серотониновых рецепторов ОЭ самкам — т-СРР только частично проявляло позитивное действие на условнорефлекторную деятельность. Такие эффекты препарата могут быть обусловлены его способностью действовать не только на 5-ГТ2В- или 5-ГТ2С-подтипы серотониновых рецепторов, но и на 5-

„ # »» ш

ГТ|В- и 5-ГТ|д-подтипы серотониновых рецепторов, хотя и в меньшей степени (Вейеа е1 а1., 2002).

Рисунок 6. Влияние

серотонинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок, получавших 17|3-эстрадиол.

Примечание: * - р<0,05 (тест Тыоки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или проэструса; -р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или проэструса, получавших серотонинотропные вещества; # -р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от контроля 3; $ - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17р-эстрадиол.

200 180 160 140 120 100 60 60 40 • 20 о

т

диэструс проэструс ОЭ ОЭ + Е2

О контроль 08-ОН-ОРАТ □N^•N-190 Шт-СРР □ кетансерин

"1

I ? #

I Пконтроль Я8-ОН-ОРАТ НМАМ-190 Ркетансерин

опытная попытка

□ контроль И8-ОН-ОРАТ Еа';'АМ.-(Уи □ кетансерин

Рисунок 7. Влияние серотонинотропных веществ на пространственное обучение у ОЭ самок крыс, получавших 17р-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 6.

Влияние серотонинотропных веществ на уровень половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17(3-эстрадиола в головном мозге у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших 17р-эстрадиол

Анализ гормонального фона у ОЭ самок, получавших 8-ОН-ОРАТ или кетансерин изолированно или в сочетании с 17(3-Ег, показал, что данные препараты понижали уровни тропных гормонов - ФСГ и ЛГ - и повышали содержание Э в крови, тем самым корректируя нарушенный гормональный статус у ОЭ самок (рис. 8). Оценка обмена нейромедиаторов в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношение к мнестическим функциям, выявила, что 8-ОН-ОРАТ и кетансерин восстанавливают нарушенный обмен НА (|Т(7,36) = 14,56, р<0,05] и |Т(5,72) = 15,22, р<0,05] соответственно) и ДА ([Р(7,36) = 7,40, р<0,01] и [Б(5,72) =

20,05, р<0,01] соответственно) в гипоталамусе и миндалине, а также обмен С А (¡Р(7,36) = 15,22, р<0,05] и |Т(5,72) = 3,22, р<0,01] соответственно) в гиппокампе у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р~Е2. Кроме того, изолированное или комбинированное с 17(3-Е2 введение 8-ОН-ОРАТ или кетансерина ОЭ самкам приводит к нормализации экспрессии генов 5-ГТ|А-рецептора (¡7(7,36) = 15,44, р<0,05] и |Т(5,72) = 22,11, р<0,01] соответственно), 5-ГТ2сгрецептора (|Т(7,36) = 9,40, р<0,05] и [Р(5,72) = 15,40, р<0,01] соответственно) и 17р-Е2-рецептора (|Р(7,Зб) = 2,88, р<0,01] и [Р(1,72) = 6,92, р<0,01] соответственно) в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине.

20

ш

2 15

ПШ_

пюструс 1струс прОЭСТруС ОЭ

□ контроль □ 8-ОН-ОРАТ Окетансернн

о контроль п 8-ОН-ОРАТ □ кетансерин

а.аструс эструс проэструс ОЭ ОЭ+17-

Ь-Е! '

□ контроль Ш 8-ОН-ОРАТ □ кетансернн

Рисунок 8. Влияние серотонинотропных веществ на уровень П и Э в крови у овариоэктомированных самок крыс, получавших 17|3-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса, эструса или проэструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса, эструса или проэструса, получавших дофаминотропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок; $ - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17р-эсградиол.

Как свидетельствуют эти данные, при введении ОЭ самкам агониста 5-ГТ1А-подтипа серотониновых рецепторов или антагониста 5-ГТ2/у2с-подтила серотониновых рецепторов изолированно или совместно с 17(3-Е2 происходит нормализация как условнорефлекторной деятельности, так и эмоциональной сферы поведения. Можно предполагать, что такие поведенческие эффекты данных препаратов у ОЭ самок могут быть обусловлены позитивным и комплексным влиянием этих веществ на гормональный и нейромедиаторный статус, а также на паттерн экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17р-Е2. Следует также отметить, что в условиях комбинированного с 17р-Е2 введения 8-ОН-БРАТ и

кетансерина отмечается потенцирование всех поведенческих и биохимических эффектов нейротропных веществ и гормонального агента В то же время, негативное действие ЫАК-190 при его введении с 17Э-Ег на высшие функции мозга у ОЭ самок распространяется как на гормональный, так и на нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов в структурах головного мозга Это говорит о том, что негативное действие МАК'-190 на поведенческие процессы при дефиците эстрогенов сопровождается еще большим увеличением уровня ЛГ и понижением концентрации Э в крови, отсутствием изменений в обмене моноаминов во всех структурах головного мозга и патологически усиленной экспрессией генов 5-ГТ^-рецептора и 17(}-Е2 в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношение к мнестическим процессам Введение т-СРР ОЭ самкам только частично проявляет позитивное действие на мнестические расстройства, при этом параллельно также частично восстанавливая нарушенный гормональный фон, повышая уровень НА, ДА и СА в гипоталамусе и экспрессию генов 5-ГТ2с-рецептора и 17р-Е2-рецептора в гипоталамусе и экстрагипоталамических образованиях головного мозга

Как свидетельствуют результаты настоящего исследования, эффекты агониста и антагониста 5-ГТ1д-подтипа серотониновых рецепторов на высшую нервную деятельность у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-Е2, противоположны, что свидетельствует об избирательном действии этих веществ именно на 5-ГТ|а-подтип серотониновых рецепторов Полагают, что 5-ГТ|Д-подтип серотониновых рецепторов опосредует многие эффекты эстрогенов на ЦНС (\Vissnik ег а1, 2001) С другой стороны, известно, что ЭР может быть активирован многими стероидными и нестероидными лигандами, а не только его собственным лигандом - эстрадиолом (Тгикеппап Й а1, 1994, \Vissmk е1 а1, 2001) Можно предположить, что разнонаправленные эффекты 8-ОН-ОРА'Г и NAN-190 связаны с их воздействием на ЭР По-видимому, агонист 5-ГТ]Л-подтипа серотониновых рецепторов выступает в качестве синергичного с 17Р-Е2 активатора эстрогеновых рецепторов (ЭР), тогда как антагонист данного подтипа серотонинового рецептора препятствует связыванию 17р-Е2 с ЭР и последующие эффекты обусловлены только аллостерической активацией ЭР посредством ]\ АК-190 Данное предположение подтверждается результатами наших исследований на ОЭ самках, получавших 17р-Е2 так 8-ОН-ОРАТ потенцировал эффекты 17р-эстрадиола на поведенческий, гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17р-Е2, тогда как ЬтА]ч'-190, напротив, полностью блокировал эффекты 17Р-Е2 на эти же показатели При анализе поведенческих эффектов кетансерина и т-СРР также прослеживается разнонаправленность в их действии, хотя присутствует и некоторая схожесть их эффектов на поведенческие процессы Оба вещества воздействуют на 5-ГТ2с-подтип серотониновых рецепторов, хотя один препарат активирует, а другой блокирует этот подтип рецепторов, но при этом эффекты на процессы обучения и памяти в некоторой степени однотипны Выявленное обстоятельство отнюдь не артефакт Во-первых, в литературе имеются сведения о том, что агонисты и

антагонисты одного подтипа нейромедиаторных рецепторов могут приводить к одинаковым поведенческим эффектам именно у самок крыс с дисбалансом эстрогенов, при этом молекулярные механизмы таких эффектов до сих пор не выяснены (01аг-УеПг, 1997). Во-вторых, ш-СРР и кетансерин проявляют разнонаправленные эффекты на эмоциональные формы поведения ОЭ самок, позитивный эффект т-СРР на обучение, в отличие от такого же эффекта кетансерина, лишь частичен. Поэтому можно говорить о том, что частичный позитивный эффект т-СРР вызван его действием на 5-ГТ2с-подтип серотониновьк рецепторов, но полностью не реализуется вследствие его агонистического действия на 5-ГТ2в-подтип серотониновых рецепторов и другие подтипы серотониновьк рецепторов. Это позволяет предполагать, что б-ГТгд-подтип серотониновьк рецепторов играет более значимую роль в высшей нервной деятельности при дефиците эстрогенов у самок, чем 5-ГТ2В-подтип серотониновых рецепторов.

Влияние дофамииотропньгх веществ на высшую нервную деятельность у

интактных самок крыс

Как показали результаты экспериментов, введение агониста Дгтипа дофаминовых рецепторов - БКР-38393 или агониста Дд-типа дофаминовых рецепторов — квинпирола циклирующим самкам нормализует условнорефлекторную деятельность в фазах проэструса и эструса на моделях непространственного и пространственного обучения (за исключением действия БКР-ЗвЗЭЗ в водном лабиринте Морриса) (рис. 9 и 10).

ДИЭСТОУС

О контроль 13 ЭКР-38393 I

проэструс эструс

13СН-23390 Эхвинпирол Ысульпирид

Рисунок 9. Влияние дофаминотропных веществ на воспроизведение УРПИ у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: * -р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # -р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

Вместе с тем, хроническое введение антагониста Д,-типа дофаминовых рецепторов - 8СН-23390 или антагониста Дд-типа дофаминовых рецепторов — сульпирида приводило к ухудшению мнестических процессов у самок в фазах проэструса и эструса на разных моделях обучения (рис. 9 и 10). При этом, введение квинпирола сопровождалось снижением уровня тревожности в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт в фазах проэструса и эструса, тогда как введение ЗКР-38393 у этих же групп животных приводило к усилению проявления тревожного

опытная попытка

диэструс проэструс эструс

□ контроль В8СН-23390 Вквинпирол Исульпирид

диэструс проэструс эструс

□ контроль ЕЭ5СН-23390 Нкеанпирол Исульпирид

Рисунок 10. Влияние дофаминотропных веществ на пространственное обучение (8-ой день тестирования) в тесте Морриса у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 9.

поведения (табл. 2). Кроме того, эти вещества негативно влияли на тревожность в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт, проявляя анксиогенный эффект у

Таблица 2

Влияние дофаминотропных веществ на тревожное поведение интактных самок крыс

Фаза цикла Время в Время в Количество Количество заходов

«открытых «закрытых заходов в в «закрытые

рукавах», сек рукавах», сек «открытые рукава», раз рукава», раз

ИНТАКТНЫЕ САМКИ

ДИЭСТРУС 86,4 ± 6,2 213,6 ±2,4 1,8 ±0,2 2,1 ±0,4

ПРОЭСТРУС 36,4 ±3,4* 263,6 ± 8,6* 0,4 ±0,1* 4,5 ± 0,2*

ЭСТРУС 42,6 + 4,2* 257,4 ±2,2* 0,3 ±0,1* 4,0 ± 0,6*

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + 8КЕ-38393

ДИЭСТРУС 36,0 ± 2,4* 264,0 ± 3,2* 0,6 ± 0,2* 2,2 ± 0,2

ПРОЭСТРУС 12,4 ±2,2* 287,6 ± 2,4* 0,1 ±0,05* 4,0 ± 0,2

ЭСТРУС 20,8 ± 3,2* 279,2 ±2,8* 0,06 ± 0,02е 4,1 ± 0,2

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + 8СН-23390

ДИЭСТРУС 30,0 ± 2,6" 270,0 ± 4,6* 0,5 ± 0,2* 2,4 + 0,2

ПРОЭСТРУС 14,0+ 1,2* 286,0 ± 2,2* 0,09 ± 0,02* 3,9 ± 0,6

ЭСТРУС 23,0 + 2,2* 277,0 ±3,8* 0,05 ± 0,02* 4,3 ± 0,6

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + КВИНПИРОЛ

ДИЭСТРУС 156,4 ± 3,2 143,6 ±4,2* 4,9 ± 0,4* 0,7 ± 0,2*

ПРОЭСТРУС »1,6 ±2,4* 218,415,2* 2,7 ± 0,2* 0,8 ± 0,2*

ЭСТРУС 92,0 ±3,4* 208,0 ± 7,2* 3,8 ±0,2* 1,2 ±0,4*

ИНТАКТНЫЕ САМКИ + СУЛЬПИРИД

ДИЭСТРУС 53,4 + 3,2* 246,6 ±2,2* 0,8 ±0,2* 2,0 ± 0,2

ПРОЭСТРУС 11,8 ± 1,2* 288,2 ± 5,6* 0,1 ±0,02* 4,0 ± 0,2

ЭСТРУС 278,0 ± 3,6* 0,06 + 0,02* 4,0 ± 0,2

Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюгаа), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

самок во все фазы полового цикла (табл 2) Однако блокада Дгтипа дофаминовых рецепторов независимо от уровня эндогенных эстрогенов в организме оказывала антидепрессивный эффект у интактных самок |Т(5,72) = 20,05, р<0,01]

Исследованиями Диаз-Велиз и соавторов (1999) продемонстрировано, что при введении как агонистов/антагонистов Д|-типа рецепторов, так и агонистов/антагонистов Дд-типа рецепторов в различных тестах обнаруживается однонаправленный эффект указанных выше дофаминотропных веществ на поведенческие реакции животных обоего пола

Таким образом, влияние агонистов и антагонистов Др/Дг-типов дофаминовых рецепторов на поведенческие процессы у интактных самок противоположны, что свидетельствует об избирательном действии этих веществ на дофаминовые рецепторы При этом, агонисты как Дгтипа, так и Дг-типа дофаминовых рецепторов однотипно проявляют позитивные эффекты на условнорефлекторную память, тогда как антагонисты Дг/Дг-типов дофаминовых рецепторов сходньм образом оказывают негативные эффекты на мнестические процессы у интактных самок в фазы проэструса и эструса

Влияние дофаминотропных веществ на уровень тропных и периферических

половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17(3-эстрадиола в головном мозге у интактных

самок крыс

Наши исследования по определению биохимических механизмов поведенческих эффектов дофаминотропных веществ, указывают на то, что поведенческие эффекты этих веществ также не коррелируют с данными гормонального и нейромедиаторного анализа Кроме того, действие квинпирола и сульпирида на мнестические процессы также не коррелирует с результатами определения экспрессии генов рецепторов в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношению к когнитивным процессам Однако, для 8КР-38393 и БСН-23390 обнаружена четкая корреляция между их поведенческими эффектами и экспрессией генов соответствующих рецепторов в структурах мозга Так, позитивные эффекты 8КГ-38393 сопровождались увеличением экспрессии генов Д]-рецептора и 17р-Е2-рецептора в гиппокампе и миндалине, тогда как негативные эффекты 8СН-23390 ассоциировались с выраженным снижением экспрессии генов этих рецепторов в структурах головного мозга (рис 11) Можно полагать, что приведенные выше поведенческие эффекты 8КР-38393 и ЗСН-23390 у циклирующих самок реализуются за счет их действия на экспрессию генов Дг рецептора и 17Р-Е2-рецептора, тогда как поведенческие эффекты квинпирола и сульпирида не связаны с действием этих веществ на гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17р-Ег, а могут реализовываться посредством других биохимических механизмов

« 3 0,4

1 5 0,35

& « 0,3

о

| | 0,25

§ § 0,2

| о. 0,15

= и

I £

0,1 0,05 0

2 I

днэструс проэструс

□ растворитель И 5КР-38393

2,5 2

! 1.5 1

0,5 0

г5

Й

□ р;

проэструс

ритель Щ 5СН-23390

Рисунок 11. Влияние 8КР-38393 и 5СН-23390 на квазистационарные концентрации мРНК, кодирующую Дгрецептор и мРНК, кодирующую 17р-Е2-рецептор, у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 9.

Влияние дофаминотропных веществ на высшую нервную деятельность у овариоэктомированиых самок и овариоэктомированных самок, получавших

17|3-эстрадиол

Хроническое введение &КР-38393, квинпирола и сульпирида изолированно или в комбинации с 17р-Е2 ОЭ самкам восстанавливало условнорефлекторную деятельность как на модели УРПИ, так и в водном тесте Морриса (за исключением действия 8КР-38393 у ОЭ самок) (рис.12, 13, 14 и 15).

Рисунок 12. Влияние дофаминотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок крыс. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контроля от самок в фазе диэструса или эструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса или эструса, получавших дофаминотропные

диэструс эструс

О контроль И 8КГ'38393 08СН-2339О ЕЭкеинпирол I

вещества; § - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок.

Наряду с этим, введение 8КР-38393 и квинпирола ОЭ самкам на фоне введения 173"Е2 или без него сопровождалось снижением уровня тревожности в тесте приподнятый «крестообразный» лабиринт (¡7(7,36) = 2,88, р<0,05] и Р(5,72) = 20,40, р<0,01] соответственно), тогда как введение сульпирида тем же группам

100 80 60 -40 -20 0

гя

□ контроль

□ квинпирол

тренировочная попытка

Й.

Ш ЗКР-38393 □ сульпирид

ОЭ

аБсн-гззэо

60 40 -20 о

□ контроль

□ квинпирол

опытная попытка

ОБКР-38393 □ сульпирид

ЕБСн-гзздо

Рисунок 13. Влитие дофаминотропных веществ на пространственное обучение (8-ой день тестирования) в тесте Морриса у ОЭ самок крыс. Примечание: см. как на рис. 12.

200

180

160

140 -

«ч.

г; о. 120 -

с 100 -

-0 80 -

т

40 -

20 -

0 ■

□ контроль В ЗКР-38393 ИЗСН-23390 В квинпирол И сульпирид

Рисунок 14. Влияние

дофаминотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок крыс, получавших 17)3-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса или проэструса; - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок в фазе диэструса или проэструса, получавших дофаминогропные вещества; # - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок; $ - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17Р-эстрадиол.

опытная попытка <(Г

ГЙ

проз струе

0 ЗКР-38393 ■ сульпирид

ОЭ * Е2

аэсн-гззэо

Рисунок 15. Влияние дофаминотропных веществ на пространственное обучение у ОЭ самок крыс, получавших 17р-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 14.

животных оказывало антидепрессивный эффект в тесте Порсолта (рис. 16 и 17). С" другой стороны, изолированное или сочетанное с 17р~Е2 хроническое введение 8СН-23390 проявляло антиамнестический и анксиогенный эффекты у ОЭ животных. Необходимо также отметить, что эффекты 17(3-Е2 на поведенческий

статус у ОЭ самок полностью блокировались при сочетанном введении с SCH-23390.

ЗОО

О 250

s

о о 200

I 150

s

с 10П

I

s SO

о. ш 0

диэструс эструс

□ контроль в SCH-23390 □ сульпирид

250

аиэструс проэструс ОЭ

□ контроль Ы SCH-23390 В сульпирид

Рисунок 16. Влияние

дофаминотропных веществ на депрессивноподобное поведение, у ОЭ самок крыс. Примечание: * - р<0,05 (тест Тыоки), достоверное отлитие от самок в фазе диэструса или эструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интактных самок и фазе диэструса или эструса, получавших дофаминотропные вещества; # - э<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок.

Рисунок 17. Влютие

дофаминотропных веществ на депрессивноподобное поведение у ОЭ самок крыс, получавших 17Р-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличне от самок в фазе диэструса или проэструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от интакных самок в фазе диэструса или проэструса, получаьших

дофаминотропные вещества; # - р< 0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок; $ - р<0,05 (тест Даннгта), достоверное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17(3-эстрадиол.

Согласно данным литературы, однократное введение SCH-23390 ОЭ сайкам изолированно или в сочетании с 17р-Е2 еще более ухудшает условнорефлекторную память (Daniel et al., 2006), что полностью совпадает с результатами настоящего исследования, в котором SCH-23390 вводился хронически. Вместе с тем, однократное введение SKF-38393 в дозе 2,5 мг/кг внутрибрюшинно, РРНТ -агонист Дд-рецепторов (в нашем исследовании это квинпирол) в дозе 31,3 м кг/кг подкожно или сульпирида в дозе 10,0 мг/кг нарушало процессы активного и пассивного обучения у ОЭ самок, что противоречит результатам нашего исследования. Эти противоречия можно объяснить за счет разного времени введения фармакологических веществ, видом гормонального агента, используемых доз и линий животных. Однако данные работы Diaz-Veliz и соавторов ( 195 9) о позитивных эффектах однократного введения сульпирида и РРНТ в сочетании с эстрадиолом бензоатом на поведенческий статус у ОЭ самок полностью соответствуют результатам нашего исследования, в котором сульпирид и квинпирол вводились хронически в сочетании с 17В-Е2-

Ъшш образом, эффекты агониста и антагониста Дгподтипа дофаминовых рецег торов на высшую нервную деятельность у ОЭ крыс и ОЭ самок, получавших 17Р-Е2, противоположны, что свидетельствует об избирательном действии этих веще« тв на Дгтип дофаминовых рецепторов

Установлено, что многие агонисты Дгподтипа дофаминовых рецепторов могут выступать в качестве нестероидных лигандов, которые непосредственно связываются с ЭР (Dagger et al, 2002) В связи с этим, можно предполагать, что противоположные эффекты SKF-38393 и SCH-23390 связаны с их разнонаправленным воздействием на ЭР Так, у ОЭ самок агонист Д\-типа дофаминовых рецепторов, по-видимому, активирует ЭР, в результате чего реализуется частичный антиамнестический эффект Однако полной нормализации мнестческих функций в этих условиях не происходит, возможно, из-за низкой дозы данного препарата

Вли иние дофаминотропных веществ на уровень половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17р-эстрадиола в головном мозге у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших 17р-эстрадиол

Со тоставление данных гормонального статуса у ОЭ самок, получавших SKF-38393, квинпирол или сульпирид изолированно или в сочетании с 17Р-Е2, позво шет говорить о том, что эти препараты понижали уровни ФСГ и ЛГ гормонов до значений интактных самок в фазе диэструса, однако при этом повышались в неско гько раз концентрации П и Э в крови, что свидетельствует о несбалансированной коррекции нарушенного гормонального статуса у ОЭ самок (рис 8) Кроме того, в условиях сочетанного введения данных препаратов с 17р-Е2 стмечалось потенцирование эффектов нейротропных препаратов и гормо 1ального агента на содержание П и Э в крови у ОЭ самок Повышение уровней периферических половых гормонов само по себе является положительным фактором по сравнению с минимальными значениями этих гормонов в крови ОЭ самок Однако этот прирост концентраций гормонов происходит в несколько раз, и отсроченные во времени эффекты таких высоких уровней гормонов в настоящее время предсказать не представляется возможным В связи с этим, следует принимать во внимание то обстоятельство, что хотя SKF-38393, квинпирол и сульгагрид позитивно влияют на мнестические процессы, эти препараты выраженно повышают уровни периферических половых гормонов в крови

Не! рохимический анализ обмена моноаминов в гипоталамусе и экстрагипоталамических структурах головного мозга выявил, что SKF-38393, квинпирол и сульпирид нормализуют нарушенный кругооборот НА ((F(5,72) = 14,52, р<0,01] и ([F(7,36) = 14,56, р<0,05] соответственно) и ДА ([F(5,72) = 2,88, р<0,05] и [F(7,36) = 2,88, р<0,05] соответственно) в гипоталамусе у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-Е2

ш

О контроль И квннпирол

0 5КР-38393 д сулытирид

35 ! 30 25

У0

2 15 10 5

' 0

□ контроль Ш5КР-38393 аэСН-23390 И_К8ИНЛ1фОЛ В супьпнрид

Рисунок 18. Влияние дофаминотропных веществ на уровень половых гормонов в крови } ОЭ самок крыс, получавших 17|3-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 17.

Наряду с эгим, изолированное или комбинированное с 17р-Е2 введение квинпирола или сульпирида ОЭ самкам приводило к нормализации экспрессии генов Дг-рецептора и 17Р-Е2-рецептора в головном мозге (рис. 19). Следует также отметить, что при совместном введении данных препаратов с 17р-Е2 у ОЭ семок происходит потенцирование действия нейротропных веществ и гормонального препарата на экспрессию генов рецепторов в головном мозге. Вместе с тем, у ОЭ самок 8КЕ-38393 только при его сочетанном введении с 17р-Е2 восстанавливал экспрессию генов Дгрецептора и 17р-Е2-рецептора в гипоталамусе, гиппокампе и миндалине (|Т(7,36)= 11,22, р<0,01] и [Т(7,36) = 9,40, р<0,01] соответственно).

Как было продемонстрировано выше, при введении ОЭ самкам агонистов Дг или Дг-типов дофаминовых рецепторов или антагониста Дд-типа дофаминовых рецепторов изолированно или совместно с 17Р-Е2 происходит нормализация как

гиппокамп * ** #

овариоэктомия

ч 1

0,6 0,5 0,4

0,3 0,2 0.1

о

проэструс ОВЯ[

□ растворитель Е квинпирол

гипоталамус

оварноэктомня

I е

0,7 0,6 — 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

'тпг

О растворитель Г£ сульлирид

Рисуюк 19. Влияние квинпирола и сульпирида на квазистационарную концентрацию мРНК, кодщ ующую Дг-рецептор или 17Р-Е2-рецептор, у ОЭ самок крыс, получавших 17|3-эстрадиол. Примгчание: см. как на рис. 17.

мнесттееких процессов, так и депрессивно-тревожного поведения. Можно предп элагать, что такие поведенческие эффекты данных препаратов у ОЭ самок реализуются за счет восстанавливающего действия этих веществ на гормональный и нейэомедиаторный статус, а также на паттерн экспрессии генов рецепторов нейро:медиаторов и 17р-Е2. С другой стороны, негативное действие ЭСН-23390 на условнорефлекторную память и эмоциональные формы поведения при дефиците

эстрогенов коррелирует с еще большим нарушением экспрессии генов рецепторов в структурах головного мозга, имеющих непосредственное отношение к мнестическим процессам

Вместе с тем, при введении ОЭ самкам SKF-38393 совместно с 17Р-Е2 отмечается полное восстановление условнорефлекторной деятелыости одновременно с нормализацией нейромедиаторного статуса и экспрессии генов рецепторов в мозге По-видимому, эти эффекты у ОЭ самок обуслоьлены совместной активацией ЭР как SKF-38393, так и 17р-Е2, в результате чего происходит потенцирование действия обоих препаратов и таким образом восстанавливаются нарушенные процессы, вызванные дефицитом эстрогенов В то же время, SCH-23390, вероятно, блокирует связывание 17Р-Е2 с ЭР и последующие эффекты обусловлены только аллостерической активацией ЭР посредством SCH-23390 Данное предположение подтверждается результатами наших исследований на ОЭ самках, получавших 17Р-Е2 SCH-23390 полностью блокировал эффекты 17Р-Е2 на поведенческий статус и экспрессию генов рецепторов нейромедиатоэов и 17Р-Е2

При анализе эффектов квинпирола и сульпирида прежде всего обращает на себя внимание их однотипность в действии на мнестические процессы, несмотря на то, что один препарат является агонистом Д2-типа дофаминовых рецепторов, а другой - антагонистом этого типа рецептора Данное противоречие объяснить с точки зрения биохимических процессов в настоящее время не представ лютея возможным Тем не менее, существуют сведения о том, что агонисты и антагонисты одного подтипа нейромедиаторных рецепторов могут приводить к одинаковым поведенческим эффектам именно у самок крыс с дисбалансом эстрогенов, при этом, молекулярные механизмы таких эффектов до сих пер не выяснены (Díaz-Veliz et al, 1997, 1999)

Влияние холинотропных веществ на высшую нервную деятельность j интактных самок крыс

В результате проведенных исследований было обнаружено, что независт-о от уровня эндогенных эстрогенов в организме самок введение ингибитора ацетилхолинэстеразы - галантамина и комбинаций веществ, стимулирующие Мили Н-холинорецепторы, оказывает позитивное влияние на расстройства процессов обучения и памяти, происходящие в течение полового цикла у самок крыс (ри; 20 и 21) Вместе с тем, введение блокаторов М- или Н-холинорецепторов для коррекции нарушений условнорефлекторной памяти при низком или высоком уровне эндогенных эстрогенов в организме циклирующих крыс являлось неэффективным

::оо

ч: о 50 -

о.

с 00 -

л

Ё 50 •

н

ц о 4

А

в н *

С:КОНТРОЛЬ

С метамизил -

галантамии

Игалантамиь Оганглерон -»

галантамин

Рисунок 20. Влияние холинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: *

- р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; #

- р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

41) 39

зо

29 211 19 -111

»-Г"

«

тренировочная попытка

----

--

Вгапаиташи □ ганглерон + галантамин

5 25 Н

0

§ 20 о.

£ 15 •

1 10 Й 5Н

С

о

УЕЛ.

О контроль Ометамиэил н

опытная попытка

, Н-^-п

галантамин

проэс:трус эструс

Вгалантамин О ганглерон + галантамин

Рисунок 21. Влияние холинотропных веществ на пространственное обучение (8-ой день тестирования) в тесте Морриса у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание: см. как на рис. 20.

Влияние холинотропных веществ на уровень тройных и периферических половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17|5-эстрадиола в головном мозге у интактных

самок крыс

При изучении нейрохимических механизмов действия холинотропных препаратов на высшие функции мозга было установлено, что параллельно с: улучшением процессов обучения и памяти в течение полового цикла у самок, получавших указанные выше препараты, происходило лишь однотипное повышение уровня Э в крови (рис. 22). В то же время, корреляцию между концентрацией других гормонов и характером мнестических процессов выявить не удало гь. Данные нейромедиаторного статуса позволяют говорить о том, что галантамин, метамизил или ганглерон, введенные совместно с галантамином, одног аправленно понижали обмен НА в гипоталамусе и гиппокампе (табл. 3).

Однако, анализ экспрессии генов М- и Н-холинорецепторов в гипоталамусе и экстрагипоталамических структурах головного мозга самок крыс в фазы прозе груса и эструса свидетельствует о существовании корреляции между восстановлением нарушенных мнестических функций у циклирующих самок крыс и увеличением степени экспрессии генов М- и Н-холинорецепторов в структура?; голов того мозга (рис. 23).

50 40 30 т 20 10 0

« # »

проэструс эструс

О галантамин В гактперои

Рисунок 22. Влияние холинотропкых веществ на уровень эстрадиола в крови интактных самок крыс в различные ф 1зы полового цикла Примечание: * - р<(,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от самок в фазе диэструса; # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах полового цикла.

Таблица 3

Влияние холинотропных препаратов на обмен норадреналина в головном мозге в течение полового цикла у интактных самок

Фаза цикла Структуры головного мозга

Гипоталамус | Гиппокамп | Миндалина

ИНТАКТНЫЕ САМКИ

НА, пг/мг

Диэструс 2203,0 ± 20,2 700,5 ± 12,4 901,7 ± 10,2

Проэструс 1100,0 ± 10,8* 360,8 ± 12,2* 203,2 ± 10,2*

Эструс 1311,0 ±10,8* 310,2 ± 11,2* 200,1 + 12,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Диэструс 102,3 ± 1,2 50,2 ±1,2 50,9 + 4,6

Проэструс 40,5 ± 1,2* 100,0 ±8,6* 4,1 ±0,8*

Эструс 51,2+1,2* 211,7 ± 10,2* 2,0 ± 0,2*

3,4-МГФГ/НА

Диэструс 0,05 ±0,01 0,07 ±0,01 0,06 ±0,01

Проэструс 0,04 + 0,02 0,3 ±0,1* 0,02 ±0,001*

Эструс 0,04 ±0,01 0,7 + 0,1* 0,01 +0,001*

Диэструс ИНТАКТНЫЕ САМКИ + ГАЛАНТАМИН

НА, пг/мг

2223,0 ± 10,6 708,5 + 8,2 910,0± 10,2

Проэструс 1110,5 ± 10,2* 330,0 ± 10,2* 199,6 ± 10,2*

Эструс 1341,0 ± 10,2* 320,0 ± 8,6* 208,5 ± 12,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Диэструс 100,0 ±8,2 706,0 ± 10,2 52,3 ± 6,2

Проэструс 23,5 ± 2,2" 5,2 ± 0,2" 4,3 ±0,8*

Эструс 19,0 ± 1,2* 2,3 ± 0,2* 2,4 ± 0,2*

3,4-МГФГ/НА

Диэструс 0,04 ± 0,01 0,02 + 0,002" 0,06 + 0,01

Проэструс 0,02 + 0,002* 0,04 ± 0,02* 0,02 ±0,001*

Эструс 0,01 ± 0,002* 0,01+0,001* 0,01 ±0,001*

Диэструс ИНТАКТНЫЕ САМКИ + МЕТАМИЗИЛ

НА, пг/мг

2220,0 ± 10,6 690,0+ 10,2 890,0 ± 10,2

Проэструс 416,3 ± 10,2® 122,0 ± 10,2* 202,0+ 10,2*

Продолжение таблицы 3

Эструс | 305,9 ± 10,2# | 162,0 + 8,6" | 223,5 ±10,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Диэструс 103,5110,2 56,5 ± 5,2 50,3 + 4,2

П]ЮЭСТруС 3,5 ±0,2" 4,9 + 0,2* 4,8 ± 0,2*

Эструс 2,4 + 0,2* 2,0 ±0,2* 2,2 ± 0,2*

3,4-МГФГ/НА

Д иэструс 0,05 ± 0,02 0,07 ± 0,02 0,06 ±0,02

П]юэструс 0,008 ± 0,002* 0,04 ±0,02* 0,008 ± 0,002*

Эструс 0,007 ± 0,002* 0,01+0,001* 0,009 + 0,002*

Диэструс ИНТАКТНЫЕ САМКИ + ГАНГЛЕРОН

НА, пг/мг

2223,0 + 10,6 708,5 + 10,2 911,0 ± 10,2

П]юэструс 1115,3 ± 10,2* 372,0 ± 10,2* 192,6 ± 10,2*

Эструс 1302,2+ 10,2* 316,5 ±8,6* 206,5 ± 12,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Дяэструс 100,0 ±8,2 56,7 ± 5,2 52,3 ± 6,2

П)юэструс 43,6 ±0,2* 544,8 ± 10,2* 324,3 + 10,8*

Эструс 52,4 ±0,2* 480,9+ 10,2* 367,3 ± 10,2*

3,4-МГФГ/НА

Д-гэструс 0,04 ±0,01 0,07 + 0,02 0,06 ±0,01

Проэструс 0,04 + 0,002 1,5 ±0,2* 1,7 ±0,2*

Эструс 0,04 ± 0,002 1,5 ±0,2* 1,8 + 0,2*

Д1эструс ИНТАКТНЫЕ САМКИ + МЕТАМИЗИЛ + ТАЛАНТ АМИН

НА, пг/мг

2209,3 ± 10,6 704,0 ±10,2 910,0 ± 10,2

П[ юэструс 1121,6± 10,2* 346,4+ 10,2* 198,6 + 10,2*

Эструс 1317,5 ±10,2* 307,5 ± 8,6* 200,5 ± 12,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Дюструс 2,3 ± 0,2* 2,0 ± 0,2* 53,2 ±6,2

П{ оэструс 3,5 ± 0,2* 4,2 ± 0,2* 4,0 ±0,8*

Эструс 2,2 ± 0,2* 1,8 ±0,2* 2,4 ± 0,2*

3,4-МГФГ/НА

Д1эструс 0,001 ±0,0001* 0,003 ±0,001* 0,06 ±0,01

П{оэструс 0,003 ±0,001* 0,01 + 0,002* 0,02 ±0,001*

Эструс 0,002 ±0,0001* 0,006 ±0,001* 0,01 ±0,001*

Д »струс ИНТАКТНЫЕ САМКИ + ГАНГЛЕРОН + ГАЛАНТАМИН

НА, пг/мг

670,3 ± 10,6* 375,4+ 12,2* 911,0 ±10,2

Пр оэструс 423,6 ±10,2* 118,4 ±10,2* 199,0 ±10,2*

Эструс 610,5 ±10,2* 158,5 ±8,6* 201,5 ±12,2*

3,4-МГФГ, пг/мг

Д острус 2,9 ± 0,2* 2,4 ± 0,2* 54,0 ± 6,2

П{оэструс 3,7 ±0,2* 4,6 + 0,2* 4,1 ±0,8*

Эструс 2,0 ± 0,2* 1,9 ±0,2* 2,5 ±0,2*

3,4-МГФГ/НА

Диструс 0,004 ± 0,002* 0,006 ±0,002* 0,06 + 0,01

П{оэструс 0,008 + 0,002* 0,04 ±0,02* 0,02 ±0,001*

Эструс 0,003 + 0,001* 0,01 ±0,001* 0,01 ±0,001*

Примечание * - р<0,05 (тест Тькжи), достоверное отличие от самок в фазе диэструса, # - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от контрольных самок в соответствующих фазах по тового цикла

□ контроль Я галантамин

□ метамиэил + галантамин Оганглерон + галантамин

дмэструс проэструт; эстру!

□ контроль В галантамин

В метамизил + галантамин □ ганглерон + гапантамиг

Рисунок 23 Влияние холинотропных веществ на квазистационарные концентрации мэНК, кодирующие М- и Н-холинорецепторы, у интактных самок крыс в различные фазы полового цикла. Примечание см как на рис 22

Вместе с тем, следует отметить, что действие данных препар атов неизбирательно, поскольку обе комбинации веществ, стимулирующих рашые типы холинотропных рецепторов, одинаково позитивно влияют на условнорефлекторную деятельность у самок крыс Кроме того, это действие веществ не детерминировано уровнем эндогенных эстрогенов в организме с,1мок крыс В то же время, неэффективность действия метамизила и ганглерона в 4 азах проэструса и эструса у самок на процессы обучения и памяти не коррелирует с уровнем половых гормонов в крови и обменом моноаминов в структурах голов -юго мозга Тем не менее, отсутствие изменений в характере экспрессии генов М- и Н-холинорецепторов на фоне применения М- или Н-холиноблокаторов коррелирует с отсутствием позитивного эффекта данных веществ на мнестические процес( ы у

самок крыс независимо от уровня эндогенных эстрогенов в течение полового цикла.

Влияние холинотропных веществ на высшую нервную деятельность у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших

17Р-эстрадиол

При изолированном или комбинированном с 17р-Е2 введении ингибитора ацетклхолинэстеразы — галантамина, блокатора Н-холинорецепторов - ганглерона или комбинации веществ, стимулирующих М- холинорецепторы, - ганглерона в комбинации с гапантамином у ОЭ самок регистрировалось выраженное стимулирующее влияние этих веществ на процессы обучения и памяти на моделях пространственного и непространственного обучения (рис. 24 и 25).

и в-

диэструс проэструс ОЭ 0Э + Е2

□ контроль Огалантамин Иметамизил

В ганглерон О метамизил + галантамин ■ ганглерон + галантамин

Рисунок 24. Влияние холинотропных веществ на воспроизведение УРПИ у ОЭ самок крыс, получавших 17(5-эстрадиол. Примечание: * - р<0,05 (тест Тьюки), достоверное отличие от от самок в фазе диэструса или проэструса; ** - р<0,05 (тест Даннета), достоверное отличие от цитатных самок в фазе диэструса или проэструса, получавших холинотропные вещества; # -р<0,С5 (тест Даннета), достоверное отличие от ОЭ самок; $ - р<0,05 (тест Даннета), достс верное отличие от группы ОЭ крыс, получавших 17(3-эстрадиол.

С другой стороны, только комбинированное с 17р-Е2 введение блокатора Махолет орецепторов - метамизила или комбинации веществ, стимулирующих Н-холиг орецепторы, — метамизил в комбинации с гапантамином оказывало позит явное действие на мнестические процессы у ОЭ самок. При этом, введение указанных выше холинотропных веществ без 17(3-Е2 является неэффективным. Согласно данным литературы, однократное введение оксотреморина -потенциального агониста М-холинорецепторов улучшает поведенческий статус у ОЭ се мок, получавших эстрадиола бензоат, что также соответствует результатам нашего исследования (р1аг-УеНг е1 а1., 1995). В совместных с клиницистами исследованиях, посвященных изучению эффективности использования низкой дозы 17Р-эстрадиола в сочетании с гапантамином для фармакокоррекции расстройств высшей нервной деятельности у пациенток, перенесших экстирпацию матки с придатками, было установлено, что использование данной комбинации

■ метамизил + галантамин

СЗ галантамин В ганглерон

И ганглерон + галантамин

опытная попытка

.«lVÍÍI«-

Рисунок 25. Влияние холинотропных веществ на пространственное обу чение у ОЭ самок крыс, получавших Пр-эстргдиол. Примечание: см. как на рис. 24.

□ контроль Бметамизил

И метамизил + галактамин

и галантамин

□ ганглерон

□ ганглерон +_галантамин

нашего исследования (Diaz-Veliz et al., 1995). В совместных с клиницистами исследованиях, посвященных изучению эффективности использования низкой дозы 17Р-эстрадиола в сочетании с галантамином для фармакокоррекции расстройств высшей нервной деятельности у пациенток, перенесших экстирпацию матки с придатками, было установлено, что использование данной комбинации веществ корректирует когнитивный статус и уровень половых гормонов в крови у пациенток (Патент № 2268726). Кроме того, этот метод терапии оказался более эффективным по сравнению с применяемой стандартной заместительной гормональной терапией.

Влияние холинотропных веществ на уровень половых гормонов в крови, обмен биогенных аминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и 17Р-эстрадиола в головном мозге у овариоэктомированных самок и овариоэктомированных самок, получавших 17(3-эстрадиол

Анализ гормонального фона у ОЭ самок, получавших галантамин, ганглерон или ганглерон в комбинации с галантамином, выявил, что эти препараты понижали уровни тропных гормонов и повышали содержание Э в крови, тем сгмым корректируя нарушенный гормональный статус у ОЭ самок (рис. 26). Однако при комбинированном введении этих веществ с 17р-Е2 уровень Э в крови у ОЭ cimok резко возрастает (эффект потенцирования), что следует учитывать при составлзнии

схем терапии для пациентов. Оценка обмена нейромедиаторов и экспрессии генов рецепторов в структурах головного мозга, имеющих непосредственное

днэслрус проэструс ОЭ ОЭ+17Ь-Е2 |

□ контроль галантамин 0 метамизил

В ганглерон ш метамизил " галантамин Я ганглерон + галантамин

450

диэструс проэструс ОЭ ОЭ+|7Ь-ЕЗ

Р контроль 13 галантамин 0 метамизил 23 ганглерон ■ метамизил + галантамин В ганглерон + галантамин

Рисунок 26. Влияние холинотропных веществ на гормональный статус у ОЭ самок крыс, получавших 17р-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 24.

отношение к высшим функциям мозга, показала, что галантамин, ганглерон или ганглерон в комбинации с галантамином восстанавливают нарушенный в головном мозге эбмен моноаминов (|Т(7,36) = 14,56, р<0,05], |Р(7,36) = 9,40, р<0,05], [Р(7,36) = 15,22, р<0,05]) и экспрессию генов М- и Н-холинорецепторов, а также гена 17(3-Е2-реиепторау ОЭ крыс и ОЭ самок, получавших 17(3-эстрадиол (рис. 27).

Мокно предполагать, что поведенческие эффекты данных препаратов у ОЭ самок могут быть обусловлены позитивным и комплексным влиянием этих вещес:в на гормональный и нейромедиаторный статус, а также на характер

5 ш 5 £

о ~

3

I 5

с

аН

4

3,5 3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

|{г

□ растворитель Ш галантамин

ОЭ+ !7Ь-Е2

проэструс ОЗ

□ растворитель ш ганглерон

Рисунок 27. Влияние холинотропных веществ на квазистационарные концентрации м.'НК,

кодирующие М-

холинорецептор, Н-

холинорецеатор или 17[>-Е2-рецептор, у ОЭ самок 1рыс, получавших 17(3-эстрадиол. Примечание: см. как на рис. 24.

з *

13

диэструс проэструс ОЭ

□ растворитель @ ганглерон + галантамин

экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17Р-Е2. Следует также отменить, что в условиях комбинированного с ] 7Р-Е2 введения галантамина, ганглеро -т и комбинации веществ, стимулирующих М-холинорецепторы, отмечается потенцирование биохимических эффектов нейротропных веществ и гормональ того агента. Наряду с этим, позитивные эффекты сочетанного введения метамизила или метамизила в комбинации с галантамином совместно с 17р~Е2 на процессы обучения и памяти у ОЭ крыс коррелируют с улучшением гормонального и нейромедиаторного статуса, и экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17^-Ег в мозге.

Таким образом, можно говорить о том, что в нарушении высших функций мозга при овариоэктомии более значимую роль играют М-холинорецепторы, чем Н-холинорецепторы. Это предположение основывается на том, что прямая актив;щия М-холинорецепторов при блокаде Н-холинорецепторов или опосредованная (но

более выраженная) при действии ингибитора ацетилхолинэстеразы на фоне блокгды Н-холинорецепторов обуславливает позитивные поведенческие эффекты у ОЭ самок, не получавших гормонального агента В то же время, блокада М-холинорецепторов или стимуляция Н-холинорецепторов в отношении их действия на № естические процессы является эффективной только у ОЭ самок, получавших 17ß-E-2 В отношении способности холинотропных лигандов модулировать функциональную активность ЭР четких данных в литературе не встречается, однако исключать такую возможность нельзя (McEwen, Al ves, 1999) В таком случае можно предполагать, что блокатор Н-холинорецепторов и стимуляторы М-холинорецепторов могут активировать ЭР подобно катехоламинергическим лигандам (Dagger et al, 2002), в результате чего происходит реализация позитивных эффектов этих веществ у ОЭ самок Вместе с тем, могут существовать и другие механизмы действия холинотропных препаратов при дефиците эстро "енов, для выяснения которых необходимо проведение дальнейших исследований

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При использовании стандартной заместительной гормонотерапии воздействие осуществляется в большей степени через ЭР и незначительно через рецепторы нейрс медиаторов, в результате чего полной и адекватной нормализации высшей нервной деятельности не происходит В предлагаемом нами новом подходе к терап-ш мнестических расстройств при дисбалансе эстрогенов сочетанное прим<нение низких доз гормонального и нейротропного агентов обеспечивает сбалансированное и комплексное воздействие как на ЭР, так и на соответствующие рецепторы нейромедиаторов При этом, низкая доза эстрогенов может играгь триггорную роль в подготовке ЭР и рецепторов нейромедиаторов к фунгасиональной активации, после их угнетения вследствие дефицита эстрогенов Комбинированное применение гормонального и нейротропного агентов в низких дозах приводит к потенцированию позитивных эффектов друг друга, в результате чего гроисходит полное восстановление адекватной деятельности головного мозга за счет нормализации уровня гормонов, обмена моноаминов и экспрессии генов соответствующих рецепторов в структурах головного мозга, имеющих отношение к высшей нервной деятельности

В заключение следует отметить, что полученные в настоящей работе результата создают фундаментальную основу для внедрения в медицинскую практику новых подходов к фармакотерапии расстройств высшей нервной деятельности при дисбатансе эстрогенов в организме изолированное или комбинированное с низкой дозой 17ß-E2 введение нейротропных веществ также в низких дозах в зависимое га от характера нарушений когнитивных процессов при разном уровне эндогенных эстро! енов в организме

ВЫВОДЫ:

1 Поведенческий статус самок крыс детерминируется степенью активности гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы При этом, направленность и выраженность поведенческих расстройств зависит от причины (естест! енная или искусственная), обусловливающей функциональное состояние гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы

2 Эффективность действия нейротропных веществ в низких дозах, введенных изолированно или в комбинации с 17р-эстрадиолом в низкой дозе, зависит от вида когнитивной патологии и функционального состояния гипофи. арно-овариальной системы Хроническое введение 17р-эстрадиола в низкой дозе может играть триггерную роль в подготовке эстрогеновых рецептоэов и рецепторов нейромедиаторов к функциональной активации, после их угнетения вследствие дефицита эстрогенов

3 Фармакологические воздействия на холинергическую, дофаминергическую или серотонинергическую системы могут потенцировать или ингибировать биологические эффекты экзогенно введенного 17р-эстрадиола в зависимости от стимуляции или блокирования типа нейромедиаторных рецепторов

4 В механизмах когнитивных расстройств, возникающих в ключевые фазы полового цикла, М- и Н-холинорецепторы принимают участие в равной степени С целью устранения этих расстройств возможно исполь: овать галантамин, метамизил или ганглерон в комбинации с галантамином

5 5-ГТ1а-подтш1 и 5-ГТгв-подтип серотониновых рецепторов вовлекаются в механизмы аффективных расстройств в течение полового цикла у самок крыс При этом, стимуляция данных подтипов рецепторов приводит к снижению выраженности депрессивноподобного поведения у самок в ключевые фазы полового цикла

6 5-ГТ2алс-подтипы серотониновых рецепторов играют выраженную роль в тревожных расстройствах в течение полового цикла и при дефиците эстрогенов у самок крыс При этом, блокада данных подтипов рецепторов привода к уменьшению проявления тревожности у самок в ключевые фазы полэвого цикла и на фоне овариозкгомии

7 В механизмах мнестических расстройств, сопровождающихся трево;кным поведением у циклирующих самок, принимает участие Дг-тип дофамиьовых рецепторов При этом, стимуляция данного типа рецептора востанавливает оптимальный поведенческий статус у самок в течение полового цикла

8 5-ГТ1А-П0ДТИП серотониновых рецепторов и Дгтип дофаминовых рецепторов играют существенную роль в расстройствах высшей нервной деятельности, обусловленных дефицитом эстрогенов стимуляция этих типов рецепторов приводит к нормализации мнестических процессов и корректфует эмоциональные формы поведения, тогда как блокада этих типов рецепторов, напротив, полностью нарушает мнестические функции у овариоэктомированных самок

9 Да тип дофаминовых рецепторов вовлекается в механизмы эмоциональных форм поведения при дефиците эстрогенов При этом, стимуляция данного тина рецептора уменьшает выраженность тревожного поведения, тогда как блокада Дг типа дофаминовых рецепторов оказывает антидепрессивный эффект у овариоэктомированных самок

10 В нарушении высших функций мозга при овариоэктомии более значимую роль играют М-холинорецепторы, чем Н-холинорецепторы Введение галантамина, гактлерона или комбинации ганглерона с галантамином корректирует поведенческий статус при дефиците эстрогенов

11 Фармакотерапия расстройств поведения при дисбалансе эстрогенов в организме заключается в изолированном или комбинированном с низкой дозой 17(3-эстрадиола применении нейротропных веществ в низких дозах в зависимости от тина нарушений высшей нервной деятельности

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: Патент:

1 Н С Сапронов, Н А Лосев, Ю О Федотова, М Е Комова Способ лечения нарушений мнестических функций - Патент № 2268726 - Бюллетень изобретений - 2006 - С 1-6

Статьи:

1 НС Сапронов, ЮО Федотова, НП Гончаров Половые гормоны и поведенческие реакции - Вестник РАМН -2001 -№12 - С 29-34

2 ЯЛ Гончаров, Ю О Федотова, Н С Сапронов Влияние дегидроэпиандростерона на условное пассивное избегание у овариоэкгомированных крыс-самок разного возраста - Журн высш нерь.н деятельности им И П Павлова -2002 -Т 52 - №3 -С 371-373

3 НС Сапронов, Ю О Федотова, А А Байрамов Влияние ДГЭА на у слов! орефлекторную деятельность и моноаминергический статус у овари: ктомированных крыс. - Мед акад журнал -2003 -Т 3 -№1 -С 41-47

4 Ю О Федотова, Н С Сапронов Способность ципрамила корректировать условюе пассивное избегание у овариоэкгомированных крыс-самок - Экспер и клин Оармакол -2003 -№1 -С 8-11

5 Н С Сапронов, Ю О Федотова, Е И Малыгина Модулирующие эффекты 8-OH-DPAT на поведенческий статус овариоэктомированных крыс-самок - Бюлл экспер им биолог мед -2004 - Т 137 - № 1 - С 51-55

6 Ю.О Федотова Влияние агонистов серотониновых рецепторов I подтипа на поведение и уровень половых гормонов в крови интактных и овариоэктомированных крыс-самок - Новости медико-биологических наук (News of Biomedical Sciences) -2004 - №1 - С 90-98

7 НС Сапронов, ЮО Федотова, ЕИ Малыгина Роль 5-НТ:А рецепторов серотонина в условнорефлекторных реакциях при дефиците эстрогенов - Мед акад журн - 2004 - Т 4 - № 2 - С 53-61

8 J О Fedotova, G Hartmann, L Lenard, N S Sapronov Effects of 5-HTiA re;eptor agonist and antagonist on anxiety in intact and ovariectomized female rats Acta Physiologica Hung 2004 -V 91 -№(3-4) -P 175-184

9 JO Fedotova, G Hartmann, L Lenard, NS Sapronov Involvement of 5-HTja receptors in passive avoidance learning m intact and ovariectomized female rats -Acta Physiologica Hung -2004 - V 91 -№(3-4) -P 185-196

10 НС Сапронов, ЮО Федотова Экспериментальные и клинические астекты психонейроэндокринологии - В мон Основы Нейроэндокринологии - 2ЛБИ-СПб -2005 - С 32-83

11 НС Сапронов, ЮО Федотова, ЕИ Малыгина Участие Д|- и Дд-подтипа дофаминовых рецепторов в модуляции поведенческих процессов при дисбглансе эстрогенов - Мед акад журн - 2005 - Т 5 -№3 -С 52-58

12 D Consoli, J Fedotova, V Micale, N Sapronov, F Drago Stressors affect the response of male and female rats to clomipramine m a model of behavioral despair (forced swim test) - Eur J Pharmacol -2005 -V 250 -N 1-3 -P 100-107

13 ЮО Федотова, НС Сапронов Нейрохимические механизмы антидепрессивного эффекта антагониста Дд-подтипа дофаминовых рецепторов у овариоэктомированных крыс - Нейрохим - 2006 - Т 23 - № 1 - С 35-41

14 Ю О Федотова Влияние введения агониста и антагониста Дг-дофамиювых рецепторов на поведение интактных и овариоэктомированных крыс - Хурн высш нервн деят им И П Павлова -2006 - Т 56 - №1 -С 111-117

15 ЮО Федотова Влияние 8-ОН-DP AT на депрессивное поведение и обмен моноаминов в гиппокампе овариоэктомированных крыс - Эксперим и кл-гаич фармаколог -2006 -Т 69 -№1 -С 12-17

16 НА Лосев, ЮО Федотова, НС Сапронов Антиамнестический эффект галантамина в комбинации с эстрадиолом у овариоэктомированных крыс-с амок среднего возраста -Бюлл эксперим биолог мед -2006 - Т 141 -№4 - С 411413

17 НС Сапронов, Ю О Федотова, НА Лосев Комбинированное введение NAN-190 с 17р-эстрадиолом устраняет амнестический эффект скополамина у овариоэктомированных крыс среднего возраста - Бюлл эксперим биолог мед -2006 - Т 142 -№7 - С 90-93

18 ЮО Федотова, НА Платонова, НС Сапронов 8-OH-DPAT модул]фует экспрессию генов 1А/2А подтипов и рецептора 17Р-эстрадиол1 у овариоэктомированных крыс в тесте Порсолта - Эксперим и клинич фармаколог - 2006 - Т 69 - № 3 - С 53-57

19 J Fedotova Effects of mild, moderate and severe stress on depression in femah rats modifications by estrous cycle, ovariectomy and estradiol treatment - Biol Psychiat Psychopharmacol - 2006 - V 8 - № 1 - P 45-47

20 К) О Федотова, Н С Сапронов Эффекты эстрогенов в центральной нервной системе -Усп физиолог наук -2007 -Т 38 -С 46-62

21 Ь С Сапронов, ЮО Федотова Эстрогены и психоневрологический статус женщин - Мед акад журн - 2007 - Т 7 - № 2 - С 24-34

22 С В Барабанова, ЮО. Федотова, НС Сапронов Эффекты антагонистов 1А и 2А/20 подтипов серотониновых рецепторов на депрессивное поведение и экспрессию C-FOS белка в гипоталамусе у овариоэктомированных крыс -Эксперим и клинич фармаколог - 2007 - Т 70 - № 2 - С 3-7

Тезисы:

1 Б А Рейхардт, Ю О Федотова Влияние ципрамила на поведенческие процессы у о вари ээктомированных крыс-самок - Тезисы докладов УШ Росс Нац Конгр «Человек и лекарство» М - 2000 - С 669

2 A A Bairamov, J О Fedotova, N Р Goncharov, N S. Sapronov Influence of DHEA on brain biogenic monoamines in ovanectomized rats - Regional ISPNE Congress, June 2 -5,2001 StPetersburg (Russia) - Neuropsychopharmacol & Biol Narcol -2001 -№? -P 133-134

3 J О Fedotova The role of thyroid hormones and estrogenes in cognitive functions of the briin - Regional ISPNE Congress, June 2 - 5, 2001 StPetersburg (Russia) -NeuroDsychopharmacol &B10I Narcol -2001 -№2 -P 99-100

4 J О Fedotova, N S Sapronov DHEA and biogenic amines m female rats - In Abstract Bookoflnt Soc of Psychoneuroendocrinol Ann Meetmg, August 5 - 8, 2001 Quebec, CanacLi -P 69

5 В I Tkachenko, J О Fedotova, N S Sapronov The influence of estradiol and testosterone on learning and behavior in male and female rats following castration -In-Abstract Book of Int Soc of Psychoneuroendocrinol Ann Meeting, August 5 - 8, 2001 Quebec, Canada -P 77

6 H С Сапронов, Ю О Федотова, О М Родионова, Е Н Селина, И И Степанов, Н А Лосев Антиамнестический эффект хронического введения галантамина у овари; ктомированных крыс-самок - Тезисы докладов IX Росс Нац Конгр "Человек и лекарство" М - 2002 - С 692

8. Ю С» Федотова, Н С Сапронов Влияние гемиовариоэктомии на гормональный и нейромедиаторный статус у взрослых крыс-самок в разные фазы овариального цикла - Психофармакол ибиол наркол -2002 - Т 2 -№3-4 - С 461-462

9 N S Sapronov, J О Fedotova, N Р Goncharov Effects of dehydroepiandrosterone on passive avoidance m the ovanectomized female rats of different age - XXXIII Annua] ISPNE Congress, March 20 - 23,2003 Pisa (Italy) Abstr Book "The bram as a sourc e and target of hormones and antihormones from basic science to clinical application" Pisa -2003 -P20

10 J О Fedotova, N S. Sapronov Capability of cypramil to correct passive avoidance performance in the ovanectomized female rats - XXXIII Annual ISPNE Congress, March 20 - 23, 2003 Pisa (Italy) Abstr Book "The bram as a source and target of hormor es and antihormones from basic science to clinical application" Pisa - 2003

Р 20

11 ЮО Федотова, НС Сапронов Сравнительная оценка эффективности серотонинергических препаратов при когнитивных нарушения:; у овариоэктомированных крыс - В сб "Фундамент проблемы фармакологии" Сб тезисов 2-го Съезда Российского научного общества фармакологов М - 2003 -Ч II - С 252

12 Ю О Федотова Поведенческие эффекты хронического введения 8-OH-DPAT или его комбинации с эстрадиолом - Тезисы докладов Всерос конф с междунар участием "Нейроэндокринология - 2003", Санкт-Петербург, 2'. - 25 сентября 2003 -2003 - С 74-75

13 НС Сапронов, Ю О Федотова, Б А Рейхардт Психонейроэндокрино1 огия прошлое, настоящее, будущее - Тезисы докладов Всерос конф с междунар участием "Нейроэндокринология - 2003", Санкт-Петербург, 23 - 25 сентября 2003 -2003 - С 59-61

14 J О Fedotova, N S Sapronov Influence cypramil on the behavioral and hormonal status m the old ovanectomized female rats - Environment and human Healti the Complete Works of International Ecologic Forum, June 29 - July 2, 2003 St Petersburg, Russia (Sofronov G , Ed), 2003 - P 505-506

15 ЮО Федотова Комбинированное введение 8-OH-DPAT или NAN-190 с эстрадиолом модулирует поведенческий и гормональный статус у овариоэктомированных крыс - Юбилейная конференция, посвященная 50-j етию со дня основания Института Физиологии НАН Беларуси (Минск, 7-8 окт 2003), Тезисы докладов -2003 - С 162-163

16 J О Fedotova, NS Sapronov 8-OH-DPAT in combination with estradiol modulates passive avoidance performance in ovanectomized female rats - Int J Neuropsychopharmacol - 2004 - V 7 - Suppl 1 - P 476

17 J О Fedotova 5-HT1A receptors play a role in behavioral and hormonal responses m mtact and ovanectomized rats - Turkish Journal Endocrinol Metab - 2004 -Suppl 1 -V 8.-P 56-57

18 ЮО Федотова Участие Д,-подтипа дофаминовых рецепторов в поведенческих процессах интактных и овариоэктомированных крыс - Мед акад журн -Прилож 5 -2004 - Т 4 - № 3 - С 70-71

19 J О. Fedotova, N S Sapronov Antidepressant effect of 5-HT1 and 5-HT2 receptors agonists m rats with estrogen fluctuations - Psychiatne - 2004 - V 8 - Suppl 4 - P

20

20 J О Fedotova, N S Sapronov Dl-receptors mvolve m behavioral and hormonal responses m ovanectomized female rats - Eur J Neuropsychopharmacol - 200^. - V 14 - Suppl 3 - P 357

21 J Fedotova, N S. Sapronov 5-HT1A receptors modulate behavior and c-fos expression m ovanectomized rats in forced swim test - Eur Neuropsychopharim col -2005 -V 15 - Suppl 2 -P 110

22 J Fedotova Estrogen-serotonin interactions implications for cognitive and affective disorders - World J Biol Psychiat -2005 -V 6 - Suppl 1 -P 110

23 J Fedotova, N Platonova, N Sapronov 8-OH-DPAT modulates expression of 5-HT1A-, 5-HT2A- and 17|3-estradiol receptors mRNAs m ovanectomized rats in forced swim est - Eur Neuropsychopharmacol - 2005 - V 15 - Suppl 3 - P 395

24 J Fedotova 8-OH-DPAT modulates anticholinergic effects on avoidance behavior in ovanectomized rats - Abstr of the 36th ISPNE Congress, Montreal, September 2427,2005 -P 97.

25 S Barabanova, J Fedotova, N Platonova, N Sapronov 5-HT2A/2C receptors modulate behaviour and c-fos expression in ovanectomized rats m forced swim test -Eur > europsychopharmacol -2006 -V 16 - Suppl 4 - P 234

26 Ю.О Федотова, НА Платонова Кетанзерин модулирует депрессивное повед;ние и экспрессию генов рецепторов 1А/2А подтипов и рецептора 17(3-эстрадаола у овариоэктомированных крыс - Материалы 4-ой международной конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности к психогропным средствам" -13 -16 марта 2006, Москва - С 76

27 J Fedotova, N Sapronov, N Losev NAN-190 facilites learning impairment induced by scopolamine in estradiol-treated ovanectomized rats - Eur Neuropsychopharmacol -2006 - V 16 - Suppl 4-P 253

28 J. Fedotova, N Platonova Behavioral response to clomipramine after application of different stressors in ovanectomized female rats - Eur. Neuropsychopharmacol 2007 V. 17.-Suppl 4-P 368

29 Ю О Федотова Роль 5-ГТ1А-рецепторов в когнитивных функциях при дефиците эстрогенов - Психофармаколог и биолог нарколог - 2007 - Т 7 -Спец Выл Ч 2 - С 1989

30 Ю О Федотова, О О Масалова, Н А Лосев, Н С Сапронов Альтернативные методы фармакокоррекции когнитивных расстройств у женщин с гипоэстрогенным синдромом - Психофармаколог и биолог нарколог - 2007 - Т 7 - Спец Вып Ч 2.-С 1990

Финансирование исследований, составивших предмет настоящей диссертации осуществлялось частично из средств Российского Фонда фундаментальных исследований (РФФИ) (проекты № 01-04-48816 и № 04-0449025) и из средств Российского гуманитарного научного фонда (РГНФ) (проект № 06-06-00551а)

Подписано в печать 15 01 08 Формат 60*84 1/16 Бумага офсетная Печать офсетная Печ л 2,75 Тираж 100 экз Заказ 18

Отпечатано с готового оригинал-макета ЗАО "Принт - Экспресс" 197101, С-Петербург, ул Большая Монетная, 5 лит А

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последнее время накоплен большой объем экспериментальных данных, свидетельствующих о роли половых стероидов не только в репродуктивном поведении, но и в модулирующем влиянии на другие, не связанные с половым, формы поведения (McEwen, Alves, 1999; Toran-Allerand et al., 1999). Действительно, исследования последних лет убедительно показали, что мозг гораздо более чувствителен к действию половых стероидов, чем предполагалось ранее (Falkenstein et al., 2000; McEwen, 2001).

При этом, гормональные сдвиги, обусловленные аномальным функционированием гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы, глубоко изменяют высшую нервную деятельность (McEwen, Alves, 1999; McEwen, 2001). Кроме того, исследования последних лет показывают, что эстрогены модулируют активность большинства нейромедиаторных систем (McEwen, 2001; Бабичев, 2005). Не случайно, что когнитивные и нервно-психические расстройства чаще встречаются у женщин по сравнению с мужчинами (Amin, Epperson, 2005).

Для коррекции обмена веществ при возникающих гормональных сдвигах в гипофизарно-овариальной системе у женщин, как правило, назначают стандартную заместительную гормонотерапию. При этом, положительный результат нередко сопровождается рядом побочных явлений, весьма губительных для отдельных пациенток. Так, длительное применение эстрогенсодержащих препаратов в качестве заместительной терапии в большинстве случаев приводит к резким нарушениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах, а также к появлению новообразований (Сметник, 2003; Wang-Cheng, Rosenfeld, 2003). Следует отметить, что в эти схемы лечения не входит оптимальная нормализация мнестических процессов пациента, а сведения о какой-либо фармакологической коррекции нарушений высших функций мозга при патологическом функционировании гипофизарноовариальной системы, кроме заместительной гормональной терапии, отсутствуют.

Принимая во внимание многомерность влияния эстрогенов на ЦНС, а также широкий спектр воздействия эстрогенов на функциональную активность нейромедиаторных систем, особенно важным представляется вопрос об изучении роли эстрогенов в реализации эффектов различных фармакологических нейротропных веществ, действующих на нейромедиаторные рецепторы. Анализ данных литературы показывает, что эстрогены могут оказывать существенное влияние на развитие эффектов лекарственных веществ как при остром, так и при хроническом применении препаратов (Арушанян, 2005). Следовательно, детализация эффектов нейротропных препаратов при дисбалансе эстрогенов является необходимым условием как для поиска оптимальных подходов к терапии, так и для разработки новых лекарственных препаратов. Кроме того, установлено, что введение Пр-Ег в очень низких дозах, обеспечивающих уровень эстрадиола в крови, близкий к физиологическому, выраженно улучшает когнитивные процессы у овариоэктомированных крыс при исследовании в различных поведенческих тестах по сравнению с введением других препаратов эстрогенов в высоких дозах (Wise et al., 2005).

В связи с этим, разработка новых подходов к фармакокоррекции, при которых используемые различные нейротропные препараты или их комбинация с эстрогенами в минимальных дозах прямо или опосредованно модулируют функциональную активность нейромедиаторных или гормональных систем, приводя к улучшению или полной нормализации процессов высшей нервной деятельности мозга, является актуальной.

Целью настоящей работы являлось изучение возможности фармакологической коррекции нарушений высшей нервной деятельности мозга в условиях аномального функционирования гипофизарно-овариальной системы, а также в ключевые периоды полового цикла у самок крыс, с помощью сочетанного введения нейротропных веществ и гормонального агента в низких дозах.

Задачи работы:

1. Оценить эффекты низкого или высокого уровня эндогенных эстрогенов, тотального дефицита эндогенных эстрогенов и экзогенного введения 17р-эстрадиола на мнестические процессы, уровень половых гормонов в крови, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов в структурах головного мозга у самок крыс.

2. Провести сравнительный анализ влияния серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на условнорефлекторную деятельность и эмоциональные формы поведения, гормональный и нейромедиаторный статус, а также экспрессию генов рецепторов в головном мозге в условиях физиологических колебаний уровня эндогенных эстрогенов у нормально циклирующих самок.

3. При экспериментальном дефиците эстрогенов провести сравнительное изучение действия серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17р-эстрадиолом в минимальных дозах, на поведенческий, гормональный и нейромедиаторный статус, а также на экспрессию генов рецепторов в головном мозге.

Научная новизна. Проведенное исследование позволило уточнить характер взаимодействия моноаминергических и холинергических систем с гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой, нарушения которых определяют развитие когнитивных расстройств при аномальном функционировании указанной гормональной системы. Впервые проведено комплексное сравнительное изучение роли нейромеднаторных систем в патогенезе развития нарушений высшей нервной деятельности в условиях естественного колебания уровня эстрогенов в крови в течение полового цикла и при экспериментально созданном дефиците эстрогенов у самок крыс. Обоснован новый подход к фармакотерапии когнитивных нарушений при дисбалансе эстрогенов, который заключается в минимизации доз нейротропных препаратов и 17р-эстрадиола при их комбинированном использовании.

В процессе исследования было впервые установлено, что:

1/ стимуляция 5-ГТ1д-подтипа или блокада 5-ГТ2д/2с-подтипа серотониновых рецепторов корректирует мнестические процессы у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол;

2/ стимуляция Д]-типа или Д2-типа дофаминовых рецепторов нормализует высшую нервную деятельность и уменьшает выраженность тревожного поведения у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол;

3/ блокада Дг-типа дофаминовых рецепторов восстанавливает мнестический статус и оказывает антидепрессивный эффект у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17Р-эстрадиол;

4/ повышение уровня ацетилхолина, стимуляция М- или блокада Н-холинорецепторов корректирует условнорефлекторную память у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол;

5/ блокада 5-ГТ1А-подтипа серотониновых рецепторов или Дртипа дофаминовых рецепторов нарушает мнестические функции мозга у ОЭ самок и ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол.

Приоритетный характер носят полученные в работе данные об эффектах серотонинотропных, дофаминотропных и холинотропных веществ в низких дозах на гормональный статус, обмен моноаминов и экспрессию генов рецепторов нейромедиаторов и рецептора 17Р-эстрадиола в структурах головного мозга, вовлеченных в механизмы реализации высших функций мозга.

Научно-практическое значение работы. Представленная работа, посвященная анализу важнейшего аспекта проблемы взаимодействия нейромедиаторных и гормональной овариальной систем при дисбалансе эстрогенов в патогенезе мнестических расстройств, носит фундаментальный характер. Основное теоретическое значение работы состоит в раскрытии нейро-эндокринных взаимодействий, включающих модуляцию гормонального статуса, обмена биогенных аминов и экспрессии генов рецепторов нейромедиаторов и 17р~ эстрадиола. Полученные в работе данные позволяют говорить о существовании конкурентных или синергичных взаимоотношений в ряде случаев между эстрогенами и нейромедиаторами в контроле высшей нервной деятельности при дефиците эстрогенов в эксперименте.

Вместе с тем, проведенное исследование создает экспериментальный базис для разработки и внедрения новых подходов к фармакотерапии когнитивных расстройств при дефиците эстрогенов в клинической практике. Предложен способ лечения нарушений мнестических функций при гипоэстрогенном синдроме (патент № 2268726). Полученные в работе результаты могут быть использованы и в разработке новых подходов для коррекции гормонального статуса при различных эндокринных патологиях, сопровождающихся дисфункцией гипофизарно-овариальной системы.

Результаты исследования способствуют выбору оптимальной терапии конитивных расстройств при дефиците эстрогенов с учетом всех негативных и позитивных эффектов монотерапии нейротропными веществами в низких дозах или комбинированной терапии нейротропными препаратами совместно с 17(3-эстрадиолом в низкой дозе и создают необходимые условия для разработки специальных тендерных схем назначения веществ с целью повышения их эффективности и ограничения побочных реакций.

Проведенный в работе анализ эффектов комбинированной терапии нейротропными веществами с 17р-эстрадиолом открывает перспективы для создания новых фармакологических препаратов, сочетающих в себе одновременно гормональной и нейромедиаторный агенты. На основе экспериментальных данных могут быть предложены новые подходы к применению нейротропных средств и/или их комбинациий с гормональными препаратами для эффективной фармакокоррекции расстройств высших функций мозга при дисбалансе эстрогенов в организме.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Направленность фармакологических эффектов нейротропных веществ, введенных изолированно или в комбинации с 17Р~эстрадиолом в низкой дозе, зависит от типа расстройств высших функций мозга и функционального состояния гипофизарно-овариальной системы.

2. При выборе оптимальной схемы фармакокоррекции мнестических нарушений при дисфункции гипофизарно-овариальной системы в эксперименте следует учитывать гормональный фон и тип патологии высшей нервной деятельности.

3. Фармакологические воздействия на холинергическую, дофаминергическую или серотонинергическую системы могут потенцировать или ингибировать поведенческие эффекты экзогенно введенного 17р-эстрадиола в зависимости от стимуляции или блокирования типа нейромедиаторных рецепторов.

4. Использование холинотропных веществ, активирующих М-холинореактивные структуры или блокирующих Н-холинореактивные структуры головного мозга, оказывает универсальное корректирующее влияние при нарушениях высшей нервной деятельности независимо от гормонального статуса самок крыс.

5. Нормализация эмоциональных форм поведения при применении нейротропных средств, стимулирующих 5-ГТ1А-подтнп серотониновых рецепторов или блокирующих б-ГТгл/гс-подтип серотониновых рецепторов, не детерминируется состоянием гипофизарно-овариальной системы.

6. Позитивные эффекты дофаминотропных веществ на мнестические процессы и тревожно-депрессивное поведение зависят от гормонального статуса и характера нарушений высших функций головного мозга.

Личный вклад автора. Автором лично проведены все опыты с использованием различных поведенческих методик, выполнены биохимические исследования по определению уровня тропных и периферических половых гормонов в крови in vitro и оценке обмена биогенных аминов в структурах головного мозга. Часть исследований, посвященных изучению экспрессии генов рецепторов в разных образованиях головного мозга, проделана совместно с Н.А. Платоновой, Н.В. Цымбаленко и Л.В. Пучковой (Отдел молекулярной генетики ГУ НИИЭМ РАМН).

Апробация работы. Результаты работы докладывались на различных международных и всероссийских конгрессах и конференциях. Из числа важнейших форумов, на которых были представлены материалы диссертации, и следует отметить: Пленум правления Российского научного общества фармакологов «Фармакология и современная медицина» (Санкт-Петербург, 1999); 1-ый Региональный конгресс Международного общества психонейроэндокринологов (Санкт-Петербург, 2001); 2-ой Региональный конгресс Международного общества психонейроэндокринологов (Бухарест, Румыния, 2002); 33-ий Ежегодный конгресс Международного общества психонейроэндокринологов (Пиза, Италия, 2003); 2-ой Съезд Российского общества фармакологов (Москва, 2003); Всероссийская конференция с международным участием «Нейроэндокринология - 2003» (Санкт-Петербург, 2003); 1-ый Международный экологический форум (Санкт-Петербург, 2003); 3-ий Региональный конгресс Международного общества психонейроэндокринологов (Капподокия, Турция, 2004); 24-ый конгресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Париж, Франция, 2004); Региональный конгресс Международной коллегии нейропсихофармакологии (Брно, Чехия, 2004); 17-ый конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Стокгольм, Швеция, 2004); 35-ый Ежегодный конгресс Международного общества психонейроэндокринологии (Глазго, Шотландия, 2004); 8-ой Региональный конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Москва, 2005); 8-ой Всемирный конгресс биологической психиатрии, (Вена, Австрия, 2005); 18-ый конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Амстердам, Нидерланды, 2005), 3-ий Съезд фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), 20-ый конгресс Европейской коллегии нейропсихофармакологии (Вена, Австрия, 2007), а также на научных заседаниях отдела нейрофармакологии IШИЭМ РАМН (Санкт-Петербург (2004 -2007 гг).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 53 работы, из них 22 статьи в центральных отечественных и зарубежных реферируемых журналах.

ВЫВОДЫ:

1. Поведенческий статус самок крыс детерминируется степенью активности гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы. При этом, направленность и выраженность поведенческих расстройств зависит от причины (естественная или искусственная), обусловливающей функциональное состояние гипоталамо-гипофизарно-овариалыюй системы.

2. Эффективность действия нейротропных веществ в низких дозах, введенных изолированно или в комбинации с 17Р-эстрадиолом в низкой дозе, зависит от вида когнитивной патологии и функционального состояния гипофизарно-овариалыюй системы. Хроническое введение 17Р-эстрадиола в низкой дозе может играть триггерную роль в подготовке эстрогеновых рецепторов и рецепторов нейромедиаторов к функциональной активации, после их угнетения вследствие дефицита эстрогенов.

3. Фармакологические воздействия на холинергическую, дофаминергическую или серотонинергическую системы могут потенцировать или ингибировать биологические эффекты экзогенно введенного 17р-эстрадиола в зависимости от стимуляции или блокирования типа нейромедиаторных рецепторов.

4. В механизмах когнитивных расстройств, возникающих в ключевые фазы полового цикла, М- и Н-холинорецепторы принимают участие в равной степени. С целыо устранения этих расстройств возможно использовать галантамин, метамизил или ганглерон в комбинации с галантамином.

5. 5-ГТ1Д-подтип и 5-ГТ2в-подтип серотониновых рецепторов вовлекаются в механизмы аффективных расстройств в течение полового цикла у самок крыс. При этом, стимуляция данных подтипов рецепторов приводит к снижению выраженности депрессивноподобного поведения у самок в ключевые фазы полового цикла.

6. 5-ГТ2а/2С-п°Дтипы серотониновых рецепторов играют выраженную роль в тревожных расстройствах в течение полового цикла и при дефиците эстрогенов у самок крыс. При этом, блокада данных подтипов рецепторов приводит к уменьшению проявления тревожности у самок в ключевые фазы полового цикла и на фоне овариоэктомии.

7. В механизмах мнеетичееких расстройств, сопровождающихся тревожным поведением у циклирующих самок, принимает участие Д2-тип дофаминовых рецепторов. При этом, стимуляция данного типа рецептора востанавливает оптимальный поведенческий статус у самок в течение полового цикла.

8. 5-ГТ1А-ПОДТИП серотониновых рецепторов и Д^тип дофаминовых рецепторов играют существенную роль в расстройствах высшей нервной деятельности, обусловленных дефицитом эстрогенов: стимуляция этих типов рецепторов приводит к нормализации мнеетичееких процессов и корректирует эмоциональные формы поведения, тогда как блокада этих типов рецепторов, напротив, полностью нарушает мнестические функции у овариоэктомированных самок.

9. Д2-ТИП дофаминовых рецепторов вовлекается в механизмы эмоциональных форм поведения при дефиците эстрогенов. При этом, стимуляция данного типа рецептора уменьшает выраженность тревожного поведения, тогда как блокада Д2-типа дофаминовых рецепторов оказывает антидепрессивный эффект у овариоэктомированных самок.

10.В нарушении высших функций мозга при овариоэктомии более значимую роль играют М-холинорецепторы, чем Н-холинорецепторы. Введение галантамина, ганглерона или комбинации ганглерона с галантамином корректирует поведенческий статус при дефиците эстрогенов.

11. Фармакотерапия расстройств поведения при дисбалансе эстрогенов в организме заключается в изолированном или комбинированном с низкой дозой 17(3-эстрадиола применении нейротропных веществ в низких дозах в зависимости от типа нарушений высшей нервной деятельности.