Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Сравнительный анализ поведенческих эффектов синтетических и растительных селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов при циклических колебаниях и дефиците эстрогенов

На правах рукописи

ии34Э1Э43

КАЗАКОВА СВЕТЛАНА БОРИСОВНА

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ СЕЛЕКТИВНЫХ МОДУЛЯТОРОВ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ЦИКЛИЧЕСКИХ КОЛЕБАНИЯХ И ДЕФИЦИТЕ ЭСТРОГЕНОВ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 8 ФЕВ 2010

Санкт-Петербург - 2009 г.

003491943

Работа выполнена в отделе нейрофармакологии им. C.B. Аничко] Научно-исследовательского института экспериментальной медицины Север Западного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН).

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Сапронов Николай Сергеевич

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, профессор Клименко Виктор Матвеевич

доктор медицинских наук, профессор Шабанов Петр Дмитриевич

Санкт-Петербургский государственга медицинский университет им. Академи И.П. Павлова

Защита состоится «....»........................2009 года в ....часов на заседании сове

Д 001.022.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора кандидата наук при Научно-исследовательском институте экспериментальн! медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, Сань Петербург, ул. Академика И. П. Павлова, 12

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИЭМ СЗО РАМ по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д. 12

Автореферат разослан «....»..............2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Доктор биологических наук, профессор

JI.B. Пучкова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Brüse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009). Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс фармакологически активных веществ - селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СЭРМ), - проявляющие избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген - чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании

эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов. Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17а-Э2 и с 17Р-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.

В задачи исследования входило:

1. Выяснить участие а- и (5-эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;

2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;

3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к а-ЭР - 17а-Э2, или в комбинации с лигандом к (3-ЭР - 17Р-Э2 в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;

4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17а- и 17Р-Э2, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.

Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн, климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17а- и 17(3-Э2 на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании с 17а- и 17(3-Э2 способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок. Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения а- и |3-ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне различных патологий репродуктивной системы.

Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния

у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 170-Эг- Применение 17[5-Э2 и/или 17а-Э2 в комплексе с тамоксифеном, генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов. Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы, спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме работы.

Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российско-китайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (2008), на научных заседаниях отдела нейрофармакологии (2008,2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 740 самках крыс линии Вистар, массой 180-200 г (возраст 4-5 месяцев), полученных из питомника РАМН "Рапполово". Животных содержали в стандартных условиях освещения и пищевого режима. Операцию тотальной овариоэктомии, взятие влагалищных мазков и поведенческие тесты проводили не ранее, чем через 7 дней после поступления из питомника.

Овариоэктомию осуществляли с соблюдением правил асептики. Методические особенности и детали операции подробно изложены у Я. Д. Киршенблата (1969). Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента.

Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для

анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов определяли 4 фазы полового цикла: диэструс, проэструс, эструс и метэструс. Определение стадии полового цикла у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата (1969).

Депрессивноподобное поведение изучали в тесте Порсолта. Животное помещали в стеклянный цилиндр (23/50 см), заполненный на две трети водой с температурой 25° на 15 минут, затем извлекали из цилиндра и обсушивали в течение 1 часа. Через 24 часа животное повторно опускали в воду. Депрессивноподобное состояние

оценивали по длительности иммобильности в течение 5 минут. Под иммобильностью понимали полное отсутствие плавательных движений при пассивном удержании животного на воде (Porsolt et al., 1978). Уровень тревожности оценивали в «приподнятом крестообразном лабиринте», состоящем из двух «открытых» и двух «закрытых» рукавов. Животное помещали в центр лабинринта и регистрировали общее время пребывания и число заходов в открытые и закрытые рукава в течение 5 минут (File,1996; Калуев, 1998; Себенцова и др., 2005). Эмоциональную реактивность, двигательную и исследовательскую активность животных изучали в тесте «открытое поле» в течение 3 минут (Петров и др., 1982; Калуев, 2002). Тестирование проводили в 9.00 - 12.00 часов). Концентрацию ЛГ, ФСГ, Эг и П в сыворотке крови крыс определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов для ИФА. Оптическую плотность измеряли при 450 нм с помощью анализатора иммуноферментных реакций АИФР-01 (ПИКОН, Россия). Перед началом исследования проводили раститровку наборов с подбором оптимального разведения сыворотки крови, концентрацию антигена в исследуемых образцах рассчитывали на основании калибровочного графика.

В работе использовали СЭРМы синтетического и растительного происхождения: тамоксифен - синтетического происхождения, (Орион, Финляндия) вводили в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно; генистейн («Sigma», Германия) - препарат растительного происхождения, относится к классу изофлавоноидов, получен из соевых бобов, вводили в дозе 1 мг/кг, внутрибрюшинно; климадинон (Bionorica, Германия) - лекарственный препарат, представляющий собой экстракт цимицифуги, вводили в дозе 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии. Необходимо отметить, что СЭРМы были использованы в поведенческих дозах, соответствующих данным литературы (Dhandapani, 2002; Diez-Perez, 2006). 17а- и 17р-эстрадиол растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. В данном исследовании были использованы низкие дозы эстрадиолов (Wise, 2000). Контрольные животные получали физиологический раствор. Все интактные и ОЭ животные были разделены на следующие группы по 18-20 особей в каждой: 1-я - интактные крысы, получавшие физиологический раствор на протяжении всего эксперимента (контроль 1); 2-я - интактные крысы, которым вводили 17а-Э2; 3-я - интактные самки, получавшие 17ß-32; 4-я группа -интактные крысы, которым вводили тамоксифен; 5-я - интактные крысы, которым вводили генистейн; 6-я - интактные самки, получавшие климадинон; 7-я - ОЭ самки, получавшие масляный растворитель в эквивалентном объеме внутримышечно (контроль 2); 8-я группа - ОЭ самки, получавшие 17р-Эг; 9-я группа - ОЭ самки, получавшие 17а-Э2; 10-я группа - ОЭ крысы, которым вводили тамоксифен; 11-я группа - ОЭ самки, получавшие тамоксифен и П$-Эг, 12-я группа - ОЭ самки, которым вводили тамоксифен и 17а-Эг; 13-я группа - ОЭ самки, получавшие генистейн; 14-я группа - ОЭ крысы, получавшие в комбинации генистейн и 17р-Эг; 15-я группа - ОЭ самки, которым вводили генистейн и 17а-Эг; 16-я группа - ОЭ животные, получавшие климадинон; 17-я группа - ОЭ крысы,

которым вводили климадинон и 17ß-32; 18-я группа - ОЭ самки, получавшие климадинон и 17сх-Э2. Все интактные самки перед началом эксперимента внутри каждой группы были разделены по фазам цикла таким образом, что в каждой стадии эстрального цикла находилось 4 — 5 животных. Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения указанных препаратов. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакетов прикладных программ «SPSS 12.0 for Windows» и «STATISTICA 6.0» с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher's LSD test) и U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U) (Беленький, 1959; Платонов, 2000). Различия между значениями считали статистически значимыми при р < 0,05. Все значения были представлены в виде М ± S.E.M., где М - среднее арифметическое, S.E.M. - стандартная ошибка среднего арифметического (Standart Error Means).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Влияние эстрального цикла и гормональной терапии 17ß- или 17а-эстрадиолом на аффективное поведение интактных самок крыс

Как показало исследование, показатели аффективного статуса в зависимости от фазы цикла. Депрессивное поведение проявляется в стадии ди - и проэструса и ослабляется в фазах эструса и метэструса. Наряду с депрессивным поведением уровень тревожности в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» наиболее высок в фазе проэструса и эструса. В тесте «открытое поле» показатели вегетативного стресса (груминг, дефекация) существенно не менялись на протяжении всего цикла (табл. 2). 17а-Э2 и 17ß-32 (нарушал фазность цикла, все животные находились в эструсе) значительно повышали депрессивное поведение у крыс по сравнению с контролем 1 (рис. 1). В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» анксиолитическая активность 17ß-32 проявлялась в увеличении числа заходов в открытые рукава. В то же время, введение 17а-Э2 приводило к резкому снижению числа заходов в открытые рукава и сопровождалось реакцией замирания (поведенческий показатель, свидетельствующий о высоком уровне тревожности у животных) в фазах проэструса и эструса. Анксиолитический эффект 17а-Э2 проявлял в стадии диэструса и метэструса (табл.1). В тесте «открытое поле» 17а-Э2 и 17ß-32 не оказывали влияния на пространственно-ориентировочную активность (табл. 2). Таким образом, циклические колебания половых гормонов в крови интактных крыс сопровождаются изменением аффективного статуса. Хроническое введение 17а-Э2 или 17ß-32 приводило к изменению поведенческих реакций, регистрируемых в тесте Порсолта, «приподнятом крестообразном лабиринте» и открытое поле». Длительное введение 17ß-32 сопровождается развитием анксиолитического эффекта у интактных самок (эструс). Хроническое введение 17а-Э2 интактным животным приводило к развитию анксиолитического действия в фазах диэструса и метэструса. В стадиях проэструса и эструса 17а-Э2 проявлял анксиогенные свойства.

Аффективный статус самок в условиях хронического введения СЭРМ Влияние тамоксифена на аффективный статус интактных самок

Из рисунка 1 видно, что время неподвижности интактных крыс, получавших тамоксифен, достоверно снижалось в фазы диэструса и метэструса по сравнению с

контролем 1 и группой самок, получавших 17а-Э2. В стадию проэструса тамоксифен повышал продолжительность иммобильности по сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших 17а-Э2. Кроме того, тамоксифен нарушал фазность цикла и на 7-10 день введения препарата стадия эструса у крыс отсутствовала. Таким образом, при среднем уровне эстрогенов в крови в стадии диэструса и метэструса тамоксифен оказывал антидепрессивное действие. При высоком содержании эстрогенов в крови в фазу проэструса данный

Рис. 1. Влияние тамоксифена на депрессивноподобное поведение интактных самок крыс в тесте Порсолта.

Группы животных: 1 - интактные (контроль 1); 2 - получавшие 17р-Э2; 3 - получавшие 17а-Эг; 4 -получавшие тамоксифен; различия между фазами полового цикла достоверны при р < 0,05;' -различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.

Как видно из таблицы 1, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения. Так, в фазу диэструса при естественном среднем уровне эстрогенов в крови животных хроническое введение препарата вызывает анксиогенное действие, что выражается в преобладании фризинга. Однако при наиболее высоком уровне секреции эстрадиола в стадию проэструса тамоксифен проявляет анксиолитический эффект. В тесте «открытое поле» тамоксифен выраженно угнетает эмоциональный компонент поведения. Вместе с тем, в фазу метэструса при постепенном снижении уровня эндогенного эстрадиола тамоксифен не влияет на аффективное поведение животных. Таким образом, эффекты тамоксифена зависят от естественных колебаний эстрогенов в течение эстрального цикла у интактных животных и сопровождаются значительными изменениями аффективного поведения.

Влияние генистейна на аффективный статус интактных самок

Хроническое введение генистейна интактным крысам (рис. 2) достоверно снижало время иммобильности в стадиях диэструса, проэструса и метэструса по сравнению с контрольными животными и группой самок, которые получали 17а-Э2. В стадию эструса данный показатель на фоне генистейна не изменялся по сравнению с контролем 1, но был меньше по сравнению с группами животных, получавших 17а-Э2 или 17(5-32. Таким образом, генистейн оказывал ярко выраженный антидепрессивный эффект в фазах диэструса, проэструса и метэструса и не влиял на степень депрессии в стадию эструса. Результаты исследований показали, что генистейн не влиял на тревожное поведение самок крыс, которые находились в стадии диэструса, а также не оказывал влияния на параметры поведения в условиях «открытого поля» (табл. 1, 2). Хроническое введение генистейна снижало уровень тревожности у животных в фазу проэструса, о чем свидетельствует увеличение числа заходов в «открытые» и «закрытые» рукава и

препарат проявлял депрессогенный эффект.

числа «обследованных» норок, а также снижение эмоциональности крыс в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле». В фазу эструса препарат проявлял анксиолитическое действие, что подтверждается увеличением времени нахождения крыс в «открытых» рукавах

Таблица 1

Влияние астрального цикла 17а- и 17р-эстрадиола, СЭРМ на поведение интактных самок крыс в _«приподнятом крестообразном лабиринте»__

Группы животных Время пребывания Время нахождени Количество Количество

(п=10) в открытых в закрытых заходов в заходов в

рукавах (сек) рукавах (сек) открытые рукава закрытые рукава

Интактные самки + физиол. р-р (контроль 1)

диэструс 86,0 ± 6,20 214,0 ±8,60 1,2 ± 0,4 2,0 ± 0,4

проэструс 36,4 ± 3,40' 263,6 ±6,40 1,0 ±0,2 4,5 ± 0,2'

эструс 42,6 ± 4,20' 257,4 ± 8,40 1,0 ± 0,2 4,0 ± 0,6'

метэструс 80,0 ± 4,80 220,0 ± 10,20 1,4 ± 0,6 2,2 ± 0,4

Интактные самки + 17а-эстрадиол

диэструс 100,0 ±3,5* 200,0 ± 3,2" 5,0 ± 0,4* 6,0 ±0,4*

проэструс 289,0 ± 3,2" 11,0 ±3,2" 0,5 ±0,1* 0,5 ±0,1*

эструс 283,6 ± 4,3" 16,5 ±4,3" 0,5 ±0,1* 0,5 ± 0,1"

метэструс 108,0 ±2,4" 192,0 ±2,4" 4,0 ± 0,4" 5,2 ±0,4*

Интактные самки + 17(5-эстрадиол

диэструс Фаза отсутствовала

проэструс Фаза отсутствовала

эструс 80,3 ± 3,0" 219,7 ±2,9" 3,4 ± 0,2* 4,4 ± 0,3

метэструс Фаза отсутствовала

Интактные самки + тамоксифен

диэструс & 299,3 ± 0,70" 10,0 ± 8,90 м 0,1 ±0,01 ** 0,3±0,10№

проэструс 220,0 ± 4,60 № 70,0 ±3,50 *& 2,0 ±0,20* 3,0 ± 0,20 №

эструс Фаза отсутствовала

метэструс 105,0 ±2,60* 190,0 ±5,60" 1,5 ±0,20* 1,5 ±0,20й

Интактные самки + генистейн

диэструс 90,0 ±2,0 210,0 ±2,0 1,0 ± 0,2* & 2,0 ±0,2*

проэструс 50,0 ± 0,9" * 250,0 ± 1,0* * 4,0 ±0,3 ш 5,0 ± 0,3*

эструс 269,0 ± 1,4"» 31,6± 1,4 * * 1,0 ±0,2» 1,0 ± 0,2

метэструс 60,2 ± 0,7 "* 239,8 ±0,7 ш 5,0 ±0,4* 6,0 ±0,4"

Интактные самки + климадинон

диэструс & 297,0 ± 2,50 *" 12,0 ±6,50* 0 0,2 ± 0,09 *"

проэструс 85,0 ± 6,50 * * 215,0 ± 6,50* 8,0 ± 2,70* 9,0 ± 2,70 & *

эструс 70,0 ± 4,50 а 230,0 ± 4,50° 4,0 ± 1,50* 5,0 ± 1,50*

метэструс 88,0 ± 10,20" 222,5 ± 13,20* 1,5 ±0,50* 3,7 ± 0,70 й"

Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при р < 0,05 по сравнению с фазой диэструса; * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1 в соответствующей фазе; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17а-эстрадиол; $ - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17р-эстрадкш.

лабиринта, повышением исследовательского поведения и снижением эмоциональности в условиях «открытого поля». У крыс в стадию метэструса

генистейн повышал время и число заходов в «открытые» рукава. Эти данные коррелировали со снижением эмоционального компонента в тесте «открытое поле», что указывает на анксиолитический профиль препарата у интактных самок в данной фазе.

Таблица 2

Влияние эстрального цикла, 17а- и 17Р-эстрадиола и СЭРМ на поведение интактных самок крыс _в тесте «открытое поле» в течение 180 сек_

Группы Параметры

животных Двигательная активность Исследовательская Эмоциональность

(п=9) Перемещение Вставание активность Груминг Дефекация

Интактные самки + физиол. раствор (контроль 1)

Диэструс 45,6 ± 2,4 11,6 ±0,4 1,6 ±0,2 2,6 ± 0,4 2,6 ±0,4

Проэструс 26,8 ± 1,2* 2,8 ± 0,2* 3,0 ± 0,2 3,0 ± 0,2 2,8 ± 0,2

Эструс 63,7 ±3,8* 14,7 ± 1,8 3,7 ± 0,4 3,3 ± 0,8 2,0 ±0,2

Метэструс 55,6 ±2,8* 12,3 ±0,8 7,1 ± 0,6 3,8 ±0,8 0,6 ±0,02*

Интактные самки + 17а-эстрадиол

Диэструс 20,8 ± 10,2" 7,8 ± 0,7" 1,3 ±0,6 3,3 ± 0,6 0

Проэструс 42,7 ± 4,6* 12,8 ±1,7* 2,0 ±0,5* 4,8 ± 0,4* 0

Эструс 37,3 ± 3,4" 10,2 ±2,4" 1,9 ±0,4* 4,0 ± 0,9 0

Метэструс 98,5 ± 4,3" 12,4 ± 1,8 5,6 ± 0,5* 3,0 ± 0,4 0

Интактные самки + 17Р-эстрадиол

Диэструс Фаза отсутствовала

Проэструс Фаза отсутствовала

Эструс 22,9 ± 1,2" 2,3 ± 0,3" 2,6 ± 0,4* 0,5 ± 0,2" 5,0 ± 0,7*

Метэструс Фаза отсутствовала

Интактные самки + тамоксифен

Диэструс 77,1 ± 4,4*1 8,1 ± 1,0* 3,0 ±0,4" 0,3 ± 0,1*1 0,5 ±0,1*

Проэструс 45,3 ±2,1* 2,6 ± 0,61 2,8 ± 0,8 0,9 ± 0,1" * 0,6 ± 0,02"

Эструс Фаза отсутствовала

Метэструс 80,3 ± 0,8* 1,5 ±0,3" 5,1 ±0,2* 0,2 ± 0,02** 0,2 ±0,01"

Интактные самки + генистейн

Диэструс 16,0 ±0,9* 7,0 ±1,0* 1,5 ±0,2 3,3 ± 0,9" 0

Проэструс 72,3 ± 1,5" 11,0 ±0,6* 4,0 ± 0,6" 2,3 ± 0,3" 0

Эструс 29,3 ± 3,2* 9,0 ±0,6** 5,0 ± 0,5"л 1,0 ±0,2" 3,6 ±0,5"

Метэструс 12,0 ± 1,2" 3,0 ±0,4" 4,0 ±0,6* 1,0 ±0,2" 1,0 ±0,2"

Интактные самки + климадинон

Диэструс 27,3 ± 1,0я 10,8 ± 1,3* 3,5 ± 0,3" 5,6 ± 1,4" 1,3 ±0,8*

Проэструс 20,0 ± 1,5** 3,0 ± 0,2* 3,0 ± 0,2 1,0 ±0,1" 0

Эструс 43,8 ± 1,5" 6,3 ± 1,7"^ 7,2 ± 0,4"& 2,0 ± 0,2я1 0,5 ± 0,1"

Метэструс 33,4 ± 1,3" 4,6 ± 0,9" 3,0 ± 0,6** 2,3 ± 0,8 0,3 ±0,1*

Примечание: * - различия между фазами полового цикла в контрольной группе достоверны при г < 0,05 по сравнению с фазой диэструса, # - различия достоверны при <0,05 по сравнению с контролем 1; $ - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17а-эстрадиол; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17(5-Э2.

Рисунок 2. Влияние генистейна на депрессивноподобное поведение интактных самок крыс в тесте Порсолта. Группы животных: 1 - контроль 1; 2 -получавшие 173-Эг; 3 - получавшие Па-Эг; 4 - получавшие генистейн

- различия между фазами полового цикла достоверны при р < 0,05; * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.

Таким образом, можно утверждать, что генистейн проявлял анксиолитическое действие независимо от уровня эндогенных эстрогенов в крови у животных.

Влияние климадинона на аффективный статус интактных самок

В фазах физиологического покоя (диэструс и метэструс), которые характеризуются средним уровнем эндогенных эстрогенов в крови, климадинон проявляет ярко выраженное антидепрессивное действие. Однако при высоком (проэструс) и низком (эструс) уровне данный препарат не оказывает существенного влияния на депрессивноподобное поведение (рис. 3).

В условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» климадинон в стадии диэструса проявлял анксиогенное действие, так как у животных наблюдалась реакция замирания и снижалось число заходов в открытые и закрытые рукава (табл. 1). Однако результаты, полученные в «приподнятом крестообразном лабиринте», не коррелировали с полученными показателями в тесте «открытое поле». В «открытом поле» у животных в 2 раза повышалось исследовательское поведение и было снижено количество болюсов дефекации (показатели анксиолитичности) (табл. 2).

Рис.3. Влияние климадинона на депрессивноподобное поведение

интактных самок крыс в тесте Порсолта. Группы животных: 1 - интактные (контроль 1); 2 - получавшие 170-32; 3 -получавшие 17а-Э2; 4 - получавшие климадинон;

- различия достоверны при р < 0,05 между фазами полового цикла в контроле 1 по сравнению с фазой диэструса; * -различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1.

Однако, в стадию проэструса климадинон оказывал ярко выраженный анксиолитический эффект, о чем говорит значительное увеличение числа заходов в открытые и закрытые рукава в лабиринте и угнетение эмоциональности при тестировании крыс в «открытом поле». В стадию эструса климадинон снижал уровень тревожности, отмечалось увеличение времени пребывания и числа заходов в открытые рукава лабиринта, что коррелировало с угнетением эмоционального компонента в тесте «открытое поле». Хроническое введение климадинона не

влияло на аффективное поведение грызунов в стадию метэструса. Таким образом, хроническое введение климадинона приводило к разнонаправленным эффектам в фазу диэструса. В фазы проэструса и эструса климадинон оказывал анксиолитическое действие, при этом в стадию проэструса указанный препарат приводил к более выраженному анксиолитическому эффекту. Однако введение климадинона не оказывало влияния на уровень тревожности грызунов в стадии метэструса.

Аффективное поведение самок крыс в условиях дефицита эстрогенов и заместительной терапии 17а- или 17Р-эстрадиола

Овариоэктомия у самок крыс резко повышала продолжительность иммобильности в тесте Порсолта по сравнению с контролем 1 (диэструс). Время неподвижности у ОЭ самок крыс составляло 233,0 ± 2,6 сек, р < 0,05, в то время как у интактных крыс - 122,0 ± 1,9 сек, р < 0,05 (рис. 4). Хроническое введение 170-Э2 ОЭ самкам приводило к снижению продолжительности иммобильности по сравнению с ОЭ крысами, получавшими масляный растворитель (контроль 2), но данный показатель был выше, чем в контроле 1 (рис. 4). Несмотря на отсутствие достоверных изменений времени неподвижности у ОЭ самок, которым вводили 17а-Э2, по сравнению с контролем 2, тем не менее, наблюдалась тенденция к снижению продолжительности иммобильности у этих животных по сравнению с ОЭ самками.

Овариоэктомия у самок крыс приводила к снижению времени пребывания в открытых рукавах лабиринта в 2 раза и уменьшению числа заходов в них по сравнению с контролем 1 (табл. 3). Овариоэктомия у самок крыс сопровождалась незначительным повышением исследовательской активности и снижением грумингового компонента по сравнению с интактными животными (табл. 4). Таким образом, искусственный дефицит эстрогенов выраженно повышает степень депрессии и уровень тревожности у животных, что говорит о депрессогенном и анксиогенном действии гипоэстрогении, не изменяя при этом ориентировочно-

Рис.4. Влияние ОЭ и хронического введения 17р- и 17а-Эг на степень депрессивного поведения ОЭ самок крыс в тесте Порсолта. Столбиками показано время иммобильности (сек.): 1-контроль 1; 2-ОЭ самки(контроль 2), 3 - ОЭ самки + 17(3-Э2, 4 - ОЭ самки + 17а-Э2; * -различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с

Хроническое введение 170-Э2 в 2 раза повышало время нахождения ОЭ животных в открытых рукавах лабиринта по сравнению с контролем 2, при этом данный показатель не отличался по сравнению с контролем 1. Число заходов в открытые и закрытые рукава не отличалось от тех же показателей в группе ОЭ крыс (табл. 3). Общее время пребывания в открытых рукавах лабиринта ОЭ самок, получавших 17а-Э2, также повышалось в 2 раза по сравнению с ОЭ самками.

исследовательскую активность грызунов.

о 250

о 200

■о

\о 150

Ж

* 100

со 50

0

Число заходов в открытые и закрытые рукава грызунов при этом выраженно повышалось по сравнению с контролями 1 и 2 (табл. 3). Время нахождения в открытых рукавах, число заходов в открытые и закрытые рукава лабиринта у ОЭ крыс, получавших 17а-Э2, было выше по сравнению с ОЭ самками из группы, которым вводили 170-Э2 (табл. 3). В тесте «открытое поле» 17[3-Э2 у ОЭ крыс в 1,8 раза понижал горизонтальную двигательную активность, а также представленность груминга по сравнению с контрольными ОЭ крысами (табл. 4). ОЭ самки, получавшие 17а-Э2 характеризовались повышением исследовательской активности и увеличением уровня эмоционального компонента по сравнению с ОЭ животными. Число «обследованных» норок, количество болюсов и исследовательское поведение у ОЭ животных, которым вводили 17а-Э2, было выше по сравнению с ОЭ крысами, получавшими 170-32.

Таким образом, 170-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический эффекты при дефиците эстрогенов, но при этом полностью не восстанавливал паттерн поведения до уровня интактных самок крыс. Хроническое введение 17а-Э2 не оказывало существенного влияния на время неподвижности ОЭ животных в тесте Порсолта, что свидетельствует об отсутствии антидепрессивного действия этого препарата. При этом, в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле» 17а-Э2 оказывал умеренное анксиолитическое действие, что выражалось увеличением числа заходов в открытые «рукава» в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт», и повышением исследовательской активности в «открытом поле». Анализ поведенческих эффектов 170-Э2 и 17а-Э2 в условиях ОЭ показал, что 170-Э2 проявлял антидепрессивный и анксиолитический эффекты более выраженно, чем 17а-Э2. Ряд авторов в своих исследованиях также демонстрировали положительные эффекты 170-Э2 при аффективных расстройствах и отсутствие эффектов 17а-Э2 на психо-эмоциональный статус (Trent et al., 2005; Touxefis et al„ 2006).

Эффекты СЭРМ на поведенческие реакции ОЭ самок крыс Влияние тамоксифена на поведение ОЭ самок крыс

Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам уменьшало время неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили 17а-Э2. В то же время, данный показатель был выше, чем в контроле 1 и в группе крыс, которым вводили 170-Э2 (рис. 5). Полученные результаты свидетельствуют об умеренном антидепрессивном эффекте тамоксифена при дефиците эстрогенов.

Однако тамоксифен оказывал менее выраженное антидепрессивное действие, чем гормональная терапия 17(3-32. При этом, селективный модулятор эстрогеновых рецепторов не восстанавливал аффективный статус до уровня интактных крыс. Введение тамоксифена ОЭ самкам на фоне 17а-Э2 или 170-Э2 (особенно) сопровождалось еще более выраженным снижением времени неподвижности в тесте Порсолта у крыс этой группы. Выполненная серия экспериментов показала, что тамоксифен снижал уровень тревожности у ОЭ крыс до уровня контрольных интактных самок, которые находились в фазе покоя. В «тесте приподнятый крестообразный лабиринт» крысы, получавшие тамоксифен, характеризовались увеличением времени нахождения и повышением в 2 раза числа заходов в открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2, и эти показатели не

отличались от таковых в контроле 1 (табл. 3). Приведенные результаты коррелировали с данными, полученными в тесте «открытое поле» (табл 4).

Таблица 3

Влияние ОЭ, хронического введения 17а- и 17Р-эстрадиола и СЭРМ на поведение крыс в

Группы животных (п=10) Время пребывания в открытых рукавах (сек) Время нахождения в закрытых рукава: (сек) Количество заходов в открытые рукава Количество заходов в закрытые рукава

Инт. самки (контроль 1) 86,0 ± 6,2 214,0 ±8,6 1,2 ±0,4 2,0 ±0,4

ОЭ самки + (контроль 2) 44,0 ±3,2* 256,0 ± 5,6* 0,5 ± 0,2* 4,0 ±0,2*

ОЭ + 17а-Э2 94,4 ± 6,6 & 187,4 ± 6,6* & 4,0 ± 0,1*& 5,0 ±0,9*

ОЭ+17р-Э2 74,0 ± 4,2*& 236,0 ± 4,2*& 0,5 ±0,2* 3,0 ± 0,6

ОЭ +тамоксифен 98,8 ± 5,4*м 228,0 ± 10,8&$ 1,1 ± 0,4 м* 1,6±0,4&#$

ОЭ + 17аЭ2 тамоксифен 98,3 ± 1 $,9Ш 201,7 ± 18,9м 3,3 ± 0,9*м 4,3 ± 0,9*

ОЭ + 17р-Э2 тамоксифен 68,8 ± 4,2м' 231,3 ± 4,2м* 0,4 ±0,1** 1,3 ± 0,2&$**

ОЭ + генистейн 186,0±6,9**№ 114,0 ± 6,9$*#& 6,0 ± 1,7$*#& 7,0 ± 1,7**$'я"

ОЭ + генистейн +17а-Э2 100,5 ± 8,9*&$е 199,6±9,0*&$е 5,0 ± 1,2*& 6,0 ±1,8*

ОЭ + генистейн + 17Р-Э2 212,5 ± 10,3**" 87,5 ± 10,3$*#& 3,3 ± 1,3*'&е 4,3 ± 1,3*е

ОЭ +климадинон 88,0 ± 8,1 212,0±8,2№ 0,5 ± 0,2** 1,7 ± 0,3«*

ОЭ + 17а-Э2 климадинон 58,8 ± 4,3 *№ш 241,3±4,2*&$в 2,5 ± 0,6*&Иш 3,5 ± 0,6*$м

ОЭ+ 17р-Э2 климадинон 123,3 ± 12,0*&$#о> 194,6 ± 12,8&$# 4,0 ± 0,2*Ыш 5,0 ± 0,2,&"и

Примечание: - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1, - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2, - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол, * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17а-эстрадиол; е - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн;10 - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших климадинон.

Сравнивая эффекты совместного введения указанных препаратов и изолированного введения тамоксифена на тревожное поведение ОЭ самок, можно отметить, что 17а-Э2 и тамоксифен, введенные в комбинации, в 3 раза повышали число заходов в открытые и закрытые «рукава», не влияя на время нахождения грызунов в этих «рукавах», что коррелировало с высокой норковой активностью и снижением числа болюсов дефекации у грызунов в тесте «открытое поле». Сочетанное введение тамоксифена и 170-Э2 уменьшало время нахождения и число заходов в открытые «рукава» лабиринта, снижало специфическую норковую

активность и увеличивало число актов дефекации в тесте «открытое поле» по сравнению с изолированным введением тамоксифена.

Таблица 4

Влияние ОЭ, хронического введения 17а- и 17р-эстрадиола и СЭРМ на поведение ОЭ крыс-

Группы животных (п=9) Параметры

Двигательная активность Исследовательска я активность Эмоциональность

Перемещение Вставание Груминг Дефекаци я

Инт. самки (контроль 1) 45,6 ± 2,4 11,6 ±0,4 1,6 ±0,2 2,6 ± 0,4 2,6 ± 0,4

ОЭ (контроль 2) 60,8 ±0,4* 11,4 ± 1,2 2,5 ± 0,2 * 1,9 ±0,02* 1,8 ±0,3

ОЭ + 17а-Э2 35,6 ±7,9"' 11,0 ±0,6 4,0 ±0,6** 4,3 ±1,5** 4,3 ±0,4**

ОЭ + 17Р-Э2 34,2 ±0,4*' 10,3 ± 1,2 2,4 ±0,2* 0,4 ± 0,02*# 0

ОЭ + тамоксифен 110,0±2,2*и& 4,8 ± 0,4*$*& 10,2 ± 0,4** *& 0,5 ±0,02**& 0,6 ± 0,02

ОЭ+17а-Э2 тамоксифен 37,4 ±6,4*' 6,7 ± 0,9*'5& 5,3 ± 0,7**$ 1,7 ± 0,5$& 0,6±0,1**&

ОЭ+тамокси фен+17Р-Э2 17,0 ± 1,2 **м 2,8 ± 0,4 3,4±0,6**$ 3,2 ± 0,02*'& 2,8 ± 0,4*&

ОЭ + генистейн 53,3 ± 1,2**® 9,0 ± 1,2* 4,0 ± 0,2 1,5 ± 0,6 0

ОЭ+ 17а-Э2 генистейн 39,9±5,3*е 10,3 ± 3,4 4,0 ± 1,2** 3,5 ± 0,9*е 2,8 ± 0,7&

ОЭ + 17РЭ2 генистейн 40,7 ± 3,5*$€ 5,3 ± 1,2 **к 2,0 ± 0,5е 3,3 ± 0,7*$е 0

ОЭ + климадинон 115,8 ± 8,3 5,8 ± 0,9**$& 13,3 ± 0,5 3,7 ± 0,7*$ 2,3 ± 0,8&

ОЭ+17а-Э2 климадинон 29,6 ± 6,7 *'ш 5,8 ± 0,9 1,8 ±0,4**" 3,5 ± 0,2 **$ 2,5 ± 0,6&

0Э+17Р-Э2 климадинон 159,8±7,5#*$со 2,5 ± 0,5 № 2,8 ± 0,3#ш 3,2 ± 0,9'$ 1,2 ± 0,5

достоверны при р< 0,05 по сравнению с контролем 2, - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17р-эстрадиол; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17а-эстрадиол, ш - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших генистейн.

Таким образом, в условиях дефицита эстрогенов наиболее выраженное анксиолитическое действие оказывало введение тамоксифена одного или в комбинации с 17а-Э2. Совместное введение 170-32 и тамоксифена не оказывало существенного влияния на тревожное поведение ОЭ самок по сравнению с изолированным введением 17Р-Э2. Все показатели тревожности, зарегистрированные в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» и «открытое поле» при комбинированном введении препаратов, не отличались от таковых в группе крыс, получавших только 17Р-Э2, что свидетельствует о нивелировании поведенческих эффектов тамоксифена при совместном введении этих препаратов на фоне дефицита эстрогенов у животных.

Рис.5. Влияние тамоксифена на степень депрессивного поведения у ОЭ самок крыс в тесте Порсолта. Столбиками показано время неподвижности в сек: 1-контроль 1; 2 - ОЭ самки (контроль 2); 3 -ОЭ самки, получавшие 17а-Э2; 4 - ОЭ самки+17Р-Э2; 5 - ОЭ + тамоксифен; 6 -ОЭ + тамоксифен + 17а-Э2; 7 - ОЭ самки + тамоксифен + 17Р-Э2; *-различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2, -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой животных, получавших 17р-Э2

Влияние генистейна на поведение ОЭ самок крыс

Как видно из рисунка 6, изолированное введение генистейна, особенно, и комбинация генистейна с 170-Э2 сопровождались резким снижением времени неподвижности, что свидетельствует о ярко выраженном их антидепрессивном действии. Комбинированное введение генистейна и 17а-Э2 также уменьшало продолжительность иммобильности по сравнению с контролями 1, 2 и изолированным введением 17а-Э2 ОЭ животным, но в меньшей степени, чем вышеуказанные препараты, что говорит об умеренном антидепрессивном действии данной комбинации препаратов. В тестах «приподнятый крестообразный лабринт» и «открытое поле» (Табл. 3 и 4) было установлено, что генистейн выраженно снижал уровень тревожности в условиях дефицита эстрогенов. ОЭ самки крыс, которым вводили генистейн, характеризовались увеличением в 4,2 раза времени пребывания в открытых рукавах лабиринта, повышением в 12 раз числа заходов в них по сравнению с контрольными ОЭ крысами, которые получали масляный растворитель. Показатели, полученные в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт», коррелировали с результатами в тесте «открытое поле». Так, у ОЭ крыс, получавших генистейн, значительно возрастала норковая активность и было угнетено эмоциональное поведение (груминг, дефекация).

Рис.6. Влияние генистейна на степень депрессивного поведения у ОЭ самок крыс в тесте Порсолта. Столбиками показано время неподвижности (в сек): 1- контроль 1; 2 - ОЭ (контроль 2); 3 - ОЭ + 17а-Э2; 4 - ОЭ + 17[!-Э2; 5 - ОЭ + генистейн; 6 - ОЭ самки + генистейн + 17а-Э2; 7 - ОЭ + генистейн + 17Р-Э2; * -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при р<0,05 по сравнению с контролем 2; 1 -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17а-Э2; & -различия достоверны при р<0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17р-Э2.

Проведя сравнительный анализ поведенческих реакций ОЭ самок крыс, получавших 17а-Э2 или 170-Э2, необходимо отметить, что генистейн проявлял более выраженное анксиолитическое действие, чем вышеуказанные препараты, о чем говорит увеличение времени пребывания и числа заходов в открытые рукава лабиринта и угнетение эмоциональности в тесте «открытое поле». Введение генистейна в сочетании с 17а-Э2 ОЭ самкам крыс повышало время пребывания и число заходов в открытые рукава лабиринта по сравнению с контролем 2. По сравнению с контролем 1 генистейн и 17а-Э2 незначительно увеличивали время нахождения в открытых рукавах лабиринта и повышали число заходов в эти рукава. Полученные результаты свидетельствуют о снижении степени тревожности у ОЭ самок, что коррелирует с повышением норковой активности грызунов в тесте «открытое поле». Однако комбинация генистейна с 17а-Э2 повышала эмоциональную реактивность у грызунов, что выражалось увеличением груминга и числа дефекаций по сравнению с контролями 1 и 2. Сравнивая эффекты совместного введения генистейна в сочетании с 17а-Э2 и изолированного введения генистейна в условиях дефицита эстрогенов, можно отметить, что более выраженное анксиолитическое действие оказывала монотерапия генистейном, что выражалось увеличением времени нахождения в открытых рукавах лабиринта и снижением эмоциональности в тесте «открытое поле». При сравнении влияния на тревожное поведение комбинированного введения генистейна с 17а-Э2 и изолированного введения 17а-Э2 достоверных изменений зарегистрировано не было. Совместное введение генистейна и 17($-Э2 снижало степень тревожности у ОЭ самок, о чем свидетельствует увеличение времени нахождения и числа заходов в открытые рукава лабиринта, а также отсутствие дефекаций в «открытом поле» по сравнению с контролем 2. При сравнении хронического введения указанных препаратов с контролем 1 отмечено повышение времени нахождения в открытых рукавах лабиринта, числа заходов в них, увеличение норковой активности и угнетение актов дефекации.

Таким образом, исследование показало, что наиболее отчетливое анксиолитическое действие в условиях ОЭ оказывает изолированное введение генистейна. Вместе с тем, очевидно, что 17а-Э2 и 170-Э2 не восстанавливали аффективный статус при дефиците эстрогенов, в то время как введенные в комбинации с генистейном указанные препараты снижали тревожное поведение до уровня интактных.

Влияние клнмадинона на поведение ОЭ самок крыс

У ОЭ самок крыс на фоне введения климадинона уменьшалось время неподвижности по сравнению с контролем 2 и группой крыс, которым вводили 17а-Э2 или 17Р-Э2; данный показатель был таким же, как в контроле 1 (Рис. 7), что свидетельствует об антидепрессивном эффекте климадинона в условиях дефицита эстрогенов. Климадинон на фоне 17а-Э2 или 17Р-Э2 также оказывал антидепрессивное действие по сравнению с контролем 2 и терапией 17а-Э2 или 17Р-Э2. Однако такое сочетание препаратов сопровождалось менее выраженным снижением времени неподвижности в тесте Порсолта по сравнению с изолированным введением климадинона. Тем не менее, комбинации климадинона с 17а-Э2 или 17(3-32 восстанавливали аффективный статус до уровня интактных крыс. При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и

«открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок (табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с введением 17|3-Э2, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Сравнивая анксиолитические свойства 17а-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить, что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта были выше у крыс, получавших один 17а-Э2, что свидетельствует о более выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле».

Рис.7. Влияние климадинона на степень депрессивного поведения у ОЭ самок крыс в тесте Порсолта.

Столбиками показано время иммобильности (в сек): 1-контроль 1; 2 - ОЭ (К 2); 3 -ОЭ+17а-Э2; 4 - ОЭ+17Р-Э2; 5 - ОЭ + климадинон; 6 - ОЭ + климадинон + 17а-Э2; 7 - ОЭ + климадинон + 17Р-Э2; * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с К 1; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с К 2,$ - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17а-Э2; & - различия достоверны при р 0,05 по сравнению с группой ОЭ самок, получавших 17р-Э2.

При тестировании ОЭ самок в «приподнятом крестообразном лабиринте» и «открытом поле» климадинон проявлял анксиолитические свойства, вызывая увеличение времени нахождения в открытых рукавах по сравнению с контрольными ОЭ крысами, и достигал значений, наблюдаемых у интактных самок (табл. 3). Эти данные коррелировали со значительным увеличением исследовательской активности в тесте «открытое поле» (табл. 4). По сравнению с введением 170-32, климадинон более выраженно проявлял анксиолитические свойства, повышая время нахождения в открытых рукавах лабиринта и исследовательское поведение в тесте «открытое поле». Сравнивая анксиолитические свойства 17а-Э2 и климадинона в условиях ОЭ, можно отметить, что время пребывания и число заходов (особенно) в открытые рукава лабиринта были выше у крыс, получавших один 17а-Э2, что свидетельствует о более выраженном противотревожном действии указанного препарата, чем у климадинона. Однако, эти результаты не подтвердились в тесте «открытое поле». Совместное введение климадинона с 170-Э2 оказывало анксиолитическое действие в условиях ОЭ. При сравнении с изолированным введением климадинона или 17032, совместное введение климадинона с 17р-Э2 повышало время нахождения в открытых рукавах лабиринта и число заходов в эти рукава. Однако в условиях «открытого поля» были получены разнонаправленные данные, не подтверждающие результаты исследований в «приподнятом крестообразном лабиринте». Сочетанное

введение климадинона с 17а-Э2 ОЭ самкам крыс оказывало умеренный анксиолитический эффект в условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» по сравнению с контрольными ОЭ крысами, о чем говорит повышение числа заходов в открытые рукава лабиринта. Однако, в условиях «открытого поля» у ОЭ самок, получавших климадинон в комбинации с 17а-Э2, норковая активность была снижена, а эмоциональная реактивность повышалась по сравнению с контролем 2, что свидетельствует о высокой стрессированности животных. Сравнивая выраженность анксиолитического действия комбинированного введения климадинона с 17а-Э2 и изолированным введением 17а-Э2, можно сделать заключение, что 17а-Э2 эффективнее снижал уровень тревожности, о чем свидетельствуют более высокие показатели анксиолитичности, полученные в поведенческих тестах, чем в группе ОЭ крыс, которым вводили 17а-Э2 в сочетании с климадиноном. По сравнению с изолированным введением климадинона, совместное введение климадинона и 17а-Э2 ОЭ крысам оказывало разнонаправленное действие на уровень тревожности в условиях «приподнятого крестообразного лабиринта» и «открытого поля». Так, климадинон в сочетании с 17а-Э2 снижали время нахождения в открытых рукавах лабиринта и число «обследованных» норок по сравнению с изолированным введением климадинона. При этом, число заходов в открытые рукава было выше при комбинированном введении указанных препаратов, а эмоциональная реактивность у грызунов в обеих группах была одинаковой.

Влияние тамоксифена на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови самок крыс в условиях дефицита эстрогенов

Хроническое введение тамоксифена ОЭ самкам крыс снижало содержание тропных гормонов в крови по сравнению с контролем 2 и с группой крыс, получавших 17а-Э2 или 17(3-Э2. При этом уровень ФСГ не отличался, а содержание ЛГ уменьшалось по сравнению с контролем 1. Концентрация периферических гормонов на фоне введения тамоксифена ОЭ самкам крыс уменьшалась по сравнению с контролем 1, 2 и группой ОЭ животных, которым вводили 17а-Э2 или 17[3-Э2 (Рис. 8). Хроническое введение тамоксифена в комбинации с 17а-Э2 ОЭ крысам не приводило к изменению уровня ФСГ в крови по сравнению с изолированным введением тамоксифена или 17а-Э2, но было значительно ниже, чем в контроле 2. Концентрация ЛГ на фоне введения указанных препаратов ОЭ самкам снижалась по сравнению с контролем 2 и тем же показателем в группе ОЭ самок, получавших только 17а-Э2. В то же время, тамоксифен, вводимый с 17а-Э2, повышал у ОЭ животных концентрацию ЛГ по сравнению с изолированным введением тамоксифена и контролем 1. Содержание Э в крови при введении тамоксифена с 17а-Э2 ОЭ крысам незначительно повышалось по сравнению с контролем 2 и изолированным введением тамоксифена, в то время как при сравнении с контролем 1 и изолированным введением 17а-Э2 уровень Э в крови у крыс в указанной группе был ниже. Тамокисфен, введенный с 17а-Э2 ОЭ животным, выраженно повышал сывороточную концентрацию П по сравнению с контролем 2 и изолированным введением тамоксифена или 17а-Э2. Однако содержание П значений контрольных интактных крыс не достигало. Хроническое введение тамоксифена в комбинации с

170-32 ОЭ крысам снижало уровень ФСГ по сравнению с контролем 1, 2 и группой крыс, получавших изолированное введение тамоксифена или 170-32.

В) Г)

Рис.8. Влияние тамоксифена на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс. Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных получавших 17а- или 17(3-эстрадиол и тамоксифен: 1 - интактные самки (контроль 1); 2 - ОЭ самки (контроль 2); 3 -ОЭ самки при введении 17а-эстрадиола; 4 - ОЭ самки, получавшие 17(5-эстрадиол; 5 - ОЭ самки при введении тамоксифена; 6 - ОЭ самки при введении тамоксифена и 17а-эстрадиола; 7 - ОЭ самки при введении тамоксифена и 17р-эстрадиола. - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; # - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2; 5 - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17а-эстрадиол; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17(3-эстрадиол; 6 - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших тамоксифен.

Содержание ЛГ в крови у ОЭ крыс на фоне тамоксифена, введенного с 170-Э2, уменьшалось по сравнению с контролем 2 и изолированным введением 170-32, однако, при сравнении с контролем 1 и изолированным введением тамоксифена, сывороточная концентрация ЛГ в указанной группе возрастала. Содержание Э в крови у ОЭ самок крыс, получавших тамоксифен с 17(3-32, возрастало по сравнению с контролем 1, 2 и изолированным введением тамоксифена, но было выраженно сниженным по сравнению с группой ОЭ крыс, которым вводили только 17|3-Э2.

Влияние генистейна на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс

Как видно из рисунка 9, хроническое введение генистейна ОЭ животным снижало содержание ФСГ в крови до уровня интактных контрольных крыс. Концентрация ЛГ так же снижалась по сравнению с контролем 2 и группой животных, получавших 17а-Э2 или 17(3-32, однако, до значений в контроле 1

концентрация ЛГ не снижалась. Уровень Э в сыворотке крови у ОЭ самок крыс на фоне введения генистейна был минимальным по сравнению с контролем 1 и группой ОЭ крыс, которым вводили 17а-Э2 или 170-Э2, и не отличался от этого показателя в контроле 2 (Рис. 9). Совместное введение генистейна с 17Р-Э2 ОЭ самкам крыс достоверно уменьшало содержание ФСГ и П по сравнению с контролями 1, 2 и группой ОЭ животных, которым вводили 17а-Э2 или 17Р-Э2. Концентрация ЛГ у ОЭ самок на фоне введения генистейна в сочетании с 17(3-Э2 снижалась по сравнению с контролем 2 и ОЭ животными, получавшими 17(3-Э2, но до уровня интактных контрольных крыс не уменьшалась.

В) Г)

Рис.9. Влияние генистейна на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс. Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных получавших 17а- или 17Р-эстрадиол и генистейн: 1 - интаткные самки (контроль 1); 2 - ОЭ самки (контроль 2); 3 - ОЭ самки при введении 17а-эстрадиола; 4 - ОЭ самки при введении 17|3-эстрадиола; 5 - ОЭ самки при введении генистейна; 6 - ОЭ самки при введении генистейна и 17а-эстрадиола; 7 - ОЭ самки при введении генистейна и 17р-эстрадиола; - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2; $ - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17а-эстрадиол; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17(3-эстрадиол; е - достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших генистейн.

Содержание Э при введении генистейна с 17Р-Э2 в условиях дефицита эстрогенов было выше, чем в контролях 1, 2 и в группе крыс, получавших только генистейн, но значительно ниже, чем при изолированном введении 17Р-Э2 ОЭ крысам (Рис. 15). Проведенное исследование показало, что изолированное и совместное с 17а-Э2 или 17Р-Э2 введение генистейна выраженно снижало сывороточную концентрацию тропных гормонов по сравнению с контрольными ОЭ самками и группой ОЭ крыс, получавших только 17а-Э2 или 17Р-Э2. Эти

результаты говорят об эстрогеноподобном воздействии

генистейна на функциональную активность гипофизарно-овариальной системы. В то же время, хроническое введение генистейна ОЭ самкам не восстанавливало содержание Э в крови по сравнению с контролем 1 и группой крыс, получавших 17а-Э2 или 170-Э2. При совместном введении генистейна и 17а-Э2 концентрация Э незначительно повышалась, но данный показатель был ниже, чем в контроле 1 и при изолированном введении 17а-Э2. При комбинированном введении генистейна и 170-Э2 уровень Э повышался по сравнению с контролями 1, 2 и с группой животных, где генистейн вводился изолированно, но был значительно ниже, чем при изолированном введении 170-32.

Влияние климадинона на концентрацию половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс

В) Г)

Рис.10. Влияние климадинона на уровень половых гормонов в сыворотке крови у ОЭ самок крыс. Столбиками показано содержание ФСГ (А), ЛГ (Б), П (В), Э (Г) в крови ОЭ животных получавших 17а- и 17р-эстрадиол и климадинон: 1 - интаткные самки (контроль 1); 2 - ОЭ крысы (контроль-2); 3 - ОЭ самки при введении 17а-эстрадаола; 4 - ОЭ крысы при введении 17р-эстрадиола; 5 - ОЭ самки при введении климадинона; 6 - ОЭ самки при введении климадинона и 17а-эстрадиола; 7 - ОЭ самки при введении климадинона и 17р-эстрадиола; -различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 1; * - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с контролем 2, - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17а-эстрадиол; & - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших 17Р-эстрадиол;6 - различия достоверны при р < 0,05 по сравнению с группой ОЭ животных, получавших климадинон.

Хроническое введение климадинона ОЭ животным снижало содержание ФСГ в крови по сравнению с контролем 2 (Рис 10). При этом данный показатель был выше, чем в контроле 1 и в группе ОЭ крыс, получавших 17а-Э2 или 170-Э2. Уровень ЛГ при введении климадинона ОЭ самкам выраженно уменьшался по сравнению с контролями 1 и 2 и с группой ОЭ крыс, получавших 17а-Э2 или 170-Э2. Сывороточная концентрация Э по сравнению с контролем 2 незначительно увеличивалась, однако, данный показатель был ниже, чем в контроле 1 и группе грызунов, которым вводили 17а-Э2 или 170-32. Общий уровень П в крови на фоне введения климадинона резко возрастал по сравнению с контролями 1, 2 и с ОЭ самками, которые получали 17а-Э2 или 170-Э2. Совместное введение климадинона и 17а-Э2 ОЭ самкам крыс приводило к снижению сывороточной концентрации ФСГ и П по сравнению с контролями 1,2 и группой крыс, получавших климадинон и 17а-Э2 изолированно. Значение ЛГ на фоне климадинона, вводимого с 17а-Э2 ОЭ грызунам, было ниже, чем в контроле 2 или при изолированном введении 17а-Э2. В то же время, данный показатель был выше, чем в контроле 1 и при изолированном введении климадинона. Сывороточное содержание Э при введении климадинона с 17а-Э2 ОЭ самкам крыс возрастало по сравнению с контролем 2 и изолированным введением климадинона; в то же время, этот показатель был ниже, чем в контроле 1 и при изолированном введении 17а-Э2.

Климадинон в комбинации с 17Р-Э2 снижал содержание тропных гормонов в крови по сравнению с контрольными ОЭ самками, но не до уровня интактных крыс. Значения ФСГ и ЛГ при введении климадинона и 170-32 существенно не отличались от таковых в группе ОЭ крыс, получавших только 17Р-Э2. В отличие от крыс, получавших только климадинон, совместное введение животным климадинона и 170-32 не влияло на содержание ФСГ, тогда как сывороточный показатель ЛГ возрастал. Концентрация периферических гормонов у ОЭ крыс, получавших указанную комбинацию препаратов, возрастала по сравнению с контролями 1 и 2. Однако, сравнивая содержание 3 и П в крови в данной группе и в группе ОЭ крыс, которым вводили только климадинон, можно отметить, что значения Э увеличивались, а П снижались под влиянием климадинона с 170-32. По сравнению с изолированным введением 170-Э2, сочетанное введение указанных препаратов снижало содержание 3 и повышало уровень П в сыворотке крови животных. Приведенные результаты говорят о том, что изолированное введение климадинона, как и его комбинаций с 17а-Э2 или 17Р-Э2, снижало уровень тропных гормонов в крови по сравнению с контролем 2 и в меньшей степени по сравнению с изолированным введением 17а-Э2 или 17Р-Э2.

В то же время, введение одного климадинона повышало уровень 3 и П, особенно, по сравнению с контролем 2. Совместное введение климадинона с 17а-Э2 или 17Р-Э2 более выраженно повышало уровень Э в крови, чем введение одного климадинона. Необходимо отметить, что у ОЭ крыс климадинон и его комбинации с 17а-Э2 или 170-Э2 не корректировали баланс половых гормонов до уровня интактных животных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенное исследование не оставляет сомнений в том, что СЭРМы синтетического и растительного происхождения влияют не только на

периферические ткани и органы, но и вовлекаются в сложные механизмы формирования эмоционального поведения как при естественном колебании эндогенных половых гормонов, так и на фоне их дефицита. Данная работа создает основу для внедрения в клиническую практику модуляторов ЭР с целью коррекции аффективного статуса пациенток, подвергшихся гистерэктомии в репродуктивном возрасте, а также во время климактерического периода и глубокой менопаузе. Кроме того, все исследуемые препараты не вызывают пролиферации в периферической репродуктивной системе, что позитивно отличает их от 17(3-32. Этот факт позволит в дальнейшем осуществлять поиск наиболее эффективных комбинаций СЭРМ и 170-Э2 для коррекции высшей нервной деятельности, баланса половых гормонов при минимальном количестве побочных эффектов. Таким образом, полученные данные о селективных эффектах различных комбинаций терапии у животных с экспериментальной ОЭ и при циклических колебаниях половых гормонов могут быть в дальнейшем использованы для разработки методов коррекции эмоциональных расстройств при дефиците или дисбалансе эстрогенов.

ВЫВОДЫ

1. Колебания половых гормонов в течение эстралыюго цикла сопровождаются изменением аффективного статуса. Фаза эструса и метэструса характеризуется снижением выраженности депрессивноподобного поведения. Наименьший уровень тревожности наблюдается в фазы покоя, характеризующиеся низким содержанием эндогенного Э2, - эструсе и метэстру се.

2. Овариоэктомия у самок крыс приводит к развитию комплекса поведенческих расстройств, включающих повышение депрессивноподобного поведения и увеличение тревожности, которые можно охарактеризовать, как нарушение аффективного статуса.

3. Хроническое введение 17а-Э2 не влияет на аффективное поведение и фазность цикла у грызунов.

4. Хроническое введение 17(3-32 интактным самкам приводит к нарушению эстрального цикла (устойчивый эструс) и развитию аффективных расстройств. На фоне ОЭ 170-32 частично восстанавливает аффективный и гормональный статус.

5. Поведенческие эффекты тамоксифена у интактных самок зависят от фазы полового цикла. Степень депрессивноподобного состояния снижается в стадии покоя (ди- и метэструс). Анксиолитический и антидепрессивный эффекты наблюдаются на фоне высокого содержания Э (проэструс), и у ОЭ животных при изолированном введении. При среднем содержании Э в крови (диэструс) тамоксифен проявляет анксиогенные свойства. В комбинации с 17(3-32 эффекты тамоксифена нивелируются, с 17а-Э2 показатели тревожности и депрессии оставались такими же, как при изолированном введении тамоксифена.

6. Введение генистейна изолированно или в комбинации с 17а-Э2 или 170-32 снижает показатели аффективных расстройств у интактных и у ОЭ крыс, наиболее выраженно при изолированном введении у ОЭ самок.

7. У интактных и ОЭ самок климадинон в меньшей степени воздействует на аффективное поведение, чем генистейн.

8. Введение 170-Э2 резко повышает уровень эндогенного эстрадиола в крови. Комбинированное введение 170-Э2 с СЭРМ значительно снижает содержание

эндогенного эстрадиола в крови. Все СЭРМы как при изолированном введении, так и в комбинации с 17а-Э2 или 170-Э2 выражение снижают содержание тропных гормонов в крови.

9. Сравнительный анализ показал, что наиболее яркое антидепрессивное и анксиолитическое действие проявляет генистейн. В меньшей степени анксиолигическое и антидепрессивное действие по сравнению с вышеуказанными препаратами проявляет климадинон. Комбинации СЭРМ с 17а- или 170-Э2 не усиливают их поведенческие эффекты. Изолированное введение 17а- или 170-Э2 не устраняют аффективные расстройства в той же степени, что и СЭРМ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. С.Б. Казакова «Влияние климадинона на поведение и гормональный статус овариоэктомированных самок крыс» П Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике: Материалы 2-ой Международной Российско-Китайской конференции - 2006 - с. 63

2. С.Б. Казакова «Модулирующее влияние тамоксифена на пассивное обучение и уровень половых гормонов у интактных и овариоэктомированных крыс-самок» // Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике: Материалы 2-ой Международной Российско-Китайской конференции - 2006 -с. 64

3. С.Б. Казакова, Ю. О. Федотова, Н. С. Сапронов «Влияние тамоксифена на тревожность у интактных и овариэктомированных самок крыс» // Эксперим. Клин. Фармакол. - 2007. Т. 70. №. 5. С.3-8

4. Н. С. Сапронов, С. Б. Казакова «Влияние селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов синтетического и растительного происхождения на депрессивноподобное поведение у самок крыс» // Бюлл.Экспер. Биол. - 2008. Т. 146. №. 7. С. 80-83

5. С. Б. Казакова, Н. С. Сапронов «Сравнительный анализ эффектов эстрогенов и тамоксифена на высшие функции мозга» // Эксперим. Клин. Фармакол. - 2008. Т. 71. №. 6. С. 49-53

6. С.Б. Казакова «Эффекты генистейна на тревожно-депрессивное состояние при дефиците эстрогенов» // Психофармакол. и биол. наркол. 2008. Т. 8, вып. 1-2. С. 2364.

Подписано в печать 24.12. 09. Формат 60*84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 114.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии Издательства СПбГЭТУ "ЛЭТИ"

Издательство СПбГЭТУ "ЛЭТИ" 197376, С.-Петербург, ул. Проф. Попова, 5

Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают 1\юдулирующее влияние на когнитивный и психоэмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом патологий, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость. В некоторых случаях развивается депрессия. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральных контрацептивных средств, во время предменструального синдрома, в течение беременности и послеродовом периоде, в климактерическом периоде.

В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Так, эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективпом действии эстрогенов.

В настоящее время заместительная гормональная терапия (ЗГТ) широко используется для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции. Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009).

Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает новый класс фармакологически активных веществ -селективные эстроген-рецепторные модуляторы (СЭРМ), — проявляющих избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. Раньше эта группа лекарственных средств рассматривалась как антиэстрогены; сегодня известно, что такое определение ошибочно. Обозначение СЭРМ было создано для описания соединений, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам.

В настоящее время остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген — чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения в условиях естественных колебаний половых гормонов и при дефиците эстрогенов.

Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17а-эстрадиолом и с 17|3-эстрадиолом, на депрессивнподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови, и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.

Задачи исследования:

1. Исследовать участие а- и p-эстрогеновых рецепторов в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;

2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;

3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к а-эстрогеновым рецепторам - 17а-эстрадиолом, или в комбинации с лигандом к (3-эстрогеновым рецепторам - 17р-эстрадиолом в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;

4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17а- и 17р-эстрадиола, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) препаратов указанной группы при дисбалансе половых гормонов.

Научная новизна. Впервые показано влияние СЭРМ синтетического и растительного происхождения на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17а- и 17р~эстрадиола на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании 17а- и 17Р-эстрадиола способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.

Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения а- и Р-ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с ЗГТ эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне патологий репродуктивной системы.

Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах.

Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 17р-эстрадиолом. Применение 17р-эстрадиола и/или 17а-эстрадиола в комплексе с тамоксифеном или генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.

выводы

1. Колебания половых гормонов в течение эстрального цикла сопровождаются изменением аффективного статуса. Фаза эструса и метэструса характеризуется снижением выраженности депрессивноподобного поведения. Наименьший уровень тревожности наблюдается в фазы покоя, характеризующиеся низким содержанием эндогенного Э2 - эструс и метэструс.

2. ОЭ у самок крыс приводит к развитию комплекса поведенческих расстройств, включающих повышение депрессивноподобного поведения и увеличение тревожности, которые можно охарактеризовать, как нарушение аффективного статуса.

3. Хроническое введение 17а-Э2 не влияет на аффективное поведение и фазность цикла у грызунов.

4. Хроническое введение 170-Э2 интактным самкам приводит к нарушению эстрального цикла (устойчивый эструс) и развитию аффективных расстройств. На фоне ОЭ 170-Э2 частично восстанавливает аффективный и гормональный статус.

5. Поведенческие эффекты тамоксифена у интактных самок зависят от фазы полового цикла. Степень депрессивноподобного состояния снижается в стадии покоя (ди- и метэструс). Анксиолитический и антидепрессивный эффекты наблюдается на фоне высокого содержания Э (проэструс), и у ОЭ животных при изолированном введении. При среднем содержании Э в крови (диэструс) тамоксифен проявляет анксиогенные свойства. В комбинации с 170-Э2 эффекты тамоксифена нивелируются, с 17а-Э2 показатели тревожности и депрессии оставались такими же, как при изолированном введении тамоксифена.

6. Введение генистейна изолированно или в комбинации с 17а-Э2 или 170-Э2 снижает показатели аффективных расстройств у интактных и у ОЭ крыс, наиболее выраженно при изолированном введении у ОЭ самок.

7. У интактных и ОЭ самок климадинон в меньшей степени воздействует на аффективное поведение, чем генистейн.

8. Введение 170-Э2 резко повышает уровень эндогенного эстрадиола в крови. Комбинированное введение 170-Э2 с СЭРМ значительно снижает содержание эндогенного эстрадиола в крови. Все СЭРМы как при изолированном введении, так и в комбинации с 17а-Э2 или 170-Э2 выраженно снижают содержание тропных гормонов в крови.

9. Сравнительный анализ показал, что наиболее яркое антидепрессивное и анксиолитическое действие проявляет генистейн. Поведенческие эффекты тамоксифена зависят от фазы цикла, что необходимо учитывать при его возможном применении в клинике. В меньшей степени анксиолитическое и антидепрессивное действие по сравнению с вышеуказанными препаратами проявляет климадинон. Комбинации СЭРМ с 17а- или 17(3-Э2 не усиливают их поведенческие эффекты. Изолированное введение 17а- или 17|3-Э2не устраняют аффективные расстройства в той же степени, что и СЭРМ.