Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта сабельника болотного при экспериментальных нефропатиях

На правах рукописи

ПОПОВА НАТАЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ 6УХОГО ЭКСТРАКТА САБЕЛЬНИКА БОЛОТНОГО ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ НЕФРОПАТИЯХ

14.00.25- фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан-Удэ - 2007

003174146

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор

кандидат медицинских наук

Шантанова Лариса Николаевна

Цыренжапова Октябрина Даши-Дондобовна

Петунова Анна Николаевна

Ведущая организация ГОУ ВПО Иркутский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится «25 » октября 2007 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета К 003 028 01. в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу 670047, г Улан-Удэ, ул Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан « 24 » сентября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, - -

кандидат биологических наук / Ь^ к Хобракова В Б

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность поиска путей повышения эффективности фармакотерапии заболеваний почек определяется их широкой распространенностью и наблюдающейся тенденцией к росту нефрологической патологии в общей структуре заболеваемости По статистическим данным за 19952005 г г в России количество больных с заболеваниями органов мочевы-делительной системы увеличилось почти вдвое (Здоровье населения , 1996-2005) В некоторых странах заболеваемость хроническими формами нефропатий приобрела эпидемиоподобный характер, что определяет высокую медико-социальную значимость данной проблемы (Шило, 2004) При этом, с каждым годом растет число больных с тяжелыми формами нефролатий, нуждающихся в таких дорогостоящих мероприятиях как гемодиализ и трансплантация почек По данным литературы известно, что в европейских странах и США расходы на проведение гемодиализа составляют до 2 % от общего бюджета системы здравоохранения (Collms et al, 2000)

Помимо широкой распространенности нозологических форм заболеваний почек, поражения их встречаются при многих патологических состояниях интоксикациях, заболеваниях печени, сахарном диабете, кол-лагенозах и других системных заболеваниях (Ермоленко, 2000, Бурневич и др , 2002, Parving, 2000). Особую тревогу вызывает тот факт, что в последнее время все чаще встречаются случаи лекарственной нефропатии (Астахова, 2000, Тареева, 1998, 2000) К числу лекарственных препаратов, оказывающих нефротоксическое действие, относятся антибиотики, нестероидные противовоспалительные средства, рентгеноконтрастные вещества, туберкулостатики, цитостатики и др (Тареева и соавт, 2000, Полонский, 2001)

При этом, несмотря на использование современных методов лечения, заболевания почек в 1,5 % случаев приводят к развитию острой почечной недостаточности, при которой летальность достигает 40 — 50 % (Милованов, Николаев, 1998; Шишкин, 2005)

Фармакотерапия и фармакопрофияактика заболеваний почек требует осторожного подхода ввиду снижения функциональной состоятельности почек при их повреждениях, и сама медикаментозная терапия может явиться причиной развития рецидивов заболевания В этой связи основным требованием к нефропротекторным средствам является отсутствие токсичности и нежелательных побочных явлений при их применении

Учитывая широкое распространение заболеваний почек, их прогрессирующее течение, приводящее к развитию почечной недостаточности, тяжелый медико-социальный прогноз, недостаточное количество нефропротекторных препаратов, актуальной задачей остается разработка и

внедрение новых эффективных и безвредных лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний почек

В народной медицине для лечения заболеваний почек используются галеновые препараты из сабельника болотного (Comat ит palustre L) Растение широко распространено в тундровой и лесной зонах Евразии и Северной Америки, что обеспечивает его достаточную сырьевую базу Нами, совместно с сотрудниками В ИЛ АР был разработан способ получения сухого экстракта из корней и корневищ сабельника болотного, условно названный «эксабол»

Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности эксабола при повреждениях почек различной этиологии, а также выявление возможных механизмов его нефропротекторного действия

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи

- изучить основные фармакологические свойства эксабола,

- оценить фармакотерапевтическую эффективность эксабола при нефропа-тиях различной этиологии,

- выявить основные механизмы нефропротекторного действия эксабола

Научная новизна Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности нового растительного средства — сухого экстракта сабельника болотного эксабола Установлено, что эксабол обладает широким спектром фармакологических свойств, диуретической, гипоазоте-мической, противовоспалительной, антибактериальной, анальгетической, иммуномодулирующей, стресспротективной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной Показано, что курсовое введение эксабола в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг, оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при нефропатиях ишемиче-ской, токсической и иммунной этиологии, способствуя нормализации морфофункционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса Одним из ведущих молекулярно-клеточных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование процессов свободнорадикального окисления (СРО), обусловленное высоким содержанием веществ фенольной природы Механизм антиоксидантной активности указанного средства обусловлен как прямым антирадикальным, так и опосредованным хелатирующим действием, а также связан с его способностью повышать мощность эндогенной антиоксидантной системы организма Наряду с этим, установлено также, что одним из возможных механизмов нефропротекторного действия экса-

бола является ингибирование активности одного из основных ферментов апоптотического процесса - каспазы 3

Практическое значение. На основании проведенных экспериментальных исследований общей и специфической фармакологической активности, фармакотерапевтической эффективности и безопасности эк-сабола представлен в ФК МЗ и СР РФ отчет по его доклиническим испытаниям Полученные данные о выраженной нефропротекторной активности сухого экстракта сабельника болотного аргументируют целесообразность его применения в комплексной фармакотерапии и профилактике заболеваний почек

Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Федерального агентства по образованию и социальному развитию.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины Фундаментальные основы и реализация» на 2003-2006 г г, утвержденной Президиумом СО РАН

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Эксабол в экспериментально-терапевической дозе, составляющей 100 мг/кг, обладает диуретическим, гипоазотечическим, противовоспалительным, антибактериальным, анальгетическим, иммуномодулирующим, стресспротективным, мембраностабилизирукнцим и антиоксидантным свойствами

2 Курсовое введение эксабола животным на фоне повреждений почек ишемической, токсической и иммунной этиологии сопровождается нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса

3 Одним из базисных механизмов нефропротекторного действия указанного средства является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной антиоксидантной защиты организма благодаря наличию комплекса биологически активных веществ фенольной природы

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на

- научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д б н Фролова Д Ш (Улан-Удэ, 2005),

- конференции молодых ученых ИОЭБ СО РАН, посвященной Дню науки (Улан-Удэ, 2006),

- научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д м н Базарона Э Г (Улан-Удэ, 2006),

- Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 2 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 130 листах компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 233 источника, из которых 61 работа иностранных авторов Работа иллюстрирована 35 таблицами и 18 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная работа выполнена на половозрелых белых крысах-самцах линии Wistar массой 180-240 г, мышах-самцах линии СВА и Fl(CBAxC578116) массой 18-25 г Животные находились в стандартных условиях содержания и кормления в виварии (Приказ МЗ № 1179 от 10 10 83 г) Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12 08 77 г )

Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапи-тации под легким эфирным наркозом

Кроме того, в работе были использованы модельные системы суспензии эритроцитов, мононукле'арных лейкоцитов, культуры условно-патогенных микроорганизмов и др

Двустороннюю ишемию почек воспроизводили путем выделения почек белых крыс из жировой капсулы и окклюзии сосудистых пучков обеих почек на 60 мин (Шепотиновский и соавт, 1989)

Сулемовый некронефроз у белых крыс вызывали однократным внутрибрюшинным введением водного раствора сулемы в дозе 2 мг/кг (Соколова с соавт , 1975)

Экспериментальный гломерулонефрит (нефрит Хеймана) воспроизводили по методу Reynolds 3 et al, (1994) путем двукратного введения в вену хвоста белых крыс полного адьюванта Фрейнда

С целью оценки функционального состояния почек животных определяли диурез по общепринятому методу (Берхин, Иванов, 1972), концентрацию катионов натрия и калия методом пламенной фотометрии, депурационную функцию почек оценивали по содержанию мочевины и

креатинина в сыворотке крови и моче - унифицированными методами с использованием наборов реактивов Био-Ла-Тест «Лахема», содержание белка в моче - реакцией с сульфосалициловой кислотой (Меньшиков и соавт, 1987), оценку скорости клубочковой фильтрации (СКФ)- по клиренсу эндогенного креатинина (Вандер, 2000)

Для оценки противовоспалительной активности эксабола определяли его влияние на экссудацию, альтерацию и образование грануляционной ткани Так, изучение антиэкссудативной активности проводили на модели острого асептического воспаления задней конечносш животного, индуцированного формалином (Стрельников, 1960), декстраном (Ленинский, 1976), гистамином (Александров и соавт, 1986) Воспалительный процесс с преобладанием явлений альтерации моделировали подкожным введением раствора уксусной кислоты с одновременным внутрибрюшин-ным введением реополиглюкина (Ойвин, Шетель, 1961) Оценку влияния эксабола на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Ф Тринусисоавт (1975)

Анальгетическую активность оценивали на модели асептического перитонита, вызванного внутрибрюшинным введением животным раствора уксусной кислоты (Руководство , 2005) Жаропонижающее свойство эксабола оценивали по способности оказывать гипотермический эффект у крыс на фоне «дрожжевой лихорадки» (Руководство , 2005)

Оценку антибактериальной активности осуществляли методом двукратных серийных разведений в жидкой среде (Першин, 1971) В качестве тест-объектов использовали штаммы бактерий Escherichia coli 408, Staphylococcus aureus 209P, Proteus vulgaris H 50, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa Микробная нагрузка составляла 250 000 клеток в 1мл

Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и соавт, 2000), гуморального звена - по количеству антителообразующих клеток, определяемых методом локального гемолиза (Cunningham, 1965) Влияние на пролиферативную активность Т- и B-лимфоцитов оценивали в реакции бластной трансформации (Руководство ,2005)

При исследовании стресспротективной активности использовали модель иммобилизации белых крыс на спине в течение 24 часов «Язвенный индекс» Паулса подсчитывали по методу (Амосова и соавт, 1998)

Оценку мембраностабилизирующей активности осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, вызванного реактивом Фентона (перекис-ный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) (Ковалев и соавт, 1986)

Концентрацию триацилглицеридов (ТГ), липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) в сыворотке крови определяли, используя унифицированные лабораторные методы Индекс атероген-ности (ИА) рассчитывали как отношение ЛПНП/ЛПВП

Антиоксидантные свойства эксабола оценивали по степени ин-гибирования процессов свободнорадикального окисления и влиянию на эндогенную антиокислительную систему В крови животных определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) (Темирбулатов, Селезнев, 1981), диеновых коньюгатов (Гаврилов, Мишкорудная, 1983), восстановленного глутатиона (Anderson, 1989), активность супероксиддисмутазы (Чевари и соавт, 1985), каталазы (Королюк и соавт, 1988) Содержание МДА в гомогенате почек определяли по методу (Стальная, Гаришвили, 1977)

Обшую антиоксидантную емкость (ОАОЕ) определяли по методу Govindarajan R с соавт (2003) Антиоксидантную активность (АОА) определяли с использованием модели деградации (í-каротина (Lee et al, 1995) Антирадикальную активность по отношению к 02" - радикалам определяли по методу Chen A -S с соавт (2004), по отношению к ДФПГ-радикалов -по методу Lee Y с соавт (1996) Железосвязывающую активность эксабола определяли с использованием фенантролинового метода (Теселкин, 1997)

Индуцированный апоптоз воспроизводили ишемией/реперфузией почек животных путем 40 минутной окклюзии почечной артерии Активность каспазы-3 определяли спектрофотометрически в гомогенате коркового слоя почек с использованием стандартного набора реактивов «Cas-pase assay kit» (Sigma)

При патоморфологическом исследовании почки животных фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и фиксаторе Буэна Депарафинированные гистологические срезы, полученные на микротоме, окрашивали гемотоксилин-эозином ( Киселева и соавт , 1983)

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами с применением критерия U Манна-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2000) Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р<0,05)

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование специфической фармакологической активности

эксабола включало определение его влияния на функциональное состояние почек, противовоспалительную, антибактериальную, анальгетиче-

скую, жаропонижающую, иммуномодулирующую, стресспротективную, мембраностабилизирующую и антиоксидантную активности, изучение его влияния на процессы свободнорадикалъного окисления и активность кас-пазы-3 при ишемии и реперфузии почек у крыс

В серии предварительных экспериментов было установлено, что острая токсичность (ОЬ50) эксабола при внутрибрюшинном введении белым крысам составляет 370,5 мг/кг (391,8-349,2), а при введении мышам -358 мг/кг (375,4-340,6), что позволяет отнести испытуемый фитоэкстракт к группе малотоксичных веществ (Сидоров, 1973)

При исследовании влияния эксабола на функциональное состояние почек белых крыс было установлено, что испытуемый фитоэкстракт обладает диуретической активностью (табл 1)

Таблица 1

Влияние эксабола на диуретическую функцию почек белых крыс в зависимости от вводимой дозы

Группы животных Доза, мг/кг Объем мочи, мкл/100 г/ч Увеличение диуреза, %

Контрольная (Н20) - 190,7± 10,26 -

Опытная 1 (эксабол) 25,0 205,5 ± 12,65 7,8

Опытная 2 (эксабол) 50,0 217,9+14,20 14,2

Опытная 3 (эксабол) 100,0 243,7 ± 9,27* 27,8

Опытная 4 (эксабол) 150,0 224,4 ± 7,5* 17,7

Опытная 5 (канефрон) 1,5 мл/кг 219,2± 5,07* 14,9

Примечание - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от

данных контрольной группы при Р < 0,05

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, однократное введение белым крысам эксабола в дозах 25 и 50 мг/кг не оказывает существенного влияния на водовыделительную функцию почек белых крыс, тогда как при введении препарата в более высоких дозах отмечается достоверный дозо-зависимый диуретический эффект Так, на фоне введения фитосредства в дозах 100 и 150 мг/кг диурез повышается соответственно на 28 и 18 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы При этом, диуретическая активность эксабола в указанных дозах превосходила таковую у препарата сравнения канефрона Учитывая, что наиболее высокую диурегическую активность эксабол проявлял в дозе 100 мг/кг, указанная доза была использована в качестве экспериментально-

терапевтической. Установлено, что увеличение диуреза под влиянием эк-сабола обусловлено повышением скорости клубочковой фильтрации на 50 % и увеличением скорости выведения ионов натрия и калия в среднем на 30 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы

Установлено, что эксабол обладает выраженной противовоспалительной активностью, оказывая влияние на основные стадии воспалительного процесса Так, его курсовое введение в дозе 100 мг/кг на фоне острого асептического воспаления сопровождалось уменьшением выраженности альтерации тканей и ускорением регенерации, о чем свидетельствует уменьшение площади кожно-мышечного дефекта на 2, 9 и 25 сутки соответственно на 45, 40 и 35 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы Наряду с этим, эксабол в дозе 100 мг/кг оказывает выраженное антиэкссудативное действие, уменьшая степень отека конечности при асептическом воспалении, вызванном введением формалина, декстрана и гистамина соответственно на 37, 44 и 62 % по сравнению с аналогичными показателями животных контрольных групп При этом антиэкссудативное действие эксабола превосходило таковое у препарата сравнения При изучении влияния эксабола на пролиферативные процессы при воспалении установлено, что испытуемый фитоэкстракт в дозе 100 мг/кг оказывает умеренное стимулирующее влияние на процессы развития гранулемы Установлено, что эксабол в высоких концентрациях обладает выраженной антибактериальной активностью по отношению к штаммам бактерий, наиболее часто вызывающим инфекционные заболевания органов мочевыделительного тракта По отношению к исследованным штаммам эксабол в концентрации 12,5 мг/мл проявляет бактерицидное действие, а в более низких концентрациях - бактериостатическое

При изучении анальгетической активности эксабола установлено, что его однократное введение в дозе 100 М1/кг сопровождается увеличением продолжительности латентного периода болевой реакции и уменьшением количества корчей соответственно на 72 и 32 % по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы Введение эксабола в указанной дозе при «дрожжевой лихорадке» способствует снижению ректальной температуры белых крыс до уровня физиологической нормы Жаропонижающая активность испытуемого средства была сопоставима по выраженности с эффектом натрия метамизола

При исследовании влияния испытуемого средства на состояние иммунной системы животных при азатиоприновой иммуносупрессии установлено, что испытуемый экстракт оказывает стимулирующее действие на показатели гумор&пыюго и клеточного звена иммунного ответа Так, при курсовом введении эксабола в дозе 100 мг/кг отмечалось достоверное

увеличение количества антителообразующих клеток, как в абсолютных значениях, так и в относительных в среднем в 2 раза по сравнению с данными животных контрольной группы Установлено также, что данное фитосредство повышает индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа в 1,4 раза, подавляет пролиферацию Т-лимфоцитов на 28 % и увеличивает пролиферацию В-лимфоцитов на 34 % по сравнению с данными в контрольной группе Полученные данные свидетельствуют, что эксабол уменьшает выраженность супрессивного действия азатиопри-на на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа При этом установлено, что введение эксабола интактным животным не оказывает существенного влияния на показатели иммунного статуса организма, что присуще лишь «истинным» иммуномодуляторам, обладающими активностью только в условиях повреждения системы иммунитета

Введение эксабола в дозе 100 мг/кг на фоне 24 часовой иммобилизации оказывает стресспротективное действие, препятствуя развитию ка-таболических изменений во внутренних органах животных, о чем свидетельствует менее выраженная инволюция тимуса и уменьшение количества язвенных повреждений слизистой оболочки желудка

При исследовании мембраностабилизирующего действия эксабола наблюдали, что под его влиянием степень перекисного гемолиза эритроцитов уменьшается в 3 раза по сравнению с контролем Поскольку известно, что реактив Фентона индуцирует перекисное окисление липидов, можно полагать, что мембранопротекторное действие фитосредства обусловлено его способностью ингибировать процессы свободнорадикально-го окисления

С использованием модельных систем показано, что ингибирова-ние процессов СРО под влиянием эксабола связано с наличием достаточно высокой общей антиоксидантной емкости ОАОЕ, выраженной антирадикальной и хелатирующей активности Эксабол в диапазоне доз 100 — 400 мкг/мл обладает восстанавливающей способностью, сопоставимой с таковой у аскорбиновой кислоты и танина, что свидетельствует о наличии высокой ОАОЕ, обусловленной веществами фенольной природы, содержащимися в фитосредстве Также показано, что данное фитосредство оказывает выраженное антирадикалыюе действие по отношению к радикалам дифенилпикрилгидразила и супероксидным анион-радикалам, а также обладает выраженной железосвязывающей активностью При этом, антирадикальная и хелатирующая активности эксабола были близки к таковой у классического антиоксиданта - ионола

Исследование фармакотерапевтнческой эффективности Исследования фармакотерапевтнческой эффективности эксабола проведено с использованием моделей почечной недостаточности токсиче-

ской, ишемической и аутоиммунной этиологии Введение водных растворов испытуемого экстракта осуществляли по соответствующим схемам внутрижелудочно 1 раз в день в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг В качестве препарата сравнения использовали канефрон в объеме 1,5 мл/кг

Результаты исследования фармакотерапевтической эффективности эксабола на фоне токсической (сулемовой) нефропатии представлены в таблице 2

Таблица 2

Влияние эксабола на функциональное состояние почек, показатели процессов ПОЛ и состояние антиоксидантной системы белых крыс на _фоне сулемовой нефропатии_

Группы животных

Показатели Контрольная (ишемия + Н20) Опытная 1 (ише-мия+эксабол) Опытная 2 (ишемия+ канефрон)

1 2 3 4

1 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,2±0,02 0,4±0,02* 0,5±0,03*

Белок в моче, г/л 1,5±0,10 0,6±0,03* 1,4±0,10

Креатинин в сыворотке крови, мкмоль/л 185,8±4,34 135,3±4,57* 173,2±2,79

Креатинин в моче, ммоль/л 0,9±0,02 2,4±0,06* 1,6±0,03*

МДА в гомогенате почки, нмоль/г ткани 3,3± 0,02 2,4 ±0,28 2,5±0,23

Диеновые коньюгаты, ед ОП 38,6±1,17 32,5±2,91 36,8±4,01

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 3,5±0,21 3,1±0,36 3,4±0,33

Каталаза, мкат/л 28,5±3,44 33,4±1,95 34,4±1,88

СОД, мкмоль/мл 22,4±1Д9 38,7±2,14" 25,1±2,36

Восст глутатион, ммоль/л 0,2±0,002 0,5±0,001* 0,4±0,01*

3 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,4±0,02 0,5±0,02* 0,5±0,01*

Белок в моче, г/л 1,3±0,10 0,8±0,03" 1,2±0,15

Креатинин в сыворотке крови, мкмоль/л 262,5±33,10 130,3±15,97* 136,6±2,64*

Креатинин в моче, ммоль/л 3,2±0,25 5,6±0,20* 3,1±0,10

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 2,7±0,28 1,2±0Д5" 1,4±0,12*

1 2 3 4

МДА в гомогенате почки, нмоль/г ткани 2,2±0,14 1,4±0,15* 1,4±0,15*

Диеновые коньюгаты, ед ОП 39 5±1 10 27,0*1,93* 33,9±3,14

Каталаза, мкат/т 21,3±1,72 46,7±2,80* 35,1±2,79*

СОД, мкмоп./чл 19,8±1,19 34,2±3,90* 33,8±2,30*

Восст глутатион, ммоль/л 0,2±0,01 0,3±0 02* 0,2±0,02

7 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,3±0,01 ОДЫ),03* 0,3±0,01

Белок в моче, г/л 1,5±0 02 0,5±0,04* 1,0±0,20*

Креатшшн в сыворотке крови, мкмоль/л 225,4± 10,15 115,3± 1,12* 117,2± 1,14*

Креатинин в моче, ммоль/т 3,2± 0,13 6,4±0 55* 6,1± 0,55*

МДА в сыворотке крови, МКМ01Ь/МЛ 1,2 ±0,16 1,0±0,12 1,0 ±0,02

МДА в гомогенате почки, нмоть/г ткани 4,4±0,42 2,0±0,17* 4,0± 0,45

Диеновые коньюгаты, ед ОП 26 7± 2,00 16,8±1,30* 15,5±1,51*

Каталаза, мкат/л 8,6±0,61 12,4 ±0,15* 14,9 ± 1,14

СОД, мкмоль/мл 3,2±1,29 5,7±1,00* 4 6±0,248

Восст глутатион, ммоль/л 0,2±0,01 1 7±0,П* 1,1±0,19*

Как следует из данных, приведенных в таблице 3. введение экса-бола на фоне сулемовой иефропатии уже через 1 сутки наблюдения оказывало выраженное гипоазотемическое действие, о чем свидетельствует снижение концентрации креатинина в сыворотке и повышение его в моче соответственно на 41 и 47 % по сравнению с данными у животных контрольной группы

На 3 и 6 сутки наблюдения введение эксабола способствовало дальнейшему снижению концентрации креатинина в сыворотке, что свидетельствует о более активном купировании гиперазотемического синдрома Также на фоне введения эксабола отмечалось достоверное повышение СКФ и диуреза, с нормализацией этих показателей на 7 сутки опыта Курсовое введение животным эксабола на фоне сулемовой нефропатии оказывало выраженное антиокслдантное действие, на что указывает достоверное снижение концентрации МДА и диеновых конъюгатов в сыворотке крови, а также МДА в гомогенате почек животных опытной группы по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы во все сроки наблюдения Под влиянием испытуемого средства наблюдали достоверное повышение активности супероксиддисмутазы и каталазы, а

также концентрацию восстановленного глутатиона в крови животных опытной группы на 3 и 7 сутки исследования При этом нефрозащитная и антиоксидантная активности эксабола значительно превосходила таковую у препарата сравнения - канефрона

Данные патоморфологического исследования почек животных, проведенные на 1, 3 и 6 сутки наблюдения, позволили заключить, что эксабол способствует сохранности базалыюй мембраны, являющейся каркасом для пролиферирующего эпителия, а также клеток канальцев, ускорению элиминации некротических масс из просвета канальцев, что способствовало восстановлению пассажа мочи На фоне введения испытуемого фитосред-ства отмечалась более высокая степень регенерации нефронов, о чем свидетельствовало достоверное повышение числа митозов в клетках нефронов животных опытной группы

В таблице 3 представлены результаты исследования влияния эксабола на течение постишемической нефропатии

Таблица 3

Влияние эксабола на функциональное состояние почек, показатели процессов ПОЛ и состояние антиоксидантной системы белых крыс на фо-

не постишемической нефропатии

Показатели Группы животных

Контрольная (ишемия + Н20) Опытная 1 (ишемия +эксабол) Опытная 2 (ишемия +канефрон)

1 2 3 4

1 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,2±0,02 0,4±0,02* 0,5±0,03*

Белок в моче, г/л 1,5±0,10 0,6±0,03* 1,4±0,10

Креатинин в крови, мкмоль/л 185,8±4,34 135,3±4,57* 173,2±2,79

Креатинин в моче, ммоль/л 0,9±0,02 2,4±0,06* 1,6±0,03*

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 3,7±0,21 3,1±0,36 3,4±0,33

МДА в гомогенате почки, нмоль/г 3,3± 0,02 2,4 ±0,28* 2,5±0,23*

Диеновые коньюгаты, ед ОП 38,7±1,17 32,5±2,91 36,1±4,01

Каталаза, мкат/л 28,6±3,44 33,4±1,95 34,45±1,88

СОД, мкмоль/мл 22,4± 1.19 38,8±2,14* 25,1±2,36

Восст глутатион, ммоль/л 0,2±0,002 0,5±0,00Г 0,4±0,01*

1 2 3 | 4

3 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,4±0,02 0,5+0,02* 0,5+0,01*

Белок в моче, г/л 1,3±0,Ю 0,8±0,03* 1,1±0,15

Креатинин в крови, мкмоль/л 262,5±33,10 130,3+15,97* 136,6±2,64*

Креатинин в моче, ммоль/л 3,2+0,25 5,6±0,20* 3,6±0,10

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 2,7+0,28 1,2+0,15* 1,4±0,12*

МДА в гомогенате почки, нмоль/г 2,2±0,14 1,4+0,15* 1,4±0,15*

Диеновые коньюгаты, ед ОП 39,5±1,10 27,0+1,93* 33,9±3,14

Каталаза, мкат/л 21,3±1,72 46,6+2,80* 35,1±2,79*

СОД, мкмоль/мл 19,8±1,19 34,2+3,90* 13,8±2,30*

Восст глутатион, ммоль/л 0,2±0,01 0,3+0,02* 0,3±0,02*

7 сутки

Диурез, мл/100 г час 0,3+0,01 0,4±0,03* 0,3±0,01

Белок в моче, г/л 1,5±0,02 0,5+0,04* 1,1±0,20

Креатинин в крови, мкмоль/л 225,4± 10,15 115,3± 1,12* 117,2± 1,14*

Креатинин в моче, ммоль/л 3,2+ 0,13 6,4±0,55* 6,2± 0,55*

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 1,2±0,16 1,0±0,12 1,1 ±0,02

МДА в гомогенате почки, нмоль/г 4,4±0,42 2,0+0,17* 4,0± 0,45

Диеновые коньюгаты, ед ОП 26,7± 2,00 16,7+1,30* 15,5±1,51*

Каталаза, мкат/л 8,6±0,61 10,4 ±0,15 10,9+1,14

СОД, мкмоль/мл 3,2±1,29 2,8+1,00 1,7±0,25

Восст глутатион, ммоль/л 0,2+ 0,01 1,7+0,11* 1,1+0,19*

Как следует из данных, приведенных в таблице 3, при курсовом введении эксабола на фоне постишемической острой почечной недостаточности во все сроки исследования отмечалось достоверное снижение содер-

жание креатинина в сыворотке крови и его повышение в моче Наряду с этим, в моче крыс опытной группы достоверно снижалось количество бедка Также отмечено увеличение диуреза соответственно срокам наблюдения в 1,8 раза, на 28 и 40 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы Установлено, что курсовое введение эксабола на фоне постишемической нефропатии сопровождалось снижением содержания продуктов ПОЛ в тканях, повышением активности антиокислительных ферментов и увеличением концентрации восстановленного глутатиона в крови

При изучении влияния эксабола на индуцированный апоптоз установлено, что его курсовое введение на фоне ишемии/реперфузии почек сопровождалось снижением активности каспазы-3 до значений сопоставимых с показателями, полученными при использовании специфического ингибитора этого фермента Полученные данные свидетельствуют, что эксабол является средством, предупреждающим индуцированный апоптоз клеток при ишемических повреждениях почек

В таблице 4 представлены результаты исследования фармакоте-рапевтической эффективности эксабола при курсовом введении в дозе 100 мг/кг при хроническом аутоиммунном гломерулонефрите у белых крыс

Таблица 4

Влияние эксабола на показатели функционального состояния

почек у белых крыс в острую фазу аутоиммунного гломерулонефрита

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (гломеруло-нефрит+Н20) Опытная (гломеруло- нефрит +эксабол)

1 2 3 4

Креатинин, мкмоль/ мл 72,1 ±4,91 94,2+6,04 84,6±5,47

Мочевина, ммоль/мл 5,5 ±0,42 11,1 ±0,63 6,9±0,48*

СКФ, мл/час 100 г 2,7±0,08 0,4±0,03 1,2±0,09*

ТГ, ммоль/л 0,5+0,04 2,0±0,09 J 1,5±0,14

ЛПНП, ммоль/л 1.1 ±0,06 1,2±0,11 0,6±0,03*

ЛПОНП, ммоль/л 0,2±0,01 0,48±0,04 0,29+0,02*

ЛПВП, ммоль/л 1,1 ±0,03 0.6+0,03 0,8+0 03*

Коэфф атерогенности 1,2 4,2 2,3

1 2 3 4

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 1,1±0,04 5,3±0,20 1,7±0,01*

МДА в гомогенате почки, нмоль/г 2,1±0,02 4,2±0,1б 3,1+0,01*

Катал аз а, м кат/л 20,6±0,6 1б,4±0,6 20,2±0,71*

Восст глутатион, ммоль/л 0,8+0,03 0,3±0,02 0,50±0,01

Как следует из данных, приведенных в таблице 4, курсовое введение эксабола оказывало выраженное нефропротекторное влияние, о чем свидетельствует снижение концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови животных опытной группы в острую фазу патологического процесса на 10 и 37 % соответственно по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе Под влиянием испытуемого средства отмечалось также повышение диуреза, нормализация липидного состава крови, о чем свидетельствует достоверное снижение содержания ТГ, ЛПНП и ЛПОНП, повышение концентрации ЛПВП в сыворотке крови крыс опытной группы В результате нормализации липидного состава коэффициент атерогенности у животных, получавших эксабол был на 43 % ниже, чем в контрольной группе Курсовое введение эксабола оказывало также антиоксидантное действие, на что указывает достоверное снижение концентрации МДА в сыворотке крови и гомогенате почек у животных опытной группы соответственно в 3 и 1,5 раза по сравнению с контролем Одновременно с этим, в крови животных опытной группы в 3 раза повышалась активность каталазы, а содержание восстановленного глутатиона увеличивалось на 40 % по сравнению с показателями в контрольной группе

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что эксабол в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг, обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при нефропатиях токсической, ишемической и аутоиммунной этиологии способствуя восстановлению морфо-функциональной состоятельности почек животных на более ранних сроках патологического процесса При этом фармакотерапевтическая эффективность эксабола была сопоставима с таковой у препарата сравнения канефрона, а по ряду параметров превосходила ее Установлено, что испытуемое средство оказывает протекторное действие как на клубочковый, так и тубулярный аппарат нефроронов В частности, превентивно-курсовое введение испытуемого фктоэкстракта на фоне повреждений почек сопровождалось повышением диуретической

функции почек, что обусловлено улучшением внутрипочечной гемодинамики, о чем свидетельствует повышение скорости клубочковой фильтрации, а также увеличением скорости выведения ионов натрия и калия с мочой Под влиянием эксабола отмечалось повышение депурационной функции почек, на что указывает уменьшение выраженности гиперазотемии и увеличение экскреции азотистых метаболитов при нефропатиях различного генеза Установлено также, что эксабол обладает антипротеи-нурическим действием, что представляет собой одно из составляющих его ренопротективного действия, поскольку известно, что протеинурия ассоциирована с повреждениями, как базальной мембраны клубочков, так и канальцевого аппарата нефронов (Яоёгщиег-КигЬе, 2001, Фетисова и др, 2004) Вследствие этого, превентивно-курсовое введение эксабола на фоне нефропатий различной этиологии ограничивало выраженность структурных повреждений почек, способствовало ранней инволюции патологических изменений, ускорению регенерации клеток поврежденных нефронов и тем самым восстановлению функциональной состоятельности почек животных на более ранних сроках патологического процесса

Очевидно, что наиболее важным звеном нефропротекторного действия эксабола является наличие выраженной противовоспалительной активности, т к практически все заболевания почек (неиммунного и иммунного характера) сопровождаются выраженным воспалительным компонентом (Тареева, 2000) При этом эксабол оказывает позитивное влияние на все основные стадии воспалительной реакции В частности, под влиянием испытуемого фитоэкстракта снижалась экссудация, что было показано нами на моделях формалинового, декстранового и гистаминово-го отека Также использование эксабола уменьшало выраженность альтерации и ускоряло регенерацию поврежденных тканей Особо важно последнее свойство испытуемого фитоэкстракта, поскольку в условиях альтерации почек оно способствует ускорению репарации поврежденных мембран клеток нефронов и восстановлению их структурной и функциональной целостности

Наряду с этим, в реализации нефропротекторного действия эксабола немаловажное значение имеет наличие значительного иммуномо-дулирующего потенциала, связанного с благоприятным воздействием на различные звенья как клеточного, так и гуморального иммунитета При этом показано, что испытуемое средство относится к т н истинным имму-номодуляторам, поскольку его иммуностимулирующее действие проявляется только в условиях снижения иммунного статуса организма (Хаитов, Пинегин, 2006) Очевидно, что нормализация показателей иммунного ответа организма под влиянием эксабола при нефропатиях различного генеза сопровождается повышением активности клеточного звена и угнетением

факторов аутоиммунной перестройки организма, сопровождающих заболевания почек

Выявленные нами стресспротективные свойства эксабола свидетельствуют, что нефрозащитное действие эксабола связано также с его способностью повышать неспецифическую резистентность организма В частности, показано, что введение эксабола на фоне иммобилизационного стресса уменьшало выраженность «триады Селье» инволюцию иммуно-компетентных органов, гипертрофию надпочечников и развитие деструктивных поражений в слизистой оболочке желудка

Полученные нами данные о том, что курсовое введение эксабола на фоне ишемии почек, сопровождающейся индуцированным апоптозом, способствовало ингибированию одного из ключевых ферментов апопто-тического процесса -каспазы 3, свидетельствуют, что механизмы нефро-зашитного действия испытуемого средства связаны с его способностью предупреждать ранний апоптоз клеток

Установлено, что молекулярно-клеточный механизм нефропротек-торного действия эксабола обусловлен его способностью ингибировать процессы свободнорадикального окисления, и тем самым стабилизировать мембранные структуры клеток нефонов, поскольку известно, что заболевания почек различной этиологии сопровождаются развитием оксидатив-ного стресса (Зенков и соавт, 2001, Николаев и соавт, 2001), а в патогенезе ишемических повреждений почек индукция свободнорадикальных процессов является триггерным звеном патологического процесса (Биленко, 1989) При этом, что эксабол оказывает как прямое антиоксидантное действие, ингибируя процессы свободнорадикального окисления, так и опосредованное, связанное с повышением мощности эндогенной антиокси-дантной системы животных В частности, его курсовое введение при повреждениях почек сопровождалось снижением в тканях концентрации продуктов пероксидации (МДА и диеновых коныогатов), повышением активности ферментативного звена антиоксидантной системы (суперок-сиддисмутазы и каталазы) и повышением содержания восстановленного глутатиона, играющих важную роль в инактивации и утилизации гидропе-роксидов полиненасыщенных жирных кислот, перекиси водорода и других продуктов свободнорадикальных процессов При этом установлено, что механизм антиоксидантного действия эксабола связан с наличием выраженных антирадикальных и хелатирующих свойств, сопоставимых с таковыми у классического антиоксиданта - ионола Так в серии экспериментов m vitro установлено, что испытуемое средство оказывает антирадикальное действие по отношению к супероксидному анион-радикалу и гидрокисль-ным радикалам, а также обладает выраженной железосвязывающей активностью Очевидно, что указанные эффекты эксабола обусловлены вещест-

вами фенольной природы, содержащимися в фитоэкстракте и обусловливающих его высокую антиоксидантную емкость и восстанавливающую способность, сопоставимые с таковыми у эталонных веществ — танина и аскорбиновой кислоты

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что эксабол обладает широким спектром фармакологических свойств диуретическим, гипоазотемическим, противовоспалительным, анальгети-ческим, иммуномодулирующим, антибактериальным, стресспротектив-ным, мембраностабилизирующим и антиоксидантным

Исследование фармакотерапевтической эффективности эксабола показало, что его курсовое введение в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг, при нефропатиях токсической, ишемиче-ской и аутоиммунной этиологии оказывало выраженное нефропротектор-ное влияние, характеризующееся нормализацией функционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса В частности, на фоне введения испытуемого фитоэкстракта повышался диурез, увеличивалась скорость клубочковой фильтрации, снижались азотемия и протеинурия, также происходило уменьшение выраженности деструктивных изменений в нефронах

Установлено, что наиболее важным аспектом в механизме нефро-протекторного действия эксабола является наличие базисной мембрано-стабилизирующей активности, реализация которой связана с антиоксидантным действием комплекса фенольных соединений В свою очередь, механизм антиоксидантной активности эксабола обусловлен как прямым радикалперехватывающим действием полифенольных соединений, так и опосредованным, связанным с активацией системы антиоксидантной зашиты организма Установлено также, что одним из возможных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование ферментов, индуцирующих апоптотический процесс

Полученные данные о выраженной нефропротекторной активности эксабола аргументируют целесообразность его применения в комплексной фармакотерапии нефропатий различной этиологии, а также для профилактики рецидивов заболеваний почек

выводы

1 Эксабол обладает широким спектром фармакологических свойств диуретическим, гипоазотемическим, противовоспалительным, анальгетическим, иммуномодулирующим, антибактериальным, стресспро-тективным, мембраностабилширующим и антиоксидантным

2 Курсовое введение эксабола в дозе 100 мг/кг на фоне повреждений почек токсической, ишемической и иммунной этиологии сопровождается нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса

3 Одним из базисных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной антиоксидантной системы организма благодаря наличию комплекса биологически активных веществ фенольной природы

Внедрение полученных данных в практику

1 Отчет по доклиническим испытаниям эксабола направлен в Фармакологический комитет МЗ и СР РФ для рассмотрения вопроса о разрешении его применения в клинической практике

2 Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Федерального агентства по образованию и социальному развитию.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Попова Н А , Михайлова Е А , Мондодоев А Г Диуретическая активность сухого экстракта сабельника болотного и его фракций //Материалы 4-ой региональной межвузовской конференции «Медицина завтрашнего дня» -Чита, 2005 - С 151

2 Попова Н А , Михайлова Е А , Бикмулина Г А , Мондодоев А Г, Бидо-гаев Ю А Фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта сабельника болотного и нефрофита при экспериментальном гломерулонеф-рите //Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» - Улан-Удэ, 2006 — Т 2 - С 87-88

3 Попова Н А, Бикмулина Г А , Михайлова Е А , Петунова А Н Фармакотерапевтическая эффективность эксабола при сулемовом некронефрозе у белых крыс //Материалы научно- практической конференции, посвящен-

ной 75-летию со дня рождения д м н Базарона Э Г - Улан-Удэ, 2006 — С 61-63.

4 Попова Н А , Бикмулина Г А , Михайлова Е А , Мондодоев А Г Анги-оксидантное действие эксабола при экспериментальной нефропатии у белых крыс //Там же -Улан-Удэ, 2006 - С 63-64

5 Попова Н А , Михайлова Е А , Унагаева А А , Мондодоев А Г, Шанта-нова Л Н Фармакологическая активность нового лекарственного средства растительного происхождения //Сборник научных трудов ВСГТУ Серия Химия и биологическая эффективность природных соединений — Улан-Удэ, 2006 -Вып 10 -С 113-120

6 Ажунова Т А , Чехирова Г В , Николаев С М , Разуваева Я Г , Лоншако-ва К С , Лемза С В , Гармаева М Л , Михайлова Е А, Попова Н А Фарма-котерапевтическая эффективность нового растительного средства при гепато-ренальном синдроме // Вестник Бурятского государственного Университета Серия «Медицина» - Вып 6 - Улан-Удэ, 2006 -С 178-184

7 Лемза С В , Михайлова Е А, Попова Н А , Гармаева М Л , Унагаева А А, Ажунова Т А , Мондодоев А Г Влияние нового растительного средства на активность каспазы-3 при остром токсическом поражении клеток печени // Вестник Бурятского государственного университета Серия «Медицина» -Вып 6 - Улан-Удэ, 2006 - С 128-131

Подписано в печать 21 09.2007. Формат 60x84 1/16. Усл.пл 1,39. Тираж 100 экз

Издательство ВСГТУ 670013. г Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40, в.

О ВСГТУ, 2007 г

Актуальность темы. Актуальность поиска путей повышения эффективности фармакотерапии заболеваний почек определяется их широкой распространенностью и наблюдающейся тенденцией к росту нефрологической патологии в общей структуре заболеваемости. По статистическим данным за

1995- 2005 г.г. в России количество больных с заболеваниями органов моче-выделительной системы увеличилось почти вдвое (Здоровье населения .,

1996-2005). В некоторых странах заболеваемость хроническими формами нефропатий приобрела эпидемиоподобный характер, что определяет высокую медико-социальную значимость данной проблемы (Шило, 2004). При этом, с каждым годом растет число больных с тяжелыми формами нефропатий, нуждающихся в таких дорогостоящих мероприятиях как гемодиализ и трансплантация почек. По данным литературы известно, что в европейских странах и США расходы на проведение гемодиализа составляют до 2 % от общего бюджета системы здравоохранения (Collins et al., 2000).

Помимо широкой распространенности нозологических форм заболеваний почек, поражения их встречаются при многих патологических состояниях: интоксикациях, заболеваниях печени, сахарном диабете, коллагенозах и других системных заболеваниях (Ермоленко, 2000; Бурневич и др., 2002; Parving, 2000). Особую тревогу вызывает тот факт, что в последнее время все чаще встречаются случаи лекарственной нефропатии (Астахова, 2000; Тарее-ва, 1998; 2000). К числу лекарственных препаратов, оказывающих нефроток-сическое действие, относятся антибиотики, нестероидные противовоспалительные средства, рентгеноконтрастные вещества, туберкулостатики, цито-статики и др. (Тареева и соавт., 2000; Полонский, 2001).

При этом, несмотря на использование современных методов лечения, заболевания почек в 1,5 % случаев приводят к развитию острой почечной недостаточности, при которой летальность достигает 40 — 50 % (Милованов, Николаев, 1998; Шишкин, 2005) .

Фармакотерапия и фармакопрофилактика заболеваний почек требует осторожного подхода ввиду снижения функциональной состоятельности почек при их повреждениях, и сама медикаментозная терапия может явиться причиной развития рецидивов заболевания. В этой связи основным требованием к нефропротекторным средствам является отсутствие токсичности и нежелательных побочных явлений при их применении.

Учитывая широкое распространение заболеваний почек, их прогрессирующее течение, приводящее к развитию почечной недостаточности, тяжелый медико-социальный прогноз, недостаточное количество нефропротек-торных препаратов, актуальной задачей остается разработка и внедрение новых эффективных и безвредных лекарственных средств, предназначенных для профилактики и лечения заболеваний почек.

В народной медицине для лечения заболеваний почек используются га-леновые препараты из сабельника болотного (Comarum palustre L.). Растение широко распространено в тундровой и лесной зонах Евразии и Северной Америки, что обеспечивает его достаточную сырьевую базу. Нами, совместно с сотрудниками ВИЛАР был разработан способ получения- сухого экстракта из корней и корневищ сабельника болотного, условно названный «эк-сабол».

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности эксабола при повреждениях почек различной этиологии, а также выявление возможных механизмов его нефропротекторного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить основные фармакологические свойства сухого экстракта сабельника болотного;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность эксабола при неф-ропатиях различной этиологии;

- выявить возможный механизм нефропротекторного действия эксабола.

Научная новизна. Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности нового растительного средства - сухого экстракта сабельника болотного эксабола. Установлено, что эксабол обладает широким спектром фармакологических свойств: диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, антибактериальной, анальгетической, иммуномодулирую-щей, стресспротективной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной. Показано, что курсовое введение эксабола в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг, оказывает выраженное фар-макотерапевтическое влияние при> нефропатиях ишемической, токсической и иммунной этиологии, способствуя нормализации морфофункционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса. Одним из ведущих молекулярно-клеточных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование процессов,свободнорадикального окисления (СРО), обусловленное высоким содержанием-веществ фенольной природы. Механизм антиоксидантной активности указанного средства обусловлен как прямым антирадикальным, так и опосредованным хелатирую-щим действием, а также связан с его способностью повышать мощность эндогенной антиоксидантной системы организма. Наряду с этим, установлено также, что одним из возможных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование активности одного из основных ферментов апоптотического процесса - каспазы 3.

Практическое значение. На основании проведенных экспериментальных исследований общей и специфической фармакологической активности, фармакотерапевтической эффективности и безопасности эксабола представлен в ФК МЗ и СР РФ отчет по его доклиническим испытаниям. Полученные данные о выраженной нефропротекторной активности сухого экстракта сабельника болотного аргументируют целесообразность его применения в комплексной фармакотерапии и профилактике заболеваний почек.

Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Федерального агентства по образованию и социальному развитию.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация» на 2003-2006 г.г., утвержденной Президиумом СО РАН. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Эксабол в экспериментально-терапевической дозе, составляющей 100 мг/кг, обладает диуретическим, гипоазотемическим, противовоспалительным, антибактериальным, анальгетическим, иммуномодулирующим, стресс-протективным, мембраностабилизирующим и антиоксидантным свойствами.

2. Курсовое введение эксабола животным на фоне повреждений почек ише-мической, токсической и иммунной этиологии сопровождается нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса.

3. Одним из базисных механизмов нефропротекторного действия указанного средства является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной антиоксидантной защиты организма благодаря наличию комплекса биологически активных веществ фенольной природы.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

- научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.б.н. Фролова Д. Ш. (Улан-Удэ, 2005);

- конференции молодых ученых ИОЭБ СО РАН, посвященной Дню науки (Улан-Удэ, 2006);

- научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.м.н. Базарона Э.Г. (Улан-Удэ, 2006);

- Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, из них 2 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

ВЫВОДЫ

1. Эксабол обладает широким спектром фармакологических свойств: диуретическим, гипоазотемическим, противовоспалительным, анальгетиче-ским, иммуномодулирующим, антибактериальным, стресспротективным, мембраностабилизирующим и антиоксидантным.

2. Курсовое введение эксабола в дозе 100 мг/кг на фоне повреждений почек токсической, ишемической и иммунной этиологии сопровождается нормализацией морфофункционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса.

3. Одним из базисных механизмов нефропротекторного действия эксабола является ингибирование процессов свободнорадикального окисления и активация эндогенной антиоксидантной системы организма благодаря наличию комплекса биологически активных веществ фенольной природы.

Внедрение полученных данных в практику

1. Отчет по доклиническим испытаниям эксабола направлен в Фармакологический комитет МЗ и СР РФ для рассмотрения вопроса о разрешении его применения в клинической практике.

2. Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Федерального агентства по образованию и социальному развитию.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что эк-сабол обладает широким спектром фармакологических свойств: диуретическим, гипоазотемическим, противовоспалительным, анальгетическим, им-муномодулирующим, антибактериальным, стресспротективным, мембрано-стабилизирующим и антиоксидантным.

Исследование фармакотерапевтической эффективности эксабола показало, что его курсовое введение в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 100 мг/кг, при нефропатиях токсической, ишемической и аутоиммунной этиологии оказывало выраженное нефропротекторное влияние, характеризующееся нормализацией функционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса. В частности, на фоне введения испытуемого фитоэкстракта повышался диурез, увеличивалась скорость клу-бочковой фильтрации, снижались азотемия и протеинурия; также происходило уменьшение выраженности деструктивных изменений в нефронах.

Установлено, что наиболее важным аспектом в механизме нефропро-текторного действия эксабола является наличие базисной мембраностабили-зирующей активности, реализация которой связана с антиоксидантным действием комплекса фенольных соединений. В свою очередь, механизм антиок-сидантной активности эксабола обусловлен как прямым радикалперехваты-вающим действием полифенольных соединений, так и опосредованным, связанным с активацией системы антиоксидантной защиты организма. Установлено также, что одним из возможных механизмов иефропротекторного действия эксабола является ингибирование ферментов, индуцирующих апопто-тический процесс.

Полученные данные о выраженной нефропротекторной активности эксабола аргументируют целесообразность его применения в комплексной фармакотерапии нефропатий различной этиологии, а также для профилактики рецидивов заболеваний почек.