Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение травы сабельника болотного

Па правах рукописи

МАЛКЖ ЕКАТЕРИНА ВАЛЕРЬЕВНА

ФАРМ АКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ САБЕЛЬНИКА

БОЛОТНОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

003058886

На правах рукописи

МАЛЮК ЕКАТЕРИНА ВАЛЕРЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ САБЕЛЬНИКА

БОЛОТНОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

доктор фармацевтических наук, профессор - Денисенко Олег Николаевич

доктор фармацевтических наук,

профессор — Муравьева Дарья Алексеевна

кандидат фармацевтических наук — Челова Лариса Владимировна

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Пермская государственная фармацевтическая академия Росздрава

Защита состоится ц< 9 г> оС1ЛсЯ._2007 года в -У_часов на заседании

Диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава

Автореферат разослан «-■/р¡¿Л 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

Е В Компанцева

Общая характеристика работы Актуальность проблемы

Одной из важных проблем современной медицины является лечение заболеваний опорно-двигательной системы Современный арсенал лекарственных средств, рекомендуемых для лечения этих заболеваний, включает в основном синтетические органические вещества Однако, их использование вызывает ряд негативных явлений, в том числе, вредное воздействие на желудочно-кишечный тракт, а одновременное использование нескольких противовоспалительных нестероидных препаратов повышает риск сердечных заболеваний в 6 раз Это следует принимать во внимание. учитывая тот фаст, что заболевании опорно-двигательной системы наблюдаются у людей в зрелом и пожилом возрасте, а применение противовоспалительных препаратов является длительным или постоянным

В то же время, в ряде случаев при заболеваниях суставов могут оказаться эффективными растительные препараты В частности, известно, что в народной медицине для лечения этих заболевагаШ применяется сабельник болотный Преимуществом использования растительных препаратов является отсутствие серьезных побочных явлений, что позволяет применять их длительное время

Однако, широкое использование сабельника болотного сдерживается тем, что недостаточно данных по ф ар м а к о гн о с т иче с к о му изучению и фармакологическому подтверждению эффективности лекарственных препаратов из него В частности, нет данных по содержанию основных групп биологически активных соединений, не изучены товароведческие показатели сырья, не исследована противовоспалительная активность лекарственных препаратов сабельника

Поэтому фармакогностическое исследование травы сабельника болотного является актуальной темой для фармацевтической науки и практики Цель работы

Целью настоящих исследований являлось фармакогностическое изучение травы сабельника болотного, разработка технологии и нормативной документации на сырье и сабельника болотного экстракт жидкий (11)

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

1 Провести качественный анализ и количественное определение основных групп биологически активных соединений травы сабельника болотного (БАС)

2 Выделить и идентифицировать индивидуальные соединения, содержащиеся в траве сабельника болотного и определяющие его биологическую активность

3 Установить основные морфолого-анатомические признаки и товароведческие показатели сырья

4 Разработать проект фармакопейной статьи на сырье (траву) сабельника болотного

5 Разработать технологию сабельника болотного экстракта жидкого (1 1) и метода его стандартизации

6 Изучить противовоспалительную активность сабельника болотного экстракта жидкого (1 1)

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорской ГФА» Росздрава (№ госрегистрации 01 200 213550)

Научная новизна

Впервые установлен компонентный состав полифенольного комплекса травы сабельника болотного методом ВЭЖХ С помощью этого метода выделено и идентифицировано 15 компонентов, 9 из которых выделены из исследуемого вида впервые флавоноиды — гесперидин, лютеолин-7-гликозид, робинин, виценин, дигидро-кверцетин, гиперозид, оксикоричные кислоты — цикоревая, кофейная, кумарин — умбеллиферон Преобладающими компонентами являются апигенин, дигидроквер-цетин, робинин и рутин

Установлено, что тритерпеновые сапонины травы сабельника болотного представлены 4 гликозидами, агликоном которых является олеаноловая кислота, присут-

ствующая также в растении в свободной форме

Впервые проведена количественная оценка содержания в траве сабельника болотного фенолкарбоновых кислот, тритерпеновых сапонинов, кумаринов, аминокислот, макро- и микроэлементов Изучен моносахаридный состав полисахаридов травы сабельника болотного

Разработаны оптимальные условия выполнения количественного определения основных групп биологически активных веществ в сырье (траве) сабельника болотного Проведена валидация предлагаемых методик качественного и количественного анализа сырья по показателям «специфичность», «линейность», «правильность», «предел обнаружения», «отсутствие систематической ошибки»

Определена острая токсичность и установлена специфическая фармакологическая активность сабельника бологаого экстракта жидкого (1 1) подтвердившая его противовоспалительное действие

Практическая значимость результатов исследования

Установлены характерные диагностические признаки сырья (травы) сабельника болотного

Проведена стандартизация травы сабельника болотного с учетом современных требований, предъявляемых к качеству лекарственного растительного сырья

Впервые разработана технологическая схема получения сабельника болотного экстракта жидкого (1 1)

Обоснована целесообразность применения травы сабельника болотного для получения сабельника болотного экстракта жидкого (1 1) и дальнейшего его изучения с целью внедрения в медицинскую практику в качестве противовоспалительного средства

Внедрение результатов исследования

Проект ФС «Сабельника болотного трава - Coman palustns herba» принят на экспертизу в Институт стандартизации Научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (письмо №5273 от 27 12 06) для рассмотрения

Получены акты апробации технологии и методов анализа сабельника болотн го экстракта жидкого на базе экспериментального участка фитоцеха ФГУП «Пят горская фармацевтическая фабрика» от 29 05 2006 г Положения, выдвигаемые па защиту

1 Результаты изучения химического состава травы сабельника болотного методам ТСХ, ВЭЖХ, БХ и препаративной хроматографии

2 Данные качественного и количественного анализа основных групп биологическ активных соединений сырья (травы) сабельника болотного

3 Выявленные характерные морфолого-анаюмические диагностические признак сырья (травы) сабельника болотного

4 Основные положения стандартизации сырья (травы) сабельника болотного, са бельника болотного экстракта жидкого (1 1) и нзешйки «Сабельник Эвалар»

5 Результаты изучения фармакологической активности сабельника болотного экс тракта жидкого (11)

Апробання работы и публикации

Основные положения диссертационной работы апробированы на межрегио нальной конференции по фармации и фармакологии (г Пятигорск, 2003, 2004, 2005 2006 гг )

Объем и ет руктура диссертации

Работа изложена на 157 страницах машинописного текста, содержит 45 таб лиц, 27 рисунков и 20 расчетных формул Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 150 источников, в том числе 11 иностранных и приложения

Основное содержание работы

Объектом исследования явился Comarum palustre L. семейства Rosaceae Сырье (трава) собрано в августе 2002 г ЧП «Забродин» в окрестностях с Красногорск и в сентябре 2005 г в окрестностях г Бийск, Алтайского края (Б), в Бакчарском районе на верховом болоте Томской области (Бч), окрестностях г Томска (Т), селе Алтайском, Алтайский район, Алтайский ¡фай (А) в фазу полного цветения

6

2 Биологически активная добавка - настойка «Сабельник Эвалар», на 20% спирте этиловом, предоставленная компанией «Эвалар»

Изучение биологически активных соединений травы сабельника болотного

В результате фитохимического исследования в траве сабельника болотного были обнаружены флавоноиды, оксикоричные кислоты, тритерпеновые сапонины, кумарины, каротиноиды, полисахариды и органические кислоты

С целью идентификации индивидуальных веществ были изучены отдельные фракции БА.В хроматографическими методами Так с помощью хроматографии на бумаге 1пНгаск Ь'М-11, производства Германии в системах БУВ (4 1 2), кислота уксусная (15% и 2%) и в тонком слое сорбента на готовых пластинках «5пгЬй1» ПТСХ-П-А-УФ размером 10х15в системах БУВ (4 1 2), хлороформ - спирт метиловый (8 2) в этилацетатной и эфирной фракциях обнаружили три зоны адсорбции, соответствующие агликонам флавоноидов кверцетину СбЗ, кемпферолу С62 и апиге-пину С51, к еще четыре зоны, соошыивующие флавоноидному гликозиду рутину и океикпричным ьислотам феруловои, кофейной и хлорогеновой

Таблица 1 - Хроматографические и спектральные характеристики выделенных веществ __

Исследуе- Значение ЯГ Проявители ^•тах

мый объект Б\, система БУВ (4 12) | ТСХ система хлороформ-| кислота ук-I сушая (5 2) ' УФ свет 2 ■о о Е о 1 5 в + » ы П X О о X о о о г. с: п X п Ш О о С - г в + > п + Ж п

С61 0 900,92 0 68-0,72 кор ж-зел 253 пл, 266,294 274,303 387 267 297пл 320пл 372 256,260, 303,348, 422

С62 0 71- 0 56-0,6 ж-чел ж 255,269 257 пл 372, 265,

— 0,74 пл, 301 274, ЗОЗпл, 301пл,

г пл, 370 329,390 388 3*59,428

X й СбЗ 0 77- 0 43-0,45 ж ж 267,296 274, 268,302 276,299,

в 0,79 пл,336 301,376 пл 338 340,381

Апнгештн 091- 0 68-0,70 кор ж-зел 253 пл , 274,303 267,297пл 256, 260,

0 92 266,294 387 320пл 372 303,348, 422

Кемпферол 0 70- 0 56-0,6 ж-зел ж 255,269 257 т 372, 265,

0,74 пл, 301 пл , 370 274, 329,390 ЗОЗпл, 388 301 пл 359,428

Кверцетин 0 77- 0 43-0,45 ж ж 267,296 274, 268,302 276,299,

0,79 пл, 336 301,376 пл 338 340,381

Зоны адсорбции, соответствующие агликонам флавоноидов, аккуратно спим ли с пластинки Слой силикагеля, соответствующий веществам С61, С62 и Сб элюировали спиртом этиловым и подвергали повторному разделению в систем бензол - этилацетат (2 1), операцию повторяли до получения достаточного колич ства исследуемых веществ Далее изучали УФ-спектры выделенных соединений истинных образцов «свидетелей» (таб 1)

Соответствие УФ-спектров веществ, выделенных из травы сабельника болот ного спектрам образцов «свидетелей^, подтвердило их идентичность

В хлороформной фракции после омыления методом ТСХ в системах бензол ацетон (9 1), бензол - этилацетат (9 1), бензол - Э1 ил ацетат (2 1), обнаружили од! зону адсорбции соответствующую по величине ЯГ кумарину умбеллиферону В пет ролейно-эфирной фракции установили присутствие каротиноидов Для этого е хроматографировали в системах эфир петролейный - ацетон (6 4), эфир петролей ный - спирт третбутнловый (8 2), спирт метиловый — бензол - эталацетат (5 70 25), выявлено 3 зоны адсорбции, соответствующие [5-каротину, а-криптоксакткну, {3-криптоксантину (таб 2)

Для изучения качественного состава полифенольного комплекса и тритерпе-новых сапонинов травы сабельника болотного также использовали метод ВЭЖХ

Таблица 2 — Качественный состав основных групп БАС травы сабельника болотного

Группа БАС Метод анализа

БХ ТСХ 1 ВЭЖХ

Флавоноиды РуТИН кверцетин, кемпферол, агшгенин Руган, кверцетин. кемпферол агшгенин Гесперидин, лютеолин-7-пгикозид, апи-генин, гиперознд, рутин робинии, ди-гидрокверцешн кверцепш виценин

Оксикорич-пыс кислоты Феруловая хлорогеновая Феруловая, хлорогеновая, кофейная Цикоревая, феруловая, кофеГшая

Тритерпено-вые сапонины Моносахарндные остатки гликозидов Олеаноловая кислота

Кучарипы - Учбстлифсрон -

Каротиноиды Р-Каротнн, а- криптокеантин Р-криптоксантин

Исследования по изучению фенольных соединений проводили на базе московской лаборатории стандартизации и контроля лекарственных средств на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» модель 305

В качестве неподвижной фазы использовали металлическую колонку размером 4,6x250 мм PLATINUM EPS С 18 100, размер частиц 5 микрон, подвижной фазой явилась смесь спирт метиловый - вода - кислота фосфорная концентрированная в соотношении 400 600 5 Анализ проводили при комнатной температуре Скорость подачи элгоента 0,5 мл/мин Детектирование веществ осуществляли УФ-детектором "GILSTON" UV/VIS модель 151, при длине волны 254нм Регистрировали время удерживания полифенольных соединений травы сабельника болотного и сравнивали его со временем удерживания стандартных образцов «свидетелей» (таб 3)

Таолица 3 - Результаты ВЭЖХ анализа полифенольных соединений трачы сабельника болотного

Идентифицированные вещества Содержание в cvecu, % (метод внутренней норматиации)

Галловая кислота 8 82

Катечин 8 07

Вииенин 3 71

Эпикатехин 4 30

Цикоревая кислота 4 96

Феруяовая кислота 4 09

Гесперидин 5 72

Лютеолип-7-пшкозид 5 45

Апигенин 14 11

Гиперозид 4 81

Рутин 9 18

Робшшн 9 97

Дишлрокверцетин 10 76

Квернеган 6 05

Проведенные исследования позволили впервые для изучаемого вида иденти-

фицировать флавоноиды гесперидин, лютеолин-7-гликозид, робинин, виценин, ди-гидрокверцетин, гиперозид, фенолкарбоновые кислоты кислоту цикоревую

В сумме тритерпеновых сапонинов после гидролиза был обнаружен только один агликон Так как с помощью тонкослойной хроматографии практически невозможно отличить кислоту олеаноловую от урсоловой, то для их идентификации использовали метод ВЭЖХ В качестве образцов сравнения использовали стандартные образцы «свидетелей» кислот урсоловой и олеаноловой (рис 1)

10 20

Рисунок 1 - Хроматограмма кислоты олеаноловой(1), кислош урсоловой (2) и агликоиа гритерпеновых сапонинов травы сабельника болотного (3)

Сравнивали спектральные характеристики в УФ-области ири длине волны от 220 до 280 нм Наличие пика 7 с 220 нм. характерного для олеаноловой кислоты и отсутствие пика 6 с 254 нм, характерного для урсоловой кислоты, позволили идентифицировать выделенный агликон как олеаноловую кислоту

Далее было проведено изучение количественного содержания основных групп БАС в траве сабельника болотного Результаты представлены в таблице 4

Содержание суммы флавоноидов оценивали методом дифференциальной спектрофотометрии В качестве стандартного вещества был выбран рутин, так как положение максимума поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом в среде кислоты хлористоводородной ()чп„ - 410 - 412) близок по значению >.„,ах к комплексу суммы флавоноидов сабельника болотного с алюминия хлоридом (Хт„ - 410 -415)

Таблица 4 — Количественное содержание основных групп БАС в траве сабельника болотного

Группа БАС Методы исследования Количественное содержание, % Бх АХ Е,%

Флавопоиды Дифференциальная УФ-спектрофотометрия 0 59+0,0010 0,0058 0,0010 2,43

Эксгракционная спектрофотометр™ 0,56±0,0012 0,0055 0,0012 2,45

Гидроксикоричные кислоты Экстракционная спектрофотометр ия 0,84+0,0025 0,0102 0,0025 2,99

Кумарипы УФ-спектрофотометрия 0,67+0,0011 0,0061 0,0011 2,24

Дубильные вещества Титриметрия 14,7+0,07 0,0285 0,07 047

Тритерпеповые сапонины УФ-спектрофотометрпя 1 01+0,021 0,0018 0,021 2,09

ЮЖХ 1,00+0,022 0,0016 0,022 2Д2

Каротнноиды УФ-спектрофотометрия 12,5+0,112 мг/% 0,0019 0,112 2,76

Орг аиичес,кие кислоты Гигричетрчч 3,54+0,071 0,0500 0,071 2,03

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве сабель-

ника болотного обрабатывали с использованием параметрического критерия Стьго-дента согласно ГФ XI

Данная методика рекомендуется для стандартизации сырья (травы) сабельника болотного Чтобы доказать валидность предлагаемой методики, нами были изучены такие показатели как «линейность» и «правильность» (таб 5 и 6)

Таблица 5 — Результаты линейности методики, полученные методом регрессионного анализа

Уср Хер Ь а Ггаб (95% 6)

2,81 0,1436 0,0653 2,45

0,469 БхП) = 1, у1 = 1 Ах БЬ ! ДЬ ва Да г

0,2846 0,6973 0,0109 0,0267 0,0336 0,0823 0,9777 0,0015

Как видно из таблицы, рассматриваемая линейная зависимость выражается уравнением у = 0,1436 х, поскольку свободный член линейной зависимости статистически незначим Представленные данные свидетельствуют о линейности результатов Подтверждением этому служит значение коэффициента линейной корреляции г =0,9777, рассчитанное в результате метрологической аттестации

Таблица 6 - Результаты правильности методики, полученные методом рефессион-ного анализа

ь а 1таб (95%. 6)

0,0174 0,0079 2,45

5Ь ДЬ ва Да г в 2

0,1163 0,2849 0,3579 0,8769 0,9777 0,1686

Как следует из представленных данных, рассчитанные значения критерия Стьюдента для коэффициентов а и Ь не превышают ^ (95%, 6), свидетельствуя об отсутствии как постоянной, так и линейно изменяющейся систематической ошибок, следовательно, о валидности методики по показателю «правильность»

Количественное содержание тритерпеновых сапонинов в пересчете на олеано-ловую кислоту определяли методом прямой спектрофотометрии В качестве экстра-гента использовали спирт этиловый 96%, а для очистки агликона после гидролиза от примесей использовали хлороформ

Спектрофотометр ичсское определение тритерпеиоидов основано на реакции с кислотой серной, в результате которой тритерненоиды протонируются по двойной связи с образованием карбокатиона, а при наличии карбоксильной группы при С-28 имеет место последующая лактонизация При этом наблюдается характерный максимум поглощения при 310 нм (Э Т Оганесян, А А Савина)

Чтобы доказать правомерность использования предлагаемой методики для стандартизации сырья (травы) сабельника болотного, была рассчитана «линейность» и «правильность» результатов (таб 7 и 8)

Таблица 7 - Результаты линейности методики, полученные методом регрессионного анализа

Уср Хер Ь а Ггаб (95%, 6)

0,9 0,4006 0,1485 2,45

0,509 Эх 1Ц = 1. У1 = 1 Дх 8Ь ДЬ Ба Да г

0,087 0,2131 0,0253 0,0621 0,0256 0,0627 0,984 0,0011

Представленные данные свидетельствуют о линейности результатов Подтверждением этому служит значение коэффициента линейной корреляции г =0,984, рассчитанное в результате метрологической аттестации рассматриваемой регрессии Как видно из таблицы, рассматриваемая линейная зависимость выражается уравнением у = 0,4 х +0,1485

Результаты оценки линейной зависимости методом регрессионного анализа позволяют установить правильность предлагаемой аналитической методики

Таблица 8 - Результаты правильности методики, полученные методом регрессионного анализа

ь а Иаб (95% 6)

0,0484 0,0179 2,45

БЬ ДЬ Яа Ла г

0,39Ь'2 0,9757 0,4022 0,9854 0,9844 0,2664

Установлено, что рассматриваемая зависимость строго линейна и характеризуется необходимыми для оценки правильности статистическими параметрами, указанными в таблице 8

Методом атомно-абсорбционной спектроскопии устанавливали макро- и микроэлементный состав сабельника болотного после озоления проб Определение проводили на спектрографе СТЭ-1 на базе геологической станции «Кольцовская экспедиция» г Ессентуки Трава сабельника болотного содержит 28 макро- и микроэлементов, основными из которых являются калий (2,1 г/кг), кальций (13,5 г/кг), магний (2,1 г/кг), натрий (1,6), железо (3,0 г/кг), фосфор (0,84 г/кг) и марганец (0,84 г/кг).

Анализ аминокислот проводили на базе химической лаборатории Ставропольского НИИ животноводства и кормопроизводства (г Ставрополь) на аминокислотном анализаторе ААА 339М (колонка ОСТИОН ЛГ АНБ диаметром 8 мм и длиной 35 мм) Условия хроматографирования подвижная фаза раствор нингидрина при рН = 2,2, скорость подачи эшоента 15 мл в час, цикл хроматографирования - 120 минут Параллельно хроматографировали стандартные образцы аминокислот Преобла-

дающими компонентами являются аспарагиновая (1,95%), глюташшовах (1,86%) кислоты и лейцин (1,24%).

Стандартизация сырья (травы) сабельника болотном

Высушенное сырье - вся надземная часть растения - представляет собой смесь цельных или частично измельченных тонких веточек, листьев, кусочков стеблей толщиной до 12мм. Стебли полые, цилиндрические, тонкие, темно-коричневого цвета. Листья сверху зеленые, снизу сизоватые, очередные, длинно-черешковые, сложные, с прилистниками, опушенные, жилкование сетчатое- Запах слабый ароматный.

При установлении основных диагностических признаков сырья, необходимых для его идентификации, проводили мОрфгоюго-анатомические исследования в результате которых выявлены основные диагностические признаки: для листа (рис. 2, 3) - устьица аномоцитного типа, на верхней стороне листа волоски простые одноклеточные, на нижней - многочисленные простые волоски и, реже, головчатые с одно-(снеточной небольшой головкой па 1 - или 2 клеточной ножке; для стебля - строение ненучковое, клетки эпидермы мелкие, устьица расположены продольными полосами, простые волоски такого же строения, как и па листьях, головчатые — с одноклеточной шаровидной головкой на многоклеточной (3-10 клеток) ножке.

Выявленные диагностические признаки позволили стандартизовать сырье и рекомендовать использовать их для идентификации травы сабельника болотного.

Рисунок 2 - 11репарат листа с поверхности (75х) 1 — головчатый волосок, 2 - устьице

Рисунок 3 - 11реаарат листа с поверхности (75х) 1 - простой волосок

Дня подтверждения подлинности сырья использовали качественные реакции на флавоноиды, катехины и тритерпеновые сапонины и тонкослойную хромато<рафию. Изучали поведение суммы флавоноидов в различных хроматографичсскях системах. В качестве оптимальной выбрана система бензол - эти л ацетат (7,5:2,5). В этой системе критерий разделения не менее 3, «пятна» не образуют «хвостов».

Таблица - 9 Спецификация сырья «Сабельника болотного трава»

ПокакахтёЙ Методы Нормы

Внешние признаки ГФ XI В соответствии с проектом ФС

1 Качественные реакции: | - на катехины 1 - на флавопоиди Качественные химические реакции Малиновое окрашивание Оранжево-красное окрашивание

! Числовые показатели ! Содержание флавоноидов Содержание тритерпеновых сапонинов Влажность Зола ой с нал Зола, нерастворима* к НС! 10%-цоЙ Органические примеси. % Минеральные примеси. % Частицы, прошедшие сквозь сито с а =7 мм. % Пожелтевшие, побуревшие и почерневшие части растения, % * Дифференциальная епектро фотометр ия Г1рямая спек-грофо-тометрия ГФ X! ГФ XI ГФ XI ГФ XI ГФ XI ГФ X! ГФ XI Не менее 0,4% Не менее 1% Не более 10% Не более 4,55% Не более 0,16% Не более 0,9% Не более 0,45% Не более 7% Не более 1,5% ^ '

Микробиологическая чистота ГФ XI. Изменение №3, категория 4 а Соответствует

Упаковка По НД Соответствует

Маркировка По НД Соответствует

Три л а юргирова ни е По ЯД Соответствует

Хранение По НД В еухоу. чашгацешюм от света меинг

Срок годности - 3 юла

Товароведческие показатели сырья определяли фармакопейными методам! Стандартизовали сырье по показателю «количественное содержание» по флавоно дам и тритерпеновым сапонинам.

Определение сроков годности травы сабельника болотного проводили в ест ственных условиях с 2002 по 2006 гг Для этого контролировали количественное с держание флавоноидов, дубильных веществ и тритерпеновых сапонинов в сырье периодичностью в полгода В течение всего срока хранения количественное соде жание биологически активных веществ менялось незначительно, но, так как поел 38 месяца хранения сырье трава сабельника болотного по показателю содержани суммы флавоноидов перестало соответствовать разработанным критериям, то реко мендуется срок годности сырья 3 года при температуре 20°С

Проведенные исследования позволили разработать нормы качества сырь (травы) сабельника болотного (таб 9), которые р. дальнейшем были использовань при разработке ФС на траву сабельника болотного

Получение и стандартизация сабельника болотного зкетраюпа

жидкого(1:1)

Первым этапом разработки сабельника болотного экстракта жидкого (1.1) явилось установление технологических показателей сырья, которые изучали с помощью методик, разработанных проф Ю Г Пшуковым, в результате чего были подобраны оптимальные условия получения экстракта травы сабельника болотного (1 1) Экстракт ютовили на спирте этиловом 70%-ном, так как этот растворитель (в сравнении с экстрактами, полученными на спирте этиловом 40 и 96%-ном) позволяет наиболее полно извлечь сумму биологически активных веществ растения Были определены технологические показатели сырья Эстракцию проводили в батарее из 6 диффузоров в соотношениях (11) методом реперколяции

Результаты анализа экстракта травы сабельника болотного (1 1) по показателям качества представлены в таблице 10

Таблица 10 - Результаты анализа экстракта травы сабельника болотного (1 1) по показателям качества

Показатели качества Требования к экстракту Результаты анализов

№1 №2 №3 №4

Описание Темно-коричневая жидкость с приятным запахом, горьковатого вкуса + + + + +

Качественный анализ Реакция с железоаммониевьгми квасцами + + + + +

ТСХ в системе бензол - этшгаце- 0,4 0,39 0,4 0,41 0,41

тат (75 2,5), 0,28 0,28 0,27 0,29 0,27

БХ в системе БУВ (40 12 29), 0,43 0 45 0 44 0 43 0 46

0,52 0 53 0 56 0 52 0 55

0,74 0 75 0 74 0 75 0 77

Плотность 0,920 - 0,927 г/см 0,920 0,927 0,923 0,925 0,921

Сухой остаток Не менее 14,3% 14,8 14 4 14 6 14 8 14,3

Спирт 65 - 69 % 65,1 Ь5,5 65,0 68,7 68,4

Тяжелые металлы Не >0,01 % + + + + +

Микробиологическая Категория 3 д + + + + +

чистота

Количественное 0 393-0 401 0,393 0,398 0,400 0,401 0,394

определение суммы

флавоноидов

+ - соответствует требованиям нормативной документации

Результаты хроматографического анализа сабельника болотного экстракта жидкого (1 1), настойки «Сабельник Эвалар» и образцов «свидетелей» показали, что в экстракте жидком содержатся - рутин, кверцетин, кемпферол, дигидрокверцетин,

феруловая, кофейная и хлорогеновая кислоты В настойке «Сабельник Эвалар» -^ *

кемпферол, кверцетин и рутин

Сапонины определяли в системе н-бутанол - спирт этиловый - аммония гид-роксид (7:2 5) Сабельника болотного экстракт жидкий дает 4 пятна с КГ 0,26, 0,59, 0,79, 0,95, а настойка -«Сабельник Эвалар» - 3 пятна с Ш" 0,26,0,59,0,95

Таблица 11- Содержание БАС в сабельника болотного экстракте жидком (1 1) и на стойке «Сабельник Эвалар»

Исследуемый объект Флавононды, % Дубильные вещества,% Свободные органические кислоты,% Тритерпеновые сапоноиы,%

«Сабельник Эвалар» 0,036+0,0009 2,9+0,024 0,334+0,005 0,04+0,0012

Sx 0,0058 0,0485 0,0406 0,0066

АХ 0,0009 0,024 0,005 0,0012

Е,% 2,45 0,81 1,25 2,99

Сабельника болотного экстракта жидкою (11) 0,397+0,008 10,45+0,078 0,469+0,006 0,97+0,021

Sx 0,0038 0,0215 0,0500 0,0016

АХ 0,008 0,078 0,006 0,021

Е,% 2,42 0 75 1 ->-> 2,8ö

Количественное определение основных групп БАС обеих лекарственных фор? показало преимущество сабельника болотного экстракта жидкого (11) перед на стойкой «Сабельник Эвалар«, в котором их содержание значительно больш (таби 11)

Фармакологическое изучение сабельника болотного экстракта

жидкого(1:1)

Определение острой токсичности сабельника болотного экстракта жидког (1 1) проводили на белых мышах обоего пола массой 22,6+2,3г Все животные был разделены на группы по 6 в каждой и находились в равноценных условиях жизни Исследования проводили в июне - июле 2006 г Сабельника болотного экстракт жидкий и сумму сапонинов вводили per os

Острая токсичность сабельника болотного экстракта жидкого (1 1) составила 28,85 г/кг, для суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельника болотного - более 40,0 г/кг, что позволило по классификации Ходжа и Стсрнера отнести исследуемые объекты к веществам VI класса токсичности, то есть они являются безопасными для здоровья человека.

Противовоспалительный зффем изучаемых обьектов выполняли на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 210,0+22,4 г Все животные были разделе-

ны на группы по 6 в каждой и находились в равноценных условиях жизни Исследования проводили в июне - июле 2006 г Сабельника болотного экстракт жидкий и сумму сапонинов разводили водой до концентрации спирта этилового 40% и вводили per os

Противовоспалительную активность оценивали по величине отека лапок относительно препарата сравнения - настойки «Сабельник Эвалар» и контролировали некоторые показатели лейкоформулы и изучали гистологию декальцинированных продольных срезов суставов леченых крыс и животных контрольной и интактной групп (таб 12)

Таблица 12 — Изменение величины отека суставов с моделированным артритом в течение опыта, М+т, А%

Показатель Дни после введения здьгеванта Контрольная группа (адьюьант) Сабельника болотного экс-тракг жидкий (1*1) «Сабечьник Эвалар»

Изменение величины отека суставов с моделированным артритом в течение опыта 3-й 79,4+5,6 75,0+3,6 76 6±4.8

14-й(начало лечения) 61,8±4,3 55,2+2 9 57,4±4,8

25-й (окончание лечения) 74,2±6,Г 18,7+1,2ч# 45,7+2,7х*

Примечание х - изменения достоверны относительно контрольной группы (адъю-вант), р<0,05, # - измерения достоверны относительно препарата сравнения - настойка «Сабельник Эвалар», р<0,05

Воспалительные процессы вызывают изменение картины крови, поэтому следующим этапом исследования явился контроль СОЭ и лейкоформулы

Установлено, что исследуемые объекты достоверно снижают СОЭ и лейкоцитоз, подтверждающие развитие иммунного воспалительного процесса Микроскопическими исследованиями срезов суставов подтверждена противовоспалительная активность сабельника болотного экстракта жидкого (1 1)

* Выражаем искреннюю благодарность за помощь в проведении Фармакологических исследований доц С.А Кулешовой

ш*

: | —

I £" V

I: 1Й1У '¿'Ж

Ш

Рисунок 4 - 1 'иотологическая картина среза сустава крысы через 25 дней после введения адъюванта без течения (контроль).

1 - суставная капсула, 2 - полость сустава. 3 - грануляционная ткань

- I

Рисунок 6 - Гистологическая картина среза сустава крысы через 25 дней после введения адьюванта кя фоне лечения сабельника болот -ногО эЙетрэККЭМ жидким (1:1).

1 - суставная капсула. 2 - полость сустава, 3 — тона некроза

Рисунок 5 - Гистологическая картина среза интактного сустава крысы

1 - суставная капсула, 2 - полость

и

,-,0 / # т?' ■

ШШчМ ■

>

Рисунок 1 - Гистологическая картина среза сустава крысы через 25 дней после введения адмованта на фоне лечения препаратом сравнения «Сабельник Звал ар».

1 - суета я пан капсула, 2 - полость сустава, 3 - грануляционная ткань

Применение настойки «Сабельник Эвалар» снизило развитие патоморфологн-ческих изменений сустава (рис, 7), но в меньшей степени, чем сабельника болотногс экстракт жидкий (1:1) {рис. 6). На фоне лечения сабельника болотного экстрактом жидким (1:1) просвет капсулы сустава практически свободен от содержимого (рис. 4 и 5). Поражение капсулы о1ранмчено очаговой тканевой дезорганизацией в участку суставной капсулы, в который был введен адъювант и альтеративно-экссудативными изменениями лишь в этой зоне. Остальные участки капсулы обычных поперечных размеров со слабо выраженными явлениями отека.

Таким образом, сабельника болотного экстракт жидкий обладает противовоспалительной активностью, превышающей действие препарата сравнения - настойки «Сабельник Эвалар» и может быть рекомендован для дальнейшего изучения с целью внедрения и медицинскую практику.

Общие выводы

1 Впервые установлено присутствие в траве сабельника болотного флавонои-дов гесперидина, лютеолин-7-гликозида, робинина, виценина, дигидрокверцетина, гиперозида, фенолкарбоновой кислоты цикоревой кислоты, кумарина умбеллифе-рона, органических кислот лимонной, яблочной и янтарной

2 Выделены и идентифицированы на основании изучения физико-химических и спектральных характеристик кверцетин, кемпферол (флавоноиды), кофейная кислота (оксикоричные кислоты), олеаноловая кислота (тритерпеновые сапонины)

3 Установлено количественное содержание в сырье (траве) сабельника болотного дубильных веществ (11 9 - 14 7%), оксикоричных кислот (0 391 - 0 459%), флавоноидов (0 51 -•- 0 59%), кумаринов (0 57 -0 67 %) тритерпеновых сапонинов (0 98 - 1 01%), каротиноидов (11.3 - 12 5мг%), свободных органических кислот (2 51 —3 54%), полисахаридов (0 14%)

4 Изучен аминокислотный и элементный состав растения Преобладающими компонентами в сумме аминокислот являются аспарагиновая, глютаминовая кислоты и лейцин Трава сабельника болотного содержит 28 макро- и микроэлементов, основными из которых являются калий (2,1 г/кг), кальций (13,5 г/кг), магний (2,1 г/кг), натрий (1,6), железо (3,0 г/кг), фосфор (0,84 г/кг) и марганец (0,84 г/кг)

5 Определены и использованы для идентификации основные морфолого-анатомические признаки сырья

6 Подобраны оптимальные условия получения экстракта травы сабельника болотного жидкого (11), определены технологические показатели сырья

7 Разработаны и валидированы методики, использованные для стандартизации сабельника болотного экстракта жидкого (11)

8 Проведен сравнительный анализ экстракта жидкого сабельника болотного и настойки «Сабельник Эвалар» по содержанию флавоноидов, тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ и свободных органических кислот

9 Установлена на крысах противовоспалительная активность сабельника болотного экстракта жидкого (1 1) и суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из

травы сабельника болотного, на модели адъювантного артрита Сабельника болотного экстракт жидкий (1 1) оказал достоверно значимое противовоспалительное действие, превышающее в 2,4 раза эффект настойки «Сабельник Эвалар»

10 Установлено, что сабельника болотного экстракт жидкий (1 1) и сумма тритерпеновых сапонинов этого растения относятся к веществам VI класса токсичности по классификации Ходжа и Стернера и являются безопасными для здоровья человека Для сабельника болотного экстракта жидкого (1 1) острая токсичносгь составила 28,85 г/кг, для суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельника болотного — более 40,0 г/кг.

11 Разработан проект ФС «Сабельника болотного трава - Coman palustris herba» в соответствии с требованиями ОСТа 91500 05-001-00

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Фармако-технологическое изучение надземной части сабельника болотного -Comarum palustre L // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч трудов - Пятигорск, 2004 - Вып 59 - С 36 — 37 (Соавт О Н Денисенко, Н В Кобыльченко)

2 Количественное определение суммы флавоноидов в надземной части сабельника болотного - Comarum palustre L // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения материалы IX Междунар съезда - СПб,2005 -С 268-270 (Соавт О Н Денисенко)

3 Фармако-технологическое изучение экстракта жидкого (11) сабельника болотного // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч трудов - Пятигорск, 2005 -Вып 60 -С 124-125 (Соавт О Н Денисенко)

4 Изучение элементного состава в надземной части сабельника болотного (Comarum palustre L ) Н Разработка исследование и маркетинг новой ф армяне rth-

ческой продукции сб науч трудов - Пятигорск, 2006 -Вып 61 -С 34-35 (Соавт О H Денисенко)

5 Некоторые сведения о распространении и содержании биологически активных веществ в траве Comarum palustre L // Молодые ученые медицине тез докл 5-й науч конф молодых ученых - Владикавказ, 2006 - С 65 — 67 (Соавт О H Денисенко)

6 Содержание флавоноидов и оксикоричных кислот в траве Comarum palustre L различных экотипов // Медицинский вестник Башкортостана — 2006 - Т 4, №1 -С 148- 150 (Соавт О H Денисенко)

7 Стандартизация экстракта жидкого 1 1 травы сабельника болотного Comarum palustre L на 70%-ом спирте этиловом / Изв вузов Сев -Кавказ региона Ес-теств науки Приложение — 2006 — №7 — С 51 — 54

8 Изучение противовоспалительной активности сабельника болотного экстракта жидкого // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч трудов - Пятигорск, 2007 - Вып 62 - С 502 - 503 (Соавт О H Денисенко, С.А Кулешова, M H Ивашев)

9 Нормативные исследования сырья (травы) сабельника болотного// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевт ической продукции сб науч трудов - Пятигорск, 2007 - Вып 62 - С 90-91 (Соавт О H Денисенко)

МАЛЮК ЕКАТЕРИНА ВАЛЕРЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ САБЕЛЬНИКА

БОЛОТНОГО

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати «_»_2007 г Фармат бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная Печать ротаггринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 6ьъ

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ

РАЗВИТИЮ» 357532, г Пятигорск, пр Калинина 11

МЛЛЮК ЕКАТЕРИНА ВАЛЕРЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ САБЕЛЬНИКА

БОЛОТНОГО

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати <i¿b> ¿/7/7/)g/M 2007 г Фармаг бумаги 60x84 1/16 Бумага ышжно-журпалыыя Печать рогапринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №

663.

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНО! О ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ 1 ОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ

РАЗВИТИЮ» 357532, г Пятигорск, пр Калинина 11

Актуальность проблемы. Одной из важных проблем современной медицины является лечение заболеваний опорно-двигательного аппарата. Несмотря на большие различия в причине возникновения (перенесенная инфекция, аутоиммунный конфликт, нарушения обмена мочевой кислоты и т.д.), заболевания суставов имеют в своей основе общие механизмы- развития. Основным патогенетическим механизмом в данном случае является воспаление, в результате которого наступает повреждение тканей суставов, выделение экссудата (воспалительной жидкости) и замещение поврежденных тканей рубцом. Чередование.этих процессов или одновременное их протекание и формирует клиническую картину болезни: заболевания суставов характеризуются болью, покраснением, отеком, повышением температуры- в области поражения, а также нарушением функции соответствующего сустава.

Поскольку, для этой группы заболеваний, боль является, основной причиной, заставляющей обратиться за медицинской помощью, то вполне* естественно, что группа нестероидных противовоспалительных препаратов является - одной из ведущих и успешно применяемых при лечении вышеуказанных заболеваний в сочетании: с глюкокортикостероидами и иммуномодуляторами. Однако их использование вызывает ряд негативных явлений, в том числе, вредное воздействие на желудочно-кишечный тракт, а одновременное, использование нескольких противовоспалительных нестероидных препаратов повышает риск сердечных заболеваний в 6 раз. Это следует принимать во внимание, учитывая тот факт, что заболевания опорно-двигательной системы наблюдаются в зрелом и пожилом возрасте, а применение противовоспалительных препаратов является длительным или постоянным.

В то же время; в ряде случаев при заболеваниях суставов могут оказаться эффективными растительные препараты. Для лечения заболеваний суставов выбирают растения, обладающие противовоспалительным, мочегонным (противоотеч-ным), регулирующим обменные процессы, обезболивающим, седативным, общеукрепляющим, десенсибилизирующим действием. Среди растений, применяемых при заболеваниях этих нозологических групп, в традиционной медицине и в виде биологически» активных добавок к пище широко применяется сабельник болотный -! Comarum palustre Е., сем; Rosaceae. Преимуществом» использования растительных препаратов является отсутствие серьезных побочных явлений, что позволяет применять их длительное время.

Однако ^широкое' использование: сабельника болотного сдерживается тем, что недостаточно данных по-фармакогностическому изучению и фармакологическому подтверждению эффективности препаратов из него. ,В частности, нет данных по со-'I держанию:основных- групп биологически активных соединений,, не изучены товароведческие показатели, сырья, не исследована противовоспалительная активность препаратов сабельника;

Поэтому фармакогностическое исследование травы сабельника болотного является актуальной темой фармацевтической науки и практики.

Цель работы

Щелью настоящих исследований являлось фармакогностическое изучение травы; сабельника болотного, разработка технологии и нормативной; документации на сырье и сабельника болотного экстракт жидкий;

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести качественное и количественное определение основных групп биологически активных соединений травы сабельника болотного (БАС):

2. Выделите и идентифицировать индивидуальные соединения, содержащиеся в траве сабельника; болотного и определяющие его биологическую активность.

3. Установить основные морфолого-анатомические признаки и товароведческие показатели сырья. .

4. Разработать проект фармакопейной статьи на сырье (траву) сабельника болотного.

5. Разработать технологию сабельника болотного экстракта жидкого (1:1)'и t методы:его стандартизации; 6 ■ '

6. Изучить противовоспалительную активность сабельника болотного экстракта жидкого (1:1).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава (№ госрегистрации 01.200.213550) в рамках проблемы «Фармация» Ученого совета Министерства здравоохранения и социального развития РФ, секция №38.

Впервые установлен компонентный состав полифенольного комплекса травы сабельника болотного методом ВЭЖХ. С помощью этого метода выделено и идентифицировано 15 компонентов, 9 из которых идентифицированы для исследуемого вида впервые: флавоноиды - гесперидин, лютеолин-7-гликозид, робинин, виценин, дигидрокверцетин, гиперозид; оксикоричные кислоты - цикоревая, кофейная; кума-рины - умбеллиферон. Преобладающими компонентами являются: апигенин, дигидрокверцетин, робинин и рутин.

Установлено, что тритерпеновые сапонины травы сабельника болотного представлены 4 гликозидами, агликоном которых является олеаноловая кислота, которая также присутствует в растении в свободной форме. Методом ВЭЖХ доказано, что агликоном тритерпеновых сапонинов травы сабельника болотного является олеаноловая кислота.

Впервые проведена количественная оценка содержания в траве сабельника болотного фенолкарбоновых кислот, тритерпеновых сапонинов, кумаринов. Изучен моносахаридный состав полисахаридов травы сабельника болотного.

Разработаны основные показатели, определяющие качество сырья. Предложены критерии оценки качества и идентификации сырья по его основным морфологическим и анатомическим признакам. Проведена валидация предлагаемых методик качественного и количественного анализа сырья по показателям «специфичность», «линейность», «правильность», «предел обнаружения», «отсутствие систематической ошибки».

Впервые разработана технологическая схема получения сабельника болотного экстракта жидкого (1:1). Разработаны методики количественного определения основных групп биологически активных веществ.

Установлена специфическая фармакологическая активность сабельника болотного экстракта жидкого (1:1), подтвердившая его противовоспалительное действие.

Практическая значимость результатов исследования.

Установлены характерные диагностические признаки сырья (травы) сабельника болотного.

Проведена стандартизация травы сабельника болотного с учетом современных требований, предъявляемых к качеству лекарственного растительного сырья.

Обоснована целесообразность применения травы сабельника болотного для получения сабельника болотного экстракта жидкого (1:1) и. его дальнейшего изучения с целью внедрения его в медицинскую практику в качестве противовоспалительного средства.

Внедрение результатов исследования.

Проект ФС «Сабельника болотного трава - Comari palustris herba» принят на экспертизу в Институт стандартизации и контроля лекарственных средств Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (письмо №5273 от 27.12.06) для рассмотрения и утверждения.

Получены акты апробации технологии и методов анализа сабельника болотного экстракта жидкого (1:1) на базе экспериментального участка фитоцеха ФГУП «Пятигорская фармацевтическая фабрика» от 29.05.2006 г. Положения, выдвигаемые на защиту.

1. Результаты изучения химического состава травы сабельника болотного методами ТСХ, ВЭЖХ, БХ и препаративной хроматографии.

2. Данные качественного и количественного анализа основных групп биологическа активных соединений сырья (травы) сабельника болотного.

3. Выявленные характерные морфолого-анатомические диагностические признаки сырья (травы) сабельника болотного.

4. Основные положения стандартизации сырья (травы) сабельника болотного, сабельника болотного экстракта жидкого и настойки «Сабельник Эвалар».

5. Результаты изучения фармакологической активности суммы тритерпеновых сапонинов и сабельника болотного экстракта жидкого (1:1).

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы апробированы на межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (г. Пятигорск, 2003, 2004, 2005 гг.).

Объём и структура диссертации.

Работа изложена на 153 страницах машинописного текста, содержит 45 таблицу, 29 рисунков и 20 расчётных формул. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 150 источников, в том числе 11 иностранных и приложения.

СОКРАЩЕНИЯ

Б АД - биологически активная добавка

БАС - биологически активные соединения

БХ - бумажная хроматография

ВРПС - водорастворимые полисахариды

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГК - глюкокортикоиды

ГЦ - гемицеллюлоза

НПВС - нестероидные противовоспалительные средства

ПВ - пектиновые вещества

РА - ревматоидный артрит

РСО - рабочий стандартный образец

ТСХ - хроматография в тонком слое сорбента

ФС - фармакопейная статья

Б - г. Бийск, Алтайского края;

БЧ - Бакчарский район;

Т - Томск,

А - Алтайский район

Кор» - коричневая окраска зоны адсорбции;

Красно - кор» - красно-коричневая окраска зоны адсорбции;

Ж» - желтая окраска зоны адсорбции;

Г» - голубая окраска зоны адсорбции;

Син» - синяя окраска зоны адсорбции;

Син-Ф» - сине-фиолетовая окраска зоны адсорбции;

Ярко-г» - ярко-голубая окраска зоны адсорбции;

Светло-г» - светло- голубая окраска зоны адсорбции;

Зел-г» - зеленовато-голубая окраска зоны адсорбции;

Ж-Зел» - жёлто-зелёная окраска зоны адсорбции.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Впервые установлено присутствие в траве: сабельника болотного:, флавоноидов: гесперидина, лютеолин-7-гликозида, робинина, виценина, дигидрокверце-тина, гиперозида; фенолкарбоновых кислот::цикоревой кислоты; кумаринов: умбёл-лиферона; органических кислот: лимонной, щавелевой и винной:

2: Выделены и идентифицированы на основании изучения;физико-химических I и спектральных характеристик кверцетин,. кемпферол (флавоноиды); кофейная? кислота (оксикоричные кислоты); олеаноловаяжислота (тритерпеновые сапонины):

3. Установлено количественное содержание.в сырье (траве) сабельника болот-f ного дубильных веществ (11.9 - 14.7%); оксикоричных кислот (0.391 - 0.459%); флавоноидов (0:51, - 0.59%); кумаринов (0:57 - 0:67 %) тритерпеновых сапонинов^

0.98 - 1.01%); каротиноидов (11.3 - 12.5мг%); свободных органических кислот (2.51 - 3.54%); полисахаридов (0.14%). | 4. Изучен аминокислотный состав растения. Главными компонентами являюте ся аспарагиновая, глютаминовая кислоты и лейцин; Bi траве: сабельника болотного^ обнаружено 28 микроэлементов; доминирующие из которых К, Са, Mg, Na, Fe, Р,

Mn.

5; Определены^ основные морфолого-анатомические признаки сырья; позволяющие достоверно ^идентифицировать сырье - травусабельника болотного.

6. Подобраны оптимальные: условия получения? экстракта травы сабельника» болотного жидкого (1:1), определены технологические показатели сырья. Установлены показатели-качества экстракта. $

7. Проведен сравнительный анализ экстракта жидкого сабельника болотного и : настойки «Сабельник Эвалар» по содержанию флавоноидов,. тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ и свободных органических, кислот.

8. Установлена противовоспалительная активность сабельника болотного экстракта жидкого и суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельни-, ка болотного на крысах на модели адъювантного артрита. Сабельника болотного экстракт жидкий оказал достоверно значимое противовоспалительное действие, превышающее в 2,4 раза эффект настойки^ «Сабельник; Эвалар».

3 . 138

9. По классификации Ходжа и Стернера сабельника болотного экстракт жидкий и сумма тритерпеновых сапонинов этого растения относятся к веществам VI класса токсичности и являются безопасными для здоровья человека. Для сабельника болотного экстракта жидкого острая токсичность составила 28846,15 мг/кг; для суммы тритерпеновых сапонинов, выделенных из травы сабельника болотного — более 40000 мг/кг.

10. Разработана ФС «Сабельника болотного трава — Comari palustris herba» в соответствии с требованиями ОСТа 91500.05-001-00.