Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Фармакологическое изменение эффектов морфина ингибиторами кальций-зависимых эндопептидаз

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РФ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

На правах рукописи

/ ^• ^г^/х7,^

ЛЮПИНА Юлия Вячеславовна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕНЕНИЕ ЭФФЕКТОВ МОРФИНА ИНГИБИТОРАМИ КАЛЬЦИЙ—ЗАВИСИМЫХ ЭНДОПЕПТИДАЗ

14.00.45 — Наркология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА — 1991

Работа выполнена в лаборатории нейробиологии влечений Института Медико-биологических проблем наркологии Государственного Научного Центра наркологии МЗиМП РФ.

Научный руководитель

доктор медицинских наук С. К. Судаков

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Л. В. Калюжный

доктор медицинских наук В. П. Нужный

Ведущее учреждение — Санкт-Петербугский Государственный Медицинский Университет им. И. П. Павлова.

Защита диссертации состоится « » 1994 г.

в » часов ,на заседании диссертационного совета

. ОтУ'^Р' . при Государственном Научном Центре наркологии МЗиМП РФ (121921, Москва, Малый Могильцевский пер., 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ наркологии МЗиМП РФ.

Автореферат разослан « » года.

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат биологических наук

О. Ф. Львова

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Вещества опиатной природы, в частности морфин, широко применяются в медицинской практике благодаря своим анальгетическим свойствам. Однако, длительное применение морфина сопровождается патологическим влечением к препарату, психической и физической зависимостью с выраженным абстинентным синдромом после резкой отмены этого наркотика. Особую озабоченность вызывает существенный рост распространённости наркоманий среди молодежи и подростков, а также тенденция к расширению использования кустарно изготовленных наркотических ве-цеств, в первую очередь опиатов (Попов, 1983; Бабаян с соавт.. 1988; Зрублевский с соавт., 1989). Эйфоризирующее действие опиатов на человека давно и хорошо известно (Эрленмейер, 1899; Пятницкая, 1975). 3 экспериментальных моделях на животных изучен морфо-физиологический :убстрат феномена опиатной зависимости (Olds, 1960; Weeks, 1962; Lodens et al, 1973). В последние годы появляется все больше данных в тользу того, что развитие лекарственной зависимости и толерантности связано с изменением в активности генетического аппарата нервных слеток (Chang et al, 1989; Hayward et al, 1990; Gultart et al, 1992; lope et al, 1992; Ярыгин, 1990; Крылова, 1994). Обнаружено, что од-юкратное введение морфина экспериментальным крысам ингибирует бел-совый синтез, но многократное введение этого наркотика, напротив, дативирует ядерную и рибосомальную синтетическую активность нейронов >азличных структур ЦНС (Сох et al, 1970; Clouet et al, 1971; Cohen !t al, 1977). Последний факт связывают с развитием толерантности и ¡ависимости. Вместе с тем, введение ингибиторов различных стадий ¡елкового синтеза (актиномицин Д, 8-азагуанин, циклогексимид) досто-¡ерно снижает скорость формирования толерантности к морфину у мышей : крыс.

Следует отметить, что важное место в регуляции функционирования леток и целостного организма занимают контролирующие и регуляторные ротеазные механизмы, включающие деятельность кальций-зависимых эн-опептидаз. Протеазные механизмы регуляции описаны для мембранных роцессов, в частности, они вовлечены в механизм активации глутамат-ых, Нх-рецепторов, GABAB-рецепторов нейронов (Lynch et al 1983; 984; Majewska et al, 1984). Показано участие кальций-зависимых эн-опептидаз в процессах, происходящих в цитоплазме и затрагивающих аботу мембраносвязанных белков кальпаина (Yoshida et al, 1983). родемонстрирован протеазный механизм регуляции и контроля экспрес-ии генов (Myen et al, 1977). Морфин индуцирует изменения в мемб-

- г -

ранных, цитоплазматических процессах, в работе генетического аппарата клеток, возможно, оказывая влияние на активность определенных протеолитических ферментов, контролирующих и регулирующих эти процессы. •

Поэтому применение селективных ингибиторов кальций-зависимых эндопептидаз, действующих на определенный уровень регуляции мембранных и цитоплазматических процессов, экспрессию генов может дать результаты, имеющие важное значение для понимания особенностей процессов, лежащих в основе развития опиатной зависимости и толерантности, и поможет решить проблему патогенетической терапии опиатных наркоманий.

Целью настоящей работы является поиск путей направленной коррекции эффектов морфина посредством воздействия ингибиторами кальций-зависимых эндопептидаз.

В ходе исследования решались следующие задачи: '

1. Исследовать In vitro действие морфина на синтез мРНК в нервных клетках различных структур мозга крыс.

2. Изучить влияние антипаина, селективного ингибитора кальций-зависимых эндопептидаз, на действие морфина in vitro.

3. Изучить влияние антипаина и люпептина на эффекты острого и хронического действия морфина.

4. Используя метод радиолигандного связывания, изучить спектр нейрохимических свойств антипаина и люпептина.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. '

В работе экспериментально установлено, что морфин активирует работу генетического аппарата нервных клеток различных структур ЦНС. Показано, что селективный ингибитор кальций-зависимых эндопептидаз, антипаин, подавляет прирост транскрипционной активности нейронов, вызванный морфином.

Впервые показано, что формирование синдрома отмены у морфинза-висимых крыс сопровождается изменением плотности и чувствительности б-опиатных рецепторов. Установлено, что введение люпептина предотвращает изменения б-опиоидной рецепции в период отмены морфина к уменьшает выраженность абстинентного . синдрома у морфинзависимьи крыс.

Установлено, что добавление антипаина или люпептина в раствор морфина, усиливает его анальгетический эффект, уменьшает положительно-подкрепляющие свойства и снижает выраженность синдрома отмень

морфина у морфинзависимых крыс.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ,

Полученные научные данные о механизмах формирования опиатной зависимости и направленной коррекции работы генетического аппарата нейронов, задействованных в этих механизмах, дополняют научную базу для психофармагенетики, нового направления в экспериментальной медицине. и позволяют рекомендовать рациональные пути синтеза новых соединений, купирующих опийный абстинентный синдром и использующихся в качестве добавок к морфину для усиления его анальгетических свойств и уменьшения наркогенного потенциала.

На основании полученных научных данных Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров РФ выдал положительные решения на патенты изобретений:

Средство для купирования абстинентного синдрома при опийных наркоманиях; заявка N 5066808/14. Гос. регистр заявлен 22. 07. 92.

Препарат для анальгезии на основе морфина; заявка N Э3016321/14, Гос. регистр заявлен 30. 03. 92.

Средство для купирования абстинентного синдрома при опийных наркоманиях; заявка N 92015086/14, Гос. регистр заявлен 29. 12. 92.

Антипаин и люпептин могут быть использованы в наркологической практике для купирования абстинентного синдрома. В клинической практике (анестезиологии, онкологии, военной медицине) для усиления анальгетических свойств морфина и предотвращения нежелательных последствий его применения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. .

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: конференции мо-подых ученых "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века" 27 мая 1994 года; заседании Проблемной комиссии по вопросам наркологии Го-зудаственного Научного Центра наркологии 9 июня 1994 года; на IRNC 1994 Meeting 19 июля 1994 года, США.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на страницах машинописного текста и

состоит из введения, обзора литературы, посвященной молекулярным механизмам действия опиатов в нервной системе, материалов и методов ^следований, четырех глав результатов исследований, обсуждения результатов, выводов и библиографии, включающей г^гт^дгазваний. Диссертация. содержит 14 рисунков, 12 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЖИВОТНЫЕ.

Эксперименты проведены на 640 крысах-самцах линии Wistar весом в начале экспериментов 180-200 г. Крыс содержали в условиях искусственного освещения (12 часов в сутки), постоянного доступа к стандартному комбинированному корму и воде в клетках по 8-10 животных.

СОЕДИНЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VIVO.

Антипаин - Phe-(CO-Arg-Val-Arg-al); люпептин -

(Acetyl-Leu-Leu-Arg-al) - селективные ингибиторы кальций-зависимых эндопептидаз производства фирмы "Sigma" (USA); 0.9% изотонический раствор хлорида натрия промышленного производства; морфин гидрохлорид (Чимкентский завод). Действие всех указанных веществ изучали при внутрибрюшинном введении.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Оценка транскрипционной активности хроматина ядер клеток сенсо-моторной коры больших полушарий, коры мозжечка, миндалины, зоны СА-3 гиппокампа, крупного ядра шва, центрального серого вещества, вентро-медиального гипоталамуса, прилежащего ядра, спинного мозга проводилась с помощью радиоавтографического метода.

Изучение основных характеристик ccj, а2, и р - адренергических, Sg— серотонинергических, Da - дофаминергических, бенздиазепиновых рецепторов стриатума, . ji- опиатных рецепторов, коры мозга крыс проводили радиолигандным методом в модификации Русакова (1992). Концентрацию белка в пробе определяли по методу Lowry et al, 1951.

Для определения порогов болевой чувствительности использовали тест "отдергивания хвоста". Регистрировали латентный период реакции отдергивания хвоста из горячей воды (56° С).

Изучение влияния антипаина и люпептина на вторично-подкрепляющие свойства морфина производили в тесте "предпочтение места". Процедура опыта состояла в определении исходного предпочтения темного отсека "челночной" камеры, последующем обусловливании в течение 4-х дней: сочетании посадки животных в непредпочитаемый (светлый) отсек с введением исследуемого вещества непосредственно перед посадкой в непредпочитаемый отсек. О предпочтении судили по времени пребывания животных опытной группы в светлом отсеке "челночной" камеры в сравнении с тем же показателем животных контрольной группы. Учитывали количество переходов из отсека в отсек "челночной" камеры, а также

число животных в группе, у которых выработалась условная реакция предпочтения светлого отсека "челночной" камеры.

Хроническую морфинизавдю животных производили в течение 12 дней: морфин гидрохлорид вводили в течение 12 дней в дозах, возраставших от 10 до 60 мг/кг, 2 раза в сутки (в 8.00 и 20.00). Через 36 часов после последней инъекции морфина животных помещали в "открытое поле" на 3 минуты для регистрации изменения общеповеденческих и наличия специфических абстинентных реакций. Выражали в баллах суммарный показатель изменения горизонтальной и вертикальной двигательной активности, наличия и частоты груминга, отряхиваний, нарушения дыхания и позы, птоза, пилоэрекции, вокализации, скрежета зубами, корчей, судорог, бегства, ринореи, встряхивания лапами, диареи. Оценку тяжести синдрома отмены морфина производили индивидуально у каждого животного, подсчитывая сумму наблюдаемых у него тех или иных признаков в тесте "открытое поле", умноженных на соответствующий индекс, определяющий специфичность данного признака (Судаков с соавт., 1994).

Изучение основных характеристик ц- и б- опиатных рецепторов продолговатого мозга, среднего мозга и коры больших полушарий проводили радиолигандным методом, описанным Зайцевым (1986). Концентрацию белка в пробах определяли по методу Лоури. Расчеты концентрации рецепторов и константы диссоциации проводили в координатах Скетчарда, з последующей статистической обработкой данных.

Обработка результатов проводилась при помощи пакета статистических программ "Microstat" с использованием t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. ВЛИЯНИЕ МОРФИНА И АНТИПАИНА НА ТРАНСКРИПЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ ХРОМАТИНА ЯДЕР НЕРВНЫХ КЛЕТОК РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУР МОЗГА КРЫС.

Работа выполнена совместно с сотрудниками кафедры биологии Го-¡ударственного Медицинского Университета.

Известно немного работ, которые анализируют изменения, происхо-,ящие на уровне транскрипции при введении морфина In vitro. Некото-ые исследователи полагавт, что добавление морфина к хроматину, выеденному из мозга крыс, ранее^ не морфинизированиых , к изменению ранскрипции не приводит (Clouet, 1971; Castles, 1971). Однако Hook

et al, (1985), применяя метод гисторадиоавтографии наблюдали In vitro повышение включения Н3-UTP в ядра невроцигов краниального шейногс симпатического узла кролика и крысы под влиянием морфина и эндогенных опиоидов. Задачей настоящёго исследования было изучить In vitr< влияние морфина и антипаина на транскрипционную активность хроматин; ядер нервных клеток различных структур мозга крыс.

В экспериментах использовали 32 крысы. После декапитации животных, фрагменты указанных выше структур (80-100 мг) измельчали Д( размеров 1 х 0.5 х 0.5 мм и инкубировали по методике, описанно] Бродским с соавторами (1988). Время преинкубации составляло 30 ми нут. Для изучения влияния морфина и антипаина на транскрипционну активность хроматина,, препараты вносили в инкубационную смесь в кон центрациях 8 мМ и 0.08 мМ соответственно. Через 60 минут.в инкубаци онную смесь вносили Н3-уридин и продолжали инкубировать при темпера туре 37°с. Контрольными являлись срезы, которые инкубировали в сред без добавления морфина или антипаина. Результаты выражали в удельно радиоактивности срезов (в имп/мин/мг сырой массы).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что реак ция аппарата транскрипции нервных клеток.на воздействие' морфина антипаина во всех исследуемых структурах однонаправленна (Рис. 1) Инкубация срезов с морфином вызывает значительное достоверное повь шение относительного, с поправкой на пул, включения Н3-уридина суммарную РНК, причем прирост значительно выше в структурах, принад лежащих к эндогенной антиноцицептивной системе (большом ядре шве центральном сером веществе), и в лимбических структурах (зоне СА-гиппокампа, ■ вентромедиальном гипоталамусе). Наименьший прирос транскрипционной активности при инкубации срезов в среде, содержаще морфин, отмечен в спинном мозге. Достоверное повышение относительш го, с поправкой на пул, включения Н3-уридина в суммарную РНК набл! дается во всех структурах мозга, кроме миндалины и спииного мозг; инкубированных в среде, содержащей антипаин. Наибольший приро! транскрипционной активности при действии антипаина наблюдался в ti структурах, в которых отмечен максимальный прирост транскрипционн активности и при действии морфина. При совместном введении препар тов в инкубационную смесь, эффект морфина достоверно снижался всех исследованных структурах, кроме коры мозжечка, миндалины спинного мозга, в спинном мозге уровень включения Н3-уридина знач тельно возрастал относительно контрольного уровня и действия преп

1300 1100 900 700 500

300 100

SMC HIPP AMYG ACC VMH NRM SG CBL MEDUL

E3i Шг Е23э

Рис. l. Показатели включения НЗ-ур"идиНа в суммарную мРНК нервных клеток сенсомоторной коры (SMС). гиппокампа (HIPP), миндалины (AMVG). прилежамего ядра (АСС). вентронедиального гипоталамуса (VMH). большого ядра шва (NRM). центрального серого вещества (SG). коры мозжечка (CBL). спинного мозга (MEDUL) крыс при введении в инкубационную среду морфина (1); антипаина (2); совместно морфина с антипаином (31.

»« - р< о.01; » - р<0.05 (по сравнению с контролем): ++ - р<0.01; + - р<0.05 (по сравнению с морфином)

По оси ординат - показатели включения НЗ-уридина в суммарную мРНК. выраженные в процентах по отношению к контролю. Показатели контрольной группы животных приняты за 100%.

нов каждого в отдельности (Рис. 1).

Таким образом, повышение транскрипционной активности хроматина ;ер нервных клеток исследованных структур головного мозга, вызван-е добавлением в инкубационную среду морфина, подавляется ингибито-м кальций-зависимых эндопептидаз, селективным блокатором экспрес-и СОС-генов антипаином.

Различие в реакции аппарата транскрипции нервных клеток разных руктур ЦНС на введение морфина объясняется, возможно, разным со-ржанием "морфин-чувствительных" сайтов ДНК: их меньше в таких уктурах, как сенсомоторная кора, кора мозжечка и больше в тех руктурах, которые вовлечены в регуляцию болевой чувствительности и ляются важными звеньями эндогенной анальгетической системы голов-го мозга (большое ядро шва, центральное серое вещество). Совмест-

ное введение морфина и антипаина в инкубационную среду значительно снижает показатели включения меченого уридина в суммарную мРНК структур эндогенной антиноцицептивной системы и резко увеличивает исследуемый показатель в спинном мозге, что, вероятно, свидетельствует о реципрокных взаимоотношениях описанных структур. Прирост транскрипционной активности, вызываемый морфином, подавляется анти-паином, что, по-видимому, свидетельствует об ингибирующем действии антипаина в отношении протеазного механизма регуляции активации "морфин-чувствительных" сайтов ДНК. Возможно, этот механизм регуляции аналогичен протеазному механизму регуляции СОС-генов у прокариот (Муеп е! а1, 1977). Согласно научным данным других исследовательских групп модуляция матричной активности при действии морфина связана с активацией экспрессии гена, кодирующего орнитиндекарбоксила-зу. Активация орнитиндекарбоксилазы может происходить не только путем экспрессии гена, но и регулироваться уровнем предсинтезированной иРНК (Ярыгин, 1987; МивШп е1 а1, 1987; Ре11еяг1п1-С1агар1е1го еЬ а1. 1988). Если предположить, что обнаруженные нами изменения в работе генетического аппарата нейронов под действием морфина подвергаются направленной коррекции (блокада экспрессии генов при воздействии на протеазный механизм регуляции синтеза мРНК). то становится очевидным факт возможной модуляции эффектов морфина.

2. ИЗУЧЕНИЕ НЕЙРОХИМИЧЕСКОГО СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ АНТИПАИНА К ЛЮ-ПЕПТИНА.

Использовали 16 крыс. Методом радиолигандного связывания было обнаружено, что люпептин способен ингибировать связывание меченого налоксона в достаточно низких концентрациях 10"6 - 10"5 М. Антипаин конкурировал с меченым спироперждолом и клонидином за места их специфического связывания в грубой фракции синаптических мебран стриа-тума и коры головного мозга крыс. Следует отметить, что наблюдаемое сродство к Б2-дофаминергическим и а2 - адренергическим рецепторам наблюдается только в очень высоких концентрациях лиганда Ю"4М. Основные характеристики нейрохимического спектра действия антипаина и люпептина представлены в таблице N 1.

Следовательно, можно считать, что антипаин обладает слабым сродством к Б2 -дофаминергическим и а2 - адренергическим рецепторам, а люпептин к одному из подтипов опиатных рецепторов головного мозга.

Таблица N1.Нейрохимический спектр действия антипаина и

люпептина.

Исследуемые рецепторы Антипаин Люпептин

д- опиатные - 1С50 = 7.610 10"5М К^ — 1.52 10"5М

D2-дофаминергические 1С50= 1.753 10'4М Kt = 2.153 10"5 -

Sg-серотонинергические - -

а4 - адренергические - -

аг -адренергические 1С50= 1.194 10"4М Kt= 2.756 10"5 -

Р -адренергические - -

Бенздиазепиновые - -

Примечание: "-" - обозначено отсутствие способности исследуемых зецеств конкурировать с мечеными лигандами за места их специфического связывания.

3. ВЛИЯЙИЕ АНТИПАИНА И ЛЮПЕПТИНА НА ЭФФЕКТЫ ОСТРОГО ДЕЙСТВИЯ ЮРФИНА У КРЫС.

3. 1. Влияние антипаина и люпептина на анальгетические свойства горфина.

В опытах на крысах установлено, что морфин в дозе 5, 10 мг/кг 1ри подкожном или внутрнбрюшинном введении устраняет боль, вызванную термическим раздражением хвоста (Abbott et al, 1982; Charles ,1983). 1елью настоящего исследования было изучение влияния морфина, антипаша и люпептина на длительность латентного периода реакции отдерги-¡ания хвоста из горячей воды.

Использовали 232 крыс (29 групп по 8 крыс в каждой) . Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор за 15 минут до 'вотирования. Животным экспериментальных групп за 15 минут до тести-ювания: морфин в дозах 2.О,.5.О, 10 мг/кг; антипаин или люпептин -1.05, 0.1, 0.5, 1. 0, 5.0, 10, 25 мг/кг; совместно морфин (10 мг/кг)

и антипаин в тестируемых дозах; совместно морфин (2 иг/кг) и люпеп-тин в дозах 0.5, 1.0, 5.0 мг/кг; совместно морфин (10 мг/кг) и лю-пептин в дозах 0.05, 0.1, 0.5 мг/кг.

Через 30 минут после введения морфина гидрохлорида в дозе 5, 10 мг/кг у крыс наблюдалось увеличение латентного периода реакции отдергивания хвоста (ЛП РОХ) по сравнению с контрольными животными (р<0.01). ЛП РОХ был соответственно равен 21.12 ± 3.13 сек и 21.27 ± 4.32 сек. У крыс контрольной группы на 30-й минуте тестирования ЛП РОХ составлял 4.25 ± 0.26 сек. Наблюдали также увеличение ЛП РОХ у крыс, которым вводили антипаин или люпептин в дозах 0.05, 0.1, 1, 10 мг/кг (р<0.05, в сравнении с контрольной группой крыс). У крыс, которым вводили антипаин или люпептин в дозах 0.5, 5 мг/кг ЛП РОХ не отличался от ЛП РОХ контрольных животных.

Было обнаружено усиление анальгетического эффекта морфина в дозе 10 мг/кг при добавлении в раствор морфина антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг (р<0. 01).

Анальгетический эффект морфина в дозе 2 мг/кг не был выражен, латентный период РОХ не отличался от латентного периода РОХ контрольной группы животных и составлял 4.25 ± 0.36 сек. Введение антипаина или люпептина в дозе 0.5, 1, 5 мг/кг совместно с морфином в дозе 2 мг/кг вызывало увеличение латентного периода реакции отдергивания хвоста у крыс(р<0.01, в сравнении с контрольной группой крыс).

Таким образом, потенцирующее действие антипаина и люпептина на анальгетический эффект морфина проявляется при совместном внутрибрю-шинном введении морфина в дозе 2 мг/кг с люпептином в дозах 0.5, 1, 5 мг/кг и морфина в дозе 10 мг/кг с антипаином или люпептином'в дозе 0.5 мг/кг.

Возможно, слабые анальгетические свойства и способность к потенцированию и усилению антиноцицептивных свойств морфина у антипаина и люпептина связана с их влиянием на нейрохимические и молекулярные процессы в системах, вовлеченных в механизмы антиноцицепции : норадренергическую (антипаин имеет сродство к а2-адренергическим рецепторам) и опиатную (люпептин имеет сродство к одному из подтипое опиатных рецепторов). Неодинаковый вклад этих систем в механизмь анальгетического действия морфина, по-видимому, объясняет разницу е потенцирующих и усиливающих способностях антипаина и люпептина.

Полученные в наших экспериментах результаты коррелируют с данными, полученными другими исследовательскими группами. Показано, чт(

антиноцицептивное действие морфина реализуется посредством активации эндогенных ошоидных систем через ц- и б- опиатные рецепторы (Vande-rah, 1992; Takemorl et al, 1992). Наряду с опиоидными системами доказано участие норадренергических и серотонинергических механизмов в антиноцицепции, вызываемой морфином (Reddy et al, 1980; Mellne et al, 1985). Некоторые данные указывают на то, что важную роль в ноци-цепции и действии опиатов играет кальций (Ross et al, 1979). Опиатные рецепторы функционально связаны с потенциал-зависимыми ионными каналами, и непосредственная стимуляция эе-рецепторов и опосредованная стимуляция д-рецепторов опиатами подавляет кальциевую проводимость (North, 1986). Stlvens et al, (1993) предполагают, что все вещества, которые используют Саг+ из цитоплазмы, блокируют анальге-тический эффект морфина. Поэтому блокада кальций-зависимых эндопеп-тидаз "экономит" внутриклеточный кальций, что, по-видимому, также может приводить к усилению анальгетического эффекта морфина.

3. 2. Влияние антипаина и люпептина на вторично-подкрепляющие свойства морфина.

К настоящему времени накопился определенный материал, характеризующий условно-подкрепляющие свойства морфина при системном введении. Условная реакция предпочтения места формируется при сравнительно невысоких дозах опиата: 0.08 мг/кг при внутривенном, 0.2 мг/кг при подкожном, 1-5 мг/кг при внутрибрюшинном введениях (Katz et al, 1979, Mucha et al, 1984). В данном исследовании мы изучали влияние антипаина и люпептина на вторично-подкрепляющие свойства морфина, определяемые у крыс в тесте "предпочтение места".

В экспериментах использовали 100 крыс (10 групп по 10 крыс в каждой). Морфин вводили в дозе 5.0 мг/кг, антипаин или люпептин - в дозе 0. 5 мг/кг. совместно морфин в дозе 5.0 мг/кг с антипаином или люпептином в дозе 0. 5 мг/кг, двум группам крыс антипаин или люпептин в дозе 0.5 мг/кг вводили за 1 час до 1-го обусловливания и двум группам - за 1 час до контрольного тестирования; животным контрольной группы вводили физ. раствор. Крысам двух групп вводили физ. раствор до первого обусловливания, за 1 час до контрольного тестирования.

Обусловливание, производимое в светлом отсеке "челночной камеры" после инъекции морфина, приводило к увеличению времени пребыва-

ния крыс в светлом отсеке (на 21.7% по сравнению с контрольной группой животных). При этом у всех животных после обусловливания морфина наряду с изменением временной асимметрии отмечалась инверсия, т.е. у животных ранее предпочитавших темный отсек, возникало предпочтение светлого отсека "челночной" камеры.

Введение физиологического раствора, антипаина или люпептина за 1 час до контрольного тестирования и однократно за 1 час до первой инъекции морфина животным, обусловливание которых проходило при введении морфина, не влияло на характер инверсионного действия последнего. Предпочтение светлого отсека сохранялось у 80% животных. Добавление антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг в раствор морфина, вводимого в период обусловливания блокировало формирование инверсий. Контрольное тестирование показало, что предпочтение темного отсека "челночной камеры" сохранилось у 90%■ животных.

Антипаин и люпептин в дозе 0.5 мг/кг не проявляли воспроизводимого подкрепляющего действия. Инверсия исходной реакции предпочтения темного отсека "челночной камеры" не наблюдалась ни у одного животного. Время пребывания в светлом отсеке после обусловливания и введения антипаина или люпептина не отличалось от такого, же показателя контрольной группы животных.

Таким образом, можно заключить, что только"добавление антипаина или люпептина в раствор морфина изменяет характер инверсионного' действия наркотика, т. е., по-видимому, уменьшает его Положительно-подкрепляющие свойства. ■ ' - , .

Возможно, уменьшение подкрепляющего действия' морфина происходит вследствие того, что антипаин и люпептин посредством ■ ингибирования определенных кальций-зависимых эндопептидаз изменяют активность определенных рецепторов в центральной нервной системе, вовлеченных . в механизмы подкрепляющего действия морфина. В научной литературе широко обсуждается вопрос участия различных систем в реализации вторично-подкрепляющих эффектов опиатов. Показано участие Dj- и 1)г-до-фаминергических рецепторов в подкрепляющих эффектах морфина (0.5 мг/кг) на модели условной реакции предпочтения места. Эксперименты 'с хронической инфузией антагонистов опиатных рецепторов демонстрируют участие ¡1- и 5- опиатных рецепторов в реализации подкрепляющих эффектов опиатов (Suzuki et al, 1991). . Доказан общий дигидропири-дин-чувствительный механизм реализации подкрепляющего действия наркотиков-психостимуляторов и морфина (Кузьмин с соавт. 1991). Lynch

et al, (1984) наблюдали у крыс, после обучения в Т-образном лабиринте, увеличение концентрации глютаматных рецепторов гиппокампальных и . теленцефалнческих нейронов. Функциональное экспонирование глутамат-ных рецепторов происходит в результате протеолиза фодрина Саг* -зависимой тиоловой протеазой кальпаином, люпептин (при интратекальном введении) ингибирует этот процесс, как следствие, не происходит сохранения навыков обучения. В этой связи, нельзя исключить возможности влияния антипаина и люпептина на ассоциативные процессы, происходящие в головном мозге во время обучения. Для более детального изучения механизмов подкрепляющего действия морфина и возможности их модуляции необходимы исследования по изучению влияния антипаина и люпептина на первично-подкрепляющие свойства морфина. Исследования в этой области будут проведены нами в дальнейшем. •

4. ВЛИЯНИЕ АНТИПАИНА И ЛЮПЕПТИНА НА ЭФФЕКТЫ ХРОНИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МОРФИНА..

Развитие лекарственной зависимости и толерантности связано с изменением в активности генетического аппарата нервных клеток (Chang et al-, 1988; Hayward et al, 1990; Gultart et al; 1992; Hope et al, 1992; Ярыгин. 1990; Крылова, 1994). Установлено, что многократное введение морфина активирует ядерную и рибосомальную синтетическую активность.нейронов различных структур ЦНС (Clouet et al, 1971; Cohen et al*. 1977;. Lee et al. . 1978). Обнаруженный факт связывают с развитием толерантности и зависимости. Действительно, хроматин, выделенный' из ядер клеток головного мозга мышей и крыс, толерантных к морфину, обладает повышенной матричной активностью (Castles et al, 1972; Lee et .al, 1975; Ogurl et al. 1976; Stokes et al, 1980; Hook et al. 1981). Возможно, что процесс формирования зависимости и толерантности к морфину включает экспрессию генов, индуцированных морфином. В экспериментах In vitro нами установлено, что антипаин подавляет экспрессию генов, индуцированную морфином (см. выше). В настоящей серии экспериментов мы попытались оценить влияние антипаина и люпептина на процессы формирования физической зависимости от морфина, синдром отмены и толерантности к анальгетическому действию последнего.

В экспериментах использовали 210 крыс (21 группа по 10 в каждой). Животным контрольной группы в течение 12-ти дней вводили физ.

раствор; 1 группе крыс - морфин; 2 группе крыс - антипаин в дозе 0.5 мг/кг; 3 группе - люпептин в дозе 0.5 мг/кг; 4 группе крыс - морфин, а за 1 час до его последней инъекции физ. раствор; 5 группе крыс -морфин , .а за 1 час до контрольного тестирования физ. раствор. Для оценки влияния антипаина и люпептина на формирование зависимости от морфина 6 и 7 группам - антипаин или люпептин в дозе 0.5 мг/кг добавляли в раствор морфина; для оценки влияния антипаина на формирование синдрома отмены морфина 8, 9.и 10 группам - антипаин'в дозах 1, 10 и 50 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина; для оценки влияния антипаина на выраженность сформировавшегося синдрома отмены 11 и 12 группам - антипаин в дозах 10 и 50 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования.

4. 1. Влияние антипаина и люпептина на Формирование зависимости от морфина у крыс.

У крыс, которым в течение 12-ти дней двукратно вводили физиологический раствор, не было обнаружено изменения поведенческих реакций, характерных для интактных животных. Многократные инъекции морфина в нарастающих дозах вызывали формирование физической зависимости от морфина - у животных через 36 часов после последней ' инъекции морфина наблюдался выраженный синдром отмены. Средний суммарный показатель абстиненции (СПА), характеризующий все исследуемые общеповеденческие и специфические реакции крыс, в группе морфинзависимых крыс был равен 10.125 ± 0.26. Потеря в весе за 36 часов после отмены морфина у животных составляла 22.5 ±5.3 грамма.

Инъекции антипаина или люпептина в дозе о.5 мг/кг в течение 12-ти дней не вызывали Формирование физической зависимости: у крыс не было выявлено наличия специфических реакций, характерных для синдрома отмены. Суммарные показатели поведенческих характеристик, оцениваемые по шкале СПА у животных этих групп соответственно были 3.1±0.53 и 3.3+1.45, и достоверно не отличались от такого же показателя животных контрольной группы 2.9±0.73. Не было обнаружено достоверного изменения в весе за период отмены препаратов у крыс, получавших многократно антипаин' или люпептин, и животных контрольной группы.

Добавление в раствор морфина антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг приводило к тому, что признаки синдрома отмены были менее выражены. Средний суммарный показатель синдрома отмены морфина состав-

лял 6.78+0.57 и 6.11±0.35, и был достоверно меньше такого показателя у животных, получавших морфин (р<0.01). У крыс этих групп отмечалось меньше таких специфических проявлений, как отряхивания, скрежет зубами, встряхивание передними лапами, диспное. Потеря в весе у животных, получавших (морфин и люпептин в дозе 0.5 мг/кг), составляла 14.8 ±3.7 грамма и достоверно отличалась от такого же показателя у морфинзависимых крыс (р<0.05).

Таким образом, добавление в раствор морфина антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг приводит к уменьшению формирования физической зависимости от данного наркотика.

4. 2. Влияние антипаина на развитие синдрома отмены у морфинзависимых крыс.

Введение физиологического раствора морфинзависимым крысам за 1 час до последней инъекции морфина не приводило к достоверному изменению суммарного показателя абстиненции в сравнении с группой морфинзависимых крыс, СПА составлял 9.73+0.51.

Введение антипаина в дозах 1, 10 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина приводило к тому, что средний суммарный показатель синдрома отмены морфина был меньше, чем в группе морфинзависимых крыс (р<0.01) и составлял соответственно 7.5 + 0.47 и 7.8 ± 0.63 Снижение среднего суммарного показателя синдрома отмены происходило за счет уменьшения таких проявлений, как отряхивания, скрежет зубами, диспное, пилоэрекция, ринорея. Введение антипаина в дозе 50 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина не приводило к достоверному снижению суммарного показателя синдрома отмены морфина. Средний суммарный показатель синдрома отмены морфина у крыс этой группы был равен 9.6 ± 0.58. Потеря в весе за период отмены морфина у крыс, которым вводили антипаин в дозе 1 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина, составляла 12.0 ± 2. 7 грамма и отличалась от такого же показателя морфинзависимых крыс (р<0.05).

Таким образом, внутрибрюшинное введение антипаина в дозах 1. 10 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина приводило к ослаблению формирования синдрома отмены морфина у морфинзависимых крыс.

4. 3. Влияние антипаина на выраженность сформировавшегося синдрома отмены морфина у морфинзависимых крыс.

Введение физиологического раствора морфинзависимым крысам за 1

час до контрольного тестирования не приводило к уменьшению выраженности синдрома отмены морфина у этой группы животных. Средний суммарный показатель абстиненции составлял 9.57+0.83 балла и достоверно не отличался от СПА морфинзависимых крыс..

Введение антипаина в дозах 50 мг/кг и 10 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования в "открытом поле" приводило к тому, что проявление признаков синдрома отмены морфина у этих животных было менее выражено. Средний суммарный показатель был равен 6.5±0.37 и 6.4±0.43, и отличался от такого же показателя группы морфинзависимых крыс. Уменьшение суммарного показателя синдрома отмены происходило, в основном, за счет' уменьшения таких проявлений, как отряхивания, скрежет зубами, встряхивания лапами.

Таким образом, внутрибрюшинное введение антипаина в дозах 10, 50 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования в "открытом поле" снижает выраженность основных специфических признаков синдрома отмены морфина у морфинзависимых крыс.

4. 4. Влияние антипаина и люпептина на развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина у крыс.

Использовали 90 крыс (9 групп по 10 в каждой). Крысам контрольной группы вводили физ. раствор, 2, 3 группам крыс. - антипаин или люпептин в дозе 0.5 мг/кг добавляли в раствор морфина в период мор-финизации; 4, 5, 6 группам - антипаин в дозах 1, 10, 50 мг/кг вводили на 12-й день за 1 час до последней инъекции морфина в дозе 60 мг/кг, 7. 8 группам - антипаин или люпептин, 9 группе - физ. раствор за 1 час до последней инъекции морфина. Определяли пороги болевой чувствительности при введении морфина в дозе 10 мг/кг и 60 мг/кг (после 12-ти дневной морфинизации).

Введение физиологического раствора, антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг ежедневно внутрибрюшинно крысам не оказывало влияния на болевую чувствительность крыс. Латентный период реакции отдергивания хвоста из горячей воды (ЛП РОХ) у крыс контрольной группы был равен 4.66 ± 1.9 сек и не отличался от результатов первичного тестирования 4.25 ± 1.0 сек. У животных, которым ежедневно вводили антипаин или люпептин, ЛП РОХ составляли соответственно 4.6 ± 0.44 сек и 5.3 ± 0.26 сек и также не отличались достоверно от первоначальных результатов тестирования (5.03 ±0.5 сек и 4.6 ± 0.5 сек соответственно).

Многократные инъекции морфина в нарастающих дозах вызывали формирование толерантности к анальгетическому действию морфина - эффект лорфина в дозе 60 мг/кг не отличался достоверно от анальгетического эффекта морфина в дозе 10 мг/кг, ЛП РОХ был равен 17.9 ± 2.1 сек. введение антипаина в дозах 1, 10 и 50 мг/кг морфинзависимым животным гак же не приводило к проявлению достоверного анальгетического эффекта морфина в дозе 60 мг/кг. Совместное введение нарастающих доз юрфина и антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг не влияло на шальгетический эффект морфина в дозе 60 мг/кг у толерантных живот^

1ых.

Таким образом, антипаин и люпептин не оказывают влияние на раз-штие толерантности к анальгетическому действию морфина у крыс.

4. 5. Изучение влияния люпептина на состояние д- и 5 - опиатных юиепторов головного мозга морфинзависимых крыс в период отмены мор->ина.

В современной литературе имеются противоречивые данные о состо-;нии опиатных рецепторов у морфинзависимых животных. Davis et al, 1975) показали, что специфическое связывание 3Н-морфина в срезах твола мозга при хронической опиатной стимуляции изменяются: более :ем в 3 раза увеличивается константа диссоциации при сохранении мест вязывания. Sivam et al (1982) обнаружили изменение только числа ест связывания, но не аффинитета к лигандам при хроническом введе-ии морфина во фракции синаптических мембран мозга мышей. Данные, олученные другими исследователями, указывают на то, что количество аффинные свойства опиатных рецепторов у толерантных животных не зменяются (Terenlus, 1984; Wuster et al, 1985). При формировании олерантности к опиатам рецепторный резерв уменьшается, что не соп-яжено с изменением параметров специфического связывания (Chavkln et 1, 1984). Обсуждается возможность интерконверсии различных подтипов пиатных рецепторов и других форм изменения их свойств (Terenlus, 984). Зайцев с соавт. (1986) обнаружили изменение параметров связы-ания лигандов с б-опиатными рецепторами у толерантных к морфину рыс. Возможно изменения в опиоидной рецепции связаны с изменениями работе генетического аппарата нейронов, происходящими при хрони-эской морфинизации. Целью настоящего исследования было изучение лияния люпептина на состояние ц- и 5-опиатных рецепторов морфинза-

висимых крыс в условиях отмены морфина.

Использовали 50 крыс (5 групп по 10 животных в каждой). 1 группе крыс в течение 12 дней вводили физ. раствор, у 2 - 5 групп крыс вырабатывали физическую зависимость от морфина по выше описанной схеме, причем крысам 3, 4, ■ 5 групп за 1 час до последней инъекции морфина вводили соответственно 1, 10, 50 мг/кг люпептина. Животных забивали декапитацией через 36 часов после последней инъекции морфина. Используя радиолигандный метод, изучали основные характеристики /1- и 5- опиатных рецепторов продолговатого мозга, среднего мозга и коры больших полушарий.

В результате проведенных нами исследований было обнаружено, что у морфинзависимых крыс в состоянии отмены морфина наблюдается изменение состояния 5-опиатных рецепторов в коре и продолговатом мозге. В коре головного мозга у крыс увеличивалась плотность 5-опиатных рецепторов, Вшах составляло 7.58± 0.29 и отличалось от такого же показателя животных контрольной группы 5.5 ± 0.21 (р<0.01), в продолговатом мозге у крыс происходило снижение чувствительности б-опиатных рецепторов Кй составляла 0.633± 0.109 и отличалась от такого же показателя контрольной группы животных 0.36± 0.028 (р<0.05). При этом не было обнаружено изменений в состоянии ¿1-опиатных рецепторов всех исследованных отделов головного мозга морфинзависимых крыс в состоянии отмены морфина.

Введение морфинзависимым крысам за 1 час до последней инъекции морфина люпептина в дозе 1 мг/кг приводило к снижению концентрации б-опиатных рецепторов в коре головного мозга (Вшах = 6.141±0.43; группы морфинзависимых крыс - Вшах = 7.58 ± 0.29) (р<0.05). Введение люпептина в дозе 50 мг/кг морфинзависимым крысам приводило к возрастанию концентрации 5-рецепторов в продолговатом мозге, Втах составляло 7.65± 1.141 и отличалось от такого же показателя морфинзависимых крыс 3.12+1.25 (р<0.01).

Таким образом, у морфинзависимых крыс после отмены морфина наблюдается изменение состояния б-опиатных рецепторов головного мозга: происходит увеличение плотности данного типа рецепторов в коре головного мозга и снижение чувствительности в продолговатом мозге. Ведение люпептина в дозе 1 мг/кг морфинзависимым крысам приводит к тому, что состояние б-опиатных рецепторов головного мозга морфинзависимых крыс не отличается от состояния таковых у контрольных животных.

Очевидно, возрастание концентрации 5-опиатных рецепторов в коре

головного мозга морфинзависимых крыс в состоянии отмены морфина может быть вызвано ответной реакцией на отмену наркотического вещества, поступавшего в организм в больших концентрациях. Ослабление чувствительности 5-опиатных рецепторов в продолговатом мозге, по-видимому, связано с механизмом адаптации организма к токсическому действию морфина.

По современным научным представлениям в генезе морфинового абстинентного синдрома задействованы различные механизмы и нейромедиа-торные процессы. Известную роль играют ц- и 5- опиатные рецепторы в развитии опиатной зависимости и толерантности (Lee et al, 1991, Зайцев, 1986). В происхождении синдрома отмены опиатов существенное значение придают катехоламинергическим механизмам (Van der Laan, 1987). Кроме того, в научной литературе имеется немало работ, посвященных адаптивным процессам, происходящих в нейронах, при действии опиатов. Известно, что при хронической опиатной стимуляции развиваются контрадаптивные реакции в нейрональных системах: происходит компенсаторное увеличение активности аденилатциклазы, восстанавливается вход кальция и увеличивается аффинитет в местах секреции, ионов (Kuriyama, 1982; Lollens et al, 1978; Way, 1983). Хроническое введение морфина приводит к увеличению содержания кальмодулина в синапто-сомах мозга крыс (Simantov. et al, 1982; Bonnet et al, 1983). Baeyens et al., 1987; Саго et al, 1988; Antklewlchz-Mlchaluk et al, (1990) продемонстрировали, что состояние абстинентного синдрома у крыс связано с достоверным увеличением плотности Н3-нитридипин-связывающих участков мембран коры головного мозга, отражающих состояние потенциал-зависимых кальциевых каналов и, соответствует усилению болевой чувствительности и экспрессии характерных поведенческих признаков синдрома отмены у морфинзависимых крыс. В работах Romualdi et al, (1991) и др. отмечено, что хроническое введение опиатов вызывает изменения в эндогенной опиоидной системе, касающиеся регуляции экспрессии генов. Показано, что при однократном введении морфин индуцирует экспрессию гена c-fos в мозге крыс, а хроническое введение этого наркотика подавляет данную реакцию, усиление реакции наблюдается вновь в результате резкой отмены препарата (Крылова с соавт., 1993; Mestler et al, 1992, Hayward et al. 1990). Возможно, хроническое действие морфина снижает чувствительность опиатных рецепторов или вызывает изменения функционирования связанных с рецепторами систем вторичных мессенджеров, которые регулируют процессы транскрипции ге-

на c-fos в мозге. Существуют данные, свидетельствующие об изменении мембранных рецепторов, компонентов системы вторичных мессенджеров и процессов фосфорилирования белков в ряде регионов мозга под действием хронической морфинизации и подтверждающие данную гипотезу (Roders et al 1986; Nestler et al. 1989; Guitard et al. 1989. 1990; 1992; Hayward et al, 1990). Хроническое введение морфина вызывает изменения в системе синтеза и деградации эндогенных опиоидных пептидов: увеличение активности энкефалиназы (Hersh et al, 1982; Scb.r;artz et al. 1981), модуляции экспрессии гена проэнкефалина, связак^сй с активацией транскрипции "ранних" генов c-fos и c-jun (Chang, 1990; Sonnenberg et al, 1989; Romuald! et al. 1991). Таким образом, изменения в работе генетического аппарата нейронов различных мозговых регионов, участвующих в реализации эффектов морфина, наблюдаются только в критических состояниях для клетки: в ответ на однократное введение морфина и отмену этого наркотика после длительной хронической морфинизации. В случае хронического введения морфина в нейронах запускаются компенсаторные приспособительные процессы, направленные к приведению состояния клетки к "гомеостатическому" уровню функционирования в условиях постоянного поступления наркотика и, по-видимому, определяют феномен опиатной толерантности. Возможно, поэтому модулирующее действие антипаина и люпептина проявляется в отношении однократного введения морфина и при его отмене после длительной хронической морфинизации, но не в отношении развития толерантности. Полученные нами данные указывают на различие механизмов анальгетичес-кого, подкрепляющего эффектов морфина и механизмов развития толерантности и зависимости. Различие этих процессов продемонстрировано в работах Kaneto et al, 19S2; Schultz et al, 1980; Panerai et al, 1987. Возможно, развитие физической зависимости от морфина, но не толерантности к его анальгетическому действию включает экспрессию определенных генов, которая может быть блокирована антипаином или люпептином. По-видимому, изменения в 5-опиоидной рецепции в период хронического введения морфина и после его отмены обусловлены активирующим действием морфина на генетический аппарат нервных клеток. Ан-типаин и люпептин, подавляя прирост транскрипционной активности нервных клеток, предотвращают изменения 5-опиоидной рецепции, таким образом "смягчают" выраженность синдрома отмены. Способность к изменению эффектов морфина у антипаина и люпептина связана с их непосредственным ингибирующим влиянием на протеазный механизм регуляции

экспрессии генов, контролирующее цитоплазматическое звено: синтез мРНК. изменяющийся под влиянием морфина. Кроме того, имея некоторую специфическую аффинность, указанные соединения способны посредством связывания с определенными рецепторами нейронов, вовлеченных в реализацию эффектов морфина, модулировать эффекты последнего.

На основании изложенного выше, можно предположить, что антипаин и люпептин могут влиять на следующие процессы взаимодействия морфина с нервной клеткой: а) взаимодействия морфина с д-опиатными рецепторами, б) сопряженной активации аг-адренергических или Б2-дофаминер-гических рецепторов, в) накопления сйМР, сАМР, Са2+ и передачи внутриклеточных сигналов с помощью сСМР, сАМР, Са2+ и других молекул вторичных мессенджеров специфическим протеинкиназам, г) эквивалентной экспрессии генов и синтеза мРНК, д) увеличения синтеза 5-опиатных рецепторов, е) изменения эффекторной информации, так называемого биологического ответа нейрона.

Таким образом, полученные нами результаты дополняют существующие в настоящий момент представления о механизмах действия морфина и позволяют наметить возможные пути коррекции эффектов последнего посредством воздействия ингибиторами кальций-зависимых эндопептидаз.

ВЫВОДЫ.

1. Воздействие морфина приводит к усилению транскрипционной активности нервных клеток в переживающих срезах различных структур ЦНС.

2. Антипаин подавляет прирост транскрипционной активности нейронов, вызванный морфином.

3. Совместное введение антипаина или люпептина с морфином усиливает анальгетический эффект и уменьшает вторично-подкрепляющие свойства последнего.

4. Добавление в раствор морфина антипаина или люпептина приводит к уменьшению выраженности формирования физической зависимости от этого наркотика.

5. Однократное введение антипаина морфинзависимым крысам вызывает уменьшение выраженности синдрома отмены.

6. Формирование синдрома отмены у морфинзависимых животных сопровождается изменением плотности и чувствительности 5- опиатных рецепторов, что, по-видимому, обусловлено активирующим действием мор-5ина на генетический аппарат нервных клеток.

7. Антипаин и люпептин, подавляя усиление транскрипционной активности нервных клеток, предотвращают изменения 6- опиоидной рецепции в период отмены у морфинзависимых крыс, что, по-видимому, может обусловливать уменьшение выраженности синдрома отмены.

8. Антипаин и люпептин являются перспективными соединениями для создания препаратов, купирующих опийный абстинентный синдром, а также в качестве добавок к морфину для усиления его анальгетических свойств и уменьшения наркогенного потенциала.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Люпина Ю. В., Влияние препарата АП на синдром отмены у морфинзависимых крыс. //Вопросы медико-социальной реабилитации больных алкоголизмом и наркоманией. Мат. республиканского совещания психиатров-наркологов 16-21 марта 1993 года, МЗ РФ, М, с. 105-108.

2. Люпина Ю. В., Характеристика поведенческого и нейрохимического спектра действия препарата АП. //Тезисы конференции молодых ученых России. МЗ РФ, М. 1993, с. 87.

3. Люпина D. В., Экспериментальное обоснование применения новой. группы препаратов для купирования абстинентного синдрома и в качестве анальгетиков. //Мат. международной конференции, МЗ Республики Беларусь, Гродно, 1993, с. 338-339.

4. Leuplna Yu. V., Sudakov S. К., . Yarygln V. N., Deverslty of morphine-induced analgesia, tolerance and dependence.//Abstract of IRNC 1994 Meeting. - Cape Cod, North Falmouth. MA, USA, N T52.

5. S. K. Sudakov, Yu. V. Leuplna, V. N. Yarygln, New drugs for modulation of opiate action.//Abstract of CPDD 1994 Annual Scientific Meeting. - Palm Beach, FL, USA.