Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Фармакологическое изменение эффектов морфина ингибиторами кальций-зависимых эндопептидаз

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РФ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

Р Г Б он

На правах рукописи

\ г дьк г ■

ЛЮПИНА Юлия Вячеславовна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗМЕНЕНИЕ ЭФФЕКТОВ МОРФИНА ИНГИБИТОРАМИ КАЛЬЦИЙ—ЗАВИСИМЫХ ЭНДОПЕПТИДАЗ

14.00.45 — Наркология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата миологических наук

МОСКВА — 1991

Работа выполнена в лаборатории нейробиологии влечений Института Медико-биологических проблем наркологии Государственного Научного Центра наркологии МЗиМП РФ.

Научный руководитель

доктор медицинских наук С. К. Судаков

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Л. В. Калюжный

доктор медицинских наук В. П. Нужный

Ведущее учреждение — Санкт-Петербугский Государственный Медицинский Университет им. И. П. Павлова.

Защита диссертации состоится « . 1994 г.

в « .-"¥<< » часов на заседании диссертационного совета . . . (^'¿¡'■рУ'Р^С^ при Государственном Научном Центре наркологии МЗиМП РФ (121921, Москва, Малый Могильцевский пер., 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ наркологии МЗиМП РФ.

Автореферат разослан « . . . » . . ... . 1994 года.

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат биологических наук

О. Ф. Львова

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Вещества опиатной природы, в частности морфин, широко применя-ся в медицинской практике благодаря своим анальгетическим свойс-ам. Однако, длительное применение морфина сопровождается патологи-ским влечением к препарату, психической и физической зависимостью выраженным абстинентным синдромом после резкой отмены этого нарко-ка. Особую озабоченность вызывает существенный рост распространён-сти наркоманий среди молодежи и подростков, а также тенденция к гширению использования кустарно изготовленных наркотических ве-зтв, в первую очередь опиатов (Попов, 1983; Бабаян с соавт., 1988; ублевский с соавт., 1989). Эйфоризирующее действие опиатов на че-зека давно и хорошо известно (Эрленмейер, 1899; Пятницкая, 1975). экспериментальных моделях на животных изучен морфо-физиологический Зстрат феномена опиатной зависимости (Olds, 1960; Weeks, 1962; Lois et al, 1973). В последние годы появляется все больше данных в чьзу того, что развитие лекарственной зависимости и толерантности 1зано с изменением в активности генетического аппарата нервных зток (Chang et al, 1989; Hayward et al. 1990; Gultart et al, 1992; )e et al, 1992; Ярыгин, 1990; Крылова, 1994). Обнаружено, что од-сратное введение морфина экспериментальным крысам ингибирует бел-¡ый синтез, но многократное введение этого наркотика, напротив, 'ивирует ядерную и рибосомальную синтетическую активность нейронов ¡личных структур ЦНС (Сох et al, 1970; Clouet et al, 1971; Cohen al, 1977). Последний факт связывают с развитием толерантности и 1Исимости. Вместе с тем, введение ингибиторов различных стадий [кового синтеза (актиномицин Д, 8-азагуанин, циклогексимид) досто-iHO снижает скорость формирования толерантности к морфину у мышей рыс.

Следует отметить, что важное место в регуляции функционирования ток и целостного организма занимают контролирующие и регуляторные теазные механизмы, включающие деятельность кальций-зависимых эн-ептидаз. Протеазные механизмы регуляции описаны для мембранных цессов, в частности, они вовлечены в механизм активации глутамат-, Hj-рецепторов, GABAB-рецепторов нейронов (Lynch et al 1983; 4; Majewska et al, 1984). Показано участие кальций-зависимых эн-ептидаз в процессах, происходящих в цитоплазме и затрагивающих оту мембраносвязанных белков кальпаина (Yoshida et al, 1983). демонстрирован протеазный механизм регуляции и контроля экспрес-генов (Myen et al, 1977). Морфин индуцирует изменения в мемб-

ранных, цитоплазматических процессах, в работе генетического аппар та клеток, возможно, оказывая влияние на активность определенн протеолитических ферментов, контролирующих и регулирующих эти пр цессы.

Поэтому применение селективных ингибиторов кальций-зависим эндопептидаз, действующих на определенный уровень регуляции мембра ных и цитоплазматических процессов, экспрессию генов может дать р зультаты, имеющие важное значение для понимания особенностей проце сов, лежащих в основе развития опиатной зависимости и толерантное! и поможет решить проблему патогенетической терапии опиатных наркоз ний.

Целью настоящей работы является поиск путей направленной кс рекции эффектов морфина посредством воздействия ингибиторами Kaj ций-зависимых эндопептидаз.

В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Исследовать In vitro действие морфина на синтез мРНК в нер ных клетках-различных структур мозга крыс.

2. Изучить влияние антипаина, селективного ингибитора Kaj ций-зависимых эндопептидаз, на действие морфина in vitro.

3. Изучить влияние антипаина и люпептина на эффекты острого хронического действия морфина.

4. Используя метод радиолигандного связывания, изучить cnei нейрохимических свойств антипаина и люпептина.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

В работе экспериментально установлено, что морфин активир: работу генетического аппарата нервных клеток различных структур Ц1 Показано, что селективный ингибитор кальций-зависимых эндопептид антипаин, подавляет прирост транскрипционной активности нейрон! вызванный морфином.

Впервые показано, что формирование синдрома отмены у морфин: висимых крыс сопровождается изменением плотности и чувствительно' 6-опиатных рецепторов. Установлено, что введение люпептина' предо1 ращает изменения б-опиоидной рецепции в период отмены морфин уменьшает выраженность абстинентного . синдрома у морфинзависи. крыс.

Установлено, что добавление антипаина или люпептина в раст морфина усиливает его анальгетический эффект, уменьшает положите но-подкрепляющие свойства и снижает выраженность синдрома отм

>рфина у морфинзависимых крыс.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Полученные научные данные о механизмах формирования опиатной шисимости и направленной коррекции работы генетического аппарата ¡йронов, задействованных в этих механизмах, дополняют научную базу ш психофармагенетики, нового направления в экспериментальной меди-гае, и позволяют рекомендовать рациональные пути синтеза новых сое-шений, ■ купирующих опийный абстинентный синдром и использующихся в яестве добавок к морфину для усиления его анальгетических свойств уменьшения наркогенного потенциала.

На основании полученных научных данных Комитет по делам изобре-¡ний и открытий при Совете Министров РФ выдал положительные решения i патенты изобретений:

Средство для купирования абстинентного синдрома при опийных фкоманиях; заявка N 5066808/14, Гос. регистр заявлен 22. 07. 92.

Препарат для анальгезии на основе морфина; заявка N ¡016321/14, Гос. регистр заявлен 30. 03. 92.

Средство для купирования абстинентного синдрома при опийных фкоманиях; заявка N 92015086/14, Гос. регистр заявлен 29. 12. 92.

Антипаин и люпептин могут быть использованы в наркологической )актике для купирования абстинентного синдрома. В клинической прак-1ке (анестезиологии, онкологии, военной медицине) для усиления 1альгетических свойств морфина и предотвращения нежелательных пос-эдствий его применения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: конференции мо-)дых ученых "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века" 27 мая )94 года; заседании Проблемной комиссии по вопросам наркологии Го-гдаственного Научного Центра наркологии 9 июня 1994 года; на IRNC 394 Meeting 19 июля 1994 года, США.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на страницах машинописного текста и

эстоит из введения, обзора литературы, посвященной молекулярным ме-шизмам действия опиатов в нервной системе, материалов и методов ^следований, четырех глав результатов исследований, обсуждения ре-лпьтатов, выводов и библиографии, включающей названий. Дис-

эртация содержит 14 рисунков. 12 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЖИВОТНЫЕ.

Эксперименты проведены на 640 крысах-самцах линии Wistar весс в начале экспериментов 180-200 г. Крыс содержали в условиях искусс твенного освещения (12 часов в сутки), постоянного доступа к стак дартному комбинированному корму и воде в клетках по 8-10 животных.

СОЕДИНЕНИЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VIVO.

Антипаин - Phe-(CO-Arg-Val-Arg-al); люпептин

(Acetyl-Leu-Leu-Arg-al) - селективные ингибиторы кальций-зависишь эндопептидаз производства фирмы "Slgma" (USA); 0.9% изотонически раствор хлорида натрия промышленного производства; морфин гидро хлорид (Чимкентский завод). Действие всех указанных веществ изучал при внутрибрюшинном введении.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Оценка транскрипционной активности хроматина ядер клеток сенсо моторной коры больших полушарий, коры мозжечка, миндалины, зоны СА-гиппокампа, крупного ядра шва, центрального серого вещества, вентро медиального гипоталамуса, прилежащего ядра, спинного мозга проводи лась с помощью радиоавтографического метода.

Изучение основных характеристик а4, а2, и ß - адренергических Sz- серотонинергических, D2 - дофаминергических, бенздиазепиновы рецепторов стриатума, . ji- опиатных рецепторов коры мозга крыс прово дили радиолигандным методом в модификации Русакова (1992). Концент рацию белка в пробе определяли по методу Lowry et al, 1951.

Для определения порогов болевой чувствительности использовал: тест "отдергивания хвоста". Регистрировали латентный период реакци; отдергивания хвоста из горячей воды (56° С).

Изучение влияния антипаина и люпептина на вторично-подкрепляю щие свойства морфина производили в тесте "предпочтение места". Процедура опыта состояла в определении исходного предпочтения темноп отсека "челночной" камеры, последующем обусловливании в течение 4-: дней: сочетании посадки животных в непредпочитаемый (светлый) отсе] с введением исследуемого вещества непосредственно перед посадкой i непредпочитаемый отсек. О предпочтении судили по времени пребывант животных опытной группы в светлом отсеке "челночной" камеры в сравнении с тем же показателем животных контрольной группы. Учитывал! количество переходов из отсека в отсек "челночной" камеры, а такж!

тело животных в группе, у которых выработалась условная реакция [редпочтения светлого отсека "челночной" камеры.

Хроническую морфинизацию животных производили в течение 12 ;ней: морфин гидрохлорид вводили в течение 12 дней в дозах, возрас-■авших от 10 до 60 мг/кг, 2 раза в сутки (в 8.00 и 20.00). Через 36 асов после последней инъекции морфина животных помещали в "открытое оле" на 3 минуты для регистрации изменения общеповеденческих и на-ичия специфических абстинентных реакций. Выражали в баллах суммар-ый показатель изменения горизонтальной и вертикальной двигательной ктивности, наличия и частоты груминга, отряхиваний, нарушения дыха-ия и позы, птоза, пилоэрекпии, вокализации, скрежета зубами, Корей, судорог, бегства, ринореи, встряхивания лапами, диареи. Оценку яжести синдрома отмены морфина производили индивидуально у каждого явотного, подсчитывая сумму наблюдаемых у него тех или иных призна-эв в тесте "открытое поле", умноженных на соответствующий индекс, ^ределяющий специфичность данного признака (Судаков с соавт., 394).

Изучение основных характеристик д- и 5- опиатных рецепторов зодолговатого мозга, среднего мозга и коры больших полушарий провощи радиолигандным методом, описанным Зайцевым (1986). Концентрацию злка в пробах определяли по методу Лоури. Расчеты концентрации ре-зпторов и константы диссоциации проводили в координатах Скетчарда. последующей статистической обработкой данных.

Обработка результатов проводилась при помощи пакета статисти-;ских программ "Microstat" с использованием t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

1. ВЛИЯНИЕ МОРФИНА И АНТИПАИНА НА ТРАНСКРИПЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ 'ОМАТИНА ЯДЕР НЕРВНЫХ КЛЕТОК РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУР МОЗГА КРЫС.

Работа выполнена совместно с сотрудниками кафедры биологии Го-дарственного Медицинского Университета.

Известно немного работ, которые анализируют изменения, происхо-щие на уровне транскрипции при введении морфина In vitro. Некото-е исследователи полагают, что добавление морфина к хроматину, вы-ленному из мозга крыс, ранее- не морфинизированных , к изменению анскрипции не приводит (Clouet, 1971; Castles. 1971). Однако Hook

et al, (1985), применяя метод гисторадиоавтографии наблюдали in vi го повышение включения H3-UTP в ядра невроцитов краниального шейнс симпатического узла кролика и крысы под влиянием морфина и эндоге ных опиоидов. Задачей настоящего исследования было изучить in vit влияние морфина и антипаина на транскрипционную активность хромата ядер нервных клеток различных структур мозга крыс.

В экспериментах использовали 32 крысы. После декапитации живс ных, фрагменты указанных выше структур (80-100 мг) измельчали размеров 1 х 0.5 х 0.5 мм и инкубировали по методике, описаю Бродским с соавторами (1988). Время преинкубации составляло 30 i нут. Для изучения влияния морфина и антипаина на транскрипциою активность хроматина,. препараты вносили в инкубационную смесь в кс центрациях 8 мМ и 0.08 мМ соответственно. Через 60 минут в инкуба1 онную смесь вносили Н3-уридин и продолжали инкубировать при темпе] туре 37°С. Контрольными являлись срезы, которые инкубировали в cpt без добавления морфина или антипаина. Результаты выражали в уделы радиоактивности срезов (в имп/мин/мг сырой массы).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что peí ция аппарата транскрипции нервных клеток на воздействие' морфина антипаина во всех исследуемых структурах однонаправленна (Рис. : Инкубация срезов с морфином вызывает значительное достоверное noi шение относительного, с поправкой на пул. включения Н3-уридин; суммарную РНК, причем прирост значительно выше в структурах, прин; лежащих к эндогенной антиноцицептивной системе (большом ядре mi центральном сером веществе), и в лимбических структурах (зоне С, гиппокампа, вентромедиальном гипоталамусе). Наименьший прир| транскрипционной активности при инкубации срезов в среде, содержа! морфин, отмечен в спинном мозге. Достоверное повышение относителы го, с поправкой на пул, включения Н3-уридина в суммарную РНК наб. дается во всех структурах мозга, кроме миндалины и спинного моз инкубированных в среде, содержащей антипаин. Наибольший прир транскрипционной активности при действии антипаина наблюдался в структурах, в которых отмечен максимальный прирост транскрипцион активности и при действии морфина. При совместном введении препа тов в инкубационную смесь, эффект морфина достоверно снижался всех исследованных структурах, кроме коры мозжечка, миндалин спинного мозга, в спинном мозге уровень включения Н3-уридина зна тельно возрастал относительно контрольного уровня и действия пре

%

isa 1 ES! 2 Шз

Рис. 1. Показатели включения НЗ-ур~идиНа в суммарную мРНК нервных клеток сенсомоторной коры (SMC), гиппокампа (HIPP). миндалины (AMYG), прилежащего ядра (А С С). вентромедиального гипоталамуса (V М Н) . большого ядра шва (NRM). центрального серого вещества (SG). коры мозжечка (CBL). спинного мозга (MEDUL) крыс при введении в инкубационную среду морфина (1): антипаина С 2) ; совместно морфина с антипаином (31.

«» - р < о . О 1 ; « - р < 0.о 5 (по сравнению с контролем); + + - р<0.01 : + - р<0.05 (по сравнению с морфином)

По оси ординат - показатели включения НЗ-уридина в суммарную мРНК. выраженные в процентах по отношению к контролю. Показатели контрольной группы животных приняты за ЮОЖ.

ов каждого в отдельности (Рис. 1).

Таким образом, повышение транскрипционной активности хроматина р нервных клеток исследованных структур головного мозга, вызван-добавлением в инкубационную среду морфина, подавляется ингибито-кальций-зависимых эндопептидаз, селективным блокатором экспрес-СОС-генов антипаином.

Различие в реакции аппарата транскрипции нервных клеток разных уктур ЦНС на введение морфина объясняется, возможно, разным со-канием "морфин-чувствительных" сайтов ДНК: их меньше в таких ктурах, как сенсомоторная кора, кора мозжечка и больше в тех уктурах, которые вовлечены в регуляцию болевой чувствительности и яются важными звеньями эндогенной анальгетической системы голов-э мозга (большое ядро шва, центральное серое вещество). Совмест-

ное введение морфина и антипаина в инкубационную среду значительно снижает показатели включения меченого уридина в суммарную мРНН структур эндогенной антиноцицептивной системы и резко увеличивает исследуемый показатель в спинном мозге, что, вероятно, свидетельствует о реципрокных взаимоотношениях описанных структур. Прирост транскрипционной активности, вызываемый морфином, подавляется анти-паином, что, по-видимому, свидетельствует об ингибирующем действии антипаина в отношении протеазного механизма регуляции активации "морфин-чувствительных" сайтов ДНК. Возможно, этот механизм регуляции аналогичен протеазному механизму регуляции СОС-генов у прокариот (Муеп е! а1, 1977). Согласно научным данным других исследовательских групп модуляция матричной активности при действии морфина связана с активацией экспрессии гена, кодирующего орнитиндекарбоксила-зу. Активация орнитиндекарбоксилазы может происходить не только путем экспрессии гена, но и регулироваться уровнем предсинтезированной и РНК (Ярыгин, 1987; МизШп ег а1, 1987; Ре11еяг1п1-Иашр1е1го et а1, 1988). Если предположить, что обнаруженные нами изменения в работе генетического аппарата нейронов под действием морфина подвергаются направленной коррекции (блокада экспрессии генов при воздействии на протеазный механизм регуляции синтеза мРНК), то становится очевидным факт возможной модуляции эффектов морфина.

2. ИЗУЧЕНИЕ НЕЙРОХИМИЧЕСКОГО СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ АНТИПАИНА И ЛЮ-ПЕПТИНА.

Использовали 16 крыс. Методом радиолигандного связывания было обнаружено, что люпептин способен ингибировать связывание меченого налоксона в достаточно низких концентрациях 10"6 - 10"5 М. Антипаин конкурировал с меченым спироперидолом и клонидином за места их специфического связывания в грубой фракции синаптических мебран стриа-тума и коры головного мозга крыс. Следует отметить, что наблюдаемое сродство к П2-дофаминергическим и аг - адренергическим рецепторам наблюдается только в очень высоких концентрациях лиганда Ю"4М. Основные характеристики нейрохимического спектра действия антипаина и люпептина представлены в таблице N 1.

Следовательно, можно считать, что антипаин обладает слабым :родством к Бг -дофаминергическим и а2 - адренергическим рецепторам, а люпептин к одному из подтипов опиатных рецепторов головного мозга.

Таблица N1.Нейрохимический спектр действия антипаина и

люпептина.

Исследуемые рецепторы Антипаин Люпептин

а- опиатные - IC5D = 7.610 10"5М Kj= 1.52 10"5М

D2-дофаминергические 1С50= 1.753 10"4М Kt = 2.153 10"5 -

г-серотонинергические - -

а1 - адренергические - -

ос2 -адренергические 1С50= 1.194 10"4М К1= 2.756 10"5 -

/5 -адренергические - -

Бенздиазепиновые - -

Примечание: "-" - обозначено отсутствие способности исследуемых ществ конкурировать с мечеными лигандами за места их специфическо-связывания.

3. ВЛИЯНИЕ АНТИПАИНА И ЛЮПЕПТИНА НА ЭФФЕКТЫ ОСТРОГО ДЕЙСТВИЯ РФИНА У КРЫС.

3. 1. Влияние антипаина и люпептина на анальгетические свойства рфина.

В опытах на крысах установлено, что морфин в дозе 5, 10 мг/кг и подкожном или внутрибрюшинном введении устраняет боль, вызванную рмическим раздражением хвоста (Abbott et al, 1982; Charles ,1983). лью настоящего исследования было изучение влияния морфина, антипа-а и люпептина на длительность латентного периода реакции отдерги-лия хвоста из горячей воды.

Использовали 232 крыс (29 групп по 8 крыс в каждой) . Крысам 'нтрольной группы вводили физиологический раствор за 15 минут до ютирования. Животным экспериментальных групп за 15 минут до тести-|вания: морфин в дозах 2. О, - 5.0, 10 мг/кг; антипаин или люпептин -05,' 0.1, 0.5, 1.0, 5.0, 10, 25 мг/кг; совместно морфин (10 мг/кг)

и антипаин в тестируемых дозах; совместно морфин (2 мг/кг) и люпе1 тин в дозах 0.5, 1.0, 5.0 мг/кг; совместно морфин (10 мг/кг) и Л1 пептин в дозах 0.05, 0.1, 0.5 мг/кг.

Через 30 минут после введения морфина гидрохлорида в дозе 5, 1 мг/кг у крыс наблюдалось увеличение латентного периода реакции от дергивания хвоста (ЛП РОХ) по сравнению с контрольными животньа (р<0. 01). ЛП РОХ был соответственно равен 21.12 ± 3.13 сек и 21.27 4.32 сек. У крыс контрольной группы на 30-й минуте тестирования 1 РОХ составлял 4.25 ± 0.26 сек. Наблюдали также увеличение ЛП РОХ крыс, которым вводили антипаин или люпептин в дозах 0.05, 0.1, 1, 1 мг/кг (р<0.05, в сравнении с контрольной группой крыс). У крыс, кс торым вводили антипаин или люпептин в дозах 0.5, 5 мг/кг ЛП РОХ к отличался от ЛП РОХ контрольных животных.

Было обнаружено усиление анальгетического эффекта морфина в дс зе 10 мг/кг при добавлении в раствор морфина антипаина или люпептин в дозе 0.5 мг/кг (р<0.01).

Анальгетический эффект морфина в дозе 2 мг/кг не был выражен латентный период РОХ не отличался от латентного периода РОХ конт рольной группы животных и составлял 4.25 ± 0.36 сек. Введение анти паина или люпептина в дозе 0.5, 1, 5 мг/кг совместно с морфином дозе 2 мг/кг вызывало увеличение латентного периода реакции отдерги вания хвоста у крыс(р<0.01, в сравнении с контрольной группой крыс)

Таким образом, потенцирующее действие антипаина и люпептина н анальгетический эффект морфина проявляется при совместном внутрибрю шинном введении морфина в дозе 2 мг/кг с люпептином в дозах 0. 5, 1 5 мг/кг и морфина в дозе 10 мг/кг с антипаином или люпептином в доз 0.5 мг/кг.

Возможно, слабые анальгетические свойства и способность к по тенцированию и усилению антиноцицептивных свойств морфина у антипаи на и люпептина связана с их влиянием на нейрохимические и молекуляр ные процессы в системах, вовлеченных в механизмы антиноцицепции норадренергическую (антипаин имеет сродство к аг-адренергическим ре цепторам) и опиатную (люпептин имеет сродство к одному из подтипо: опиатных рецепторов). Неодинаковый вклад этих систем в механизм] анальгетического действия морфина, по-видимому, объясняет разницу i потенцирующих и усиливающих способностях антипаина и люпептина.

Полученные в наших экспериментах результаты коррелируют с дан ными, полученными другими исследовательскими группами. Показано. 4ti

- И -

¡тиноцицептивное действие морфина реализуется посредством активации :догенных опиоидных систем через д- и 6- опиатные рецепторы (Vande-.h, 1992; Takemorl et al, 1992). Наряду о опиоидными системами додано участие норадренергических и серотонинергических механизмов в тиноцицепции, вызываемой морфином (Reddy et al, 1980; Mellne et , 1985). Некоторые данные указывают на то, что важную роль в ноци-пции и действии опиатов играет кальций (Ross et al, 1979). Опиат-:е рецепторы функционально связаны с потенциал-зависимыми ионными налами, и непосредственная стимуляция эе-рецепторов и опосредован-я стимуляция д-рецепторов опиатами подавляет кальциевую проводи-сть (North, 1986). Stivens et al, (1993) предполагают, что все щества, которые используют Са2+ из цитоплазмы, блокируют анальге-ческий эффект морфина. Поэтому блокада кальций-зависимых эндопеп-даз "экономит" внутриклеточный кальций, что, по-видимому, также жет приводить к усилению анальгетического эффекта морфина.

3. 2. Влияние антипаина и люпептина на вторично-подкрепляюшие ойства морфина.

К настоящему времени накопился определенный материал, характе-зующий условно-подкрепляющие свойства морфина при системном введе-и. Условная реакция предпочтения места формируется при сравнитель-невысоких дозах опиата: 0.08 мг/кг при внутривенном, 0.2 мг/кг л подкожном, 1-5 мг/кг при внутрибрюшинном введениях (Katz et , 1979, Mucha et al. 1984). В данном исследовании мы изучали влия-э антипаина и люпептина на вторично-подкрепляющие свойства морфи-, определяемые у крыс в тесте "предпочтение места".

В экспериментах использовали 100 крыс (10 групп по 10 крыс в кдой). Морфин вводили в дозе 5.О мг/кг, антипаин или люпептин - в зе 0.5 мг/кг, совместно морфин в дозе 5.О мг/кг с антипаином или гептаном в дозе 0.5 мг/кг, двум группам крыс антипаин или люпептин цозе 0.5 мг/кг вводили за 1 час до 1-го обусловливания и двум /ппам - за 1 час до контрольного тестирования; животным контроль-3 группы вводили физ. раствор. Крысам двух групп вводили физ. зтвор до первого обусловливания, за 1 час до контрольного тестиро-

1ИЯ.

Обусловливание, производимое в светлом отсеке "челночной каме' после инъекции морфина, приводило к увеличению времени пребыва-

ния крыс в светлом отсеке (на 21.7% по сравнению с контрольной гру пой животных). При этом у всех животных после обусловливания морфи наряду с изменением временной асимметрии отмечалась инверсия, т.е. животных ранее предпочитавших темный отсек, возникало предпочтен светлого отсека "челночной" камеры.

Введение физиологического раствора, антипаина или люпептина 1 час до контрольного тестирования и однократно за 1 час до перв инъекции морфина животным, обусловливание которых проходило при вв дении морфина, не влияло на характер инверсионного действия после него. Предпочтение светлого отсека сохранялось у 80% животных. Д бавление антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг в раствор морфин вводимого в период обусловливания блокировало формирование инверси Контрольное тестирование показало, что предпочтение темного отсе "челночной камеры" сохранилось у 90% животных.

Антипаин и люпептин в дозе 0.5 мг/кг не проявляли воспроизвод мого подкрепляющего действия. Инверсия исходной реакции предпочтен темного отсека "челночной камеры" не наблюдалась ни у одного живо ного. Время пребывания в светлом отсеке после обусловливания и вв дения антипаина или люпептина не отличалось от такого же показате контрольной группы животных.

Таким образом, можно заключить, что только добавление антипаи или люпептина в раствор морфина изменяет характер инверсионно действия наркотика, т. е., по-видимому, уменьшает его Положител но-подкрепляющие свойства. •

Возможно, уменьшение подкрепляющего действия морфина происход вследствие того, что антипаин и люпептин посредством - ингибирован определенных кальций-зависимых эндопептидаз изменяют активность о ределенных рецепторов в центральной нервной системе, вовлеченных механизмы подкрепляющего действия морфина. В научной литературе ш роко обсуждается вопрос участия различных систем в реализации вт рично-подкрепляющих эффектов опиатов. Показано участие D4- и Б2-д фаминергических рецепторов в подкрепляющих эффектах морфина (О мг/кг) на модели условной реакции предпочтения места. Эксперименты хронической инфузией антагонистов опиатных рецепторов демонстриру участие д- и б- опиатных рецепторов в реализации подкрепляющих э фектов опиатов (Suzuki et al, 1991). Доказан общий дигидропир дин-чувствительный механизм реализации подкрепляющего действия на котиков-психостимуляторов и морфина (Кузьмин с соавт. 1991). Lyn

et al, (1984) наблюдали у крыс, после обучения в Т-образном лабиринте, увеличение концентрации глютаматных рецепторов гиппокампальных и теленцефалических нейронов. Функциональное экспонирование глутамат-ных рецепторов происходит в результате протеолиза фодрина Са2+ -зависимой тиоловой протеазой кальпаином. люпептин (при интратекальном введении) ингибирует этот процесс, как следствие, не происходит сохранения навыков обучения. В этой связи, нельзя исключить возможности влияния антипаина и люпептина на ассоциативные процессы, происходящие в головном мозге во время обучения. Для более детального изучения механизмов подкрепляющего действия морфина и возможности их модуляции необходимы исследования по изучению влияния антипаина и люпептина на первично-подкрепляющие свойства морфина. Исследования в этой области будут проведены нами в дальнейшем. '

4. ВЛИЯНИЕ АНТИПАИНА И ЛЮПЕПТИНА НА ЭФФЕКТЫ ХРОНИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МОРФИНА.

Развитие лекарственной зависимости и толерантности связано с изменением в активности генетического аппарата нервных клеток (Chang et al-, 1988; Hayward et al, 1990; Gultart et al; 1992; «Hope et al, 1992; Ярыгин, 1990; Крылова,1994). Установлено, что многократное введение морфина активирует ядерьую и рибосомальную синтетическую активность нейронов различных структур ЦНС (Clouet et al, 1971; Cohen et al, 1977; Lee et al, 1978). Обнаруженный факт связывают с развитием толерантности и зависимости. Действительно, хроматин, выделенный' из ядер клеток головного мозга мышей и крыс, толерантных к морфину, обладает повышенной матричной активностью (Castles et al, 1972; Lee et al, 1975; Ogurl et al, 1976; Stokes et al, 1980; Hook et al, 1981). Возможно, что процесс формирования зависимости и толерантности к морфину включает экспрессию генов, индуцированных морфином. В экспериментах In vitro нами установлено, что антипаин подавляет экспрессию генов, индуцированную морфином (см. выше). В настоящей серии экспериментов мы попытались оценить влияние антипаина и люпептина на процессы формирования физической зависимости от морфина, синдром отмены и толерантности к анальгетическому действию последнего.

В экспериментах использовали 210 крыс (21 группа по 10 в каждой). Животным контрольной группы в течение 12-ти дней вводили физ.

раствор; 1 группе крыс - морфин; 2 группе крыс - антипаин в дозе 0.5 мг/кг; 3 группе - люпептин в дозе 0.5 мг/кг; 4 группе крыс - морфин, а за 1 час до его последней инъекции физ. раствор; 5 группе крыс -морфин , а за 1 час до контрольного тестирования физ. раствор. Для оценки влияния антипаина и люпептина на формирование зависимости от морфина 6 и 7 группам - антипаин или люпептин в дозе 0.5 мг/кг добавляли в раствор морфина; для оценки влияния антипаина на формирование синдрома отмены морфина 8, 9 и 10 группам - антипаин в дозах 1, 10 и 50 мг/кг за 1 час до последней инъекции морфина; для оценки влияния антипаина на выраженность сформировавшегося синдрома отмены И и 12 группам - антипаин в дозах 10 и 50 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования.

4. 1. Влияние антипаина и люпептина на Формирование зависимости от морфина у крыс.

У крыс, которым в течение 12-ти дней двукратно вводили физиологический раствор, не было обнаружено изменения поведенческих реакций, характерных для интактных животных. Многократные инъекции морфина в нарастающих дозах вызывали формирование физической зависимости от морфина - у животных через 36 часов после последней инъекции морфина наблюдался выраженный синдром отмены. Средний суммарный показатель абстиненции (СПА), характеризующий все исследуемые общеповеденческие и специфические реакции крыс, в группе морфинзависимых крыс был равен 10.125 ± 0.26. Потеря в весе за 36 часов после отмены морфина у животных составляла 22.5 ±5.3 грамма.

Инъекции антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг в течение 12-ти дней не вызывали формирование физической зависимости: у крыс не было выявлено наличия специфических реакций, характерных для синдрома отмены. Суммарные показатели поведенческих характеристик, оцениваемые по шкале СПА у животных этих групп соответственно были 3.1Ю.53 и 3.3±1.45, и достоверно не отличались от такого же показателя животных контрольной группы 2.9±0.73. Не было обнаружено достоверного изменения в весе за период отмены препаратов у крыс, получавших многократно антипаин или люпептин, и животных контрольной группы.

Добавление в раствор морфина антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг приводило к тому, что признаки синдрома отмены были менее выражены. Средний суммарный показатель синдрома отмены морфина состав-

лял 6.78±0.57 и 6.11Ю.35, и был достоверно меньше такого показателя у животных, получавших морфин (р<0.01). У крыс этих групп отмечалось меньше таких специфических проявлений, как отряхивания, скрежет зубами, встряхивание передними лапами, диспное. Потеря в весе у животных, получавших (морфин и люпептин в дозе 0.5 мг/кг), составляла 14.8 ±3.7 грамма и достоверно отличалась от такого же показателя у морфинзависимых крыс (р<0.05).

Таким образом, добавление в раствор морфина антипаина или лю-пептина в дозе 0.5 мг/кг приводит к уменьшению формирования физической зависимости от данного наркотика.

4. 2. Влияние антипаина на развитие синдрома отмены у морфинзависимых крыс.

Введение физиологического раствора морфинзависимым крысам за 1 гас до последней инъекции морфина не приводило к достоверному изме-шнию суммарного показателя абстиненции в сравнении с группой мор-данзависимых крыс, СПА составлял 9.73±0. 51.

Введение антипаина в дозах 1, 10 мг/кг за 1 час до последней шъекции морфина приводило к тому, что средний суммарный показатель шдрома отмены морфина был меньше, чем в группе морфинзависимых рыс (р<0.01) и составлял соответственно 7.5 ± 0.47 и 7.8 ± 0.63 нижение среднего суммарного показателя синдрома отмены происходило а счет уменьшения таких проявлений, как отряхивания, скрежет зуба-и, диспное, пилоэрекция, ринорея. Введение антипаина в дозе 50 г/кг за 1 час до последней инъекции морфина не приводило к досто-ерному снижению суммарного показателя синдрома отмены морфина, редний суммарный показатель синдрома отмены морфина у крыс этой руппы был равен 9.6 ± 0.58. Потеря в весе за период отмены морфина крыс, которьм вводили антипаин в дозе 1 мг/кг за 1 час до послед-эй инъекции морфина, составляла 12. О ± 2.7 грамма и отличалась от акого же показателя морфинзависимых крыс (р<0.05).

Таким образом, внутрибрюшинное введение антипаина в дозах 1, 10 п/кг за 1 час до последней инъекции морфина приводило к ослаблению эрмирования синдрома отмены морфина у морфинзависимых крыс.

4. 3. Влияние антипаина на выраженность сформировавшегося синд-)ма отмены морфина у морфинзависимых крыс.

Введение физиологического раствора морфинзависимым крысам за 1

час до контрольного тестирования не приводило к уменьшению выраженности синдрома отмены морфина у этой группы животных. Средний суммарный показатель абстиненции составлял 9.57Ю.83 балла и достоверно не отличался от СПА морфинзависимых крыс.

Введение антипаина в дозах 50 мг/кг и 10 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования в "открытом поле" приводило к тому, что проявление признаков синдрома отмены морфина у этих животных было менее выражено. Средний суммарный показатель был равен 6.5±0.37 и 6.4Ю.43, и отличался от такого же показателя группы морфинзависимых крыс. Уменьшение суммарного показателя синдрома отмены происходило, в основном, за счет уменьшения таких проявлений, как отряхивания, скрежет зубами, встряхивания лапами.

Таким образом, внутрибрюшинное введение антипаина в дозах 10, 50 мг/кг за 1 час до контрольного тестирования в "открытом поле" снижает выраженность основных специфических признаков синдрома отмены морфина у морфинзависимых крыс.

4. 4. Влияние антипаина и люпептина на развитие толерантности к анальгетическому эффекту морфина у крыс.

Использовали 90 крыс (9 групп по 10 в каждой). Крысам контрольной группы вводили физ. раствор, 2, 3 группам крыс - антипаин или люпептин в дозе 0.5 мг/кг добавляли в раствор морфина в период мор-финизации; 4, 5, 6 группам - антипаин в дозах 1, 10, 50 мг/кг вводили на 12-й день за 1 час до последней инъекции морфина в дозе 60 мг/кг, 7, 8 группам - антипаин или люпептин, 9 группе - физ. раствор за 1 час до последней инъекции морфина. Определяли пороги болевой чувствительности при введении морфина в дозе 10 мг/кг и 60 мг/кг (после 12-ти дневной морфинизации).

Введение физиологического раствора, антипаина или люпептина е дозе 0.5 мг/кг ежедневно внутрибрюшинно крысам не оказывало влияния на болевую чувствительность крыс. Латентный период реакции отдергивания хвоста из горячей воды (ЛП РОХ) у крыс контрольной группы бы; равен 4.66 ± 1.9 сек и не отличался от результатов первичного тестирования 4.25 ±1.0 сек. У животных, которым ежедневно вводили антипаин или люпептин, ЛП РОХ составляли соответственно 4.6 ± 0.44 сек ъ 5.3 ± 0.26 сек и также не отличались достоверно от первоначальны) результатов тестирования (5.03 ±0.5 сек и 4.6 ± 0.5 сек соответственно) .

Многократные инъекции морфина в нарастающих дозах вызывали фор-лрование толерантности к анальгетическому действию морфина - эффект эрфина в дозе 60 мг/кг не отличался достоверно от анальгетического 5фекта морфина в дозе 10 мг/кг. ЛП РОХ был равен 17.9 ±2.1 сек. зедение антипаина в дозах 1, 10 и 50 мг/кг морфинзависимым животным 1К же не приводило к проявлению достоверного анальгетического эф-экта морфина в дозе 60 мг/кг. Совместное введение нарастающих доз эрфина и антипаина или люпептина в дозе 0.5 мг/кг не влияло на гальгетический эффект морфина в дозе 60 мг/кг у толерантных животах.

Таким образом, антипаин и люпептин не оказывают влияние на раз-1тие толерантности к анальгетическому действию морфина у крыс.

4. 5. Изучение влияния люпептина на состояние ц- и 5 - опиатных щепторов головного мозга морфинзависимых крыс в период отмены морща.

В современной литературе имеются противоречивые данные о состо-ши опиатных рецепторов у морфинзависимых животных. Davis et al, .975) показали, что специфическое связывание 3Н-морфина в срезах "вола мозга при хронической опиатной стимуляции изменяются: более im в 3 раза увеличивается константа диссоциации при сохранении мест (язывания. Sivam et al (1982) обнаружили изменение только числа ¡ст связывания, но не аффинитета к лигандам при хроническом введе-:и морфина во фракции синаптических мембран мозга мышей. Данные, жученные другими исследователями, указывают на то, что количество аффинные свойства опиатных рецепторов у толерантных животных не меняются (Terenlus, 1984; Wuster et al, 1985). При формировании лерантности к опиатам рецепторный резерв уменьшается, что не соп-жено с изменением параметров специфического связывания (Chavkln et , 1984). Обсуждается возможность интерконверсии различных подтипов иатных рецепторов и других форм изменения их свойств (Terenlus, 84). Зайцев с соавт. (1986) обнаружили изменение параметров связы-ния лигандов с б-опиатными рецепторами у толерантных к морфину ыс. Возможно изменения в опиоидной рецепции связаны с изменениями работе генетического аппарата нейронов, происходящими при хрони-ской морфинизации. Целью настоящего исследования было изучение ияния люпептина на состояние ц- и б-опиатных рецепторов морфинза-

висимых крыс в условиях отмены морфина.

Использовали 50 крыс (5 групп по 10 животных в каждой). 1 группе крыс в течение 12 дней вводили физ. раствор, у 2 - 5 групп крыс вырабатывали физическую зависимость от морфина по выше описанной схеме, причем крысам 3, 4, 5 групп за 1 час до последней инъекции морфина вводили соответственно 1, 10, 50 мг/кг люпептина. Животных забивали декагатацией через 36 часов после последней инъекции морфина. Используя радиолигандный метод, изучали основные характеристики ц- и 5- опиатных рецепторов продолговатого мозга, среднего мозга и коры больших полушарий.

В результате проведенных нами исследований было обнаружено, что у морфинзависимых крыс в состоянии отмены морфина наблюдается изменение состояния б-опиатных рецепторов в коре и продолговатом мозге. В коре головного мозга у крыс увеличивалась плотность б-опиатных рецепторов, Вшах составляло 7.58± 0.29 и отличалось от такого же показателя животных контрольной группы 5. 5 ± 0.21 (р<0.01), в продолговатом мозге у крыс происходило снижение чувствительности б-опиатных рецепторов М составляла 0.633± о.109 и отличалась от такого же показателя контрольной группы животных 0.36± 0.028 (р<0.05). При этом не было обнаружено изменений в состоянии д-опиатных рецепторов всех исследованных отделов головного мозга морфинзависимых крыс в состоянии отмены морфина.

Введение морфинзависимым крысам за 1 час до последней инъекции морфина люпептина в дозе 1 мг/кг приводило к снижению концентрации б-опиатных рецепторов в коре головного мозга (Вшах = 6.141±0.43; группы морфинзависимых крыс - Вшах = 7.58 ± 0.29) (р<0.05). Введение люпептина в дозе 50 мг/кг морфинзависимым крысам приводило к возрастанию концентрации б-рецепторов в продолговатом мозге. Вшах составляло 7.65± 1.141 и отличалось от такого же показателя морфинзависимых крыс 3.12+1.25 (р<0. 01).

Таким образом, у морфинзависимых крыс после отмены морфина наблюдается изменение состояния б-опиатных рецепторов головного мозга: происходит увеличение плотности данного типа рецепторов в коре головного мозга и снижение чувствительности в продолговатом мозге. Ведение люпептина в дозе 1 мг/кг морфинзависимым крысам приводит к тому, что состояние 5-опиатных рецепторов головного мозга морфинзависимых ■ крыс не отличается от состояния таковых у контрольных животных.

Очевидно, возрастание концентрации 5-опиатных рецепторов в коре

головного мозга морфинзавиоимых крыс в состоянии отмены морфина может быть вызвано ответной реакцией на отмену наркотического вещества, поступавшего в организм в больших концентрациях. Ослабление чувствительности 5-опиатных рецепторов в продолговатом мозге, по-видимому, связано с механизмом адаптации организма к токсическому действию морфина.

По современным научным представлениям в генезе морфинового абстинентного синдрома задействованы различные механизмы и нейромедиа-торные процессы. Известную роль играют ц- и 5- опиатные рецепторы в развитии опиатной зависимости и толерантности (Lee et al, 1991, Зайцев, 1986). В происхождении синдрома отмены опиатов существенное значение придают катехоламинергическим механизмам (Van der Laan, 1987). Кроме того, в научной литературе имеется немало работ, посвященных адаптивным процессам, происходящих в нейронах, при действии опиатов. Известно, что при хронической опиатной стимуляции развиваются контрадаптивные реакции в нейрональных системах: происходит компенсаторное увеличение активности аденилатциклазы, восстанавливается вход кальция и увеличивается аффинитет в местах секреции ионов (Kuriyama, 1982: Lollens et al, 1978; Way, 1983). Хроническое введение морфина приводит к увеличению содержания кальмодулина в синапто-сомах мозга крыс (Slmantov et al, 1982; Bonnet et al, 1983). Baeyens et al., 1987; Саго et al, 1988; Antklewichz-Mlchaluk et al, (1990) продемонстрировали, что состояние абстинентного синдрома у крыс связано с достоверным увеличением плотности Н3-нитридипин-связывающих участков мембран коры головного мозга, отражающих состояние потенциал-зависимых кальциевых каналов и, соответствует усилению болевой чувствительности и экспрессии характерных поведенческих признаков синдрома отмены у морфинзавиоимых крыс. В работах Romualdl et al, (1991) и др. отмечено, что хроническое введение опиатов вызывает изменения в эндогенной опиоидной системе, касающиеся регуляции экспрессии генов. Показано, что при однократном введении морфин индуцирует экспрессию гена c-fos в мозге крыс, а хроническое введение этого наркотика подавляет данную реакцию, усиление реакции наблюдается вновь в результате резкой отмены препарата (Крылова с соавт., 1993; Nestler et al, 1992, Hayward et al, 1990). Возможно, хроническое действие морфина снижает чувствительность опиатных рецепторов или вызывает изменения функционирования связанных с рецепторами систем вторичных мессенджеров, которые регулируют процессы транскрипции ге-

на c-fos в мозге. Существуют данные, свидетельствующие об измененш мембранных рецепторов, компонентов системы вторичных мессенджеров i процессов фосфорилирования белков в ряде регионов мозга под действием хронической морфинизации и подтверждающие данную гипотезу (Roden et al 1986; Nestler et al, 1989; Guitard et al, 1989, 1990; 1992; Hayward et al, 1990). Хроническое введение морфина вызывает изменения в системе синтеза и деградации эндогенных опиоидных пептидов: увеличение активности энкефалиназы (Hersh et al. 1982; Sc^rartz et al, 1981), модуляции экспрессии гена проэнкефалина, связапг'сй с активацией транскрипции "ранних" генов c-fos и c-Jun (CHang, 1990; Sonnenberg et al, 1989; Romualdl et al, 1991). Таким образом, изменения в работе генетического аппарата нейронов различных мозговы> регионов, участвующих в реализации эффектов морфина, наблюдаютс? только в критических состояниях для клетки: в ответ на однократное введение морфина и отмену этого наркотика после длительной хронической морфинизации. В случае хронического введения морфина в нейрона* запускаются компенсаторные приспособительные процессы, направленные к приведению состояния клетки к "гомеостатическому" уровню функционирования в условиях постоянного поступления наркотика и, по-видимому, определяют феномен опиатной толерантности. Возможно, поэтому модулирующее действие антипаина и люпептина проявляется в отношении однократного введения морфина и при его отмене после длительной хронической морфинизации, но не в отношении развития толерантности. Полученные нами данные указывают на различие механизмов анальгетичес-кого, подкрепляющего эффектов морфина и механизмов развития толерантности и зависимости. Различие этих процессов продемонстрировано в работах Kaneto et al, 1992; Scnultz et al, 1980; Panerai et al, 1987. Возможно, развитие физической зависимости от морфина, но не толерантности к его анальгетическому действию включает экспрессию определенных генов, которая может быть блокирована антипаином или люпептином. По-видимому, изменения в 5-опиоидной рецепции в период хронического введения морфина и после его отмены обусловлены активирующим действием морфина на генетический аппарат нервных клеток. Ан-типаин и люпептин, подавляя прирост транскрипционной активности нервных клеток, предотвращают изменения 5-опиоидной рецепции, таким образом "смягчают" выраженность синдрома отмены. Способность к изменению эффектов морфина у антипаина и люпептина связана с их непосредственным ингибирующим влиянием на протеазный механизм регуляции

экспрессии генов, контролирующее цитоплазматическое звено: синтез мРНК, изменяющийся под влиянием морфина. Кроме того, имея некоторую специфическую аффинность, указанные соединения способны посредством связывания с определенными рецепторами нейронов, вовлеченных в реализацию эффектов мо]эфина, модулировать эффекты последнего.

На основании изложенного выше, можно предположить, что антипаин л люпептин могут влиять на следующие процессы взаимодействия морфина : нервной клеткой: а) взаимодействия морфина с д-опиатными рецепторами, б) сопряженной активации а2-адренергических или Б2-дофаминер-"ических рецепторов, в) накопления саЛР, сАМР, Саг+ и передачи внут-эиклеточных сигналов с помощью сй1Р, сАМР, Са2+ и других молекул вторичных мессенджеров специфическим протеинкиназам, г) эквивалент-юй экспрессии генов и синтеза мРНК, д) увеличения синтеза 5-опиат-1ых рецепторов, е) изменения эффекторной информации, так называемого экологического ответа нейрона.

Таким образом, полученные нами результаты дополняют существуйте в настоящий момент представления о механизмах действия морфина и гозволяют наметить возможные пути коррекции эффектов последнего пос-)едством воздействия ингибиторами кальций-зависимых эндопептидаз.

ВЫВОДЫ.

1. Воздействие морфина приводит к усилению транскрипционной ак-■ивности нервных клеток в переживающих срезах различных структур [НС.

2. Антипаин подавляет прирост транскрипционной активности ней-10Н0В, вызванный морфином.

3. Совместное введение антипаина или люпептина с морфином уси-ивает анальгетический эффект и уменьшает вторично-подкрепляющие войства последнего.

4. Добавление в раствор морфина антипаина или люпептина приво-ит к уменьшению выраженности формирования физической зависимости от того наркотика.

5. Однократное введение антипаина морфинзависимым крысам вызы-ает уменьшение выраженности синдрома отмены.

6. Формирование синдрома отмены у морфинзависимых животных соп-овождается изменением плотности и чувствительности 5- опиатных ре-епторов, что, по-видимому, обусловлено активирующим действием мор-ина на генетический аппарат нервных клеток.

7. Антипаин и люпептин, подавляя усиление транскрипционной активности нервных клеток, предотвращают изменения 5- опиоидной рецепции в период отмены у морфинзависимых крыс, что, по-видимому, может обусловливать уменьшение выраженности синдрома отмены.

8. Антипаин и люпептин являются перспективными соединениями для создания npenapáTOB, купирующих опийный абстинентный синдром, а также в качестве добавок к морфину для усиления его анальгетических свойств и уменьшения наркогенного потенциала.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Люпина Ю. В., Влияние препарата АП на синдром отмены у морфинзависимых крыс. //Вопросы медико-социальной реабилитации больных алкоголизмом и наркоманией. Мат. республиканского совещания психиатров-наркологов 16-21 марта 1993 года, МЗ РФ, М. с. 105-108.

2. Люпина Ю. В., Характеристика поведенческого и нейрохимического спектра действия препарата АП. //Тезисы конференции молодых ученых России, МЗ РФ, М, 1993, с. 07.

3. Люпина Ю. В., Экспериментальное обоснование применения новой группы препаратов для купирования абстинентного синдрома и в качестве анальгетиков. //Мат. международной конференции. МЗ Республики Беларусь, Гродно, 1993, с. 338-339.

4. Leuplna Yu. V., Sudakov S. К., Yarygln V. N.. Deverslty of morphine-Induced analgesia, tolerance and dependence.//Abstract of IRNC 1994 Meeting. - Cape Cod, North Falmouth, MA. USA. N T52.

5. S. K. Sudakov, Yu. V. Leuplna, V. N. Yarygln, New drugs for modulation of opiate action.//Abstract of CPDD 1994 Annual Scientific Meeting. - Palm Beach, FL, USA.