Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологическое исследование экстракта горноколосника колючего, произрастающего в Восточной Сибири

На правах рукописи

ОДИНЕЦ АЛЕКСАНДР ДМИТРИЕВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСТРАКТА ГОРНОКОЛОСНИКА КОЛЮЧЕГО, ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 1 ОКТ2012

Томск-2012

005052917

005052917

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации

Научный руководитель:

кандидат фармацевтических наук Левента Алексей Иванович

Официальные оппоненты:

Суслов Николай Иннокентьевич доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория фитофармаколоши, заведующий лабораторией

Серебрякова Валентина Александровна доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, кафедра патологической физиологии, ассистент

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится 2012 г. в -/У часов на заседании

диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (634028, Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан " " /{^¿¿/¿'М/Я 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Улучшение качества жизни населения (в части сохранения и укрепления здоровья) приобретает в условиях современного общества (природно-экологических, социально-экономических, научно-технических) большую актуальность. В настоящее время отмечается снижение адаптационных возможностей человека под влиянием экстремальных факторов среды обитания. Решение этой проблемы тесно связано с изучением принципов профилактики стрессорных повреждений и повышения неспецифической сопротивляемости организма к различным воздействиям. Фармакологическая коррекция в данной ситуации выступает как важный способ сохранения относительного динамического постоянства внутренней среды организма, увеличения потенциала адаптации, способствует профилактике переутомления и реабилитации после сильных нагрузок (Яременко К.В., 2006). При этом достаточно большое значение имеет применение адаптогенных средств, в том числе растительного происхождения. Однако широкое потребление некоторых известных и популярных препаратов (экстракты элеутерококка, экстракта родиолы розовой), истощение их природных ресурсов объясняет повышенный интерес к исследованиям в данной области с целью получения новых эффективных препаратов. Для систематизации и облегчения поиска необходимы современные методологические подходы, основанные как на фундаментальных законах и современных достижениях науки, так и на глубоком изучении опыта народной медицины. Растительные препараты из арсенала народной медицины применяются в течение многих столетий, доказав свое право на жизнь. Но, кроме этого, отмечается более высокая результативность поиска новых лекарственных средств из растительного сырья. Если у вновь синтезированных химических веществ этот показатель равен 1 фармакологически активное соединение на 10.000 исследованных, то в случае с растительным сырьем этот показатель равен 1:125 (Winston D., Maimes S„ 2007). Используя принцип филогенетического родства для поиска перспективных лекарственных растений, а также работы Гончаровой С.М. (2006) по генетическому анализу близкородственных растений, информацию из источников традиционной и народной медицины, был начат анализ и изучение близкого родственника родиолы розовой (Rhodiola rosea L.) по семейству толстянковые (Crassulaceae) - горноколосника колючего Orostachys spinoza (L.) С. А. Меу.

Данное растение на протяжении многих веков используется как ранозажив-ляюхцее, противовоспалительное средство в народной медицине Востока (Алтай, Тибет, Китай, Монголия, Япония, Корея). В настоящее время свойства шрноко-лосника активно изучаются в ряде стран (Монголия, Корея, Япония, Китай). Между тем, фармакологические свойства горноколосника колючего как возможного адаптогена практически не исследованы, что и определило основное направление нашей работы.

Целью настоящей работы явилась оценка стимулирующих, антигипоксиче-ских и стресспротективных свойств экстракта горноколосника колючего (Orostachys spinoza (L.) С. А. Меу) в эксперименте на лабораторных животных.

Для достижения поставленной цели необходимо бьшо решить следующие задачи:

1. Оценить влияние экстракта горноколосника колючего на физическую работоспособность мышей и крыс.

2. Оценить воздействие экстракта горноколосника колючего на течение ге-мической и нормобарической гиперкапнической гипоксии.

3. Исследовать влияние экстракта горноколосника колючего на длительность ингаляционного наркоза у крыс.

4. Дать сравнительную оценку влияния экстракта горноколосника колючего на показатели поведенческих тестов (ОП, ПКЛ, УРПИ).

5. Исследовать влияние экстракта шрноколосника колючего на течение иммобилизационного стресса.

Научная новизна.

Впервые выполнено сравнительное экспериментальное исследование фармакологических свойств экстракта из надземной части горноколосника колючего (ОгойасЬуз ярто/а (Ъ.) С. А. Меу), произрастающего в Восточной Сибири. Выявлена фармакологическая активность экстракта горноколосника колючего, показавшего стимулирующую, антигипоксическую, психостимулирующую и анти-стрессорную активность в сравнении с официнальными адаптогенными препаратами (экстракт элеутерококка жидкий, экстракт родиолы жидкий) и показана сходная динамика изменения экспериментальных показателей известных адапто-генов и экстракта горноколосника колючего.

Практическая значимость работы.

На основании результатов проведенных исследований целесообразно дальнейшее изучение фармакологических свойств горноколосника колючего с целью получения новых лекарственных препаратов адаптогенного типа действия. Полученные результаты позволяют рекомендовать использование препаратов горноколосника колючего как средства повышающего работоспособность, обладающего антигипоксической активностью, оказывающего положительное влияние на высшую нервную деятельность и как средства формирующего состояние неспецифической повышенной сопротивляемости организма при воздействии различных неблагоприятных факторов внешней среды (психоэмоциональный стресс, физические нагрузки, гипоксия различного генеза и т.п.). Получена приоритетная справка Роспатента на изобретение № 2011131591/15(046551) от 27.07.2011 г. «Средство повышающее работоспособность». Получено два удостоверения на рационализаторские предложения.

Основные положения, выносимые на защиту.

Результаты исследования основных фармакологических свойств экстракта горноколосника колючего (Огс^асЬув эршога (Ь.) С. А. Меу):

- Экстракт горноколосника колючего повышает физическую работоспособность, способствует развитию выносливости и увеличению мышечной силы, в модели БМР у крыс и мышей показывает результаты, сравнимые с показателями офици-нальных адаптогенов (экстракт элеутерококка жидкий, экстракт родиолы жидкий)

- Экстракт горноколосника колючего в сравнительном эксперименте на крысах показывает отчетливый антигипоксический и антинаркозный эффект.

- В сравнительных поведенческих экспериментах экстракт горноколосника колючего проявляет психостимулирующую активность, оптимизируя функциональное состояние ЦНС крыс.

- Экстракт горноколосника колючего проявляет выраженные стресс-протективные свойства в условиях экспериментального стрессорнош воздействия.

Апробация работы.

Основные положения диссертации представлены на:

• 7-м международном научно-практическом конгрессе «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности» (Москва, 2010).

• XI международной научно-практической конференции «Наука и современность» (Новосибирск, 2011).

• Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медико-профилактическош факультета ИГМУ (Иркутск, 2010).

• Региональной научно-практической конференции «Интеллектуальные и материальные ресурсы Сибири» (Иркутск, 2010).

• XIII международной научно-практической конференции «Наука и современность» (Новосибирск, 2011).

• Первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (Барнаул, 2011).

• Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2011).

• Всероссийской научной конференции с международным участием «Окружающая среда и здоровье населения» (Иркутск, 2011).

• Всероссийской научпо-практической конференции с международным участием «Биомедицинская инженерия и биотехнология» (Курск, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 научных работ, из них 5 - в периодических изданиях, рекомендованных перечнем ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 295 источников: 155 отечественных и 140 зарубежных авторов.

Работа изложена на 116 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 19 таблицами и 23 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Экспериментальную часть работы проводили на 267 белых беспородных крысах и 45 белых беспородных мышах обоего пола. Колебания веса животных одной группы были в пределах 5-10%. Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.). Работа одобрена на заседании Этического Комитета ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России, протокол от 18.11.2010 г. Образцы сырья заготавливали на территории Ир-

кутской области. Готовился экстракт горноколосника колючего методом перколя-ции 70% этанолом при соотношении сырье-экстрагент 1:7. В дальнейшем экстракт деалкоголизировался и доводился водой до первоначального объема, разовая вводимая доза экстракта составляла 1 мл/кг. Стандартизацию экстракта проводили по сухому остатку (экстрактивным веществам) после сгущения в вакуумном аппарате и последующего выпаривания (Зенкевич И.Г., 2002). Сухой остаток составил 8,4% от исходного. В соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000г.» в качестве стандартных препаратов сравнения нами были выбраны официнальные препараты с тонизирующими и стимулирующими (адаптогенными) свойствами -экстракт элеутерококка жидкий заводского изготовления ОАО «Дальхимфарм» (Р № 001518/01 от 18.01.2008 г., серия 150309, годен до 01.04.2013) и экстракт ро-диолы жидкий изготовления ОАО «Дальхимфарм» (дата 13.03.09 г., серия 020309, годен до 04.2014 г.), которые затем деалкоголизировались методом выпаривания и восстановлением объема дистиллированной водой. Растворы готовились ех tempore и вводились в дозе 0,5мл/кг. Экстракт горноколосника и препараты сравнения лабораторным животным вводили per os с помощью зонда в наиболее эффективных дозах, установленных на предварительном этапе исследования (Гацу-ра В.В., Саратиков A.C., 1977). Расчет эффективных доз препаратов для мышей и крыс производился с учетом специальных коэффициентов (Freireich E.J., 1966; Брехман И.И., 1957, 1968).

Острую токсичность определяли на белых крысах обоего пола исходной массой 160-190г, пероральным введением экстракта горноколосника, с последующим расчетом LD50 по методике Кербера (Саноцкий И.В., Уланова И.П., 1975; Беленький M.JL, 1963). Физическую работоспособность определяли на модели беспрерывной мышечной работы с использованием антиортостатического положения лабораторного животного (Авакян O.A., Ширинян Э.А., 1977) в модификации автора (свидетельство на рационализаторское предложение № 4508 от 31.05.2010 г.). Экстракт горноколосника вводили предварительно в течение 7 суток и за 1 час до эксперимента в дозе 1мл/кг. Антигипоксическую активность выявляли на моделях нормобарической гиперкапнической гипоксии помещением крыс в индивидуальные термокамеры объемом 500мл ± 5мл (Лукьянова Л.Д., 1990) и гемической гипоксии с подкожным введением раствора нитрита натрия (NaNÜ2) в дозе 100 мг/кг, в качестве эталонного антигипоксанта использовался 20% раствор натрия оксибутирата в дозе 500 мг/кг, с последующим забором крови для биохимических анализов. Антинаркозное (пробуждающее) действие экстракта горноколосника исследовалось по методике сравнительной оценки действия адаптогенных средств и экстракта горноколосника на время наступления и длительность ингаляционного наркоза. Для проведения опытов использовались стеклянные емкости объемом Юл. В качестве наркозного средства применялся хлороформ, с последующей фиксацией признаков наступления наркоза: выраженности рефлекса переворачивания и рефлекса сдавливания запястий (Фруентов Н.К., 1986). Поведенческие реакции исследовались по общепринятым методикам: на установке открытого поля (ОП), (Буслович С.Ю., 1989; Saenz J.C., 2006), на установке приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ), (Cruz P.M., 1994; Rodgers

R.J., 1997), на установке УРПИ (Буреш Я. и соавт., 2000). Для оценки cipeccjino-тективных свойств использовалась методика иммобилизации животных в положении на спине в течение 6 часов. Критериями оценки адаптогенного стресс-протективнош действия служили изменения массы тела, массы надпочечников, тимуса, язвообразование в желудке (Оболенцева Т.В., 1984), изменения коры надпочечников (Автандилов Г.Г., 1990), содержание эозинофилов, кортикостеро-на и пролактина периферической крови (Меньшиков В.В., 1987), содержание гликогена, фосфолипидов и аскорбиновой кислоты в надпочечниках (Яковлева А.И., 1964; Jlynna X., 1980). По окончании экспериментов животных умерщвляли, соблюдая ««Правила Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Статистические вычисления производились с использованием программы Excel 2003 путем расчета средней арифметической (X) и средней ошибки (т). О достоверности различий судили, используя параметрический t-критерий Стьюдента (при нормальном распределении) и непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни. Достоверность показателей выраженных в долях определяли по угловому преобразованию Фишера. Различия считали достоверными при р<0,05. (Гублер Е.В., 1978; Фролов Ю.П., 1997).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование острой токсичности экстракта ГК показало, что LD50>6300 мг/кг для крыс при пероральпом разовом введении экстракта ГК через зонд, т.е. его можно отнести к относительно безвредным веществам IV класса — малоопасные поГОСТ 12.1.007-76.

На следующем этапе нами проводилась оценка влияния экстракта ГК на физическую работоспособность животных (крысы и мыши). Среди множества методов моделирования мышечной нагрузки нами была использована модифицированная методика плавательной пробы в антиортостатическом положении (Авакян O.A. и соавт., 1977), позволившая довести мелких лабораторных животных до полного мышечного изнурения (Брехман И.И., 1990), и минимизировать погрешности эксперимента (Бобков Ю.Г., 1984). Экстракт ГК вводили предварительно в течение 7 суток и за 1 час до эксперимента в дозе 1 мл/кг. Экстракты элеутерококка и родиолы вводились в течение 7 суток и за 1 час до эксперимента в дозе 0,5мл/кг. Данные представлены на рис.1. В эксперименте нами было выявлено отчетливое стимулирующее действие экстракта ГК и препаратов сравнения: время беспрерывной мышечной работы (БМР) достоверно увеличивалось. Так на фоне введения экстракта ГК прирост времени у мышей составил 60,1%, у крыс 62%. При введении экстракта элеутерококка время БМР увеличилось у мышей на 52,5% и у крыс на 44,3%. В сравнении с контролем увеличение времени беспрерывной работы также показал экстракт родиолы: у мышей на 61,8% у крыс на 59,2%. В экспериментах с БМР отмечен значительный рост предельного времени физической работоспособности, что характерно для препаратов тонизирующего и стимулирующего типа, и является одним из общепризнанных свойств известных адаптогенов (женьшень, элеутерококк, родиола, лимонник и др.).

Рис. 1. Время беспрерывной мышечной работы в контроле, на фоне введения экстракта ГК, экстрактов элеутерококка и радиолы, мин. п=10.

Сравнительное исследование антигипоксической активности экстракта ГК проводилось на моделях гемической и нормобарической гиперкапнической гипоксии, позволяющих комплексно оценить антигипоксические свойства исследуемых веществ. Гипоксия является универсальным патологическим процессом, при котором развивается каскад реакций, приводящих к несост оятельности энергообеспечения клеток, инактивации ферментных ансамблей и в конечном итоге к декомпенсации всех функций организма и смерти. Экстракт ITC вводили ежедневно в течение 5 суток и за 1 час до эксперимента в дозе 1 мл/кг. Группе сравнения с в течение 5 суток и за 1 час до эксперимента вводились экстракт элеутерококка и экстракт родиолы в дозе ОДмл/кг. Данные представлены в табл. 1. На модели нормобарической гиперкапнической гипоксии увеличили продолжительность жизни: экстракт родиолы - на 48,6%, экстракт ГК - на 41,6%, экстракт элеу терококка - на 24,1%. Экстракт ГК статистически значимо не только увеличил продолжительность жизни, но и показал практически те же результаты, что и экстракт родиолы.

Таблица 1

Влияние исследуемых экстрактов на продолжительность жизни крыс в модели

нормобарической гиперкапнической гипоксии (Х±гп), мин.

Экспериментальные группы Продолжительность жизни, мин.

Контроль 19,3 ± 1.6

Экстракт родиолы 0,5 мл/кг 28,5 ± 1,4**

Экстракт ГК 1 мл/кг 27,3 ± 1,6**

Экстракт элеутерококка 0,5мл/кг 23,6 ± 1,4*

Примечание: * - достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем,**- достоверное различие (р<0,01) по сравнению с контролем, пш9.

На следующем этапе исследовалось влияние экстракта ГК на течение острой гемнческой гипоксии, она моделировалась подкожным введением раствора нитрита натрия в дозе 100 мг/кг, и позволяла оценить как антигипоксические, так и антитоксические свойства исследуемых препаратов. Растительные средства вводились в течение 4 дней виутрижелудочно в дозах: экстракт ГК - 1 мл/кг, экстракты родиолы и элеутерококка - 0,5мл/кг. Наряду с препаратами сравнения использовался эталонный антигипоксант: 20% раствор натрия оксибутирата в дозе 500 мг/кг внутрнбрюшинно за 30 мин. до эксперимента. Антигипоксическое действие препаратов оценивали по продолжительности жизни в минутах. Данные представлены в табл.2.

Таблица 2.

Влияние исследуемых препаратов на продолжительность жизни крыс

в модели гемнческой гипоксии.

Группы животных Количество Продол жителг ность жизни

животных в минутах в % от кон-

(Х±ш) троля

Контроль 10 16,3±2,8 -

Раствор натрия оксибутирата 0,5г/кг 8 19,4±2,5 119,5

Экстракт родиолы 0,5 мл/кг 8 22,3±2,2** 136,9

Экстракт элеутерококка 0,5мл/кг 8 20,3±2,6* 124,9

Экстракт ГК 1мл/кг 8 33,3±3,4** 204,6

Примечание: * - достоверное различие (р<0,05) по сравнению с контролем,**- достоверное различие (р<0,01) по сравнению с контролем.

В модели гемнческой гипоксии, вызванной введением раствора нитрита натрия, продолжительность жизни крыс, получавших раствор натрия оксибутирата, возросла на 19% по сравнению с контролем. Экстракт родиолы увеличил время жизни на 36,9%, экстракт элеутерококка - на 24,9% по сравнению с контролем. Экстракт ГК показал наибольшее время жизни: выше в 2,04 раза выше по сравнению с контролем. Сразу после эксперимента из хвостовой вены забиралась кровь для биохимических исследований, данные представлены в таблице 3. Известные адапгогенные препараты показали прогнозируемую антигипоксическую активность, так как принято считать, что повышение устойчивости к гипоксии является типичным проявлением адаптогенной активности препарата. По результатам проведенных экспериментов выявлено наличие выраженной антигипоксической активности у исследуемого экстракта ГК.

На следующем этапе исследований выявлялись антитоксические свойства экстракта ГК. Антитоксическое действие адаптогенов проявляется но отношению к различным химическим веществам. Адаптогепы обладают антигипнотическими и антинаркозными свойствами, т.е. являются «пробуждающими средствами». Нами проводились эксперименты по изучению влияния экстракта ГК и препаратов сравнения на течение ингаляционного хлороформного наркоза у белых крыс.

Таблица 3.

Биохимические показатели крови крыс, перенёсших гемическую гипоксию, (Х± ш).

Показатели крови Группы сравнения

Контроль 20% р-р натрия оксибугирата Экстракт ГК Экстракт элеутерококка Экстракт родиолы

глюкоза (моль/л) 6,1 ±0,1 6,0 ± 0,2 5,0 ±0,1 6,2 ±0,1 4,5 ±0,1*

общий белок (г/л) 65,1 ± 1,5 70,1 ±2,3 65,8 ± 1,2 72,3 ± 2,2 59,3 ± 1,8

лактат 22,2 ± 1,5 33,5 ± 2,4 49,5 ±2,1* 49,2 ± 2,2* 43,1 ± 1,5*

креатинин (ммоль/л) 112,8 ± 8,1 117,8 ±4,5 116,9 ±8,5 115,8 ±6,6 114,6 ± 7,4

ГГТ (Ед/л) 0,6 ±0,1 3,8 ± 0,1 9,9 ± 0,7* 2,5 ± 1,3* 12,4 ± 0,4

а амилаза (Ед/л) 2133,0±121,1 2245,3±143,5 1474,2±139,4 2007,5±122,5 1142,5±105,9*

мочевина (ммоль/л) 6,6 ± 0,4 18,5 ±0,9 16,6 ± 0,3* 13,9 ±0,5* 17,6 ± 0,3

ЛДГ (Ед/л) 1154,2±53,5 327,2±15,6 157,7±15,0* 131,8±22,1* 278,5±20,6*

АЛТ (Ед/л) 62,1 ± 1,3 62,7 ± 1,0 73,9 ± 2,2* 55,1 ± 2,6* 51,6 ±0,9

ACT (Ед/л) 214,2 ± 9,8 410,5 ± 29,9 281,3 ± 25,4* 227,2 ± 17,8 280,3 ± 17,4

холестерин (ммоль/л) 1,7 ± ОД 2,6 ±0,1 1,7 ±0,1 1,8 ±0,4 2,1 ±0,1*

Примечание: *- достоверное различие по сравнению с контролем при р<0,05, п=10.

Все препараты вводились в течение 7 дней внутрижелудочно в дозах: экстракт ГК - 1 мл/кг, экстракты родиолы и элеутерококка - 0,5мл/кг. Данные по хлороформному наркозу представлены в таблице 4. В ходе эксперимента выявлено: минимальная длительность наркоза наблюдалось у животных, получавших экстракт родиолы (на 40,9% меньше контрольного) и получавших экстракт ГК (на 21,2% меньше контрольного), у животных получавших экстракт элеутерококка выявлено укорочение длительности наркоза на 10,5% по сравнению с контрольной группой. Проведенные опыты показывают отчетливый защитный, антинаркозный, антитоксический эффект экстракта ГК.

Таблица 4.

Среднее время наступления и длительность хлороформного наркоза (Х±т), сек.

Исследуемый препарат Среднее-время наступления наркоза, сек. Среднее время выхода из состояния наркоза, сек. Длительность наркоза, сек.

Контроль 327,4±18,5 785,6±21,6 458,2±21,1

Экстракт ПС 1мл/кг 404,4±17,3** 783,1±27,9 378,7±17,9*

Экстракт элеутерококка 0,5мл/кг 398,7±16,3** 809,3±16,1 410,6±9,8*

Экстракт родиолы 0,5мл/кг 395,2±14,2** 720,4±19,5* 325,6±14,3**

Примечание: *- достоверность по отношению к контролю при р<0,05,**- достоверность р<0,01 но сравнению с контролем, п 10.

Влияние исследуемых препаратов на высшую нервную деятельность (ВНД) животных оценивалось по показателям следующих тестов: открытое поле (ОП), приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ), условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ). Все препараты вводились в течение 5 дней внутрижелудочно в дозах: экстракт ПС - 1 мл/кг, экстракты родиолы и элеутерококка - 0,5мл/кг. Результаты теста ОП представлены в табл. 5.

Таблица 5.

Показатели/ Группы Контроль Экстракт элеутерококка Экстракт родиолы Экстракт горноколосника

Центр, сек. 17,75±1,1 14,3±1,2 10,1±1,5* 11,2±1,3*

Горизонтальная активность, квадрагы 32.9±9,55 44,7±5,9 64,1±10,9** 71,4±8,8**

Норка, шт 4.3±1,5 7,8±1,8 14,0±2,6* 11,2±2Д*

Вертикальная активность, шт 4.4±0,4 6,9±1,2* 8,1±1,8** 7,6±1,4**

Замирания и обнюхивания, сек. 105±7,1 117±9,3 85,0±5,0* 72±4,4*

Груминг, сек. 18,4±1,9 12.9±1,2* 9,4±1,7* 11,2±1,5

Болюсы, шт. 5.9±0,7 4,4±0,4* 3,3±0,6* 2,1±0,3*

Примечание: *- достоверность но отношению к контролю при р<0,05,**- достоверность р<0,01 по сравнению с контролем, п=10.

В ходе проведения опыта отмечались изменения следующих показателей: во всех группах, но сравнению с контрольными, уменьшалось латентное время выхода из центра, общее число актов дефекации и уринации - показателей традиционно связываемых с эмоциональной реакгивностыо животных. Общее время замирания увеличилось в группе получавшей экстракт элеутерококка - на 11,4% от контроля. Для показателей характеризующих ориентировочно-исследовательскую реакцию крыс отмечалась следующая тенденция: количество вертикальных стоек

увеличилось во всех экспериментальных группах, причем в группе получавшей экстракт родиолы увеличение на 84% от контрольной, и увеличение на 72,7% в группе получавшей экстракт ГК. Близкая тенденция прослеживалась по показателям горизонтальной активности: увеличение числа пересеченных квадратов во всех экспериментальных группах, причем в группе получавшей экстракт родиолы увеличение на 94,8% от контрольной, и увеличение на 117% в группе получавшей экстракт ГК. Результаты теста ОП выявили тенденцию повышения локомоторной активности и ориентировочно-исследовательского поведения. При этом отмечается положительное влияние исследуемых препаратов на эмоциональную сферу, проявившееся в виде снижении количества дефекаций (в группе получавшей экстракт родиолы уменьшение на 78,7% от контрольной, и в группе получавшей экстракт ГК меньше на 180,9% от контрольной).

Модель УРПИ позволяет оценить влияние препаратов на память крыс, оцениваемую по степени формирования и закрепления у крыс элементарных оборонительных условных рефлексов (избегания аверсивного фактора). Данные эксперимента представлены в таблице 6.

Таблица 6.

Результаты теста УРПИ в контроле и на фоне введения препаратов.

Группы Значения показателей

этап обучения УРПИ Воспроизведение УРПИ

24 ч 7 сут 14 сут

латентное время, сек. латентный период, сек. % животных не посетивших камеру латентный период, сек. % животных не посетивших камеру латентный период, сек. % животных не посетивших камеру

Контроль 15,2 ±3,4 161,0 ± 22,4 42,9% 122,7 ± 18,9 42,9% 58,4 ±6,5 14,3%

Экстракт родиолы 0,5мл/кг 10,5 ± 1,3 180 100,0%* 180 100,0%* 121,8 ± 15,1 43,8%

Экстракт ГК, 1 мл/кг 10,1 ± 1,8 180 100,0%* 164 85,7%* 66,5 ± 7,2 14,3%*

Экстракт элеутерококка, 0,5мл/кг 12,4 ± 2,2 158,0 85,7%* 155,1 ± 20,3 71,4%* 97,7 ± 9,5 28,6%*

Примечание: *- различия достоверны в сравнении с контролем, п-7.

Установлено, что в контрольной группе крыс при воспроизведении УРПИ через 24 ч после обучения (получение болевого раздражения в темном отсеке камеры) 42,9% животных помнили об ударе током и не заходили в темный "опасный" отсек, крысы получавшие экстракт элеутерококка лучше хранили памятный след: 85,7% через 24 часа не заходили в темный отсек, на фоне действия экстракта родиолы и экстракта ГК памятный след хранился ещё лучше: ни одно животное

не посетило темный отсек. Через 7 и 14 суток наблюдалась следующая картина: сильнее УРПИ угасал в контроле, здесь же отмечено большее количество животных, перешедших в темный отсек; в экспериментальных группах отмечается уменьшение латентного периода первого захода в тёмный отсек и уменьшение количества животных в группах, зашедших в него при воспроизведении навыка на 7 и 14 сутки после обучения в тесте УРПИ.

Также, для оценки психоневрологического статуса нами использовался тест ПКЛ. Данные представлены в таблицах 7 и 8. Время, проведенное в открытых рукавах увеличилось во всех экспериментальных группах, причем в группе получавшей экстракт родиолы оно увеличилось на 58,4% от контрольного, в группе получавшей экстракт ГК время увеличилось на 108% от контрольного, что подтверждает наличие у данных препаратов способности стимулировать двигательную активность, выявленную в тесте ОП.

Таблица 7.

Влияние препаратов на поведение животных в тесте ПКЛ (Х±т), сек

Группы Время в открытых рукавах, сек. % Время в закрытых рукавах, сек. % Центр, сек. %

Контроль 26,7 ± 2,2 14,8 143,3 ±9,9 79,4 10,2 ± 1,4 5,8

Экстракт родиолы, 0,5мл/кг 42,3 ± 2,7* 23,4 125,2 ±4,5* 69,5 12,6 ±1,4 7,1

Экстракт ГК, 1 мл/кг 55,8 ±3,9** 31,0 100,1 ±6,2** 55,5 24,1 ±3,2 ** 13,5

Экстракт элеутерококка, 0,5мл/кг 30,7 ±4,1 17,0 133,8 ±6,2 73,8 14,5 ±1,9* 9,2

Примечание: *- достоверность по отношению к контролю при р<0,05, **- достоверность по

отношению к контролю при р<0,01, количество животных, п-10.

Число переходов между темными рукавами лабиринта (которое также является показателем уровня локомоторной активности животных в ПКЛ) было увеличено в группе получавшей экстракт ГК в 3,4 раза и в группе получавшей экстракт элеутерококка в 3,7 раз. Под влиянием препаратов усиливалась и исследовательская активность, о чем свидетельствовало увеличение числа свеишваний под лабиринт: в группе получавшей экстракт ГК в 3,3 раза и в группе получавшей экстракт элеутерококка в 2,8 раза.

Таблица 8.

Оценка параметров риска в тесте ПКЛ (Х±т)._

Группы/Активность свешивания переходы стойки

Контроль 2,1 ±0,4 5,4 ± 1,4 0,8 ±0,1

Экстракт родиолы, 0,5мл/кг 5,4 ±1,1* 12,0 ±2,1** 4,5 ± 1,1**

Экстракт ГК, 1мл/кг 6,9 ± 1,6** 18,1 ±2,7** 5,8 ± 1,4**

Экстракт элеутерококка, 0,5м л/кг 6,0 ± 1,5** 20,2 ±3,1** 2,5 ± 0,3**

Примечание: *- достоверность по отношению к контролю при р<0,05, **- достоверность по отношению к контролю при р<0,01, количество животных, п=10.

С целью изучения стресспротективной активности изучаемых препаратов моделировался б-ти часовой иммобилизационный стресс с последующим изучением морфометрических, гистологических, биохимических и гистохимических показателей. В ходе эксперимента отмечалось заметное снижение массы тела животных: в контрольной группе в среднем на 11,3%, в экспериментальных группах - снижение от исходной массы на 6,5% в группе получавшей экстракт родиолы, снижение от исходной массы на 6,1% в группе получавшей экстракт элеутерококка и снижение от исходной массы на 8.8% в группе получавшей экстракт ПС (табл. 9).

Таблица 9.

Морфометрические показатели животных в норме, после

6-ти часового стресса в контроле и на фоне введения препаратов (Х±т).

Препарат Показатели Интактные Стресс-контроль Экстракт родиолы 0,5мл/кг Экстракт элеутерококка 0,5 мл/кг Экстракт ГК, 1 мл/кг

масса надпочечников, мг 52,4*3,1 71,8±3,7 61,7±2,6 * 62,3±3,5* 62,9±3,9*

масса тимуса, мг 504,4±33,1 418,4±12,9 •160.9: 11.2 462,4*15,3* 449,б±9,4

площадь язв, мм2 0 3,6±1.7 0.5±0.2** 0,6Ю,2** 0,8±0,2**

масса животных, г. 196,8±12,5 17б,1±11,б 184,3=10,8 185,4±12,1 180,8±9,7

*- достоверность по отношению к стресс-контролю при р<0,05, **- достоверность по отношению к контролю при р<0,01, п-10.

В результате эксперимента отмечалось увеличение массы надпочечников на 36,5% у контрольных животных, в группе получавшей экстракт родиолы увеличение массы надпочечников составило 17,3%, группе получавшей экстракт элеутерококка масса надпочечников увеличилась на 19,2% и в группе получавшей экстракт ГК увеличение составило 19,8% от исходной массы надпочечников. Острый стресс вызвал характерные изменения содержания эозинофилов крови, концентрации кортикостерона и иролактина экспериментальных животных (табл. 10)

Таблица 10.

Уровень эозинофилов, кортикостерона и пролактина после иммобилизационного _стресса в контроле и на фоне введения препаратов(Х±т)._____

показатели / время норма 24 часа 3 СУТКИ 7 сутки

контроль

Эозинофилы (шт./мкл.) 189,3±17,5 54,1±1,9 107,2±5,4 154,6±6,8

Кортакосчерон (нмоль /л) 31,6±1,6 47,5±1,2 42,4±С),9 35,9±0,7

Пролактин (нмоль /л) 32,2±1,4 115,7±5,4 85,9±1,5 55,2 ±1,3

Экстракт родиолы, 0,5мл/кг

Эозинофилы (шт./мкл.) 189,3±17,5 68,4±3,9* 120,6±4,3* 179,5 ±5,7

Кортикостерон (нмоль/л) 31,6±1,6 43,1±2,5* 39,8±1,8* 34,1 ±1,4*

Пролактин (нмоль/л) 32,2±1,4 78,4±2,1** 53,7±2,2** 46,1 ±1,5*

Экстракт элеутерококка, 0,5мл/кг

Эозинофилы (шт./мкл.) 189,3±17,5 70,6±4,4* 122,8±5,8* 170,2 ±6,6*

Кортикостерон (нмоль/л) 31,6±1,6 44,9±2,2* 40,2±2,4* 34,9 ±2,7

Пролактин (нмоль/л) 32,2±1,4 84,3±3,3** 65,8±4,1* 51,9 ±2,7*

Экстракт горноколосника колючего, 1 мл/кг

Эозинофилы (шт./мкл.) 189,3±17,5 62,5±2,8** 113,1±5,4* 166,5 ±5,2*

Кортикостерон (нмоль/л) 31,6±1,6 44,6±3,4 41,3±2,5 35,1 ±0,8

Пролактин (нмоль/л) 32,2±1,4 88,6±4,1* 66,3±3,6* 53,7 ±2,5

*- достоверность по отношению к стресс-контролю при р<0,05, **- достоверность по отноше^ нию к контролю при р<0,01, п=10.

В течение первых суток после стрессорного воздействия в контрольной группе животных развивается эозинопения (54,1 ±1,9 шт./мкл), достигая на 7-е сутки почти нормальных показателей. На фоне приема препаратов сравнения и экстракта ГК прослеживается меньшая степень эозинопении и почти полное восста-ноатение нормальных показателей в течение 7 суток. Показатели гормонального статуса выявили следующую картину: самое выраженное антистрессорное действие отмечается у экстракта родиолы, затем по эффективности следуют экстракт ГК и экстракт элеутерококка. Результаты подтверждаются, в частности, изменением уровня пролактина крови в течение первых суток после стресса: в контроле уровень выше исходного в 3,6 раза, в группе получавшей экстракт родиолы выше в 2,4 раза, в группе получавшей экстракт элеутерококка выше в 2,6 раза и в группе получавшей экстракт ГК выше в 2,7 раза от исходного уровня. Стресс-протективная активность исследуемых препаратов выявлялась также по показателям митотической активности кортикоцитов которая, как известно, при стрес-сорных воздействиях значительно снижается. В эксперименте у контрольной группы животных данный показатель снизился: в клубочковой зоне на 45%, в пучковой на 73,6% и в сетчатой на 75% (табл. 11). При этом в группе получавшей экстракт родиолы митотический индекс снизился всего на 13,8% в клубочковой зоне, на 20% в пучковой и на 35% в сетчатой зоне; для группы получавшей экстракт элеутерококка показатели снижения индекса соответственно следующие: клубочковая зона снижение на 13,8%, пучковая на 13,4% и сетчатая на 30% от

нормальных показателей. Для группы получавшей экстракт ПС получены следующие значения: снижение митотического индекса клубочковой зоны на 20.1%, пучковой зоны на 20% и сетчатой на 30% от нормы.

Таблица 11.

Митотическая активность (митотический индекс) кортикоцитов после 6-ти часового иммобилизационного стресса на фоне введения препаратов (Х±т), %о.____

Зоны коры/Препараты клубочковая зона пучковая зона сетчатая зона

Норма 0,29*0,01 ОД5±0,01 0,2+0,01

Стресс-контроль 0,16*0,01 0.04±0,02 0,05±0,01

Экстракт родиолы, 0,5мл/кг 0,25±0,02 0,12±0.02* 0ЛЗ±0,01

Экстракт элеугерокок-ка.0.5мл/кг 0,25±0,02 0,13±0,01* 0. М -0.01

Экстракт ГК, 1 мл/кг 0,23+0,02 0,12*0,02* 0,14±0,01

Примечание: *-достоверность по отношению к стресс-контролю при р<0,05, о-10.

Оценивая полученные данные, можно сказать, ч то экс тракт гориоколосника колючего повышает сопротивляемость организма к физическим нагрузкам, а также к гипоксии, психоэмоциональному стрессу. Причем количественные показатели близки к показателям таких известных адаптогенов как родиола и элеутерококк. Полученные результаты исследований свидетельствуют о перспективности дальнейшего экспериментального исследования горноколосника колючего и представляют теоретический и практический интерес.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт горноколосника колючего повышает устойчивость к физическим нагрузкам, проявившуюся в увеличении времени БМР крыс и мышей, сопоставимом с показателями экстракта родиолы и экстракта элеутерококка.

2. На моделях гемической и нормобарической гипоксии экстракт гориоколосника колючего повышает устойчивость крыс к недостатку кислорода, нропшогшгокси-ческий эффект экстракта горноколосника на модели гемической гипоксии превосходит эффект препаратов сравнения - экстракта элеутерококка и экстракта родиолы.

3. Экстракт гориоколосника колючего обладает антигишюгениым действием, укорачивая длительность ингаляционного (хлороформного) наркоза у крыс.

4. Экстракт горноколосника колючего оказывает тонизирующее и психостимулирующее действие, улучшает количественные и качественные показатели тестов ОП, УРПИ и ПКЛ, повышает пластичность поведения, оказывает позитивное влияние на память и условно-рефлекторную деятельность крыс, не уступая по активности экстрактам родиолы и элеутерококка.

5. Введение экстракта горноколосника колючего при иммобилизационном стрессе у крыс оказывает выраженный защитный эффект не уступающий действию препаратов сравнения - экстрактов родиолы и элеутерококка. Антистрессорное действие экстракта гориоколосника колючих) проявляется в уменьшении пшертро-

фии надпочечников, выраженном противоязвенном эффекте и нормализации показателей системы крови и карнометрических данных надпочечников.

ПЕРЕЧЕНЬ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса на поведенческие реакции лабораторных животных // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - Т.95, № 4. - С. 103-105 (соавторы Левента А.И., Охрем-чук Л.В., Усов Л.А.).

2. Анксиолитические и мнемотропные эффекты извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса в эксперименте на лабораторных животных // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - Т.96, JV» 5. - С. 125-128. (соавторы Левента А.И., Усов Л.А.).

3. Влияние препаратов из горноколосника колючего и рододендрона Адамса на течение стресс-реакции экспериментальных животных // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 6(76). - С. 175-182.(соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Изатулин A.B., Шабатурова О.В.).

4. К антипшоксическому действию препаратов из растительного сырья Сибири // Сибирский медицинский журнал. - 2011. - Т.104, JY» 5. - С. 112-115 (соавторы Левента А.И., Щукин Д.А., Шабатурова О.В.).

5. Исторические аспекты и современные методологические подходы к поиску новых лекарственных средств на основе растительного сырья из биоразнообразия Байкальской Сибири (к 90-летию кафедры фармакологии ИГМУ) // Сибирский медицинский журнал. - 2012. - Т.108, Ж> 1. - С. 105-111 (соавторы Левента А.И., Семинский И.Ж., Кузнецов С.М., Тимофеева С.А., Шабатурова О.В.).

6. Биологические свойства некоторых перспективных растений Байкальского региона // Вестник ИР О АН ВШ России. - 2010 - №2(17) -С. 209-214 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Шапкин Ю.Г.).

7. Экспериментально-фармакологическое изучение влияния природных адап-тогенов на скорость и продолжительность ингаляционного наркоза // Материалы региональной научно-практической конференции "Интеллектуальные и материальные ресурсы Сибири", - Ирку тск: Изд-во БГУЭП, 2010. -С.67-69 (соавторы Левента А.И., Шапкин Ю.Г., Щукин Д.А.).

8. Влияние извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса на адаптационные поведенческие реакции лабораторных животных в условиях эксперимента // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медико-профилактического факультета ИГМУ. - Иркутск, 2010. - С. 279-283 (соавторы Левента А.И.. Шапкин ЮГ., Щукин ДА.).

9. Сведения о применении перспективного растения горноколосник колючий в народной медицине Восточной Сибири и традиционных медицинских системах стран Азии // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медико-профилактического факультета ИГМУ. - Иркутск, 2010. - С. 283-287 (соавторы Левента А.И., Усов Л.А., Шабатурова О.В.).

Ю.Эколого-биологические особенности перспективного растения горноколосник колючий, и его место в семействе толстянковые // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медико-профилактического факультета ИГМУ. - Иркутск, 2010. - С. 287292 (соавторы Левента А.И., Усов Л.А., Тимофеева С.А.).

11. К вопросу о биологических свойствах некоторых перспективных растений байкальского региона // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медико-профилактического факультета ИГМУ. - Иркутск, 2010. - С. 195-199 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Шапкин Ю.Г., Куклина Л.Б.).

12.Поведенческие реакции экспериментальных животных при действии фено-тропила, извлечений из горноколосника и рододендрона Адамса // Материалы 7-го международного научно-практического конгресса «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности. Москва, 2010. - С. 360-361 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Охремчук Л.В.).

13.Антипгаоксические свойства некоторых перспективных растений байкальского региона // Материалы 7-го международною научно-практического конгресса «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности. Москва, 2010. - С. 367-368 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Куклина Л.Б., Трубникова Т.И.).

14.Изучение адаптогенных свойств перспективных растений и усовершенствование модели работы мелких лабораторных животных // Материалы 7-го международного научно-практического конгресса «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности. Москва, 2010. - С. 364-365 (соавторы Левента А.И., Шабатурова О.В., Щукин Д.А.).

15.Влияние адаптогенов растительного происхождения на уровень постоянного потенциала (VIill) головного мозга // Материалы 7-го международного научно-практического конгресса «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности. Москва, 2010. - С. 359-360 (соавторы Левента А.И., Шапкин Ю.Г., Куклина Л.Б.).

16.Изменение адаптационных поведенческих реакций лабораторных животных в условиях эксперимента под влиянием извлечений горноколосника и рододендрона Адамса // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа // под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 30-31 (соавторы Левента А.И., Щукин Д.А., Шапкин Ю.Г., Тимофеева С.А.).

17.Изучение антигипоксических свойств некоторых растений Байкальского региона // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа

// под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 42-43 (соава-торы Усов Л.А., Левента А.И.).

18. Моделирование гемической гипоксии в эксперименте на лабораторных животных // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 43-45 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Шабатурова О.В.).

19. Изучение адаптогенных свойств перспективных растений и усовершенствование модели работы мелких лабораторных животных // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 28-30 (соавторы Левента А.И., Щукин Д.А., Шабатурова О.В.).

20. Влияние на гипоксию некоторых перспективных для внедрения в медицинскую практику растений Байкальского региона // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 45-47 (соавторы Усов Л.А., Левента А.И., Куклина Л.Б., ТрубниковаТ.И).

21. Влияние адаптогенов растительного происхождения на уровень постоянного потенциала головного мозга // Актуальные вопросы клинической фармакологии. Сб. научных трудов, посвященный 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа под. ред. Н.В. Верлан. - Иркутск РИО ИГИУВа, 2011. - С. 47^8 (соавторы Шапкин Ю.Г., Левента А.И.).

22. Результаты моделирования иммобилизационного стресса при введении извлечений из горноколосника колючего и рододендрона Адамса // Материалы первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (сборник статей) под ред. В.М. Брюханова - Барнаул ГОУ ВПО АГМУ Минздравсоцразвития России, 2011. - С. 41-43 (соавтор Левента А.И.).

23. Экспериментальное моделирование физической нагрузки при оценке стимулирующего и тонизирующего эффекта извлечений из горноколосника колючего и рододендрона Адамса // Первая Всероссийская научно-практической конференция молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (сборник статей) под ред. В.М. Брюханова - Барнаул ГОУ ВПО АГМУ Минздравсоцразвития России, 2011. - С. 43-44. (соавтор Левента А.И.).

24. Изучение антигипоксической активности некоторых перспективных растений Байкальского региона // Всероссийская научная конференция студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» » СПб. - 2011. - С.57-59. (соавтор Шабатурова О.И.).

25. Влияние извлечений из горноколосника колючего и рододендрона Адамса на поведенческие реакции лабораторных животных после иммобилизационного стресса // Сборник материалов XI Международной научно-практической конференции «Наука и современность» под ред. С.С. Черно-

ва. - Новосибирск Издательство НГТУ, 2011. - С.293-299 (соавторы Левен-та А.И., Гаспарян В.А., Бекчан A.A.).

26. Оценка антигипоксических свойств некоторых растений Прибайкалья // Сборник материалов IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Биомедицинская инженерия и биотехнология» Курск ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России, 2011. - С. 136-140 (соавторы Левента А.И., Шабатурова О.В., Кисель С.Е.).

27. К вопросу методологических подходов изыскания новых лекарственных средств на основе растительного сырья // Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Окружающая среда и здоровье человека» под ред. М.Ф. Савченкова. - Иркутск НЦРВХ СО РАМН, 2011. - С.201-207 (соавторы Левента А.И., Усов Л.А., Семинский И.Ж., Белых А.И., Шабатурова О.И.).

28. Применение комплексного подхода к поиску новых лекарственных средств на основе растительного сырья // Сборник материалов XIII Международной научно-практической конференции «Наука и современность» под ред. С.С. Чернова. - Новосибирск, НГТУ, 2011. - С. 8-12 (соавтор Антонян Д.М.).

29. Влияние извлечений из растительного сырья Восточной Сибири на морфологию и гистохимию надпочечников экспериментальных животных на фоне иммобилизационного стресса // Сб. научных трудов «Современная наука-теория, практика, технологии, инновации» Бугульма НО «ФЭН-НАУКА», 2011. - С. 89- 92 (соавторы Левента А.И., Бекчан A.A., Гаспарян В.А.).

30. Усовершенствование модели мускульной работы мелких лабораторных животных // Сборник научных статей молодых ученых, посвященных 80-летию медико-профилактического факультета ИГМУ / под ред. А.И. Белых. - Иркутск, 2011. - С.42-44 (соавторы Левента А.И., Щукин Д.А., Шабатурова О.В.).

Изобретения и рационализаторские предложения

1. Средство повышающее работоспособность (Заявка на изобретение. Приоритетная справка 2011131591/15(046551) от 27.07.2011 г. Соавт. Левента А.И., Усов Л.А., Шапкин Ю.Г.)

2. Усовершенствованная модель динамической работы мелких лабораторных животных (Рацпредложение № 4508 от 31.05.2010 г., зарегистрировано в ГБОУ ВПО ИГМУ. Соавт. Левента А.И., Усов Л.А., Шапкин ЮГ.).

3. Усовершенствованная модель гиперкапнической, нормобарической (баночной) гипоксии (Рацпредложение № 4570 от 28.11.2011 г., зарегистрировано в ГБОУ ВПО ИГМУ. Соавт. Левента А.И., Шапкин Ю.Г.).

Сокращения, использоватнле в работе

АЛТ - аланинаминотрансфераза АСТ - аспартатаминотрансфераза БМР — беспрерывная мышечная работа ВНД - высшая нервная деятельность

ГК - горноколосник колючий

ГТТ - гаммаглутамилтранспептидаза

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

ОП - установка открытое поле

ПКЛ - приподнятый крестообразный лабиринт

УРПИ - условный рефлекс пассивного избегания

Автор выражает глубокую признательность и благодарность профессору кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Иркутского медицинского университета Изатулину В.Г. за консультативную помощь при выполнении 5-й главы диссертации «Изучение стресспротективной активности экстракта горноколосника колючего». Благодарность и признательность врачу-биохимику Научного центра реконструктивной и восстановительной хирургии (НЦРВХ СО РАМН) Трубниковой Т.Н. за помощь в проведении биохимических анализов крови и обработке данных.

Подписано в печать 08.08.2012. Бумага офисная белая. Печать RISO. Тираж 100 экз. Заказ №231020.

Отпечатано в ООО «Оперативная типография Вектор» 664025, г.Иркутск, ул. Степана Разина д.6, офис 106, т.: (3952) 33-63-26, 25-80-09 e-mail: dc@siline.ru

Одна из основных проблем современной медицины - повышение резистентности здорового организма и профилактика основных неинфекционных заболеваний. Сейчас даже появился термин «городской неинфекционный СПИД», поскольку нет ни одного заболевания, при котором не происходило бы нарушения иммунитета: динамичная и высокочувствительная иммунная система вовлекается в патологические процессы практически при всех заболеваниях человека, а от ее состояния во многом зависит прогноз болезни [10, 68]. Решение этой проблемы тесно связано с изучением принципов профилактики стрессорных повреждений и повышения неспецифической сопротивляемости организма к различным воздействиям. Так, по данным статистики в России только 7-8 % населения можно отнести к категории абсолютно здоровых [61]. Адаптация организма к патологическим воздействиям является одной из его основных функций, позволяющих существовать в постоянно меняющемся мире [128, 140, 215]. Решение этой проблемы тесно связано с изучением принципов профилактики стрессорных повреждений и повышения неспецифической сопротивляемости организма к различным воздействиям. Фармакологическая коррекция выступает как важный способ сохранения относительного динамического постоянства внутренней среды организма, увеличения потенциала адаптации. При этом достаточно большое значение имеет применение адаптогенных средств, в том числе растительного происхождения [21, 154]. Эти препараты влияют на организм значительно мягче чем синтетические средства, лучше переносятся, реже вызывают побочные реакции, как правило, не обладают кумулятивным действием [47]. Определение адаптогенов было дано ВОЗ (всемирной организацией здравоохранения) в 1966 году. Адаптогены — средства, повышающие устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям внешней среды. Однако перечень применяемых в клинической практике адаптогеннных препаратов растительного происхождения в настоящее время недостаточен, а широкое потребление таких давно известных и популярных адаптогенов как женьшень, элеутерококк, родиола розовая привели к заметному истощению их природных ресурсов [157, 190, 278]. Поэтому вполне объясним повышенный интерес к исследованиям в области растительных адаптогенов [254, 247]. На наш взгляд одним из таких растений может явиться представитель семейства толстянковые - горноколосник колючий (заячья капуста, колючая репка, живучка), (Оп^асЬуБ Бртога (Ь.) С. А. Меу), который достаточно широко распространен в Сибири, на Дальнем Востоке, в Средней Азии, степных регионах Монголии и Китая. Данное растение на протяжении многих веков успешно используется в народной медицине Востока (Алтай, Тибет, Китай, Монголия, Япония, Корея). В настоящее время свойства горноколосника активно изучаются в ряде стран (Монголия, Корея, Япония, Китай). Между тем, свойства горноколосника колючего как возможного адаптогенного растения практически не исследованы, что и определило основное направление нашей работы.

Цель исследования: оценка стимулирующих, антигипоксических и стресспротективных свойств экстракта горноколосника колючего (Огс^асИуБ эршога (Ь.) С. А. Меу) в эксперименте на лабораторных животных.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние экстракта горноколосника колючего на физическую работоспособность мышей и крыс.

2. Оценить воздействие экстракта горноколосника колючего на течение гемической и нормобарической гиперкапнической гипоксий.

3. Исследовать влияние экстракта горноколосника колючего на длительность ингаляционного наркоза у крыс.

4. Дать сравнительную оценку влияния экстракта горноколосника колючего на показатели поведенческих тестов (ОП, ПКЛ, УРПИ).

5. Исследовать влияние экстракта горноколосника колючего на течение иммобилизационного стресса.

Научная новизна.

Впервые выполнено сравнительное экспериментальное исследование фармакологических свойств экстракта из надземной части горноколосника колючего (Оп^асЬуз эртога (Ь.) С. А. Меу), произрастающего в Восточной Сибири. Выявлена фармакологическая активность экстракта горноколосника колючего, показавшего стимулирующую, антигипоксическую, психостимулирующую и антистрессорную активность в сравнении с официнальными адаптогенными препаратами (экстракт элеутерококка жидкий, экстракт родиолы жидкий) и показана сходная динамика изменения экспериментальных показателей известных адаптогенов и экстракта горноколосника колючего.

Научно-практическая значимость.

На основании результатов проведенных исследований целесообразна разработка новых лекарственных препаратов из горноколосника колючего в качестве профилактического и терапевтического средства повышающего функциональные возможности организма, что свойственно препаратам стимулирующего и адаптогенного характера действия. Полученные результаты позволяют рекомендовать использование препаратов горноколосника колючего как средства, повышающего работоспособность, обладающего антигипоксической активностью, оказывающего положительное влияние на высшую нервную деятельность и как средства формирующего состояние неспецифической повышенной сопротивляемости организма при воздействии различных неблагоприятных факторов внешней среды (психоэмоциональный стресс, физические нагрузки, гипоксия различного генеза и т.п.). Имеется приоритетная справка Роспатента на изобретение № 2011131591/15(046551) от 27.07.2011 г. «Средство повышающее работоспособность».

Основные положения, выносимые на защиту. 1.Экстракт горноколосника колючего повышает физическую работоспособность, способствует развитию выносливости и увеличению мышечной силы, в модели БМР (беспрерывной мышечной работы) у лабораторных животных показывает результаты, сравнимые с показателями официнальных адаптогенов (экстракт элеутерококка жидкий, экстракт родиолы жидкий)

2. Экстракт горноколосника колючего в сравнительных экспериментальных исследованиях на лабораторных животных показывает отчетливый антигипоксический и антинаркозный эффект.

3. В сравнительных поведенческих экспериментах экстракт горноколосника колючего проявляет психостимулирующую активность, оптимизируя функциональное состояние ЦНС лабораторных животных.

4. Экстракт горноколосника колючего проявляет выраженные стресс-протективные свойства в условиях экспериментального стрессорного воздействия.

Внедрение в практику.

Разработана стабильно воспроизводимая модель беспрерывной мышечной работы мелких лабораторных животных (рационализаторское предложение № 4508 от 31.05.2010 г.). Она позволяет проводить эффективный скрининг лекарственных препаратов и химических соединений для поиска в их ряду средств стимулирующего типа действия. Данная разработка внедрена в научно-исследовательскую работу кафедр фармакологии (в соответствии с положением о кафедре СМК ПСП 85 2011), нормальной физиологии, медицинской и биологической физики, мобилизационной подготовки здравоохранения и медицины катастроф, гистологии, эмбриологии и цитологии, патологии с курсом аллергологии и иммунологии, центра лабораторной диагностики «Мечников» ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России, в лаборатории токсикологии Ангарского филиала ВСНЦ ЭЧ СО РАМН - НИИ медицины труда и экологии человека, в научно-исследовательскую работу фармацевтического института Монгольского медицинского университета (МНР), работу ООО «Иркутскбиофарм» согласно Устава, научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии Красноярского медицинского университета им. Войно-Ясенецкого. Результаты экспериментальных исследований могут служить основой для создания новых лекарственных препаратов адаптогенного типа действия.

Апробация работы.

Материалы и положения диссертации представлены на 7-м международном научно-практическом конгрессе «Человек в экстремальных условиях: клинико-физиологические, психологические и санитарно-эпидемиологические проблемы профессиональной деятельности» (Москва, 2010), XI международной научно-практической конференции «Наука и современность» (Новосибирск, 2011), межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 80-летию медикопрофилактического факультета ИГМУ (Иркутск, 2010), первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Сибирский медико-биологический конгресс» (Барнаул, 2011), Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2011),Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Биомедицинская инженерия и биотехнология» (Курск, 2011), Международной заочной научно-практической конференции «Современная медицина: актуальные вопросы» (Новосибирск, 2012).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 30 научных работ, в том числе 5 в рекомендованных ВАК РФ изданиях.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт горноколосника колючего повышает устойчивость к физическим нагрузкам, проявившуюся в увеличении времени БМР крыс и мышей, сопоставимом с показателями экстракта родиолы и экстракта элеутерококка.

2. На моделях гемической и нормобарической гипоксий экстракт горноколосника колючего повышает устойчивость крыс к недостатку кислорода, противогипоксический эффект экстракта горноколосника на модели гемической гипоксии превосходит эффект препаратов сравнения -экстракта элеутерококка и экстракта родиолы.

3. Экстракт горноколосника колючего обладает антигипногенным действием, укорачивая длительность ингаляционного (хлороформного) наркоза у крыс.

4. Экстракт горноколосника колючего оказывает тонизирующее и психостимулирующее действие, улучшает количественные и качественные показатели тестов ОП, УРПИ и ГЖЛ, повышает пластичность поведения, оказывает позитивное влияние на память и условно-рефлекторную " деятельность крыс, не уступая по активности экстрактам родиолы и элеутерококка.

5. Введение экстракта горноколосника колючего при иммобилизационном стрессе у крыс оказывает выраженный защитный эффект не уступающий действию препаратов сравнения - экстрактов родиолы и элеутерококка. Антистрессорное действие экстракта горноколосника колючего проявляется в уменьшении гипертрофии надпочечников, выраженном противоязвенном эффекте и нормализации показателей системы крови и кариометрических данных надпочечников.