Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологические свойства экстракта Sophora flavescens Soland. и изучение его гастрозащитного действия

На правах рукописи

ШОБОЛОВА АЛЕКСАНДРА БАЗАРЖАПОВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТА SOPHORA FLAVESCENS SOLAND. И ИЗУЧЕНИЕ ЕГО ГАСТРОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

- 1 ДЕК 2011

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан-Удэ-2011

005004451

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской Академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Шантанова Лариса Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Цыренжапова Октябрина Даши-Дондо-бовна

кандидат медицинских наук Банзаракшеев Виталий Гамбалович

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет»

Защита состоится «23 » декабря 2011 г. в 1600 на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяно-вой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан «21» ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Хобракова В.Б.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В общей структуре болезней одно из ведущих мест занимают заболевания желудочно-кишечного тракта и, в первую очередь, язвенная болезнь и гастриты. Несмотря на значительные успехи, достигнутые в лечении указанных заболеваний, в настоящее время наблюдается тенденция к росту заболеваемости среди населения в России и за рубежом (Бутов, 2007; Родина, Моисеева, 2011; Сауа1сапи е( а!., 2006). Так, по данным статистических исследований в России в 2010 г. распространенность язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки составила 96 случаев на 1000 населения (Здоровье населения 2010), в высокоразвитых странах Европы и Америки число больных язвенной болезнью достигает 15% взрослого населения (Щербатых А.В. и соавт., 2005).

При этом, несмотря на использование высокоэффективных противоязвенных средств, развитие обострений и возникновение рецидивов наблюдается в 30-82 % случаев, осложненные формы язвенной болезни встречаются в 26-42 % случаев, а у 15-25 % больных существует проблема резистентности гастродуоденальных язв к фармакотерапевтическому воздействию (Щербатых и соавт., 2005; Куркин, 2006), почти у трети больных прием рекомендуемых препаратов сопровождается проявлением того или иного побочного действия (Емшанова и соавт., 2007). В этой связи актуальной проблемой остается разработка эффективных, не оказывающих побочного действия гастропротективных средств.

Одним из рациональных подходов к решению этой проблемы является применение средств растительного происхождения, имеющих ряд преимуществ перед химиопрепаратами: поливалентность действия, низкая токсичность, отсутствие негативных побочных эффектов при длительном приеме (Крылов, 2005; 2006).

Софора желтоватая БорИога Атеасет 8о1ап<1. (сем. РаЬасеае) является ценным лекарственным растением, широко используемым в народной и традиционной медицине стран Дальневосточного региона (Растительные ресурсы России, 2010). В тибетской медицине софора желтоватая известна под названием «слэ-трэс» и является одним из наиболее часто используемых видов сырьях в комплексных средствах (Базарон, Асеева, 1984). Спектр использования этого растения достаточно широк, в том числе его применяют для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (Сакаева и соавт., 2001; Кагщ й а1., 2000; Ко е1 а1., 2000).

В Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН разработан способ получения сухого

экстракта из корневищ и корней софоры желтоватой, обладающего гас-тропротективной активностью. Заявка на предполагаемое изобретение за № 1020300902914 от 25.08.2011 направлена в Роспатент.

Целью настоящего исследования явилось определение фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта БорИога Аауетеэ при повреждениях желудка в эксперименте, а также выявление возможных механизмов его гастропротективного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить фармакологические свойства сухого экстракта софоры желтоватой;

- оценить его фармакотерапевтическую эффективность при экспериментальных повреждениях желудка;

- определить особенности механизма гастропротективного действия сухого экстракта софоры желтоватой.

Научная новизна. Работа представляет собой исследование фармакологических свойств и гастропротективного действия сухого экстракта, полученного впервые из корневищ софоры желтоватой. Установлено, что сухой экстракт софоры в экспериментально-терапевтических дозах обладает противовоспалительным действием: уменьшает выраженность экссудации, ускоряет регенерацию, а также стимулирует секреторную активность слизистой оболочки желудка, оказывает анальгетическое, антибактериальное и иммуномодулирующее действие, обладает мембрано-стабилизирующей активностью. Установлена выраженная фармакотера-певтическая эффективность экстракта софоры при экспериментальных повреждениях желудка: стресс-индуцированном и лекарственном ульце-рогенезе, а также при «рефлюкс-гастрите». Показано, что курсовое введение экстракта софоры в экспериментально-терапевтических дозах препятствует развитию глубоких деструкции слизистой оболочки желудка, способствует сохранению его кислото- и ферментообразующих функций, ускоряет регенерацию тканей. Молекулярно-клеточным механизмом гастропротективного действия сухого экстракта софоры желтоватой является его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления, повышать потенциал эндогенной антиоксидантной системы организма и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток при повреждении желудка различной этиологии.

Практическое значение. Полученные данные о фармакологических свойствах и фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта

софоры желтоватой при повреждениях слизистой оболочки желудка оформлены в виде заявки на предполагаемое изобретение «Способ получения сухого экстракта, обладающего гастропротективными свойствами». Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет».

Положения, выносимые на защиту:

1. Сухой экстракт софоры желтоватой обладает противовоспалительным, иммуномодулирующим, анальгетическим, антибактериальным действием, стимулирует секреторную активность слизистой желудка, обладает мембраностабилизирующими свойствами;

2. Испытуемое средство оказывает выраженное фармакотерапевти-ческое влияние при экспериментальных повреждениях желудка, препятствуя развитию дистрофических и некротических изменений и способствуя функциональной состоятельности слизистой желудка;

3. Механизмы антиульцерогенного действия экстракта софоры связаны с наличием базисной мембраностабилизирующей активности, обусловленной ингибированием процессов свободнорадикального окисления, а также его выраженными иммуномодулирующими свойствами.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: III международной научной конференции «Традиционная медицина: современное состояние и перспективы развития» (г. Улан-Удэ, 2008 г.); межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета БГУ (г. Улан-Удэ, 2009 г.); научно-практической конференции, посвященной 110-летию НУЗ ОКБ на ст. Улан-Удэ (г. Улан-Удэ, 2010 г.); 5 Международной конференции «Present situation and future development of Mongolian traditional medicine» (Ulaan-baatar, 2011).

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 239 источников: 177 отечественных и 89 зарубежных авторов. Работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 27 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовали сухой экстракт корневищ софоры желтоватой. Способ получения данного экстракта разработан в лаборатории химико-фармацевтических исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (Заявка на получение патента РФ от 25.08. 2011 г.). Сухой экстракт получен путем экстракции растительного сырья 70% спиртом этиловым, упариванием полученного экстракта в вакууме и последующей быстрой сушкой. Полученный экстракт представляет сумму экстрактивных веществ, представленных флавоноидами, тритерпена-ми и алкалоидами. Флавоноидный состав в основном представлен прени-лированными производными флаванона и халкона. Стандартизация экстракта осуществляется по кураринону (01епшкоу, 2011).

Исследования выполнены на 350 белых крысах линии \Vistar обоего пола массой 180-200 г и 90 мышах линии Р, (СВА х С57В1/6) обоего пола массой 20-22 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.). Протокол исследования согласован этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол № 3 от 03.02.2009). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Разделение животных на группы производили с учетом принципа рандомизации. Кроме того, в экспериментах были использованы штаммы условно-патогенных бактерий, суспензии эритроцитов и желточных липо-протеидов, биохимические тест-системы.

Для исследования фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта софоры желтоватой были использованы следующие экспериментальные модели повреждения желудка:

- стресс-идуцированный ульцерогенез воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 24 часов;

- лекарственное повреждение слизистой оболочки желудка вызывали путем внутримышечного однократного введения бутадиона в дозе 300 мг/кг в виде 15% взвеси на ацетоне (Подвигина и соавт., 2003);

- гипосекреторный «рефлюкс-гастрит» воспроизводили путем 28-дневного пероралыюго введения медицинской желчи в объеме 1мл/100г (Акимов H.JI. и соавт., 1982).

Определение острой токсичности DL50 осуществляли по методу Кербера (Требования..., 1984).

Для оценки противовоспалительной активности сухого экстракта софоры определяли его влияние на экссудацию, альтерацию и образование фиброзно-грануляционной ткани. Изучение антиэкссудативной активности экстракта проводили на моделях острого асептического воспаления задней конечности животных, которое воспроизводили путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3% раствора формалина (Стрельников, 1960) и 0,1 мл 6% раствора декстрана (Лещинский, 1976). Острый перитонит вызывали у белых крыс внутрибрюшинным введением 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра (Александров и соавт., 1986). Оценку влияния указанного средства на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли с использованием метода «ватной гранулемы» (Тринус и соавт., 1975). Для определения влияния экстракта на процессы альтерации воспалительный процесс моделировали путем подкожного введения в область спины 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты с одновременным внутрибрюшинным введением декстрана в дозе 300 мг/кг (Ойвин, Шетель, 1961).

Влияние экстракта софоры на болевую чувствительность оценивали с использованием метода «горячих пластинок» (Woolfe, McDonald, 1944).

При исследовании параметров желудочной секреции животным накладывали лигатуру на привратник под барбамиловым наркозом (60 мг/кг, внутрибрюшинно). Через 12 часов определяли темп желудочной секреции и общую кислотность желудочного сока - по методу Михаэлиса (Лабораторные..., 1987), состояние ферментообразующей функции - по В.Т.Туголукову (1965).

Оценку антибактериальной активности экстракта софоры осуществляли методом двукратных серийных разведений в жидкой среде (Пер-шин, 1971). В качестве тест-объектов использовали бактерии кишечной группы: Escherichia coli 408, Staphylococcus aureus 209p, Proteus vulgaris h

50, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa. Микробная нагрузка составляла 250000 клеток в 1 мл. Культуры бактерий с исследуемым фи-тоэкстрактом термостатировали при 37°с в течение 20 часов.

Исследование иммуномодулирующей активности проводили с использованием модели иммуносупрессивного состояния у мышей, которое воспроизводили путем перорального введения цитостатика азатиоприна в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней. Состояние клеточного иммунитета оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ (Петров Р.В. и соавт., 1987). Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J. Cunningham (1965). Состояние макрофагального иммунитета оценивали в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей в отношении Staphylococcus aureus in vitro (Фрейдлин, 1976).

Определение мембраностабилизирующей активности осуществляли по степени перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови, который вызывали соответственно реактивом Фентона и добавлением дистиллированной воды (Ковалев и соавт., 1986).

Для оценки антиоксидантных свойств экстракта софоры определяли его влияние на интенсивность процессов свободнорадикального окисления и состояние эндогенной антиоксидантной системы организма. Для этого определяли концентрацию ТБК-активных продуктов в сыворотке крови (Темирбулатов P.A. и соавт., 1981) и гомогенате желудка (Гаври-лов В.Б. и соавт., 1983); активность супероксиддисмутазы (Чевари и соавт., 1985) и каталазы (Королюк и соавт., 1988) в сыворотке крови.

Кроме того, с использованием методов in vitro оценивали влияние испытуемого фитоэкстракта в различных концентрациях на динамику накопления ТБК-активных продуктов в суспензии липосом яичного желтка (Клебанов и соавт., 1988). Антирадикальную активность экстракта по отношению к супероксидным радикалам определяли по методу A.-S. Chen и соавт.(2003), по отношению к ДФПГ-радикалам - по методу A. Seyoum и соавт. (2006), по отношению к NO - по методу R. Govindarajan и соавт. (2003). Инактивацию пероксида водорода на фоне экстракта софоры оценивали по методу Chen A.-S. и соавт. (2003). Хе-латирующую активность испытуемого средства определяли с использованием О-фенантролинового метода (Теселкин, 1997).

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны по Манну-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2000). Различие считали достоверным при вероятности 95 % (Р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование острой токсичности сухого экстракта софоры желтоватой показало, что при внутрибрюшинном введении его ОЬ50, рассчитанная по методу Кербера, составила 1750,5 мг/кг (1247,1ч-1986,3). При внутрижелудочном введении экстракта софоры в диапазоне доз 4 0006 ООО мг/кг гибели животных в течение всего периода наблюдения не отмечали. Полученные данные позволяют отнести испытуемое средство к группе малотоксичных веществ по классификации К.К.Сидорова (Требования ..., 1984).

При исследовании противовоспалительной активности софоры желтоватой установлено, что данное средство при превентивно-курсовом введении в дозах 50, 100 и 200 мг/кг на фоне острого асептического воспаления, вызванного введением формалина, сопровождается уменьшением выраженности отека (табл. 1).

Таблица 1

Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на экссудативную

фазу воспаления при формалиновом отеке

Группы животных Доза, мг/кг Д, мл % угнетения отека

Контрольная (п = 6) - 0,48 ± 0,025

Опытная 1 (экстракт софоры желтоватой) (п = 6) 25 0,41 ±0,018 15

50 0,33 ± 0,027* 31

100 0,30 ±0,031* 38

Опытная 2 (калефлон) (п = 6) 100 0,29 ±0,021* 30

Примечания: Д - разность между объемами отечной и неотечной лапок; * -здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных контрольной гру ппы при Р < 0,05.

Наиболее выраженное антиэкссудативное действие фитоэкстракт оказывает в дозах 50-100 мг/кг, угнетая развитие отека на 31-38% по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом активность испытуемого средства в указанных дозах сопоставима с таковой у препарата сравнения калефлона. На основании полученных данных в качестве экспериментально-терапевтической дозы в последующих экспериментах была использована доза, составляющая 50 мг/кг. Антиэкссуда-

тивное действие экстракта софоры в указанной дозе было выявлено также при декстрановом и гистаминовом отеке конечности, на фоне которых отмечали уменьшение объема экссудата соответственно на 15 и 28% по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы.

Таблица 2

Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на процессы альтерации и регенерации при остром асептическом воспалении у белых крыс

Группы животных Площадь альтерации, см

7 сутки 14 сутки 21 сутки

Контрольная (п=6) 3,9 + 0,18 2,8 ± 0,20 1,9 ± 0,16

Опытная 1 (экстракт софоры желтоватой) (п=8) 3,5 ± 0,26 2,1 ±0,15* 0,43 +0,08*

Опытная 2 (калефлон) (п=8) 3,4 + 0,25 2,0 + 0,25* 0,84 + 0,06*

Как следует из данных, приведенных в таблице 2, курсовое введение животным экстракта софоры в дозе 50 мг/кг на фоне повреждения тканей уксусной кислотой сопровождается уменьшением степени альтерации тканей и ускорением регенерации. При этом антиальтеративный эффект испытуемого средства, как и препарата сравнения, проявляется на ранних сроках эксперимента: на 7 сутки площадь альтерации у крыс опытных групп была в среднем на 20% меньше, чем в контроле. Кроме этого, 3-х крыс, получавших экстракт софоры желтоватой, не отмечали развития кожно-мышечного дефекта. На 21 сутки у 5-ти крыс, получавших экстракт софоры желтоватой, наблюдали полное закрытие кожно-мышечного дефекта, а у оставшихся - ее площадь была в 4 раза меньше, чем у животных контрольной группы.

При исследовании влияния экстракта софоры на секреторную активность слизистой оболочки желудка животных показано, что 5-дневное его введение в дозе 50 мг/кг сопровождается повышением уровня секреции соляной кислоты и пепсина соответственно на 26% и в 2,6 раза по сравнению с аналогичными показателями у интактных крыс.

Установлено, что экстракт софоры оказывает бактерицидное действие по отношению к Pseudomonas aeruginosa (в концентрации 0,63 мг/мл), бактериостатическое - к Escherihia coli, Staphylococcus aureus и Streptococcus faecalis (в концентрации 1,56 мг/мл), слабое бактериостатическое действие по отношению к Proteus vulgaris (в концентрации 6,25 мг/мл).

При исследовании анальгезирующего действия экстракта софоры в дозе 50 мг/кг при контактно-тепловом раздражении установлено, что по-

рог болевой чувствительности у животных опытной группы повышался на 70% по сравнению с данными у крыс контрольной группы.

Изучение иммуномодулирующих свойств экстракта софоры, проведенное на модели экспериментальной иммуносупрессии, показало, что курсовое введение мышам фитосредства в дозе 50 мг/кг сопровождается повышением активности клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа организма (табл. 3).

Таблица 3

Влияние экстракта софоры на выраженность реакций гиперчувствительности замедленного типа, антителообразования и фагоцитоза на фоне азатиоприновой иммуносупрессии у мышей линии П(СВАхС57В1\6)

Группы животных

Показатели реакций Интактная (п=10) Контрольная (азатиоприн) (п=10) Опытная 1 (азатиоприн+ экстракт софоры) (п=10)

Индекс реакции ГЗТ 41,7± 3,99 27,3± 1,35 43,5± 2,74*

Ьй О < на селезенку 59267± 3434 32333± 2195 71533± 4996*

03 i о на 10 спленоцитов 226,0± 18,8 159,0± 14,4 472,0± 34,9*

Активность, % 81,8± 2,44 42,4 ± 1,54 85,8 ±4,81*

Фагоцито Интенсивность (ср. кол-во St. aureus, поглощенное 1 ПМ) 7,8 ±0,61 3,9 ±029 6,6 ± 0,50*

В частности, установлено, что экстракт софоры повышает индекс реакции ГЗТ в среднем в два раза по сравнению с контролем. Также установлено стимулирующее влияние фитосредства на гуморальное звено иммунного ответа, на что указывает существенное увеличение количества антителообразующих клеток как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов в 2 и 3 раза соответственно по сравнению с контролем. С использованием культуры перитонеальных макрофагов показано, что внесение в культуральную среду экстракта софоры в концентрациях, эквивалентных экспериментально-терапевтическим дозам, на фоне введения азатиоприна сопровождалось повышением функциональной активности перитонеальных макрофагов. При этом активность фагоцитоза увеличивалась в 2 раза, а интенсивность - в 1,5 раза по сравнению с контролем.

Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при экспериментальных повреждениях желудка

При исследовании фармакотерапевтической эффективности экстракта софоры желтоватой установлено, что его курсовое введение крысам рег об в дозе 50мг\кг оказывает выраженное гастропротективное действие при повреждениях желудка: стресс-индуцированном и бутадиеновом ульцерогенезе, а также при «рефлюкс-гастрите».

Так, превентивное 7-дневное введение экстракта софоры в дозе 50 мг/кг на фоне 24-часовой иммобилизации оказывает выраженное стресс-протективное действие, уменьшая выраженность «триады Селье»: гипертрофии надпочечников, инволюции иммунных органов и развития деструкции в слизистой оболочке желудка белых крыс (табл. 4). Так, масса надпочечников крыс опытной группы была меньше, чем в контроле на 35%; масса тимуса и селезенки больше, чем в контроле на 20 и 27% соответственно.

Гастропротективное действие экстракта софоры проявлялось в задержке развития глубоких деструкций в слизистой оболочке желудка: у животных опытной группы количество точечных кровоизлияний и эрозий было соответственно в два и три раза меньше, чем в контроле. При этом, у крыс опытной группы не наблюдали образования полосовидных язв, тогда как у животных контрольной группы в 80 % случаев отмечали появление такого глубокого поражения слизистой как полосовидные язвы. При этом показано, что фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры превосходит таковую у препарата сравнения - бефунгина.

Установлено, что на фоне введения крысам экстракта софоры в указанной дозе отмечается выраженное уменьшение интенсивности процессов свободнорадикального окисления, индукция которых наблюдается при стрессорном повреждении желудка. У крыс опытной группы концентрация ТБК-активных продуктов в сыворотке крови уменьшалась на 53%, активность каталазы и СОД повышалась соответственно на 33 и 76% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

При изучении фармакотерапевтической эффективности экстракта софоры при ульцерогенезе у крыс, индуцированном введением токсических доз бутадиона, установлено, что через сутки после инъекции бута-диона погибло 25% животных контрольной группы при 100 % выживаемости в опытной группе.

Таблица 4

Влияние экстракта софоры на характер повреждений слизистой оболочки желудка белых крыс при стресс-индуцированном ульцерогенезе

Показатели Группы животных

Интактная (п=8) Контрольная (стресс) (п=8) Опытная 1 (стресс+экстра кт софоры) (п=8) Опытная 2 (стресс+ бефунгин) (п=8)

Масса надпочечников, мг 32,7 ±4,08 75,0 ±5,43 45.4 ±5.22* 73.6 ±6.38

Масса тимуса, мг 149,5 ±12,4 98,0 ±4,55 117,8 ±5.84* 134,5 ±11,50*

Масса селезенки, мг 495,3±60,45 340,3± 30,08 430,6± 28,47 425,3±34,78*

Кол-во точечных кровоизлияний на 1 животное 1,0 ± 0,12 0,42 ± 0,30* 1,4 ±0,50

Кол-во эрозий на 1 животное 2,5 ±0,54 0,8 ± 0,36* 1,0 ±0,12*

Кол-во поло-совидных язв на 1 животное 1,1 ±0,20 0,0 0,9 ±0,12

Таблица 5

Влияние экстракта софоры на выраженность повреждений слизистой оболочки

желудка белых крыс и показатели свободнорадикального окисления _при остром бутадионовом повреждении_

Показатель Группы животных

Интактная (п=8) Контрольная (буга-дион) (п=8) Опытная 1 (бутади- он+экстракт софоры) (п=8) Опытная 2 (бутади-он+бефун ги)(п=8)

1 2 3 4 5

Кол-во точечных кровоизлияний на 1 животное 13.7 ± 1,25 8.9+1.33 9.0 ± 1,04

Кол-во эрозий на 1 животное - 4.5 ±0.64 0.24 + 0.02* 1.55±0.09*

Окончание табл. 5

1 2 3 4 5

Кол-во полосовидных язв на 1 животное - 1.7 ± 1.02 0.20 + 0,04* 0.23±0,01*

МДА, мкмоль/мл 2,9+ 0.24 11,7+0,56 4,5+ 0,23* 7,8± 0,33*

Активность каталазы. м кат/л 10,5+ 0,72 5,0+0,62 8,9+ 0,43* 8,3± 0,23*

Активность СОД. мкмоль/мл 24,1± 2.35 7,7±0,52 19,0±1,82* 15.6±1,37*

Как следует из данных, приведенных в таблице 5, превентивное курсовое введение животным экстракта софоры в дозе 50 мг/кг при бутадиеновом ульцерогенезе оказывает гастропротективное действие, о чем свидетельствует уменьшение количества деструкций в слизистой оболочке желудка: количество точечных кровоизлияний и эрозий у крыс опытной группы было соответственно на 35 и в 5 раз меньше, чем в контроле, а полосовидные язвы были отмечены у 3-х крыс из 8 в группе. Показано также, что курсовое введение внутрижелудочное экстракта софоры оказывает выраженное антиоксидантное действие: у крыс опытной группы наблюдали уменьшение концентрации МДА в сыворотке крови в 2,5 раза и повышение активности каталазы на 78% и СОД - в 2,5 раза по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

В таблице 6 представлены результаты исследования фармакотера-певтической эффективности экстракта софоры в дозе 50 мг/кг при остром «рефлюкс-гастрите» у белых крыс.

Таблица 6

Влияние экстракта софоры на функциональное состояние желудка белых крыс при экспериментальном «рефлюкс-гастрите»

Показатели Группы животных

Интактная (п=8) Контрольная (рефлюкс- гастрит) (п=8) Опытная (рефлюкс-гастрит+экстракт софоры) (п=8)

Общая кислотность, ТЕ 144.4 ± 1.30 69.4 + 6.25 96,5+ 11,00*

Темп желудочной секреции. мл/100г/час 0,5 ± 0,06 0.40 ± 0,03 0,5 + 0,04

Дебит-час HCL. мкг/100 г/час 86.6 ±9.11 20,55 + 3.00 64,6 + 5.77*

Пепсин, мг/мл 39.9 + 3.24 3.9 + 0.49 7.2 + 0.06*

Как следует из таблицы 6, альтерация желудка медицинской желчью сопровождается значительными нарушениями функционального состояния слизистой оболочки желудка белых крыс. Курсовое введение животным экстракта софоры в указанной дозе оказывает выраженное гастро-протективное действие, препятствуя атрофии слизистой оболочки желудка и способствуя сохранению его секреторной активности. Так, у крыс опытной группы на 28 сутки эксперимента существенно повышалась ки-слото- и ферментообразуюшая функции желудка: общая кислотность, темп желудочной секреции и дебит-час соляной кислоты превышали аналогичные показатели крыс контрольной группы соответственно на 40, 25 % и в 3 раза; содержание пепсина при введении испытуемого экстракта повышалось на 82 % по сравнению с показателями в контроле. Гастро-протективный эффект испытуемого средства при экспериментальном «рефлюкс-гастрите» проявлялся также в уменьшении степени повреждения слизистой оболочки желудка крыс: число эрозий у животных опытной группы было вдвое меньше, чем в контроле, индекс Паулса (ИП) составил 0,29 против 1,84 в контроле. У крыс, получавших испытуемое средство, не наблюдали образования полосовидных язв при 100 % поражении в контроле. Установлено также, что курсовое введение экстракта софоры оказывает антиоксидантное действие, уменьшая выраженность процессов свободнорадикального окисления и повышая активность системы антиоксидантной защиты организма. Так, на фоне введения животным испытуемого средства концентрация МДА в сыворотке крови была меньше, чем в контроле в среднем на 50%, а активность каталазы и су-пероксиддисмутазы в крови повышались соответственно на 50 и 33 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

Исследование механизмов гастропротективного действия экстракта софоры желтоватой показало, что его внесение в суспензию эритроцитов донорской крови оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень осмотического и перекисного гемолиза эритроцитов. При этом обнаружен дозозависимый эффект: при осмотическом гемолизе актив- ность данного экстракта возрастает с увеличением его концентрации в инкубационной среде: при добавлении 2,0 мг/мл испытуемого средства степень осмотического гемолиза снижается почти на 60% по сравнению с показателями контрольной пробы. При перекисном гемолизе обнаружена обратная зависимость: активность экстракта снижается с уменьшением его концентрации в инкубационной пробе и наиболее выраженное уменьшение гемолиза (на 90%) установлено при использовании его в концентрации 0,2 мг/мл. Можно полагать, что меха-

низм мембраностабилизирующего действия экстракта софоры при пере-кисном гемолизе связан с ингибированием процессов свободнорадикаль-ного окисления, поскольку свободные радикалы, образующиеся при распаде реактива Фентона, индуцируют перекисное окисление липидов в клеточных мембранах и приводят к гемолизу эритроцитов. Наличие мем-браностализирующих свойств у экстракта софоры было подтверждено данными об уменьшении выраженности дегрануляции тканевых макрофагов и экссудации при остром перитоните (табл. 7). Как следует из приведенной таблицы, курсовое введение крысам экстракта софоры в дозе 50 мг/кг сопровождается уменьшением объема внутрибрюшинной жидкости у крыс опытной группы на 17% по сравнению с данными у животных контрольной группы. Интенсивность окраски внутрибрюшинного экссудата была в два раза меньше, чем в контроле, что свидетельствует об отсутствии в ней эритроцитов. В брыжейке крыс опытной группы отмечалось снижение количества дегранулированных тучных клеток - в среднем на 30% по сравнению с данными у крыс контрольной группы.

Таблица 7

Влияние экстракта софоры на экссудацию, сосудистую проницаемость

и дегрануляцию тканевых макрофагов у белых крыс _при остром асептическом воспалении

Группы животных Объем перитоне-альн.экссудата, мл Дегрануляция макрофагов, % Интенсивность окраски пери-тонеального экссудата, Е 540 нм

Интактная (п=8) - 4,21 ±0,34 -

Контрольная (воспале-ние+Н2 О) (п=8) 0,73 ± 0,06 68,2 ±4,40 0,14 + 0,02

Опытная (воспале-ние+экстракт софоры) (п=8) 0,61 ±0,05* 47,8 ±3,50* 0,07 ± 0,005*

Опытная (воспале-ние+калефлон) (п=8) 0,44 ±0,02* 48,0 ±5,06* 0,08 ± 0,004*

С использованием методов in vitro выявлено, что антиоксидантная активность экстракта софоры обусловлена наличием прямого антирадикального действия, а также опосредованного, связанного с его хелати-рующими свойствами. Так, наличие выраженной антирадикальной активности было установлено по отношению к супероксидным анион-радикалам и радикалам NO: уровень связывания указанных радикалов

повышался с увеличением концентрации средства в инкубационной среде и достигал максимальных значений (90% связывание) при концентрации средства 5,55 мл/мл. При этом антирадикальная активность испытуемого экстракта была сопоставима с таковой у танина и аскорбиновой кислоты, но уступала действию ионола. Установлено также, что экстракт софоры достоверно снижает скорость накопления ТБК-активных продуктов в модельной системе и проявляет выраженные хелатирующие свойства, практически на 100% связывая ионы железа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенного исследования свидетельствуют, что экстракт софоры желтоватой при курсовом введении в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг обладает фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальных повреждениях желудка, препятствуя развитию атрофии и деструкции слизистой оболочки, а также способствуя ускорению регенерации и восстановлению ее функциональной активности на более ранних сроках патологического процесса. Одним из наиболее важных свойств экстракта софоры, обеспечивающим его гас-тропротективное действие, следует признать наличие противовоспалительных свойств, благодаря которым уменьшается степень альтерации слизистой желудка, ускоряется репарация его поврежденных структур и тем самым обеспечивается восстановление их структурной целостности и повышение функциональной состоятельности. Учитывая полученные данные о существенном снижении степени дегрануляции тучных клеток под влиянием экстракта софоры, один из аспектов его противовоспалительного действия может быть связан с его способностью блокировать высвобождение гистамина и других провоспалительных агентов из базо-филов и тучных клеток. Очевидно, что противовоспалительное действие фитоэкстракта обусловлено также его способностью стимулировать процессы микроциркуляции в очаге воспаления, на что указывают полученные нами данные о снижении сосудистой проницаемости и уменьшении внутрибрюшинной экссудации под влиянием экстракта софоры. Очевидно, что реализация этой активности фитоэкстракта обеспечивается содержащимися в нем флавоноидными соединениями, обладающими Р-витаминными эффектами (Барабой и соавт., 1998; Макарова, 2011).

Важное значение в реализации гастропротективного действия экстракта софоры имеют выявленные нами антибактериальные и иммуно-модулирующие свойства фитоэкстракта. Поскольку зачастую возбудите-

лем язвенной болезни является Helicobacter pylori (Васильев, 2002; 2007 и др.), антибактериальные и иммуностимулирующие свойства биологически активных веществ софоры желтоватой, способствуют, очевидно, ускорению эррадикации бактериального возбудителя. Вместе с этим, определенное значение имеют выявленные анальгезирующие свойства экстракта, обусловленные наличием в экстракте алкалоидов .

Показано, что механизм противовоспалительного действия испытуемого фитоэкстракта связан со стабилизацией мембранных структур клеток под его влиянием, на что указывают полученные нами данные о снижении степени гемолиза эритроцитов, а также дегрануляции тканевых макрофагов. С использованием модельных систем установлено, что базисные молекулярно-клеточные механизмы мембраностабилизирующего действия экстракта софоры заключаются в его способности ингибировать процессы свободнорадикального окисления, повышать активность анти-оксидантной системы. Об универсальности указанного механизма в действии экстракта софоры свидетельствуют данные об ингибировании процессов ПОЛ при повреждениях желудка, вызванных различными факторами. Так, на фоне введения экстракта наблюдали снижение концентрации продуктов процесса переоксидации липидов и повышение активности ферментов эндогенной антиоксидантной системы организма в опытах in vivo и in vitro . Полученные данные согласуются с данными литературы, указывающими на то, что ключевым триггерным механизмом развития гастропатий и язвенной болезни является индукция процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул с одновременным угнетением антиоксидантной защиты организма (Мусинов, 2007; Меньшикова и соавт., 2008). Ингибирование процессов ПОЛ обеспечивается входящими в состав экстракта соединениями фенольной природы: флаво-ноидами, тритерпенами и др. (Olennikov, 2011), обладающими прямым радикалперехватывающим действием и, тем самым, прерывающими сво-боднорадикальные реакции (Сафонова и соавт., 2001), а также косвенными хелатирующими свойствами.

ВЫВОДЫ

1. Сухой экстракт софоры желтоватой обладает противовоспалительным, иммуномодулирующим, анальгезирующим, антибактериальным, мембраностабилизирующим действием, стимулирует секреторную активность слизистой оболочки желудка;

2. курсовое введение белым крысам экстракта софоры желтоватой в экспериментально-терапевтической дозе (50 мг/кг) при экспериментальном ульцерогенезе препятствует развитию атрофии и деструкции слизистой оболочки желудка, способствует ускорению ее регенерации и восстановлению его функциональной активности на более ранних сроках патологического процесса;

3. механизмы антиульцерогенного действия экстракта софоры связаны с наличием базисной мембраностабилизирующей активности, обусловленной ингибированием процессов свободнорадикального окисления, а также с его выраженными иммуномодулирующими свойствами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шоболова А.Б. Антиэкссудативная активность сухого экстракта Sophora flavencens Soland /А.Б. Шоболова //Тезисы межрегиональной конференции студентов и молодых ученых с международным участием, посвященной десятилетию медицинского факультета БГУ. - Улан-Удэ, 2009.-С. 236-237.

2. Shobolova A.B. Acute toxicity of extractions from the roots and rhizomes of Sophora flavescens I A.B. Shobolova, D.V. Sandanov, L.N. Shan-tanova //Materials of the III International Scientific Conference "Traditional Medicine: a current situation and perspectives of development". - Ulan-Ude, 2008.-P. 90.

3. Хобракова В.Б. Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на показатели гуморального звена иммунного ответа / В.Б. Хобракова, А.Б. Шоболова, С.М. Николаев //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2009. - № 3 (67).-С. 228-229.

4. Хобракова В.Б. Влияние сухого экстракта софоры желтоватой и выделенных из нее фракций на состояние клеточного звена иммунного ответа / В.Б. Хобракова, А.Б. Шоболова, Д.Н. Оленников, С.М. Николаев //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 2 (72). - С. 219-221.

5. Шоболова А.Б. Иммунокорригирующее действие сухого экстракта софоры желтоватой / А.Б. Шоболова, В.Б. Хобракова, Д.Н. Оленников //Мат-лы III Всеросс. науч.-практич. конф. с междун. участием «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2010. - С. 397-399.

6. Khobrakova V.B. The perspectives of Sophora flavescens application as immunomodulator / V.B. Khobrakova, A.B. Shobolova, D.N. Olennikov //Abstracts of International Scientific Conference "Current situation and future

trends of drug research and development from natural sources". - Ulaanbaatar, 2010.-P. 122-123.

7. Хобракова В.Б. Влияние фракций, выделенных из софоры желтоватой, на антителообразование / В.Б. Хобракова, А.Б. Шоболова, Д.Н.Оленников //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 3 (73). -С. 275-277.

8. Хобракова В.Б. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта софоры желтоватой при экспериментальной иммунодепрессии / В.Б. Хобракова, А.Б. Шоболова, Д.Н.Оленников //Сибирский медицинский журнал.-2010.-№8.-С. 140-141.

Подписано в печать 18.11.2011. Формат 60x84 1/16. Печать офсетная. Бумага офсетная. Гарнитура Тайме. Усл. печ. л. 1,7. Уч.-изд. л. 1,6. Тираж 100. Заказ № 61.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.