Фармакологическая защита эндотелия донорских роговиц гомологичными клеточными пептидами на этапе консервации

Ролик, Ольга Ивановна

Диссертации по медицине → Глазные болезни

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.07) на тему:Фармакологическая защита эндотелия донорских роговиц гомологичными клеточными пептидами на этапе консервации

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Ролик, Ольга Ивановна Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.07

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологическая защита эндотелия донорских роговиц гомологичными клеточными пептидами на этапе консервации

На правах рукописи

РОЛИК ОЛЬГА ИВАНОВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ЗАЩИТА ЭНДОТЕЛИЯ ДОНОРСКИХ РОГОВИЦ ГОМОЛОГИЧНЫМИ КЛЕТОЧНЫМИ ПЕПТИДАМИ НА ЭТАПЕ КОНСЕРВАЦИИ

14.01.07 - глазные болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 2 НОЯ 2012

Москва - 2012

005055360

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Министерства Здравоохранения России

Научные руководители: доктор медицинских наук

Борзенок Сергей Анатольевич

доктор медицинских наук, профессор Онищенко Нина Андреевна

Официальные оппоненты:

Каспаров Аркадий Александрович

доктор медицинских наук, профессор, руководитель отделения реконструктивной микрохирургии глаза НИИ глазных болезней РАМН

Слонимский Юрий Борисович

доктор медицинских наук, профессор, доцент кафедры офтальмологии РМАПО

Ведущая организация: ФГБУ «МНИИ Глазных болезней им.

Гельмгольца» Министерства Здравоохранения России

Защита состоится «3» декабря 2012 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета по защите докторских диссертаций Д.208.014.01 при ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России по адресу: 127486, г. Москва, Бескудниковский бульвар, д. 59А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Министерства Здравоохранения России

Автореферат разослан «2» ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

В.В. Агафонова

Список сокращений

БАВ - Биологически активные вещества

ЗАПК - Задняя автоматизированная послойная кератопластика

ПЭК - Плотность эндотелиальных клеток

СКП - Сквозная кератопластика

СЭМ - Сканирующая электронная микроскопия

ТЭМ - Трансмиссионная электронная микроскопия

ЭК - Эндотелиальные клетки роговицы (задний эпителий роговицы)

ЭЭД - Эпителиально-эндотелиальная дистрофия роговицы

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Для прозрачного приживления сквозного трансплантата роговицы необходима максимальная сохранность морфофункционального состояния клеток эндотелия (заднего эпителия) донорской роговицы (Каспаров А.А. и др., 1990; Хорошилова-Маслова И.П. и др., 1990; Явишева Т.М., 1990; Федоров С.Н. и др., 1993; Ронкина Т.И., 1994; Вит В.В., 2003; Abramo F. et al., 1990; Hwang D.G. et al., 1993; Krachmer J.H. et al., 2005). После изъятия донорский материал претерпевает ряд патологических изменений, связанных с изменением микроокружения и тканевой ишемией, вызывающих снижение потенциала жизнеспособности и структурные перестройки (Hsu J.K.W. et al., 1999; Krachmer J.H., 2005).

Метод гипотермической консервации является краткосрочным и позволяет сохранять трупные донорские роговицы для трансплантации в культуральных средах при низких положительных температурах. В настоящее время с этой целью используется несколько сред: OPTISOL (табельная среда для всех Глазных банков Америки, Азии, Индии и ряда стран Востока), EUSOL (европейский аналог среды OPTISOL; широко применяется в Глазных банках стран ЕвроСоюза), среда Борзенка-Мороз (табельная среда для всех Глазных банков Российской Федерации). Эти среды

позволяют сохранять жизнеспособность и основные морфометрические характеристики эндотелия до 6-ти суток консервации (Борзенок С.А., 19982008; Слонимский Ю.Б., Слонимский А.Ю., 2004; Directory ЕЕВА, 20022006; Heck Е„ 2005; Sato Е.Н., 2005).

Консервация роговиц методом органного нормотермического культивирования в средах на основе 199 среды на солях Эрла, рекомендованных европейской ассоциацией глазных банков для органного культивирования донорской роговицы, позволяет сохранять роговичный трансплантат до 30-ти суток (Bredehorn-Mayr T. et al., 2009; Pels Е., Rijneveld W.J. 2009).

В настоящее время успех выполнения различного вида кератопластик напрямую связывается с повышением жизнеспособности и морфофункциональной сохранности ЭК донорских роговиц в процессе консервации. С целью повышения резистентности ЭК донорских роговиц к гипотермическому стрессу, фактору длительной изоляции и остановки процессов посмертного апоптоза, все большее внимание привлекает возможность добавления БАВ в культуральные среды (Шумаков В.И. и др., 1983; Борзенок С.А., 2006-2008; Chu Y.I., 2000; Krachmer J.H. et al., 2005; Sornelli F. et al. 2010; Fucherluger T.A. et al. 2011; Peh G.S. et al., 2011).

Данные о фармакологической защите трупных донорских роговиц с помощью гомологичных регуляторных пептидов, на этапе консервации в литературе отсутствуют.

Цель работы: повысить жизнеспособность и трансплантационные качества эндотелиальных клеток трупной донорской роговицы в процессе гипотермической консервации и нормотермического органного культивирования.

Задачи исследования

1. Разработать рецептуру органных сред для гипотермической консервации и органного культивирования трупных донорских роговиц с включением в их состав регуляторных клеточных пептидов.

2. Провести сравнительный анализ изменения морфометрических характеристик эндотелиальных клеток трупных роговиц человека в процессе гипотермической консервации и нормотермического культивирования в культуральных средах, содержащих регуляторные клеточные пептиды тканей роговицы.

3. Провести сравнительный анализ изменений ультраструктурных характеристик эндотелиальных клеток трупных роговиц человека в процессе гипотермической консервации и нормотермического культивирования в культуральных средах с добавлением в них регуляторных клеточных пептидов тканей роговицы.

4. Изучить антиапоптотический эффект регуляторных клеточных пептидов на эндотелий донорской роговицы в процессе гипотермической консервации и органного культивирования.

5. Разработать прогноз потери эндотелиальных клеток донорских роговиц в процессе консервации.

Научная новизна результатов исследования

1. Впервые установлено, что апоптотический индекс эндотелиальных клеток донорских роговиц в среде Борзенка-Мороз с добавлением регуляторных клеточных пептидов на сроке консервации 9 суток составляет 17,1% при потере плотности эндотелиальных клеток в этот срок - 4,8%, по сравнению с апоптотическим индексом эндотелиальных клеток донорских роговиц в условиях стандартной консервации - 18,8% и снижением плотности эндотелия на 7,45%.

2. Впервые установлено, что добавление регуляторных клеточных пептидов в среду Борзенка-Мороз в течение длительной консервации до 12-ти суток повышает жизнеспособность эндотелиальных клеток донорских роговиц, что проявляется в снижении потери эндотелиальных клеток с 10,5% до 8,5%, замедлении увеличения площади эндотелиальных клеток с 4% до 3%, уменьшении потери гексагональных клеток с 31,4% до 8,7%.

3. Впервые установлено, что апоптотический индекс эндотелиальных клеток донорских роговиц, консервированных в органной среде на основе среды 199 на солях Эрла с добавлением регуляторных клеточных пептидов на сроке культивирования 18 суток составляет 8,2% при потере плотности эндотелиальных клеток в этот срок - 4,8%, по сравнению с апоптотическим индексом эндотелиальных клеток донорских роговиц в условиях стандартной консервации - 12,3%, и снижением плотности эндотелиальных клеток на 6,3%.

4. Впервые установлено, что добавление регуляторных клеточных пептидов в стандартную среду для органного культивирования на основе среды 199 на солях Эрла в течение длительного культивирования до 31-их суток повышает жизнеспособность эндотелиальных клеток донорских роговиц, что проявляется в снижении потери эндотелиальных клеток с 11,3% до 8,5%, замедлении увеличения площади эндотелиальных клеток с 7,3% до 6%, снижении потери гексагональных клеток с 41% до 17%.

Практическая значимость результатов исследования

1. Доказано, что добавление клеточных пептидов в среду Борзенка-Мороз для гипотермической консервации в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов в объеме 10 мл в виде препарата ЫеуШЬ №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) пролонгирует сроки консервации донорской роговицы до 9 суток.

2. Доказано, что добавление клеточных пептидов в стандартную среду для органного культивирования, в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов в объеме 10 мл в виде препарата ЫеуШЬ №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) пролонгирует сроки консервации донорской роговицы до 24-х суток.

3. Созданные номограммы для определения потери эндотелиальных клеток донорских роговиц в процессе консервации в зависимости от вида, срока консервации, состава сред и исходной плотности эндотелия донорского материала, позволяют индивидуально подходить к выбору донорского

материала в зависимости от исходной нозологической формы патологии роговицы реципиента.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Добавление регуляторных клеточных пептидов в среды для гипотермической консервации (среда Борзенка-Мороз) и органного культивирования (среда, рекомендованная европейской ассоциацией глазных банков) способствует снижению потери эндотелиальных клеток в процессе консервации, сохраняет их мономорфизм и гексагональность, ингибирует процессы клеточного апоптоза, что свидетельствует о повышении жизнеспособности эндотелиальных клеток и позволяет пролонгировать сроки гипотермической консервации до 9-ти суток и нормотермической консервации до 24-х суток.

2. Созданы номограммы, позволяющие рассчитать потерю эндотелиальных клеток донорских роговиц в процессе консервации в зависимости от вида, срока консервации, состава сред и исходной плотности эндотелия донорского материала, что позволяет индивидуально подходить к выбору донорского материала в зависимости от исходной нозологической формы патологии роговицы реципиента.

Внедрение в практику Результаты исследований внедрены в работу лаборатории трансплантологии и консервации с Глазным Тканевым банком головной организации и Лаборатории наших филиалов ФГБУ «МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова».

Результаты диссертационной работы используются в лекционных курсах для клинических ординаторов, аспирантов и курсантов Научно-педагогического центра ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова», а также ординаторов и аспирантов кафедры глазных болезней Московского государственного медико-стоматологического университета имени А.И. Евдокимова.

Апробация работы

Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на IV Всероссийском съезде трансплантологов памяти академика В.И. Шумакова (Москва, 2008); VI Международном научно-практическом конгрессе «Человек в экстремальных условиях: человеческий фактор и профессиональное здоровье» (Москва, 2008); XIX Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2009); научно-практической конференции «Экологическая медицина и офтальмология» (Москва, 2009); IV Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2009); IX Съезде офтальмологов России (Москва, 2010); V Всероссийском съезде трансплантологов (Москва, 2010); клинической конференции МНТК «МГ» (Москва, 2010); 23-й ежегодной конференции Европейской Ассоциации Глазных Банков (Фрайбург, Германия, 2011); научно-практической конференции офтальмологов с международным участием «Филатовские чтения», посвященной 75-летию основания ГУ «Институт глазных болезней и тканевой терапии им. В.П.Филатова Национальной академии медицинских наук Украины» (Одесса, Украина, 2011); 2-м международном ежегодном конгрессе ЕиСогпеа (Вена, Австрия, 2011); 5-ом Российском общенациональном офтальмологическом форуме (Москва, 2012).

Публикации

По материалам диссертации опубликована 21-а печатная работа, из них 4 в журналах, рецензированных ВАК РФ и 4 в иностранной печати. По теме диссертационной работы получен 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации

Работа изложена на 122-х страницах машинописного текста; иллюстрирована 17-ью таблицами, 24-мя рисунками. Список литературы включает 151 источник, из них 52 - отечественных и 99 - иностранных.

Содержание работы Материалы и методы исследования

Для выполнения задач исследования были отобраны 174 донорские роговицы. Средний возраст доноров составил 32±4 лет. Показатель трансплантабельности донорских роговиц соответствовал ЗА, ЗВ, 2А и 2В по классификации С.А. Борзенка (2008). Средняя плотность эндотелиальных клеток (ПЭК) донорского материала, вошедшего в эксперимент, составила 2863±265,2 кл/мм2. Роговицы парных донорских глаз составили контрольную группу. При оценке данных СЭМ и ТЭМ за норму принималась морфометрическая и ультраструктурная картина эндотелиального пласта 6-ти донорских роговиц, полученных не позднее 6-ти часов после констатации биологической смерти.

В качестве препарата, содержащего регуляторные клеточные пептиды роговицы, использовался моноорганный препарат NeyDIL №37 Still, содержащий гомологичные регуляторные пептиды клеточной цитоплазмы эмбриональных роговых оболочек животных в концентрации 100 мкг/мл.

Было проведено in vitro сравнение ультраструктуры, морфометрических характеристик и витальности (апоптотического индекса) эндотелиальных клеток 84-х трупных донорских роговиц от 42-х доноров трупов в условиях гипотермической консервации (t +6° С) в течение 12-ти суток и эндотелиальных клеток 84-х трупных донорских роговиц от 42-х доноров трупов при нормотермическом культивировании (t +35° С) в течение 31-их суток в консервационных средах с добавлением и без добавления в их состав гомологичных клеточных пептидов роговицы.

Применялась стандартная среда для органного культивирования, рекомендованная Европейской ассоциацией глазных банков, без добавления фетальной бычьей сыворотки (чтобы исключить влияние содержащихся в ней факторов роста и регуляторных пептидов на ЭК, культивированных донорских роговиц). Культивирование трупных донорских роговиц

проводилось в С02 инкубаторе. Замена среды осуществлялась каждые 8 суток.

В опытную среду для органного культивирования 42-х донорских роговиц вводился в процессе приготовления среды на заключительном этапе смешивания компонентов пептидный препарат NeyDIL №37 St.III в концентрации 1 мкг/мл среды, который вводился в процессе приготовления среды на заключительном этапе смешивания компонентов. Контрольная группа состояла из 42-х роговиц парных глаз от тех же доноров. Анализ морфометрических и ультраструктурных характеристик эндотелиальных клеток в опытной и контрольной группах проводился на 1-ые, 8-ые, 16-ые, 24-ые и 31-ые сутки гипотермической консервации, определение процента апоптотически поврежденных клеток проводилось на 1-ые, 8-ые, 16-ые и 18-ые сутки.

Оценивалось состояние ультраструктуры, морфометрические характеристики и витальность ЭК 42-х донорских роговиц, консервированных в условиях гипотермии в среде Борзенка-Мороз с добавлением в ее состав гомологичных клеточных пептидов в виде пептидного препарата NeyDIL №37 St. III в концентрации 1 мг/мл среды, который вводился в процессе приготовления среды на заключительном этапе смешивания компонентов. Контрольная группа состояла из 42-х роговиц парных глаз от тех же доноров. Анализ морфометрических и ультраструктурных характеристик эндотелиальных клеток в опытной и контрольной группах проводился на 1-ые, 3-ьи, 6-ые, 9-ые и 12-ые сутки гипотермической консервации, определение процента апоптотически поврежденных клеток проводилось на 1-ые, 3-ьи, 6-ые и 9-ые сутки.

Сканирующая электронная микроскопия выполнялась на базе лаборатории анатомии микроорганизмов ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи. Препараты анализировались с помощью сканирующего электронно-ионного микроскопа "Quanta 200 3D" (FEI Company, США).

Трансмиссионная микроскопия выполнялась на базе лаборатории гистохимии и электронной микроскопии НИИ клинической онкологии РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. Исследование функционально-цитологических характеристик - определение процента живых и апоптотически поврежденных клеток проводилось с помощью флуоресцентной микроскопии пласта ЭК донорских роговиц, окрашенных витальными красителями. Слой клеток изучали под люминесцентным инвертированным микроскопом СКХ 41 (Olympus, Япония). В проходящем свете производили оценку морфологии клеток, а в ультрафиолетовом диапазоне -подсчет клеток, окрашенных йодидом пропидия (апоптотически поврежденные ЭК) и бисбензимидом (жизнеспособные ЭК), находящихся в поле зрения микроскопа. Подсчет процента апоптотически поврежденных клеток (апоптотический индекс) производился в 30 полях зрения, включающих каждое от 80 до 100 клеток.

Морфометрические исследования плотности, площади, показателя гексагональности эндотелиальных клеток донорских роговиц, проводились неинвазивным способом в динамическом режиме с помощью компьютерного Кератоанализатора для Глазных банков модели 98 фирмы «Копап» (Япония). Также для более полной оценки морфометрического состояния эндотелиапьного пласта и ПЭК применялся инвертированный световой микроскоп 307 - 143.003 Leitz Wetzlar GmbH (Германия) для подсчета ПЭК рутинным способом с помощью шаблона.

Статистический анализ результатов экспериментальных исследований состояния эндотелиального пласта трупных донорских роговиц опытных и контрольных групп проводился с помощью методов общей статистики с помощью пакета лицензированных программ статистической обработки данных SPSS v. 12.02 для Windows.

Результаты гипотермической консервации В процессе длительной гипотермической консервации донорских роговиц человека (до 12-ти суток) в опытной группе с применением

клеточных регуляторных пептидов роговицы потеря ЭК была достоверно ниже (8,5%) (рис. 1) по сравнению с роговицами контрольной группы (11,6%) (р<0,05).

Потеря ЭК в процессе гипотермической

12 " консервации

V» ю • 10,2

и Г) 8 у?" 8,5

3 О.

<и Н 6

X а 4

С 2

0,1

1 сутки 3 сутки 6 сутки 9 сутки 12 сутки

Сутки консервации

""^Опыт Контроль

Рис. 1. График потери ЭК в процессе гипотермической консервации

При анализе электроннограмм ЭК донорских роговиц опытной и контрольной групп в процессе гипотермической консервации было выявлено соответствие данных СЭМ и ТЭМ. Повреждения клеточного скелета и межклеточных контактов ЭК в процессе консервации, выявленные при СЭМ, соответствовали патологическим изменениям органелл и клеточной цитоплазмы ЭК, выявленным при ТЭМ на тех же сроках, что свидетельствовало о достоверности проведенного исследования.

С помощью СЭМ и ТЭМ было установлено, что консервация при I +6° в среде Борзенка-Мороз, содержащей регуляторные клеточные пептиды роговицы, способствует более длительному (до 9-ти суток), чем в контроле (до 6-ти суток) сохранению цитоархитектоники ЭК. Кроме того, была отмечена большая функциональная сохранность ЭК, что выражалось в сохранении процессов внутриклеточной регенерации (гипертрофия клеток и увеличение их полиморфизма), чего не было выявлено в образцах контрольной группы (рис. 2).

Рис. 2. Архитектоника пласта ЭК в центральной зоне роговицы на 9-ые сутки гипотермической консервации. СЭМ. Роговицы опытной группы: А-800х, Б-3000; роговицы контрольной группы: В-800х, где 1 - разрушение межклеточных взаимоотношений с деструкцией билипидного слоя мембран; Г-ЗОООх, где 1 - уменьшение электронно-оптической плотности внутри клеток и в межклеточном пространстве, разрушение клеточного скелета

Гипотермическая консервация донорской роговицы на протяжении 12-ти суток сопровождалась выраженным повреждением цитоскелета и грубыми ультраструктурными изменениями клеток, характерными для состояния аутолиза. Это позволило сделать вывод, что донорский материал консервированный более 9-ти суток в условиях низких положительных температур не пригоден для оптических кератопластик, так как можно прогнозировать большую потерю ЭК в постоперационном периоде.

При изучении изменения витальности ЭК методом флуоресцентной микроскопии с окраской бисбензимидом и йодидом пропидия было выявлено, что процент апоптотически поврежденных клеток в опытной и контрольной группах на 9-ые сутки превышал верхние границы нормы. После получения данных результатов было решено не продолжать

исследование витальности ЭК на 12-ые сутки консервации, так как можно было прогнозировать дальнейшее нарастание процента апоптотически поврежденных клеток (рис. 3).

я 18

1 о 16

с с 14

я 12

г! 10

Изменение процента ЭК в стадии апоптоза в процессе гипотермической консервации

I сутки 3 сутки 6 сутки 9 сутки

*^-Опыт Контроль

Рис. 3. График изменения процента ЭК в стадии апоптоза в процессе гипотермической консервации

Результаты нормотермической консервации

В процессе длительного нормотермического культивирования донорских роговиц человека (до 24-х суток) с применением клеточных регуляторных пептидов роговицы, потеря эндотелиальных клеток была меньше (6,6%) по сравнению с роговицами контрольной группы (10,04%) (рис. 4).

Потеря ЭК в процессе нормотермической консервации

Сутки культивирования "♦"Опыт "■"Контроль

Рис. 4. График потери ЭК в процессе нормотермической консервации

При органном культивировании донорской роговицы в среде с добавлением гомологичных клеточных пептидов выявлено более длительное (до 24-х суток) ультраструктурное сохранение ЭК (рис. 5, 6).

Рис. 5. Архитектоника пласта ЭК в центральной зоне на 24-ые сутки органного культивирования. СЭМ. Роговицы опытной группы: А-800х, Б-1600х; роговицы контрольной группы: В-800х, Г-1600х, где 1 - уменьшение электронно-оптической плотности внутри эндотелиальных клеток

Рис. 6. Изменение ультраструктуры ЭК роговиц в процессе органного культивирования. ТЭМ. 20000х. 8-ые сутки: А - опыт; Б - контроль; 16 сутки: В - опыт; Г - контроль; 24 сутки: Д - опыт; Е - контроль

Несмотря на длительный срок консервации, ЭК опытной группы максимально сохранили свой мономорфизм, гекса- и пентагональность. Не было выявлено повреждения цитоскелета и нарушения межклеточных связей, что может говорить о протективном действии регуляторных клеточных пептидов на ЭК и повышении их устойчивости к негативному воздействию длительного временного фактора консервации.

Органное культивирование донорской роговицы до 31-их суток сопровождается выраженным нарушением межклеточных связей, отеком ЭК как в образцах опытной, так и контрольной групп. Это позволяет сделать вывод, что донорский материал, консервированный в условиях нормотермии более 24-х суток, не пригоден для оптических кератопластик, так как полученные результаты позволяют прогнозировать большую потерю ЭК в процессе операции и в послеоперационном периоде.

Анализ витальности ЭК в условиях органного культивирования проводился с интервалом в 8 суток, соответствуя сроку замены среды. Однако при дальнейшем увеличении сроков культивирования данный временной интервал был принят слишком большим, так как показатели

апоптотического поражения ЭК уже на 16-ые сутки приближались к верхней границе нормы. Поэтому следующая флуоресцентная микроскопия образцов обеих групп была проведена на 18-ые сутки культивирования. В этот срок превышение нормы клеточного апоптоза было выявлено как в опытной, так и в контрольной группе, поэтому проведение исследования витальности ЭК в более поздние сроки не проводилось (рис. 7).

Изменеия процента ЭК в стадии апоптоза в процессе нормотермического культивирования

12,3

£ 10

1 сутки 8 сутки 16 сутки

~«-Опыт НВ- Контроль

18 сутки

Рис. 7. График изменения процента ЭК в стадии апоптоза в процессе нормотермического культивирования

Результаты исследования свидетельствуют о том, что регуляторные клеточные пептиды роговицы, входящие в состав органных консервационных сред, обладают антиапоптотическим эффектом на ЭК донорских роговиц, они способствуют сохранению нормальных функциональных показателей ЭК до 9-ти суток при использовании гипотермической консервации и до 24-х суток при органном культивировании.

При сопоставлении данных, полученных при морфометрическом и ультраструктурном анализе изучаемых групп, с данными флуоресцентной микроскопии, выявлено несоответствие благополучной морфологической и ультраструктурной картины эндотелиального пласта с высоким процентом ЭК, находящихся в стадии апоптоза при длительном нормотермическом

культивировании (до 24-х суток) и длительной гипотермической консервации (до 16-ти суток). Это свидетельствует о том, что при оценке жизнеспособности роговичного трансплантата недостаточно учитывать только морфометрические и ультраструктурные характеристики ЭК, необходима также морфофункциональная оценка эндотелия, так как клетка с сохранной цитоархитектоникой может быть декомпенсирована в функциональном плане в результате срыва компенсаторно-приспособительных реакций и активации процессов апоптоза.

Исходя из полученных данных по процентному снижению ПЭК в процессе гипотермической и нормотермической консервации, с помощью математического моделирования были рассчитаны формулы и номограммы по прогнозированию ПЭК в зависимости от вида, срока консервации, исходного значения ПЭК донорской роговицы и консервационной среды.

На основании вышеизложенных данных собственных исследований и данных литературы (Ермаков Н.В., 1989, 1994; Мороз З.И, 1990, 2004; Сургуладзе Н.Г., 1990; Каспаров А.А. и др., 1990), был рассчитаны критерии для выбора донорского материала в зависимости от ПЭК и нозологии, по поводу которой должна проводиться кератопластика (табл. 1).

Таблица 1

Критерии выбора донорского материала для кератопластики в

зависимости от нозологической формы патологии роговицы и ПЭК

Нозологическая патология роговицы ПЭК донорского материала, кл/мм2

Задняя автоматизированная послойная кератопластика

Первичная ЭЭД Вторичная ЭЭД 3000-2600

Сквозная кератопластика

Осложненное бельмо 2900 - 2600

Буллезная кератопатия в том числе при первичной и вторичной ЭЭД 2800 - 2600

Ретрансплантация роговицы 3100-2800

Кератиты с помутнением роговицы, в активной фазе 3100-2800

Кератоконус 2500 - 2200

Выводы

1. Введение гомологичных клеточных пептидов из роговиц животных в виде препарата ЫеуШЬ №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в концентрации 1 мкг/мл среды в базисную среду Борзенка-Мороз для гипотермической консервации донорских роговиц в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов позволяет пролонгировать время консервации до 9-ти суток с сохранением жизнеспособности и цитоархитектоники эндотелиальных клеток донорских роговиц.

2. Введение гомологичных клеточных пептидов в виде препарата ЫеуШЬ №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в концентрации 1мкг/мл среды в базисную среду для органного культивирования донорских роговиц, рекомендованную европейской ассоциацией глазных банков, в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов, позволяет пролонгировать время консервации до 24-х суток с сохранением жизнеспособности и цитоархитектоники эндотелиальных клеток донорских роговиц.

3. Длительное нормотермическое культивирование донорских роговиц человека (до 24-х суток) в стандартной среде для органного культивирования донорской роговицы, рекомендованной европейской ассоциацией глазных банков, с применением клеточных регуляторных пептидов роговицы, позволяет снизить потерю эндотелиальных клеток с 9,7% до 6,1%. Использование гомологичных клеточных пептидов при консервации донорских роговиц человека в условиях гипотермии (до 12-ти) суток в среде Борзенка-Мороз снижает потерю эндотелиальных клеток с 10,2% до 8,5%.

4. Выявлено, что процент апоптотически поврежденных эндотелиальных клеток в роговицах, консервированных в среде Борзенка-Мороз и органной среде на основе 199 среды на солях Эрла, с добавлением гомологичных клеточных пептидов, в условиях гипотермии и нормотермии в сроки до 9-ти и 18-ти суток, снижается с 18,8% до 17,1% и с 12,3% до 8,2% соответственно.

5. Предложенные номограммы снижения плотности эндотелия позволяют определять предположительную потерю эндотелиальных клеток донорских

роговиц в процессе консервации в зависимости от вида, срока консервации, состава сред и исходной плотности эндотелия донорского материала, что дает возможность дифференцированно подходить к выбору донорского материала для выполнения разного вида кератопластик.

Практические рекомендации Для продления сроков гипотермической консервации и сохранения морфофункциональных характеристик ЭК донорских роговиц до 9-ти суток и для повышения жизнеспособности и улучшения трансплантационных качеств ЭК на меньших сроках консервации в среде Борзенка-Мороз, рекомендуется добавлять в среду гомологичные клеточные пептиды в виде препарата NeyDIL №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в объеме 10 мл в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов, для достижения концентрации препарата 1 мкг/мл среды.

Для продления сроков нормотермической консервации и сохранения морфофункциональных характеристик ЭК донорских роговиц (до 24-х суток) и для повышения жизнеспособности и улучшения трансплантационных качеств ЭК в среде, рекомендованной европейской ассоциацией глазных банков, рекомендуется добавлять в среду гомологичные клеточные пептиды в виде препарата NeyDIL №37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в объеме 10 мл в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов, для достижения концентрации препарата 1 мкг/мл среды.

Для определения предположительной потери ЭК донорских роговиц в процессе консервации в зависимости от вида, срока консервации, состава сред и исходной плотности эндотелия донорского материала, рекомендуется использовать предложенные номограммы для расчета ПЭК.

ЭК в послеоперационном периоде (например, кератопластика по поводу кератоконуса) рекомендуется использовать донорский материал с ПЭК равной 2500-2200 кл/мм2, соответственно при кератопластиках по поводу осложненных бельм и кератитов в активной фазе, сопровождающихся большей потерей ЭК в послеоперационном периоде рекомендуется использовать донорский материал с ПЭК равной 3100 - 2800 кл/мм2.

Список публикаций по теме диссертации

1. Борзенок С.А., Ролик О.И., Комах Ю.А., Мороз З.И. Пептидная биоревитализация сквозного трансплантата роговицы при ожоговой травме глаза // VI Международный научно-практический конгресс «Человек в экстремальных условиях: человеческий фактор и профессиональное здоровье». Сб. Тез. - М„ 2008. - С. 278-279.

2. Борзенок С.А., Ролик О.И., Мороз З.И., Комах Ю.А., Тонаева Х.Д. Пептиды клеточной цитоплазмы как специфические адаптогены органа зрения при экстремальных воздействиях факторов внешней среды // Экологическая медицина и офтальмология. Сб. Тез. - М., 2009. - С.168-169.

3. Ролик О.И., Борзенок С.А., Мороз З.И., Комах Ю.А., Ковшун Е.В., Тонаева Х.Д. Ревитализирирующие эффекты в клетках трансплантата трупной донорской роговицы in vitro под влиянием гомологичных клеточных пептидов // В сб.: IV Всероссийская научная конференция молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии». - М.,2009. - С. 54-55.

4. Takhchidi K.P., Borzenok S.A., Rolik O.I., Komakh Y.A., Volkova O.S., Kovshun E.V., Tonaeva K.D., Shipunova A.V. Revitalizing effects in transplant cells of donor cornea in vitro under the influence of homologous cellular peptides // Сб. тезисов международной ежегодной конференции Европейской ассоциации Глазных банков.- Барселона, 2010.- С. 98.

5. Ролик О.И., Борзенок С.А., Боровая Т.Г., Диденко JI.B., Комах Ю.А., Мороз З.И., Ковшун Е.В., Тонаева Х.Д., Шипунова A.B. Нормотермическая и гипотермическая консервация донорской роговицы с использованием

гомологичных клеточных пепдидов // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии. Сб. Тез. - Санкт-Питербург., 2010.- С. 111-112.

6. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Комах Ю.А., Волкова О.С. Среднесрочная консервация донорских роговиц в двух режимах -нормотермического и гипотермического культивирования с использованием гомологичных клеточных пептидов // 9-го съезд офтальмологов России. Сб. Тез. - М„- 2010.- С.328-329.

7. Ролик О.И., Борзенок С.А., Комах Ю.А., Онищенко H.A., Мороз З.И., Ковшун Е.В. Среднесрочная консервация донорских роговиц в нормотермическом и гипотермическом режимах с использованием гомологичных клеточных пепдидов И Вестник трансплантологии и искусственных органов. - Т. 12. Приложение,- Москва, 2010.- С.241-242.

8. Ролик О.И., Борзенок С.А., Онищенко H.A., Комах Ю.А. Фармакологическая защита трансплантата роговицы гомологичными клеточными пептидами на этапе нормотермической и гипотермической консервации // Сб. тезисов всероссийской научной школы-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина». - Москва, 2010,- С63-64.

9. Ролик О.И., Борзенок С.А., Онищенко H.A., Комах Ю.А. Фармакологическая защита трансплантата роговицы гомологичными клеточными пептидами на этапе нормотермической и гипотермической консервации // Стволовые клетки и регенеративная медицина. Сб. Тез. М., 2010.- С.63-64.

10. Borzenok. S.A., Rolik O.I., Komakh Y.A., Volkova O.S., Kovshun E.V. Homologous cellular peptides protects donor corneal endothelial cells during corneal cold storage at 4°C. // Сборник тезисов международной ежегодной конференции Европейской ассоциации Глазных банков. - Фрайбург., 2011.-С.71.

11. Ролик О.И., Борзенок С.А., Тахчиди Х.П., Комах Ю.А., Онищенко H.A. Применение гомологичных клеточных пептидов при среднесрочной

консервации донорских роговиц в нормотермическом и гипотермическом режимах // Филатовские чтения. Сб. тезисов - Одесса; 2011. - С.38.

12. Ролик О.И., Борзенок С.А., Онищенко H.A., Мороз З.И., Комах Ю.А., Волкова О.С. Применение гомологичных клеточных пептидов при среднесрочной консервации донорских роговиц в двух режимах -нормотермическом и гипотермическом // Федоровские чтения - 2011. Сборник тезисов - Москва, 2011. - С.272-273.

13. Ролик О.И., Борзенок С.А., Тахчиди Х.П., Онищенко H.A., Малюгин Б.Э., Комах Ю.А., Мороз З.И., Ковшун Е.В. Протективное действие гомологичных клеточных пептидов на эндотелиальные клетки днорской роговицы в процессе нормотермической и гипотермисеской консервации // Актуальные вопросы офтальмологии: Сб. тезисов. — Краснодар, 2011. — С.75.

14. Rolik O.I., Borzenok S.A., Komakh Y.A., Kovshun E.V., Volkova O.S. Homologous cellular peptides protect donor corneal endothelial cells during organ culture [Электронный ресурс] // Тезисы 2-ого международного ежегодногоконгресса EuCornea. - Венна, 2011. Доступ: http://www.cucornea.org/Viennal l/freepaperdetails.asp?id=12049&day=0

15. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Комах Ю.А. Методы консервации донорских роговиц и применение гомологичных клеточных пептидов (обзор литературы) // Офтальмохирургия. - 2011.- №4.- С. 75-78.

16. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Комах Ю.А. О возможности совершенствования консервации донорских роговиц путем применения регуляторных пептидов. (Аналитический обзор) // Вестник трансплантологии и искусственных органов, - М., 2011,- № 4. - С.101-105.

17. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Комах Ю.А., Делекторская

B.В., Шацких A.B. Применение гомологичных клеточных пептидов при среднесрочной консервации донорских роговиц в гипотермическом режиме // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2011. - № 14. -

C.79-82.

18. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Комах Ю.А., Делекторская

B.В. Применение гомологичных клеточных пептидов для улучшения морфофункционального состояния эндотелия донорских роговиц при хранении в нормотермическом и гипотермическом режимах // Вестник трансплантологии и искусственных органов. —М., 2012. - №1. - С.78-85.

19. Ролик О.И., Комах Ю.А., Мороз З.И., Сабурина И.Н., Онищенко H.A., Борзенок С.А. Антиапоптотический эффект гомологичных клеточных пептидов при среднесрочной консервации донорских роговиц в двух режимах - нормотермическом и гипотермическом // Федоровские чтения -2012. Сб. Тез. - Москва, 2012. - С.150-151.

20. Борзенок С.А., Ролик О.И., Онищенко H.A., Сабурина И.Н., Кошелева Н.В., Комах Ю.А. Антиапоптотическое действие гомологичных клеточных пептидов на эндотелиальные клетки донорской роговицы при консервации в режимах нормотермии и гипотермии // V Российский общенациональный офтальмологический форум: Сб. Науч. Трудов. - Москва, 2012. - Том 2. -

C.747-748.

21. Борзенок С.А., Малюгин Б.Э., Онищенко H.A., Ролик О.И., Комах Ю.А., Мороз З.И., Сабурина И.Н. Антиапоптотический эффект гомологичных клеточных пептидов при среднесрочной консервации донорских роговиц в нормотермическом и гипотермическом режимах // Вестник трансплантологии и искуственных органов. - Том 14. -Приложение. - М., 2012. - С. 297.

Патенты РФ на изобретения по теме диссертации Тахчиди Х.П., Борзенок С.А., Малюгин Б.Э., Ролик О.И., Комах Ю.А., Мороз З.И.,Ковшун Е.В. «Средство для консервации донорской роговицы». Патент РФ на изобретение № 2450515 от 20.04.2012 Биографические данные Ролик Ольга Ивановна, 1984 года рождения, в 2007 году окончила Московский Государственный Медико-стоматологический Университет по специальности «Лечебное дело».

С 2007 по 2009 год проходила обучение в клинической ординатуре по специальности «офтальмология» на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. С 2009 по 2012 год обучалась в очной аспирантуре на базе ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России. Является автором 30 печатных работ, 1 патента на изобретение.

Подписано в печать: 01.11.2012 Тираж 150 экз. Заказ №908 Отпечатано в типографии «Реглет» г. Москва, Ленинградский пр-т д.74 (495)790-74-77 www.reglet.nl

Оглавление диссертации Ролик, Ольга Ивановна :: 2012 :: Москва

Введение

Глава 1. Обзор литературы

Современные аспекты применения биологически активных веществ для защиты эндотелиальных клеток трансплантата роговицы

1.1. Актуальность сохранения жизнеспособности эндотелия 15 при различных видах кератопластики

1.2. Достоинства и ограничения традиционных методов 19 консервации роговицы

1.2.1. Гипотермическая консервация роговиц в культуральных 19 средах

1.2.2. Консервация роговиц методом органного 22 нормотермического культивирования

1.2.3. Криогенная консервация донорских роговиц

1.3. Пролонгирование сохранности витальных свойств 26 эндотелия с помощью биологически активных веществ в составах консервирующих сред

1.3.1. Пролонгирование витальных свойств эндотелия с 26 помощью антиапоптотических и ростовых факторов

1.3.2. Пролонгирование витальных свойств с помощью 31 регуляторных пептидов

Глава 2. Материалы и методы экспериментальных исследований

2.1. 2.2.

Общая характеристика материалов Общая характеристика методов

2.2.1. Метод органного культивирования донорской роговицы

2.2.2. Метод гипотермической консервации донорской роговицы

2.2.3. Инвазивные лабораторные методы исследования

2.2.4. Неинвазивные лабораторные методы исследования

2.2.5. Статистические методы исследования

Глава 3. Разработка сред с добавлением гомологичных 54 регуляторных пептидов

3.1. Разработка рецептуры среды для гипотермической 54 консервации трупных донорских роговиц

3.2. Разработка рецептуры органной среды для 57 нормотермического культивирования трупных донорских роговиц

Глава 4. Влияние гомологичных регуляторных пептидов в составе 60 консервирующих сред на морфофункциональные характеристики эндотелиальных клеток

4.1. Анализ морфометрических характеристик эндотелиальных 60 клеток в процессе гипотермической консервации

4.2. Анализ морфометрических характеристик эндотелиальных 65 клеток в процессе органного культивирования

4.3. Влияние гомологичных регуляторных пептидов в составе 71 консервирующих сред на результаты исследований ультраструктурных характеристик эндотелиальных клеток в процессе консервации

4.3.1. Изменения ультраструктуры эндотелиальных клеток в 73 процессе гипотермической консервации

4.3.2. Результаты исследования ультраструктурных изменений 82 эндотелиальных клеток в процессе органного культивирования

4.4. Изменения витальности (апоптотического индекса) эндотелиальных клеток в процессе гипотермической консервации

4.5. Изменения витальности (апоптотического индекса) 91 эндотелильных клеток в процессе нормотермического культивирования

4.6. Тактика выбора донорских консервированных роговиц для 94 проведения кератопластик

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Ролик, Ольга Ивановна, автореферат

Проблема трупного тканевого донорства и трансплантации жизнеспособной роговицы является одним из наиболее сложных и актуальных разделов офтальмологии (Каспаров A.A. и др., 1990; Мороз З.И., 2004; Борзенок С.А., 2008; Melles G.R. et al., 1998; Krachmer J.H. et al., 2005).

Для прозрачного приживления сквозного трансплантата роговицы необходима максимальная сохранность морфофункционального состояния его эндотелиальных клеток (ЭК), или клеток заднего эпителия, обеспечивающих нормальную гидратацию и прозрачность посредством осуществления ими энергозависимой транспортной и насосной функций (Krachmer J.H. et al., 2005). ЭК роговицы являются высокодифференцированными клетками и имеют нейроглиальное происхождение (Федоров С.Н и др., 1993; Ронкина Т.И., 1994; Вит В.В., 2003; Hwang D.G., 2005). Так как биологически ЭК не способны к митотической регенерации, то при их значительной потере в посттрансплантационном периоде возникает сначала функциональная декомпенсация, а затем -необратимое помутнение трансплантата (Krachmer J.H. et al., 2005).

В трупных донорских роговицах уже на этапе консервации в нормотермическом и гипотермическом режимах происходит нарушение регуляции энергетического метаболизма, в результате чего в ЭК возникает ряд морфофункциональных перестроек, сопровождающихся ослаблением межклеточных взаимодействий, десквамацией ЭК и снижением их жизнеспособности (Hsu J.K.W, et al., 1999; Krachmer J.H., 2005).

Выкраивание и фиксация роговичного трансплантата при сквозной и задней послойной кератопластиках также сопровождаются потерей ЭК, в связи с чем исходная плотность эндотелиальных клеток является определяющей для сохранения функции роговицы после трансплантации и, по данным Melles G.R. (1998), должна быть не менее 2800-3000 кл/мм2.

В этой связи пролонгирование адекватного метаболизма и повышение жизнеспособности ЭК трупных донорских роговиц на этапе их консервации является крайне важной и актуальной задачей (Борзенок С.А., 2008).

Анализ публикаций по проблеме культивирования и консервации изолированных донорских роговиц позволяет прийти к заключению, что пролонгирование адекватного метаболизма в трансплантатах роговицы, повышающего морфофункциональную резистентность ее ЭК к воздействию ишемического и гипотермического стрессов, может быть достигнуто путем усовершенствования составов консервационных сред (Шумаков В.И. и др., 1983; Lass J. H. et al.,1994; Shin YJ. et al. 2009; Peh G.S. et al., 2011).

Наибольшие возможности в плане совершенствования противоишемической защиты и защиты от гипотермического повреждения создает включение в культуральные среды и консервирующие растворы различных биологически активных веществ, которые, пролонгируя энергетические и пластические процессы, повышают эффективность межклеточных взаимодействий и формируют плотность межклеточных контактов (Tripathi B.J. et al., 1992; Vincent P. T. et al., 1994; Xin G., EunDuck P. K., 1998).

В целях восстановления и поддержания структуры и функции ЭК трупных донорских роговиц в процессе их хранения значительный интерес представляют фармакологические препараты на основе регуляторных клеточных пептидов, полученных из тканей глаза. К таким препаратам нового поколения относятся цитамины отечественного производства (Максимов И.Б., 2005; Хавинсон В.Х., Трофимова C.B., 2003) и панель клеточных биорегуляторов NeyDIL импортного производства (Heine H., 1996). К сожалению, отечественная фармакологическая промышленность не производит препараты регуляторных пептидов с адресным действием к эндотелиальным клеткам роговицы. До настоящего времени единственным органотропным препаратом, полученным из регуляторных пептидов клеточной цитоплазмы эмбриональных роговых оболочек промышленных животных, является препарат NeyDIL Nr.37 «Cornea», который выпускается немецкой фирмой «VitOrgan», имеющий Государственную регистрацию в Российской Федерации (Р/У JIPC-008827/08-061108).

Данные о возможности повышения качества защиты изолированных трупных донорских роговиц от повреждения с помощью гомологичных регуляторных пептидов на этапе нормотермического культивирования и гипотермической консервации в литературе отсутствуют. Прямая зависимость результата трансплантации роговицы от исходной жизнеспособности и плотности сцепления ЭК между собой послужила основанием для изучения эффективности применения органотропных регуляторных пептидов роговиц - препарата NeyDIL Nr.37 - для улучшения морфофункциональной сохранности ЭК и повышения резистентности трупной донорской роговицы к действию неблагоприятных факторов нормотермического органного культивирования и гипотермической консервации.

Цель исследования

Повысить жизнеспособность и трансплантационные качества эндотелиальных клеток трупной донорской роговицы в процессе гипотермической консервации и нормотермического органного культивирования.

Задачи исследования

5. Разработать прогноз потери эндотелиальных клеток донорских роговиц в процессе консервации.

Научная новизна результатов исследования

Практическая значимость результатов исследования

1. Доказано, что добавление клеточных пептидов в среду Борзенка-Мороз для гипотермической консервации в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов в объеме 10 мл в виде препарата №уБ1Ь №.37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) пролонгирует сроки консервации донорской роговицы до 9-ти суток.

2. Доказано, что добавление клеточных пептидов в стандартную среду для органного культивирования в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов в объеме 10 мл в виде препарата КеуБ1Ь №.37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) пролонгирует сроки консервации донорской роговицы до 24-х суток.

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

IV Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2009); IX Съезде офтальмологов России (Москва, 2010); V Всероссийском съезде трансплантологов (Москва, 2010); на клинической конференции МНТК «МГ» (Москва, 2010); 23-й ежегодной конференции Европейской Ассоциации Глазных Банков (Фрайбург, Германия, 2011); научно-практической конференции офтальмологов с международным участием «Филатовские чтения», посвященной 75-летию основания ГУ «Институт глазных болезней и тканевой терапии им.

B.П.Филатова Национальной академии медицинских наук Украины» (Одесса, Украина, 2011); на 2-м международном ежегодном конгрессе EuCornea (Вена, Австрия, 2011); на 5-ом Российском общенациональном офтальмологическом форуме (Москва, 2012).

Доклад «Ревитализирующие эффекты в клетках трансплантата трупной донорской роговицы in vitro под влиянием гомологичных клеточных пептидов» занял первое место на IV Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2009).

Внедрение в практику

Результаты исследований внедрены в работу лаборатории трансплантологии и консервации с Глазным Тканевым банком Центра фундаментальных и прикладных медико-биологических проблем ФГБУ «МНТК «МГ» им. акад. С.Н.Федорова» и в работу лабораторий филиалов.

C.Н.Федорова», а также ординаторов и аспирантов кафедры глазных болезней Московского государственного медико-стоматологического университета имени А.И. Евдокимова.

Публикации

По материалам диссертации опубликована 21 печатная работа, из них 4 в журналах, рецензированных ВАК РФ и 4 в иностранной печати. По теме диссертационной работы получен 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакологическая защита эндотелия донорских роговиц гомологичными клеточными пептидами на этапе консервации"

выводы

1. Введение гомологичных клеточных пептидов из роговиц животных в виде препарата Иеу01Ь №.37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в концентрации 1 мкг/мл среды в базисную среду Борзенка-Мороз для гипотермической консервации донорских роговиц в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов позволяет пролонгировать время консервации до 9-ти суток с сохранением жизнеспособности и цитоархитектоники эндотелиальных клеток донорских роговиц.

2. Введение гомологичных клеточных пептидов в виде препарата №уБ1Ь №.37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в концентрации 1 мкг/мл среды в базисную среду для органного культивирования донорских роговиц, рекомендованную европейской ассоциацией глазных банков, в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов, позволяет пролонгировать время консервации до 24-х суток с сохранением жизнеспособности и цитоархитектоники эндотелиальных клеток донорских роговиц.

3. Длительное нормотермическое культивирование донорских роговиц человека (до 24-х суток) в стандартной среде для органного культивирования донорской роговицы, рекомендованной европейской ассоциацией глазных банков, с применением клеточных регуляторных пептидов роговицы, позволяет снизить потерю эндотелиальных клеток с 9,7% до 6,1%. Использование гомологичных клеточных пептидов при консервации донорских роговиц человека в условиях гипотермии (до 12-ти суток) в среде Борзенка-Мороз снижает потерю эндотелиальных клеток с 10,2% до 8,5%.

5. Предложенные номограммы снижения плотности эндотелия позволяют определять предположительную потерю эндотелиальных клеток донорских роговиц в процессе консервации в зависимости от вида, срока консервации, состава сред и исходной плотности эндотелия донорского материала, что дает возможность дифференцированно подходить к выбору донорского материала для выполнения разного вида кератопластик.

Практические рекомендации

Для продления сроков гипотермической консервации и сохранения морфофункциональных характеристик ЭК донорских роговиц до 9-ти суток и для повышения жизнеспособности и улучшения трансплантационных качеств ЭК на меньших сроках консервации в среде Борзенка-Мороз, рекомендуется добавлять в среду гомологичные клеточные пептиды в виде препарата NeyDIL Nr.37 (Р/У ЛРС-008827/08-061108) в объеме 10 мл в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов, для достижения концентрации препарата 1 мкг/мл среды.

Для продления сроков нормотермической консервации и сохранения морфофункциональных характеристик ЭК донорских роговиц (до 24-х суток) и для повышения жизнеспособности и улучшения трансплантационных качеств ЭК в среде, рекомендованной европейской ассоциацией глазных банков, рекомендуется добавлять в среду гомологичные клеточные пептиды в виде препарата NeyDIL Nr.37 (Р/У JIPC-008827/08-061108) в объеме 10 мл в процессе ее приготовления на заключительном этапе смешивания компонентов для достижения концентрации препарата 1 мкг/мл среды.

При выборе стратегии консервации трупной донорской роговицы рекомендуется ориентироваться на разработанные рекомендации к выбору донорского материала: для выполнения ЗАПК рекомендуется использовать донорский материал с ПЭК, равной 3000-2600 кл/мм2. При выполнении СК у пациентов с патологией роговицы, не сопровождающейся большой потерей ЭК в послеоперационном периоде (например, кератопластика по поводу кератоконуса) рекомендуется использовать донорский материал с ПЭК, равной 2500-2200 кл/мм2, и соответственно при кератопластиках по поводу осложненных бельм и кератитов в активной фазе, сопровождающихся большей потерей ЭК в послеоперационном периоде, рекомендуется использовать донорский материал с ПЭК, равной 3100-2800 кл/мм2.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Ролик, Ольга Ивановна

1. Андреев Ю.В. Фотохимическая деструкция новообразованных сосудов роговицы (в эксперименте): Автореф.дис. канд.мед.наук. М., 1993. - 23 с.

2. Бордюгова Г.Г., Альсакини A.B. Оценка жизнеспособности консервированной ткани роговой оболочки методом авторадиографии // Травмы глаз: Сб.Науч.Трудов МНИИ им. Гельмгольца. М., 1978. - С. 25-26.

3. Бордюгова Г.Г., Лукашевич И.П. Математический анализ способов консервирования роговичного трансплантата в клинике // Трансплантация органов и тканей: Материалы. Тбилиси, 1979. - С. 305-306.

4. Борзенок С.А., Проблема прионов и прионных болезней в офтальмотрансплантологии // Офтальмохирургия. 2006. - №3. - С. 41-48.

5. Борзенок С.А. Медико-технологические и методологические основы эффективной деятельности глазных тканевых банков России в обеспечении операций по сквозной трансплантации роговицы: Дис. . д-ра мед. наук. М.- 2008. - 156 с.

6. Вандич Н.Е. Особенности кератопластики у пожилых пациентов с предварительной фармакологической коррекцией: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2001. - 26 с.

7. Вит В.В. Строение зрительной системы человека.- Одесса: АстроПринт, 2003. С. 179-655.

8. Гамм Э.Г. Кислотно-щелочное равновесие и динамика дыхательных газов водянистой влаги: Автореф. дис. канд. мед. наук. -М., 1982. 21 с.

9. Грищенко В.И., Белоус A.M. Итоги научно-организационной деятельности института (к 20-летию Института проблем криобиологии и криомедицины АН Украины) // Проблемы криобиологии.- 1992.- №1.-С. 3-13.

10. Гундорова P.A., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Сохранность структур роговой оболочки при различных способах консервирования // Межд. конф. по кератопластике и кератопротезированию: сб. тез.- Одесса, 1978. С. 70-71.

11. Дьяконов M.M. Отечественные биорегуляторы — цитамины входят в повседневную врачебную практику // Terra Medica. 2000. - № 3. - 18 с.

12. Ермаков Н.В. Диагностическое и прогностическое значение зеркальной микроскопии эндотелия при трансплантации роговицы: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1989. - 26 с.

13. Ермаков Н.В. Микроскопия заднего эпителия роговицы в реконструктивной хирургии переднего отдела глаза // Съезд офтальмологов России, 6-й: Тез. докл. М., 1994. - С. 297.

14. Илатовская JI.B., Маслова-Хорошилова И.П., Деревянко В.П. Ультраструктура роговицы глаза человека после криоконсервации // Межд. конф. по кератопластике и кератопротезированию: Тез. докл. Одесса, 1978. -С. 74-75.

15. Канюков В.Н., Стадников A.A. Экспериментально-гистологические обоснование новых технологий в офтальмохирургии М.: Медицина, 2005. -С.84-89.

16. Карлсон Б. Основы эмбриологии по Пэттену: Пер. с англ. М.: Мир, 1983.-Т. 2.-390 с.

17. Каспаров A.A., Ермаков Н.В., Раппопорт Ю.М. Эндотелий трансплантата донора после сквозной кератопластики // Вестн. офтальмол. -1990.-Т. 106, №5.-С. 12-16.

18. Каспаров A.A., Розинова В.Н., Ямскова В.П. Питательная среда с Адгелоном для консервации роговицы донора // Онтогенез. 2000. - Т.31, № 4. - с.273-274.

19. Комах Ю.А. Клинико-цитохимические аспекты прогнозирования и профилактики помутнения трансплантата после рекератопластики: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1995. -20 с.

20. Копаева В.Г. Современные аспекты сквозной субтотальной кератопластики: Дис. д-ра мед. наук. М., 1982. - 435 с.

21. Копаева В.Г., Легких Л.С. Морфологические и математические аспекты эктазии роговицы при кератоконусе и кератоглобусе // Федоровские чтения 2004: сб. Тез. Москва, 2004. - С. 236-239.

22. Кротова Е.В. Клинико-иммунологические аспекты рекератопластики различными видами донорского материала: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1994.-24 с.

23. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз) М.: Медицина, 2001.- С. 87-95.

24. Максимов И.Б. Комплексная пептидная коррекция при микрохирургическом лечении травм глаз и их последствий // Автореф. дисс. .д-ра мед. наук. М., 1996.-42 с.

25. Максимов И.Б., Мошетова Л.К., Савостьянова С.А. Ретиналамин в комплексном лечении инволюционных центральных хориоретинальных дистрофий // СПб. 2006. - 96 с.

26. Малюгин Б.Э. Хирургическая коррекция астигматизма после сквозной кератопластики: Дис. . канд. мед. наук. -М., 1994. 166 с.

27. Милюдин Е.С. Динамика водородного показателя при хранении донорской роговицы // Съезд офтальмологов России, 7-й: Материалы. М., 2000.-Ч. 2.-С. 32-33.

28. Мороз З.И., Тахчиди Х.П., Калинников Ю.Ю. и др. Современные аспекты кератопластики // Федоровские чтения 2004: сб.тез. Москва, 2004. -С. 280-288.

29. Морозов В.Г., Рыжак Г.А., Малинин В.В. и др. Цитамины (Биорегуляторы клеточного метаболизма). СПб.: Фолиант, 1999. - 120 с.

30. Непомнящих В.А. Клеточные биорегуляторы в комплексной терапии глазных болезней. Монография-руководство. М.: РегБиоМед, 2010. - 140 с.

31. Пирятинский Б.Л. Экспериментально-клиническое обоснование применения сбалансированных по газовому составу влагозамещающих растворов: Дис. канд. мед. наук. Москва, 1987. - 120 с.

32. Попова З.С., Королев В.В. Ультраструктура роговой оболочки, консервированной криометодом // Вестн. офтальмологии. 1979. - № 2. - С. 32-36.

33. Ролик И.С. Пептидотерапия: клиническое применение // М.: РегБиоМед, 2010.-392 с.

34. Ролик И.С. Основы клинической фармакологии органопрепаратов // М.: РегБиоМед. 2004. 336 с.

35. Ронкина Т.И. Закономерности возрастных изменений эндотелия роговицы человека в норме и патологии, возможности активации пролиферации эндотелия и их назначение в офтальмологии: Дис. д-ра мед. наук в форме науч. доклада. М., 1994. - 48 с.

36. Ронкина Т.И., Мороз З.И., Багров С.Н. и др. Влияние физиологического раствора на задний эпителий роговицы трупных глаз // Хирургия роговой оболочки: Сб. научн. тр. -М., 1986. С. 87-89.

37. Рыжак Г.А., Малинин В.В., Платонова Т.Н. Применение кортексина при лечении заболеваний центральной нервной системы. СПб., 2003. - 63 с.

38. Слонимский Ю.Б., Слонимский А.Ю. Место сквозной субтотальной трансплантации роговицы в хирургии кератоконуса на современном этапе // Новые технологии в лечении заболеваний роговицы: Материалы всерос. научно-практ. конф. -М., 2004. С. 339-344.

39. Сургуладзе Н.Г. Роль эндотелия в приживлении роговичного трансплантата после сквозной кератопластики: Дис. . канд. мед. наук.- М., 1990.- 156 с.

40. Трофимова C.B., Максимов И.Б., Нероев В.В. Регуляторное действие пептидов сетчатки // СПб.: ИКФ «Фолиант». 2004. - 160 с.

41. Трофимова C.B., Фихман 0.3. Биорегулирующая терапия и качество жизни людей старшего поколения с нарушением функции зрения // СПб.: «Falcon Crest». 2008. - 105 с.

42. Федоров С.Н., Ронкина Т.И., Явишева Т.М. Эндотелий роговицы человека. M.: МНТК «Микрохирургия глаза», 1993. - 126 с.

43. Хавинсон В.Х., Хокканен В.М., Трофимова C.B. Пептидные биорегуляторы при диабетической ретинопатии. СПб.: Фолиант, 2000. 64 с.

44. Хавинсон В.Х., Трофимова C.B. Пептидные биорегуляторы в офтальмологии // СПб.: ИКБ «Фолиант». 2000. - 48 с.

45. Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н. Пептидные биорегуляторы и старение // СПб.: Наука. 2003. -160 с.

46. Хватова A.B., Плескова A.B. Успешная кератопластика у детей: новая реальность или отдаленная перспектива // Федоровские чтения 2004: сб.тез.-Москва, 2004. С. 372-375.

47. Хорошилова-Маслова И.П., Платовская JI.B., Щипанова А.И. Изменения эндотелия при некоторых поражениях переднего отрезка глаза // Съезд офтальмологов Украинской ССР, 8-й: Тез. докл. Одесса, 1990. - С. 331-332.

48. Ченцова Е.В. Система патогенетически обоснованного лечения ожоговой травмы глаз: Дис. . д-ра мед. наук. М., 1996. - 304 с.

49. Шульгина Н.С., Никулина Н.Б. Биологические свойства роговой оболочки, консервированной разными методами // Проблемы пересадки роговой оболочки. Киев: Здоровье, 1966. - С. 268-271.

50. Шумаков В.И., Онищенко H.A., Кирпатовский В.И. Фармакологическая защита трансплантата. М.: Медицина, 1983. - 232 с.

51. Юрченко Т.Н. Гипотермическая и низкотемпературная консервация роговицы и течение восстановительного периода после трансплантации: Автореф. дис. д-ра мед. наук. Харьков, 1982. - 37 с.

52. Явишева Т.М. Морфо-функциональные особенности эндотелия роговицы человека в норме и патологии и отбор донорского материала для кератопластики: Дис. .канд. мед. наук. М., 1990. - 198 с.

53. Ямскова В.П., Краснов М.С., Ямсков И. А. Наноразмерные биорегуляторы тканей глаза млекопитающих как основа для фармакологических препаратов нового поколения.-М.: М.Пресс, 2009. 84 с.

54. Яхина Н.М., Затулина Н.И., Панормова Н.В. О трансплантабельности консервированной донорской роговицы // Междунар. конф. по кератопластике и кератопротезированию: Материалы. Одесса, 1978. - С. 87-88.

55. Albon J., Tullo А.В., Aktar S., Boulton M.E. Apoptosis in the Endothelium of Human Corneas for Transplantation // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. -Vol. 41, № 10.-P. 2887-2893.

56. Armitage W.J., Juss B.K. The influence of cooling rate on survival of frozen cells differs in monolayers and in suspensions // Cryoletters. 1996. - Vol.17. - P. 213-218.

57. Armitage W.J., Hall S.C., Routledge C. Recovery of endothelial function after vitrification of cornea at -110°C // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002. - Vol. 43,№7.-P. 2160-2164.

58. Abramo F., Bohnke M., Draeger J. Morphology of the corneal endothelium following preservation in dextran or chondroitin sulfate containing culture media // Fortschr. Ophthalmol. 1990. - Vol. 87, № 3. - P. 234-236.

59. Bednarz J., Doubilei V., Wollnik P., Engelmann K. Effect of three different media on serum free culture of donor corneas and isolated human corneal endothelial cells // Br. J. Ophthalmol. 2001. - Vol. 85. - P. 1416-1420.

60. Bourne W.M. Endothelial cell survival on transplanted human corneas preserved at 4 C in 2,5% chondroitin sulfate for one to 13 days // Am. J. Ophthalmol. 1986. - Vol. 102, № 3. - P. 382-386.

61. Bourne W.M. The endothelial cell assay method for the evaluation of corneal preservation // The Cornea: Transactions of the World Congress on the Cornea III.-New York, 1988.-P. 111-114.

62. Bourne W.M., Dougman D.J., Lindstrom R.L. Decreased endothelial cell survival after transplantation of corneas preserved by three modifications of corneal organ culture technique // Ophhalmology. 1985. - Vol. 92, № 11. - P. 1538-1541.

63. Bourne W.M., Lindstrom R.L., Dougman D.J. Endothelial cell survival on transplanted human corneas preserved by organ culture with 1,35% chondroitin sulfate // Am. J. Ophthalmol.- 1985. Vol. 100. - P. 789-793.

64. Bredehorn-Mayr T., Duncker G.I.W., Armitage W.J. Eye Banking // Developments in Ophthalmology. 2009. -Vol. 43. - P. 63-69.

65. Brunette I., Le Francois M., Tremblay M.C., Guertin M.C. Corneal transplant tolerance of cryopreservation // Cornea. 2001. -Vol. 20.- P. 590-596.

66. Builles N., Kodjikian L., Burillon C., Damour O. Major endothelial loss from corneas in organ culture (Importance of second endothelial count) // Cornea. -2006.-Vol. 25, №7.-P. 815-820.

67. Capella J.A., Edelhauser H.F., Van Horn D.L. Corneal preservation. Clinical and laboratory evaluation of current methods.- Springfield, USA: C.C. Thomas publisher, 1973. 336 p.

68. Chu Y.I., Wilhelmus K.R., Penland R.L., Richardson S.W. Limitations of detecting microbial contamination by current eye banking methods // Cornea. -2000.-Vol. 19, №2.-P. 257.

69. Corwin W.L., Baust J.M., Baust J.G., Van Buskirk R.G. The unfolded protein response in human corneal endothelial cells following hypothermic storage: implications of a novel stress pathway // Cryobiology. 2011. - Vol. 63, № 1. - P. 46-55.

70. Doughman D.J. Prolonged donor presrvation in organ culture: long term clinical evaluation // Trans. Am. Ophthalmol. Soc.- 1980. Vol. 78. - P. 567-628.

71. Edelhauser H.F. Functional survival of cryopreserved corneal tissue // Corneal preservation. Springfield, 1973. - P. 280-286.

72. European Eye Bank Assotistion (EEBA). Directory. 2009.- Freiburg. - p.21

73. Eye Bank Assotiation of America (EBAA). Medical Standard.- Washington: DC, 2002.

74. Farge E.J., Fort R.A., Wilhelmus K.R. et al. Morphologic changes of K-Sol preserved human corneas // Cornea. 1989. - Vol. 8. - P. 159-169.

75. Feldman S.T., Gately D.B. Seely L., et al. Stimulation of DNA Synthesis and c-Fos Expression in Corneal Endothelium by Insulin or Insulin-like Growth Factor-I // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1993. - Vol. 34, № 6. - P. 2105-2111.

76. Fuchsluger T.A., Jurkunas U., Kazlauskas A., Dana R. Anti-apoptotic gene therapy prolongs survival of corneal endothelial cells during storage // Gene Ther. -2011.-Vol. 18,№8.-P. 778-787.

77. Fuchsluger T.A., Jurkunas U., Kazlauskas A., Dana R. Viral vectors for gene delivery to corneal endothelial cells // Klin. Monbl. Augenheilkd. 2011. - Vol. 228, №6.-P. 498-503.

78. Grant M. B., Khaw P. T., Schultz G. S. et al. Effects of Epidermal Growth Factor, Fibroblast Growth Factor, and Transforming Growth Factor-B on Corneal Cell Chemotaxis // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1992. - Vol. 33. - P. 3292-3301.

79. Halberstadt M., Bohnke M., Athmann S., Hagenah M. Cryopreservation of human donor corneas with dextran // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2003. - Vol. 44.-P. 5110-5115.

80. Hashimeto T. Electron-microscopic study of the rabbit cornea stored in dialysed serum // Acta. Soc. Ophthalmol. Jap. 1966. - Vol. 70, № 6. - P. 13551366.

81. He Z., Campolmi N., Gain P., Minh H. B. et al. Revisited Microanatomy of the Corneal Endothelial Periphery: New Evidence for Continuous Centripetal Migration of Endothelial Cells in Humans // Stem Cells.-2012.- Vol.10. P. 1212.

82. Heine H. Wissenschftliche Grundlagen der Organtherapie // Tierarztliche Umschau.- 1996. № 51.- P. 71-73.

83. Hoppenreijs V.P., Pels E., Vrensen G. et al. Effects of human epidermal growth factor on endothelial wound healing of human corneas // Inves. Ophthalmol. Vis. Sei. -1992. Vol. 33, № 6. - P. 1946-1956.

84. Hoppenreijs V.P., Pels E., Vrensen G. et al. Basic fibroblast growth factor stimulates corneal endothelial cell growth and endothelial wound healing of human corneas // Invest Ophthalmol. Vis. Sei. 1994. - Vol. 35, № 3. - P. 931-944.

85. Hsu J.K.W., Cavanagh H.D., Jester J.V. et al. Changes in corneal endothelial apical junctional protein organization after corneal cold storage // Cornea. 1999. -Vol. 18, №6.- P. 712-720.

86. Hu J., Kovtun A., Tomaszewski A., Singer B.B. et al. A new tool for the transfection of corneal endothelial cells: calcium phosphate nanoparticles // Acta. Biomater. 2012. - Vol. 8, № 3. - P. 1156-1163.

87. Hull D.S., Green K., Bowman K. et al. Intracellurar pH and glutathione levels in rabbit corneal endothelium following storage in moist chamber and MK medium // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1983. - Vol. 24, № 2. - P. 214-217.

88. Hull D.S., Green K., Thomas L. Effect of HEPES buffer on corneal storage in MK medium // Acta. Opthalmol. 1984. - Vol. 62, № 6. - P. 900-910.

89. Hwang D.G, Nakamura T., Trousdale M.D., Smith T.M. Combination antibiotic supplementation of corneal storage medium // Am. J. Ophthalmol. -1993.-Vol. 115.-P. 299-308.

90. Hwang D.G. Proliferative Capacity of the Corneal Endothelium // V. World Cornea Congress.- Washington: DC, 2005. P. 16.

91. Ikebe H., Itoi M. Cytofluorometric nuclear DNA determination in human corneal endothelial cells //Nihon Ganka Gakkai Zasshi. 1983. - Vol. 87, № 10. -P. 983-988.

92. Johnsen-Soriano S., Haug K., Arnal E., Peris-Martinez C. et al. Oxidative stress gradient in a medium during human corneal organculture // Molecular Vision.-2012.-Vol. 18.-P. 1604-1608.

93. Joseph K.W.H., Dwight C., James V.J. et al. Changes in Corneal Endothelial Apical Junctional Protein Organization After Corneal Cold Storage // Cornea. -1999. Vol. 18, № 6. - P. 712-720.

94. Kampik D., Ali R.R., Larkin D.F.P. Experimental gene transfer to the corneal endothelium (Original Research Article) // Experimental Eye Research. -2012.-Vol. 95,№ l.-P. 54-59.

95. Kampmann M., Blobel G. Biochemistry. Nascent proteins caught in the act // Science. 2009. - Vol. 4. - P. 1352-1353.

96. Karelin A.A., Blishchenko E., Ivanov V.T. A novel system of peptidergic regulation // FEBS Lett. 1998. - № 428.- P. 7-12.

97. Kaufman H.E. Corneal cryopreservation and its clinical application // Transplant. Proc. 1976. - Vol. 8, № 2. - P. 149-152.

98. Kaufman H.E., Varnell E.D., Kaufman S. et al. K-Sol corneal preservation // Am. J. Ophthalmol. 1985. - Vol. 100, № 2. - P. 299-304.

99. Kaufman H.E., Beuerman R.W., Steinemann T.L. et al. Optisol corneal storage medium // Arch. Ophthalmol. 1991. - Vol. 109. - P. 864-868.

100. Kim E.C., Park S.H., Kim M.S. A comparison of pupil dilation and induction of corneal endothelial apoptosis by intracameral 1% lidocaine versus1:100,000 epinephrine in rabbits // J. Ocul. Pharmacol. Ther. 2010. - Vol. 26, № 6.-P. 563-570.

101. Kim P., Yeung S.N., Lichtinger A. et al. Descemet stripping automated endothelial keratoplasty using infant donor tissue // Cornea. 2012. -Vol. 31, № l.-P. 52-54.

102. Kment A., Hofecker G., Niedermuller H., Dreier H.K. Specific incorporation of labelled tissue homogenates into the homologous organs of the rat (author's transl) // Arzneimittelforschung. 1976. - Vol. 26, № 11. - P. 2043-2046.

103. Kment A., Niedermuller H., Hofecker G., Papadopoulos E. Deposition of radiolabeled tissue homogenates in rat organs // Strahlentherapie. Sonderb. -1975.-Vol. 74.-P. 98-106.

104. Krachmer J.H., Mannis M.J., Holland E.J. Cornea. Fundamentals, Diagnosis and Management: 2nd Edition. Elsevier-Mosby, 2005. - Vol. 1. - 1409 p.

105. Koh M.S.W. Corneal endothelial autocrine trophic factor VIP in a mechanism-based strategy to enhance human donor cornea preservation for transplantation // Exp. Eye Res. 2012. -Vol. 95, № 1. - P. 48-53.

106. Komuro A., David O., Gores J.G., Bourne W. M. Cell death during corneal storage at 4 degrees C // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. - Vol. 40, № 12. -P. 2827-2832.

107. Lambiase A. Use of nerve growth factor for the storage, culture or treatment of cornea// United States Patent: 6,537,808. Is.- March 25, 2003.

108. Lass J. H., Putman S.C., Bruner W. E. et al. The Effect of hEGF and Insulin on Corneal Metabolism During Optisol Storage // Cornea. 1994. - Vol. 13, № 3. -P. 243-249.

109. Li W., Sabater A. L., Chen Y. T. et al. A novel method of isolation, preservation, and expansion of human corneal endothelial cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - Vol. 48, № 2. P. 614-620.

110. Lindstrom R.L., Doughman D.J., Skelnik D.L., Mindrup E.A. Minnesota system corneal preservation // Br. J. Ophthalmol. 1986. - Vol. 70, № 1. - P. 4754.

111. Lu X., Chen D., Liu Z., Li C. et al. Enhanced survival in vitro of human corneal endothelial cells using mouse embryonic stem cell conditioned medium // Mol Vis. 2010. -Vol. 8, №16. - P. 611-622.

112. Lundh B.L., Kallmark B. Endothelial cell density after penetrating keratoplasty using long-time banked donor material after long-distancetransportation (Denmark-Sweden) // Acta Ophthalmol. 1986. - Vol. 64. - P. 492498.

113. McCarey B.E, Kaufman H.E. Improved corneal storage // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 1974. - Vol. 13. - P. 165-173.

114. Melles G.R., Eggink F., Lander F. A surgical technique for posterior lamellar keratoplasty // Cornea. 1998. - Vol. 17. - P. 618-626.

115. Melles G.R., Wijdh R.H., Nieuwendaal C.P. A technique to excise the Descemet membrane from a recipient cornea (descemetorhexis) // Cornea. 2004. -Vol. 23.-P. 286-288.

116. Mishima S. Clinical investigations on the corneal endothelium // Ophthalmology. 1982. - Vol. 89, № 6. - P. 525-530.

117. Okumura N., Ueno M., Koizumi N. et al. Enhancement on Primate Corneal Endothelial Cell Survival In Vitro by a ROCK Inhibitor // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2009. - Vol. 50, № 8. - P. 3680-3687.

118. O'Neil P., Mueller F.O., Trevor-Roper P.D. On the preservation of corneal at -196° С for full thickness homografts in man and dog // Brit. J. Ophthalmol. -1967.-Vol. 51, № l.-P. 13-30.

119. Pakarinen P. Preservation of the cornea for penetrating keratoplasty: an experimental study //Acta ophthalmol. 1969. - P. 375.

120. Petroll M.W., Ma L., Jester J.V. et al. Organization of Junctional Proteins in Proliferating Cat Corneal Endothelium During Wound Healing // Cornea.- 2001.-Vol. 20, № 1.- P. 73-80.

121. Pels E, Rijneveld WJ. Organ culture preservation for corneal tissue. Technical and quality aspects // Dev. Ophthalmol. 2009. - Vol. 43. - P. 31-46.

122. Peh G. S., Beuerman R. W., Colman A., Tan D. T. et al. Human corneal endothelial cell expansion for corneal endothelium transplantation: an overview // Transplantation. 2011. - Vol. 91, № 8. - P. 811-819.

123. Peh G.S., Toh K.P., Wu F.Y. et al. Cultivation of Human Corneal Endothelial Cells Isolated from Paired Donor Corneas Электронный ресурс.//

124. PLoS One.- 2011. Vol. 6, № 12. - P. :e28310. - Доступ: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3241625/

125. Pettersson RF, Angelin B, Daneholt B. Günter Blobel the 1999 Nobel Prizewinner in physiology and medicine. Proteins are directed in the cell through by built-in "zip-codes" // Lakartidningen. 1999. - Vol. 96, № 42. - P. 4507-4512.

126. Polack F.M. Cryopreservation of corneas for penetrating keratoplasty // Am. J. Ophthalmol. 1971. - Vol. 71, № 3. - P. 505-515.

127. Price M.O., Bidros M., Gorovoy M. et al. Effect of incision width on graft survival and endothelial cell loss after Descemet stripping automated endothelial keratoplasty // Cornea. 2010. - Vol. 29, № 5. - P .523-527.

128. Rieck P.W., Gigon M., Jaroszewski J. et al. Increased Endothelial Survival of Organ-Cultured Corneas Stored in FGF-2 Supplemented Serum-Free Medium // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2003. - Vol. 44, № 9. - P. 3826-3832.

129. Rieck P.W., Von Stockhausen R.M., Metzner S., et al. Fibroblast growth factor-2 protects endothelial cells from damage after corneal storage at 4 degrees С // Graefes. Arch. Clin. Exp .Ophthalmol. 2003.- Vol. 241, № 9. - P.757-764.

130. Rijneveld J.W., Remeijer L., Rij G., Beekhuis H., Pels E. Prospective clinical evaluation of McCarey-Kaufman and organ culture cornea preservation media: 14-year follow-up // Cornea. 2008. - Vol. 27, № 9. - P. 996-1000.

131. Robbins J.E., Capella J.A., Kaufman H.E. A study of endothelium in keratoplasty and corneal preservation // Arch. Ophthalmol. 1965. - Vol. 73. - P. 242-247.

132. Routledge C., Armitage W.J. Cryopreservation of cornea: a low cooling rate improves functional survival of endothelium after freezing and thawing // Cryobiology. 2003.- Vol. 46.- P. 277-283.

133. Sato E.H. Current Status of Corneal Storage // V. World Cornea Congress: Program abstracts.- Washington: DC, 2005. P. 16.

134. Schöfmann M. The Nobel Prize in Medicine 1999. "Zip code" signals within proteins//Radiologe. 1999.-Vol. 39, № 11.-P. 1000-1001.

135. Schultz R.O., Matsuda M., Yee R.W. et al. Long-term survival of ciyopreserved corneal endothelium // Ophthalmology. 1985. - Vol. 92, № 12. -P. 1663-1667.

136. Schultz G., Cipolla L., Whitehouse A. et al. Growth factors and corneal endothelial cells: III stimulation of adult human corneal endothelial cell mitosis in vitro by defined mitogenic agents // Cornea. 1992. - Vol. 11. - P. 20-27.

137. Shin Y.J., Kim J.H., Seo J.M. et al. Protective effect of clusterin on oxidative stress-induced cell death of human corneal endothelial cells // Mol. Vis.-2009.-Vol. 16, № 15. P. 2789-2795.

138. Shin Y.J., Seo J.M., Chung T.Y., Hyon J.Y., Wee W.R. Effect of cysteamine on oxidative stress-induced cell death of human corneal endothelial cells // Curr. Eye Res. 2011. - Vol. 36, № 10. - P. 910-917.

139. Solmaz R.S., Chauhan R., Blobel G. et al. Molecular Architecture of the Transport Channel of the Nuclear Pore Complex // Cell. 2011. - Vol. 147, № 3. -P. 590-602.

140. Sornelli F., Lambiase A., Mantelli F., Aloe'L. NGF and NGF-receptor expression of cultured immortalized human corneal endothelial cells // Molecular Vision.-2010.-Vol. 16.-P. 1439-1447.

141. Sperling S. Cryopreservation of human cadaver corneas regenerated at 31 degr. C in a modified tissue culture medium // Acta opthalmol. 1981. - Vol. 59 -P. 142-148.

142. Sperling S., Olsen T., Ehlers N. Fresh and cultured corneal grafts compared by post-operative thickness and endothelial cell density // Acta ophthalmol. -1981. Vol. 59, №4. - P. 566-575.

143. Stocker F.W., Levenson D., Georgiade N.C. Medium term preservation of corneal tissue for grafting // Arch. Opthalmol.- 1963. Vol. 70, № 5. - P. 554-557.

144. Senoo T., Obara Y. Joyce N.C. EDTA: A Promoter of Proliferation in Human Corneal Endothelium // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei. 2000. - Vol. 41, № 10.-P. 2930-2935.

145. Slettedal J.K., Lyberg T., Roger M., Beraki K., Ramstad H., Nicolaissen B.

146. Regeneration with proliferation of the endothelium of cultured human donor corneas with extended postmortem time // Cornea. 2008. - Vol. 27, № 2. - P. 212-219.

147. Terry M.A., Li J., Goshe J., Davis-Boozer D. Endothelial keratoplasty: the relationship between donor tissue size and donor endothelial survival // Ophthalmology.-2011.-Vol. 118, № 10.-P. 1944-1999.

148. Theurer K. Biological immunosuppression and molecular regneration using cytoplasmic therapy // Z. Allgemeinmed. 1972. - Vol. 48, № 5. - P. 234-237.

149. Theurer K.E. Innovative Biotherapie: Fortschritte d. Zell-, Molekular u. Immunobiologie. Stuttgart.: Hippokrates-Verlag. 1987.- P. 304.

150. Theurer K.E. Биологическая иммунотерапия: способы изготовления и применения препаратов vitOrgan, сывороток, вакцин из аутокрови и другого биоматериала. Перевод: Сорокина В.А., Стогова Т.В.- М., 2007, 256 с.

151. Tripathi В.J., Kwait P.S., Tripathi R.C. Corneal growth factors: a new generation of ophthalmic pharmaceuticals // Cornea. 1992. - Vol. 9. - P. 2-9.

152. Valtink M, Gruschwitz R, Funk RH, Engelmann К. Two clonal cell lines of immortalized human corneal endothelial cells show either differentiated or precursor cell characteristics // Cells Tissues Organs. 2008. - Vol. 187, № 4. -P. 286-294.

153. Van Horn D.L. Ultrastructural changes in cryopreserved and experimentally rehydrated corneal tissue // Corneal preservation. Springfield, 1973. - P. 237-247.

154. Volker-Dieben H.J., Kok-Van Alphen C.C., Lansbergen G. et al. Different influence in corneal graft survivaling 539 transplants // Acta ophthalmol. 1982. -Vol. 60,№2. -P. 190-202.

155. Waring G.O., Krochn M.A., Ford G.E. Four methods of measuring human ccorneal endothelial cells from specular photomicrographs // Arch. Ophthalmol. — 1980.-Vol. 98.-P. 848-855.

156. Xin G., EunDuck P. K. Distribution and Putative Roles of Fibroblast Growth Factor-2 Isoforms in Corneal Endothelial Modulation // Invest. Ophthalmol. Vis. Sei.- 1998. Vol. 39, № 12. - P. 2252-2258.

157. Yao Y.F., Zhang Y.M., ZhoifF. et al. Therapeutic penetrating keratoplasty in severe fungal keratitis using cryopreserved corneas // Cornea. 2003. - Vol.87. -P.543-547.

158. Yoeruek E., Tatar O., Spitzer M.S., Saygili O. et al. Effects of bevacizumab on apoptosis, Na+ -K+ -adenosine triphosphatase and zonula occludens 1 expression on cultured corneal endothelial cells // Ophthalmic Res. 2010. - Vol. 44, № l.-P. 43-49.

159. Yokogawa H., Kobayashi A., Sugiyama K. Clinical evaluation of a new donor graft inserter for Descemet's stripping automated endothelial keratoplasty // Ophthalmic Surg. Lasers Imaging.- 2012 Vol. 43, № 1. - P. 50-56.

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологическая защита эндотелия донорских роговиц гомологичными клеточными пептидами на этапе консервации

Оглавление диссертации Ролик, Ольга Ивановна :: 2012 :: Москва

Введение диссертации по теме "Глазные болезни", Ролик, Ольга Ивановна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Ролик, Ольга Ивановна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций