Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция повреждений организма, вызванных различными патологическими воздействиями (экспериментальное исследование)



□0305340Э

ДЕНИСЕНКО Наталия Петровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ ОРГАНИЗМА, ВЫЗВАННЫХ РАЗЛИЧНЫМИ ПАТОЛОГИЧЕСКИМИ ВОЗДЕЙСТВИЯМИ (экспериментальное исследование)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 2007

003053409

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Бурбелло Александра Тимофеевна доктор медицинских наук, профессор Николаев Валентин Иванович

Официальные оппоненты:

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Игнатов Юрий Дмитриевич доктор медицинских наук, профессор Крауз Владислав Алексеевич доктор медицинских наук, профессор Васильев Андрей Глебович

Ведущее учреждение:

ГОУВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» Министерства оборы РФ.

Защита состоится «¿У »/¿¿^/<2- 2007 года в « » часов на заседании диссертационного совета Д. 208.086.01 при ГОУВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр., 47.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр., 47. Автореферат разослан 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Команденко М.С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Из великого множества повреждающих факторов первостепенное значение имеют те, с которыми наиболее часто встречается человек в своей повседневной и производственной деятельности - перегревание, холод, физическое и нервное перенапряжение, гиподинамия, интоксикации, голод, жажда, гравитация, шум, вибрация и другие. Эта область общей патологии, патофизиологии становится полем интенсивного фармакологического исследования, с одной стороны для изучения механизмов патологических процессов, а с другой стороны, для экспериментальных обоснований применения фармакологических средств с целью защиты организма от повреждающего действия указанных факторов, повышения адаптивных возможностей организма и коррекции уже возникших нарушений, для поддержания жизнедеятельности и работоспособности.

Роль стресса как фактора этиологии и патогенеза язвенных поражений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, атеросклероза, нарушений функции сердца, печени, вторичных иммуно-дефицитных состояний, онкологических заболеваний в настоящее время доказана многочисленными исследованиями (КорховВ.В., 1974; Эверли Д.С., Розенфельд Р., 1985; Меерсон Ф.З., 1993; Рысс Е.С., Звар-тауЭ.Э., 1998; Соколов Е.И., 1998; Макнелли П.Р., 1999; Губарева JI.И., 2001; Пшенникова М.Г., 2001; Овсянников В.И., 2003; Krantz D.S. et al., 1996; Schiaffonati L. et al., 1997; Opie L.H., 1997).

Голодание и истощающая физическая нагрузка также являются стрессорными воздействиями на организм, вызывая повреждение, существенно изменяя защитные силы организма (Ивашкин В.Т. и со-авт., 1991; Луфт В.М., 1994; Шанин В.Ю., 1995; Крыжановский Г.Н. и соавт., 1997; Доценко В.А., 2001; Симоненко В.Б. и соавт., 2001; Но-воженов В.Г. и соавт., 2002; Гриневич В.Б. и соавт., 2004; Fricher М. et al., 1991). Длительное стрессорное воздействие отягощает течение многих других заболеваний - инфекционных, воспалительных, нервно-психических (Нестерова И.В., 1992; Тузанкина И.Ф. и соавт., 1993; Насруллаева Г.М., 1999; Sternberg Е.М. et al., 1992).

В основе характерных повреждений, вызванных токсическим, флогогенным и /или стрессорным воздействием, независимо от вида патогенного фактора, лежат стойкие нарушения вегетативного и гуморального баланса. Возникающий, как следствие нарушения тканевого метаболизма, дефицит энергии, приводит к вторичным метаболическим сдвигам, в том числе активирует свободнорадикальное окисление (СРО) в клетке (ЛанкинВ.З. и соавт., 2001). Активация

СРО в силу реакционной способности свободных радикалов приводит к повреждению биологических мембран (ЗенковН.К. и соавт., 2001; Голиков А.П. и соавт., 2003). В результате возникают функциональные и структурные повреждения тканей и органов. Фармакологическая коррекция нарушений метаболизма, возникающих при патологических состояниях, вызванных стрессорными, токсическими, флого-генными воздействиями, является одной из актуальных биомедицинских проблем.

Фармакотерапия повреждений, вызываемых стрессорным воздействием, повышающая (улучшающая) процессы адаптации, традиционно основывается либо на использовании препаратов, повышающих «порог психофизической устойчивости» (Вальдман A.B. и соавт., 1979), либо лекарственных средств, повышающих резистентность организма к воздействию неблагоприятных факторов (Лазарев Н.В., 1949). Однако, повышение «порога психофизической устойчивости» достигается, как правило, ценой ограничения приема и переработки информации, скорости, количественных и качественных характеристик ответа. Препараты, влияющие на резистентность организма, чаще оказывают профилактический эффект, не влияя на количественный и качественный характер повреждений, вызванных стрессорным воздействием. Базисная фармакотерапия диффузных заболеваний печени связана с использованием гепатопротекторов, однако, существующие лекарственные средства для стимуляции процессов регенерации в печени не полностью удовлетворяют потребности клинической практики (Дегтярева И.И., 2000; Губергриц Н.Б. и соавт., 2000; Оковитый C.B., 2002; Саратиков A.C., 2003). Традиционная фармакологическая коррекция воспалительных процессов связана с применением стероидных и нестрероидных препаратов, в то же время поиск новых путей лекарственного влияния на воспаление является актуальным (Луйк А.И., Липкан Г.Н., 1988).

Универсальными регуляторами метаболизма направленного действия являются полиненасыщенные жирные кислоты и аминокислоты, что позволяет создавать на их основе новые эффективные препараты (Раевский К.С., Георгиев В.П., 1986; Чекман И.С., 1991; Левачев М.М., 1995; Воронина Т.А., Середенин С.Б., 1998; Бурбелло А.Т., 2005). Исходя из этого, поиск препаратов для коррекции нарушений, обусловленных стрессорными, токсическими воздействиями на организм, используемых при воспалении, перспективен среди средств метаболической терапии, в качестве которых предлагаются полиен (комплекс полиненасыщенных жирных кислот; ЭПК, ДГК не менее 25%), нейрозим (комплекс незаменимых аминокислот) и их комбинация.

Целью исследования является обоснование использования полнена, нейрозима и их комбинации для коррекции нарушений, возникающих при патологических состояниях, вызванных стрессорными, токсическими воздействиями и при воспалении.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности изменения реактивности организма при применении полиена, нейрозима и их комбинации.

2. Оценить стрессопротекторное действие нейрозима и его комбинации с полиеном по показателям изменений липидного обмена; интенсивности процессов перекисного окисления липидов; активности антиоксидантной системы; состояния иммунной системы; морфологическим изменениям органов при сверхсильном и длительном стрессорном воздействии.

3. Изучить действие полиена, нейрозима и их комбинации на антитоксическую, секреторную, ферментативную функции печени, энергетический, белковый, жировой обмены, процессы перекисного окисления липидов, активность антиоксидантной системы, состояние иммунной системы, морфологическую картину ткани печени при различных видах повреждения при профилактическом и терапевтическом применении веществ.

4. Провести сравнительное изучение эффекта полиена, нейрозима и их комбинации на процессы воспаления, репарации и регенерации при профилактическом и терапевтическом использовании.

5. Дать экспериментальное обоснование для использования и определить показания к применению полиена, нейрозима и их комбинации.

Научная новизна. Расширено представление о роли неспецифических повреждений, обусловленных стрессорной реакцией, в развитии патологических состояний при токсическом повреждении печени, воспалении. Обосновано применение препаратов метаболического типа действия в комплексной терапии для их коррекции.

Впервые установлено, что полиен, нейрозим и их комбинация повышают функциональную активность ЦНС, иммунной системы у ин-тактных животных.

Впервые выявлено стрессопротекторное действие нейрозима и его комбинации с полиеном, которое обусловлено антиоксидантными свойствами веществ, нормализацией белкового и жирового обменов, активацией иммунной системы.

По данным биохимических, иммунологических и гистологических исследований впервые показано, что полиен, нейрозим и их комбинация оказывают антиоксидантное действие, нормализуют синтетическую и детоксикационную функции гепатоцитов, устраняют

признаки цитолиза при токсическом повреждении печени четырех-хлористым углеродом (СС14) и частичной гепатэктомии (ЧГЭ), оказывая гепатопротекторное действие.

Впервые установлено, что полиен, нейрозим и их комбинация способствуют восстановлению энергетического, пластического обменов, снижают интенсивность ПОЛ, повышают активность АОС при воспалении; улучшают процессы репарации и регенерации.

Научно-практическая значимость. Обоснована перспективность применения омега-3 полиненасыщенных жирных кислот и аминокислот, обладающих комплексным механизмом действия, направленным на оптимизацию, нормализацию метаболических изменений, возникающих в результате экстремальных воздействий, вызывающих патологические изменения в системах и органах. Полиен, нейрозим и их комбинация могут быть рекомендованы как фармакологические средства метаболической терапии для коррекции нарушений пластического обмена, нормализации адаптационно-приспособительных механизмов, снижения интенсивности перекисного окисления липидов при стрессорном повреждении систем и органов, нарушениях функции печени и воспалительных процессах.

Личное участие автора. Автором лично выбрана тема исследования, разработана программа, осуществлялось планирование и организация исследования по всем разделам работы. Автор является основным участником экспериментальных исследований по выявлению стрессопротекторных, гепатопротекторных и противовоспалительных свойств изучаемых веществ и их комбинации. Лично автором организовано проведение и выполнение физиологических и биохимических методов исследования (доля участия - 90%). Отдельные исследования (иммунологические, морфогогические) выполнены совместно со специалистами соответствующего профиля лабораторий, за что автор выражает благодарность. Доля участия автора в накоплении материала составляет 80%, в анализе и обобщении материала - 100%.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Полиен, нейрозим и их комбинация обладают способностью модулировать реактивность организма интактных животных.

2. Полиен, нейрозим и их комбинация оказывают стрессопротек-торное действие на метаболические нарушения, возникающие в организме при сверхсильном и длительном стрессорном воздействии.

3. Полиен, нейрозим и их комбинация оказывают защитное действие на печень при частичной гепатэктомии и токсическом повреждении.

4. Полиен, нейрозим и их комбинация обладают противовоспалительным эффектом, стимулируют процессы репарации и регенерации.

5. Комбинация веществ обладает стресспротекторными, гепато-протекторными, противовоспалительными свойствами в большей степени, чем полиен и нейрозим в отдельности, суммируя эффект действия веществ.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии» (Смоленск, 1994); на I Всероссийском съезде фармакологов (Волгоград, 1995); I, II и III Российских конгрессах по патофизиологии (Москва, 1996, 2000, 2004); Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1996,1997,1998); Международном конгрессе «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 1997); IV Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Великий Новгород, 2000); региональном конгрессе ISPNE (Санкт-Петербург, 2001); Первом Всероссийском форуме «Третье тысячелетие. Пути к здоровью нации» (Москва, 2001); юбилейной конференции, посвященной 50-летию института физиологии HAH Беларуси (Минск, 2003); научно-практических конференциях СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2000-2006).

Внедрение. Материалы исследования используются в научном и учебном процессах кафедр фармакологии и патологической физиологии Российской военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, СПбГМУ им. И.П. Павлова, СПбГМА им. И.И. Мечникова. Материалы исследования используются в научно-исследовательской работе отделения трансплантации костного мозга и биотерапии ГУ НИИ онкологии им. H.H. Петрова. По результатам исследования направлена заявка на изобретение «Способ коррекции токсического повреждения печени с помощью комбинации веществ (полиена и нейрозима), обладающих иммуномодулирующим, регенерирующим, мембранно- и гепатопротекторным действием». По результатам исследования издано учебно-методическое пособие «Патология клетки», рекомендованное в качестве учебного пособия для студентов медицинских вузов и факультетов Департаментом образовательных медицинских учреждений и кадровой политики МЗ РФ (№15-16/84).

Публикации. Основное содержание диссертационной работы отражено в 58 научных работах, из них 16 статей, 8 - в центральной печати и главе в монографии «Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты. Фармакология и клиническое применение».

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав результатов собственных исследований, обсуждения результа-

тов, выводов, списка литературы. Работа изложена на 265 страницах машинописного текста, иллюстрирована 45 рисунками и 56 таблицами. Библиографический указатель содержит 364 наименования.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова, в отделе фармакологии ГУ НИИ экспериментальной медицины РАМН в период с 1994 по 2005 годы.

В исследованиях использовали полиен, нейрозим и их комбинацию.

1. Полиен, представляет собой биологически активную добавку (БАД) с концентрацией эйкозопентаеновой и докозогексаеновой кислот не менее 25%, где полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) содержатся в нативном состоянии, произведен ОАО «Полярис» г. Мурманск.

2. Нейрозим (биотон) - пищевое вещество, представляющее собой смесь аминокислот и низших пептидов. Получают путем переработки пекарских дрожжей с использованием автолитической деструкции, ионообменной хроматографии, упаривания и сушки. Вещество не содержит белки, липиды, нуклеиновые кислоты и их фрагменты.

Дозы веществ составили от 25 мг/кг до 560 мг/кг в зависимости от целей и задач экспериментов. Вещества вводили внутрижелудочно с помощью зонда. Длительность применения веществ или их комбинации зависела от цели и характера исследования и могла быть единовременной, либо вещества вводились в течение определенного количества дней до или параллельно с экспериментальным воздействием. Контролем служили животные, получавшие физиологический раствор в эквиобъемных дозах, препараты сравнения выбирались в зависимости от цели эксперимента.

Исследования выполнены на 1684 белых нелинейных крысах-самцах, 532 белых мышах, 180 морских свинках, с соблюдением принципов гуманного отношения к лабораторным животным в соответствии с Международными рекомендациями (1993), Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (МЗ РФ, 2000) и приказом МЗ РФ «Об утверждении Правил лабораторной практики» № 267 от 19.06.2003.

Оценку влияния нейрозима и его комбинации с полиеном на степень работоспособности, выносливости и выживаемость животных проводили на модели «неизбегаемого плавания и длительного голодания» (Автандилов Г.Г., 1980; Руководство по клинической и лабораторной диагностике под редакцией Меньшикова В.В., 1982). Учи-

тывали выживаемость, динамику массы тела, продолжительность плавания животных (Тихонов В.Н., 1981). Для оценки состояния иммунной системы определяли количество Т- и В- лимфоцитов в селезенке, селезеночный индекс, титр комплемента и содержание циркулирующих иммунных комплексов.

Водоиммерсионный стресс у крыс вызывали путем погружения иммобилизированных животных в бассейн с водой комнатной температуры (20 С) (Методические указания МУК 2.3.2.721-98). Оценивали профилактическое и лечебное действие нейрозима и его комбинации с полиеном по показателям интенсивности перекисного окисления липидов (ДК, ГПЛ, МДА) и состоянию антиоксидантной системы (СОД, ГР, Гл-6-ДГ, каталазы) в крови и микросомах печени, проводили морфологическое исследование.

Длительное стрессорное напряжение у крыс вызывали с помощью электрокожного раздражения, оказывающего слабое болевое воздействие; применяемые при этом сила тока 0,2 мА и напряжение от 20 до 40 В не оказывают повреждений (Bliss Е., Ailion G., 1968; Yuwiller R., 1971). Длительность эксперимента составила 90 дней. Биохимические и морфологические исследования проводили на 10-й, 50-й и 90-й дни опыта. Интактную группу животных помещали в экспериментальную клетку без тока в течение 90 дней по указанной схеме. Повреждающее действие стрессорного воздействия оценивали по интенсивности перекисного окисления липидов (ДК и МДА), состоянию антиоксидантной системы (СОД, ГР), изменению липидного обмена (содержание общих липидов, О-ХС, а-ХС, суммарных ЛПНП и ЛПОНП, ЛПВП, ТГ, ФЛ; рассчитывали индекс атерогенности и фосфолипидно-холестериновый коэффициент). В указанные сроки исследования проводили морфологическое изучение ткани сердца.

Гепатопротекторные свойства веществ были изучены на двух моделях: 1) повреждение печени, вызванное четыреххлористым углеродом и 2) частичной гепатэктомии.

Защитное действие веществ на модели повреждения печени СС14 изучали при профилактическом и лечебном применении полнена, нейрозима и их комбинации. Подострое токсическое поражение печени четыреххлористым углеродом формировали введением СС14 подкожно в дозе 2 мл/кг в смеси с подсолнечным маслом (1:1) 3 раза в неделю в течение месяца. В острых опытах животным в желчный проток вставляли эластическую фистулу и затем в течение 1, 2, 3 часов после операции конюлирования собирали желчь. Определяли количество секретируемой желчи, содержание в ней общего билируби-

на, сумму желчных кислот, общие фосфолипиды, холато-холестери-новый коэффициент.

О гепатозащитном действии полиена, нейрозима и их комбинации судили по выживаемости животных, состоянию антитоксической функции печени, о которой судили по продолжительности гексенало-вого наркоза и экскреторной функции печени, которую оценивали с помощью бромсульфалеиновой пробы (Тугаринова В.Н., 1966, в мод. Нуралиева Ю.Н., 1975). Кроме того, определяли активность АсАТ, АлАТ, ЩФ, ГТТ, белковые фракции, концентрацию общих липидов, фосфолипидов, триглицеридов, холестерина в сыворотке крови; показатели свертываемости крови. В гепатоцитах определяли интенсивность протекания перекисного окисления липидов (ДК, ГПЛ, МДА) и активность антиоксидантной системы (каталаза, СОД). Состояние иммунной системы оценивали по содержанию Т- и B-лимфоцитов в селезенке, индексу селезенки, концентрации ЦИК, титру комплемента. Для гистологического исследования кусочки печени фиксировали в 10% раствора нейтрального формалина и заливали в парафин. Серийные срезы окрашивали гематоксилином и эозином.

Частичную гепатэктомию выполняли по методике A.M. Higgins и P.M. Anderson (1931), удаляя левую боковую и центральную доли печени (2/3 части всей печени) под нембуталовым наркозом (70 мг/кг). Для количественной оценки процессов регенерации в печени рассчитывали коэффициент полноты регенерации, предложенный Е.Б. Шустовым, В.В. Гайворонской и соавт. (1990, 1992 гг.). Функциональную активность печени оценивали по продолжительности гексеналового сна, отражающего состояние микросомальной системы, метаболизи-рующей ксенобиотики, в частности, гексенал. Гексенал вводили внутрибрюшинно в дозе 80 мг/кг (Verly W.G., 1976). Кроме того, в сыворотке крови определяли уровень общего белка и белковых фракций, активность ферментов.

Противовоспалительное действие полиена и его комбинации с нейрозимом было изучено на 4-х моделях воспаления. Отек лапок у крыс вызвали введением под апоневроз по 0,1 мл 2,5% раствора формалина, 0,1% раствора гистамина, 0,01% раствора серотонина и 2% раствора каррагенина. Критерием оценки противовоспалительного действия веществ служила величина отека лапок, измеряемая онко-метрическим способом до введения и через 0,5; 1,5; 3 и 4 часа после введения гистамина, серотонина и каррагенина; и через 24 и 48 часов после введения формалина (Николаевский В.И., 1941). Препаратами сравнения служили бутадион, индометацин, диклофенак натрия. Бы-

ло изучено влияние веществ и их комбинации на экссудативную и пролиферативную фазы воспаления (Тринус Ф.П. и др., 1975).

Адьювантный артрит моделировали путем инокуляции под апоневроз правой задней лапки полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), содержащего 2 мкг БЦЖ в 1 мл (Алехин Е.К., 1994). Влияние веществ на репарацию и регенерацию тканей было изучено на модели травматического неврита седалищного нерва и по степени регенерации слизистой желудка после повреждения (водоиммерсионный стресс, 0,6 N соляная кислота, криогенное воздействие).

О функциональном состоянии ЦНС судили по изменению сумма-ционно-порогового показателя (Сперанский C.B., 1965); на моделях, формирующих условный рефлекс активного избегания (УРАИ) (Шабанов П. Д., 1981); условный рефлекс пассивного избегания (УРПИ) (Любимов Б.И., 1965).

Содержание общего белка и альбумина в сыворотке крови определяли фотометрически по методу O.N. Lowry et al. (1951). Содержание белковых фракций определяли электрофоретическим способом (КолбВ.Г., Камышников B.C., 1976). Активность аспартат ами-нотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) определяли с использованием набора стандартных реактивов фирмы «Оль-векс-Европа» по методу S. Reitman et al. (1957). Активность щелочной фосфатазы определяли по реакции гидролиза (î-глицерофосфата (Бодановский, 1993). Активность ГТТ определяли унифицированным методом с использованием наборов реактивов фирмы «LACHEMA».

Определение содержания общего холестерина определяли по модифицированной Ильком реакции Либермана-Бурхарда в сыворотке крови (КолбВ.Г., Камышников B.C., 1976). Индекс атерогенности высчитывали по формуле, предложенной Климовым А.Н. (1984). Содержание триглицеридов в сыворотке крови определяли ферментативным методом (Комаров Ф.И., 1998), используя наборы стандартных реактивов. Содержание общих фосфолипидов в сыворотке крови определяли по методу Зильверсмита и Дэвиса (Строев Е.А., Макарова В.Г., 1986). Изучение спектра липопротеидов сыворотки крови проводили методом дискового электрофореза в полиакриланидном геле (Маграчева Е.Я., 1973).

Определение ДК проводили по методу И.Д. Стальной (1977). Количество гидроперекисей определяли по восстановлению железа из двухвалентной формы в трехвалентную. Для расчета использовали коэффициент молярной экстинции 0,55x105 Моль"1 см"1 (Доров-ских В.А. и др., 1989). Определение содержания малонового диальде-

гида (МДА) проводили по методу M. Uchiyma, M. Michara (1978) в модификации Л.И. Андреевой, Л.А. Кожемякина (1988).

Комплексное определение активности супероксиддисмутазы (СОД) и глутатионредуктазы (ГР) в эритроцитах и тканях проводили по методу Е.В. Макаренко (1988). Определение активности каталазы в крови и гомогенате печени крыс проводили по методу М.Д. Королюк и соавт. (1988).

Содержание общего билирубина определяли по методу Ендрасси-ка-Клеггорна-Грофа с использованием набора реактивов фирмы «La-chema».

Функцию коры надпочечников оценивали по содержанию суммарных 11-ОКС в плазме крови и 17-ОКС в моче животных по методу Н.Я. Усватовой и Ю.А. Панкова (1968). Содержание А, НА, ДОФА и ДА в моче определяли по методу Э.Ш. Матлиной, З.М. Киселевой, И.Э. Софиевой(1965).

Иммунологические исследования выполнены в отделении трансплантации костного мозга и биотерапии ГУ НИИ онкологии им. H.H. Петрова.

Методом мембранной иммунной люминесценции определяли количество Т- и B-клеток в селезенке (Шторх В., Эммрих Й., 1987).

Методом Г.Б. Васельвольф, Л.П. Копытовской определяли титр комплемента в сыворотке крови (Гринбаум Н.Б., Савельвольф Г.Б., 1968).

Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) измеряли на спектрофотометре и выражали в единицах оптической плотности по методу M. Digeon et al. (1977).

Анафилактогенную активность нейрозима, полиена и их комбинации исследовали на морских свинках в реакции гиперчувствительности немедленного типа (анафилактический шок). Тяжесть шока оценивали по шкале Weigle через 1-5 мин после введения разрешающей дозы сыворотки (Методические рекомендации, 1986).

Чувствительность замедленного типа изучали на морских свинках по методу Б.И.Любимова (1999). Площадь эритемы на месте введения разрешающей дозы препарата измеряли с помощью колориметрической линейки, а реакцию изменения цвета кожи оценивали в баллах по шкале, предложенной C.B. Суворовым (1974):

Оценку активности макрофагов проводили по определению поглотительной и биоцидной активности (Полевщиков A.B., 1995). Определение числа антителообразующих клеток (АОК) проводили по методу Jerne N. (1974). Определение розеткообразующих клеток

(РОК) проводили микрометодом в соответствии с модификацией В.Н. Вохминцева (1986).

Морфологические исследования проводились на кафедре патологической анатомии СПбГМА им. И.И.Мечникова. Морфологические исследования слизистой желудка, ткани печени, сердечной мышцы проводили после фиксации 10% формалином. Серийные среды тканей окрашивали гематоксилином и эозином.

Обработку полученных результатов исследований проводили с использованием общепринятых методов параметрической и непараметрической статистики - для выборок с нормальным распределением - критерий Фишера (Р) и критерий Сьюдента. Из непараметрических тестов, в зависимости от типов выборок (независимые или связанные), вычисляли критерий Вилкоксона-Манна-Уитни (II) или парный критерий Вилкоксона (V/). Достоверными считали различия при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние полнена, нейрозима и их комбинации на реактивность организма интактных животных

В соответствии с целью и задачами исследования было проанализировано влияние полиена, нейрозима и их комбинации на реактивность организма интактных животных. В экспериментах было установлено, что полиен не изменял, а нейрозим и его комбинация с поливном интенсифицировали поведенческую активность животных, стимулировали условно-оборонительную реакцию организма. Результаты исследования показали, что нейрозим и его комбинация с полисном влияют на особенности формирования условных реакций активного (УРАИ) и пассивного (УРПИ) избегания. Так, было отмечено увеличение числа правильных ответов и снижение числа межсигнальных реакций уже с 1-го дня исследования (рис. 1). В тесте с формированием УРПИ наиболее выраженным антиамнестический эффект был у комбинации полиена и нейрозима и проявлялся в увеличении латентного времени захождения в темновую камеру после обучения; уменьшении числа захождений в темновую камеру, увеличении времени нахождения в освещенной камере. Антиамнестический эффект комбинации полиена и нейрозима был сопоставим с эффектом ноотропила (рис. 2).

ПО - правильные ответы; МР - межсигнальные реакции

4 день

ПО МР 5 лень

| Контроль 0.9% ЫаС1

Полнен 1 мл/кг

Нейрозим £¡¡¡2 комбинация нейрозим Ноотролил

250 мг/кг + полиен 1000 мг/кг

Рис. I. .........с полнена, исйрошмя м их комбинации »а выработку УГЛИ

у крыс.

Латентный период первого захождения а темновую камеру

%

1400 1200 1000 600 600 400 200 О

.1

I

%

400 Э50 эоо 250 300 150 100 50 о

Суммарное время нахождения в освещенной камере

1Й

А

Чисто заховдений в темновую камеру

%

160 ,-140 -120 -100 -80 ■ 60 -40 ■ 20 -О ..

I

ХЕ

1

I I обучение через 24 час.

1 - контроль; 2 - комбинация нейрозим + полиен (за 1 час ДО обучения); 3 - комбинация нейрозим + полиен 4 дня; комбинация нейрозим + полиен 7 дней; 5-ноотролил 1000 мг/кг

Рис. 2. Лнтиамнестическое леве I вне комбинации полнена и нейрознма

в тесте с УРПИ.

Не являясь нейропептидом, комплекс незаменимых аминокислот- нейрозим, по всей видимости, влияет на метаболические процессы мозга и оказывает оптимизирующее действие как на скорость

выработки, так и на закрепление УРПИ и УРАИ. По-видимому, обучение на фоне нейрозима и его комбинации с полиеном обеспечивает повышение устойчивости сложившейся в период обучения системы межнейронных связей. Последнее, по мнению ряда авторов, улучшает такое свойство памяти, как консолидация и «вспоминание» или в случае условнорефлекторного поведения, воспроизведение поведенческого акта, в наших экспериментах направленного на избегание аверсийного воздействия (Семёнова Т.П., 1992; Козловский И.И. и др. 2000; O'Keefe G., 1976; Mishkin N.. 1993).

При оценке состояния эндокринной системы интактных животных (по содержанию суммарных 11-ОКС в плазме крови и 17-ОКС в моче животных, и уровню А, НА, ДОФА, ДА в моче) было установлено, что полиен, нейрозим и их комбинация практически не влияли на ее функциональное состояние. Нейрозим вызывал транзиторную гиперпротеинемию на 2-й месяц исследования, полиен и его комбинация с нейрозимом не влияли на белковый обмен животных. Полиен, в отличие от нейрозима и комбинации веществ, при длительном использовании (6 месяцев) снижал содержание общего холестерина, ЛПНП и ЛПОНП в сыворотке крови. Нейрозим при длительном применении (4 месяца) приводил к транзиторной гипергликемии, сопровождавшейся увеличением активности амилазы, полиен и его комбинация с нейрозимом не влияли на углеводный обмен.

Известно, что лекарственные средства, относящиеся к различным химическим и фармакологическим группам, в терапевтических дозах могут оказывать влияние на иммунную систему (Зимин Ю.В., 1983; Соколов Е.И., 1998). Исходя из данных литературы (Фрейлих М.П., 1997, Kelley D.S. et al., 1996), собственных исследований, химического строения изучаемых веществ было сделано предположение о влиянии нейрозима, полиена и их комбинации на состояние иммунной системы интактных животных.

Об изменении функциональной активности иммунной системы судили по уровню Т- и B-лимфоцитов, титру комплемента, концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), индексу селезенки. Оценивали влияние веществ на реакции гиперчувствительности замедленного и немедленного типа, на поглотительную и био-цидную активность макрофагов, а также исследовали функциональную активность Т- и B-клеток в индуктивный и продуктивный периоды иммунного ответа.

В ходе исследования было установлено, что применение полиена не вызывает достоверных изменений активности иммунной системы животных, показатели были сопоставимы с интактной группой. В то

же время применение нейрозима по той же схеме привело к увеличению титра комплемента (на 7,0 %), уровня Т-лимфоцитов в селезенке (на 20,1%) и наблюдалась тенденция к увеличению ЦИК в сыворотке крови животных (табл. 1).

Таблица 1

Влияние нейрозима полнена и их комбинации на показатели функциональной активности иммунной системы интактных животных

Группы животных Уровень Т-лимфоцитов в селезенке (%) Уровень В-лимфоцитов (%) Индекс селезенки (Мсел./Мтела х 1000) Титр комплемента (СН100ЕД) ЦИК (ед. оптической плотности)

Интактные 44,1±2,7 4б,0±0,5 5,42±0,47 161,03±0,004 0,062±0,001

Контроль на введение (0,9% NaCl) 43,9±2,9 46,3±0,2 5,59±0,37 162,00±0,001 0,063±0,001

Полиен 1,0 мл/кг в теч. 14 дней 43,9±2,4 45,9±0,5 5,54±0,51 160,0±0,003 0,061 ±0,002

Нейрозим 250 мг/кг в теч. 14 дней 53,27±1,6* 45,1±0,9 6,02±0,24* 171,2±0,005* 0,069±0,004

Комбинация нейрозим + полиен в теч. 14 дней 50,07±2,4* 44,1±05 6,00±0,27* 168,25±0,001* 0,065±0,005

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным.

В ходе изучения влияния полиена, нейрозима и их комбинации на реакции ГНТ и ГЗТ на морских свинках было установлено, что ней-розим в большей степени, чем его комбинация с полиеном потенцировал анафилаксию: у сенсибилизированных свинок развивался анафилактических шок в ответ на внутрисердечное введение 0,1 мл сыворотки.

Атональный период при введении нейрозима был сопоставим со временем атонального периода у контрольных животных при введении 0,1 мл сыворотки (рис. 3).

На основании полученных данных можно заключить, что нейро-зим обладал анафилактической активностью; он потенцировал аллергенное действие сыворотки, что, по-видимому, приводило к немедленной гиперактивности В-клеток, и, возможно, тучных клеток.

Изучение динамики гиперчувствительности замедленного типа во временном интервале, определяемом в течение 48 часов, свидетельствовало о сложном характере изменений накожных реакций у морских свинок.

Нейрозим 250 мг/кг + полнен 1 мл/кг Нейроэим 250 мг/кг Контроль 2 Контроль 1

2,0

} 4,0

О

О. <3}

5.0

<

Нейрознм 250 мг/кг + полиен 1мл/кг Нейрозим 250 мг/кг Контроль 2

1,8#

X

3-1 3.7#

и а>

; и

КЯЯч о,е

ч Нейрозим 250 мг/кг + полнен 1 мл/кг Нейрозим 250 мг/кг Контроль 1

|-13,4*

ЕЕМ 3,0

е-

4,0

<

0,0 1,0 2.0 3,0 4,0 5.0 6.0

* - достоверность отличий по сравнению с контролем ] (0,5 мл), р < 0.01;

# - то же самое по сравнению с контролем 2 (0.) мл).

Рнс. 3. Влияние нейрошма н его комбинации с полисном на выраженность анафилакгнческою шока у морских свинок, сенсибилизированных нормальной лошадиной сывороткой.

Установлено, что через час после введения разрешающей дозы в группе сенсибилизированных свинок (ПАФ+нейрозим) реакция на препарат отсутствовала. В группе сенсибилизированных животных (ПАФ + комбинация нейрозима и полиена) - площадь распространения едва видимой эритемы составляла около 4,0 мм, по сравнению с контролем, где на всем участке пятна развивалась бледно-розовая эритема (р<0,001). Через 24 часа площадь распространения эритемы у опытных животных значительно сокращалась; через 48 часов размеры накожной эритемы у животных, получавших комбинацию веществ, значительно снижалась (рис. 4).

Известно, что интенсивность чувствительности замедленного типа на химические соединения зависит от индуцированной активности различных субпопуляций Т-лимфоцитов. Поэтому вполне допустимым представляется заключение о том, что комбинация нейрозима и полиена оказывает выраженное влияние на Т-клетки.

При определении поглотительной активности макрофагов (при введении животным нейрозима и его комбинации с полисном) было установлено, что нейрозим более существенно усиливал фагоцитарную реакцию макрофагов, по сравнению с действием его комбинации с полиеном (табл. 2).

6,0 5,0 4,0 3,0 2,0 1,0 -0,0

5с£_

Ж. 4,0*

5,0 -О—

',0,8 ✓

5,0

-О

3,5

0,4

1 час

24 часа 48 часов

1 час

24 часа

48 часов

—о—-Контроль —*— Нейрозим - - - ж- • ■ Нейрозим + полиен

различия между опытом и контролем (ПАФ) достоверны, р < 0,001, то же самое между опытными группами

Рис. 4. Влияние нейрозима и его комбинации с полиеном на гиперчувствительность замедленного типа у морских свинок (индекс реакции ГЗТ: а - в баллах; б - в мм).

Таблица 2

Поглотительная активность клеток перитонеального экссудата мышей, получивших нейрозим и его комбинацию с полиеном

Группы животных Поглощение клетками нейтрального красного (оптическая плотность при 570 нм)

200 тысяч клеток на пробу 600 тысяч клеток на пробу

Контроль (0,9% ЫаС1) 0,1257+0,0001 0,2602+0,0005

Нейрозим 250 мг/кг 0,3438±0,0002* 0,6183±0,001*

Нейрозим 250 мг/кг + полиен 1 мл/кг 0,2015±0,0004*" 0,3998±0,002*х

Примечание: * - р<0,001 - достоверность отличий по сравнению с контролем (физиологический раствор); х - р<0,001 - достоверность отличий между опытными группами.

При изучении биоцидной активности макрофагов было установлено, что нейрозим в большей степени усиливал продукцию супероксид-аниона по сравнению с его комбинацией с полиеном. Вместе с тем, нейрозим оказывал выраженное потенцирующее влияние на активность продигиозана, о чем свидетельствовало усиление реакции стимулированных клеток, по сравнению с контролем и применением его комбинации с полиеном (табл. 3).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что изучаемые вещества усиливали поглотительную и биоцидную активность макрофагов. Вместе с тем, очевидно, что нейрозим оказывал более выраженный эффект на усиление неспецифической резистентности.

Базалыюе и стимулированное продигиозаном восстановление нитросинего тетразолия клетками перитонеального экссудата мышей, получавших нейрозим и его комбинацию с полиеном

Группы животных Продукция супероксид-аниона (оптическая плотность продукта реакция при 620 нм)

Базальная Стимулированная

Контроль (0,9% N301) 0,074±0,003 0,0846±0,005

Нейрозим 250 мг/кг 0,095±0,005* 0,105±0,003*

Нейрозим 250 мг/кг + полиен 1 мл/кг 0,093±0,001* 0,098±0,001*

Примечание:

* - р<0,01 - достоверность отличий между опытными группами и контролем.

Известно, что фармакологические препараты как в норме, так и в условиях патологии инициируют определенный ритм стимуляции и супрессии - Т- и В-лимфоцитов (1уапоузка N.. 1997; \VortisH.H., 1995). Поэтому представляется оправданным подход (Нежинская Г.И., 1999), при котором исследование пролонгированного действия препаратов базируется на оценке функциональной активности Т- и В-клеток при первичном иммунном ответе и в фазе пролонгации.

Результаты исследования числа АОК и РОК показали, что максимальное увеличение активности В-клеток проявлялось в индуктивный период иммунного ответа и увеличение это было наиболее существенно при применении комбинации нейрозима и полнена, тогда как активность Т-клеток не изменялась и не отличалась от контроля. В продуктивную фазу иммунного ответа число АОК снижалось, а число РОК повышалось лишь в группе животных, получавших комбинацию веществ (табл. 4).

Таблица 4

Влияние нейрозима и его комбинации с полиеном на число АОК и РОК в динамике иммунного ответа

Сроки исследования

Вещества 5 сутки 14 сутки

число АОК число РОК число АОК число РОК

(10"6 клеток) (%) (10"6 клеток) (%)

Контроль (иммунизация ЭБ) 400±60 31±4 133±22 23±3

Нейрозим 880±55* 28±4 322±47*х 30±6

Нейрозим + полиен 1010±80* 23±5 255±26*х 37±5*х

Примечание: * - р<0,05- достоверность отличий по сравнению с контролем; х - р<0,05 - тоже самое между опытными группами.

Таким образом, учитывая, что вещества не оказывают супресси-рующеш действия на активность Т-клеток, можно предположить, что их влияние обусловлено инициацией Т-зависимой стимуляции В-клеток с максимумом активности в индуктивный период иммунного ответа.

Оценка стресспротекторных свойств нейрозима и его комбинации с полиеном

Каждый фактор среды, действующий на организм, в силу особенностей своей природы вызывает ответную специфическую реакцию, адекватную качеству и силе раздражения. Однако, в любой такой реакции, как остающейся в физиологических пределах, так и патологической, обязательно присутствует неспецифический компонент, характеризующийся состоянием напряжения или стресса (Барабой В.А. и соавт., 1992; Губарева Л.И., 2001).

Известно, что голодание и истощающая физическая нагрузка являются чрезмерным стрессорным воздействием на организм. Это позволило нам оценить возможность фармакологической коррекции с помощью нейрозима и его комбинации с полиеном негативных последствий стрессорного воздействия.

Влияние нейрозима, и его комбинации с полиеном, в условиях длительного голодания и неизбегаемого плавания изучено в опытах на 90 крысах-самцах, массой 180-200 г. Эксперименты показали, что комбинация двух чрезвычайных факторов (голод и истощающая физическая нагрузка) приводила к значительной потере массы тела со 193,5+1,7 г до 166,7±5,5 г и гибели 60% животных к 10 дню эксперимента (рис. 5).

100 ^Ж 90 [ 80

2 70

1 60 аэ

1 50 § 40 £

а 30

О

й 20

2 10

о

"О

—■—Обычный рацион + плавание —О— Голод + плавание —*— Голод + плавание + нейрозим —X— Голод+ллавание+комбинация

2-й

м

м

8-й

день определения

Рис. 5. Динамика массы тела животных (%) и гибель животных (%) в условиях голодания и неизбегаемого плавания при внутрижелудочном введении нейрозима и его комбинации с полиеном.

В то же время нейрозим при ежедневном введении оказывал про-тективное действие - способствовал увеличению выживаемости и сохранению физической активности. При введении комбинации ней-розима и полнена выживаемость и физическая выносливость животных возрастали в еще большей степени (табл. 5).

Таблица 5

Продолжительность плавания животных в условиях голодания при внутрижелудочном введении нейрозима и его комбинации с полиеном

Группа День определения / продолжительность плавания (мин)

1-й 2-й 3-й 5-й 8-й 10-й

Обычный рацион + плавание 149,7± 0,46 143,6± 0,82 140,9+ 0,57 140,7± 0,83 143,7± 1,10 146,4+ 0,96

Голод + плавание 148,4+ 0,60 140,1+ 3,13 131,6± 0,59 46,3+ 1,23 а 10,3+ 0,93 а (погибло 4) 4,3+ 0,47а (погибло 6)

Голод + плавание + нейрозим 149,9+ 2,17 141,3+ 3,68 135,4± 0,19 64,5+ 0,52 аб 32,0± 1,16 аб (погибло 2) 25,1± 1,36 аб (погибло 4)

Голод + плавание + комбинация (нейрозим + полиен) 147,4± 0,58 140,6+ 0,36 135,5+ 1,59 66,3± 0,51 а6* 35,7± 0,84 аб* (погибло 1) 29,4+ 1,32 аб* (погибло 2)

Примечание: ^-достоверно при р<0,05 по отношению к 1-й группе;

- достоверно при р<0,05 по отношению ко 2-й группе; * - достоверно при р<0,05, по отношению 4-й группы к 3-й группе.

Общепризнано, что стрессорные воздействия сопровождаются изменением функциональной активности различных систем организма, а истощение приспособительных механизмов ведет к структурным нарушениям. Важное место в этих процессах принадлежит иммунной системе, изменения в которой возникают уже на ранних стадиях адаптационных реакций при экстремальных воздействиях.

В нашем исследовании мы изучали влияние нейрозима и его комбинации с полиеном на состояние иммунной системы у животных при голодании и истощающей физической нагрузке (по содержанию Т- и В-лимфоцитов; титру комплемента, концентрации ЦИК и индексу селезенки). Установлено, что голодание и истощающая физическая нагрузка приводили к снижению титра комплемента (на 45%), уровня ЦИК (на 62%), индекса селезенки (на 37%).

Применение нейрозима и в большей степени его комбинации с полиеном приводило к нормализации титра комплемента, увеличению ЦИК, полному восстановлению индекса селезенки к 10-му дню исследования (рис. 6).

50 40 30 20 -10 -0

0,08 0,06 0,04

Содержание Т-лимфоцитов в селезенке

43,0

38,4 £

40,4

ЦИК (ед опт плотности) 0,062

0,047

0,024

==

| | Интактные

Ку1 Контроль (голод + плавание)

Титр комплемента (СН 100 Ед)

150,0*

89,2

Индекс селезенки

5,0

157,4

5,5

п

Голод + плавание + нейрозим

Голод +плавание + комбинация (нейрозим + полиен)

Примечание'. * - достоверно при р<0,05 по отношению к ннтактным животным.

Рис. 6. Влияние нейрозима и его комбинации с полиеном на показатели первичного иммунного ответа при голодании и истощающей физической нагрузке.

В настоящее время накоплено большое количество данных, свидетельствующих о развитии окислительного стресса при различных повреждающих воздействиях. Влияние нейрозима и его комбинации с полиеном на интенсивность ПОЛ и активность АОС изучали при во-доиммерсионном (холодовом) стрессе в 2-х сериях опытов. Нейрозим или его комбинацию с полиеном вводили в желудок с профилактикой (в течение 7 дней до начала стрессорного воздействия) и лечебной (в течение 7 дней после окончания действия стрессора) целью.

Результаты показали, что сразу после воздействия водоиммерси-онного стресса в крови и ткани печени увеличивалось содержание МДА (на 83%; 143%) а активность каталазы и СОД снижались (на 50% / 112%; 45% /103%) по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе животных.

Введение нейрозима (50 и 250 мг/кг) с целью профилактики не оказывало какого-либо влияния на интенсивность ПОЛ в крови и печени, однако несколько увеличивало активность каталазы и СОД.

Введение нейрозима с лечебной целью способствовало нормализации содержания МДА в печени, а активность каталазы и СОД восстанавливались до нормы (табл. 6).

Оценка влияния нейрозима при стрессорном воздействии на крыс

Печень Кровь

Группы животных МДА, нмоль/г Катал аза, мгН202/мг белка мин сод, А/мг белка мин МДА, нмоль/мл Катал аза, мгНзОг/мкл мин СОД, А/мкл мин

Контроль 16,9±1,39 0,481±0,02 2,9±0,21 3,5+0,84 0,179±0,03 0,35+0,03

Плацебо + стресс 31,0±0,82* 0,240+0,06* 1,6+1,10* 8,5+0,59* 0,379+0,05* 0,71+0,15*

Нейрозим 50 + стресс 32,5±3,85* 0,239+0,01* 1,4±0,09* 8,0±0,35* 0,356±0,02* 0,73±0,07*

Нейрозим 250 + стресс 32,8±2,08* 0,230±0,1* 1,3±0,13* 8,9±0,43* 0,384+0,04* 0,73±0,04*

Стресс + плацебо 20,7±0,73 0,417± 0,05 6,2+0,38* 4,1±0,23 0,192+0,06 0,47±0,03

Стресс + нейрозим 50 19,2+1,26 0,504+0,03** 5,6+0,87* 4,0+0,33 0,191+0,01 0,46+0,03

Стресс + нейрозим 250 19,1 ±0,92 0,445± 0,03 5,1+0,30** 4,1+0,48 0,197+0,01 0,45+0,03

Примечание: р<0,05: * - по сравнению с контролем; ** - по сравнению с плацебо.

Таким образом, результаты исследования показали, что нейрозим в изученных дозах не предупреждал активацию ПОЛ и угнетение системы антиоксидантной защиты в печени крыс, подвергнутых во-доиммерсионному стрессу, оказывал заметное лечебное действие (в дозе 250 мг/кг) при стрессе, поддерживая содержание МДА в печени в пределах нормы при сохраненной активности ферментов антиоксидантной системы.

Результаты дальнейших исследования показали, что при профилактическом введении за 7 дней до стрессорного воздействия комбинация нейрозима и полнена оказывала выраженный профилактический эффект: концентрация ДК в крови была ниже на 11,8% по сравнению с контрольной группой животных, а содержание ГПЛ и МДА в крови сохранялось в нормальных пределах (табл. 7).

Полученные нами данные свидетельствуют о значительном профилактическом и лечебном действии комбинации нейрозима и полиена на процессы ПОЛ при стрессорном воздействии в ткани печени. Если в крови мы наблюдали значительные изменения показателей ПОЛ, сопоставимые с контрольной группой животных, то в ткани печени они были близки к показателям интактных животных (табл. 7).

Влияние комбинации нейрозима и полнена на интенсивность перекисного окисления липидов в крови и печени животных при водоиммерсионном стрессе

Группы животных Кровь Печень

ДК нмоль/мл ГПЛ нмоль/мл МДА нмоль/мл ДК нмоль/г тк ГПЛ нмоль/г тк МДА нмоль/г тк

Интактная 32,38±1,45 3,18±0,27 0,83±0,09 188,28+5,6 17,14±0,83 3,00±0,16

Контрольная (стресс + 0,9% N30) 40,78+ 1,30* 6,04± 0,74* 1,22± 0,06* 222,56± 4,16* 43,96± 1,08 * 6,43± 0,33 *

«Профилактическая» (комбинация веществ 7 дней + стресс) 35,99+ 1,04° 3,25± 0,23° 0,99+ 0,04° 194,24+ 3,70° 21,02+ 0,45° 3,64± 0,31°

«Лечебная» (стресс + комбинация веществ 7 дней) 40,27± 0,80° 3,47+ 0,22° 1,10± 0,08° 199,95± 6,44° 20,72± 0,99° 3,23+ 0,24°

Примечание: * — р<0,05 по отношению к интактным животным;

° - р<0,05 по отношению к контрольной группе.

Введение нейрозима в комбинации с полиеном с профилактической и лечебной целью способствовало нормализации активности ка-талазы в крови; при этом активность СОД значительно увеличивалась как в эритроцитах (на 33,6% - при профилактическом и 44,2% - при лечебном введении комбинации средств), так и в ткани печени (211,2% при профилактическом и 252,2% - при лечебном введении нейрозима и полнена) (табл. 8) .

Полученные данные показали, что введение комбинации нейрозима и полиена, замедляло процессы пероксидации в крови и гепато-цитах и значительно увеличивало активность ферментов антиокси-дантной системы в эритроцитах и ткани печени.

Нами были выявлены также макро- и микроскопические изменения в органах, развивающихся при водоиммерсионном стрессе и дана оценка действия комбинации нейрозима и полиена при введении с профилактической и лечебной целью.

В контрольной группе животных, подвергшихся водоиммерсион-ному стрессу, постоянными и выраженными были морфологические проявления нарушения микроциркуляции с органным и внутриорган-ным перераспределением крови. Они характеризовались резким полнокровием в сосудах микроциркуляторного русла, доходящем до стаза, формированием сладж и ДВС синдромов, кровоизлияниями.

Влияние комбинации нейрозима и полиена на активность антиоксидантной системы крови и печени животных при водоимммерсионном стрессе

Группы Кровь Печень

Катал аза мкмоль/мл СОД А/мл в мин а л к и 5 н? я о X ; 2 2 2 я © я в.4 5 и < 2 Гл-6-ДГ нмоль/мл Каталаза мкмоль/г тк СОД А/гтк в МИН ГР нмоль НАДФ.Н2 на г тк в мин Гл-6-ДГ нмоль/г тк

Интакгная 33,33+ 0,97 68,46+ 0,54 7,61+ 0,18 12,17± 0,66 91,17+ 1,28 12,93+ 0,73 9,52± 0,31 36,33± 0,54

Контрольная (стресс + 0,9% №С1) 21,50+ 0,97* 85,46+ 0,51 * 15,71± 0,17* 12,83± 0,77* 30,00± 0,80* 15,59+ 0,78* 12,65+ 0,43* 66,83+ 0,91 *

«Профилактическая» (комбинация веществ + стресс) 29,67± 1,38° 91,47+ 0,24° 16,63± 0,16° 14,00+ 1,02° 56,33+ 0,88° 40,24± 2,05° 23,25+ 1,70° 44,33+ 1,08°

«Лечебная» (стресс + комбинация веществ) 31,83+ 1,64° 98,75+ 0,42° 17,25± 0,03° 11,00+ 0,63° 49,50± 1,16° 45,54+ 1,08° 22,38± 1,63° 55,33± 1,57°

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным;

° - р<0,05 по отношению к контрольной группе.

Наиболее выражены проявления нарушения кровообращения были в легких, печени, надпочечниках. Особенно значительны повреждения были в легких, где обширные кровоизлияния сочетались с ателектазом и эмфиземой респираторных отделов. Морфологические проявления стрессорного воздействия в желудке, яичке были постоянны и значительны. В желудке у всех животных обнаружены множественные эрозии с некрозом поверхностных отделов слизистой и кровоизлияниями в зоне эрозий без клеточной реакции. В яичке всех животных были постоянны распространенные морфологические проявления нарушения сперматогенеза и спермиогенеза: нарушалась фазо-вость процесса, отсутствовали ассоциации клеток, свойственные пролиферации, росту, созреванию, формированию; преобладали канальцы с отсутствием спермий и резким уменьшением числа клеток на всех этапах сперматогенеза. В надпочечнике помимо указанных нарушений микроциркуляции, имелась умеренно выраженная гиперплазия клеток мозгового вещества. В тимусе - снижение толщины коркового слоя и делимфатизация мозгового слоя.

Профилактическое введение комбинации полиена и нейрозима не оказывало выраженного защитного действия, повреждения не отличались от контроля.

Лечебное введение комбинации веществ в течение 7 дней после стрессорного воздействия оказывало выраженное положительное действие на процессы восстановления в организме, которые характеризовались нормализацией кровообращения, восстановлением цито-архитектоники органов, гиперплазией железистых тканей.

В ходе нашего исследования изучалось влияние не только острого, «сверхсильного» стрессорного воздействия, но и длительное патогенное воздействие (электрокожное раздражение) и возможности коррекции негативных последствий хронического стресса с помощью нейрозима и его комбинации с полиеном.

Результаты эксперимента показали, что у животных при длительном (90 дней) электрокожном раздражении с первых дней эксперимента изменится липидный обмен (увеличивается ХС, ЛПОН и ЛПНП в крови), интенсифицируются процессы ПОЛ в крови и миокардиоцитах и снижается активность ферментов АОС в крови и ткани сердца

Введение нейрозима не влияло на липидный обмен во все сроки исследования, в то время как введение комбинации веществ оказывало выраженное антиатерогенное действие. Нормализовалась концентрация общих липидов; общего холестерина; ЛПОНП, ЛПНП, при достоверном увеличении процентного содержания ЛПВП (табл. 9).

Таблица 9

Влияние нейрозима в комбинации с полиеном на динамику липидного обмена при длительном электрокожном раздражении

Группы животных Общие липиды г/л о-хс ммоль/л а-ХС ммоль/л ИА Сум ЛПНП и лпонп% ЛПВП % Тригли-цериды ммоль/л О-ФЛ ммоль/л ФЛ/ХС

Интактные 2,89± 0,023 3,56± 0,032 2,01± 0,008 0,210± 0,130 16,47± 0,098 36,38+ 0,072 2,23± 0,026 2,88+ 0,026 0,68± 0,132

Контроль 10 дней 4,72± 0,059* 5,16+ 0,047* 1,94± 0,019 0,306± 0,10* 23,54± 0,136* 36,55+ 0,144 2,69± 0,056* 0,75± 0,033 0,15± 0,006*

Комбинация 10 дней 3,27± 0,045*" 4,24± 0,023*" 2,79+ 0,014" 0,146± 0,05*" 22,38± 1,148*" 37,42+ 0,115*" 2,18± 0,046*" 1,95± 0,026*" 0,46± 0,008*"

Контроль 50 дней 7,73+ 0,036* 6,35+ 0,033* 2,73± 0,018* 0,219+ 0,10 40,52+ 0,185* 33,33± 0,182* 2,94± 0,033* 0,63+ 0,028* 0,10+ 0,05*

Комбинация 50 дней 2,83± 0,062" 4,70± 0,054*" 2,98± 0,012*" 0,214± 0,10 22,16± 0,028*" 45,25± 0,071*" 2,63± 0,081*" 1,80+ 0,082*" 0,39± 0,017*"

Контроль 90 дней 6,72+ 0,089* 6,99± 0,046* 2,47± 0,031* 0,310+ 0,10* 36,54± 0,160* 37,37± 0,153* 3,55± 0,052* 0,64+ 0,035* 0,09± 0,005*

Комбинация 90 дней 2,24+ 0,049*" 4,16+ 0,029*" 2,93+ 0,036* * 0,269± 0,10*" 25,31± 0,180*" 49,14+ 0,617*" 2,45± 0,040*" 1,97± 0,051*" 0,47+ 0,013*"

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактной группе;

х - р<0,05 по отношению к контрольной группе в соответствующий срок исследования.

Следует отметить, что изменения индекса атерогенности были не всегда не достоверны; однако наблюдалась стойкая тенденция к сохранению (на уровне показателей интактных животных) соотношения общих фосфолипидов и общего холестерина у крыс, получавших нейрозим в комбинации с полиеном в течение 90-дневнош эксперимента

В ходе исследования было установлено, что нейрозим и особенно его комбинация с полиеном оказывали защитный эффект на организм животных при длительном электрокожном раздражении. Так, введение веществ в течение всего периода стрессорного воздействия приводило к снижению концентрации МДА и ДК в крови и сердечной мышце, при этом активность СОД и ГР в эритроцитах и миокардио-цитах значительно возрастала (табл. 10).

Таблица 10

Влияние нейрозима в комбинации с полиеном на интенсивность ПОЛ и активность ДОС в крови и миокардиоцитах крыс при длительном электрокожном раздражении

Группы Интенсивность ПОЛ Активность АОС

ДК нмоль/мл (Г) МДА нмоль/мл (г) СОДу.е. на мл (г) в мин ГР нмоль НАДФ»Н2 на мл (г) в мин

кровь сердце кровь сердце кровь сердце кровь сердце

Интактные 46,37+ 0,48 3,34± 0,07 1,04+ 0,03 3,86+ 0,03 69,07+ 0,35 15,67+ 0,11 7,36+ 0,12 10,68+ 0,15

10 дней Контроль 62,36+ 0,76* 4,08± 0,15* 1,50+ 0,04* 16,22± 0,06* 75,41± 0,28* 25,36+ 0,49* 11,23± 0,23* 49,65± 0,15*

Комбинация 49,90± 0,79* х 4,00+ 0,01*" 1,3 4± 0,03* х 11,08± 0,40* х 81,91+ 0,18* х 37,90± 1,40* х 17,71+ 0,11*х 53,43+ 0,57* х

50 дней Контроль 64,40± 0,80* 6,16+ 0,02* 2,95± 0,06* 26,62+ 0,39* 87,63+ 0,34* 33,95+ 0,70* 22,23+ 0,57* 9,99± 0,39*

Комбинация 48,07+ 1,15*х 4,35± 0,10*х 1,58+ 0,07* х 11,54+ 0,15* х 95,36± 1,08* х 60,21+ 0,51*х 35,59± 1,31*х 19,68+ 0,34* х

90 дней Контроль 52,16+ 0,72* 4,47± 0,09* 2,07± 0,04* 15,45+ 0,18* 42,22± 0,20* 31,67± 0,19* 20,00± 0,34* 17,20+ 0,15*

Комбинация 45,97+ 0,82 х 3,44± 0,05* х 1,38± 0,04* х 4,05+ 0,03* х 85,26± 0,13*х 56,78+ 0,17* х 31,36± 0,29* х 21,05+ 0,22* х

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным;

* - р<0,05 по отношению к контрольной группе в соответствующий срок исследования.

Интенсификация процессов ПОЛ, снижение активности АОС в крови и сердечной мышце, проатерогенные изменения липидного обмена при длительном электрокожном раздражении сопровождались

морфологическими изменениями коронарных сосудов: наблюдалось формирование обширных зон сегментарной и тотальной ишемии с многочисленными некрозами и выраженной клеточной реакцией. Применение нейрозима в комбинации с полиеном оказывало выраженный защитный эффект и у 60% животных морфологически значимые повреждения отсутствовали.

Оценка гепатопротекторных свойств полнена, нейрозима и их комбинации

В настоящее время остается высокой потребность в гепатопротекторных средствах, повышающих резистентность печени к действию химических агентов и нормализующих ее метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции. Большое значение в проявлении ге-патотоксического эффекта ксенобиотиков имеет усиление перекисного окисления липидов в мембранах гепатоцитов (Ungemach E.R., 1987; Yones М., Siegers С.Р., 1984), где, в основном, и локализованы процессы метаболической биотрансформации чужеродных соединений.

В нашем исследовании защитное действие веществ мы изучали на модели отравления четыреххлористым углеродом (CCLt). CCI4 является специфическим гепатотропным ядом, вызывающим развитие острого и хронического гепатитов (Скакун Р.П., Шманько В.В., 1986; Арча-ков А.И., Карузина И.И., 1988; Шукурупий В.А., Гаврилин В.И., 1983; Fisher-Nielsen A. et al., 1991). При связывании СС14 с цитохромом Р450 образуются радикалы СС13, которые являются пусковым звеном в механизме повреждающего действия этого яда (Владимиров Ю.А., Арча-ков А.И., 1972; Владимиров Ю.А., 1998; Moody D.A. et al., 1992) Сво-боднорадикальные продукты метаболизма CCLt стимулируют процессы перекисного окисления липидов, что в свою очередь, приводит к повреждению биологических мембран. Под влиянием четыреххлористого углерода в печеночной паренхиме резко уменьшается содержание гликогена, РНК, нарушается пигментообразовательная функция, углеводный и жировой обмены (Гайворонская В.В., 1992; Саратиков A.C. и соавт., 1996). Тяжелые нарушения возникают также со стороны желчеобразова-тельной, антитоксической и экскреторной функций печени (Азонов Д.А., 1995). СС14 введенный животным в малых дозах, вызывает значительные гистологические изменения, нарушения метаболических процессов, развитие жировой и белковой дистрофии, появление некроза в клетках печени (Стречень С.Б., Стресюн В.Н., 1972).

В ходе экспериментов было установлено, что введение комбинации полнена и нейрозима способствовало увеличению выживаемости

животных при отравлении СС14 в большей степени по сравнению с нейрозимом и полиеном при их применении в отдельности (рис. 7).

125 п

1 2 3 4 5 6

1 - Интактные

2 - ССи 2 мл/кг через день в течение месяца

3 - ССЦ 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг через день в течение месяца

4 - ССЦ 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца

5 - ССЦ 2 мл/кг по схеме + полиен и нейрозим ежедневно в течение месяца

6 - ССЦ 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца

Рис. 7. Выживаемость крыс с подострым поражением печени ССЦ, леченных полиеном, нейрозимом, их комбинацией и розанолом в течение месяца (%).

Применение комбинации полиена и нейрозима способствовало восстановлению антитоксической и экскреторной функции печени в большей степени, чем веществ в отдельности, что характеризовалось сокращением продолжительности гексеналового сна (на 78,1% по сравнению с контролем) и нормализацией секреции бромсульфалеина (табл. 11).

Таблица 11

Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на продолжительность гексеналового сна и бромсульфалиеновую пробу у крыс после введения ССЦ

в течение месяца

Серии опытов Гексеналовый сон (мин) Бромсульфалиеновая проба

Интактные 15,8±0,2 8,17±0,27

ССЦ 2 мл/кг через день в течение месяца 83,5±1,1* 23,44±0,25*

СС14 2 мл/кг через день в течение месяца + полиен 1,0 мл/кг 27,2±1,3*а 13,28±0,31*а

ССЦ 2 мл/кг через день в течение месяца + нейрозим 250 мг/кг 32±1,5*а 15,23±0,23*а

ССЦ 2 мл/кг через день в течение месяца + комбинация полиена и нейрозима 18,32±0,4*а 11,41±1,07* а

ССЦ 2 мл/кг через день в течение месяца + розанол 30 мг/кг 45,2±0,1* а 17,12±0,53*а

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным;

а - р<0,05 по отношению к контрольной группе.

Применение комбинации полиена и нейрозима как в профилактических, так и в лечебных целях оказывало гепатопротекторное действие, что сказалось на уменьшении эффекта цитолиза и снижении активности ферментов в сыворотке крови. Следует отметить, что активность АсАТ снижалась в 2,7 раза, АлАТ - в 3,9 раза по сравнению с контролем, а активность ЩФ и ГГТ при применении комбинации полиена и нейрозима соответствовала показателям интактных животных (табл. 12).

Таблица 12

Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на активность ферментов

в сыворотке крови у крыс с подострым токсическим поражением печени

Серия опытов и дозы в мг/кг массы АсАТ, мкмоль/л АлАТ, мкмоль/л ЩФ, нмоль/сл ГГТ, нмоль/сл

Интактные 0,40±0,01 0,36±0,01 547,48±0,39 578,48±1,53

СС14 2 мл/кг через день в течение месяца 2,32±0,04* 2,13±0,03* 1840,48±0,37* 1591,12±4,40*

CCI4 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца 1,18± 0,02* а 6 0,98± 0,02* а 933,87± 1,14* аб 483,17± 0,05* а 6

СС14 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг ежедневно в течение месяца 1,27± 0,02* а 6 0,97± 0,02* а 940,15± 0,09* а 6 590,41± 0,16* а6

СС14 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен + нейрозим 21 день (лечебная серия) 0,86± 0,01* а6 0,54± 0,01* а 6 566,78± 0,69* а 6 581,0± 1,17* аб

СС14 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца 1,33± 0,02* а 1,13± 0,01* а 1008,17± 0,31* а 516,17± 0,40* а

Примечание'. * — р<0,05 по отношению к интактным животным;

- р<0,05 по отношению к контрольной (2-й) группе; б- р<0,05 по отношению к животным, получавшим розанол.

В эксперименте было установлено, что комбинация полиена и нейрозима еще в большей степени, чем указанные вещества в отдельности способствует восстановлению белковообразовательной функции печени. Так, при введении комбинации веществ происходило увеличение концентрации общего белка в сыворотке крови до 75,5±0,06 г/л при 54,40±0,24 г/л в контроле; нормализовалось соотношение между альбуминами и глобулинами и альбуминово-глобулиновый коэффициент соответствовал таковому у интактных животных (табл. 13).

Влияние полиена, нейрозима, их комбинации и розанола на белковообразовательную функцию печени у крыс с подострим токсическим поражением печени СС14

Серия опытов и дозы Общий белок г/л Альбумины % Глобулины % А/Г

Альфа! Альфа2 Бета Гамма

Интактные 64,9± 1,53 47,8± 0,03 8,70± 0,24 8,2± 0,23 16,3± 0,05 19,1± 0,01 1,01± 0,03

СС14 2 мл/кг через день в течение месяца 54,4± 0,24* 40,4± 0,35* 10,0± 0,03* 11,7± 0,19* 20,3± 0,65* 40,4± 0,35* 0,68± 0,01*

ССЦ 2 мл/кг по схеме + полиен 1 мл/кг ежедневно в течение месяца 72,8± 0,03*аб 48,0± 0,05аб 8,7± 0,04аб 9,0± 0,03*аб 16,0± 0,50а 18,2± 0,01*аб 0,90± 0,02*аб

СС14 2 мл/кг по схеме + нейрозим 250 мг/кг ежедневно в течение месяца 71,9± 0,03 *аб 46,8± 0,08* аб 8,1± 0,01*аб 9,6± 0,01*аб 16,5± 0,03 *аб 18,9± 0,01 *а6 0,90± 0,02* аб

CCI4 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен + нейрозим 21 день (лечебная серия) 75,5± 0,55* аб 49,0± 0,50 аб 8,9± 0,01*аб 10,6± 0,21 *а 16,2± 0,1736 18,4± 0,05* аб 0,96± 0,02 а6

СС14 2 мл/кг по схеме + розанол 30 мг/кг ежедневно в течение месяца 69,3± 0,04*а 43,1± 0,03 *а 9,9± 0,03*а 10,6± 0,03 *а 16,0± 0,01а 20,1± 0,2*а 0,75± 0,02*а

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным;

а - р<0,05 по отношению к контрольной (2-й) группе; б- р<0,05 по отношению к животным, получавшим розанол.

Изучение влияния комбинации полиена и нейрозима на интенсивность ПОЛ и активность АОС в гепатоцитах показало, что при введении вышеуказанной комбинации веществ интенсивность ПОЛ значительно снижается во все сроки исследования (табл. 14).

В то же время полиен в комбинации с нейрозимом в большей степени, чем вещества в отдельности способствовал нормализации активности ферментов антиоксидантной системы, особенно к 21 дню исследования. Эффект комбинации веществ был сравним с эффектом токоферола в дозе 100 мг/кг (табл. 14).

Вызываемое СС14 поражение печени сопровождается резкими отклонениями во всех звеньях гуморального иммунного ответа. Изменяются содержание и пути дифференцировки полипотентных стволовых клеток в костном мозге, содержание Т- и В-лимфоцитов в иммуноком-петентных органах, функциональная активность Т-лимфоцитов крови, количество АОК селезенки. Характер нарушений в значительной степе-

ни зависит от дозы и кратности введения тетрахлометана, связан со степенью повреждения печени и развитием регенераторных процессов в ней (Хакимов 3.3., Рахманов А.Х., 1992). Известно, что нарушение де-токсикационной функции, вызванное повреждением печени CCU, способствует накоплению иммунных комплексов (Kinsellf I.E. et al., 1990).

Таблица 14

Влияние комбинации полнена и нейрозима на состояние ПОЛ и АОС гепатоцитов крыс с подострым поражением печени

Показатели ПОЛ, имоль/г [ Показатели АОС

Серия опытов и дозы ДК ГПЛ МДА Катал аза, мкмоль-г-'с1 сод, УЕ на г тк/мин

Интактные 195,63± 3,21 42,93± 0,40 6,40± 0,15 94,57± 0,67 24,74± 0,14

СС14 2 мл/кг через день в течение месяца 283,2± 0,54* 95,14± 0,46* 12,53± 0,17* 31,52± 0,20* 9,50± 0,20*

СС14 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 7 дней (лечебная серия) 220,00± 1,83 *аб 80,55± 0,33* 8 6 6,85± 0,10 *аб 53,09± 0,54 *а6 17,04± 0,75 *аб

CCI4 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 14 дней (лечебная серия) 231,58± 0,76 *аб 51,92± 0,21 *а6 5,30± 0,05 *аб 61,65± 0,22 *аб 19,05± 0,06 *аб

CCI4 2 мл/кг по схеме + комбинация полиен 1 мл/кг + нейрозим 250 мг/кг 21 день (лечебная серия) 196,93± 0,30 *аб 50,63± 0,20 *а6 5,46± 0,23 *а6 84,95± 0,48 *а6 20,83± 0,38 *аб

СС14 2 мл/кг по схеме + токоферол 100 мг/кг 257,09± 0,34 * а 34,09± 0,66 * а 7,18± 0,25 * а 87,23± 0,97 * а 19,98± 0,29 * 3

Примечание: * - р<0,05 по отношению к интактным животным;

а- р<0,05 по отношению к контрольной (2-й) группе; - р<0,05 по отношению к животным, получавшим токоферол.

О влиянии полиена в комбинации с нейрозимом на активность иммунной системы при хроническом подостром токсическом гепатите судили по уровню Т- и В-лимфоцитов, титру комплемента, концентрации циркулирующих иммунных комплексов. Кроме того, вычисляли индекс селезенки (отношение массы селезенки к массе тела х 1000). Так же проводили определение числа антителообразующих (АОК) и розеткообразующих (РОК) клеток селезенки и фагоцитарную и био-цидную активность макрофагов перитонеального экссудата.

В ходе исследования было установлено, что при токсическом гепатите, вызванном ССЦ, количество В-лимфоцитов в крови снижалось в 1,8 раза (с 46,0±0,5 до 24,7±0,3%), при этом число АОК в селе-

зенке увеличивалось в 1,3 раза по сравнению с интактными животными. Уровень ЦИК увеличивался на 74,2%, биоцидная и поглотительная активность макрофагов снижалась на 71,6% и 93,4% соответственно (рис. 8).

1200 1000 эоо 600 400 200 о

Число АОК (*10-6)

Т-лимф(%)

В-лимф (%)

16

14

12 10 8 6 4 2 О

]

□ ин такгные

О СС14 2 мг/кг через день в течение месяца

□ ОСИ 2 мг/кг по схеме + комбинация (7 дн.) ЕЗ СС(4 2 мг/кг ло схеме + комбинация (14 дн.) ■ СС14 2 мг/кг по схеме + комбинация (21 д.)

14,2-а

11,8

Ю.б'Э 9,5*

Ш

" ш уш »♦Ж«

►♦Ж"

л***? втей

,6*а

Число РОК (%)

0,06

0,1

0,15

0,0823

0,092'а 0.091'а

* - достоверно по отношению к интактным животным при р<0,05; а - достоверно по отношению к конэрольной группе (№2) при р<0,05.

Рис. 8. Влияние комбинодии полнена и ненрошча на состояние иммунной системы при полос гром токсическом поражении печени.

Ежедневное применение комбинации веществ в течение месяца приводило к нормализации числа В-лимфоцитов. снижению ЦИК практически до показателей интактных животных. В то же время фаго-

цитарная (поглотительная) активность макрофагов увеличилась во все сроки исследования, достигала значения интактных животных и составила 0,1247±0,0002 (на 200 тыс. клеток) к 21 дню исследования (рис. 8). Следует отметить, что применение комбинации полнена и нейрозима вызывало достоверное увеличение АОК и РОК в селезенке.

Проведенное морфологическое исследование ткани печени при токсическом повреждении СС14 и профилактическим и лечебным введением полиена, нейрозима и их комбинации показало вариабельность течения патологического процесса и вместе с тем выявило основные тенденции их развития.

Так, в контрольной группе животных имелась картина острого, агрессивного токсического гепатита с субтотальным поражением печени. Повреждение паренхимы преобладало над стромальными и компенсаторно-приспособительными процессами.

При профилактическом введении веществ и их комбинации наблюдалось отчетливое снижение интенсивности и распространенности повреждения паренхимы, нерегулярность некробиотических и, особенно, некротических изменений, снижение клеточной инфильтрации в стро-ме и паренхиме. У животных этой группы обнаружены наименее выраженные проявления токсического повреждения печени.

При оценке лечебного эффекта веществ и их комбинации, обнаруживалась отчетливая положительная динамика морфологических процессов уже на 7 сутки опыта. Отмечалось снижение интенсивности и распространенности дистрофических процессов, наличие редких некротических изменений, нарастание компенсаторно-приспособительных морфологических проявлений, которые коррелировали со снижением инфильтрации портальных трактов клетками лимфоплазмоцитарного ряда. К концу эксперимента у большей части животных имелась четкая тенденция к значительному снижению процессов повреждения и нарастанию компенсаторно-приспособительных процессов в паренхиме с восстановлением паренхиматозно-стромальных отношений.

Для проверки нашего предположения о возможном участии веществ и их комбинации в компенсаторных процессах, связанных с восстановлением синтеза белка в гепатоцитах, были проведены эксперименты на модели частичной резекции печени. Результаты исследований показали, что на 7-е сутки после частичной гепатэктомии в группе животных, получавших полиен и нейрозим в комбинации, коэффициент полноты регенерации печени на 19% превосходил таковой у контрольных крыс; препарат сравнения карсил не оказывал эффекта. Кроме того, в исследованиях установлено, что регенерация печени сопровождалась восстановлением ее антитоксической функции. Так,

продолжительность гексеналового сна у животных опытной группы в результате терапии комбинацией веществ составляла 77,8%, тогда как у крыс контрольной группы (без лечения) - 278,5% (рис. 9).

130

Продолжительность гексеналового сна

119,0

110 100,0 100,0 1

90 70 61,8* 60,0* 40,2*# с: X <и £

50 30 22,4 г! 1 О о

10 I —.. ... ^^т _

Коэффициент полноты регенерации {%}

□ гр 1 - интакткые

□ гр.2 - ЧГЭ + физиологический раствор (контроль) О гр. 3 - ЧГЭ + комбинация полнена и нейрозима

■ гр, 4 - ЧГЭ + карсил

* - различия достоверны по отношению к интактной группе р<0,05;

4 - различия достоверны но отношению ко 2 группе животных, получавших после ЧГЭ физиологический раствор. р<0,05.

Рис. 9. Влнинис полнена в комбинации с нейрозимоч на продолжительность гексеналового сна (мин) и коэффициент полноты регенерации (%) при частичной гепапктомни (ЧГЭ).

Полученные данные указывают на способность тестируемых веществ и комбинации полнена и нейрозима стимулировать естественную регенерационную способность гепатоцитов и восстанавливать антитоксическую функцию печени. Карсил на модели частичной ге-патэктомии не оказывал влияния на продолжительность гексеналового сна и регенерацию печени. Обнаруженное нами достоверное усиление процессов регенерации в печени после ЧГЭ при терапии комбинацией веществ, по сравнению с естественной регенерационной способностью печени, по-видимому, связано со способностью комбинации полиена и нейрозима стимулировать синтез белка.

При сравнительной макро- и микроскопической оценке печени разных серий опыта и контроля во всех наблюдениях было отмечено формирование рубца в месте резекции и восстановление паренхимы печени. При гистологическом исследовании наблюдались выраженные различия в различных сериях опытов.

В контрольных группах в зоне рубца имелись очаги некроза печеночной ткани с продуктивным воспалением и формированием гранулем вокруг инородных тел. В регенерате печеночной ткани наблюдалось восстановление гепатоцитов: полное восстановление, восстановление балочного и долькового расположения.

В опытных группах имело место более оптимальное восстановление не только печеночных клеток, но и балочной и дольковой архитектоники. Наблюдалось более отчетливое и распространенное созревание соединительной ткани в рубце и рассасывание некротизиро-ванной печеночной ткани.

Оценка противовоспалительного действия полнена и его комбинации с нейрозимом

В наших исследованиях воспалительный процесс моделировали по стандартным методикам на фоне кратковременного недлительного действия полиена и его комбинации с нейрозимом.

Результаты экспериментов показали, полиен и в особенности его комбинация с нейрозимом оказывают выраженный противовоспалительный эффект и действие веществ нарастает по мере их накопления в организме. Выраженность противовоспалительного эффекта изучаемых веществ была сопоставима с эффектом нестероидных противовоспалительных препаратов (бутадион, индометацин, диклофенак натрия) на всех моделях (рис. 10).

В ходе экспериментов было установлено, что полиен и, в особенности, его комбинация с нейрозимом оказывают выраженное действие на процесс воспаления, как в фазу экссудации, так и пролиферации и их эффект был сопоставим с эффектом индометацина и дикло-фенака натрия и носил дозозависимый характер.

В работе так же исследовали состояние антиоксидантной системы (СОД) и интенсивности перекисного окисления липидов (МДА) при использовании полиена в комбинации с нейрозимом на модели воспаления, вызванного формалином. Так, в результате эксперимента было установлено, что применение полиена в комбинации с нейрозимом в течение 3-х часов до начала опыта привело к снижению концентрации МДА на 24,8 % через 1,5 часа и на 6,5 % через 48 часов по отношению к контрольным животным. Применение комбинации в течение 21 дня до начала эксперимента привело не только к снижению уровня МДА в сыворотке крови, но и повышало активность СОД на 20,4 % через 1,5 часа и 27,6 % через 48 часов (табл. 15).

0,5 часа 1Г5 часа 3 часа 4 часа Серотонин 1% - 0.1

0.5 часа 1,5 часа 3 часа 4 часа Гисгамин 1% - 0.1

0.5 часа 1,5 часа 3 часа Каррагенин 2% - 0.1

4 часа

□ Интактная группа

□ Контрольная группа

□ Полиен + нейрозим (3 часа)

□ Полиен + нейрозим (7 дней)

■ Полиен + нейрозим (14 дней) И Полиен + нейрозим (21 день)

■ И ндометацин

■ Диклофенак Ыа

Рнс. 10. В.щинис пил пени и комбинации с ненрошмом на процесс воспалении, вызванный гнетам н иоч, серою» ином, карраген ином.

Таблица 15

Динамика и (мененнн концентрации активности МДД н СОД в сыворотке кропи крыс мри воспаления, вызванным формалином

1 руппы животных МДА нмоль/мл СОД >.е./мл в мин.

1,5 часа 48 часов 1,5 часа 48 часов

Интактная группа 1.02+0,05 70,01 ±0,02

Контрольная группа (45% формалин) 2,50±0,04 *6 1,69±0.06 * 118,05+0.04 * 124,02±0,02 *

Попнен+нейрозим (3 час) 1,88±0,02 *' 1,58±0,05 * 134,35+0.04* 147.14+0.05

Полиен+нейрозим (21 день) 1,26+0,05 +а6 1,10+0.03® 142,17+0,02 *а6 158,2±0,05 *аВ

Бутадисш 1.97+0,02 *а 1,64±0,02 * 69.02+0.03 а 89,15±0,03 *

Примечание: * - достоверно по отношению к интактным животным мри р<0.05;

а - достоверно по отношению к контрольным животным при р<0,05; - достоверно по отношению к группе сравнения при р<0.05.

Таким образом, полиен и, в особенности, его комбинация с ней-розимом оказывали выраженное противовоспалительное действие, потенцировали действие основных противовоспалительных препаратов; снижали интенсивность ПОЛ и увеличивали активность АОС животных.

Полиен, в особенности в комбинации с нейрозимом, ускоряли регенерацию (в 1,3 раза) травмированного седалищного нерва; влияли на локальную симптоматику течения адъювантного артрита, снижая инднекс реакции воспаления в 0,9 раза.

Защитное действие полиена и его комбинаций с нейрозимом на слизистую оболочку желудка исследовали при:

- воздействии некротизирующего агента 0,6 ЫНС1;

- «хроническом криогенном» воздействии;

- при остром водоиммерсионном стрессе.

Результаты исследования показали, что полиен, нейрозим и особенно их комбинация обладают выраженным противоязвенным действием: снижался индекс изъязвления во всех сериях опытов. Введение веществ предотвращало образование язв, ускоряло процессы эпи-телизации, способствовало усилению процессов репарации во все сроки исследования.

Основу патогенеза многообразных нозологических форм составляют типовые патологические процессы, зачастую протекающие независимо от причины первичного повреждения.

В ходе наших исследований было установлено, что при стрессор-ном воздействии (остром, хроническом); действии флогенных факторов, вызывающих воспаление; токсических агентов, формирующих повреждение печени в организме в целом, в органах и тканях возникают неспецифические однотипные реакции, связанные с нарушением метаболизма:

- активация СРО —» интенсификация ПОЛ;

- ингибирование активности АОС;

- нарушение иммунной системы;

- дефицит энергообеспечения;

- снижение биосинтеза белка;

- увеличение протеолиза;

- нарушения липидного обмена и др. (рис. 11).

Рис. 11. Возможности фармакологической коррекции нарушений метаболизма при различных повреждениях с помощью полнена, нейрозима и их комбинации: Т восстановление процесса; 4- снижение интенсивности процесса

Применение веществ метаболического действия, как показали исследования, приводят к нормализации метаболизма при патологическом воздействии, изменяют реактивность у интактных животных, а значит, могут быть использованы в качестве средств профилактики и лечения негативных последствий стрессорного воздействия, патологии печени, при воспалении, язвенном поражении.

ВЫВОДЫ

1. В эксперименте на интактных животных установлено, что ней-розим и его комбинация с полиеном оказывают стимулирующее действие на функциональное состояние ЦНС (интенсифицируют поведенческую активность животных, обладают антиамнестическим эффектом); иммуномодулирующее действие (достоверно увеличивают титр комплемента, уровень Т-лимфоцитов в селезенке, поглотительную и биоцидную активность макрофагов, стимулируют индуктивный период иммунного ответа).

2. При различных стрессорных повреждениях, воспалении и токсическом повреждении печени выявлены однотипные метаболические сдвиги, которые характеризуются энергетическим дефицитом,

нарушениями белкового, липидного, углеводного обменов, усилением процессов перекисного окисления липидов, снижением активности антиоксидантных систем, нарушениями иммунной системы.

3. Нейрозим и его комбинация с полиеном обладают выраженным защитным эффектом при остром стрессорном воздействии, что проявляется в повышении выживаемости и физической выносливости животных; увеличении активности антиоксидантных систем, снижении интенсивности перекисного окисления липидов в крови и тканях; восстановлении активности иммунной системы.

4. Нейрозим и его комбинация с полиеном обладают антиатероген-ным действием, нормализуя липидный, белковый обмены, снижая морфологические проявления, при длительном стрессорном воздействии.

5. Полиен, нейрозим и их комбинация при профилактическом и лечебном использовании нормализуют антитоксическую, экскреторную, белковосинтетическую, пигментообразующую функции печени, снижают цитолиз при подостром токсическом повреждении печени. Полиен и его комбинация с нейрозимом усиливают естественные процессы регенерации в печени и нормализуют антитоксическую, белковосинтетическую функции после частичной гепатэктомии.

6. На различных моделях воспаления установлено: полиен и его комбинация с нейрозимом обладают противовоспалительным эффектом, тормозят экссудативные процессы, восстанавливают активность антиоксидантной системы; снижают интенсивность процессов перок-сидации, увеличивают активность Т- и В-лимфоцитов, усиливают действие нестероидных противовоспалительных средств.

7. Полиен и его комбинация с нейрозимом стимулируют процессы репарации и регенерации тканей: оказывают выраженное профилактическое и лечебное действие на различных моделях язв желудка, восстанавливают функцию седалищного нерва при травматическом неврите (в эксперименте) в 1,3 раза быстрее, чем у контрольных животных.

8. Полиен, нейрозим и, в большей степени, их комбинация воздействуют на единые механизмы развития повреждений при стрессе, воспалении, токсическом поражении печени и оказывают стрессопро-текторное, противовоспалительное и гепатопротекторное действие.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Комбинация нейрозима и полиена обладает выраженным стрес-сопротекторным действием, что может быть использовано для предотвращения негативных последствий «сверхсильного» и длительного стрессорного воздействия.

2. Комбинация нейрозима и полнена обладает выраженным гепа-топротекторным действием, что может быть использовано для лечения и профилактики токсических поражений печени.

3. Показано, что комбинация нейрозима и полиена усиливает и пролонгирует действие нестероидных противовоспалительных средств, уменьшает их ульцерогенный эффект.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Денисенко Н.П. Изменения симпатико-адреналовой системы центральных моноаминов в динамике хронического эмоционального стресса /Е.Ю. Горнушкина, Н.П. Денисенко, П.С. Хомуло // Модельные системы в медико-биологических исследованиях: Сб. научн. тр. - Л.: ЛСГМИ, 1989.-С. 72-77.

2. Денисенко Н.П. Оценка роли стресс-лимитирующих систем при длительном электроболевом стрессе / Е.Ю. Горнушкина, Н.П. Денисенко // Фармакологическая регуляция стресса: Сб. научн. тр. - Благовещенск: БГМИ, 1990.-С. 11-13.

3. Denisenko N. Psychotropic effects due to substances pereferal activity / N. Denisenko, P. Denisenko // Biological basis of Individual Sensitivity to psychotropic Drugs: The 2nd International Conference: Abstr. - Moscow, 1993.-P. 77.

4. Denisenko N. Pharmacologic Correction of Neuroendocrine System Disturbances in Stress / N. Denisenko, P. Denisenko // First International Congress of Hormones Brain Neuropsychopharmacology: Abst. - Athens, Greece, 1993.-P. 386.

5. Денисенко Н.П. Влияние комплекса незаменимых аминокислот (нейрозим), ненасыщенных жирных кислот (полиен) и мелкодисперсных порошков железа и цинка (МДПМ) на развитие и течение некоторых патологических состояний в эксперименте / Н.П. Денисенко // Химия и технология лекарственных веществ: Материалы 2-ой всероссийской конференции. - СПб, 1994. - С. 98-99.

6. Денисенко Н.П. Влияние нейрозима на некоторые функции мозга / Э.А. Коссовский, Н.П. Денисенко // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы всероссийской конференции - Смоленск, 1994. - С. 37-38.

7. Денисенко Н.П. Влияние омега-кислот на кровоснабжение и метаболизм мозга / Н.П. Денисенко, А.Е. Мелконян, В.А. Тер-Карапетян // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы всероссийской конференции. - Смоленск, 1994. - С. 38-40.

8. Denisenko N. Protective and curative effect of fatty acids on Neuroendocrine system and some target organs / N. Denisenko, P. Denisenko,

A. Melkunuan // The 25th Congress of Psychoneuroendocrinology: Abst. -Seattle, USA, 1994.-P. 156.

9. Denisenko N. Pharmacology Polyene - the compound made of Polyno-saturated fatty acids of omega-3 type / N. Denisenko, P. Denisenko, E. Maly-gina // The First European congress of Pharmacology: Abst. - Milan, Italy, 1995.-P. 230.

10. Denisenko N. Prophylaxis and treatment of stress disorders in neuroendocrine systems by metabolic means / N. Denisenko, P. Denisenko, A. Gor-deladze // The 26th Congress of Psychoneuroendocrinology: Abst. - Munich, Germany, 1995.-P. 12.

11. Денисенко Н.П. Препараты метаболитного действия (нерозим, полиен, дисперфер) — новые средства профилактики и лечения различных заболеваний / Н.П. Денисенко, Э.А. Коссовский // Человек и лекарство: Материалы 2-го Российского Национального конгресса - М., 1995. -С. 144.

12. Денисенко Н.П. Направленное вмешательство в обменные процессы - эффективный метод фармакотерапии / Н.П. Денисенко // Материалы 1-го Всероссийского съезда фармакологов. - Волгоград, 1995. -С. 141-142.

13. Денисенко Н.П. Антиатерогенное действие омега-3- кислот (эй-козопентаеновой и докозагексаеновой) в эксперименте и клинике / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, О.В. Богданов // Липопротеиды и атеросклероз. - СПб, 1995. - С. 23-24 .

14. Денисенко Н.П. Гепатозащитное действие полиена, нейрозима и УДМП / Н.П. Денисенко, Е.И. Малыгина, А.Ф. Сафонова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - М., 1995. -Т. 5, № 3. - С. 96-97.

15. Денисенко Н.П. Эксперементальная терапия поражений слизистой желудка / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Е.И. Малыгина, А.Ф. Сафонова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - М., 1995. - Т. 5, № 3. - С. 98-99.

16. Денисенко Н.П. Возможности фармакологической профилактики повреждений печени / Н.П. Денисенко, ЕЛ. Прогер, Н.П. Кадушкина // Профилактические основы теории и практики семейной медицины: Материалы научно-практической конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 1996. - С. 36-37.

17. Денисенко Н.П. Влияние комбинированного назначения незаменимых аминокислот и незаменимых ненасыщенных жирных кислот на репаративные процессы / Н.П. Денисенко, Н.В. Федорова, П.П. Денисенко и др. // Человек и лекарство: Материалы 3-го Всероссийского национального конгресса. - М., 1996. - С. 107.

18. Денисенко Н.П. Активность перекисного окисления липидов при различных стрессах и возможность ее фармакологической коррекции / Н.П. Денисенко, И.В. Амброзас // Материалы 1-го Российского конгресса по патофизиологии. - М., 1996. - С. 193.

19. Денисенко Н.П. Пищевая добавка «полиен», содержащая незаменимые ненасыщенные кислоты / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Н.Р. Исаева и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - М., 1996. - Т. 6, № 4. - С. 14-16.

20. Денисенко Н.П. Пищевая добавка «нейрозим» на основе комплекса незаменимых аминокислот / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Н.Р. Исаева и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - М., 1996. - Т. 6, № 4. - С. 56-58.

21. Денисенко Н.П. Влияние полиена на некоторые функции печени в норме и при экспериментальном ее повреждении / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Ю.Н. Нуралиев, Д.М. Зубайдова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. - М., 1996. - Т. 6, №4.-С. 171-172.

22. Denisenko N. Influence of combined use of essential aminoacids in lone-term emotional stress / N. Denisenko, P. Denisenko, A. Safonova // The 27* International Meeting of Psychoneuroendocrinology: Abstr. - Yascais, Portugal, 1996.-P. 105.

23. Denisenko N. Influence of preparation produced from co-acids on generative male function / N. Denisenko, P. Denisenko, N. Isaeva // The 28th International Meeting of Psychoneuroendocrinology: Abstr. - San-Francisco, USA, 1997. - Vol. 22. - P. 342.

24. Denisenko N. Prevention of morphofunctional development pathology in newborn rats by to-acids / N. Denisenko, P. Denisenko, N. Isaeva // 28 International Meeting of Psychoneuroendocrinology: Abstr. - San-Francisco, USA, 1997. - Vol. 22. - P. 354.

25. Денисенко Н.П. Комплексное фармакологическое воздействие как эффективный способ профилактики заболеваний и ускорения реабилитации / Н.П. Денисенко, C.B. Викленко, П.П. Денисенко // Актуальные проблемы медицинской приматологии. - Сухуми, 1997. - С. 68-69.

26. Денисенко Н.П. Лечебное и профилактическое применение препаратов незаменимых ненасыщенных жирных кислот / Н.П. Денисенко, Н.Р. Исаева // Клиническая фармакология и терапия. - М., 1997. - № 9. -С. 47-52.

27. Денисенко Н.П. Возможность коррекции измененного липидного обмена с помощью полиена в эксперименте / Н.П. Денисенко, А.Н. Жарков, Е.Л. Прогер // Актуальные вопросы профилактики и лечения наиболее распространенных заболеваний: Материалы научной конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 1997. - С. 23-24.

28. Денисенко Н.П. Препараты незаменимых ненасыщенных жирных кислот как средство метаболитной терапии / Н.П. Денисенко // Человек и лекарство: Материалы IV Российского национального конгресса. -М., 1997.-С. 342.

29. Денисенко Н.П. Препараты незаменимых ненасыщенных жирных кислот - средства широкого терапевтического действия / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Н.Р. Исаева, C.B. Викленко, В.А. Тер-

Карапетян // Aqua Vitae. - M., 1998.-№. l.-C. 34-35.

30. Денисенко Н.П. Препараты незаменимых ненасыщенных жирных кислот и их клиническое применение / Н.П. Денисенко, Н.В. Федорова, П.П. Денисенко, Н.Р. Исаева, А.Ф. Сафонова, Е.И. Малыгина, И.М.Матвеева // Актуальные проблемы клинической фармакологии: Материалы II Украинской научной конференции с международным участием. - Винница, 1998. - С. 34.

31. Денисенко Н.П. Препараты омега-кислот - средства широкого спектра действия для профилактики и лечения / Н.П. Денисенко, Н.В. Федорова, Н.Р. Исаева, П.П. Денисенко, C.B. Викленко // Здоровый мир: Материалы II Российского фестиваля. - СПб, 1998. - С. 43.

32. Денисенко Н.П. Влияние полнена и эпадена на экспериментальную лихорадку и некоторые показатели иммунитета / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, Н.Р. Исаева, А.Ф. Сафонова, A.A. Селиванов // Традиционные методы лечения - основные направления и перспективы развития: Материалы научно-практической конференции. - М., 1998. - С. 53.

33. Денисенко Н.П. Поиск новых гепатозащитных средств / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, А.Ф. Сафонова, Е.И. Малыгина, Н.В. Федорова, C.B. Викленко, Н.Р. Исаева, Э.А. Коссовский // От materia medica к современным медицинским технологиям: Материалы Всероссийской научной конференции. - СПб, 1998. - С. 43.

34. Denisenko N. Antihypoxants, antioxidants and omega-3 unsaturated fatty acids for fetus patology prevention / N. Denisenko, P. Denisenko, S. Viclenko, A. Safonova // 29th International congress of Psychoneuroendo-crinology: Abstr. -Trier, Germany, 1998. - P. 377.

35. Denisenko N. Neurozime influence on certain biochemical brain parameters in rats in case of its ischemia and stress / N. Denisenko, S. Viclenko // 30th International congress of Psychoneuroendocrinology: Abstr. - Orlando, USA, 1999.-P. 659.

36. Денисенко Н.П. Нейрозим - новая биологически активная добавка / Н.П.Денисенко, П.П. Денисенко, C.B. Викленко, Д.И. Островский, А.Ф. Сафонова, В.Д. Руденко, Н.В. Федорова // Парентеральное и энтеральное питание: Материалы III Международного Конгресса. - М., 1999.-С.34.

37. Денисенко Н.П. Влияние нейрозима (биотона) на дегидрогеназ-ную активность мозга при его ишемии / Н.П. Денисенко, C.B. Викленко // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии: Материалы Всероссийской конференции с международным участием НИИ ЭМ РАМН - СПб, 1999. - С. 58-59.

38. Денисенко Н.П. Влияние нейрозима (биотона) и полиена на ВНД крыс / Н.П. Денисенко, C.B. Викленко, Д.И. Островский, В.Д. Руденко // Человек и лекарство: Материалы VI Российского национального конгресса. - М., 1999. - С. 96-97.

39. Денисенко Н.П. Полиен как аниатерогенный препарат / Н.П. Денисенко, В.И. Николаев // Проблемы теории и практики укрепле-

ния общественного и индивидуального здоровья в современных условиях: Материалы научно-практической конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 1999. - С. 305-306.

40. Денисенко Н.П. Снижение выраженности стрессовых реакций и повышение адаптивных возможностей организма фармакологическими средствами / Н.П. Денисенко, С.В. Викленко, П.П. Денисенко // Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины: Материалы конференции, посвященной 110-летию НИИ ЭМ РАМН. - СПб, 2000. - С. 67-68.

41. Денисенко Н.П. Экспериментальное и клиническое изучение препаратов на основе незаменимых полиненасыщенных жирных кислот / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, С.В. Викленко, Н.Р. Исаева // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы IV Международного съезда. - Великий Новгород, 2000. - С. 23-24.

42. Денисенко Н.П. Иммунотропная активность композиций А и Б, получаемых при переработке дрожжей / Н.П. Денисенко, С.В. Викленко, П.П. Денисенко, Г.И. Нежинская, Э.А. Коссовский // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы IV Международного съезда. - Великий Новгород, 2000.-С. 25-26.

43. Денисенко Н.П. К вопросу о фармакологической коррекции измененного липидного обмена с помощью полиена / Н.П. Денисенко, П.П. Денисенко, В.И. Николаев // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы IV Международного съезда. - Великий Новгород, 2000. - С. 52-53.

44. Денисенко Н.П. Полисахариды дрожжей как эффективные санирующие средства / Н.П. Денисенко, С.В. Викленко, П.П. Денисенко, Э.А. Коссовский // Человек и лекарство: Материалы VII Российского национального конгресса. - М., 2000. - С. 47.

45. Денисенко Н.П. Индивидуальные механизмы адаптации зависят от свойств нервной системы / Н.П. Денисенко, В.И. Николаев, Е.Ю. Гор-нушкина // Медико-социальные проблемы профилактики, диагностики и лечения заболеваний: Материалы научно-практической конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 2000. - С. 46-47.

46. Денисенко Н.П. Возможности использования биологически активных пищевых добавок для повышения адаптивных резервов организма при стрессе / Н.П. Денисенко // Ш тысячелетие. Пути к здоровью нации: Материалы 1-го Всероссийского форума. - М., 2001. - С. 32-33.

47. Денисенко Н.П. Возможности использования биологически активных пищевых добавок для повышения резервов организма при стрессе / Н.П. Денисенко // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - СПб, 2001. - №4. - С. 167-168.

48. Denisenko N. Pharmacological opportunities increases the adaptive reserves of an organism during stress / N. Denisenko // Psychopharmacology

and biological narcology. - 2001. - N 2. - P. 22-23.

49. Денисенко Н.П.. Об индивидуальных подходах к фармакологической коррекции эмоционального стресса/ Е.Ю. Горнушкина, Д.С. Ма-лаковский, Н.П. Денисенко, О.П. Сибилев, Э.В. Гречко // Проблемы охраны здоровья населения и окружающей среды: Материалы научно-практической конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 2002. -С. 68-69.

50. Денисенко Н.П. Патология клетки / В.И. Николаев, М.Д. Хегай, Н.П. Денисенко // Учебное пособие для студентов медицинских вузов и факультетов. - СПб, 2001. - 57 с.

51. Денисенко Н.П. К вопросу о возможности фармакологической коррекции повреждений, вызванных стрессорным воздействием в эксперименте / Н.П. Денисенко, А.Н. Жарков, В.К. Спиридонов // Медицинский академический журнал. - СПб, 2003. - Т. 3, № 4. - С. 144-146.

52. Денисенко Н.П. Новый подход к фармакологической регуляции эмоционального стресса / Н.П. Денисенко // Материалы юбилейной конференции, посвященной 50-летию института физиологии НАН Беларуси. -Минск, 2003.-С. 49-50.

53. Денисенко Н.П. К вопросу о возможности фармакологической коррекции повреждений, вызванных стрессорным воздействием в эксперименте / Н.П. Денисенко, Л.Б. Гайковая // Новые данные о редких и распространенных заболеваниях. - СПб, 2003. - С. 87-98.

54. Денисенко Н.П. Патогенетические особенности фармакологической коррекции воспаления / Н.П. Денисенко, В.И. Николаев, Е.Л. Протер, О.П. Сибилев // Проблемы укрепления здоровья и профилактика заболеваний: Материалы научно-практической конференции СПбГМА им. И.И. Мечникова. - СПб, 2004. - С. 76-77.

55. Денисенко Н.П. Фармакологическая коррекция токсического поражения печени / Н.П. Денисенко, А.Н. Жарков, Е.Л. Прогер, О.П. Сибилев // Материалы III Российского конгресса по патофизиологии. - М., 2004.-С. 86.

56. Денисенко Н.П / А.Т. Бурбелло, Е.И. Мясникова // Экспериментальное обоснование использования полиена // Омега-3 полиненасыщенные жирные кислоты: монография под ред. А.Т. Бурбелло. -СПб., 2005.-С. 40-112.

57. Денисенко Н.П. Фармакологическая регуляция комбинацией полиена и нейрозима цитолиза гепатоцитов при подостром токсическом поражении печени / Н.П. Денисенко // Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - СПб., 2006.-№1 (7).-С. 121-124.

58. Денисенко Н.П. Защитный эффект нейрозима и его комбинации с полиеном при «холодовом» стрессе / Н.П. Денисенко // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - СПб., 2006. -№2(16). - С. 71-73.

ЛР№ 020365

Подписано в печать 27.12.06г. Заказ № 900 Формат бумаги 60 х 84 1/16. Тираж 100 экз. Усл.пл. 2,0

Санкт-Петербургская государственная медицинская

академия им. И.И. Мечникова Типография ООО «КАРО-НЕВА» Санкт-Петербург, Красногвардейская пл., д. 3

Актуальность исследования

Из великого множества повреждающих факторов первостепенное значение имеют те, с которыми наиболее часто встречается человек в своей повседневной и производственной деятельности - перегревание, холод, физическое и нервное перенапряжение, гиподинамия, интоксикации, голод, жажда, гравитация, шум, вибрация и другие. Эта область общей патологии, патофизиологии становится полем интенсивного фармакологического исследования, с одной стороны для изучения механизмов патологических процессов, а с другой стороны, для экспериментальных обоснований применения фармакологических средств с целью защиты организма от повреждающего действия указанных факторов, повышения адаптивных возможностей организма и коррекции уже возникших нарушений, для поддержания жизнедеятельности и работоспособности.

В настоящее время доказана роль стресса как фактора этиологии и патогенеза язвенных поражений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, атеросклероза, нарушении функции сердца, печени, вторичных иммунодефицитных состояний, онкологических заболеваний (Макнел-лиП.Р., 1974; Корхов В.В., 1998; Губарева Л.И., 2001; Пшенникова М.Г., 2001; Овсянников В.И., 2003; Krantz D.S., et el., 1996; Schiaffonati L. et al., 1997; Opie L.H., 1997).

Голодание и истощающая физическая нагрузка являются также стрес-сорными воздействиями на организм, вызывая повреждение. Многочисленные исследования свидетельствуют, что недостаточность питания существенно изменяет защитные силы организма (Ивашкин В.Т. и соавт., 1991; ЛуфтВ.М., 1994; Шанин В.Ю., 1995; Крыжановский Г.Н. и соавт., 1997; До-ценко В.А., 2001; Симоненко В.Б. и соавт., 2001; Новоженов В.Г. и соавт., 2002; Гриневич В.Б. и соавт., 2004; Ficher М. et al., 1991; Anker S.D., Rauckhaus М., 1999). Кроме того, длительный стресс отягошает течение многих других заболеваний - инфекционных, воспалительных, нервно-психических (Нестерова И.В., 1992; Тузанкина И.Ф. и соавт., 1993; Насруллаева Г.М., 1999; Sternberg Е.М. et al., 1992; Chikanza I.C.etal., 1992; Coor S.A., Pool-Wilson P. A., 1999).

В основе характерных изменений, вызванных повреждающим токсическим, флогогенным и /или стрессорным воздействием, независимо от вида патогенного фактора, лежат стойкие нарушения вегетативного и гуморального баланса. Возникающий, как следствие нарушения тканевого метаболизма, дефицит энергии, приводит к вторичным метаболическим сдвигам, в том числе активирует свободнорадикальное окисление (СРО) в клетке (Панкин В.З. и соавт., 2001). Активация СРО в силу реакционной способности свободных радикалов приводит к повреждению биологических мембран (ЗенковН.К. и соавт., 2001; Голиков А.П. и соавт., 2003). Образуется порочный круг: стресс нарушает энергетический обмен и стимулирует СРО, а активация свободнорадикальных процессов, повреждая мембраны, усиливает энергодефицит в клетке. В результате возникают функциональные и структурные повреждения тканей и органов, приводящие к снижению качества жизни, утрате трудоспособности, инвалидизации. В связи с этим фармакологическая коррекция нарушений метаболизма, возникающих при патологических состояниях, в патогенезе которых важная роль принадлежит стрессу, является одной из актуальных биомедицинских проблем.

Сходство основных метаболических сдвигов, вызываемых стрессорны-ми, токсическими воздействиями на организм; возникающих при воспалении (нарушение процессов биологического окисления с ростом энергодефицита и накоплением недоокисленных соединений, подавление активности антиок-сидантной системы, активация СРО), позволяет выдвинуть концептуальные представления о том, что именно универсальная неспецифическая стресс-реакция, потерявшая адаптационное значение, является общим механизмом, определяющим характер и тяжесть повреждения. Выяснение этого механизма и его роли в патогенезе вызываемых повреждений способствует разработке новых подходов к лечению повреждений миокарда, нарушений функции печени, алиментарной дистрофии, воспаления, иммунодефицитов, проблема оптимальной фармакотерапии которых не теряет своей актуальности (Алмазов В.А. и соавт., 1999; Подымова С.Д., 1999; Новоженов В.Г. и соавт., 2001; Саратиков А.С. и соавт., 2003; Чазов Е.И., 2003; Кратнов А.Е., 2003; Шаб-ров А.В. и соавт., 2003; Opie L.H., 1997; Rizzeto М., 1999).

Фармакотерапия повреждений, вызываемых стрессорным воздействием, повышающая (улучшающая) процессы адаптации, традиционно основывается либо на использовании препаратов, повышающих «порог психофизической устойчивости» (Вальдман А.В. и соавт., 1979), либо лекарственных средств, повышающих резистентность организма к воздействию неблагоприятных факторов (Лазарев Н.В., 1949). Однако, повышение «порога психофизической устойчивости» достигается, как правило, ценой ограничения приема и переработки информации, скорости, количественных и качественных характеристик ответа. Препараты, влияющие на резистентность организма, чаще оказывают профилактический эффект, не влияя на количественный и качественный характер повреждений, вызванных стрессорным воздействием.

Базисная фармакотерапия диффузных заболеваний печени связана с использованием гепатопротекторов - группы лекарственных средств с различными механизмами действия, направленными на нормализацию функциональной активности печени, потенцирование репаративно-регенератоных процессов, восстановление гомеостаза и повышение устойчивости организма к действию патогенных факторов.

Существующие лекарственные средства для стимуляции процессов регенерации в печени не полностью удовлетворяют потребности клинической практики (Дегтярева И.И., 2000; Губергриц Н.Б. и соавт., 2000; Окови-тый С.В., 2002; Саратиков А.С., 2003). Некоторые препараты обладают нежелательными побочными эффектами (стероидные анаболические средства), другие пока мало изучены в гепатологии и дороги (гепатопоэтины). Многие средства, хотя и вполне безопасны, но не всегда достаточно эффективны (витамины, нестероидные анаболические средства). Лекарственные вещества -экстракты животного и растительного происхождения, содержащие высокомолекулярные вещества, - несут потенциальную опасность развития аллергических реакций.

Традиционная фармакологическая коррекция воспалительных процессов связана с применением стероидных и нестероидных препаратов, в то же вре-мяпоиск новых путей лекарственного влияния на воспаление является актуальным (Луйк А.И., Липкан Г.Н. 1988).

Универсальными регуляторами метаболизма, направленного действия являются полиненасыщенные жирные кислоты и аминокислоты, что позволяет создавать на их основе новые эффективные препараты (Раевский К.С., Георгиев В.П., 1986; Чекман И.С., 1991; Левачев М.М., 1995; Воронина Т.А., Середенин С.Б., 1998; Бурбелло А.Т., 2005; Steinke F.N., 1992; Carsia R.V., Weber Н., 2000). Исходя из этого, поиск препаратов для коррекции нарушений, обусловленных стрессорными, токсическими воздействиями на организм, используемых при воспалении, перспективен среди средств метаболической терапии, в качестве которых предлагаются полиен (комплекс полиненасыщенных жирных кислот; ЭПК, ДГК не менее 25%), нейрозим (комплекс незаменимых аминокислот) и их комбинация.

Цель исследования

Целью исследования является обоснование использования полиена, нейрозима и их комбинации для коррекции нарушений, возникающих при патологических состояниях, вызванных стрессорными, токсическими воздействиями и при воспалении.

Задачи исследования

1. Изучить особенности изменения реактивности организма при применении полиена, нейрозима и их комбинации;

2. Оценить стрессопротекторное действие полиена, нейрозима и их комбинации по показателям изменений липидного обмена, интенсивности прцессов пероксидации, активности антиоксидантной системы, состояния иммунной системы; морфологическим изменениям органов при сверхсильном и длительном стрессорном воздействии;

3. Изучить действие полиена, нейрозима и их комбинации на антитоксическую, секреторную, ферментативную функции печени, энергетический, белковый, жировой обмены, процессы ПОЛ, активность АОС, состояние иммунной системы, морфологическую картину ткани печени при различных видах повреждения при профилактическом и терапевтическом применении веществ;

4. Провести сравнительное изучение эффекта полиена, нейрозима и их комбинации на процессы воспаления, репарации и рененерации при профилактическом и терапевтическом использовании;

5. Дать экспериментальное обоснование для использования и определить показания к применению полиена, нейрозима и их комбинации.

Научная новизна

Расширено представление о роли неспецифических повреждений, обусловленных стрессорной реакцией, в развитии патологических состояний при токсическом повреждении печени, воспалении. Обосновано применение препаратов метаболического типа действия в комплексной терапии для их коррекции.

Впервые установлено, что полиен, нейрозим и их комбинация повышают функциональную активность ЦНС, иммунной системы у интактных животных.

Впервые выявлено стрессопротекторное действие полиена, нейрозима и их комбинации, обусловленное антиоксидантными свойствами веществ, нормализацией белкового и жирового обменов, активацией иммунной системы.

По данным биохимических, иммунологических и гистологических исследований впервые показано, что полиен, нейрозим и их комбинация оказывают антиоксидантное действие, нормализуют синтетическую и детоксика-ционную функции гепатоцитов, устраняют признаки цитолиза при токсическом повреждении печени четыреххлористым углеродом (ССЦ) и частичной гепатэктомии (ЧГЭ), оказывая гепатопротекторное действие.

Впервые установлено, что полиен, нейрозим и их комбинация способствуют восстановлению энергетического, пластического обменов, снижают интенсивность ПОЛ, повышают активность АОС, при воспалении; улучшают процессы репарации и регенерации.

Научно-практическая значимость

Обоснована перспективность применения омега-3 полиненасыщенных жирных кислот и аминокислот, обладающих комплексным механизмом действия, направленным на оптимизацию, нормализацию метаболических изменений, возникающих в результате экстремальных воздействий, вызывающих патологические изменения в системах и органах. Полиен, нейрозим и их комбинация могут быть рекомендованы как фармакологические средства метаболической терапии для коррекции нарушений пластического обмена, нормализации адаптационно-приспособительных механизмов, снижения интенсивности перекисного окисления липидов при стрессорном повреждении систем и органов, нарушениях функции печени и воспалительных процессах.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Полиен нейрозим и их комбинация обладают способностью модулировать реактивность организма интактных животных.

2. Полиен нейрозим и их комбинация оказывают стресспротективное действие на метаболические нарушения, возникающие в организме при сверхсильном и длительном стрессорном воздействии.

3. Полиен нейрозим и их комбинация оказывают защитное действие на печень при частичной гепатэктомии и токсическом повреждении.

4. Полиен, нейрозим и их комбинация обладают противовоспалительным эффектом, стимулируют процессы репарации и регенерации.

5. Комбинация веществ обладает стресспротекторными, гепатопротек-торными, противовоспалительными свойствами в большей степени, чем полиен и нейрозим в отдельности, суммируя эффект действия веществ.

Личное участие автора

Автором лично выбрана тема исследования, разработана программа, осуществлялось планирование и организация исследования по всем разделам работы. Автор является основным участником экспериментальных исследований по выявлению стрессопротекторных, гепатопротекторных и противовоспалительных свойств изучаемых веществ и их комбинации. Лично автором организовано проведение и выполнение физиологических и биохимических методов исследования (доля участия - 90%). Отдельные исследования (иммунологические, морфогогические) выполнены совместно со специалистами соответствующего профиля лабораторий, за что автор выражает благодарность. Доля участия автора в накоплении материала составляет 80%, в анализе и обобщении материала - 100%.

Реализация результатов исследования

Материалы исследования используются в научном и учебном процессе кафедр фармакологии и патологической физиологии Российской военно-медицинской академии им. С.М. Кирова, СПбГМУ им. И.П. Павлова, СПбГМА им. И.И. Мечникова. Материалы исследования используются в научно-исследовательской работе отделения трансплантации костного мозга и биотерапии ГУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова.

По результатам исследования направлена заявка на изобретение «Способ коррекции токсического повреждения печени с помощью комбинации веществ (полиена и нейрозима), обладающих иммуномодулирующим, регенерирующим, мембрано- и гепатопротекторным действием». По результатам исследования издано учебно-методическое пособие «Патология клетки», рекомендованное в качестве учебного пособия для студентов медицинских вузов и факультетов Департаментом образовательных медицинских учреждений и кадровой политики МЗ РФ (№ 15-16/84).

Апробация и публикация материалов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на I Всероссийском съезде фармакологов (Волгоград, 1995); I, II и III Российских конгрессах по патофизиологии (Москва, 1996, 2000, 2004); на конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии» (Смоленск, 1994); Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 1996, 1997, 1998); Международном конгрессе «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 1997); IV Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Великий Новгород. 2000); региональном конгрессе ISPNE (Санкт-Петербург, 2001); 1-м Всероссийском форуме «Третье тысячелетие. Пути к здоровью нации» (Москва, 2001); юбилейной конференции, посвященной 50-летию института физиологии НАН Беларуси (Минск, 2003); научно-практических конференциях СПбГМА им. И.И. Мечникова (20002006).

Основное содержание диссертационной работы отражено в 58 научной работе, из них 8 статей в центральных журналах и главе в монографии «Оме-га-3 полиненасыщенные жирные кислоты. Фармакология и клиническое применение».

Апробация диссертационной работы прошла на расширенном заседании проблемной комиссии «Медико-социальные проблемы профилактики, диагностики и лечения внутренних болезней» и кафедры патофизиологии СПбГМА им. И.И. Мечникова 28.09.2006г.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Работа изложена на 265 ст раницах машинописного текста, иллюстрирована 45 рисунками и 56 таблицами. Библиографический указатель содержит 364 наименования.

226 ВЫВОДЫ

1. В эксперименте на интактных животных установлено, что нейрозим н его комбинация с полисном оказывают стимулирующее действие на функциональное состояние ЦНС (интенсифицируют поведенческую активность животных, обладают антиамнеетичсским эффектом); нммуномодулируюЩее действие (достоверно увеличивают титр комплемента, уровень Т-лимфо-цитон в селезенке, поглотительную И бноцндную активность макрофагов, стимулируют индуктивный период иммуиного ответа),

2. При различных стрессорных повреждениях, воспалении н токсическом повреждении печени выявлены однотипные метаболические сдвиги, которые характеризуются энергетическим дефицитом, нарушениями белкового, липидного, углеводного обменов, усилением процессов перекисного окисления липидов, снижением активности аитиоксидантиых систем, нарушениями иммунной системы.

3. Нейрозим я его комбинация с полиеном обладают выраженным защитным эффектом при остром стрессорном воздействии, что проявляется в повышении выживаемости и физической выносливости животных; увеличении активности а нтн оке и двнтных систем, снижении интенсивности перекисного окисления липидов в кровн и тканях; восстановлении активности иммунной системы.

4. Нейрозим и его комбинация с полисном обладают анткатеро генным действием, нормализуя лнпидиый, белковый обмены, снижая морфологические проявления, при длительном стрессорном воздействии,

5. Полиен, нейрозим и нх комбинация при профилактическом и лечебном использовании нормализуют антитоксическую, экскреторную, белково-сннтетнческую, пнгменгообразующую функции печени, снижают цитолиз при подостром токсическом повреждении печени. Полиен и его комбинация с нейрозимом усиливают естественные процессы регенерации в печени н нормализуют антитоксическую, бслковосннтетичсскую функции после частичной гспагжтомнн.

6. Ня различных моделях воспаления установлено: полиен и его ком-бннацня с нейрозимом обладают противовоспалительным эффектом, тормозит экссудативные процессы, восстанавливают активность антноксидантной системы; снижают интенсивность процессов пероксидации, увеличивают активность Т- и В-лимфоцнгов, усиливают действие нестерондных противовоспалительных средств.

7. Полнен и его комбинация с нейрозимом стимулируют процессы репарации и регенерации тканей: оказывают выраженное профилактическое к лечебное Действие па различных моделях язв желудка, восстанавливают функцию седалищного нерва прн травматическом неврите (в эксперименте) а 1,3 раза быстрее, чем у контрольных животных.

В. Полиен, нейрозим н. в большей степени, их комбинация воздействуют на единые механизмы развития повреждений при стрессе, воспалении, токсическом поражении печени и оказывают стрессопротекторное, противовоспалительное и гепатопротекторное действие.

П РА КТИЧ ЕСКИЕ ГЕКОМ Е Н Д А ЦИ И

1. Комбинация нейрознма н полнена обладает ныраженным стрессо-протекторным действием, что может быть использовано для предотвращения негативных последствий «сверхснльного» н длительного стрессорного воздействия.

2. Комбинация нейрознма и полнена обладает выраженным renetonpo-текторным действием, что может быть использовано для лечения и профилактики токсических поражений печенн

3. Показано, что комбинация нейрознма и полнена усиливает и пролонгирует действие нестерондных противовоспалительных средств, уменьшает нх ульцерогенный эффект.

5.4. Заключение

Экспериментальное исследование показало, что полнен, нейрозим и, в особенности, их комбинация оказывают защитное действие на печень при ее повреждении СС14 н частичной резекции:

- желчеобразоватсльну'кэ, желчевыделитсльную функции при токсическом подостром повреждении печенн CCU;

- восстанавливают антитоксическую функцию;

- нормализуют экскреторную функцию;

- снижают интенсивность ПОЛ и повышают активность АОС гепатоцнтов;

- благоприятно влияют на белковообразовательную функцию и обмен липидов и холестерина; обладают иммуномодулируюшнм эффектом;

- гистологические исследования позволяют заключить, что полиен, неГгрознм и, в большей степени нх комбинация, защищают гепатошпы от повреждающего воздействия гепатотропного яда, проявляющееся и снижении процессов некробиоза и некроза н более отчетливой выраженности адаптационных процессов.

Защитное и лечебное действие полиена, нейрозима и нх комбинации нарастает при повторном введении » достигает пика к концу 3-й недели применения.

Глава 6. ВЛИЯНИЕ ПОЛИЕНА, НЕЙРОЗИМА И ИХ КОМБИНАЦИИ НА ПРОЦЕССЫ ВОСПАЛЕНИЯ, РЕПАРАЦИИ И РЕГЕНЕРАЦИИ

6.1. Изучение противовоспалительного дсйствнн полнена п его комби на цнн с нейрозимом

Биологический смысл воспаления заключается в системной метаболической реакции организма и отграничения патогенного раздразните ля, ею уничтожении, элиминации, после чего воспаление заканчивается репарацией и восстановлением гомеостаза,

Независимо от причинного фактора, вызывающего воспалительную реакцию, основные клеточные, сосудистые и другие процессы в очаге опосредуются химическими посредниками (медиаторами или модуляторами). Такой подход обосновывает рациональные принципы разработки средств противовоспалительного действия, Различают медиаторы сосудистой проницаемости, ответственные за первичные сосудистые реакции, гистамнн, серото-иии, киннны. некоторые простагландины, ингнбирование эффектов которых подавляет в основном экссудатнвные процессы, и медиаторы хемотаксиса, с которыми связано противовоспалительное действие нестсрондных противовоспалительных средств (Willoughby D.A., 1989).

Богатый опыт клинического применения нсстерондных противовоспалительных средств, изучение их фармакологии и механизмов развития воспаления определили изменение философии поиска и разработки новых аитн-флогнетнков. Исследования направлены на научение эндогенных природных противовоспалительных механизмов, поиск средств нетрадиционного действия, связанного не только с ингибированнсм биосинтеза простагланлннов.

Среди фармакологических веществ, обладающих выраженной метаболической активностью, встречаются препараты с противовоспалительным действием. Как известно, одним из важнейших критериев перспективности препарата в качестве противовоспалительного средства является его способность угнетать развитие каррагенннового воспаления (Di Rosa M.J. ct al., 1971; Vmgarel K.L. a]., 1976).

6 1 1 Изучение противовоспалительного действия полиена при профилактическом и лечебном применении

Воспалительный процесс моделировали по стандартным методикам (Николаевский В.И., 1941) па фоне кратковременного и длительного действия полнена, В качестве провоспалительных агентов использовали формалин, гистамнн, серотоник и каррагеннн. О выраженности противовоспалительного действия полиена судили по торможению отека лапок крыс, которым под апоневроз задних лапок вводили флагогениые агенты.

Формалиновый артрит у белых крыс (54 особн) вызывали введением под апоневроз голсеюстопного сустава 0.1 мл 2,5% раствора формалина. Величину воспалительного отека определяли онкометрнчсскнм методом через 0,5, 1,5, 3, б, 24, 48 часов от начала опыта. В качестве эталона противовоспалительного средства был использован бутадион.

Оказалось, что противовоспалительное действие полнена (1,0 мл'кг) нарастало по мере накопления в организме последнего; выраженность воспаления, вызванного формалином после 20-лиевного применения полиена, была сопоставима с противовоспалительным эффектом бутаднона. Комбинация бугадиоиа с полисном (21 день) практически полностью затормозила воспалительную реакцию, вызванную формалином - такое действие свидетельствует об усилении противовоспалительного действия бугадиоиа на фоне действия полнена (рис. 6.1).

Опыты с серотоиином были проведены на 54 белых беспородных крысах самцах; I % раствор ссротонкка вводили в объеме 0,1 мл крысам, которым до этого за три часа нлн в течение 3; 7; ] 4; 21 дней вводили полиен, В качестве противовоспалительного препарата сравнения был использован ни-дометацнн. Результаты регистрировали через 0,5; 1,5; 3; 4 часа.

Рис. 6.1- В.ТНШМЦ' iia.ltH'HSI на liocru.llllllc, IHJ11ИПГНОС форма, I ИНОМ (обът ланок крыс в % К исходному).

Результаты эксперимента показали, что характер противовоспалительного действия полнена в общем был таким же как и в опытах с формалином: действие полиена (1,0 мл/кг) на воспалительный процесс усиливалось по мере насыщения организма полнненасыщеннымн жирными кислотами. Применение индометацнна на фоне действия полнена обусловило эффект потенцирования: воспаление, вызванное серотоннном, было незначительным: обьем лапок увеличивался на 30% через 1,5 часа после введения серотоника н отек практически исчезал к 4-му часу наблюдения (рис. 6.2).

9.5ч J4 «Ч

Рис. 6.2. В.шшю полнена на аосналснис, ни шин нос ссротоннноч (объем ланок крмс в *А к исходному).

Гистаминовое воспаление моделировали таким же методом на 54 крысах- Характер н выраженность воспалительной реакции, вызванной введением гистамнна. напоминали картину опытов с ссротоннноы. Как и в предыдущих опытах, противовоспалительное действие полнена (1,0 мл/кг) было минимальным на 3-й сутки н максимально выраженным после 20-дневного применения полнена. В последнем случае противовоспалительный эффект полнена и нндомстаиииа практически совпадали (рис. 6.3).

0.5 ч <.&ч J* 4 ч

Рис, 63. Влияние полнена на аоспмат, пытанное пюкчшти (объем лапок и % к нехолноиу).

Считается, что каррагении мобилизует множество лровоспалительных факторов, в первую очередь, гистамнн и серотонни- Карраген и и фирмы "1Ме-роРоуселот" в количестве 0,1 мл 2% раствора вводили под апоневроз 54 крысам, В качестве зталона сравнения был использован днклофенак натрня. Как и в предыдущих опытах сила противовоспалительного действия полнена нарастала от 1 до 21 дня. На фоне 3-х недельного применения полнена противовоспалительный эффект последнего был равен эффекту днклофенака натрия. Применение днклофенака натрия с 7-го дня ежедневного применения полиена характеризовался отчетливым потенцированием (рис. 6,4). и i:

8 то * »

1»

1»

Рнс. 6.4. H-IIIUIIHU lUMHLltJ на ЦОСПЯЛСНИС. ШИИШюс KUppaiСПИНОМ (v6li(K tilt|«к ■ % к исходному).

Известно, что воеггзление представляет собой сложный многокомпонентны» процесс, в котором наиболее четко вылетают фазу экссудации и пролиферации. Поэтому практически важно было уточнить влияние полнена на каждый из этик периодов- Оценил» влияние препарата на различные фазы воспаления позволяет модель с имплантацией в подкожную клетчатку стерильных рулончиков (Трмиус Ф.П, и др., 1975). Для этого стерильные рулончики из хромагогрэфическоГт бумаги весом 42 мг одинакового объема были имплантированы крысам 4-х групп (п«12)с t-я - контрольная; 2-я - жинотные, которым в тс-ченне 10 дней после кмпляташш рулончиков ежедневно вводили полней (1,0 м.'р'кг); 3-я группа животных, которым вводили полнен (вуказанной дозе) в течение 7 дней до имплэнтацнн и после нмплаигацни в последующие Ю дней; 4-Я группа животных, которым вводили полиен в течение 2 недель до имплантации и ь течение го денгй после имплантации рулончиков, Введение полнена в разные сроки исследования, с различной продолжительностью дяди возможность оценить влияние вещества на экссудатнвную н пролифератнвную фазы воспаления в зависимости от степени насыщения организма ПНЖК.

Опыты показали, что наиболее выраженное торможение воспаления было у животных 4-й группы и наиболее слабый эффект у животных 2-й группы, то есть и в этих опытах проявилась ранее отмеченная дозозавнеимая закономерность- Кроме того, четко проявилось выраженное тормозящее действие полнена на экссудативную фазу воспаления: во всех опытных группах вес влажных гранулем достоверно снижался по отношении? к контрольным животным (во 2-й группе на - 30,0*0,5 мг, в 3-Й группе - на 71,0±0,3 мг, в 4-й группе - на 82,4±0,2 мг) (рнс, 6.5), цчмчк донулмм Осудив докупмы

Рис- 6,5. Выраженность лснсгпни полиена ид "«кссулатнннуда и про.тифератппн) н> фасы воспаления и зависимости от продолжительности его введении а организм (среднпЛ шее в.11жшл н сухих транълеч в чг).

612 Изучение противовоспалительного действия комбинации гюлиена и нейрозима

Противовоспалительные свойства комбинаиии полиена (1,0 мл/кг) и нейрозима (250 мг/кг) изучали на тех же моделях с использованием формалина, серотоннна, гнетамнна и каррагенина

В исследованиях на модели воспаления, вызванного формалином, установлено, ЧТО комбинация полиена с нейрозимом оказывает достоверно больший противовоспалительный эффект, чем полнен и препарат сравнения бутадиен (рнс. б,6.А),

Противовоспалительное действие комбинации полнена и нейрозима нарастало по мере накопления нх в организме. Применение комбинации средств (полнен + нейрозим) н противовес лап нтельнш веществ (бутадиен, иидометацнн, диклофснак натрия) в каждом эксперименте показало потенцирующее действие веществ, практически полностью подавляющее процесс воспаления (рис, 6.6,Б), к □Обчаа И S чха ЯЗчаы ■ччасм таи !1j И fc fc fcfc

1'ис. б.й.А- Влияние ношена в комбинации с нсИрошмом на воспаление, иыэ&аннос ф0|>\1 Ц.11ПЮН1 . ранок ■ % к исходному). Л

31в 4-----I ■

1 Q1 92 ОЭ В5 ев Ш7 ШЪ llliiilliiiililili. ilk

0S<*i 1Д«и» )ча ■Own 9.1

3 чи^ ^ " Пи—ui * тЯраяы |' лкП)

Рне. 6.А.Б. Влпшшг полнена п комбинации с иейроммом нп воспаление, вы шинное гнетямнноч, ееротоннноч, Kappai с-ннпом (oSltx лапок в % к нсыкиюму)

Влияние полнена а комбинации с нейрозимом оценивали на модели с имплантацией в подкожную клетчатку стерильных рулончиков (Трннус Ф.П, и соавт., 1975).