Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1-дезокси-1(N-метиламино)-D-глюцитола

Коваленко, Алексей Леонидович

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1-дезокси-1(N-метиламино)-D-глюцитола

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Коваленко, Алексей Леонидович Санкт-Петербург 2005 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.00.25

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1-дезокси-1(N-метиламино)-D-глюцитола

На правах рукописи

КОВАЛЕНКО Алексей Леонидович

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ОРИГИНАЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ 1 -ДЕЗОКСИ-1 (Ы-МЕТИЛАМИНО)-О-ГЛ ЮЦИТОЛА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург 2005

Работа выполнена в Институте токсикологии, научно-технологической фармацевтической фирме «Полисан», в Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи РАМН.

Научные консультанты:

доктор медицинских наук Т. Н. Саватеева-Любимова, доктор медицинских наук, профессор А. Н. Петров.

Официальные оппоненты:

• доктор медицинских наук, профессор П. Д. Шабанов;

• доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Е. А. Лужников;

• доктор биологических наук, профессор В. П. Комов.

Ведущее учреждение:

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И. П. Павлова.

Защита диссертации состоится « 2005 г. в /^"часов на

заседании Диссертационного совета Д208.030.01 Института токсикологии МЗРФ

по адресу: 193019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, д. 1. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института

токсикологии.

Автореферат разослан « I/ » 005 г.

Ученый секретарь совета \J¿f/rl) Т- Н. Саватеева-Любимова доктор медицинских наук *

Изготовлено ООО «Тактик-Студио»

Подписано в печать 20.03.2005 г.

Формат 60х88'/|й. Бумага офсетная. Печать офсетная.

Гарнитура Minion. Усл. печ. л. 3.

Тираж 150 экз.

Актуальность проблемы

Поиск и разработка оригинальных безопасных лекарственных препаратов относятся к числу наиболее сложных направлений фармакологии и неотделимы от таких дисциплин, как химия, биология, физика, и других смежных отраслей медико-биологических наук.

Тесное взаимодействие химика и фармаколога в поиске новых биологически активных соединений позволяет проводить эффективную оценку вновь синтезированного химического соединения и полностью оценить весь спектр его потенциальной фармакологической активности.

Поскольку соотношение «структура - биологическая активность» верно только в пределах одного ряда химических соединений, то для прогнозирования потенциальной фармакологической активности соединения необходима адекватная оценка биологических эффектов ранее синтезированных структур данного класса.

Особое значение для создания нового лекарственного препарата, после первичного скрининга биологически активных веществ, имеет отоор наиболее перспективного образца из спектра изученных соединений.

Однако выделенные в ходе первичного скрининга новые активные образцы соединений, наряду с высокой биологической активностью, зачастую обладают целым комплексом отрицательных свойств. Так, высокая токсичность соединения обусловлена химической, термической или фотонестабильностью, а из плохой растворимости обычно следует низкая биодоступность вещества. Следовательно, создание новых лекарственных препаратов путем модификации биологически активных соединений, проводимой для придания ранее синтезированному биологически активному соединению новых фармакологических свойств, перспективно.

Совершенным инструментом придания выбранному биологически активному соединению необходимых фармакологических свойств является химический синтез, приводящий к получению абсолютно новой химической структуры, зачастую и с абсолютно новыми фармакологическими свойствами.

Альтернативным путем улучшения фармакологических свойств выбранного соединения является создание комплексных препаратов - комбинации вновь синтезированного продукта с уже известными биологически активными соединениями, что требует длительных исследований по химической и фармакологической совместимости активных компонентов соединения.

Настоящую работу следует отнести к актуальным исследованиям, поскольку она включает:

• разработку оригинальных безопасных лекарственных средств, основанную на сравнительном анализе их эффективности, полученную на экспериментальных моделях, а также с учетом оценки риска причинения вреда здоровью человека в период нахождения лекарственных препаратов на фармацевтическом рынке России;

• развернутую оценку нового класса фармакологически активных соединений;

• направленный синтез новых лекарственных средств из исследуемого ряда соединений^-------—--

' 3

I I 1

_._____J

• исследования фармакологической активности полученных лекарственных препаратов;

• изучение механизмов действия разработанных лекарственных препаратов и установление связи химического состава с проявляемыми биологическими эффектами;

• получение новых данных о корреляции биологических эффектов, полученных in vitro, с эффектом на организм человека in vivo.

Работа выполнена в соответствии с федеральными целевыми программами «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского направления» (Постановление Правительства РФ № 1414 от 23.11.1996) и «Медицина высоких технологий» (Постановление Правительства Российской Федерации от 25 ноября 1998 г. № 1391), а также в соответствии с планом научно-исследовательских работ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН по направлениям «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза», «Национальные приоритеты в медицине и здравоохранении».

Целью настоящей работы является разработка оригинальных лекарственных препаратов, в состав которых входят биологически активные органические кислоты, с применением современных переносчиков лекарственных веществ основного характера с оценкой их безопасности и изучением фармакологической активности.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие задачи:

• Синтезировать безопасное фармакологически приемлемое соединение на основе акридонуксусной кислоты с применением современных солеи комплексообразователей, обладающее интерферониндуцирующей активностью в отношении цитокинов (a-интерферона и других).

• Синтезировать новую транспортную форму янтарной кислоты, в виде сложного сукцината с созданием на ее основе безопасных лекарственных препаратов с высокой фармакологической активностью, обладающих выраженными детоксицирующими свойствами.

• Оценить безопасность с изучением фармакологической активности разработанных (на основе сложных субстратных композиций) оригинальных лекарственных препаратов in vitro и in vivo, с целью последующего проведения клинических испытаний и внедрения их в медицинскую практику.

Научная новизна работы

Впервые показано, что соли и комплексы N-метилглюкамина с органическими кислотами представляют собой класс биологически активных веществ, перспективных для разработки безопасных эффективных лекарственных препаратов, обладающих высокой биологической доступностью.

На основе N-метилглюкамина (МГА) и акридонуксусной кислоты (АУК) синтезирован высокоактивный низкомолекулярный индуктор интерферона - циклоферон

На экспериментальных моделях in vitro, in vivo изучены противовирусный, противоопухолевый (антипромоторный, антиканцерогенный), иммуномоду-лирующий эффекты циклоферона, установлен механизм действия препарата.

Впервые целенаправленно синтезирована фармакологически активная смешанная Na.N-метилглюкамониевая соль янтарной кислоты - реамберин.

На экспериментальных моделях in vitro и in vivo показана его безопасность, установлены детоксицирующие свойства, в основе которых лежат ан-тигипоксический и антиоксидантный механизмы.

На основе реамберина разработаны сложные субстратные композиции:

• цитофлавин - метаболический церебропротектор;

• ремаксол - инфузионный гепатопротектор;

• реоплазмин - плазмозамещающий раствор комбинированного действия;

• осмофузин - осмотический диуретик.

На экспериментальных моделях изучена их безопасность, оценены фармакологические свойства, механизм действия; потенциально определено их последующее медицинское применение.

Практическая ценность работы

Разработаны и утверждены в МЗ РФ нормативно-технологические документы: промышленные регламенты и фармакопейные статьи предприятия:

• циклоферон, 12,5% раствор для инъекций (ПР 64-23057866-016-03; ФСП 42-0320170001);

• реамберин, 1,5 % раствор для инфузий

(ПР 64-23057866-013-02; ФСП-420320158401);

• цитофлавин, раствор для внутривенного введения (ПР 64-23057866017-03; ФСП-42-0320339802).

Зарегистрированы в Российской Федерации препараты на основе N-ме-тилглюкамина:

• циклоферон, 12,5% для инъекций (per. №95/211/5, перерегистрация в связи с введением новых требований, Р№ 001049/03-2002);

• реамберин, 1,5% для инфузий (per. №001048/01-2002)

• цитофлавин, раствор для внутривенного введения (Р№ 003135/012004).

Проведенные исследования послужили основой для организации промышленного выпуска (лицензия №64/0139-71/03) оригинальных лекарственных препаратов на основе МГА: циклоферон, 12,5% раствор для инъекций; реамберин, 1,5% раствор для инфузий; цитофлавин, раствор для внутривенного введения.

Представлены материалы в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ для проведения рандомизированных контролируемых клинических исследований с последующей регистрацией оригинальных препаратов ремаксол, реоплазмин и осмофузин.

Подготовлено пособие для врачей «Особенности течения гемоконтактных вирусных гепатитов в зависимости от состояния внешней среды» (Ученый совет МЗ РФ, протокол №8, от 01.12.2003). Утверждены УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России учебные пособия «Применение иммуномодуляторов в хирургической клинике» (УМО-128 от 27.08.2004); «Иммуномодуляторы с противовирусной активностью» (УМО-639 от 22.10.2004); «Оценка качества жизни у больных инфекционного стационара» (УМО-640 от 22.10.2004).

Утверждены два информационных письма для врачей:

1. «Применение реамберина при острых экзогенных и эндогенных интоксикациях» (утверждено заместителем руководителя Департамента здравоохранения г. Москвы Лешкевичем И. А. и председателем УМС Департамента здравоохранения г. Москвы Костомаровой Л. Г.).

2. «Оптимизация профилактики и лечения острых респираторных заболеваний», информационное письмо для терапевтов, инфекционистов и педиатров (утверждено председателем комитета здравоохранения администрации г. Саратова Михайловым А. В.).

Препараты широко используются в лечебных учреждениях и вузах Российской Федерации:

• Московской городской клинической больнице № 15;

• Научно-исследовательском институте детских инфекций (Санкт-Петербург);

• Пензенском институте усовершенствования врачей;

• НИИ скорой помощи (Санкт-Петербург);

• Пятигорской химико-фармацевтической академии;

• Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И. И. Мечникова;

• Больнице Петра Великого Санкт-Петербургской медицинской академии им. И. И. Мечникова;

• Московской клинической детской больнице № 13 им. Н. П. Филатова.

Постановлением Правительства Российской Федерации № 85 от 16.02.2004

«за разработку технологии, организацию промышленного выпуска и внедрение в медицинскую практику готовых лекарственных форм нового отечественного препарата циклоферон» присуждена премия Правительства Российской Федерации в области науки и техники 2003 г.

Положения, выносимые на защиту

1. Ы-метилглюкамин (МГА) является не только солеобразователем, но и обладает высокой фармакологической активностью. Фармакологические эффекты МГА обусловлены наличием большого количества гидроксильных групп, образующих водородные связи, что приводит к формированию стойких комплексов аминоспирта с белками клеточных мембран и, соответственно, изменению заряда и гиперполяризации мембран, влияя на калий/натриевый насос. Кроме того, МГА конкурентно взаимодействует с анионами и, следовательно, способствует их селективному переносу через биологические мембраны.

2. На основе МГА и акридонуксусной кислоты разработан лекарственный препарат - циклоферон, обладающий интерферониндуцирующей активностью в отношении цитокинов, характеризующийся противовирусной, противоопухолевой (антипромоторное, антиканцерогенное действие) и иммуномодулирующей активностью.

3. Противовирусный эффект соединения реализуется на уровне репликации вируса, на стадии внутриядерной сборки вирусных капсидов, на поздних стадиях репликативного цикла, за счет увеличения количества ДИ-частиц и снижения вирус-индуцированного синтеза белка

в клетке, опосредованного экспрессией специфического ядерного рецептора и/или эффекторного белка.

4. Под влиянием циклоферона индуцируется каскад сигналов, включающих «цитокиновую сеть». Цитокинкорригирующее действие связано с активацией генов интерферона, IL-4, IL-12, а также подавлением экспрессии генов TNF-a и IL-6.

5. Синтезирована новая фармакологически активная смешанная Na,N-метилглюкаммониевая соль янтарной кислоты - реамберин, обладающий антигипоксическим, антиоксидантным действием. На его основе показана возможность создания субстратных композиций разнонаправленного действия (ремаксол, реоплазмин, осмофузин, ци-тофлавин), обладающих антиоксидантной/антигипоксантной активностью.

Апробация и внедрение результатов исследования

Основные результаты исследования доложены и обсуждены на:

• 3,4,5,6-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996,1997,1998,1999 гг.);

• 32-й научно-практической конференции дерматовенерологов, акушеров-гинекологов и урологов Санкт-Петербурга (Санкт-Петербург, 18-20 июня 1997 г.);

• Юбилейной международной научной конференции «Грипп - XXI век» (Санкт-Петербург, 28 сентября-2 октября 1997 г.);

• Второй Всероссийской научной конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Саратов, 19-21 мая 1998 г.);

• научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (Пенза, 20-24 апреля 1998 г.);

• Третьем пленуме правления ассоциации ортопедов-травматологов России (Уфа, 1998 г.);

• зональной научно-практической конференции травматологов и ортопедов Северо-Запада России (Великий Новгород, 1998 г.);

• международной конференции «Конструктивная и деструктивная гипоксия» (Украина, Киев, 12-14 июня 1998 г.);

• научной конференции, посвященной 200-летию BMA, «Современные проблемы герпесвирусной инфекции» (Санкт-Петербург, 17 февраля 1999 г.);

• конгрессе педиатров России (Москва, 16-18 февраля 1999г.);

• научной конференции «Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней» (Санкт-Петербург, 27-28 октября 1999 г.);

• Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Санкт-Петербург, 1999 г.);

• международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» (Санкт-Петербург, 1999 г.);

• научно-практической конференции «Безопасность и здоровье подростков» (Санкт-Петербург, 1999 г.);

• научной конференции «Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины» (Санкт-Петербург, 18-20 декабря 2000 г.);

• Всероссийской конференции «Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, 2002 г.);

• рабочем совещании РАМН «Митохондрии в патологии» (Москва, 2001 г.);

• научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2003 г.);

• международных конференциях «Успехи современного естествознания: гомеостаз и инфекционный процесс» (Дагомыс, 2002,2003 гг.);

• 12-й и 13-й международных конференциях молодых ученых Санкт-Петербургского государственного университета «Человек. Природа. Общество. Актуальные проблемы» (Санкт-Петербург; 26-30 декабря 2001,2002 гг.);

• 6-м Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 29-31 октября 2003 г.);

• Юбилейной конференции, посвященной 60-летию Пензенского государственного университета (19-21 ноября 2003 г.);

• научно-практической конференции «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2003 г.);

• заседании Ученого совета ГУ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН (Москва; 20 марта 2003 г.);

• расширенном заседании Ученого совета ГУ НИИ вирусных препаратов РАМН (Москва, 30 октября 2003 г.);

• научном совете по присуждению премий Правительства РФ в области науки и техники 19 декабря 2003 г., в рамках выполненной программы «Разработка технологии, организация промышленного выпуска и внедрение в медицинскую практику готовых лекарственных форм циклоферона»;

• научно-практической конференции «Выпускник фармацевтического вуза: вчера, сегодня, завтра» (Санкт-Петербург, 2004 г.);

• 3-й и 4-й международных конференциях «Клинические исследования лекарственных средств в России» (Москва, 2003,2004 гг.);

• международной конференции РУДН «Здоровье и образование XXI века» (Москва, 20-22 октября 2004 г.);

• 60-й региональной научной конференции Пятигорской фармацевтической академии (Пятигорск, 29-30 января 2005 г.).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов.

Указатель литературы включает 170 отечественных и 262 зарубежных источника.

Работа представлена на 349 страницах машинописного компьютерного текста, иллюстрирована 59 таблицами и 51 рисунком.

По теме диссертационного исследования опубликовано 85 работ в открытой печати, в т.ч. 63 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, получено 6 патентов на изобретение.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы

Все экспериментальные исследования проводились по «Нормативно-методическим материалам по экспериментальному изучению новых лекарственных средств»1 и «Правилам доклинической оценки безопасности лекарственных средств» (РД 64-126-91, М.,1992).

Исследования выполнялись на базе ГУ «Институт токсикологии», под руководством д. м. н. Т. Н. Саватеевой, в отделе интерферонов ГУ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи (руководитель отдела академик РАМН, профессор, д. м. н. Ф.И.Ершов), в научно-производственной лаборатории НТФФ «Полисан» (руководитель лаборатории к. ф. н. А. Ю. Петров), в лаборатории исследования канцерогенеза НИИ онкологии им Н. Н. Петрова МЗ РФ (руководитель лаборатории профессор В. Н. Анисимов), отделе нейрофармакологии НИИ экспериментальной медицины РАМН (руководитель чл.-кор. РАМН, профессор Н. С. Сапронов), лаборатории химиотерапии НИИ гриппа РАМН (заведующий лабораторией к. м. н. В. Г. Платонов) в период 1993-2004 гг.

Для проведения биологических экспериментов отобраны наиболее оригинальные лекарственные препараты (производство препаратов осуществляет НТФФ «Полисан», Санкт-Петербург) различных классов, разработанные на основе МГА:

• циклоферон (противовирусное средство с иммуномодулирующей активностью; per. № 95/211/5 от 20.07.1995, перерегистрация препарата в связи с новыми требованиями, per. №001049/03-2002);

• реамберин, 1,5% раствор для инфузий; перерегистрация препарата в связи с новыми требованиями (per. №001048/01-2002);

• цитофлавин, раствор для внутривенного введения (per.№003135/01-2004);

• ремаксол, раствор для инфузий, патент РФ №2240116 от 20.11.2004; метаболическое средство (стимулятор тканевого дыхания);

• реоплазмин (товарный знак №204920 от 09.12.1999), плазмозамещаю-щий раствор, антиоксидант/антигипоксант;

• осмофузин (товарный знак № 2003720557 от 14.10.2003), осмотический диуретик, метаболическое средство.

Кроме этого, в качестве препаратов сравнения использовались следующие лекарственные средства: полудан - индуктор интерферона; реаферон - препарат рекомбинантного а-интерферона; азидотимидин - ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ; ремантадин - противовирусное средство; ацик-ловир - противовирусное средство; солкосерил, церебролизин - репарант,

1 Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. В. П. Фисенко. М.: Изд-во МЗРФ, 2000.397 с.

регенерант; циклофосфан, адриамицин - цитостатаческое химиотерапев-тическое средство для лечения злокачественных заболеваний; лейкомакс

- стимулятор лейкопоэза; пирацетам - ноотропное средство; мексидол - ан-тиоксидантное средство; маннитол - осмотический диуретик, гепастерил А

- гепатопротекторное средство; ХАЕС-стерил - плазмозамещающий раствор гидроксиэтилкрахмала; неотон - метаболическое средство.

В работе использованы следующие культуры клеток: U-937; U651; клетки Нер-2; Hela; L-929; MG-63; К-562; М-19; CEMSS; SW-13; МТ-4; НТА-41; а также среды: Игла, RPMI.

Для проведения экспериментальных исследований in vivo с целью изучения фармакологической активности препаратов использованы: 2650 мышей; 1980 крыс; 450 кроликов; 260 морских свинок; 28 собак.

Все грызуны были получены из питомника РАМН «Рапполово» и «Столбовая». Собаки получены из вивария Санкт-Петербургской государственной медицинской академии. Животных содержали в стандартных клетках в условиях естественного светового режима, при свободном доступе к воде и стандартному гранулированному корму с добавкой овощей и витаминов.

Основные методики и модели, применяемые нами при изучении фармакологической активности указанных выше оригинальных препаратов на этапе их доклинического экспериментального изучения:

Молекулярно-биологические:

• связывание циклоферона с ДНК и локализация препарата в клетке;

• экспрессия РНК цитокинов циклофероном;

• индукция м-РНК цитокинов под действием циклоферона;

• PCR-реакция выполнялась при следующих условиях:

1) 94°С - 2 мин;

2) 35 циклов: 94°С - 1мин, 55°С - 2 мин, 72°С - 2 мин;

3) 72°С - 5 мин -> SHUT-OFF.

PCR-продукты выявлялись с использованием электрофореза в 3 % агароз-ном геле и окрашивались бромидом этидия.

Экспериментальные модели in vitro:

• влияние циклоферона на размножение вируса гепатита С в культуре клеток;

• влияние циклоферона на пролиферацию лимфоцитов;

• противогерпетическая активность циклоферона в культуре клеток;

• влияние циклоферона на активность естественных киллерных клеток;

• интерферониндуцирующая активность циклоферона (биологический микрометод С. С. 1ригорян);

• активность циклоферона на модели ВИЧ-инфекции;

• экспериментальная модель ишемии в первичной культуре кардио-миоцитов.

Экспериментальные модели in vivo:

• эффективность циклоферона при гриппозной инфекции;

• эффективность циклоферона при герпетической пневмонии;

• эффективность циклоферона при герпетическом кератите;

• эффективность антиканцерогенного действия циклоферона при химическом канцерогенезе;

• влияние циклоферона на рост перевиваемых опухолей у крыс и мышей;

• влияние циклоферона на метастазирование перевиваемых опухолей;

• эффективность циклоферона при экспериментальной лучевой терапии опухолей;

• эффективность циклоферона при деформирующем остеоартрозе;

• эффективность циклоферона при экспериментальной (криогенной) язве двенадцатиперстной кишки;

• модель экспериментального шока;

• модель экспериментальной черепно-мозговой травмы на фоне алкогольной интоксикации;

• экспериментальные модели полиорганных токсических поражений;

• модель токсического поражения печени;

• модель острой интоксикации циклофосфаном;

• модель острого отравления ядовитыми грибами;

• модель токсического полиорганного поражения этанолом;

• модель экспериментального аденовирусного гепатита;

• модель инфаркта миокарда;

• экспериментальная модель роста и метастазирования перевиваемых опухолей;

• методика опытов по изучению влияния препаратов на рост карциномы Эрлиха у мышей;

• методика опытов по изучению влияния препаратов на рост меланомы В16 у мышей;

• модель радиозащитного эффекта;

• экспериментальная модель антрациклиновой кардиомиопатии;

• экспериментальная модель геморрагического инсульта;

• моделирование внутримозговых кровоизлияний проводили по методу Л.В.Крушинского и Л.П.Доброхотовой (1957), С.А.Воронцовой (1976), Т. П. Романовой (1989).

Биохимические методы, использованные в работе2:

• определение концентрации восстановленного глутатиона проводили по методике в. Ь. ЕНшап (1959);

• активность глутатионпероксидазы определяли по методу А. Н. Гаври-ловой (1985);

• активность глутатионредуктазы определяли методом I. Саг1Ьег§ и В. Аппепгак (1985);

• определение активности глутатион-Б-трансферазы проводили по методу Ш. Н. НаЫд и В1акоЬу (1981);

• активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы определяли по методу А.КогпЬег8(1955);

• активность каталазы определяли методом М. А. Королюка (1988);

• определение концентрации диеновых конъюгатов в гомогенатах тканей осуществляли по методике И. Д. Стальной (1977);

2 Энциклопедия лабораторных тестов / Под ред. Н.Тица. М., 1986,1997; Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М., 2000.

• концентрацию малонового диальдегида определяли по методу M.Uchiyama (1978);

• содержание белка определяли методом Лоури в модификации G. L. Peterson (1977).

Статистические методы

Для оценки эффективности препаратов использованы параметрические и непараметрические методы и многофункциональные критерии. Обработка результатов эксперимента проводилась по рекомендациям3, с использованием программы «Статистика для Windows, версия 5,0».

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Синтез, физико-химические свойства, противовирусная активность циклоферона

Активной субстанцией при производстве лекарственных форм циклоферона является акридонуксусная кислота (АУК) общей формулы C15HnN03. Акридонуксусная кислота получается методом химического синтеза в три стадии из о-хлорбензойной кислоты.

АУК впервые была описана как противовирусное средство4, представляет собой кристаллическое вещество желтого цвета, практически нерастворимое в воде. Эффективность использования акридонуксусной кислоты в виде натриевой соли при оральном пути введения, как это описано в патенте США, крайне мала, так как при попадании в желудок кислота переходит в недиссоциированную форму, выводится из организма в неизменном виде. Парентеральное введение АУК в виде натриевой соли невозможно, так как рН раствора составляет 10,5-11,0.

Попытки снизить значение рН водных растворов натриевой соли АУК путем забуферирования или добавления стабилизаторов, предпринимаемые нами и известные из литературных источников, не позволяли достичь желаемого результата. Основными недостатками опытных вариантов парентеральной лекарственной формы АУК были следующие:

• высокое значение рН раствора;

• нестабильность раствора при попытках снизить значение рН;

• необходимость введения большого числа вспомогательных веществ для стабилизации раствора;

• технологические трудности при изготовлении лекарственной формы, в частности необходимость исключения влияния дневного и солнечного света при растворении компонентов и в процессе последующего хранения.

3 Беликов В. Г., Пономарев В. Д. Применение математического планирования и обработка результатов эксперимента в фармации. Пятигорск, 1973; Сергиенко В. И., Бондарева И. Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М., 2000; Планирование и проведение клинических исследований лекарственных средств / Под ред. Ю. Б. Белоусова. М., 2000.

4Патент США № 3681360 от 09.04.1971.

Рис. 1. Акридонуксусная кислота

Кроме натриевой соли были также изучены другие соли АУК: аммониевая, калиевая, магниевая. Все они имели такие же недостатки, как и натриевая соль.

Однако в экспериментальных моделях in vivo, in vitro выявлен ряд свойств растворов солей АУК, делающих ее привлекательным объектом биологических исследований, подтверждающих потенциальную возможность использования ее в медицинских целях, поскольку установлена ее активность в отношении как РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов, обусловленная индукцией в организме высоких титров интерферона.

Вместе с тем АУК (рис. 1) нетоксична и в дозах, значительно превышающих проявления указанных биологических эффектов, не обладает мутагенными свойствами, не интеркалирует в молекулу ДНК, несмотря на малый размер, плоскую структуру и отрицательный заряд.

Все положительные биологические свойства АУК однозначно подтверждали актуальность создания фармакологически приемлемой и технологически воспроизводимой лекарственной формы.

По своим физико-химическим свойствам АУК является кислотой средней силы (рКа~3,4). Поэтому исследования были направлены на подбор противо-иона для перевода кислоты в водорастворимое соединение. В качестве про-тивоионов целесообразно использовать основания средней силы, которые могут способствовать стабилизации раствора с одновременным снижением значений рН по сравнению с натриевой солью.

Нами исследованы основания средней силы, содержащие аминную группу, способную к солеобразованию, такие как аминосахара, аминоспирты, аминокислоты.

Критериями пригодности соединения для использования его в качестве противоиона, для перевода АУК в водорастворимое состояние, выбраны следующие показатели:

• полнота растворения АУК;

• стабильность полученного раствора при хранении его при комнатной температуре;

• сохранность свойств раствора при воздействии высоких и низких температур;

• физиологически приемлемый рН раствора; широта интервала рН, при котором свойства раствора сохраняются;

• необходимость добавления к растворам солюбилизаторов, стабилизаторов для сохранения их свойств в процессе длительного хранения;

• степень биологической эффективности получаемого соединения;

• концентрационные пределы при растворении;

• воспроизводимость полученных результатов;

• простота технологических решений;

• доступность сырья.

Для создания препарата на основе АУК был синтезирован ряд солей с органическими и неорганическими основаниями: натриевая, калиевая, кальциевая, магниевая, аммониевая, гидроксиметилметанаммониевая (ТРИС) и И-метилглюкаминовая (МГА).

Соли АУК с бивалентными щелочноземельными металлами - магнием и кальцием оказались практически нерастворимы в воде и из дальнейших исследований были исключены.

Соли АУК с щелочными одновалентными металлами, аммиаком и такими низкомолекулярными органическими аминами, как МГА и ТРИС, оказались хорошо растворимы в воде и, следовательно, потенциально более пригодны для создания парентеральной лекарственной формы.

АУК является светонеустойчивым соединением и легко декарбоксили-руется под действием квантов света в водных растворах, образуя осадок нерастворимого И-метилакридона и смолистые соединения полимерного характера (рис. 2). Учитывая, что химическая стабильность, в том числе фотохимическая, является важнейшей характеристикой лекарственных средств, нами исследована экспериментально светоустойчивость солей АУК.

Изучение светоустойчивости 10% растворов синтезированных солей АУК с органическими и неорганическими основаниями показало, что натриевая, калиевая и аммониевые соли оказались светонеустойчивыми и, следовательно, малопригодными для создания парентеральной лекарственной формы АУК.

Высокая фотохимическая стабильность солей акридонуксусной кислоты с низкомолекулярными аминоспиртами обеспечивается стабилизацией

сн2-соон

сн3

Ы-метилакридон

АУК

Рис. 2. Разложение АУК под действием квантов света

л-электронной системы акридонового цикла, образованием прочных межмолекулярных водородных связей между карбонильной и карбоксильной химическими группировками гетероциклического кольца и гидроксильными группами аминоспиртов. Большее количество гидроксильных групп в МГА обеспечивает более прочные водородные связи в соответствующей соли и, следовательно, более высокую светоустойчивость по сравнению с ТРИС. Немаловажным фактом, влияющим на повышение светоустойчивости АУК с МГА, является наличие у молекулы N-метилглкжамина антиоксидантных свойств.

Соль АУК с избытком ТРИС и соль АУК с МГА показали не только хорошую растворимость в воде, но и отсутствие гидролиза с высокой стабильностью в требуемом интервале (рН 7,0-8,0), обусловленном солюбилизирующи-ми и комплексобразующими свойствами аминоспиртов ТРИС и МГА.

Парентеральное введение 10% водного раствора соли АУК с ТРИС вызывало нежелательные побочные эффекты у лабораторных животных (мышей, крыс и морских свинок) - образование труднорассасывающихся инфильтратов, а соль АУК с МГА вводилась без видимых побочных явлений.

Учитывая, что ТРИС растворяет АУК только при трехкратном мольном избытке, а его применение разрешено Фармакопеей РФ только в ограниченных дозировках и только в лекарственных формах для подкожного введения, наиболее фармакологически приемлемой лекарственной формой акридонук-сусной кислоты по большинству физико-химических параметров и фармакологическим свойствам явилась соль с N-метилглюкамином.

N-метилглюкамин (1 -дезокси-1 -(Ы-метиламино)-О-глюцитол) является производным линейного полиспирта D-сорбита, защищенного по первому атому углерода метиламинной группой, придающей данному соединению свойства органического основания (рис. 3).

МГА представляет собой химически стабильное гигроскопичное кристаллическое вещество белого цвета, хорошо растворимое в воде и большинстве полярных органических растворителей. МГА является органическим осно-

NH2

сн3

Н JÜ

но-

-он

СН20Н

н-н-

СИЗ

сн

но-

-он

CH20H

н-

Ni,H

Рис. 3. Синтез N-метилглюкамина из D-глюкозы

сиз

HN I

СН2

Н-

нон-

-он

-н

-он

снгрн

ваяием (рКв=9,6), а его водные (водно-спиртовые) растворы имеют щелочную реакцию. Благодаря наличию в молекуле пяти гидроксильных групп и вторичной аминогруппе МГА легко образует хорошо растворимые в воде четвертичные аммонийные соли и устойчивые комплексы с гетероаромати-ческими и алифатическими соединениями и ионами металлов.

Мощные внутри- и межмолекулярные водородные связи между гидрок-сильными группами и вторичным азотом обусловливают его высокую солю-билизирующую активность и растворимость в подавляющем большинстве органических растворителей. Это позволяет использовать МГА для создания новых растворимых лекарственных форм или стабилизации физико-химических свойств лекарственных препаратов.

Фармакологические эффекты МГА обусловлены наличием большого количества гидроксильных групп, образующих водородные связи, что приводит к формированию стойких комплексов аминоспирта с белками клеточных мембран и, соответственно, изменению заряда и гиперполяризации мембран, влияя на калий/натриевый насос. Кроме того, МГА конкурентно взаимодействует с анионами и, следовательно, способствует их селективному переносу через биологические мембраны.

При растворении эквимолярных количеств АУК и МГА происходило полное растворение кислоты с образованием прозрачных растворов желтого цвета, стабильных при хранении при комнатной температуре. Кипячение полученного раствора соли с последующим охлаждением до комнатной температуры или замораживание его с последующим оттаиванием не приводило к нарушению равновесия и выпадению АУК в осадок.

При смешивании компонентов в строго эквимолярном соотношении получаемые растворы имели значения рН, близкие к нейтральным (6,4-6,5), причем растворы сохраняли стабильность в широком интервале физиологически пригодных значений рН от 6,5 до 8,0. Никаких других стабилизаторов, буферных или солюбилизирующих добавок для таких растворов не требовалось. Метилглюкамина акридонацетат был получен в виде желтого порошка путем лиофилизации его водных растворов. Синтезированное вещество (рис. 4) могло растворяться в воде в высоких концентрациях (до 35-40%) без утраты физико-химических свойств.

Таким образом, было синтезировано химическое соединение, являющееся четвертичной аммониевой солью кислоты акридонуксусной и N-метилглю-камина (рис. 4, табл. 1).

Изучение острой токсичности позволило отнести полученное вещество к малотоксичным соединениям, LD50 для мышей линии СБА составляла 1200мг/кг при пероральном введении и 800мг/кг массы при внутривенном введении. При этом мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим и аллергенным действием соединение не обладало, что свидетельствовало об отсутствии его токсической активности и возможности использования в медицинских целях.

Однако, как всякое лекарственное вещество, полученное соединение должно быть не только безвредно, но и высокоэффективно. Поэтому особое внимание было уделено подтверждению сохранения в этом соединении биологической активности, присущей АУК.

С этой целью была изучена интерфероногенная активность метил-глюкамина акридонацетата. Интерфероногенную активность изучали на линейных мышах линии СВА.

и3

н2м

сн2

н-н-нон-

-он

-н

-он

СН20Н

Рис. 4. Дезокси-1-К-[метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-И-глюцитол (метилглюкамина акридонацетат)

Таблица 1

Физико-химические характеристики метилглюкамина акридонацетата

Показатель Данные анализа

Внешний вид Кристаллический порошок ярко-желтого цвета, без запаха, горького вкуса

Растворимость Хорошо растворим в воде, умеренно растворим в низших спиртах, нерастворим в хлороформе, эфире, ацетоне, бензоле.

Ультрафиолетовый спектр 0,002 % раствора в воде, нм 210,255,392,408

ПМР-спектр, а, м. д 2,5 (в), 3,0-3,1 (0,3,5-3,8 (ш), 4,0 (ш), 4,5 (б), 7,1-7,25 (ш), 7,55-7,65 (т), 7,97-8,05 (ш)

ЯМР С13- спектр, а, м. д. 35,622,50,472,51,761,63,352,68,710,71,185,71,391, 71,594,115,829,121,065,122,686,126,844,135,550, 175,602,179,532

Элементный анализ, % Вычислено: С, Н, N Найдено: С, Н, N 58,93,6,25,6,25 59,01,6,06,6,34

Молекулярная масса: найдено вычислено 451,6 448,3

Температура плавления, °С 129-132

Синтез интерферона отмечен, начиная с 4-х часов после введения метил-глюкамина акридонацетата, и составил соответственно 360 и 620 Ед/мл, при разных дозах. Максимальный пик продукции интерферона отмечен на 18 часах после его введения, составив соответственно 80 ООО и 104 ООО Ед/мл. К 24 часам после его введения отмечено снижение в 250 раз уровня индуцированного интерферона при вводимой дозе 100мг/кг и в 83,8 раза при вводимой дозе 50 мг/кг. К 48 часам уровень синтезированного интерферона снизился до 10 Ед/мл, независимо от дозы (табл. 2).

Таблица 2

Синтез интерферона в зависимости от дозы метилглюкамина акридонацетата

Доза препарата Титры интерферона (Ед/мл) после парентерального введения циклоферона в течение 48 часов

1 2 4 8 18 24 48

100 мг/кг 10 20 360 720 80000 320 10

50 мг/кг 10 10 620 1320 104000 12400 10

Кроме этого, нами изучена продукция интерферона в органах и тканях экспериментальных животных на пике продукции интерферона, вводимого в дозе 50 мг/кг. Циклоферон индуцировал высокие титры эндогенного интерферона в селезенке, легких и мышцах, а также обнаруживался в кишечнике. Следует отметить преодоление препаратом гематоэнцефалического барьера, о чем свидетельствовало его обнаружение в мозговой ткани (табл. 3).

Таблица 3

Продукция эндогенного интерферона в различных органах животных под действием метилглюкамина акридонацетата

Препарат, доза Титры интерферона (МЕ/л) в органах экспериментальных животных

Селезенка Легкие Мышцы Кишечник Мозг

Циклоферон, 50 мг/кг 80000 1280 1280 640 320

Физиологический раствор (плацебо) 10 20 20 10 10

Результаты исследования свидетельствуют о синтезе эндогенного интерферона лимфоцитами периферической крови, в основном Т-лимфоцитами, а также спленоцитами экспериментальных животных. Установлена принадлежность интерферона, индуцированного метилглюкамином акридонаце-татом, к типу а, что может указывать на наличие противовирусного эффекта у препарата (табл. 4).

Таким образом, Ы-метилглюкамин является для АУК наиболее предпочтительным противоионом с целью перевода ее в водорастворимое, т. е. биологически активное, состояние, как в физико-химическом, так и биологическом плане. Метилглюкамина акридонацетат-1 -дезокси-1 -Ы- [метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-0-глюцитол является оригинальным, ранее нигде не зарегистрированным соединением (Евразийский патент №000382 от 22.01.1998), обладающим пролонгированной интерфероногенной актив-

ностью в отношении всех типов интерферона. Веществу было присвоено торговое название «Циклоферон»5.

Таблица 4

Титры эндогенного интерферона в ответ на введение метипглюкамина акридонацетата в культурах клеток

Культура клеток Время забора материала (ч) с момента обработки культуры препаратом (доза 200 мкг/мл), титры ИФН (МЕ/л)

24 48 72 96 120

Спленоциты 2500 1280 5120 640 80

Лимфоциты крови 2500 1280 2500 160 10

Т-лимфоциты 2500 1280 5120 1280 160

В-лимфоциты 10 40 80 10 10

Для лекарственной формы циклоферона была выбрана концентрация ме-тилглюкамина акридонацетата, близкая к максимально возможной, а именно -22,5 % или в перерасчете на АУК 12,5 %. Ампула объемом 2 мл для однократного введения препарата содержит 450 мг циклоферона (250 мг АУК).

При изучении безопасности циклоферона установлено, что величины среднесмертельных доз циклоферона позволяют отнести 12,5% раствор циклоферона к малотоксичным лекарственным веществам. При этом токсические дозы превышали средние терапевтические в десятки и сотни раз, свидетельствуя о большой широте терапевтического действия, хорошей переносимости и безвредности препарата.

Подострое (30 дней) и хроническое (180 дней) ежедневное парентеральное введение циклоферона экспериментальным животным в дозах, превышающих рекомендованные для человека в 5-100 раз, не оказывало вредного воздействия на основные адаптационные системы (нервную, сердечно-сосудистую, кроветворную, выделительную, дыхательную), обмен веществ, общее состояние и развитие, основные гомеостатические параметры организма. Следует отметить также отсутствие у циклоферона раздражающего действия на стенки сосудов, покровные ткани (кожу, подкожную клетчатку), мышцы и апиро-генность препарата. Все это относится как к грызунам, так и не грызунам, т. е. свидетельствует об универсальном характере безвредности препарата.

Циклоферон при парентеральном, как внутривенном, так и внутримышечном, введении быстро проникает в кровь, достигая максимальных концентраций через 30 минут, определяется в крови в течение 6 часов (рис. 5). Препарат практически полностью экскретируется за 24 часа (элиминация из организма осуществляется главным образом за счет почечной экскреции).

С целью установления фармакологической активности циклоферона проведено изучение его локализации в клетке, взаимодействие с ДНК, а также влияние на транскрипцию генов цитокинов (IFN-a, TNF, IL-2).

Связывание циклоферона с ДНК зависит от рН среды, при рН 4,5-4,7 связывание прекращается, о его полноте судили по флюоресценции N-мети-лглюкамина акридонацетата. Установлен факт связывания одной молекулы

5 Свидетельство на товарный знак №123546.

140120 -

0 -I-1-1-1-1-1-1 Iй*-1-1-г-1

01 23456789 10 11 12

Время, Ч

Рис. 5. Динамика концентрации цикпоферона в организме экспериментальных животных

с двумя парами нуклеотидов в ДНК, а также связывание с дуплексами, составленными комплементарными 20-членными олигонуклеотидами. Обработка клеток моноцитарной линии U-937 приводила к резкому нарастанию концентрации РНК в клетке, превышая в 11 раз контрольную (составив 250 мкг, против 23 мкг в фоновом исследовании). Таким образом, взаимодействие циклоферона с клетками опосредовано экспрессией в них специфического ядерного рецептора и/или эффекторного белка, обладающих невысокой аффинностью к соединению. При связывании с рецепторами запускается каскад реакций, приводящий к усилению синтеза интерферона, концентрация которого нарастает от 2 до 6 часов инкубации, превышая исходный уровень в 2,6-4 раза. Транскрипция гена мРНК интерферона альфа уже к 6 часам от начала воздействия на клетки достигает максимума, превышая фоновый уровень в 29-44 раза, указывая, что индукция этого гена есть первичный ответ клеток моноцитарной линии U-937. Нечувствительность генов TNF и IL-2 к воздействию говорит об избирательности по отношению к синтезу цитокинов, свидетельствуя о приоритетной роли лиганд-рецепторных взаимодействий в сравнении с влиянием непосредственно на ДНК.

В процессе отработки технологии инъекционной лекарственной формы циклоферона было установлено, что для получения раствора препарата нужной концентрации нет необходимости выделять соль АУК с МГА в виде твердой субстанции для последующего растворения ее в нужной концентрации. Проще, дешевле и технологичнее готовить раствор из исходных компонентов - АУК и МГА непосредственно перед розливом в ампулы, смешивая расчетное количество компонентов в определенном объеме воды для инъекций.

Таким образом, разработанная технологическая схема получения циклоферона для инъекций состоит из следующих стадий:

1) приготовления раствора препарата путем растворения в воде для инъекций расчетных количеств АУК и МГА в эквимолярных соотно-

шениях;

2) стерилизующей фильтрации полученного раствора препарата;

3) розлива в ампулы по 2 мл и запайки;

4) стерилизации циклоферона в ампулах;

5) маркировки и упаковки готовой продукции6.

Лекарственная форма препарата была усовершенствована (Евразийский патент 002462 от 22.02.2001), так как экспериментальными исследованиями установлено, что добавление к раствору избытка МГА, в количестве до 1 % сверх расчетного, улучшало физико-химические свойства.

Увеличение избытка МГА свыше 1 % вызывало увеличение рН раствора выше 8,0, что нецелесообразно для препаратов с парентеральным методом введения.

Добавление избытка МГА в количестве 0,05-1% от расчетного значения приводило к:

• стабилизации рН раствора препарата, что не допускало его падения после стерилизации, что объясняется увеличением буферной емкости раствора;

• уменьшению относительной вязкости и осмолярности раствора, что существенно улучшало его технологические свойства при розливе в ампулы. Это связано со способностью Ы-метилглюкамина вызывать структурирование раствора с образованием крупных межмолекулярных комплексов;

• увеличению длительности хранения готовой продукции на 48 % (с 25 до 37 месяцев) при 0°С и на 31 % (с 29 до 38 месяцев) при 30°С. Это улучшает потребительские свойства препарата, так как продлевает срок его годности при хранении в надлежащих условиях до 3 лет.

В соответствии с новыми требованиями МЗ РФ «Циклоферон раствор для инъекций 12,5%» перерегистрирован в РФ. Регистрационное удостоверение №001049/03-2002. Качество препарата соответствует требованиям Фармакопейной статьи предприятия (ФСП), утвержденной в установленном порядке.

2. Механизм действия и фармакологическая активность циклоферона

Влияние ПТО-а и циклоферона на иммунореактивность организма при вирусных инфекциях осуществляется за счет ингибиции ТЬ2-цитокинов. У адекватно ответивших на терапию ПЭД-а отмечается повышение уровня 1РМ-у и 1Ь-2 и полноценно реализуется Т-клеточный ответ. У неответивших пациентов наблюдается увеличение Т-клеточной реактивности и смещение ТЬ ответа в сторону 1112-цитокинового спектра.

Проведенные исследования на клеточных культурах при действии циклоферона и вируса гепатита С подтвердили важность активации генов ТЫ-цитокинов. Наблюдаемое подавление вирусного размножения, по-видимому, тесно связано с активацией генов ТИ^-у и 1Ь-2, а также с подавлением

'Лабораторный регламент N«64-23057866-002-93 на получение лекарственной формы циклоферона для инъекций. СПб., 1993; Промышленный регламент на производство циклоферона ПР 64-23057866-012-01. СПб., 2001.

экспрессии генов ТЫБ-а и И-6. Активация генов 1Ь-4, по-видимому, также важна, поскольку наблюдается в обеих циклоферон-обработанных инфицированных клеточных культурах (табл. 5).

Таблица 5

Исследование цитокинового спектра (на модели линии клеток 5\У-13)

мРНК ДЛЯ ЦИТОКИНОВ Клетки+ циклоферон Клетки + вирус + циклоферон Ви рус

ККл Кв

IFN-a + + + -

IFN-Y + + + -

ИЛ-lb + + + +

ИЛ-2 + + + -

ИЛ-4 + + + -

ИЛ-6 + + + -

И Л-8 + + - -

ИЛ-10 + + + +

ИЛ-12 + + + +

ИЛ-18 + + + +

ФНО-a + + + +

Примечание:«+» - наличие мРНК;«-» - отсутствие мРНК; ККл - контроль клеток; KB - контроль вируса.

Известно, что аномальные или дефектные формы вирусов образуются в процессе внутриклеточного цикла развития вирусов или под действием различных экзогенных воздействий (химических, < »изических и биологических). В ряде случаев размножение вирусов подавляется дефектными частицами, которые известны как дефект-интерферирующие частицы (ДИ-частицы), препятствующие нормальной репродукции вируса в клетках, что приводит к подавлению цитоцидного действия вируса (Луриа С. Е., 1981)7, а накопление ДИ-частиц в инфицированном организме может привести к самоограничению инфекции, обеспечивая защиту от болезни и смерти, при этом вирус может находиться в клетках в скрытом состоянии (Holland et al„ 1980)8.

После того как вирус закрепился в организме «хозяина», для него становится крайне неблагоприятным продолжающееся повреждение тканей, ведущее к гибели. Одним из механизмов регуляции избыточного количества вируса может служить образование дефектных геномов, которые накапливаются при достижении высоких местных концентраций вируса, ослабляя его летальное действие на клетки (Holland, 1989).

Мы предположили, что циклоферон, по-видимому, способен создать подобный эффект (образование ДИ-частиц, являющихся антивирусами) в организме больных СПИДом и, используя «эффект Ди-частиц», добиться положительного эффекта в ограничении репликации ВИЧ-1. С помощью электронно-микроскопических методов изучено влияние циклоферона на

'Луриа С. Е. Общая вирусология. М.: Мир, 1981.680 с.

•Holland J.J. et al. // Comprehensive Virology. V. 16 / Ed. by H.Fraenktl-Conrat and R. R. Wagner. N. Y., 1980. P. 137-192.

размножение ВИЧ-1 и образование ДИ-частиц в культуре клеток человека (МТ-4) (табл. 6), позволив нам установить два неизвестных ранее явления:

Таблица 6

Продукция ВИЧ в контрольных и опытных культурах лимфоцитов

Культура клеток Клеток

Почкующихся вирусов Внеклеточных вирионов Дефектных частиц

Контрольная, без обработки 98 157 53

Опытная, после обработки циклофероном 112 109 435

• Обработка клеток циклофероном снижает на ~ 30% число внеклеточных вирионов, что свидетельствует о достоверном ингибировании продукции ВИЧ.

• Циклоферон почти в 9 раз повышает образование неполноценных дефектных частиц, отличающихся от обычных форм ВИЧ меньшей величиной и редуцированным нуклеоидом. Некоторые дефектные частицы содержат только одну белковую капсулу сердцевины, т. е. полностью лишены инфекционности.

Таким образом, циклоферон, частично подавляя репродукцию ВИЧ, вызывает повреждение генома почти у 90 % формирующихся вирионов потомства, которые утрачивают способность вызывать продуктивную инфекцию и могут служить естественной анти-ВИЧ вакциной, стимулируя реакции специфического иммунитета.

Подобные исследования нами проведены с использованием вируса простого герпеса (табл. 7). В результате установлено, что более 90% внутриядерных капсидов, сформировавшихся в присутствии циклоферона, не содержали ДНК и, следовательно, были неинфекционными.

Таблица 7

Дефектные вирусные частицы в клеточных культурах

Культура клеток Vero, зараженная ВПГ Число внеклеточных вирионов

Общее количество Покрытых оболочкой Капсидов, лишенных оболочки % ДИ-частиц

Контрольная, без обработки 2435 1798 637 26

Опытная, обработанная ЦФ в дозе 50 мкг/мл 287 32 255 89

Следовательно, циклоферон, снижая эффект вирус-индуцированного блокирования синтеза собственных белков клетки на стадии внутриядерной сборки вирусных капсидов, в значительной степени блокирует инкорпорацию вирусной ДНК в пресформированные капсиды; на поздней стадии репликативного цикла ВПГ-1 препятствует «одеванию» вирусных капсидов в липопротеидную оболочку и выходу вирусного потомства.

В результате определены возможные механизмы антивирусного эффекта циклоферона через интенсивную индукцию образования ДИ-частиц,

дополнительно к ИФН-индуцирующему, цитокин-регулирующему и противовирусному действию препарата, добавляя его влияние на специфические и неспецифические реакции иммунной системы.

Обсуждая результаты исследований по изучению антиканцерогенной активности циклоферона, следует отметить, что (модель лимфосаркомы Плиса) циклоферон уменьшал (в 4 раза) число незрелых ядросодержащих эритроцитов крови, т. е. способствовал нормализации процесса эритропоэза у животных с лимфосаркомой, повышая при этом эффективность химиотерапии. Оценивая влияние циклоферона на канцерогенез кишечника (индуцируемого 1,2-диметилгидразином), установлено торможение (в 1,5 раза) процесса возникновения опухолей, вызванных химическим канцерогеном, в различных отделах кишечника (составив 59,0 против 87,0 %). Наиболее эффективно, в плане торможения канцерогенеза, введение циклоферона в фазе промоции, поскольку влияние циклоферона обусловлено не действием на метаболизм канцерогенеза и повреждение ДНК, а стимуляцией интерферона, индукцию которого вызывает циклоферон.

Оценивая влияние циклоферона на пролиферативную активность и ме-тастазирование опухолей (модель карциномы легких Льюиса), показано, что циклоферон оказывает ингибирующее действие на карциному Льюиса, увеличивая латентный период формирования опухолевых узлов, замедляя рост опухолей, снижая (в 2 раза) митотическую активность опухолевых клеток, уменьшая число метастазов (до 50,0, против 83,0%) в легких; максимальный ингибирующий эффект (снижение числа животных с метастазами до 20,0 против 40,0%) установлен при комбинированной терапии циклоферона с циклофосфаном.

Рассматривая механизм репаративного действия циклоферона (модель криогенной язвы), необходимо отметить, что циклоферон укорачивал сроки заживления язвенного дефекта, снижал интенсивность процессов ПОЛ, вызывал заживление экспериментальной язвы в 85-100% случаев (табл. 8).

Комбинация циклоферона с солкосерилом значительно превосходит эффект терапии монопрепаратов по качеству заживления язвенного дефекта и восстановлению морфофункциональной структуры слизистой оболочки кишки.

Приведенные исследования по изучению влияния циклоферона на параметры иммунного ответа, включая и цитокиновый, свидетельствуют о сложной структуре системы цитокинов, которая четко структурирована и обеспечивает определенную последовательность подключения цитокинов, ответственных за различные направления защитных механизмов (рис. 6).

Баланс между цитокинами, продуцируемыми клетками ТЫ и ТЬ2, определяется, по мнению ряда исследователей9, различными факторами. В зависимости от характера патогенного агента, интенсивности, продолжительности антигенной стимуляции цитокины, продуцируемые различными типами Т-хелперов, могут действовать и как антогонисты, и как синергисты, дополняя друг друга.

9 Семененко Т. А. Клеточный иммунный ответ при гепатите С // Вирусные гепатиты. 2000. № 1(8). С. 3-9; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Иммунная система при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта // Вестник РАМН. 1997. №11. С. 13-17.

Таблица 8

Лечебное действие циклоферона, солкосерила и их комбинации при язве двенадцатиперстной кишки

Группы животных Площадь язвы (мм1) % заживления Продукты ПОЛ, мМ/л

Интактные - - 229 ±17,5

Контроль (язвенная болезнь) 15,9± 1,2 0 480 ±22,6*

Лечение солкосерилом в динамике 5-е сутки 6,4 ±0,43* 0 303 ±16,6*

10-е сутки 2 ±0,54* 30 263 ±11,0*

15-е сутки 0,14 ±0,07* 90 236 ±13,9

20-е сутки 0* 100 220 ±17,3

Лечение циклофероном в динамике 5-е сутки 8,7 ±1,03* 0 315±13,1*

10-е сутки 2,6 ±0,86* 30 260 ±18,4*

15-е сутки 0,3 ±0,03* 85 250 ±23,1*

20-е сутки 0* 100 226 ±12,2

Лечение солкосерилом в комбинации с циклофероном в динамике 5-е сутки 5,9 ±0,97* 0 290 ±23,4*

10-е сутки 2 ±0,54* 40 270 ±11,7*

15-е сутки ОД 2 ±0,04* 90 225±11,7*

20-е сутки 0* 100 225 ±20,4*

- достоверные отличия от показателей в интактной группе.

IL-2 +

IL-4 +

11.-10-

Обозначения:

жирными линиями отмечены пути дифференцировки клеток,

тонкими - влияния, опосредованные цитокинами, указанными около линий (сплошные линии - установленные, штриховые - предполагаемые эффекты), « - » - ингибирующее действие, « + » - усиливающее действие.

Рис. б. Схема регуляции образования и функционирования субклассов СП4+ клеток ТЫ и 1Ъ2 при действии циклоферона

Нарушение баланса цитокинпродуцирующей активности клетками ТЫ и ТЪ2 играет определяющую роль в развитии аутоиммунных состояний, хрони-зации процесса и прогрессировании заболевания. Повреждающее действие цитокинов обусловлено повышением активности циклооксигеназы, липоок-сигеназы с последующим образованием свободных радикалов в результате митохондриального транспорта и нарушения белкового синтеза10,11.

Определенный вклад в формирование иммунопатогенеза хронических вирусных инфекций вносят цитокины (ТОТ-а, 1Ь-12 и 1РМ-а) - медиаторы воспалительных и клеточных иммунных реакций, а 1Ь-12, продуцируемый антигенпрезентирующими клетками в ответ на антигенный стимул, является одной из ключевых молекул в регуляции иммунного ответа макроорганизма. Регулируя баланс ТЬ1/ТЬ2, интерлейкин-12 модулирует функцию макрофагов через контроль синтеза И^Ы-у ТЫ-клетками, супрессирует продукцию 1%Е и усиливает 1}^}, активируя секрецию цитокинов клетками ТЫ за счет ингибирования ТЬ212.

3. Синтез и фармакологическая активность комплексных субстратных препаратов на основе №,Ы-метилглюкаммония сукцината

В основе нарушений функций организма лежат структурные изменения, обусловленные метаболическими расстройствами. Это определяет актуальность проблемы в целом и её значимость для теоретической и практической медицины. Сложная динамика развития гипоксии в организме, вовлеченность в неё широкого спектра функционально-метаболических систем объясняет сложность решения вопросов, связанных с антигипоксической защитой организма. Динамика нарушений электронтранспортной функции дыхательной цепи при разных формах гипоксии является фазовым процессом, зависящим от тяжести и длительности гипоксического воздействия13.

Действие антигипоксантов реализуется на уровне кислородтранспорт-ной функции или на клеточном уровне. Известно, что механизм развития гипоксии связан с нарушением окисления субстратов в тканях организма вследствие затруднения или блокады транспорта электронов в дыхательной цепи митохондрий, что приводит к повреждению мембран лизосом с выходом аутолитических энзимов в межклеточное пространство. Составной частью защиты является система ферментов, ответственных за инактивацию интермедиатов кислорода и свободных радикалов, а также ферментов, учас-

10 Cohen M. С., Cohen S. Cytokine fonction // Amer. J. Clin, pathol. 1996. Vol. 105. P. 589598.

11 Хаитов P. M., Пенегин Б. В. Иммунная система и заболевания желудочно-кишечного тракта // Вестник РАМН. 1997. 11. С.13-17.

12 Царегородцева Т. М., Серова Т. И. Цитокины в гастроэнтерологии. М., 2003. 96 с; Шичкин В. П. //Иммунология. 1998. №2. С. 9-13.

13 Юрьева Э. А. с соавт. Макроэргические адениннуклеотиды как показатель эффективности терапии энерготропными препаратами // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. С. 49-51.

твующих в разложении гидроперекисей. Это - супероксиддисмутаза, глута-тионпероксидаза, глутатиондегидроаскорбатредуктаза, каталаза, некоторые другие пероксидазы14.

Повышение устойчивости к гипоксии обеспечивают энергообеспечива-ющие интермедиаты цикла Кребса - фумаровая, лимонная и янтарная кислоты, включаясь в энергетический обмен как субстраты, направляя процесс окисления по наиболее экономичному пути.

Впервые роль перехода на преимущественное использование янтарной кислоты как субстрата окисления в митохондриях при гипоксических состояниях и роста активности сукцинатдегидрогеназы была обнаружена М. Н. Кондрашовой15. Повышение активности сукцинатоксидазной системы митохондрий является чувствительной характеристикой состояния клеточного дыхания при изменении физиологического состояния организма и в условиях воздействия гипоксии, и физической нагрузки, и ионизирующего воздействия и других факторов среды.

При гипоксии происходит комплексное функционально-метаболическое нарушение, в котором ведущую роль играет снижение уровня макроэргов - аденозинтрифосфата (АТФ) и креатинфосфата (КФ) в организме. Другим не менее важным фактором при гипоксии являются продукты свободнора-дикальных реакций.

Антиоксиданты в организме человека способны тормозить и/или устранять свободнорадикальное окисление за счет образования «радикальной формы антиоксиданта», т. е. образовывать малоактивный радикал, заменив кислород в активном свободном радикале16.

Высокая биологическая активность янтарной кислоты (ЯК) послужила предпосылкой создания на её основе ряда эффективных лекарственных препаратов. Однако биологическое действие ЯК in vivo ограничено вследствие плохой проницаемости через биологические мембраны, особенно в присутствии избытка анионов хлора. Для повышения ее биодоступности пытались использовать её липофильные производные - диметиловый и диэтиловый эфиры, гидролизующиеся в клетке до свободной формы или соли янтарной кислоты с липофильными катионами аммонийного типа.

Для выбора наиболее эффективной лекарственной формы для парентерального введения были исследованы различные ее водорастворимые соли: натрия сукцинат, аммония сукцинат и смешанная соль - Na.N-метилглю-каммония сукцинат (рис. 7), физико-химические характеристики которой представлены в табл. 9.

14 Герасимов А. М. Антиокислительная ферментная система цитозоля животных: Авто-реф. дисс.... д. м. н. М., 1981; Ланкин В. 3. II Биооксиданты. Черноголовка, 1986. С. 41-44.

15 Васин М. В., Королева Л. В. Активизация сукцинатоксидазной системы клеток при патофизиологических состояниях организма // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. С. 25-27.

" Дранник Г. Н. Витамины, витаминные препараты и антиоксидантные комплексы II Клиническая иммунология и аллергология. М., 2003. С. 351-362.

О О

% // <|нз

+ .X—СИ 2-СН 2-Сч | +

N30 о N Н2

СН 2

н—с—он

но—с—н

н—с—он

сн2он

Рис. 7.1-(1-дезокси-В-глюцитол-1-ил)-М-метиламмония натрия сукцинат (Ыа,И-метилглюкаммония сукцинат)

Таблица 9

Физико-химические характеристики Ыа^-метилглюкаммония сукцината

Свойства Значение

Внешний вид Аморфное гигроскопическое вещество

Растворимость Хорошо растворим в воде, диметилсульфоксиде, ди-метилформамиде. Малорастворим в спиртах. Нерастворим в эфире, бензоле, ацетоне, хлороформе

Брутто-формула С„Н,5Ш,Ка

Молекулярная масса, г/моль Найдено: 339 (криоскопически в диметилсульфоксиде) Вычислено: 335,3

Температура плавления, "С 69-70 (с разложением)

УФ-спектр Прозрачен

Спектр ПМР (ОМСО-су, м.д. 2,25с (ЗН СН3), 2,35с (4Н,СН,), 2,52 л (2Н,СН,), 3,45 м (6Н.СН)

Спектр ЯМР|3С (ОМСО-<у, м.д. 28,2 (СН ), 34,2 (СН,), 52,5 (СН2), 63,8 (СН), 70,2 (СН), 71,0 (СН), 71,4 (СН), 173,5 (СООН)

Элементный анализ Найдено, %: С 39,86; Н 7,36; N 4,07; О 43,04 Вычислено, %: С 39,40; Н 6,91; N 4,17; О 42,93

рН 1,5% раствора 7,2

О степени проницаемости через клеточные мембраны и, следовательно, о потенциальной биодоступности исследуемых солей янтарной кислоты судили по её антигипоксической активности на моделях нормобарической и гистотоксической гипоксии.

Применение Na.N-метилглюкаммония сукцината в качестве антигипок-санта показало высокое терапевтическое действие. Введение экспериментальным животным Na.N-метилглюкаммония сукцината (в дозе 50мг/кг и в дозе ЗООмг/кг) увеличило выживаемость экспериментальных животных, сохранив продолжительность их жизни от 28,4 до 51,2 мин, не уступая эффекту оксибутирата натрия, сохраняющего среднюю продолжительность жизни животных до 52,3 мин.

На модели гистотоксической гипоксии сукцинат натрия, в дозе 50мг/кг, увеличивал выживаемость животных на 142,5%, а вводимая доза в ЗООмг/кг - до 205,2 %, по сравнению с животными контрольной группы. Продолжительность жизни составила соответственно 107,2 и 134,9 мин, что в 1,5-1,2 раза ниже, чем в группе экспериментальных животных, получавших натрия оксибутират. Сукцинат аммония, в дозе 50мг/кг, приводил к увеличению продолжительности жизни животных до 111,6 мин, а повышение терапевтической дозы в шесть раз (300 мг/кг) увеличивало продолжительность жизни лишь до 128,9 мин, т.е. в 1,16 раза, а в контрольной (позитивной) группе продолжительность жизни равнялась 164,5 мин, т. е. была в 1,5-1,3 раза продолжительнее.

Na.N-метилглюкаммония сукцинат в низкой терапевтической дозе (50 мг/ кг в перерасчете на ЯК) на модели гистотоксической гипоксии максимально, по сравнению с другими солями ЯК, увеличил продолжительность жизни животных экспериментальной группы на 244,7%, составив 152,4 мин, что всего лишь в 1,1 раза меньше по сравнению с животными группы позитивного контроля.

Увеличение вводимой дозы Ыа,Ы-метилглюкаммония сукцината (до ЗООмг/кг) незначительно увеличивало продолжительность жизни животных, составив 162,7 мин, против 152,4 мин, при дозе 50 мг/кг, продолжительность жизни животных практически не отличалась от таковой животных, получавших оксибутират натрия (164,5 мин).

Различие в антигипоксическом эффекте Na.N-метилглюкаммония сукцината на экспериментальных моделях гипоксии обусловлено отличиями в метаболических нарушениях при использованных нами моделях гипоксии. При нормобарической модели гипоксии нарушается процесс окисления/восстановления в дыхательной цепи митохондрий с нарушением процесса переноса электронов с последующим уменьшением количества макроэргов в тканях, и хотя янтарная кислота, как энергодающий субстрат, включается в цикл Кребса, но из-за блокады дыхательной цепи митохондрий антигипок-сический эффект Na.N-метилглюкаммония сукцината при нормобарической гипоксии выражен менее значительно.

При гистотоксической модели гипоксии фторид натрия вызывает блокаду гликолиза, но при этом дыхательная цепь продолжает функционировать. Янтарная кислота, как субстрат цикла Кребса, активирует процессы аэробного окисления, поставляющего электроны для дыхательной цепи митохондрий, оказывая антигипоксическое действие.

Выраженное антигипоксическое действие Na.N-метилглюкаммония сукцината, по сравнению с другими солями янтарной кислоты, обусловлено наличием в молекуле фрагмента МГА, образующего стабилизированный

водородными связями полиспирта комплекс, легко переносящий янтарную кислоту через поляризованные клеточные мембраны. Немаловажное значение для увеличения антигипоксического действия янтарной кислоты в Ыа,М-метилглюкаммония сукцинате имеет наличие у МГА антиоксидантных свойств, обусловленных образованием стабильных комплексов с ионами железа для синтеза железосодержащих структур и увеличением метаболических возможностей по антиоксидантному противодействию17, повышая устойчивость цитохромоксидазы к действию радикальных частиц, образовавшихся под воздействием факторов, способствующих их образованию.

Субстраты цикла Кребса (малонат, оксалоацетат, глутамат) обладают антиоксидантными свойствами и способны ингибировать генерацию супероксидных радикалов в модельной системе при аутоокислении в щелочной среде. Большинство NAD-зaвиcимыx субстратов (малат, пируват, цитрат) подобными свойствами не обладают, но можно полагать, что в цитолизе клетки и в матриксе митохондрий эти соединения проявляют антиоксидантные свойства, защищая от токсического действия супероксидных радикалов18.

Переход на преимущественное окисление сукцината является способом повышения устойчивости клеток к гипоксии, позволяющим поддерживать функциональное состояние цитохромоксидазной фазы энергетического процесса (Лукьянова Л. Д., 2003)19. Накопление сукцината ускоряет выход клеток из низкоэнергетического состояния при переходе от гипоксии к нормоксии, так как сукцинат используется в этом случае митохондриями в аэробной фазе энергопродукции20.

Таким образом, Ма.Ы-метилглюкаммония сукцинат (веществу присвоено торговое название «Реамберин»), обладающий антигипоксическим и ан-тиоксидантным действием, является наиболее оптимальным соединением для создания субстратных комплексов, а МГА, раннее считавшийся только солеобразователем, обладает физико-химическими и фармакологическими свойствами, на основе которых целесообразно конструировать перспективные лекарственные препараты. МГА является избирательным переносчиком активных компонентов (как янтарной, так и акридонуксусной кислоты), и выбран нами как наиболее перспективное соединение.

Учитывая, универсальный характер фармакологической активности реамберина, на его основе разработаны комплексные субстратные антиги-поксанты/антиоксиданты для коррекции процессов свободнорадикального окисления при гипоксических и ишемических нарушениях (табл. 10).

Как видно из представленных данных, ионный состав препаратов оптимально сбалансирован и приближается к составу плазмы крови (табл. 10). Часть представленных субстратных композиций зарегистрирована как:

реамберин. 1.5% раствор для инфузий. - дезинтоксикационное средство при экзогенных и эндогенных интоксикациях различного генеза;

,7Венедиктова Н. И. с соавт. //Митохондрии в патологии. Пущино, 2003. С. 144-147.

"СиротаТ.В.//Митохондрии в патологии. Пущино,2003. С. 110-112.

"Лукьянова Л. Д. // Митохондрии в патологии. Пущино, 2001. С.49-51.

ю Маевский Е. И. с соавт. Гипоксия. Механизмы. Адаптация. Коррекция. М., 1999. С. 43-44.

Таблица 10

Физико-химические характеристики комплексных субстратных композиций на основе реамберина

Параметры Плазма крови человека Реамберин, 1,5% раствор для инфузий Реоплазмин, раствор для инфузий Ремаксол, раствор для инфузий Цитофлавин, раствор для внутривенного введения */** Осмофузин, раствор для инфузий

Концентрация реамберина, в % - 1,5 1,5 1.5 1,5/0,75 1,5

Концентрация натрия, моль/л 130-157 147 147 147 196/175 -

Концентрация калия, моль/л 3,4-5,3 4 4 4 - -

Концентрация магния, моль/л 0,78-0,91 1,2 1,2 1,2 - -

Хлориды, моль/л 100-120 109 109 109 154/154 -

Рибоксин, г/л - - - 2 1,0/0,5 -

Метионин, г/л - - - 0,75 - -

Никотинамид, г/л - - - 0,25 0,5/0,25 -

Полиэтиленгликоль-20000, г/л - - 30 - - -

Рибофлавина моконуклеотид, г/л - - - - 0,1/0,05 -

Осмолярность, мОс-ммоль/л 275-295 314-382 311-380 296-362 399-487/340-416 743-913

РН 7,2-7,4 6,0-8,0 6,0-8,0 6,0-8,0 6,0-7,5 6,5-8,5

Вязкость динамическая, мПас 1,84-1,96 0,708-0,944 1,83-2,06 0,715-0,951 - 1,03-1,25

* Показатели для данного препарата приведены с учетом разведения 10мл (1 ампула) в 200мл 0,9% раствора натрия хлорида.

** Показатели для данного препарата приведены с учетом разведения 10 мл (1 ампула) в 400 мл 0,9% раствора натрия хлорида.

цитофлавин. раствор для внутривенного введения, - как метаболический корректор, ориентированный на нормализацию состояний, сопровождающихся нарушением свободнорадикального гомеостаза (антиоксидант).

По остальным композициям закончено проведение их доклинического изучения и подготовлены необходимые нормативно-технические документы для представления препаратов на регистрацию.

Реоплазмин, раствор для инфузий. - потенциально ориентирован как плазмозамещающий препарат с антигипоксантной/антиоксидантной активностью при массивных кровопотерях, сопровождающих критические состояния.

Ремаксол. раствор для инфузий. - ориентирован как антигипоксическое средство при состояниях, сопровождающихся нарушением метаболизма и энергетического обмена. Композиция обладает выраженным гепато-не-фропротекторным эффектом за счет стимуляции распада жировых включений в паренхиматозных органах до ацетил-КоА, поступающего в цикл трикарбоновых кислот.

Осмофузин. раствор для инфузий. является осмотическим диуретиком; высокая концентрация реамберина (15%) обеспечивает эффективное снятие отека мозга и сопутствующего ему метаболического ацидоза при черепно-мозговых травмах, который нивелируется благодаря антигипоксическому эффекту янтарной кислоты, а метилглюкамин нейтрализует недоокисленные продукты метаболизма.

Резюмируя результаты исследований, полученных на экспериментальных моделях in vivo, следует отметить, что реамберин, 1,5 % раствор для инфузий, обладает антигипоксическим и гепатопротекторным действием, установленным на экспериментальных моделях острого отравления барбамилом, острой интоксикации хлористым аммонием на модели острого токсического гепатита. Кроме этого, отчетливо проявилось цитопротекторное и противо-ишемическое действие раствора, сравнимое с неотоном, особенно на ранней фазе инфаркта миокарда.

При остром нарушении мозгового кровообращения выявлены изменения в метаболическом статусе животных: повышение уровня лактата (на 194 %), снижение пирувата (на 54%), свидетельствующие об увеличении интенсивности анаэробного дыхания. При этом активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) увеличивалась на 107%, а активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ), поставляющей электроны в дыхательную цепь митохондрий, снижалась на 51 %,указывая на нарушение процессов энергообразования в ишемизированном мозге. Возрастала активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) и одновременно увеличивалось содержание диеновых конъюгатов на 78 %, а уровень малонового диальдегида увеличился на 54%, на фоне подавления системы антиоксидан-тной защиты - активность супероксиддисмутазы и уровень восстановленного глутатиона снижались, соответственно, на 42 и 35%.

Результаты исследования цитофлавина на модели острого нарушения мозгового кровообращения у крыс показали, что цитофлавин оказывал положительное действие на энергетический обмен головного мозга уже на первые сутки реперфузии. По сравнению с плацебо цитофлавин увеличивал концентрацию пирувата на 100%, снижал содержание лактата на 47%, при

этом ингибировал активность ЛДГ на 40% и усиливал активность сукци-натдегидрогеназы на 86% (величина соотношения лактат/пируват снижалась в 3,7 раза), свидетельствуя об увеличении доли аэробного пути образования энергии. К третьим суткам цитофлавин восстанавливал показатели энергетического метаболизма до исходного уровня. Оценка влияния цитоф-лавина и ноотропила на выживаемость экспериментальных животных при постишемическом повреждении головного мозга свидетельствует о сходстве их эффектов; так, гибель крыс спустя сутки после постишемической репер-фузии составила 30%, в то время как на фоне цитофлавина и ноотропила -10%.

Таким образом, цитофлавин оказывает выраженное противоишемичес-кое действие, снижая интенсивность ПОЛ, позитивно влияя на систему ан-тиоксидантной защиты.

В условиях гипоксии при резком снижении активности NAD-зависимых ферментов цикла Кребса остро встает необходимость активации альтернативных NAD метаболических потоков и, прежде всего, окисляющего янтарную кислоту сукцинатдегидрогеназного шунта. Для активации сукцинатде-гидрогиназы, которая по структуре является железосернистым флавопроте-ином, используют кофермент - рибофлавина мононуклеотид (рис. 8).

У рибофлавина установлено прямое антигипоксическое действие, связанное с увеличением активности флавинредуктаз и восстановлением уровня макроэргов - АТФ и креатинфосфата, и антиоксидантные свойства, обусловленные восстановлением окисленного глутатиона.

Транспорт рибофлавина в клетки осуществляется специальным белком-переносчиком. Проникновение рибофлавина через клеточную мембрану не зависит от рН и определяется только величиной трансмембранного потенциала.

Рибофлавин стимулирует утилизацию янтарной кислоты, активируя систему митохондриального транспорта дикарбоновых кислот цикла Кребса через глицерофосфатный «челночный» механизм, а янтарная кислота повышает трансмембранный потенциал, стимулируя транспорт рибофлавина через мембраны. Рибофлавин усиливает активность дегидрогеназ, восстанавливая ишемические повреждения, и ингибирует индуцируемое ионами Fe3+ пере-кисное окисление липидов в тканях.

Необходимо отметить, что при гипоксии для восстановления дыхательной цепи митохондрий необходима активация всех звеньев, как флавинат-, так и NAD-зависимых ферментов (рис. 8).

Введение одного из фрагментов NAD - никотинамида (НА) активирует NAD-зависимые ферменты клеток, в том числе антиоксидантные системы убихиноновых оксиредуктаз, защищающих мембраны клеток от разрушения радикальными частицами.

Никотинамид - селективный ингибитор образующегося при ишемии фермента поли-АДФ-рибозилсинтетазы, приводящего к дисфункции внутриклеточных белков и последующему апоптозу клеток. Никотинамид, обладая нейропротективным действием, повышает в клетках содержание NAD и хо-лина, а механизм нейропротективного действия обусловлен ингибированием апоптоза, индуцированногсгферментомполи-(А!ДФ-рибозил)-полимеразы.

Рис. 8. Включение цитофлавина в цикл биологического окисления

Антиоксидантное действие инозина (рибоксина) реализуется комплексом взаимосвязанных метаболических путей:

« активацией синтеза NAD в митохондриях из никотинамида, где инозин выступает в качестве донора рибозы;

• стимуляцией анаэробного гликолиза с образованием лактата и NAD+; ингибированием фермента ксантаноксидазы и подавлением радикальных процессов;

• инозин, обладая нейропротективным эффектом при реперфузионном синдроме, потенциирует вазодилатирующий эффект аденозина, инги-бируя фермент аденозиндезаминазу.

Фармакологический эффект инозина при ишемии коррелирует со скоростью его транспорта через мембраны, определяемого специальным белком-переносчиком.

Янтарная кислота, обладая антиоксидантным действием, дезактивируя пероксидазы в митохондриях, усиливает активность NAD-зависимых ферментов, а никотинамид повышает ее фармакологическую активность. Взаимосвязь этих компонентов представлена на рис. 8.

У ремаксола установлен антитоксический и гепатопротекторный эффект, подтвержденный на моделях экспериментального токсического и аденовирусного гепатита, а также на моделях алкогольной интоксикации, острой интоксикации ядовитыми грибами и циклофосфаном. Наблюдалась активация тканевого дыхания, уменьшение недоокисленных метаболитов, снижение уровня цитолитических ферментов, нормализация перекисного окисления липидов. Установлена значительная антиоксидантная активность препарата за счет купирования изменений в системе глутатиона.

Противошоковая активность реоплазмина подтверждена при экзо- и эн-дотоксикозе, в условиях шокового состояния (интоксикация, вызванная введением солей свинца, экспериментальный геморрагический шок и ожоговая травма). В экспериментальных исследованиях in vivo реоплазмин по своей фармакологической активности превосходил препарат сравнения ХАЕС-стерил.

На моделях черепно-мозговой травмы показано отсутствие летальности животных, получавших осмофузин, на фоне снижения метаболического ацидоза, в сравнении с животными, получавшими маннитол. Кроме этого, препарат активно проявлял антиоксидантные и антигипоксантные свойства. Показано его позитивное влияние на психические познавательные процессы экспериментальных животных (обучение, возбуждение, торможение и память).

4. Влияние цитофлавина на интерферониндуцирующую активность циклоферона

Антиоксидантные комплексы, принимая участие в метаболизме дыхания клеток, обладают и иммунотропной активностью, что особенно важно при воздействии оксидантов (свободных радикалов), образующихся в процессе многоступенчатых окислительных реакций, приводящих к повреждению ферментных структур клеток и биологических мембран, оказывая прямое

воздействие на внутриклеточные структуры, угнетая клеточный и гуморальный иммунный ответ. Антиоксиданты в организме человека способны тормозить и/или устранять свободнорадикальное окисление за счет образования «радикальной формы антиоксиданта», т. е. образовывать малоактивный радикал, заменив кислород в активном свободном радикале11.

В связи с вышеизложенным нам представлялось весьма интересным оценить противовирусную и интерферониндуцирующую активность циклофе-рона под воздействием цитофлавина.

Противовирусный эффект цитофлавина в отношении вируса в культуре фибробластов эмбриона человека при 4-часовой ее обработке препаратом определялся в концентрации от 0,6мг/мл до 1 мкг/мл, а при 24-часовой обработке - в концентрациях от 3 мг/мл до 0,06 мкг/мл (табл. 11).

Таблица 11

Скрининг цитофлавина в культуре фибробластов человека (М19) <1

Концентрация цитофлавина в 1 мл среды Время экспозиции с культурой

4 часа 24 часа

ЦТД препарата 50% ЦПД вируса 1Ш, ед/мл ЦТД препарата 50% ЦПД вируса 1Ш, ед/мл

300-6 мг + +

Змг - - - - + 4

1,5 мг - - - - + 8

0,6 мг * + 16-64 (40) * + 8-16 (12)

300 мкг * + 8 * + 4

150-3 мкг » + 2-4-8 (4,6) * + 4-8 (6)

1,5 мкг-1 мкг * + 4-8 (6) * + 8

0,6-0,06 мкг * + 2-4(3) * + 4-8(6)

* Отмечается улучшение качества культуры клеток по сравнению с контролем; ЦТД м -токсичность препарата; 50 % ЦПД вируса - минимальное количество вируссодержащего материала, вызывающее цитопатогенный эффект в половине взятых в опыт проб с культурой клеток; ПЭД интерферона.

Пробы культуральной жидкости, обработанные цитофлавином (в концентрации от 0,6 мг/мл до 0,06 мкг/мл) при 4-часовой обработ- { ке культуры клеток препаратом и в дозах от Змг до 0,06 мкг/мл (при 24-часовой экспозиции), обеспечивали 50,0%-ную противовирусную резистентность цитофлавина. Следовательно, противовирусный эффект $ цитофлавина, в отношении вируса УБУ, в культуре фибробластов эмбриона человека определялся в широком диапазоне концентраций.

МПК (максимально переносимая концентрация) составила 1,5 мг/мл.

Определяя интерфероногенную активность цитофлавина (при использовании его максимально активной концентрации - 0,6 мг/мл), уровень эндогенного (сывороточного) интерферона в лимфоцитах перефирической крови не определялся, составляя менее 2,0 Ед/мл (табл. 12). Индукция эндогенного

21 Дранник Г. Н. Витамины, витаминные препараты и антиоксидантные комплексы II Клиническая иммунология и аллергология. М., 2003. С. 351-362.

интерферона, при последовательном введении препаратов (цитофлавин-циклоферон), стала отмечаться при соблюдении временного интервала между введением указанных препаратов: в интервале 10-30 мин, составив лишь 4,0 Ед/мл, а при временном интервале в 60-90 мин, индукция интерферона возрастала в 3,6 раза, составив 14,4 Ед/мл.

Таблица 12

Влияние цитофлавина на индукцию интерферона циклофероном

Схема введения препаратов Ъггры Ед/мл

Циклоферон 3,9

Цитофлавин Менее 2,0

Цитофлавин +циклоферон одновременно 3,0

Цитофлавин + {10-30 мин) + циклоферон 4,0

Цитофлавин + (60-90 мин) + циклоферон 14,4

Обработка лейкоцитов крови цитофлавином показала, что уровень индукции эндогенного у-1РН не отличался от такового под воздействием цик-лоферона, составив 52,6 против 52,0 Ед/мл (табл. 13).

Совместное применение двух препаратов в последовательности «цикло-ферон + цитофлавин» с различным временным интервалом не вызывало дополнительной продукции у-1ГЫ, тогда как изменение последовательности введения препаратов: сначала цитофлавин, затем циклоферон, с удлинением временного интервала до 60-90 мин, стимулировало синтез в 2 раза, составив 104,0 Ед/мл против 52,6 (в комбинации цитофлавин + ФГА).

Таблица 13

Продукция под воздействием цитофлавина и в комбинации с циклофероном

Схема введения препаратов Титры у-1ЕМ, Ед/мл

ФГА 16,9

Циклоферон + ФГА 52,0

Цитофлавин + ФГА 52,6

Циклоферон + (10-30 мин) + цитофлавин + ФГА 41,6

Циклоферон + (60-90 мин) + цитофлавин + ФГА 41,6

Цитофлавин + (10-30 мин) + циклоферон + ФГА 64,0 +11,4*

Цитофлавин + (60-90 мин) + циклоферон + ФГА 104,0 +51,4*

ФГА - митоген фитогемагглютинин; * - разница показателя.

Цитофлавин оказывал и стимулирующее воздействие на синтез эндогенного а-1РМ (табл. 14), сопоставимое с эффектом циклоферона (соответственно 400,0,480 Ед/мл, против 151,6 Ед/мл в контроле).

Таблица 14 Продукция а-1БК под воздействием цитофлавина и в комбинации с циклофероном

Препарат, схема введения Титры а-1Ш, Ед/мл

ШУ 151,6

Циклоферон + ЫЭУ 480,0

Цитофлавин + ЖУ 400,0

Циклоферон + (10-30 мин) + цитофлавин + ЫБУ 491,4

Циклоферон + (60-90 мин) +цитофлавин + ЫОУ 592,0

Цитофлавин + (10-30 мин) +циклоферон + М5У 434,3 +34,3*

Цитофлавин + (60-90 мин) +циклоферон + ЫБУ 1024,0 +624,0*

ЫИУ-вирус болезни Ньюкастла; * - разница показателя.

Комбинация указанных препаратов в последовательности «цитофла-вин-циклоферон» при индукции a-IFN оказывается так же эффективной, но наилучшая аЛШ-индуцирующая активность (1024,0 Ед/мл) отмечается во временном интервале введения препаратов 60-90 мин, что более чем в 2 раза выше, в сравнении с индукцией под воздействием монопрепаратов.

Разработанная схема введения препаратов «цитофлавин + циклоферон» (с временным интервалом 60-90 мин), указывает на стимуляцию циклофероном продукции 1Ш-а и Ш^-у лейкоцитами цельной крови людей, причем максимальная стимуляция отмечается у лиц с изначально низкими показателями продукции интерферона, что указывает на перспективность применения данной схемы у пациентов с заболеваниями, сопровождающимися нарушениями метаболических процессов на фоне дисбаланса иммунной системы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Резюмируя представленные данные с позиций практической и социально-экономической значимости, следует указать на то, что результаты клинических испытаний циклоферона, 12,5 % раствора, реамберина 1,5 % раствора, и цитофлавина, раствора для внутривенного введения подтвердили их высокую клиническую эффективность при социально-значимых заболеваниях.

Для циклоферона показана высокая эффективность препарата при хронических медленных вирусных инфекциях (ВИЧ-инфекция, герпетическая инфекция, НВ-НС-вирусные инфекции, нейроинфекции).

Подтверждена эффективность циклоферона, 12,5% раствора, для предупреждения хронизации патологического процесса, хронический гепатит с низким уровнем репликации формировался лишь у 2,3 % больных, получавших циклоферон, против 11,8% пациентов, находившихся на базовой терапии, у которых сформировался хронический гепатит с высокой степенью активности.

При хронических гепатитах вирусной этиологии показана нормализация основных клинико-биохимических параметров и снижение уровня реп-

ликации вируса более чем у 75,0% пациентов. Установлено выздоровление более чем у 80,0% больных с острым гепатитом В. При ВИЧ-инфекции у 77,1% пролеченных отмечено снижение репликативности вируса при стабилизации субпопуляций лимфоцитов (СЭ^, СБ. , С03+). При герпесвирус-ной инфекции, за счет нормализации показателей Т-клеточного иммунитета, увеличилась длительность ремиссии в 2,5 раза, сократились в 2 раза и сроки разрешения высыпаний, на фоне полного исчезновения клинических признаков заболевания. Длительность стабильной ремиссии сохранялась более одного года.

Реамберин, 1,5% раствор для инфузий, зарегистрирован и разрешен для медицинского применения в качестве средства дезинтоксикации при экзогенных и эндогенных интоксикациях различного генеза. Реамберин применялся у пациентов при крайне тяжелых и тяжелых формах острых отравлений барбитуратами, этанолом, наркотиками, на фоне развившейся токсической и токсикогипоксической энцефалопатии. Введение препарата способствовало в течение первых двух суток сокращению длительности комы и искусственной вентиляции легких в 1,7; в 1,4 раза сокращало пребывание больных в отделении реанимации. Через 12 часов после инфузии реамберина у пациентов с тяжелыми отравлениями нейротропными ядами, на фоне тяжелого эндотоксикоза, отмечено восстановление метаболического статуса, улучшение функционирования деятельности печени и почек, а к третьим суткам наблюдалось значительное улучшение состояния больных, на фоне достоверного снижения маркеров токсикоза. Применение реамберина улучшало и состояние антирадикальной защиты организма, через 12 часов после начала введения препарата увеличивало содержание восстановленного глутатиона и снижался в 1,3 раза уровень малонового диальдегида, обеспечивая снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов.

Применение раствора цитофлавина для внутривенного введения при остром нарушении мозгового кровообращения в первые 24 часа от момента начала заболевания обеспечивало снижение в 3,2 раза уровня летальности больных (по данным многоцентровых клинических испытаний), составив 4,8 против 15,1 % в генеральной выборке в 650 человек. Применение цитофлавина у больных с токсической энцефалопатией (модель острых отравлений нейротропными ядами) обеспечило снижение в 3,3 раза уровня летальности, частоты возникновения вторичных осложнений и сокращение длительности пребывания пациента в отделении реанимации и интенсивной терапии.

Выводы

1. Синтезировано химическое соединение - 1 -дезокси-1 -Ы-[метил- (2-ак-ридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-0-глюцитол - циклоферон. По физико-химическим свойствам и требованиям безопасности отнесено к 5-й группе практически нетоксичных соединений; соединение обладает интерферонин-дуцирующей активностью (индукция интерферона тгаисходит на уровне транскрипции гена (мРНК а/(3 - интерферона) и не обусловлена посттранскрипционными процессами). Интерферон продуцируется лимфоцитами (в основном Т-лимфоцитами) и спленоцитами, характеризуясь продукцией «раннего» белка (начиная с 4 часов от момента введения препарата) в достаточно

высоких титрах, с пиком синтеза (от 80 ООО до 104 ООО Ед/мл) на 18 часах после введения. На пике продукции интерферона циклоферон индуцирует высокий уровень эндогенного интерферона в лимфотропных органах; его максимальная концентрация отмечается в селезенке, легких, мышцах и мозговой ткани, указывая на преодоление гематоэнцефалического барьера.

2. Показана противовирусная активность циклоферона, установленная в исследованиях in vitro и in vivo на экспериментальных моделях гриппозной, герпесвирусной, НС-вирусной инфекций, а также на моделях вируса иммунодефицита и клещевого энцефалита. Противовирусное действие соединения реализуется на уровне репликации вируса, за счет снижения эффекта ви-рус-индуцированного блокирования синтеза собственных белков клетки; на стадии внутриядерной сборки вирусных капсидов - блокированием инкорпорации вирусной ДНК в пресформированные капсиды; на поздних стадиях репликативного цикла препятствуя «одеванию» вирусных капсидов в ли-попротеидную оболочку и выходу вирусного потомства. Противовирусный эффект обусловлен увеличением количества дефектных частиц (ДИ-частиц) (что можно рассматривать как эффект последействия соединения, поскольку дополнительно образующийся интерферон, индуцирующийся ДИ-частица-ми, защищает клетки, неинфицированные вирусами, и здоровые), а также снижением вирус-индуцированного синтеза белка в клетке, опосредованного экспрессией в них специфического ядерного рецептора и/или эффектор-ного белка, взаимодействующего с соединением.

3. Показана противоопухолевая активность циклоферона, установленная в эксперименте на модели лимфосаркомы Плисса, карциномы Льюиса, на опухолях, индуцированных химическим канцерогеном (1,2,-диметилгидра-зин), и других моделях. Антиканцерогенная активность проявляется усилением терапевтического эффекта химиопрепаратов (в частности, циклофос-фана). Препарат (в диапазоне доз от 100 до 200 мг/кг) оказывает выраженное ингибирующее действие на опухолевый процесс, замедляя рост, снижая митоз клеток и число метастазов. Противоопухолевое действие обусловлено стимуляцией синтеза эндогенного интерферона в фазе промоции опухоли, а также опосредовано ингибированием функций ключевых ферментов дыхательной цепи митохондрий клетки - убихинонов и ингибированием связывания АТФ с митохондриальным АДФ/АТФ-зависимым транспортным белком, путем специфического ковалентного присоединения АУК по пептидной связи лизин-цестеин.

4. Выявлен репаративный эффект синтезированного циклоферона, реализующийся за счет синтеза гамма-интерферона, участвующего в процессах репарации и регенерации, что приводит к восстановлению поврежденного эпителия слизистой оболочки, обеспечивает сокращение сроков заживления язвенного дефекта, снижает интенсивность процессов перекисного окисления липидов, приводя к восстановлению морфологической картины эпителия.

5. Под воздействием циклоферона индуцируется целый каскад сигналов, включающих «цитокиновую сеть». Характер иммунного ответа зависит от доминирующего участия клонов CD4+ Th 1 -го и 2-го типа. Активация синтезированным соединением Thl (продуцирующих IFN-y, IL-2 и TNF-a), сти-

мулирует Т-лимфоциты и макрофаги, реализуя клеточный иммунный ответ. Активация ТЫ цитокинов, под воздействием циклоферона, индуцирует не только повышенную экспрессию 1Ь-12, но и обеспечивает переключение ТЫ) с синтеза ТЬ2-цитокинов (стимулирующих гуморальный иммунитет, за счет секреции 111-4,6,10) на ТЫ. Цитокин-корригирующее действие синтезированного соединения тесно связано с активацией генов 1Ш-у, 1Ь- 4 и 1Ь-12, а также с подавлением экспрессии генов ТЫБ-а и И-6.

6. Синтезированная смешанная соль Иа^-метилглюкаммония сукцинат - реамберин обладает выраженным антигипоксическим действием, не уступая по своей активности стандартному антигипоксанту - оксибутирату натрия. Антигипоксический эффект реамберина обеспечивается за счет эффективного транспорта янтарной кислоты через поляризованные Ы-метилг-люкамином клеточные мембраны. Антиоксидантный эффект реализуется за счет снижения прооксидантного эффекта ионов трехвалентного железа через образование стабильных комплексов с Ы-метилглюкамином и восстановление пула естественного антиоксиданта - восстановленного глутатиона.

7. Разработанные на основе реамберина комплексные субстратные композиции (цитофлавин, ремаксол, реоплазмин, осмофузин) по физико-химическому составу характеризуются как оптимальные сбалансированные композиции, максимально приближающиеся по составу к плазме крови человека, обладают антигипоксической, антиоксидантной активностью.

8. Ремаксол является гепатопротекторным препаратом, благодаря стимуляции распада жировых включений в паренхиматозных органах до ацетил-КоА, поступающего в цикл трикарбоновых кислот, нивелирует явления жировой дистрофии за счет наличия в своем составе комплекса метаболических компонентов - метионина, рибоксина и никотинамида. Антитоксический эффект ремаксола подтвержден на моделях экспериментального токсического гепатита, алкогольной интоксикации, интоксикации ядовитыми грибами и циклофосфаном. Фармакологическая активность ремаксола обеспечивается активацией тканевого дыхания, снижением продукции недоокисленных метаболитов, цитолитических ферментов и нормализацией процессов пере-кисного окисления липидов. Антиоксидантная активность препарата реализуется через систему глутатиона.

9. На моделях экзо- и эндотоксикоза, в условиях экспериментального шокового состояния установлено, что по своей фармакологической активности реоплазмин превосходит (отсутствие летальности животных, снижение уровня токсикоза, нормализация метаболических сдвигов и электролитного обмена) фармакотерапевтическую активность раствора гидроксиэтилиро-ванного крахмала. Позитивное влияние на функции ЦНС экспериментальных животных обеспечивается влиянием на познавательные психические процессы (возбуждение, торможение, обучение и память).

10. Осмофузин, являясь гиперосмолярным раствором, обеспечивает эффективное снятие отека мозга и сопутствующего ему метаболического ацидоза, который нивелируется благодаря антигипоксическому эффекту янтарной кислоты, за счет нейтрализации недоокисленных продуктов метаболизма И-метилглюкамином. На моделях экспериментальной черепно-мозговой травмы и токсического отека мозга, на фоне алкогольно-барбитуратной интоксикации,

показано отсутствие летальности в группе животных, получавших осмофузин, против 20-50% летальности животных в контрольной группе.

П.Фармакотерапевтический эффект цитофлавина проявляется в индуцирующем воздействии на активность ферментативного звена антиокси-дантной защиты: восстановлении пула низкомолекулярных антиоксидантов, тиол-дисульфидного равновесия и активности тиол-зависимых ферментов антиоксидантной защиты. Гепатопротекторная активность цитофлавина заключается в нормализации белоксинтезирующей, пигментообразующей и антитоксической функции печени экспериментальных животных. Одним из основных звеньев антиоксидантного эффекта цитофлавина является синтез восстановленного глютатиона в тканях. При изучении фармакокинетики цитофлавина установлено, что при внутривенной инфузии со скоростью около 2 мл/мин (в пересчете на неразбавленный цитофлавин) янтарная кислота и рибоксин утилизируются практически мгновенно и полностью, не определяясь в плазме крови. Для рибофлавина период полувыведения из плазмы составляет около 2 часов, стационарный объем распределения - около 40 литров, общий клиренс - около 0,3 л/мин. Для никотинамида период полувыведения из плазмы составляет около 1,3 часа, стационарный объем распределения - около 60 литров, общий клиренс - около 0,6 л/мин.

Резюмируя представленные данные с позиций практической и социально-экономической значимости разработанных препаратов следует указать на то, что результаты клинических испытаний 12,5 % раствора циклоферона, реамберина, 1,5 % раствора, и цитофлавина подтвердили их высокую клиническую эффективность при социально значимых заболеваниях: показана высокая эффективность циклоферона при хронических медленных вирусных инфекциях (ВИЧ-инфекция, герпетическая инфекция, НВ-НС-вирусные инфекции, нейроинфекции).

Реамберин, 1,5% раствор для инфузий, используется в качестве средства дезинтоксикации при экзогенных и эндогенных интоксикациях различного генеза (при крайне тяжелых и тяжелых формах острых отравлений барбитуратами, этанолом, наркотиками, на фоне развившейся токсической и токсикогипоксической энцефалопатии). Введение препарата способствует сокращению длительности комы и искусственной вентиляции легких в 1,7 раза, и в 1,4 раза сокращает пребывание больных в отделении реанимации. Применение реамберина улучшает и состояние антирадикальной защиты организма, увеличивая содержание восстановленного глютатиона и снижая (в 1,3 раза) уровень малонового диальдегида, обеспечивая снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов.

Применение раствора цитофлавина для внутривенного введения при остром нарушении мозгового кровообращения обеспечивает снижение (в 3,2 раза) уровня летальности больных (по данным многоцентровых клинических испытаний), составив 4,8 против 15,1% в генеральной выборке в 650 человек. Применение цитофлавина у больных с токсической энцефалопатией (модель острых отравлений нейротропными ядами) обеспечивает снижение (в 3,3 раза) уровня летальности, частоты возникновения вторичных осложнений и сокращение длительности пребывания пациента в отделении реанимации и интенсивной терапии.

Практические рекомендации

Разработанные, зарегистрированные и выпускаемые лекарственные препараты необходимо использовать в практическом здравоохранении, согласно разработанным нами и утвержденным МЗРФ инструкциям по их медицинскому применению. Циклоферон 12,5% раствор для инъекций, показан для применения при:

• хронических вирусных медленных инфекциях (герпес различной локализации, вирусный гепатит В и С, ВИЧ-инфекция);

• нейроинфекциях (серозный менингит, менингоэнцефалит, клещевой боррелиоз);

• вторичных иммунодефицитных состояниях различного генеза;

• в комплексной терапии аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артрит, системная красная волчанка, дегенеративно-дистрофические заболевания суставов).

Реамберин, 1,5 % раствор для инфузий, показан как дезинтоксикационное средство при;

• экзогенных и эндогенных интоксикациях различного генеза. Цитофлавин, раствор для внутривенного введения, ориентирован на неврологическую, реаниматологическую, токсикологическую клинику.

Основными показаниями для него являются:

• острое нарушение мозгового кровообращения (в первые 24 часа);

• сосудистая, постгипоксическая и токсическая энцефалопатия при острых и хронических отравлениях, эндотоксикозах;

• посленаркозное угнетение сознания;

• полиневро- и ангиопатии.

Рекомендованные препараты необходимо применять в дозах, указанных в инструкциях для медицинского применения.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Первые итоги клинического применения циклоферона - индуктора интерферона / М. Романцов, Ф. Ершов // Врач. 1998. № 7. С. 37-40.

2. Влияние циклоферона на рост перевиваемых опухолей у крыс и мышей / М. А. Забежинский, И. Г. Попович // Вопросы онкологии. 1998. Т. 44. №4. С. 427-431.

3. Пятилетний опыт применения циклоферона в терапии СПИДа и ВИЧ-индикаторных инфекций/ В. А. Исаков, Ю. В. Аспель// ВИЧ, СПИД и родственные проблемы. 1998. Т. 1. № 1. С. 137.

4. Quality of life assesment in maligant limphoma patients IT. I. Ionova, A. A. Novic // Quality of life research. 1998.V.7.№7.P.609-610.

5. Индукторы интерферона/ M. Г. Романцов, Ф. И. Ершов // Иммунология. 1998. № 6. С. 43-44.

6. Влияние индуктора интерферонов циклоферона на рост перевиваемых опухолей у крыс и мышей / И. Г. Попович, М. А. Забежинский // Иммунология. 1998. № 6. С. 42.

7. Клинико-иммунологическая эффективность местного применения циклоферон-линимента в терапии вагинальных инфекций / О. В. Гал-

кина, И. M. Нестеров // Иммунология. 1998. № 1. С. 37-38.

8. Гематологические эффекты циклоферона при экспериментальной лучевой терапии глиом / С. Д. Иванов // Иммунология. 1998. № 1. С. 38-39.

9. Индукторы интерферона - перспективы применения в клинике / М. Романцов, Ф. Ершов // Врач. 1999. № 2. С. 36-40.

10. Применение циклоферона при экспериментальной лучевой терапии опухолей / С. Д. Иванов, Е. Г. Кованько // Вопросы онкологии. 1999. Т. 45. №4. С. 408-420.

11. Линимент циклоферона при заболеваниях, передающихся половым путем / С. Рыбалкин, Р. Савченко // Врач. 1999. №4. С. 36-37.

12. Динамика вирусологических и иммунологических показателей у детей с хроническим гепатитом при лечении циклофероном / К. А. Ма-лышкин, Л. Г. Горячева // Медицинская иммунология. 1999.Т.1.№3-4. С. 123-124.

13. Эффективность применения циклоферона при респираторных аллер-гозах у детей / М. Г. Романцов, К. А. Малышкин // Медицинская иммунология. 1999. Т.1. №3-4. С. 131.

14. Клинико-иммунологическая эффективность линимента циклоферона в лечении больных с некоторыми формами вагинальных инфекций / А. А. Тотолян, И. М. Нестеров // Медицинская иммунология. 1999. Т.1.№3-4. С. 138.

15. Применение циклоферона в терапии менингитов / В. А. Исаков, В. Д. Евграфов // Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. 1999. Т. 3.№ 1.С. 46.

16. Применение циклоферона у ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом/ Ю. Аспель, Ф. Ершов // Врач. 1999. № 6. С. 26-28.

17. Эффективность циклоферона в лечении вирус-ассоциированных воспалительных гинекологических заболеваний / Т. П. Оспельникова, С. С. Григорян // Вопросы вирусологии. 1999. Т. 44. № 3. С. 130-133.

18. Новый иммуномодулятор «Циклоферон» в комплексном лечении больных острыми нелимфобластными лейкозами / С. И. Моисеев, К. М. Абдулкадыров // Вопросы онкологии. 1999. Т. 45. №4. С. 405410.

19. Эффективность циклоферона при ВИЧ-инфицировании и оппортунистических заболеваниях у детей / Ю. Аспель, О. Козырев // Врач. 1999. №7. С. 30-31.

20. New approachs of rheumatoid artrits treatment / T.N. Ospelnikova, S. S. Grigoriyn // Jouranl of Interferon & cytokine research. 1999. Vol. 19. N. 9. P. 104.

21. Inhibitory effect of synyhetic interferon inducer Cycloferon on 1,2-dimethylhydrazine-inuced colon carcinigenesis in rats / I. Popovich, M. A. Zabezhinsky // Cancer Letters. 1999. N. 144. P. 1-5.

22. Использование циклоферона в терапии экспериментального герпетического кератита / В. П. Сухинин, В. М. Плесков // Антибиотики и химиотерапия. 2000. Т.45. № 6. С. 13-16.

23. Реамберин - новый антигипоксант // Врач. 1999. № 10. С. 32-33.

24. Эффективность циклоферона при различных формах вирусного гепатита / Т. Сологуб, Г. Мельникова // Врач. 1999. № 11. С. 34-37.

25. Влияние циклоферона на метастазирование карциномы легких Льюис у мышей и раодомиосаркомы РА-23 у крыс / М. А. Забежинский, И. М. Квитной // Вопросы онкологии. 1999. Т. 45. № 6. С. 650-654.

26. Физико-химические свойства и применение в фармацевтической технологии Ы-метилглюкамина // Фармация. 2000. Т. 49. № 1. С. 47-49.

27. Использование цитофлавина для коррекции последствий ишемичес-кого повреждения мозга / В. В. Бульон, Л. К. Хныченко // Бюлл. экспе-рим. биол. мед. 2000. Т. 129. №2. С. 149-151.

28. Нейроборрелиоз / И. Поляков, Ф. Ершов // Врач. 2000. № 3. С. 30-33.

29. Фармакологическая активность янтарной кислоты и ее лекарственные формы // Врач. 2000. №4. С. 26-27.

30. Исследование внутриклеточной локализации циклоферона, связывания его с ДНК и стимуляции экспрессии цитокинов в клетках при воздействии циклоферона / А. А. Казаков // Цитология. 2000. Т.42. №6. С. 659-664.

31. Циклоферон в терапии острого гепатита С у наркоманов / М. В. Мезенцева, Н. В. Касьянова // Клиническая фармакология и терапия. 2000. №1. С. 89-91.

32. Опыт применения циклоферона при лечении псориаза / С. С. Григорян, Л. Д. Тищенко // Иммунология. 2000. № 2. С. 42-44.

33. Влияние циклоферона на способность клеток крови больных хроническим риносинуситом к продукции провоспалительных цитокинов / Л. Ф. Азнабаева, Н. А. Арефьева // Медицинская иммунология. 2000. Т. 2. №2. С. 208.

34. Клинико-иммунологические критерии применения препарата циклоферон при лечении больных атопическим дерматитом / Г. Н. Соколов, К. Н. Монахов // Медицинская иммунология. 2000. Т.2. №2. С. 234.

35. Циклоферон - новое средство лечения торпидных форм урогени-тальной хламидийной инфекции / Е. Л. Ъпценко, Ф. И. Ершов //Актуальные проблемы дерматологии и венерологии. 2000. С. 52-53.

36. Опыт применения циклоферона в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки/ Н. Овчинникова, И. Маев // Врач. 2000. №6. С. 21-23.

37. Изучение влияния циклоферона на развитие рака шейки матки и влагалища у мышей / М. А. Забежинский, Е. А. Зарипова // Вопросы онкологии. 2000. Т. 46. №4. С. 433-436.

38. Акридонуксусная кислота: фармакологические свойства и результаты клинического применения / М. Г. Романцов, Ф. И. Ершов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2000. N«5. С. 103107.

39. Защитное действие циклоферона при экспериментальной гриппозной инфекции/ В. П. Сухинин, В. В. Зарубаев // Вопросы вирусологии. 2000. Т. 45. N»5. С. 26-30.

40. Янтарная кислота - фармакологическая активность и лекарственные формы/ Л. Е. Алексеева //Фармация. 2000. № 5-6. С. 40-44.

41. Роль циклоферона и пиридоксина в лечении некоторых кожных и венерических заболеваний / Л. П. Тищенко, Ф. И. Ершов // Вестник РУДН. Серия «Медицина». 2000. № 3. С. 68-75.

42. Циклоферон при тяжелых формах атопического дерматита / Г. Соколов, Е. Соколовский // Врач. 2000. № 10. С. 45-47.

43. Direct antiviral activity of interferon inducer cycloferon against herpes virus type 1/ V. V. Zarubaev, A. V. Slita // International Journal of Antimi-crobal agents. 2001. Vol. 17. N 1. P. 26.

44. Коррекция свободнорадикальных процессов препаратом янтарной кислоты реамберином в интенсивной терапии острых отравлений нейротропными ядами/ Г. А. Ливанов, С. А. Куценко // Анестезиология и реаниматология. 2001. №4. С. 28-31.

45. The aspects of antioxidants use in antiepileptic treatment / T. N. Savateeva, L. E. Alexeeva // Advances of Gerontology. 2001 .Vol. 6. P. 68.

46. Циклоферон в терапии язвы двенадцатиперстной кишки у крыс / В. В. Бульон, Л. К. Хныченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2001. Т. 64. № 6. С. 41-44.

47. Янтарная кислота - основное действующее вещество новых метаболических препаратов / Л. Алексеева, А. Петров // Врач. 2001. № 12. С. 29-31.

48. Эффективность цитофлавина при лечении экспериментальной алкогольной кардиомиопатии / А. В. Лычаков, М. К. Шевчук // Токсикологический вестник. 2002. №2. С. 21-25.

49. Использование цитофлавина для коррекции последствий ишемичес-кого повреждения миокарда / В.В. Бульон, Л. К. Хныченко // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2002. Т. 65. № 1. С. 27-29.

50. Двойная терапия хронического вирусного гепатита С: сочетание ре-комбинантного интерферона с индуктором интерферонов - цикло-фероном / В. Г. Радченко, В. В. Стельмах // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2002. Т. 3. № 1-2. С. 123-128.

51. Принципы лечения больных хроническими вирусными гепатитами (этапность, индивидуальность, комплексность) / Т. В. Сологуб, Т. Л. Григорьева // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2002. Т. 3. №1-2. С. 177-181.

52. Цитофлавин и церебролизин в коррекции последствий экспериментального гемморагического инсульта / В. В. Бульон // Вестник СПбГМА им И. И. Мечникова. 2002. Т. 3. № 3. С. 123-128.

53. Эффективность циклоферона в терапии ВИЧ-инфекции у наркозависимых лиц / В. А. Исаков, А. Г. Рахманова // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. № 1-2. С. 160-164.

54. Изучение эффективности цитофлавина на модели экспериментальной черепно-мозговой травмы / С. Е. Колбасов, Т. Н. Саватеева // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2002. Т. 4. № 3. С. 112-115.

55. Эффективность цитофлавина при экспериментальном сахарном диабете у крыс / С. Е. Колбасов // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003.T.3.№3.C. 132-134.

56. Экспериментальное исследование биологической активности ангио-гена на модели патологии сердечно-сосудистой системы и патологии

гемостаза / А. В. Лычаков.М. К. Шевчук // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. Т. 133. № 1. С. 60-64.

57. Эффективность цитофлавина при экспериментальном сахарном диабете у крыс / Т. Н. Саватеева, А. В. Лычаков // Вестник СПГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. № 3. С. 132-135.

58. Основные аспекты этиологического обоснованного комплексного лечения дегенеративно-дистрофических заболеваний коленного сустава / H.H. Корнилов, К.А. Новоселов // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. №4. С. 98-102.

59. Результаты применения препарата реамберин после ортопедических операций на коленном суставе / Н. В. Корнилов, К. А. Новоселов // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. № 3. С. 128-131.

60. Влияние циклоферона на морфогенез и репродукцию вирусов простого герпеса в культуре клеток Vero / В. В. Зарубаев, В. П. Сухинин // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. №4. С. 147-152.

61. Оценка эффективности циклоферона в терапии ВИЧ-инфекции у наркозависимых лиц / В. А. Исаков, А. Г. Рахманова // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2003. Т. 4. №4. С. 185-186.

62. Церебропротективный эффект цитофлавина при закрытой черепно-мозговой травме / В. В. Бульон, И. В. Зарубина // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2003. Т. 66. № 6. С. 56-58.

63. Оригинальные лекарственные препараты на российском рынке // Врач. 2004. №5. С. 62-64.

64. Медикаментозная профилактика респираторной заболеваемости в период неустойчивой эпидемической ситуации по гриппу / М. Г. Ро-манцов, О. Г. Шульдякова // Фундаментальные исследования. 2004. №4. С. 14-16.

65. Влияние препарата нейронол на продолжительность жизни и развитие спонтанных опухолей у мышей SAMP-1 с генетически ускоренным старением / И. Г. Попович, В. Н. Анисимов //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т. 136. № 12. С. 674-678.

66. Сравнительное изучение влияния цитофлавина и нейронола на морфологические изменения в головном мозге и выживаемость крыс с ишемическим нарушением мозгового кровообращения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2004. Т. 137. №4. С. 467-471.

67. Влияние субстратного метаболического комплекса, на основе реамбе-рина, на параметры свободнорадикального гомеостаза / С. А. Румянцева, М. Г. Романцов // Врач. 2004. №11. С. 67-68.

68. Циклоферон в лечении герпетического кератита / М. Г. Романцов, С. Ю. Голубев // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2004. Т. 5. № 2. С. 130-132.

69. Эффективность цитофлавина при состояниях, сопровождающихся нарушениями свободнорадикального гомеостаза / Б. В. Батоцыренов, С. А. Румянцева // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2004. Т. 5. №2. С. 151-153.

70. Эффективность цитофлавина в терапии острого нарушения мозгового кровообращения / С. А. Румянцева, М. Г. Романцов // Вестник

СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2004. Т. 5. № 3. С. 97-98.

71. Эффективность индукторов интерферона при острых респираторных заболеваниях как средства неспецифической профилактики / С. А. Румянцева, М. Г. Романцов // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2004. Т. 5. №3. С. 97-98.

72. Опыт лечения гепатопатий у больных туберкулезом / Т. В. Сологуб, М. Г. Романцов // Вестник СПбГМА им. И. И. Мечникова. 2004. Т. 5. № 3. С. 103-104.

73. Влияние цитофлавина на параметры свободнорадикального гомеос-таза / С. А. Румянцева, М. Г. Романцов//Врач. 2004. № 11. С. 59-61.

74. Эффективность циклоферона в лечении поверхностных форм герпетического кератита / И. Б. Максимов, С. Ю.Голубев //Российские медицинские вести. 2004. №2. С. 49-54.

75. Антиамнестический эффект цитофлавина и нейронола при ишеми-ческом нарушении мозгового кровообращения у крыс / В. В.Бульон, Ю. О. Федотова, Н. С. Сапронов // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004. № 5. С. 5-8.

Патенты на изобретения

76. 1 -дезокси-1 -Ы- [метил-(2-акридон-9-он- 10-ил-ацетат)]-аммоний-В-глюцитол, обладающий интерферониндуцирующей активностью в отношении всех типов интерферона / Л. Е. Алексеева // Евразийский патент 000382 от 22.01.1998.

77. Лекарственный препарат парентерального применения / Л. Е. Алексеева //Евразийский патент №002462 от 25.04.2002.

78. Инфузионный раствор «реамберин» // Евразийский патент №000879 от 23.03.2000.

79. Инъекционное лекарственное средство цитофлавин, обладающее ци-топротекторным действием / Л. Е. Алексеева // Евразийский патент №001099 от 03.06.2000.

80. Лекарственный препарат для парентерального применения / Л. Е. Алексеева // Патент РФ №2182004 от 10.05.2002.

81. Инфузионный препарат ремаксол / Л.Е.Алексеева // Патент РФ на изобретение №2240116 от 20 ноября 2004 г.

Учебно-методическая литература

82. Особенности течения гемоконтактных вирусных гепатитов в зависимости от состояния внешней среды: Утверждено Ученым советом МЗ РФ 01.12.2003, протокол №8 / Т. В. Сологуб,М. Г. Романцов. СПб., 2003.93 с.

83. Оценка качества жизни у больных инфекционного стационара: Утверждено УМО-640 от 22.10.2004 / Т. В. Сологуб, М.Г. Романцов, С. Н. Коваленко. СПб., 2004.86 с.

84. Иммуномодуляторы с противовирусной активностью: Утверждено УМО-639 от 22.10.2004 / Т. В. Сологуб, М. Г. Романцов, М. Ю. Ледванов. СПб., 2004.64 с.

85. «Применение иммуномодуляторов в хирургической клинике: Утверждено УМО-128 от 27.08.2004 / В. В. Ступин. СПб., 2004.90 с.

Для заметок

РНБ Русский фонд

2005-4 41871

2 2 ДПР 2005

Оглавление диссертации Коваленко, Алексей Леонидович :: 2005 :: Санкт-Петербург

Перечень основных сокращений и обозначений

Введение

Глава 1. Биологическая активность, физико-химические свойства акридонуксусной кислоты, янтарной кислоты и 1Ч-метилглюкамина. Лекарственные формы на их основе

1.1.Синтез, физико-химические свойства и фармакологическая активность 1Ч-метилглюкамина

1.2.Фармакологические свойства, механизм противовирусного действия акридонуксусной кислоты

1.3.Роль янтарной кислоты при состояниях, сопровождающихся нарушением свободнорадикального го-меостаза

1.3.1.Реализация основных фармакологических свойств янтарной кислоты в лекарственных препаратах

Глава 2. Материал и методы

Глава 3. Синтез и физико-химические свойства циклоферона (метилглюкамина акридонацетата)

Глава 4. Фармакологическая активность и механизм действия циклоферона

4.1 .Интерферониндуцирующая и противовирусная активность циклоферона на моделях вирусных инфекций

4.2.Антиканцерогенная активность циклоферона и его эффективность в качестве средства экспериментальной лучевой терапии опухолей

4.3.Влияние циклоферона на репарацию тканей

4.4.Изучение иммунотропных свойств циклоферона (метилглюкамина акридонацетат)

4.4.1.Воздействие циклоферона на экспрессию цитоки-нов в клетке

4.4.2.Индукция м-РНК цитокинов в клетках, под воздействием циклоферона

Глава 5. Комплексные субстратные антигипоксанты/ антиокси- 170 данты на основе Ка,М-метилглюкаммония сукцината

5.1.Синтез и антигипоксическая активность Na,N-метилглюкаммония сукцината

5.2.Фармакологическая активность комбинированных субстратных соединений на основе Na,N-метилглюкаммония сукцината

5.3.Изучение фармакокинетики цитофлавина, раствора для внутривенного введения

5.4.Влияние комбинированного субстратного антиокси-данта (цитофлавина) на противовирусную (интерферо-ниндуцирующую) активность циклоферона

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Коваленко, Алексей Леонидович, автореферат

В настоящее время поиск и разработка новых лекарственных препаратов относится к числу наиболее сложных и практически неотделимы от таких дисциплин, как химия, биология, физика и многих других смежных отраслей науки.

Тесное взаимодействие химика и фармаколога в поиске новых биологически активных соединений позволяет быстро проводить эффективную оценку вновь синтезированного химического соединения и полностью оценить весь спектр его потенциальной фармакологической активности. Знание структурно-химических корреляций биологической активности позволяет сузить поиск соединений среди изучаемого класса и организовать расширенное фармакологическое изучение наиболее перспективных веществ.

Поскольку соотношение «структура - биологическая активность» верны только в пределах одного ряда химических соединений, то для прогнозирования потенциальной фармакологической активности соединения необходима адекватная оценка биологических эффектов ранее синтезированных структур данного класса.

В настоящее время особое место в современной медицинской химии и фармакологии занимает биоскрининг, охватывающий ежегодно огромное число как индивидуальные химические соединения, так и многокомпонентные природные, животные и растительные экстракты. И хотя из 10000 изучаемых химических соединений лишь одно, в дальнейшем, проходит полный цикл медико-биологического изучения, в качестве потенциального лекарственного препарата, значение первичных скрининговых исследований трудно переоценить.

Особое значение для создания нового лекарственного препарата в совместной работе химика и фармаколога, после первичного скрининга ряда биологически активных веществ, отводится отбору из спектра изученных соединений наиболее перспективного образца.

В исследованиях по разработке нового лекарственного препарата особое значение имеет адекватная последующая оценка химической стабильности, безопасности и фармакологической активности выбранного соединения.

Однако, выделенные в ходе первичного скрининга новые активные образцы соединений наряду с высокой биологической активностью, зачастую обладают целым комплексом отрицательных свойств - так высокая токсичность соединения обусловлена химической, термической или фотонестабильностью, а из плохой растворимости обычно следует низкая биодоступность вещества.

Следовательно, одним из перспективных направлений научных исследований, по созданию новых лекарственных препаратов, является модификация биологически активных соединений, проводимая для придания ранее синтезированному биологически активному соединению новых фармакологических свойств.

Одним из наиболее совершенных инструментов для придания выбранному биологически активному соединению необходимых фармакологических свойств, является химический синтез, приводящий к получению абсолютно новой химической структуры, зачастую и с абсолютно новыми фармакологическими свойствами. Альтернативным путем улучшения фармакологических свойств выбранного соединения является создание комплексного препарата (комбинации) вновь синтезированного продукта с уже известными биологически активными соединениями, что требует детальных исследований по химической и фармакологической совместимости компонентов.

Научные знания, полученные в результате исследований новых биологически активных соединений, комплексных лекарственных препаратов, расширяют представления о воздействии химической структуры на живой организм и стимулируют научный поиск новых, более эффективных биологически активных молекул [181].

Настоящую работу следует отнести к актуальным исследованиям, поскольку она включает:

• развернутую оценку нового класса фармакологически активных соединений;

• направленный синтез новых лекарственных средств из исследуемого ряда соединений;

• исследования фармакологической активности полученных лекарственных препаратов;

• изучение механизмов действия полученных лекарственных препаратов и связь химического состава с проявляемыми биологическими эффектами;

• получение новых данных о корреляции биологических эффектов, полученных «in vitro» с эффектом на организм человека «in vivo».

Работа выполнена в соответствии с федеральными программами «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского направления» [Постановление Правительства РФ № 1414 от 23.11.1996г.] и «Медицина высоких технологий» [Постановление Правительства Российской Федерации от 25 ноября 1998 г. № 1391], а также в соответствии с планом научно-исследовательских работ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН по направлениям «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза», «Национальные приоритеты в медицине и здравоохранении».

Проведенные исследования позволяют сделать обоснованные выводы о перспективности полученных производных на основе N-метилглюкамина.

В связи с вышесказанным, целью настоящей работы является разработка оригинальных лекарственных препаратов, в состав которых входят биологически активные органические кислоты, с применением современных переносчиков лекарственных веществ основного характера с оценкой их безопасности и изучением фармакологической активности.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие задачи:

• Синтезировать безопасное фармакологически приемлемое соединение на основе акридонуксусной кислоты с применением современных соле- и комплексообразователей, обладающее интерферониндуцирую-щей активностью в отношении цитокинов (a-интерферона и других).

Научная новизна работы

Впервые показано, что соли и комплексы N-метилглюкамина с органическими кислотами представляют собой класс биологически активных веществ, перспективных для разработки эффективных лекарственных препаратов, обладающих высокой биологической доступностью.

На основе N-метилглюкамина и АУК синтезирован высокоактивный низкомолекулярный индуктор интерферона - циклоферон

На экспериментальных моделях in vitro, in vivo изучены противовирусный, противоопухолевый (антипромоторный, антиканцерогенный), им-муномодулирующий эффекты циклоферона, установлен механизм действия препарата.

Впервые целенаправленно синтезирована фармакологически активная смешанная Ка,К-метилглюкамониевая соль янтарной кислоты - реам-берин.

На экспериментальных моделях in vitro и in vivo показана его безопасность, установлены детоксицирующие свойства, в основе котороых лежат антигипоксический и антиоксидантный механизмы.

На основе реамберина разработаны сложные метаболические (субстратные) композиции:

• Цитофлавин - метаболический церебропротектор;

• Ремаксол - инфузионный гепатопротектор;

• Реоплазмин - плазмозамещающий раствор комбинированного действия;

• Осмофузин - осмотический диуретик;

На экспериментальных моделях изучена их безопасность, оценены фармакологические свойства, охарактеризован механизм действия разра-ф ботанных лекарственных препаратов, потенциально определено их последующее медицинское применение.

Практическая ценность работы

Разработаны и утверждены в МЗ РФ нормативно-методические документы: промышленный регламенты и фармакопейные статьи предприятия:

Циклоферон 12,5% раствор для инъекций (ПР 64-23057866-016-03; ФСП42- 0320170001); ф Реамберин 1,5% раствор для инфузий

ПР 64-23057866-013-02; ФСП-420320158401); Цитофлавин, раствор для внутривенного введения (ПР 64-23057866-017-03; ФСП- 42-0320339802).

Зарегистрированы в Российской Федерации препараты на основе N-метилглюкамина:

• Циклоферон 12.5% для инъекций (рег.№ 95/211/5, перерегистрация в связи с введением новых требований, Р№ 001049/03-2002);

• Реамберин 1.5% для инфузий (рег.№ 99/363/2 ; перерегистрация в связи с новыми требованиями 001048/01-2002);

• Цитофлавин раствор для внутривенного введения (Р№ 003135/01 -2004).

Проведенные исследования послужили основой для организации промышленного выпуска оригинальных лекарственных препаратов: Циклоферон 12.5% раствор для инъекций; Реамберин 1.5% раствор для инфузий; Цитофлавин раствор для внутривенного введения.

Разработаны и представлены на утверждение в Министерство промышленности, науки и технологий необходимые нормативно-методические документы для получения лицензии (№64/0139-JI/03 от 16 января 2003г.) на производство разработанных нами оригинальных лекарственных препаратов (реамберин, раствор для инфузий 1.5%; циклоферон раствор для инъекций 12.5%; цитофлавин, раствор для внутривенного введения), в связи с окончанием проведения клинических исследований и получением разрешения на их медицинское применение.

Представлены в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения для проведения рандомизированных контролируемых клинических исследований, с последующей регистрацией оригинальные препараты «ремаксол», «реоплазмин» и «осмофузин».

На основе проведенных исследований подготовлено пособие для врачей «Особенности течения гемоконтактных вирусных гепатитов в зависимости от состояния внешней среды». (Ученый Совет МЗ РФ, протокол №8, от 01.12.03.)

Утверждены УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России учебные пособия «Иммуномодуляторы с противовирусной активностью» (протокол №1 от 16.02.04г., УМО-639 от 22.10.2004г.); «Применение иммуномодуляторов в хирургической клинике» (УМО-128 от 27.08.2004.); «Оценка качества жизни у больных инфекционного стационара» (УМО-640 от 22.10.2004).

Постановлением Правительства Российской Федерации № 85 от 16.02.04г. « За разработку технологии, организацию промышленного выпуска и внедрение в медицинскую практику готовых лекарственных форм нового отечественного препарата циклоферон» присуждена премия Правительства Российской Федерации в области науки и техники 2003г. Утверждены два информационных письма для врачей:

1. «Применение реамберина при острых экзогенных и эндогенных интоксикациях» ( утверждено заместителем руководителя Департамента здравоохранения г.Москвы Лешкевич И.А., председателем УМС Департамента здравоохранения г.Москвы Костомаровой Л.Г.).

2. «Оптимизация профилактики и лечения острых респираторных заболеваний», информационное письмо для терапевтов, инфекционистов, педиатров (утверждено председателем комитета здравоохранения администрации г.Саратова Михайловым A.B.).

Положения, выносимые на защиту

1. N-метилглюкамин является не только солеобразователем, но и обладает высокой фармакологической активностью. Фармакологические эффекты МГА обусловлены наличием большого количества гидроксильных групп, образующих водородные связи, что приводит к формированию стойких комплексов аминоспирта с белками клеточных мембран несоответственно, изменению заряда и гиперполяризации мембран, влияя на калий/натриевый насос. Кроме того, МГА конкурентно взаимодействует с анионами и, следовательно, способствует их селективному переносу через биологические мембраны.

2. На основе Ы-метилглюкамина и акридонуксусной кислоты разработан лекарственный препарат - циклоферон, обладающий интерферонин-дуцирующей активностью в отношении цитокинов, характеразующийся противовирусной, противоопухолевой, (антипромоторное, антиканцерогенное действие) и иммуномодулирующей активностью.

4. Под влиянием циклоферона индуцируется каскад сигналов, включающих «цитокиновую сеть». Цитокинкорригирующее действие связано с активацией генов интерферона, 1Ь-4, 1Ь-12, а также подавлением экспрессии генов ТИБ-а и 1Ь-6.

5. Синтезирована новая фармакологически активная смешанная №,М-метилглюкаммониевая соль янтарной кислоты - реамберин, обладающий антигипоксическим, антиоксидантным действием. На его основе показана возможность создания субстратных композиций разнонаправленного действия (ремаксол, реоплазмин, осмофузин, цитофлавин), обладающих антиоксидантной/антигипоксантной активностями.

Апробация и внедрение результатов исследования

Основные результаты исследования доложены и обсуждены на:

• 3, 4, 5, 6-м Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996, 1997; 1998; 1999);

• 32-ой научно-практической конференции дерматовенерологов, акушер-гинекологов и урологов С-Петербурга (Санкт-Петербург, 18-20 июня 1997 г.);

• Юбилейной международной научной конференции "Грипп - XXI век"

Санкт-Петербург, 28 сентября- 2 октября 1997 г.); Второй Всероссийской научной конференции "Гомеостаз и инфекционный процесс" (Саратов, 19-21 мая 1998 г.);

Научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии» (Пенза, 20-24 апреля 1998 г.);

На третьем пленуме правления ассоциации ортопедов-травматологов России (Уфа, 1998г.);

Зональной научно-практической конференции травматологов и ортопедов Северо-Запада России (Великий Новгород, 1998 г); Международной конференции «Фармация в 21 веке: инновации и традиции» (Санкт-Петербург, 8 апреля 1999 г.);

Международной конференции «Конструктивная и деструктивная гипоксия» (Украина, Киев 12-14 июня 1998 г.);

Научной конференции посвященной 200-летию ВМедА "Современные проблемы герпесвирусной инфекции" (Санкт-Петербург, 17 фев 1999г.); Конгрессе педиатров России (Москва 16-18 февраля 1999 г.); Научной конференции «Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней (Санкт-Петербург 27-28 октября 1999 г.); Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Санкт-Петербург, 1999 г); Международной конференции «Фармация в XXI веке»: инновации и традиции (Санкт-Петербург, 1999 г);

Научно-практической конференции «Безопасность и здоровье подростков» (Санкт-Петербург, 1999г.);

Научной конференции «Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины» (Санкт-Петербург, 18-20 дек. 2000 г.);

Всероссийской конференции «Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, 2002г.);

Рабочем совещании РАМН «Митохондрии в патологии» (Москва, 2001г.);

Научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского Военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины» (Оренбург, 2003 г);

Международной конференции «Успехи современного естествознания: гомеостаз и инфекционный процесс» (Дагомыс, 2002; 2003г.); 12-м и 13-м международных конференциях молодых ученых Санкт-Петербургского государственного университета «Человек. Природа. Общество. Актуальные проблемы». (Санкт-Петербург; 26-30 дек 2001, 2002 г);

6-м Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 2931 окт. 2003 г.);

Юбилейной конференции, посвященной 60-ти летию Пензенского государственного университета (19-21 ноября 2003г.);

Научно-практической конференции «Актуальные проблемы офтальмологии», (Москва, 2003 г);

Заседании Ученого Совета ГУ НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН (Москва; 20 марта 2003г);

Расширенном заседании Ученого Совета ГУ НИИ вирусных препаратов РАМН (Москва) 30 октября 2003г.; на совете по присуждению премий Правительства РФ в области науки и техники 19 декабря 2003г., в рамках выполненной программы «Разработка технологии, организация промышленного выпуска и внедрение в медицинскую практику готовых лекарственных форм циклоферона».

Научно-практической конференции «Выпускник фармацевтического вуза: вчера, сегодня, завтра» - Санкт-Петербург.-2004 г);

3-й и 4-й международных конференциях «Клинические исследования лекарственных средств в России» (Москва, 2003; 2004 гг);

4-ой международной конференции РУДН «Здоровье и образование в

XXI веке», Москва.-21-22 октября 2004г. • 60-региональной конференции Пятигорской химико-фармацевтической академии (Пятигорск.-29-30 января 2005г.).

Структура и объем диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1-дезокси-1(N-метиламино)-D-глюцитола"

ВЫВОДЫ

1. Синтезировано химическое соединение — 1-дезокси-1-М-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-Д-глюцитол - циклоферон. По физико-химическим свойствам и требованиям безопасности отнесено к 5-ой группе практически нетоксичных соединений; соединение обладает ин-терферонин-дуцирующей активностью (индукция интерферона происходит на уровне транскрипции гена (мРНК а/(3 -интерферона) и не обусловлена посттранс-крипционными процессами). Интерферон продуцируется лимфоцитами (в основном Т-лимфоцитами) и спленоцитами, характеризуясь продукцией «раннего» белка, (начиная с 4-х часов от момента введения препарата) в достаточно высоких титрах, с пиком синтеза ( от 80000 до 100 000 Ед/мл) на 18 часах после введения. На пике продукции интерферона циклоферон инду-цирует высокий уровень эндогенного интерферона в лимфотропных органах; его максимальная концентрация отмечается в селезенке, легких, мышцах и мозговой ткани, указывая на преодоление гема-тоэнцефалического барьера.

2.Показана противовирусная активность циклоферона, установленная в исследованиях in vitro и in vivo на экспериментальных моделях гриппозной, герпесвирусной НС-вирусной инфекций, а также на моделях вируса иммунодефицита и клещевого энцефалита. Противовирусное действие соединения реализуется на уровне репликации вируса, за счет снижения эффекта вирусиндуцированного блокирования синтеза собственных белков клетки; на стадии внутриядерной сборки вирусных капсидов - блокированием инкорпорации вирусной ДНК в пресформированные капсиды; на поздних стадиях репликативного цикла препятствуя «одеванию» вирусных капсидов в липопротеидную оболочку и выходу вирусного потомства. Противовирусный эффект обусловлен увеличением количества дефектных частиц (ДИ-частиц), (что можно рассматривать как эффект последействия соединения; поскольку дополнительно образующийся интерферон, индуцирующий ДИ-частицами, защищает клетки неинфицированные вирусами и здоровые), а также снижением вирус-индуцированного синтеза белка в клетке, опосредованного экспрессией в них специфического ядерного рецептора и/или эффекторного белка, взаимодействующего с соединением.

3. Показана противоопухолевая активность циклоферона, установленная в эксперименте на модели лимфосаркомы Плисса, карциномы Льюиса, на опухолях, индуцированных химическим канцерогеном (1,2,-диметилгидразин) и других моделях. Антиканцерогенная активность проявляется усилением терапевтического эффекта химиопрепаратов (в частности циклофосфана). Препарат (в диапазоне доз от 100 до 200 мг/кг) оказывает выраженное ингибирующее действие на опухолевый процесс, замедляя рост, снижая митоз клеток и число метастазов. Противоопухолевое действие обусловлено стимуляцией синтеза эндогенного интерферона в фазе промоции опухоли, а также опосредовано ингибированием функций ключевых ферментов дыхательной цепи митохондрий клетки - убихинонов и ингибированием связывания АТФ с митохондриальным АДФ/АТФ-зависимым транспортным белком, путем специфического ковалентного присоединения АУК по пептидной связи лизин-цестеин.

4. Выявлен репаративный эффект синтезированного циклоферона, реализующийся за счет синтеза гамма-интерферона, участвующего в процессах репарации и регенерации,что приводит к восстанавлению поврежденного эпителия слизистой оболочки, обеспечивает сокращение сроков заживления язвенного дефекта, снижает интенсивность процессов пере-кисного окисления липидов, приводя к восстановливлению морфологической картины эпителия.

5. Под воздействием циклоферона индуцируется целый каскад сигналов, включающих «цитокиновую сеть». Характер иммунного ответа зависит от доминирующего участия клонов СБ4+ ТЬ 1 и 2-го типа. Активация синтезированным соединением ТЫ, (продуцирующих №N-7, 1Ь-2 и ТОТ-а), стимулирует Т-лимфоциты и макрофаги, реализуя клеточный иммунный ответ. Активация ТЫ цитокинов, под воздействием циклоферона, индуцирует не только повышенную экспрессию 11,-12, но и обеспечивает переключение ТЪ 0 с синтеза ТЪ2- цитокинов, (стимулирующих гуморальный иммунитет, за счет секреции 1Ь-4,6,10) на ТЫ. Цитокин-корригирующее действие синте-зированного соединения тесно связано с активацией генов №N-7, 1Ь- 4 и 1Ь-12, а также с подавлением экспрессии генов ЮТ-а и 1Ь-6.

6. Синтезированная смешанная соль Ка,]Ч-метилглюкамония сукци-нат - реамберин обладает выраженным антигипоксическим действием, не уступая по своей активности стандартному антигипоксанту - оксибутирату натрия. Антигипоксический эффект реамберина обеспечивается за счет эффективного транспорта янтарной кислоты через поляризованные К-метилглюкамином клеточные мембраны. Антиоксидантный эффект реализуется за счет снижения прооксидантного эффекта ионов трехвалентного железа через образование стабильных комплексов с 1Ч-метилглюкамином и восстановления пула естественного антиоксиданта - восстановленного глутатиона.

7. Разработанные, на основе реамберина, комплексные субстратные композиции (цитофлавин, ремаксол, реоплазмин, осмофузин) по физико-химическому составу характеризуются как оптимальные сбалансированные композиции, максимально приближающиеся по составу к плазме крови человека, обладают антигипоксической, антиоксидантной активностью.

8. Ремаксол является гепатопротекторным препаратом, благодаря стимуляции распада жировых включений в паренхиматозных органах до ацетил-КоА, поступающего в цикл трикарбоновых кислот, нивелирует явления жировой дистрофии за счет наличия в своем составе комплекса метаболических компонентов - метионина, рибоксина и никотинамида. А н-титоксический эффект ремаксола подтвержден на моделях экспериментального токсического гепатита, алкогольной интоксикации, интоксикации ядовитыми грибами и циклофосфаном. Фармакологическая активность ремаксола обеспечивается активацией тканевого дыхания, снижением продукции недоокисленных метаболитов, цитолитических ферментов и нормализацией процессов перекисного окисления липидов. Антиоксидантная активность препарата реализуется через систему глутатиона.

9. На моделях экзо- и эндотоксикоза, в условиях экспериментального шокового состояния установлено, что по своей фармакологической активности реоплазмин превосходит (отсутствие летальности животных, снижение уровня токсикоза, нормализация метаболических сдвигов и электролитного обмена) фармакотерапевтическую активность раствора гидрокси-этилированного крахмала. Позитивное влияние на функции ЦНС экспериментальных животных обеспечивается влиянием на познавательные психические процессы (возбуждение, торможение, обучение и память).

10. Осмофузин, являясь гиперосмолярным раствором, обеспечивает эффективное снятие отека мозга и сопутствующего ему метаболического ацидоза, который нивелируется благодаря антигипоксическому эффекту янтарной кислоты, и за счет нейтрализации недоокисленных продуктов метаболизма М-метилглюкамином. На моделях экспериментальной черепно-мозговой травмы и токсического отека мозга, на фоне алкогольно-барбитуратной интоксикации, показано отсутствие летальности в группе животных, получавших осмофузин, против 20-50% летальности животных в контрольной группе.

11. Фармакотерапевтический эффект цитофлавина проявляется в индуцирующем воздействии на активность ферментативного звена антиок-сидантной защиты: восстановлении пула низкомолекулярных антиокси-дантов, тиол-дисульфидного равновесия и активности тиол-зависимых ферментов антиоксидантной защиты. Гепатопротекторная активность цитофлавина заключается в нормализации белоксинтезирующей, пигменто-образующей и антитоксической функции печени экспериментальных животных. Одним из основных звеньев антиоксидантного эффекта цитофла-вина является синтез восстановленного глютатиона в тканях. При изучении фармакокинетики цитофлавина установлено, что при внутривенной инфузии со скоростью около 2 мл/мин (в пересчете на неразбавленный ци-тофлавин) янтарная кислота и рибоксин утилизируются практически мгновенно и полностью, не определяясь в плазме крови. Для рибофлавина период полувыведения из плазмы составляет около 2-х часов, стационарный объем распределения - около 40 литров, общий клиренс - около 0.3 л/мин. Для никотинамида период полувыведения из плазмы составляет около 1.3 часа, стационарный объем распределения - около 60 литров, общий клиренс — около 0.6 л/мин.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Знание структурно-химических корреляций фармакологической активности позволяет сузить поиск соединений среди изучаемого класса и организовать расширенное биологическое тестирование наиболее перспективных веществ. Поиск, разработка эффективных лечебных и профилактических отечественных лекарственных препаратов представляет собой не только медицинскую, но и социальную проблему.

Одним из наиболее совершенных инструментов для придания выбранному биологически активному соединению необходимых фармакологических свойств, является химический синтез, приводящий к получению абсолютно новой химической структуры, зачастую и с абсолютно новыми фармакологическими свойствами. Альтернативным путем улучшения фармакологических свойств выбранного соединения является создание комплексного препарата (комбинации), вновь синтезированного продукта, с уже известными биологически активными компонентами, что требует длительных исследований по химической и фармакологической совместимости компонентов.

Исходя из цели исследования, были поставлены следующие задачи:

• Синтезировать новую транспортную форму янтарной кислоты, в виде сложного сукцината с созданием на ее основе безопасных лекарст

• Оценить безопасность с изучением фармакологической активности разработанных оригинальных лекарственных препаратов in vitro и in vivo, с целью последующего проведения клинических испытаний и внедрения их в медицинскую практику.

Активной субстанцией при производстве лекарственных форм цикло-ферона является акридонуксусная кислота (АУК) (рис.1.2.), которая получается методом химического синтеза в три стадии из о-хлорбензойной кислоты (рис.3.1).

Нами разработаны технология получения акридонуксусной кислоты, лабораторный регламент и нормативная документация, регламентирующая показатели качества новой субстанции, удовлетворяющие требованиям, предъявляемым к веществам для парентерального применения. Сама кислота представляет собой кристаллическое вещество желтого цвета, практически не растворимое в воде.

Одновременно с разработкой технологии изучались биологические свойства новой субстанции, такие как безвредность, канцерогенность, другие возможные повреждающие факторы на организм животных, а также фарма-кокинетика и фармакодинамика.

Эффективность использования кислоты акридонуксусной в виде натриевой соли при оральном пути введения, как это описано в патенте США, крайне мала, т.к. при попадании в желудок кислота переходит в недиссоции-рованную форму, выводится из организма в неизменном виде. Парентеральное введение кислоты акридонуксусной в виде натриевой соли невозможно, так как рН раствора составляет 10,5-11,0.

Попытки снизить значение рН водных растворов натриевой соли акридонуксусной кислоты путем забуферирования или добавления стабилизаторов, предпринимаемые нами и известные из литературных источников, не позволяли достичь желаемого результата.

Все варианты раствора натриевой соли АУК оказались очень болезненны при внутримышечном введении, что выражалось в беспокойном поведении животных и их агрессивности при последующих инъекциях.

Также были изучены аммониевая, калиевая, магниевая соли акридо-нуксусной кислоты, но все они имели такие же недостатки, как и натриевая соль. В целом, полученные данные свидетельствовали о малой пригодности использования солей акридонуксусной кислоты с металлами для фармацевтических целей.

Основными недостатками опытных вариантов парентеральной лекарственной формы АУК были следующие:

- высокое значение рН раствора;

- нестабильность раствора при попытках снизить значение рН;

- необходимость введения большого числа вспомогательных веществ для стабилизации раствора;

- технологические трудности при изготовлении лекарственной формы, в частности, необходимость исключения влияния дневного и солнечного света при растворении компонентов и в процессе последующего хранения.

Однако в модельных опытах на культурах клеток и экспериментах на животных был выявлен целый ряд свойств растворов солей акридонуксусной кислоты, делающих ее привлекательным объектом биологических исследований и подтверждающих потенциальную возможность использования ее в медицинских целях.

Так в 1995 году была установлена ее активность в отношении, как РНК, так и ДНК-содержащих вирусов, обусловлена индукцией в организме животных высоких титров эндогенного интерферона.

В отличие от других известных индукторов эндогенного интерферона соли АУК активируют к продукции интерферона иммунокомпетентные клетки: моноциты, лимфоциты, макрофаги. АУК проявляет себя на различных экспериментальных моделях как классическое нестероидное противовоспалительное средство. При этом установлено, что некоторые нетрадиционные нестероидные противовоспалительные средства, в частности индометацин, потенцируют уровень индукции интерферона под действием натриевой соли АУК в культурах фибробластов, лейкоцитов и макрофагов. Причем уровень выброса интерферона никак не связан с ингибированием фермента циклоок-сигеназы, определяющей противовоспалительный эффект препаратов.

АУК преодолевает гематоэнцефалический и плацентарный барьеры, не оказывая отрицательного влияния на организм взрослого животного и жизнеспособность плода. АУК не связывается с белками крови, но взаимодействует с мембранными белками эритроцитов, вызывая некоторое усиление стабильности мембраны эритроцитов к действию гипотонических растворов. Вместе с тем, АУК нетоксична и в дозах, значительно превышающих проявления указанных биологических эффектов, не обладает свойствами мутагенности и генотоксичности, не интеркалирует в молекулу ДНК, несмотря на малый размер, плоскую структуру и отрицательный заряд.

Все выявленные на этом этапе исследования положительные биологические свойства АУК однозначно подтверждали актуальность создания фармакологически приемлемой и технологически воспроизводимой лекарственной формы.

Нами были интенсифицированы работы по изучению условий перевода АУК в водорастворимое фармакологически активное состояние с сохранением ее биологических эффектов и физико-химических характеристик растворов длительностью до 2-х лет и более.

Критериями пригодности соединения для использования его в качестве противоиона для перевода кислоты акридонуксусной в водорастворимое состояние были выбраны следующие показатели: полнота растворения кислоты акридонуксусной; стабильность раствора при хранении его при комнатной температуре; сохранность свойств при воздействии высоких и низких температур; физиологически приемлемый pH раствора; широта интервала рН, при котором свойства раствора сохраняются; необходимость добавления к растворам, стабилизаторов для сохранения их свойств в процессе длительного хранения; степень биологической эффективности получаемого соединения; концентрационные пределы при растворении; воспроизводимость полученных результатов; простота технологических решений; доступность сырья.

По своим физико-химическим свойствам АУК является кислотой средней силы (рКа~3,4). Поэтому исследования были направлены на подбор основания средней силы в качестве противоиона для перевода кислоты в водорастворимое состояние, способствующее стабилизации раствора с одновременным снижением значений рН. Как известно, щелочные и щелочноземельные металлы представляют собой сильные основания, что негативно сказывалось на фармакологических и технологических свойствах натриевых, калиевых и других вышеописанных солей АУК.

В качестве оснований средней силы были изучены такие соединения как аминосахара, аминоспирты, аминокислоты, содержащие амминную группу, способную к солеобразованию.

В наибольшей степени всем этим требованиям удовлетворяло соединение акридонуксусной кислоты с Ы-метилглюкамином (МГА), который представляет собой линейный полиспирт, защищенный по первому атому углерода метиламминной группой, придающей данному соединению свойства органического основания (рис.1.1., табл. 1.1).

Нормативные документы, нормирующие показатели качества Ы-метилглюкамина классифицируют его как солеобразующую добавку для парентеральных лекарственных форм. Ы-метилглюкамин зарегистрирован в американской, японской, китайской, бразильской, югославской фармакопеях в качестве солюбилизатора и стабилизатора лекарственных препаратов. Промышленностью выпускается в небольших количествах для собственных нужд ОАО «Фармак» (Украина) и в достаточных объемах фирмой «Мегск» (Германия).

Высокий солюбилизирующий и стабилизирующий эффект МГА обусловлен наличием в его молекуле пяти гидроксильных групп и третичной амминной группировки, способной к образованию хорошо растворимых в воде четвертичных аммониевых солей и устойчивых комплексов с органическими и неорганическими ионами. Кроме подходящих физико-химических характеристик МГА обладает еще рядом интересных биологических свойств. В частности, установлено, что в ряде случаев МГА усиливает терапевтический эффект лекарственных средств, например, некоторых болеутоляющих, успокаивающих, снотворных препаратов и мышечных релаксантов. Исследованиями показано, что МГА оказывает антиагрегантное действие, обусловленное нормализацией кальциевого обмена в тромбоцитах, а также селективно влияет на калий/натриевый насос и высвобождение внутриклеточного кальция. Улучшает реологические свойства крови и гемодинамику, ослабляет воздействие осмотического шока на клетку, что обусловлено образованием стабильных комплексов МГА с альбуминами крови и мембранными белками за счет сильных водородных связей.

Пероральное введение МГА устраняет гиперкислотность в желудке, а при парентеральном введении водных растворов ликвидирует метаболический ацидоз в организме человека. Мембраностабилизирующее действие МГА используют для снижения воздействия токсичных агентов на эритроциты и очистки эритроцитарной массы при замораживании крови.

Важной особенностью МГА является способность образовывать устойчивые и хорошо растворимые в воде комплексы с желчными кислотами, что позволяет использовать его для выведения холестерина при лечении желчнокаменной болезни. Стимулирует диурез путем воздействия МГА на специфические рецепторы ангиотензин-рениновой системы.

Исследования метаболизма и фармакокинетики МГА показали, что после внутривенного введения 93% препарата выводится почками в течение 24 часов в неизменном виде. После перорального применения обнаружено, что 85% МГА выводится с фекалиями, а 15% всасывается в желудке и кишечнике и полностью выводится почками в неизменном виде.

Хорошая растворимость в воде, буферные, солюбилизирующие и дозо-зависимые свойства позволили нам использовать МГА для создания лекарственных препаратов.

Таким образом, синтезировано химическое соединение, являющееся четвертичной аммониевой солью кислоты акридонуксусной и Ы-метилглюкамина максимально удовлетворяющее вышеуказанным требованиям: 1-дезокси-1 -Ы-[-метил-(2-акридон-9-он-10-ил-ацетат)]-аммоний-Д-глюцитол структурной формулы (М.м. 448,47) - метилглюкамина акридон-ацетат (рис. 1.5).

При смешивании компонентов, в строго эквимолярном соотношении, получаемые растворы имели значение рН, близкие к нейтральным (6,4-6,5), причем растворы сохраняли стабильность в широком интервале физиологически пригодных значений рН от 6,5 до 8,0. Никаких других стабилизаторов, буферных или солюбилизирующих добавок для таких растворов не требовалось. Метилглюкамина акридонацетат растворялся в воде в высоких концентрациях (до 35-40%) без утраты физико-химических свойств.

Изучение острой токсичности метилглюкамина акридонацетата позволило отнести полученное вещество к малотоксичным соединениям, 1ЛЭ50 для мышей линии СВА составляла 1200 мг/кг при пероральном введении и 800 мг/кг массы при внутривенном введении. При этом метилглюкамина акри-донацетат не обладал мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим и аллергенным действием, что свидетельствовало об отсутствии токсической активности соединения и возможности его использования для медицинских целей. Однако как всякое лекарственное вещество, полученное соединение должно быть не только безвредно, но и высокоэффективно, поэтому особое внимание было уделено подтверждению сохранения в этом соединении биологической активности, присущей акридонуксусной кислоте.

С этой целью была изучена интерфероногенная активность метилглю-камина акридонацетата. Интерфероногенную активность соединений (200мг/кг массы) изучали на линейных мышах линии СВА массой 12-15 г. Через определенные интервалы времени определяли титры интерферона в крови стандартным методом на гомологичных клетках Ь-929, выращенных в 96-луночных планшетах в термостате с С02. Тест-вирусом служил вирус эн-цефаломиокардита мышей. Соединение сохраняло интерфероногенные свойства АУК, благодаря присутствию МГА, который, как описано выше, не является индифферентным в биологическом плане веществом.

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что Ы-метилглюкамин является для АУК наиболее предпочтительным противо-ионом с целью перевода ее в водорастворимое, т.е. биологически доступное состояние, как в физико-химическом, так и биологическом плане.

Метилглюкамина акридонацетат является оригинальным, ранее нигде не зарегистрированным соединением, обладающим пролонгированной ин-терфероногенной активностью в отношении всех типов интерферона. На это соединение была подана Евразийская заявка с приоритетом от 22.01.98 и получен Евразийский патент №000382. Веществу было присвоено торговое название «Циклоферон».

Экспериментальными исследованиями установлено, что эффективная доза для человека массой 70 кг составляет 434-1279 мг циклоферона. Экспериментально установлены оптимальные концентрации и объем вводимого раствора, для чего образцы препарата с разными концентрациями циклоферона от 10% до 35%, учитывая, что для внутримышечного введения эффективной дозы максимальным представляется объем не более 5 мл. Критериями выбора оптимальной концентрации циклоферона служили: физико-химические характеристики, местно-раздражающее действие.

Как следует из экспериментальных данных (табл.6.1) оптимальные концентрации вводимого вещества находятся в пределах 10-25% .

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Коваленко, Алексей Леонидович

1. А.с 148800 МКИ А61 К 7/52 Способ получения N-метил-д-глюкозамина / Г.Л. Вишневская, Г.М. Ягупольский, А.Д. Горбунова /СССР/.-Заявл. 24.08.60.; Опубл. 10.07.61.Бюлл №12-7.

2. Актаева И.Н., Гулий И.Я., Лихтенштейн И.Е. и др. Применение сукцината натрия у больных, перенесших инфаркт миокарда // Врачебное дело.-1985.-№6.-С.6-8.

3. Алабовский В.В., Яценко В.Н., Золотухина ВН. и др. Состояние энергетических процессов в миокарде при фибрилляции и её комплексная терапия с введением янтарной кислоты // Труды Воронежского медицинского института.-1974.-№2.-С.81-86.

4. Анисимов В.Н., Кондрашева М.Н. Влияние янтарной кислоты на частоту спонтанных опухолей и продолжительность жизни мышей СЗН/Sn // Доклады Академии Наук СССР.-1978.-Т.248., №5.-С.1242.

5. Арчаков А.И., Карузина И.И. и др. Молекулярные механизмы взаимодействия четыреххлористого углерода с мембранами эндоплазматическош ретикулума печени // Успехи гепатологии.-1973.-Ы4.-С.39-59.

6. Бабский A.M., Стефанков Ю.С., Коробов В.М. Эффект сублетальных доз нитрита натрия на дыхание и окислительное фосфорилирование в митохондриях печени крыс // Украинский биохимический журнал.-1993.-Т.65., №6.-С.106-108.

7. Бажан С.И., Белова O.E. Математическое моделирование регуляции синтеза и противовирусного действия интерферон индуцированного белка Мх // Молекулярная биология.-1997.-Т.36., №6.-С.1071-1081.

8. Бажан С.И., Белова O.E. Молекулярно-генетические аспекты индукции и противовирусного действия интерферона //Вестник РАМН-1998.-№1.-С. 18-24.

9. Байрамкулов Х.Д., Гацура В.В. и др. Влияние интермедиатов цикла Кребса на кровоснабжение и энергетический обмен ишемизированного миокарда // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1978.-Т.89., №9.-С.317-319.

10. Байрамкулов Х.Д., Гацура В.В. и др. Влияние сукцината натрия на некоторые показатели углеводного обмена ишемизированного миокарда // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1976.-Т.89., №12.-С.1439-1441.

11. Бакибаев A.A., Горшкова В.К., Саратиков A.C. и др. Антигипоксические свойства органических соединений // Химико-фармацевтический журнал.-1997.- N2.-C.16-23.

12. Балашов В.П., Балыков JI.A., Костин Я.В. и др. Противоаритмическая активность некоторых энергообеспечивающих и электроноакцеп-торных соединений // Экспериментальная и клиническая фармако-логия.- 1996,- N2.-C. 17-19.

13. Балюсин В.Я., Шабанов П.Д. Опыт лечения солкосерилом и этимизолом больных с обострением язвенной болезни // Клиническая медицина -1986., №1.-С.99-101.

14. Барбашова З.И. Акклиматизация к гипоксии и ее физиологические механизмы. Л.: Медицина, i960.-180 с.

15. Бариляк И.Р., Сатмари Е.Ф., Охрончук Б.В. Действие сукцината натрия на внутриутробное развитие крыс // Рукопись депонирована в ВИНИТИ, 12.06.80., №1357-80.-7 с.

16. Баринский И.Ф., Давыдова A.A., Грибенча C.B., Лазаренко A.A. Эффективность индукторов интерферона ридостина и камедона в профи-лактике и лечении экспериментальных альфа- и флавивирусных инфекций // Вопросы вирусологии.-1996.-Т.41., N3.-С. 133-135.

17. Белячев Л.Е., Гончарова Е.П., Пьянкова О.Г. и др. Некоторые вопросы интерферонообразования у белых мьппей // Вестник РАМН.-1998.-№4.-С.34-37.

18. Бендер К.И., Фрейдман С.Л., Хлебников А.Н. и др. Действие солей янтарной кислоты на циркуляторно-респираторную гипоксию // Журнал экспериментальной и клинической медицины.-1977.-Т. 17., №4.-С.32-36.

19. Береговая Е.Д., Горчакова H.A., Самарская Т.Н. и др. Влияние метаболитных средств на антиаритмическую активность новокаинамида и ацетилновокаинамида // Фармакология и токсикология.-1990.-Т53., №5.-С.34-37.

20. Березовский В.А. Гипоксия и индивидуальные особенности реактивности. Киев: Наукова думка, 1978.-214с.

21. Бобков Ю.Г., Кузнецова Г.А., Клейменова Г.Н. и др. Влияние сукцината натрия на метаболические и морфологические изменения при остром охлаждении // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1984.-Т.97., №10.-С.420-422.

22. Бульон В.В., Хныченко Л.К., Коваленко А.Л. и др. Использование цитофлавина для коррекции последствий ишемического повреждения миокарда // Экспериментальная и клиническая фармакология.-2002.-Т.65., №1.-С.27-29.

23. Быреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методы и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991.-399с.

24. Ванизов В.Х., Плотникова Т.М., Якимова Т.В. и др. Сукцинат аммония -эффективный корректор циркуляторной гипоксии мозга // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1995.-Т.108., №9.-С.276-278.

25. Васин В.М., Ушаков И.В., Ковтун Ю.И. и др. Эффект мелатонина, аскорбиновой и янтарной кислот на токсичность гаммофоса // Бюллютень экспериментальной биологии и медицины.-2004.-Т.117., №5.-С.450-452.

26. Венгеровский А.И., Маркова И.В., Соратников А. С. И др. Доклиническое изучение гепатозащитных средств. Методические рекомендации // Ведомости фармакологического комитета.- 1999.- №2.-С. 9-12

27. Виноградов В.М., Урюпов Ю.Ю. и др. Гипоксия как фармакологическая проблема// Фармакология и токсикология.- 1985.- N4.-C 9-20.

28. Воронина Т.А. Фармакологические свойства никотинамида возможного лиганда бензодиазепиновых рецепторов. // Фармакология и токсикология.-1981.-Т.44., №6.-С.680-683.

29. Гаркави JI.X., Уколова М.А., Квакина Е.Б. Адаптационные реакции и резистетность организма. Ростов-на-Дону: Издательство Ростовского университета, 1997.-124 с.

30. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ишемизированного сердца. М.: Медицина, 1993.-112 с.

31. Гацура В.В., Пичугин В.В. Интермедиаты цикла Кребса и электронно-акцептрные системы как новые кардиофармакологические средства // Вестник АМН СССР.-1982.-№5.-С.34-38.

32. Гацура В.В., Пичугин В.В., Сернов JI.H. и др. Противоишемический и кардиопротекторный эффект мексидола // Кардиология.- 1996.- N 11.-С. 59 -62.

33. Герасимов A.M., Деленян Н.В., Шаоев М.Т. и др. Формирование системы противокислородной защиты организма. М.: Издательство ЦИТО им Приорова, 1998.-187С.

34. Головкин В.А., Лукаш Е.П., Похмелкина С.А. и др. Улучшение состава и технологии мягких дозированных форм полимерными включениями // Научные труды Всесоюзного Научно-исследовательского института Фармации.- 1990.-Т.28.-С.70-75.

35. Головкин В.А., Лукаш Е.П., Похмелкина С.А. и др. Биофармацевтическое обоснование состава и технологии суппозиториев с натрия сукцинатом // Фармация.-1991 .-Т.40., №6.-С.9-12.

36. Горбунова А.Д., Вишневская Д.И., Кириенко С.С., Яворский Д.Ф., Ягупольский Л.М. Получение 1-дезокси-1-(метиламино) Д-глюцитола // Химико-фармацевтический журнал-1967.-Т.1, N3.-С.51-52.

37. Государственный реестр лекарственных средств разрешенных к медицинскому применению и промышленному выпуску. М.: МЗ РФ, -1996.-С.19.

38. Гуськова Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения // Химико-фармацевтический журнал:-1990.-№7.-С.10-15.

39. Гуткин Д.В., Петрович Ю.А. и др. Активность антиоксидазных ферментов в миокарде при его ишемии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1982.-Т.95., №1.-С. 33-35.

40. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология М.:МИА, 2003. С.352-362.

41. Дубинина Е.Е., Шугалей Н.В. Окислительная модификация белков // Успехи соврем, биологии.- 1993.-Т.113., №1.-С.71.81.

42. Дунаев В.В. Исследование суппозиториев с натрия сукцинатом в опытах in vitro и in vivo // Фармация.-1992.-Т.41, №1.-С.63-64.

43. Дунаев В.В., Тишкин B.C., Евдокимов Е.И., и др. Механизм действия рибоксина// Фармакология и токсикология.- 1989.-Т.52., №6.-С.56-58.

44. Ершов Ф.И. Интерфероны// Вопросы вирусологии.-1998.-Т.43., №6.-С.247-252.

45. Ершов Ф.И. Противовирусные препараты. М.: Медицина, 1999.-180с.

46. Ершов Ф.И. Система интерферона в норме и патологии. М.: Медицина, 1996.-С.110-111.

47. Ершов Ф.И., Наровлянский А.Н. и др. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях // Цитокины и воспаление.-2004.-№1.-С.З-6.

48. Ершов Ф.И., Тазулахова Э.Б. Индукторы интерферона- новое поколение иммуномодуляторов // Вестник РАМН.-1999.-№4.-С.52-56.

49. Ещенко Н.Д. Цикл трикарбоновых кислот и его регуляция в головном мозге // Нейрохимия.-1982.-Т. 1, №2.-С.1-17.

50. Жибинов В.В., Ивницкий Ю.Ю. и др. Профилактика сукцинатом натрия индуцированных радиацией изменений в стресс-реализующей системе и модификация радиорезистентности мышей // Архив патологии.-1994.-Т.56., №1.-С.88-90.

51. Забежинский М.А., Коваленко А.Л., Квитной И.М.и др. Влияние циклоферона на метастазирование карциномы легких Льюис у мышей ирабдомиосаркомы РА-23 у крыс // Вопросы онкологии. 1999.-Т.45., №6.-С.650-654.

52. Забежинский М.А., Попович И.Г., Штылик A.B. и др. Влияние циклоферона на рост перевиваемых опухолей // Вопросы онкологии.-1998.-Т.44., N4.-C.427-431.

53. Зафаров К.А., Садриддинов А.Ф., Тухтаев K.P. и др. Активность сукцинатдегидрогеназы в митохондриях гепатоцитов при экспериментальном холестазе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1991 .-№5.-С.32-35.

54. Заявка 96111178/14 МКИ А61К9/06. Средство индуцирующее эстрогеновые и прогестиновые рецепторы. / К.Г. Сурков, Е.В. Цырлина, Л.М.Берпггейн. /Россия/. Заявлена. 06.06.96; Опубликована 27.09.98. Бюл.№2.

55. Змушко Е.И., Митин Ю.А., Кацалуха В.В. и др. Индукция цитокинов и противовирусная активность циклоферона при экспериментальной герпетической инфекции // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.-2003 .-№4.-С. 105-107.

56. Иванов С.Д., Коваленко А.Л., Кованько Е.Г.и др. Применение Циклоферона при экспериментальной лучевой терапии опухолей // Вопросы онкологии.-1999.-Т.45., №4.-С.408-420.

57. Иванов С.Д., Коваленко А.Л., Кованько Е.Г. и др. Гематологические эффекты циклоферона при экспериментальной лучевой терапии глиом // Иммунология.-1998. -№.1-С.38-39.

58. Ивницкий Ю.Ю, Штурм Р. Защита мышей от рентгеновского излучения сукцинатом натрия // Радиобиология.-1990.-Т.30., №5.-С.704-706.

59. Ивницкий Ю.Ю, Штурм Р. Радиорезистентность мышей при включении в рацион янтарной кислоты и ее солей // Радиобиология.-1992.-T.32., №1.-С.117-120.

60. Ивницкий Ю.Ю. Интенсивность клеточного дыхания и радиорезистентность организма: диссертация доктора медицинских наук. Санкт-Петербург, 1994.-560с.

61. Ивницкий Ю.Ю., Головко А.И., Софронов Г.А. Янтарная кислота в системе средств метаболической коррекции функционального состояния и резистентности организма. Санкт-Петербург: Лань, 1998.-82с.

62. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция: возможности управления. М.: Медицина, 2002 .-242с.

63. Каминский Ю.Г. Изменение метаболизма адениновых нуклеотидов в печени старых крыс при голодании и введении сукцината // Биохимия.-1982.-Т.47., №4.-С.654-659.

64. Кашина Е.А. Изыскание фармакологических препаратов, улучшающих энергетический обмен и активирующих восстановительные процессы в миокарде.: Автореф. дисс. канд. мед. наук. СПб.,1994.-22с.

65. Кладницкий A.B., Мухин А.Г. Эндогенные ингибиторы специфического связывания бензодиазепинов в коре головного мозга // Журнал невропатологии и психиатрии им. С.С Корсакова.-1988.-Т.38., №.12.-С.98-105.

66. Ковалев М.М., Рой В.П., Малюк В.И. и др. Нарушения энергетического обмена печени при остром холецистите и их метаболическая коррекция сукцинатом натрия // Физиологический журнал.-1980.-Т.26., №2.-С.228-234.

67. Коваленко А.Л., Казаков В.И., Слита A.B. и др. Исследование внутриклеточной локализации циклоферона, связывания его с ДНК и стимуляции экспрессии цитокинов в клетках при воздействии циклоферона // Цитология.-2000.-Т.42.,№6.-С.659-664.

68. Коваленко А.Л., Шигарова Л.В., Алексеева Л.Е. Физико-химические свойства и применение в фармацевтической технологии N-метилглюкамина (Обзор) // Фармация.-2000.-Т.49., №1.-С.47-49.

69. Коденцова В.М., Вржесинская O.A., Сокольников A.A. и др. Действие рибофлавина улучшает метаболизм водорастворимых витаминов // Вопросы медицинской химии.-1993.-Т.39., №5.-С.29-33.

70. Кондрашева М.Н. Регуляция энергетического обмена и устойчивость организма. Пущино: ОНТИ РАН, 1975.-234с.

71. Кондрашева М.Н., Чаговец Н.Р. Янтарная кислота в скелетных мышцах во время интенсивной работы и в период отдыха // Доклады Академии наук СССР.-1971-Т. 198., №1.-С.243.

72. Конран Г.Я., Гетьман И.Я., Недугова Н.П. Фармакокинетика сульфодиметоксина и его N-метилглюкаминовой соли // Фармакология и токсикология.-1977.-Т.40., №4.-С.471 -475.

73. Коржов В.И. Влияние бенемицина и сукцината натрия на обмен протонов в митохондриях тканей легких и печени морских свинок // Украинский биохимический журнал.-1979.-Т.51., №2.-С.147-150.

74. Королева Л.В., Васин М.В. Влияние адреналина на активность сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах переферической крови после воздействия ионизирующего излучения // Радиобиология.-1994.-Т.28., №2,-С .228-229.

75. Косенко Е.А., Каминский Ю.Г. Выживаемость крыс и митохоиндральное отношение свободных НАД/НАДН в печени при действии ионизирующего излучения // Радиационная биология и экология.-1994.-Т.34., №3.-С.357-361.

76. Костин В.И. Доклиническое изучение антиангинальной активности энергометаболических интермедиатов // Фармакология и токсикология.-1989,-Т.52, №6.-С.49-52.

77. Кочетыгов Н.И., Панышева Т.Ю., Ремизова М.Н. и др. Влияние сукцината натрия на восстановление функциональной деятельности митохондрий при ожоговом шоке в эксперименте // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.- 1984.-№l.-C.33-35.

78. Круглякова К.Е., Шишкина JI.H. Общие представления о механизме действия антиоксидантов // Исследования синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo // Под ред. Е.Б. Бурлаковой.- М.: Наука, 1992.-С. 5-8.

79. КрыжыновскийТ.Н., Шандра A.A., Годлевский Л.С. и др. Дальнейшее изучение противоэпилептических свойств никотинамида // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1981.-Т.91., №1.-С.42-45.

80. Кулаев Д.В., Кочергин И.Г., Асоян Ж.А., и др. Использование инозина для защиты почек. Эффективность и возможные механизмы действия // Вестник АМНСССР.-1981.-№10.-С.75-78.

81. Курхалюк P.M. Эффект интермедиатов цикла трикарбоновых кислот на систему окиси азота при острой гипоксии // Украинский биохимический журнал.-2002.-Т.74., №4.-С.85-90.

82. Курхалюк P.M., Серебровская Т.В. и др. Энергетический метаболизм цикла трикарбоновых кислот и антиоксидантная защита при острой гипоксии // Физиологический журнал.-2003.-Т.49., №3.-С. 104-109.

83. Кучмеровская Т.М. Нейропротекторное действие никотинамида и никотинил-ГАМК у крыс при экспериментальном паркинсонизме // Украинский биохимический журнал.-1998.-Т.70., №6.-С.126-132.

84. Левин Г.С., Халматова Г.М., Парлагашвили Ю.Ю. и др. Применение полиглюкина с сукцинатом натрия в терминальной фазе шока // Проблемы гематологии и переливания крови.-1974.-Т. 19, №7.-С.40-45.

85. Лекарственные средства для лечения вирусных инфекций // Рациональная антимикробная терапия / Под. ред. В.П. Яковлева. -М.: Медицина,2003.-С.195-201.

86. Лукьянова Л.Д. Роль биоэнергетических нарушений в патогенезе гипоксии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия -2004.-№2.-С.2-11.

87. Лукьянова Л.Д. Современные проблемы гипоксии // Вестник РАМН.-2000.-№9.-С.З-12.

88. Лукьянова Л.Д. Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. М.: Наука, 1989.-С. 11-45.

89. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1997.-Т.124., №9.-С.244-254.

90. Лукьянова Л.Д., Михайлова H.H., Фоменко Д.В. и др. Об особенностях нарушений энергетического обмена при травматическом шоке и возможность их фармакологической коррекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2001.-Т.132., №9.-С.263-269.

91. Ляхович В.В., Цырлов И.Б. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков. Новосибирск: Наука, 1981. -241 с.

92. Маевский Е.И., Гришина Е.В., Окон М.С. и др. Анаэробное образование сукцината и ресинтез АТФ в митохондриях крыс // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. М.: Издательство НИИ фармакологии АМН СССР, 1989.-С.80-82.

93. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации. Санкт-Петербург: Издательство МАЛО, 1985.-34с.

94. Малов Ю.С. Некоторые аспекты этиологии и патогенеза язвенной болезни // Клиническая медицина.-1993.-№1.-С.55-61.

95. Малюк В.И., Брук Э.И., Киреева Л.М. и др. Влияние сукцината натрия на кислотообразующую и секреторную функцию желудка // Физиологический журнал.-1983 .-Т.29., №5 .-С.616-617.

96. Малюк В.И., Коржов В.И. Окислительное фосфорилирование, обмен протонов и объемные изменения митохондрий при воздействии экзогенного сукцината//Украинский биохимический журнал.-1979.-T.51., №6.-С.639-643.

97. Малюк В.И., Молотков В.Н., Коржев В.П. и др. Метаболические нарушения при острых интоксикациях и их коррекция сукцинатом натрия // Врачебное дело.-1981 .-№8.-С.66-68.

98. Малюк В.И.,Федоров В.И. Экспериментальное изучение протиязвенного действия сукцината натрия при иммибилизационном стрессе // Физилогический журнал.-1995.-Т.41., №1-2.-С.79-86.

99. Манойлов С.Е., Седых В.Н. К вопросу о механизме окисления сукцината в печени белых крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1996.-Т.117.,№5.-С.524-525.

100. Мехлюк И.В., Прокопова К.В., Остапченко Л.И. и др. Активность дс-РНК-зависмой протеинкиназы крыс под действием гамма-облучения // Украинский биохимический журнал.-2003.-Т.75., №1.-С.49-53.

101. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение ишемических и стрессорных повреждений сердца. М.: Медицина, 1984.-266 с.

102. Мейрен Д.В., Гилев А.П. Изучение биохимической фармакологии инозина // Экспериментальная и клиническая фармакология.-1980.-№9.-С.118-126.

103. Методические указания по определению индивидуальной чувствительности организма к интерферонам, другим цитокинам и индукторам интерферона. М.: Издательство МЗ РФ, 2003.-С.23-25.

104. Мутушкина Е.А., Заржецкий Ю.В., Трубина И.Е. и др. Влияние янтарной кислоты на постреанимационную патологию ЦНС и организма в целом // Анестезиология и реаниматология.-1996. -№5. -С.61-63.

105. Насибуллин В.А. Метаболические основы действия вибрации на гипоталамические структуры мозга // Морфология.-1994.-Т.107., №7-С.53-62.

106. Никулин A.A. К вопросу о влиянии янтарной кислоты на свертываемость крови и баланс катехоламинов // Фармакология и токсикология.-1988.-Т.51.,№3.-С.45-48.

107. Никушин E.B. Перекисное окисление липидов в ЦНС в норме и при патологии // Нейрохимия.-1989.-Т. 8 .,№ 1 .-С. 124-145.

108. Ноздрачева JI.B. Взаимосвязь секреторной и ферментативной активности слизистой желудка собак при внутрижелудочном введении янтарной кислоты // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1986.-№3.-С.61 -64.

109. Опи JI.X. Обмен веществ и энергии в миокарде. Физиология и патология сердца. М. Медицина, 1990.-Т.1.-С. 7-63.

110. Орехович В.Н. Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. -320 с.

111. Павленко B.C., Хлыстов В.В., Андреева ЛИ. и др. Эффект препаратов, выделенных из сердца на биоэнергетику кардиомиоцитов при гипоксии и ишемиии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1992.-№2.-С.20-24.

112. Павловская Я.В. Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций. Санкт-Петербург: Лань, 2002.-С. 15-16.

113. Патент 2,029,764 МКИ: С07С, А 61 К Способ получения N-метиленкарбокси-9-акриданона или его натриевой соли / О.В. Травкин, Е.В. Яковлева, Е.В. Буянова /Россия/. Заявлен 16.11.92.;- Опубликован 1.03.94.-//РЖ. Хим.-1995.-180161П.

114. Патент 2,031,650 МКИ А 61 К. Противовирусное лекарственное средство и способ его получения / Г.И. Гринберг, Н.И. Этингова, Н.Р. Андреева, Т.Ю. Иванова /Россия/ Заявлен 10.12.93.; Опубликован 27.03.95.-//Chem. Abstr.-1995.-Vol. 123.,N24.-P.322173z.

115. Патент 2,052,264 МКИ: А 61 К 7/11.Лекарственное средство для лечения вирусных заболеваний у животных / А.Л Коваленко, Л.Е. Алексеева, Н.П.Чижов, М.А. Борисова, P.A. Купчинский /Россия/.-Заявлен 1.04.93.; Опубликован 20.01.96.- Бюлл.1.ft'

116. Патент России 2,056,821 МКИ: А61К 9/08 Глазные капли Кератоник /Федоров С.Н., Мороз З.И., Борзенок С.А., Комах Ю.А. /Россия/.-Заявлен 26.02.93.-Опубликован 27.03.96.-Бюлл. №9.

117. Патент 2,071,768 МКИ А 61 К 20/35. Лекарственное средство для лечения атеросклероза и его осложнений./Р.А. Купчинский , Н.П. Чижов, А.Л. Коваленко , Л.Е. Алексеева, М.А. Борисова /Россия/.-Заявлен 19.07.93.;ф Опубликован 2.02.97. -Бюлл. N2.

118. Патент 2,076,710 МКИ: А 61 К 20/35. Лекарственное средство для лечения опухолевых заболеваний./ P.A. Купчинский , Н.П.Чижов , А.Л. Коваленко, Л.Е. Алексеева , М.А. Борисова /Россия/.- Заявлен 19.07.93.; Опубликован 1.10.97. Бюл.ШО.

119. Патент 2,020,941 МКИ: А61 К. Способ получения противовирусного средства. / О.В. Травкин, Е.В. Яковлева, Е.В. Буянова / Россия/.- Заявлен 6.07.92.; Опубликован 20.01.94. -//РЖ Хим.-1995.-60167П.

120. Патент 2,033,413 МКИ: С07С, А 61 К. Способ получения сложных С эфиров .Ч-метиленкарбокси-9-акриданона./ О.В. Травкин, Е.В. Яковлева,

121. Е.В.Буянова /Россия/ Заявлен 16.11.92.;- Опубликован 1.03.94.- //РЖ. Хим.-1995.-180162П.

122. Пескин A.B. Взаимодействие активного кислорода с ДНК // Биохимия.-ф 1997.-Т.62., №12.-С.1305-1308.

123. Пескин A.B. О регуляторной роли активных форм кислорода // Биохимия-1998.-Т.63., №.9.-С. 1305-1308.

124. Петрович Ю.А., Гуткин Д.В. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогенезе воспаления, ишемии и стресса // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -1986.- №5.- С. 85-92.

125. Плотников М.Б., Плотникова Т.М. Антиокислительные эффекты антигипоксантов при ишемии мозга // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1992.-Т.105., N5.-C.504-508.

126. Поборский А.Н., Зимина Т.А. Влияние некоторых экстремальных воздействий на окисление сукцината в митохондриях мозга // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1996.-№1-С.19-21.

127. Полонский В.О. Коррекция системы интерферона и клиническая эффективность препарата кагоцел при гриппе, ОРВИ и генитальном герпесе: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2003,-26с.

128. Прошин С.Н., Кравцов В.Ю., Ольнев М.Г.и др. Хромосомные мосты и "хвостатые" ядра в популяциях злокачественных клеток // Генетика. 1998.-Т.34.,N.I.- С.61-64.

129. Расулов М.М., Кузнецов И.Г., Слуцкий Л.И. и др. Солкосерил: ульцеростатический эффект и его возможные механизмы // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1993.-Т. 103, №1.-С.49-51.

130. Реакции организма человека на воздействие опасных и вредных производственных факторов. // Под. ред. Б.В. Бирюкова. М.: Издатель-ство стандартов, 1991. С. 210-243.

131. Реджебова О.И. Влияние гипоксической гипоксии на иммунологическую реактивность и некоторые факторы неспецифической резистентности человека и животных // Физио-логический журнал.-1992.-Т.38., №5.-С.98-111.

132. Розанов В.А., Шерколенко В.А., Левитский М.В. и др. Экспериментальное обоснование метода фармакологической защиты мозгапротив гипоксии при различных церебральных нарушениях // Физиологический журнал.-1991.-Т.37., №5.-С.З-11.

133. Романова Т.П. Способ моделирования внутримозговых гематом при артериальной гипертензии // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1985.-№3 .-С.80-82.

134. Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому исследованию лекарственных средств. М.: Издательст-во МЗ РФ, 1986.-С.107-126.

135. Саакян И.Р., Саакян А.Г. Двойственная взаимозависимая регуляция системы окисления сукцината в митохондриях сердца и печени в патологических условиях // Вопросы медицинской химии.-1998.-Т.44., №2.-С.151-157.

136. Саакян М.Р., Кондрашева М.Н., Высочина И.В.и др. Коррекция нарушений внутренней среды организма пищевой добавкой янтарной кислоты у животных и человека // Известия АН. Серия биологи-ческая.-1994.-№4.-С.596-604.

137. Самойлов М.О. Реакции нейронов мозга на гипоксию. Л.: Наука, 1985.190 с.

138. Сукоян Г.В., Антелава A.B., Кавадзе И.К и др. Кардиопро-тективный эффект энергостима при аллергическом миокардите // Экспериментальная и. клиническая фармакология.-2004.-Т.67., №2.-С. 19-23.

139. Сергеев П.В., Снегирева Г.В., Гукасов В.М. и др. Соотношение антиоксидантного и противоишемичекого эффектов некоторых энергообеспечивающих средств // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1991.-Т. 102., №10.-С.381-382.

140. Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А., Шимановский Н.Л. Очерки биохимической фармакологии. М.: Фармединфо, 1996. - 384 с.

141. Сергеева С.С., Базанова Н.С., Бургова М.П. и др. Роль янтарной кислоты в реакции нейрона на синаптическую активацию нейрона // Биофизика.-1986.-Т.31, №4.-С.631 -633.

142. Сернов Л,Н., Зюзина C.B., Розонов Ю.Б. и др. Исследование спектра противоишемической активности питохрома С // Экспериментальная и клиническая фармакология.-1996.- N2.-C. 13.

143. Сернов Л.Н., Снегирева Г.В., Гацура В.В. и др. Влияние интермедиатов цикла Кребса на размеры некроза и течение ранних постокклюзионных аритмий при экспериментальном инфаркте миокарда у крыс // Фармакология и токсикология.-1989.-T.52., №6.-С.47-49.

144. Сефуйлла Р.Д., Борисова И.Г. Проблемы фармакологии антиоксидантов // Фармакология и токсикология -1990.-Т.53., №6.-С.З-10.

145. Скибицкий В.В. Возможности комбинированной антиаритмической терапии у больных с ишемической болезнью сердца // Терапевтический архив.-1992.-Т.64., №8.-С.25-29.

146. Скибицкий В.В. Возможность коррекции неблагоприятных эффектов антиаритмических препаратов // Вестник РАМН.-1996.-№5.-С.9-12.

147. Стальная И.Д. Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977.320 с.

148. Тазулахова И.Б., Чижов Н.П., Борисова М.А. и др. Сравнительная характеристика интерферониндуцирующей способности двух препаратов, относящихся к ароматическим углеводородам// Антибиотики и химеотерапия. -1991.-Т.36., N10.-C.28-31.

149. Тимошин A.A., Лакомкин В.Л., Руж Е.К. и др. Центры свободных радикалов в изолированных митохондриях крыс.// Биофизика.-1996.-Т.41.,№6.-С.1305-1308.

150. Федорова З.П., Федоров В.И., Шмырева Т.И. и др. Влияние янтарнокислого натрия на функцию почек после острой массивной кровопотери // Физиологический журнал.-1980.-Т.26., №5.-С.607-611.

151. Федотчева Н.И., Геслер H.H., Аникеева С.П. и др. Метаболиты пропионатного пути как регуляторы окисления жирных и дикарбоновых кислот в митохондриях печени //Биохимия.-1993.-Т.58., №4.-С.599-605.

152. Федюк М.А., Великий М.М., Забабурина М.Л. и др. Динамический биосинтез никотинамидных коэнзимов из никотинамида и никотиновой кислоты в тканях крыс // Украинский, биохимимический журнал.-1996.-Т.68., №2.-С.29-33.

153. Фрейдлин И.С. Иммунная система и её дефекты.Санкт-Петербург: АЛТУС. 1998.-112 с.

154. Фролькис P.A. Влияние янтарнокислого натрия на окислительные процессы в сердце при инфаркте миокарда // Гипертоническая болезнь, атеросклероз и коронарная недостаточность.-1978.-№10.-С.94-97.

155. Хватова E.H., Мартынов Н.В. Метаболизм острой гипоксии. Горький: Медицина, 1977. -112 с.

156. Холоденко Б.Н., Милажан В.Ю., Борутайте В.И., и др. Регуляция скорости митохоиндрального дыхания. Сравнение окисления сукцината и НАД-зависимых субстратов// Биохимия.-1991.-Т.56., №8.-С. 1420-1428.

157. Царегородцева Т.М., Серова Т.И. Цитокины в гастроэнтерологии. -М.: Издательство РГМУ, 2003.-126 с.

158. Циммерман Я.С. Современные проблемы этиологии язвенной болезни // Клиническая медицина.-1993.-№1.-С.6-11.w

159. Чекман И.С., Гриневич А.И. Цитохром Р-450: воздействие лекарств и ядов // Фармакология и токсикология.-1984.-№1.-С. 119-123.

160. Чекман И.С., Туманов В.А., Горчакова Н.О. Клинико-фармакологическое действие никотинамида // Врачебное дело.-1997.-№6.-С.17-22.

161. Чекнев С.Б. Недостаточность системы интерферона как механизм Ф развития иммунодефицита по естественным киллерам // Иммунология.-1993.6.-С.8-11.

162. Чекнев С.Б. Регуляция активности естественных киллеров человека аутологичным интерфероном // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1994.-№9.-С.281-284.

163. Чекнев С.Б. Циркулирующий сывороточный интерферон и его влияние на активность естественных киллеров человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1994.-№12.-С.619-621.

164. Шевченко Е.В., Филькинштейн В.В., Иванов В.А. Повышение активности NK-клеток при использовании свернизких доз иммуномодулятора циклоферон // Цитология.-2001 .-Т.43., №7.-С.68-700.

165. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве / Под ред. М.Н. Кондрашевой, Ю.Г. Каминского, Е.И. Маевского. Пущино: Издательство ОНТИ РАН, 1996. 300 с.

166. Ф 172. Abel K., Alegria M.J., Rothaeucler K. et al. The relationship between simian

167. HIV RNA levels and mRNA levels о g alpha/beta interferons and IFN-alpha/beta-inducible Mx in lymphoid tissues of rhesus macaques during acute and chronic infection // J. Virol.-2002.-Vol.76., N16.-P.8433-8445.

168. Agam G., Argaman A., Livne A. Trombin-induced platelet agregationcis affected by external Na+ independently of Na+/H+ exchange // FEBS Lett.-1989.-Vol.244,Nl.-P.231-236.

169. Andah S.A., Bayly S.F., Cramer H. et al. Chemistry and biochemistry of 2,5-oligoadenylate-based antisense strategy // Curr. Med. Chem.-2001.-Vol.8., N10.-P.l 189-1212.

170. Anderson M.D. Oncolytic activity of NK-cells against SW-56 squamous ceervical carcinoma cell line: role of interferons alpha and gamma and CD 54 adhesion molecule in oncolysis // Gynecologic Oncology.-1994.-Vol.52., N.3.-P.365-372.

171. Anisimov V.N., Popovich I.G., Zabezhinski M.A. et al. Melatonin and colon carcinogenesis:I.Inhibitory effect of melatonin on development of intestinal tumors induced by 1,2-dimethylhydrazine in rats // Carcinogenesis.-1998.- Vol.18., N.8. P.-1549-1553

172. Ankel H., Capobianchi M.R., Castillitti C., Dianzani F. et al. Interferon induction by HIV glycoprotein 120: role of V3 loop // Virology.-1994.-Vol.205., N.1.-P.3443.

173. Arnaud P. The interferons: pharmacology, mechanism of action? Tolerance and side effects // Rev. Int. Med.-2002.-Vol.23., N.4.-P.449-458.

174. Aso H., Suzuki F., Yamaguchi T. et al. Induction of interferon and activation of NK cells and macrophages in mice by oral administration of Ge-132, an organic germanium compound // Gan To Kagaku Ryoho. 1982.-Vol.9., N11.-P. 1976-80.

175. Avdeev A. PH-metric log P. Glass electrode calibration in methanol-water, applied to pK, determination of water insoluable substances // Anal. Chem.-1993.-Vol.65., Nl.-P.42 49.

176. Backe K.W. The molecule as symbol for drug // Krankenpfl.-1999.-Bd.37., N6.-P.211-215.

177. Baldwin C.L., Sathiyaseelan T., Naiman B. et al. Activation of bovine periphrral blood gammadelta T cells for cell division and IFN-gamma production // Vet. Immunol. Immunopath.-2002.-Vol.87., N.3-4.-P.251-259.

178. Baldwin S.L., Powell T.D., Sellins K.S. et al. Hie biological effects of five feline IFN-alpha subtypes // Vet. Immunol. Immunopath.-2004.-Vol.89., N.3-4.-P. 153-167.

179. Bareca C., O Hare P. Suppression of herpes simplex virus 1 in MDBK cells via interferon pathway // J. Virol.-2004.-Vol.78., N16.-P.8641-8653.

180. Barile M., Passarela S., Bertoldi A., et al. Falvin adenin dinucleotide synthesis in isolated rat liver mitochondria caused by imported flavin mononucleotide // Arch. Biochem. Biophys.- 1993.-Vol.305., N.2.-P.442-447.

181. Bates C.J. Bioavailability of riboflavine // Eur. J. Clin. Nutr.-l 997.-Vol.51., N1.-P.38-42.

182. Baument A., Maier G. Purification and properties of acridone synthetase from cell suspension cultures // Z. Naturforsch.-1994.-Bd.49., N1.-S.26-32.

183. Berraondo P., Garcia-Navarro R., Gonsalez-Asequinolaza G. et al. The wooschuck interferon alpha system: cloning, family description and biological activity // J. Med. Virol.-2002.-Vol.68., N3.-P.424-432.

184. Berger B., Marquardt H. Pharmacological and toxicological aspects of new antitumor agents // Cancer. Letters.-1996.-Vol.56., N9.-P.2094.

185. Blanch-Olszewska Z., Veckenstedt A., Zaczynska E. Does physiological interferon play role in Mengo virus infection of mice? // Acta Virologica.-1993.-Vol.37., N.l-P.68-72.

186. Bowes J., Piper J., Thiermermann C. et al. Inhibitors of the activity of poly-ADP-ribose synthetase reduce the cell death caused by hydrogen peroxide in human cardiac myoblasts // Br. J. Pharmacol.-1998.-Vol. 124., N8.-P. 1760-1766.

187. Bowes J., Ruetten H., Martorana P.A., et al. Reduction of miocardial reperfusion injury by an inhibitor of poly-ADP-ribose synthetase in the pig // Eur. J. Pharmacol.-1998.-Vol.359., N.2-3.-P. 143-150.

188. Int. J. Vitam. Nutr. Res.-1997.-Vol.67., N5.-P.321-328.

189. Bremecker K.D., Bohner A. Polyacrylaye gels: use of novel bases in the prescription department // Deutche-Apotheker-Zeitung.-1990.-N130.-S.401-403.

190. Cappielo M., Mascia L, Scolozzi C., et al. In vitro assesment of salvage pathways for pyrimidine bases in rat liver and brain // Biochem. Biophys. Acta.-1998.-Vol.1425., N2.-P.273-281.

191. Cassiano O., Data P.G. Individual and combined action of N-methylglucamine and papaveroline on the spontaneous motiflty of the isolated artery // Minerva Anestesiology.- 1969.-Vol.35., N12.-P. 1265-1267.

192. Cataglia M, Vitale G., Marra M. et al. Translational and post-translational modifications of proteins as new mechanism of action alpha-interferon // Amino Acids.-2004.-Vol.26, N4.-P.409-417.

193. Chen S.W., Xin Q. Anhiolitic-like effects of succinic acid in mice I I Life Science .-2003.-Vol.73., N25.-P.3257-3264.

194. Chomczynski P., Sachi N. One-step method for RNA isolation from cells and tissues // Analytical Biochemystry- 1987.- Vol.162., N2.-P. 156-159.

195. Chromy Vol., Kulhanek Vol., Fischer J. D (-)-N-methylglucamine buffer for pH 8.5-10.5 // J. Clin. Chem.-1978.-Vol.24., N2.-P.379-381.

196. Chua M., Betz WJ. Characterization of ion channels on surface membrane of adult rat sceletal muscle // Biophys. J.-1991.-Vol.59., N6.-P.1251-1260.

197. Chuck L.H.S. Direct pharmacological and osmolal effects of contrast media on the mechanics of heart muscle isolated from cats // Am. Heart J.-1984.-Vol.l08., N1.-P.97-104.

198. Cogcia E.M., Krust B., Hovalessian A.G. Specific inhibition of viral protein in HIV-1 infected cells in responce to interferon threatment // J. Biol. Chem.-1994.-Vol.269., N.37.-P.23087-23094.

199. Cong X.L., Wang X.L., Su Q. et al. Protective effects of extracted human-liver RNA, a known interferon inducer, against radiation induced cytogenic damage in mice // Toxicol. Lett.-1998.-Vol.l4.-N.2.-P.189-198.

200. Cormican M.G., Marshall S.A., Jones R.N. Preliminary interpretive criteria for disk diffusion susceptibility testing of a compound in everninomicin class of antimicrobial agents // Diagn. Micribiol. Infect. Dis.-1995.-Vol.23.,N.4.-P. 157-160.

201. Crino A., Schiaffini R., Manfrini S. et al. A randomized trial of nicitiamid and vitamine E in children with recent onset type 1 diabetes // Eur. J. Endocrinol.-2004.-Vol.150., N5.-P.719-724.

202. Dal en A. Pharmacology of current anti-herpes agent // Treatment of Herpes Sioplex, Varicella and Zoster. London: Pergamont, 1998.-P.48-61.

203. Data P.G., Anfossi A., Cassiano O. Haemodynamic effects of methylglucamine // Bull. Ital.Biol.-1968.-Vol.44., N23-P.2043.

204. Delles Ch. A higly-selective cation current activated by intracellular calcium release in MDCK cells // J. Phys. (Cambridge).-1995.-Vol.486., N3.-P.557-569.

205. De Lucca F.L., Sales Vol.S., Souza L.R. et al. Regulatory RNA induces the production of IFN-gamma, but not IL-4 in human lymphocytes: role RNA-dependent protein kinase // Mol. Cell. Biochem.-2003.-Vol.247., Nl.-P.211-217.

206. Dombrowski J.J., Lambooy J.P. The reduction of sucinic dehydrogenase in rat by 7-methyl-8-ethylflavine // Arch. Biochem. Biophys.-1973.-Vol. 159., N.I.-P.378-382.

207. Dondi E., Rogge L., Lutfalla G. et al. Down-modulation of responses to type 1IFN upon T cell activation // J. Immunol.-2003.-Vol.170., N2.-P.749-796.

208. Dorn H.,Welfle H., Liebig R. Glucitol, 1-deoxy-l-methylamino-D- potential cytostatics.4. Configuration and derivatives of the 1-deoxy -1-methylaminoalditols, obtained from aldohexoses and aldopentoses // Chem.Ber.-1966. -Bd.99., N3.-S.812-822.

209. Endres M., Wang Z.Q., Namura S. et al. Ischemic brain injury is mediated by activation of poly-(ADP-ribose) polymerase // J. Cereb. Blood Flow. Metab.-1997.-Vol.l7.,Nll.-P.l 143-1151.

210. Erb C., Klein J. Enhancement of brain choline levels by nicotinamide: mechanism of action // Neurosci. Lett.-1998.-Vol.249., N2-3.-P. 111-114.

211. Farid N.A. Synthesis of 14-C-meglumine salicylate and its disposition in humans after oral administration // Jour. Pharm. Sci.-1977.-V66., N4.-P.536-538.

212. Fedosova N.U., Estmann M. Nucleotide-binding kinetics of Na,K-ATPase : cation dependence // Biochemistry.-2004.-Vol.43., N.14.-P.4212-4218.

213. Fiete D., Brownell M.D., Baenziger J.U. Evidence for transmembtane modulation of ligand-bindung site of the hepatocyte dalactose / N-acetylgalactosamine-specific receptor // J. Biol. Chem.-1983.-Vol.258., N2.-P.817-823.

214. Friedman E.J. Immune modulation by ionizing radiation and its implication cancer immunotherapy// Curr. Pharm. Des. -2002.-Vol.8., N19.-P. 1765-1780.

215. Fremes S.E., Furukawa R.D., Zhang I. et al. Cardiac storage with UW solution and nucleoside transport blocer // Ann. Thatac. Surg.-1995.-Vol.59., N5.-P.l 127-1133.

216. Freund M., Schwartz A. N-Diphenylglycine-o-carboxylic acid and its derivatives // Chem.Ber.-1923.-Bd.56., N9-S.1828-1831.

217. Gerrardin J.A., Baise E.A., Pire G.A. Genomic structure, organization, and promouter analysis of Mx gene // Gene.-2004.-Vol.4., N326.-P.67-75.

218. Gessani S., Puddu P., Varano B. et al Role of interferons in the restriction of HIV replication in human monocytes/macrophages // Research in Immunology.-1994,-Vol. 145., N8-9.-P.659-662.

219. Glinsky J.A., Deutch H.M., Hernandez M. et al. Synthesis of congeners and products. Water-soluable prodrugs od taxol // J. Med. Chem.-1989-Vol.32., N4,-P.788-792.

220. Goldstein B.M., Colby T.D. IMP dehydrogenase structural aspects of ingibitor binding// Curr. Med. Chem.-1999.-Vol.6., N.7-P.529-537.

221. Gross C.J., Henderson L.M. Degestion and absorbtion of NAD by small intersine in rat// J. Nutr.-1983.-Vol.113., N2.-P.412-420

222. Grove C., Liendenberg W., du Preez J.L. et al. Impruving the aqueous solibility of triclosan by solubilisation, complexation by MGA // J. Cosmet. Sci.-2003.-Vol.54., N6.-P.537-550.

223. Ham S.K., Song G.I., Yun Y.S. et al. Gamma irradiation-reduced IFN-gamma expression, STAT1 signals, and cell-mediated immunity // J. Biochem. Mol. Biol.-2002.-Vol.35., N6.-P.583-589.

224. Hammarlund E.R., Van Pevenage G.L. Sodium chloride equivalents, cryoscopic properties, and hemolytic effects of certain medicináis in aqueous solution//J. Pharm. Sci.-1966.-Vol.55.-N12.-P.1448-1451.

225. Hader R.C., Dean T.P. Incorporation of alphaxolane into different types od liposomes // J. Pharm. Pharmacol.-1993.-Vol.45., N11.-P.990-992.

226. Hasko G., Sitkovsky M., Szabo C. Immunomodulatory and neuroprotective effects of inosine // Trends Pharmacol Sci.-2004.-Vol.25., N3.-P.152-157.

227. He W., Miao F.G., Lin D.C. et al. Cytric acid cyle intermediate as ligands for orhan G-protein receptors // Nature.-2004.-Vol.429., N6988.-P. 143-145.

228. Heeg J.F., Born G.S., Kessler W.N. Absorbtion, distribution and excretiion of 14-C-meglumine in rats and dogs after administration of 14-meglumine salicylate // J. Pharm. Sci.-1977.-V66., N1.-P.96-99.

229. Hegde R., Yerigeri M., Krishnegovda G. et al. Anti-calmoduline acridone derivatives // Eur. J. Med. Chem.-2004.-Vol.39., N2.-P.161-177.

230. Heindel N.D, Van Dongen J.M., Fitzpatrick D.A. et al. Macromallecular attachment as methabolic stabilaser for labile radiosentiser // J. Pharm. Sei.-1987.-Vol.76, N5.-P.384-386.

231. Herz G.M. Molecular mechanisms of interferon resistance mediated by viral-directed inhibition of PKR, the interferon-induced protein kinase // Pharmacology & Therapeutics.-1998.-Vol.78., N1.-P.29-46.

232. Hicks R.E, Newell S.V. An improved gas chromatographic method formeasuring glucosamine and muramic acid concentrations // Anal. Biochem.-1983.-Vol.128, N2.-P.438-445.

233. Hoppel C.L, Tandler B. Riboflavin deficiency // Prog. Clin. Biol. Res.-1990.-N.321 .-P.233-248.

234. Host-Homfeld A., Zwarthoff E.C, Zawatzky R. et al. Cell type specific expression and regulation of murine interferone a- and ß-genes // Virology.-1989.-Vol.173, N2.-P.539-550.

235. Hu D, Huang X.X, Feng Y.P. Effect of dl-3-butylphtalamide on purine methabolites in striatum extracellular fluid in four vessel occlusion rats // Yao Xue Xue Bao.-1996.-N31-N.l-P.12-17.

236. Hultquist D.E., Xu F, Quandt K.S, et al. Evidence that NADPH-dependent methemoglobin reductase and administrated riboflavin protect tissues from oxidative injury//Am. J. Hematol.-1993.-Vol.42., N1.-P.13-18.

237. Ikeda H, Old L.J, Schreiber R.D. The roles of I FN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting // Cytokine Growth Factor Rev.- 2002.-Vol.13., N2.-P.95-109.

238. Ikeda K. Prevention of hepatocellular carcinogenesis by interferon // Nipponn Rinsho.-2001 .-Suppl.6.-P.755-763.

239. Hani A., Lichtstein D., Somer H. et al. Aminodeoxyglucitols for treatment of hyperacidity in body fluids // Chem. Abst.-1988.-Vol.109., N23.-P.204298.

240. Inglot A.D., Mlochowski J., Szulk M. et al. Induction of interferon in mice by sodium salt of 9-oxo-10-acredianacetic acid: specific enhancement by analogs // Arhivum immunologiae et therapiae experimentalis.-1985.-Vol.33, N2.-P.275-285.

241. Isbir C.S., Ak N., Kurtkaya O. et al. Ishemic preconditioning and nicotinamide in spinal cord protection in experimental model of transient aortic occlusion//Eur J. Cardiol. Surg.-2003.-N.5.-P. 1028-1033.

242. Ishidate M.J. Primary mutagenicity screening of food additives currently used in Japan // Food Chemistry and Toxicilogy.-1984.-Vol.22., N8.-P.623-636.

243. Jablonovski J. IFN-alpha: theraupeutic options in HIV and HIV/HCV, HIV/HBV infection//Infection.-2003.-Vol.31.,N2.-P.131-133.

244. Junghanns K.T., Kneusel R.R., BaumentbA. Et al. Molecular cloning of acridone synthetase // Plant Mol. Biol.-1995.-Vol.27., N.4.-P.681.-682.

245. Karianipour M., Ronquist G., Wikstrom G. et al. Ishaemic preconditioning alters the energy metabolism and protects the ishaemic myocardium in stepwise fashion // Acta Physiol. Scand.-2003.-Vol. 178., N2.-P. 129-137.

246. Karrer P., Herkenrath E. New reduction products resulting from the condensation of sugars and aliphatic amines // Helv.Chim.Acta.-1937-Vol.20., N1.-P.83-86.

247. Kasakov A.Y. Activation of KATP channels by Na/K pump in isolated cardiac myocytes and giant membrane patches // Biophys. J.-1998.-Vol.75., N.6.-P.2858-2867.

248. King M.C., Raposo G., Lemmon M.A. Inhibition of nuclear import and cell-cycle progression by mutated forms of dynamin-like GTPase Mx // Proc. Nathl. Acad. Sci. USA-2004.-Vol. 101., N4.-P.8957-8962.

249. Kishi T., Takahashi T, Usui A., Okamoto T. Ubiqinone redox cycle as cellular antioxidant defence system // Biofactors.-1999.-Vol. 10., N2-3.-P.31-38.

250. Klaidman L.K., Mukheqee S.K., Hutchin T.P., et al. Nicotinamide as a precursor for NAD-prevents apoptosis in the mouse brain induced by tertiary-butylhydroperoxide //Neurosci. Lett.-1996.-Vol.206., Nl.-P.5-8.

251. Kleta R. Effects of cell differentiation on ion conductans and membrane ^ voltage in LLC-PK1 cells // Pflugers Archiv European Journ. Physiol.-1995.1. Vol.429., N3.-P.370-377.

252. Kadahidze Z .G, Chertkova A.L., Slavina E.G., et al. Effect of interferon inducer neovir on sensitivity NMDRl(-) and NMDR1(+) cells to antitumor drugs // Russ. J. Immunol.-2000.-Vol.5., N4.-P.385-30.

253. Kobayashi M., Shimizu S. Nicotinic acid and nicotinamide // Nippon Rinsho.-1999.-Vol.57, N10.-P.2211-2217.

254. Kornbluth R.S, Matsuzaki H, Meylan P.R, Richman D.D. Interferon ineraction with HIV-1 in macrofages // Research in Immunology.-1994.-Vol.145,1. N8-9.-P.664-666.

255. Koster H.P, Hartog A, Van Os C. et al. Calbindin D28 facilitates cytosolic calcium diffusion without interfering with calcium signaling // Cell Calcium.-1995.-Vol.18, N.3.-P.187-196.

256. Kotegawa M, Sugiama M, Haramaki N. et al. Protective effects of riboflavine and its derivatives against ischemic pererfused damage of rat heart // Biochem. Mol. Biol. Int.-1994.-Vol.34, N4.-P.685-691.

257. Kramer M.J, Cleeland R, Grunberg E. et al. Antiviral activity of 10-carboxymethyl-9-acridanone // Antimicrob. Agents Chemotherapy.-1976-Vol.9, N2.-P.233-238.

258. Kramer M.J, Taylor J.L, Grossberg S.E. Induction of interferone in mice by 10-carboxymethylacridanone // Methods Enzymology.-1981.-Vol.78, N2.-P.284-287.

259. Kraudelt H, Schilde U, Uhlemann E. et al. Crystal structure of 1-methylamino-D-l-deoxyglucitol and 1-methylamino-D-l-deoxyglucitol hydrohloride // New Crystal. Structures.-1998.-Vol.213.-N1.-P. 177-179.

260. Krebs H.A. The intermediary stages in biological oxidation of carboxydrate // Advances of Enzymology.-l943.-Vol.3, N2.-P.191.

261. Krebs H.A., Eggleston L.V, Allessandro A. et al. The effect of succinate and amytal on reduction of acetoacetate in animal tissues // Biochemical Journal.-1961.-Vol.79, N5.-P.537-542.

262. Krishegowda G, Hegde R, Dass C. et al. Synthesys and chemical characterization acridones in multidrug resitant cancer cells // Bioorg. Med. Chem.-2002.-Vol.10, N7.-P.2367-2380.

263. Kwong L.K, Sohal R.S. Substrate and site specificity of hydrogen peroxide generation in mouse mitochondria // Arch. Biochem. Biophys.-1998.-Vol.350, N1.-P.l 18-126.

264. La Rotonda m.I, Scheffino O. Analysis of methylglucamine in pharmaceutical forms using HPLS // Boll. Soc. Ital. Biol. Sper.-1978.-V54, N24.-P.2590-2594.

265. Labrude P. Freeze-drying of hemoglobine in presence carbohydrates // Journ. Pharm. Pharmacology.-1980.-V32, N8.-P.588-589.

266. Landauer W, Sopher D. Succinate, glycerophosphate and ascorbate as source of cellular energy and as antiterratogens // J. Embriology Exp. Morphology.-1970.-Vol.24, N1.-P. 187-202.

267. Lee N.S, Rossi J J. Control HIV-l replication by RNA adherence // Virus Res.-2004.-Vol. 102, N1.-P.53-58.

268. Legrand A, Vadrot N, Lardeux B. et al. Study of the effects of interferon on several human hepatoma cell lines: analysis of signaling pathway of cytokine // Liver Int.-2004.-Vol.24, N2.-P. 149-160.

269. Lippiat J.D. Block of cloned BK Ca channels ( rSLo) expressed in HEK 293 cells by N-methylglucamine // Pflugers Archiv Eur. J. Physiol.-1998.-V436, N5.-P.810-812.

270. Lira M., Schteingart C.D., Steinbach J.N. et al. Sugar absorbtion by biliary ductular epithelium of rat: evidence for two transport system // Gastroenterology.-1992-Vol.l02., N6.-P.2190-2192.

271. Love S. Oxidative stress in brain ishemia // Brain Pathol.-1999.-Vol.9., N1.1. P.l 19-131.

272. Lyakhov S.A., Suveizdis Ya.L., Andronati S.A. et al. Biologicaly active acridine derivatives. Part 1. Unexpected preparation of 10-carboxymethylacridine-9-one methyl ester // Pharmazie.-1994.-Vol.49., N5.-P.367-368.

273. Maitra P.K., McMillan N. A., Desai S. et al. fflV-1 TAR RNA has an intrinsic ability to activate interferon-inducible enzimes //Virology.-1994.-Vol.204., N.2.-P.823-827.

274. Marek C.P., Hultquist D.E., Shlafer M. Myocardial flavine reductase and riboflavin: a potent role in decreasing reoxygenation injury // Biochem. Biophys. Res.-l 995.-Vol.212.,Nl.-P.35-40.

275. Malenkov A.G., Bogatyreva S.A., Modjanova E.A. Alteration of properties of cell contacts during progression of hepatomas // Exp. Cell Res-1973.-Vol. 76., N.2.-P.307-318.

276. Maloney A.N., Burton A.F., Robinson J.W.L. et al. The Pharmacological effects of N-methylglucosamine // Jour. Lab. Clin. Med.-1937.-Vol.22., N6.-P.600-606.

277. Malroe G.T., Deluca N.A., Knipe D.M. Herpes simplex virus has multiple m mechanisms for blocking virus-induced interferon production // J. Virol.-2004.

278. Vol.78., N16.-P.8411-8420.

279. Marcus P.I., Sekellick M.J. Interferon induction; regulation by both virus and cell // Hokkaido Journal of Medical Science.-1994.-Vol.69., N.6.-P. 1320-1331

280. Martindale The Extra Pharmacopoeia, 30- th. Edition.,- London: Science, 1993.-P.1385.

281. Matsumoto T., Wakabayashi K., Kobayashi T. et al. Alterations in vascular endothelial function in the aorta and mesenteric artery in type 2 diabetic rats // Can. J. Physiol. Pharm.-2004.-Vol.82., N3:-P. 175-182.

282. McDonald M.J., Fahien L.A. glyceraldehyde phosphate and methyl esters of succinic acid. Two new potent insulin secret // Diabetes.-1988.-Vol.37., N.9.-P.997-999.

283. Mena A., Popowich Y., Godson D.L. et al. Innate immune responses induced by CpG oligodeoxynucleotide stimulation of ovine blood mononuclear cell // Immunology.-2003.-Vol. 110., N2.-P.250-257.

284. Meyer G., Garavaglia M.L., Bazzini C. et al. Role played by sodium in activity-depended secretion of neutrophins revisited // Eur. J. Neurosci.-2000.-Vol.12., N.9.-P.3096-30106.

285. Meyer G., Garavaglia M.L., Bazzini C. et al. An anion channel in guinea pig gallbladder epithelial cells is highly permeable to HCO- // Biochem. Biophys. Res. Comm.-2000.-Vol.276., N. 1 .-P.312-320.

286. Meylan P.R., Guatelli J.C., Munis J.R. et al. Mechanisms for inhibition of HIV replication by interferon-alpha, beta and gamma in primary human macrofages // Virology.-1993.-Vol.191., N1.-P.138-148.

287. Miosda N., Roemer W. Chemical-analitical characterization and determination of 10-carboxymethyl-9-acridanone // Pharmazie.-1986.-Bd.41., N5.-S.326-328.

288. MishraG., Rountary R., Das S.R., Behera H.N. Alloxan diadetes in swiss mice: activity of Na(+)K(+)-ATPase and succinic dehydrogenase // Indian J. Physiol. Pharmacology.-1995.-Vol.39., N3.-P.271-274.

289. Miyji K. The action and therapeutic effect of sodium succinate on cardial arrhytmias // Kyushi Journal Medical Science.-1956.-N7.-P. 14-28.

290. Modjanova E.A, Malenkov A.V. Alteration of properties of cell contacts during progression of hepatomas // Exp. CellRes. -1973 .-Vol.76, N2.-P.305-14.

291. Nakajima A, Sokawa I. Induction of blood 2,5-oligoadenylate synthetase activity in mice by gastric administration of IFN-tau // J. Interferon Cytokine Res.-2002.-Vol.22, N.3.-P.397-402.

292. Nakaya T, Sato M, Hata N. et al. Gene induction pathways mediated by distinct IFNs during viral infection // Biochem. Biophys. Res. Commun.-2001.-Vol.283,N5.-P.l 150-1156.

293. Nahlovsky B.D, Lang J.H. Determination of methylglucamine in urine using high performence liquid chromatography//Jour. Chromatography.-1974.-V 101, N1.-P.225-227.

294. Neachi A.K, Kaushik R.S, Mena A. et al. CpG oligonucleotide induction of antiviral effector molecules in sheep // Cell Immunol.-2004.-Vol.227, N1.-P.24-27.

295. Neta R. Modulation of radiation damage by cytokines // Stem Cells.-1997.-Vol. 15.-Suppl.2.-P.87-94.

296. Oettmeier W, Masion K. Acridones and quinolones as inhibitirs functions of ubiquinone in the mitochondrial respiratory chain // Biochem. Soc. Translations -1994.-Vol.22, N1.-P.213-216.

297. Oettmeier W, Masson K, Kalinna S. 3H.-7-azido-4-isopropylacridone labels CYS 159 of bovine mitochondrial ADP/ATP-carrier protein // Eur. J. Biochem.-1995.-V227, N3.-P.730-733.

298. Oguro H, Iijima K, Takahashi K. et al. Succesful treatment with succinate in patient with melas // Internat. Med.-2004.-Vol.43, N5.-P.427-431.

299. Ohdo S, Wang D.S., Koyanagi S. et al. Bais for dosing time-dependent changes in antiviral activity of interferon in mice // J. Pharm. Exp. Ther.-2000.-Vol.294, N2.-P.488-493.

300. Ortega L .G, McCotter M .D, Henry G.L, McCormack S.J. mechanism of interferon action. Biochemical and genetic evidence for the intermolecular association of RNA-depended protein kinase PKR from human c ells // Virology.-1996.-Vol.215, N.1.-P.31-39.

301. Osborn B.L, Olsen H.S, Nardelli B. et al. Pharmacokinetics and pharmacodynamic studies of human serum albumin-interferon fusion protein // J. Pharm. Exp. Ther.-2002.-Vol.303, N2.-P.540-548.

302. Pat 139,806 A 61 K 45/11 Process for preparing lO-(acetylcholine) acridone as interferone stimulants/ Z. Szulk ,J. Mlochowski , A. Inglot / Poland/. Deel. 30.11.83.; Appl. 18.04.85. //Chem. Abstr.-1991.-Vol. 114,N15.-P. 143170p.

303. Pat PCT WO 96/07423 A 61 K 03/11. Immunomodulatying medicinal agent. / O.V Travkin, D.D. Genkin /Russia/.-Decl. 10.01.94.; Appl. 23.03.95.- //Chem. Abstr.-1996.-Vol.l25,N4.-P.41787e.

304. Pat. 325,244 CI A61K 07/12 Aqveous pharmaceutical solution of fat-soluable substance/ K. Shibisawa, Sh. Ohsawa / Europ. / Deel. 30.10.86.; Appl. 22.01.88. //Chem. Abstr.-1990.-Vol.ll2,N18.-P. 164989m.

305. Pat. 01,294,627 Sustained-release microcapsule for waresoluable drug / T. Hisamori, M.Nishimura. /Japan/. Deel. 12.11.85.; Appl. 24.05.88. //Chem.Abstr.-1990.-Vol.113,N6.-P.46296f.

306. Pat. 2,717,691 CI. C07 25 Oftalmic gels contaning carboxyvinyl polymers . G .KSchwarohn / France/.- Deel. 12.02.92.; Appl. 22.03.94. -//Chem.Abs.-1995.-Vol.123,N26.-P.300- 350g.

307. Pat. 82/123,115 CI. A61 K 13/07 Gels for oftalmological therapy Shering Corp./Japan/-Decl.30.06.79; Appl.l8.01.81.-//Chem. Abst.-1982.-Vol.97,N22.-P.128288e.

308. Pat. WO 92/20,824 A 61 K 7/12. c-DNA-photofluor probe and methods of making, assaying and using same / S.Steiner, R. Feldstein, R.T. Mccabe / Europ./. Deckl.14.01.89.; Appl. 20.05.91. -//Chem. Abstr.-1993.-Vol.118.,N9.-P.74777 k.

309. Pat. 136,596 A 61 K 12/03 Preparatin of 2,7-dibromo-10-carboxy-methylacridanone./ Z.Szulk, A.Inglot /Poland/.- Decl. 10.01.85.; Appl. 28.02.87.-//Chem. Abstr.- 1990.-V113., N19.-P. 171902b.

310. Pat.3,681,360 C07c 221/5 Antiviral substituted acridones /R.Freuer., E. Grunberg /USA/. Decl. 23.09.70.; Appl. 01.08.72.- //Chem.Abstr.-1972.-Vol.77.,N17.-P.114269q.

311. Pat.WO 97/12,597 CI. A 61 K Use of carbohydrates for promoting skin exploration / M. Philippe, C. Ebendan-Nappe / Europ./.- Decl. 24.06.92.; Appl. 4.10.95.- Chem. Abstr.-1997.-Vol. 126.,N24.-P.320909 g.

312. Patent 13,746 CI. C07C N-methylglucamine/H. Pfanz , K.N.Haendel (DDR).-Decl. 05.0156.; -Publ.-02.09.57.-//Chem. Abst.-1959.-Vol.53., N12.-P.11261.

313. Patent 2,016,962-963 CI. C07C. Glucamines I R.B.Flint., P.L.Salberg (USA).-Decl.07.12.30;-Publ. 8.10.32.-//Chem. Abstr.-1935.-VoI.29.,N22.-P.8007.

314. Patent 23,346 CI. C07C. 1-Deoxy-l-methylamino-D-glucitol/R. Drux , K.H. Haendel K.H.(DDR).-Decl.l0.03.58;-Publ. 23.01.60-//Chem. Abst.-1963.-Vol.58,N7.-P.6918d.

315. Patent 5,858,886. C07 J\ 219/06. Acridinone derivative composition containing same and method for using same to threat Chlamidia trahomatis /N.P Chizov, R.A. Kupchinsky ,A.L. Kovalenko, L.E Alexeva. /USA/.Decll.04.93.;Appl. 19.09.97

316. Patent 7427848 CI. C07C N-Methylglucamine /T.Nomura ,1. Mori (Japan).-Decl.05.01.66.;-Publ. 21.09.68-//Chem. Abs.-1975.-Vol.82,N21.-P140443q.

317. Patent France 2,642,420 C1:C07C55/10 Substained-release oral iron formulations. Stamm A., Durupt L., Fontaone S., Pabst J.-I. /France/.-Decl. 27.01.89.-Publ.03.08.90.-//Chem. Abstr.-1991.-Vol.ll4.,N16.-P.150190y.

318. Patent PCT WO 97/02,34 C07 D12/60. Anti-unfection, anti-inflammatory ^ and antitumor drug./ O.Vol. Travkin , E.Vol. Yakovleva / Europ/.-Deel. 10.04.96.;

319. Appl. 12.06.97 -//Chem. Abstr.-1997.-Vol.l26.,N15.-P.203703z.

320. Piantadosi C.A., Zhang J. Mitochondrial generation of oxygen species after brain ishemia in the rat // Stroke.-1996.-Vol.27., N2.-P.327-331.

321. Piasecki E., Inglot A.D., Czyrski J.A. et al. Interaction of sodium salt of 9-f oxo-10-acridinacetic acid (CMA) and its analogs with serum albumin // Arhivumimmunologiae et therapiae experimentalis.-1985.-V33., N219.-P.299-310.

322. Piasecki E., Szule B, Szule Z. et al. A simple colorimetric method for the measurement of phagocytosis // Arhivum immunologiae et therapiae experimentalis.-1988.-Vol.36, N4.-P .487-495.

323. Pihard J.M, Marsac C, Barkaoul E, et al. Leigh syndrome and leukodystrophy due to partial succinate dehydrogenese deficiency: regression with riboflavin // Arch. Pediatr.-1999.-Vol.6, N.4.-P.421-426.

324. Pitha P.M. Multiplay Effects of interferon on replication of human ^ immunodeficence virus type 1 // Antiviral Research.-1994.-Vol.24, N2-3.-P.205219.

325. Poly G, Biswas P., Faucci A.S. et al. Interferons in the pathogenesis and threatment of Human immunodeficiency virus infection // Antiviral Research.-1994.-Vol.24, N2-3.-P.221-233.

326. Popovich I, Zabezhinsky M.A, Kovalenko A.L. et al. Inhibitory effect of synyhetic interferon inducer Cycloferon on 1,2-dimethylhydrazine-inuced colon carcinigenesis in rats // Cancer Letters.-1999.-N.144.-P. 1-5.

327. Rempola B, Demkovicz-Dobranzki K, Fikus M. et al. Genotoxicity assesment of low-molecular weight interferon inducers by the SOS chromotest // Mutah. Res.-1986.-Vol.172., N1.-P.47-50.

328. Ren L.C, Huang X.Y, Long J.H. Effects of suxccinic acid on function of cultured human fibroblasts // Zhonghua Shao Shang Za Zhi.-2004.-Vol.20, N1.-P.34-36.

329. Riobo N.A., Melani M, Sanjuan N. et al. The modulation of mitochondrial nitric-oxide synthetase activity in rat brain by riboflavine // J.Biol.Chem.-2002.-Vol.277, N.45 .-P.42447-42455.

330. Roberts E., Bredoff H.M. Transamination of y-aminobutyric acid and ß-alanine in brain and liver // J. Biol. Chem.-153.-Vol.201, N3.-P.393-398.

331. Roemer W, Schulze W. 10-Carboxymethyl-9-acridanone as an inhibitor of c-AMP phosphodiesterase // Pharmazie.-1983.-V38, N7.-P .495-496.

332. Roemer W, Tonew E, Schulze W. Cyclic AMP metabolizm and interferon induction in mice after treatment with 10-carboxymethyl-9-acridanone // Acta Virologica.-1986.-V30, N5.-P.41-417.m

333. Rohle W., Fritzche H. Restriction pH DNA conformation flexibility induced by antibiotics and aminocompaunds // Studia Biophisica.-1984.-V104., Nl-3.-P.303-308.

334. Rosental O., Drabkin D.L. Oxidative responce of normal and neoplastic human tissue slices to added succinate and p-phenilendiamine // Cancer Research.-1944.-v0i.4., N. 10.-P.487-491.

335. Ruan A.J., Weitzel P.F., Benness G.T. The metabolism and excretion ofmethylglucamine (N-methyl-D-glucamine) in rat // Life Sei. 1976.-V19., N12.-P. 1925-1927.

336. Ruizaire-Dubois B., Bostel S., Dubois J.M. Background osmolyte current involved in cell volume regulation of nuuroblastoma and glioma hybride NG10815 cells // Gen Physiol. Biophys.-2001.-Vol.20., N3.-P.281-291.

337. Sahlin K.,Katz A., Broberg S. Tricarboxylic acid cycle intermediates in human muscle during prolonged exercise // Am. J. Physiol.-1990.-Vol.259., N5.-P.834-841.

338. Said H.,McCloud E., Yanagawa N. Riboflavin uptake by rat liver basolateral membrane vesicles // Biochim. Biophys. Acta.-1995.-Vol. 1236., N2.-P.244-248.

339. Sakamoto M., Takeshige K., Yasui H. et al. Cardioprotective effect of succinate against i shemia/reperfusion injury// Surgery Today.-1998.-Vol.28., N5.-P.522-528.

340. Salathe M., Ivonet P.I., Lieb. T. Agonist stimulated calsium decreases in ovine ciliated airway epitalial cells // J. Physiol.-2001 .-Vol.531., N1 .-P. 13-26.

341. Sanders A.P, Currie W.D, Woodhall B. et al. Protection of brain metabolism with glutatione, glutamate,y-aminobutyrate and succinate // J. Soc. Exp. Biol. Med.-1969.-Vol. 130., N8.-P. 1021-1022.

342. Salovara S , Sandberg A.S, Anhlid T. e t al. C ombinet impact o f pH and organic acids on uptake by CACO-2 cells // J. Agric. Food. Chem.-2003.-Vol.51, N26.-P.7820-7824.

343. Schen C.C, Huang H.M, Ou H.C. et al. Protective effect of nicotinamide on neuronal cells under oxygen and glucose deprivation and hypohia // J. Biomed. Sci.-2004.rVol.ll., N4.-P.472-481.

344. Schwartz L.M, Bukowski T.R, Revkin J.H, et al. Cardiac endothelial transpot and metabolism od adenosine and inosine // Am. J. Physiol.-1999.-Vol.277, N3.-P.1241-1251.

345. Sharma R.J, Fernando A.R, Griffiths J.R. Inosine methabolism in rat // Biochem. J. -1982.-Vol.208, N3.-P.839-844.

346. Shensi S.L, Canzoniero L.M, Turetsky D.M. et al. Glutamate receptor mediated calcium entry in neurons derived from pi9 embrional carcinoma cells // J. Neurosci. Res.-1996.-Vol.45, N.3.-P.226-236.

347. Shirazi Y, Popik W, Pitha P.M. Modulation of interferon-mediated inhibition of human immunodificiency virus by Tat // J. Interferon Research.-1994.-Vol.14, N.5.-P.259-263.

348. Simpson R.J, Peters T.J. Fe2+ uptake by intestinal brush-border membrane vesicles from normal and hypoxic mice // Biochim. Biophys. Acta. -1985.-Vol.814, N2.-P.381-388.

349. Sinegal F.P, Fitzgerald-Bocarsly P, Montefiori D. et al. Interferon-alpha generation and immune reconstitution during antiretroviral therapy for HIV // AIDS.-2001-Vol.15, N13.-P. 1603-1612.

350. Singer T.P, Ramsay R.R, Ackrell B.A. Deficience of NADH and succinate dehydrogeneses in degenerative dioseases and myopathies // Biochem. Biophys. Acta.-1995.-Vol. 1271., N. 1 .-P.211 -219.

351. Siverman R.H. Fascination 2,5-A-depended Rnase: a unique enzyme that functions in interferon action // J. Interferon Research.-1994.-Vol. 14, N.3.-P.101-104.

352. Smith C, Francis R, Guilbert R. et al. Growth factors rescue of cytokine mediated trophoplast apaptosis // Placenta-2002.-Vol.23, N4.-P.322-330.

353. Smith J.B. Sodium-calcium antiport in cultured arterial smooth muscle cells. Inhibition by magnesium and other divalent cations // J. Biol. Chem.-1987.-Vol.262, N25.-P.11988-11994.

354. Spiegerings D.C, de Vries E.G., Vellenda E. et al. Tissue distribution of the death ligand trial and its receptors // J. Histochem. Cytochem.-2004.-Vol.52, N6.-P.821-831.

355. Storch E, Baumgartle D.L, Krimcher H. etal. Protection by p olyl-polyC agindt infection with gerpes simplex viruscin mice pretreated with Corynebacterium parvum // Nat. Immun. Cell Growth Regul.-1984.-Vol.3, N3.-P. 134-142.

356. Storch E, Brehm G, Hueller K, Marcucol F. Production of interferon -ß by murine T-cell lines induced by 10-carboxymethyl-9-acridanone // Scand. J. Immunol.-1986.-Vol.23, N2.-P. 195-199.

357. Storch E, Kirchner H. Induction of interferone in murine bone marrow-derived macrofage cultures by 10-carboxymethyl-9-acridanones // Eur. J. Immunology.-1982.-Vol. 12, N9.-P.793-796.

358. Storch E, Kirchner H. Interferon inducibility in mice treated with Corynebacterium parvum II Antiviral research.-1985.-Vol.5, N2.-P.117-123.

359. Storch E, Kirchner H, Huller K. et al. Enhancement by carprofen or indomethacin of interferon induction by lO-carboxymethyl-lO-acridanone // Jour. General Virology.-1986.-Vol.67, N6.-P.1211-1214.

360. Strabados G, Ando A, Tretter L, Horvath I. Effect of succinate on mitohoindral lipid reroxidation. 1. Comprative studies on ferrous ion and ADP-iron/ NADPH-induced peroxidation // Jour. Bioenergetics and Biomembranes.-1987.-Vol.19, N.1.-P.21-30.

361. Strahlendorf J.C, Acosta S, Miles R. et al. Choline blocks AMPA-induced degeneration of Purkinje neurons: potential role of nicotinic receptor // Brain Res.-2001.-Vol.901, N1-2.-P.71-78.

362. Strander H, Eihora S. Interferons and tumor cell // Biotherapy.-1996.-Vol.8, N.3-4.-P.213-218.

363. Suerez-Pinzon W.L, Mabley G.G., Power R. et al. Poly ADP-ribose polymerase inhibition prevents spontaneous and recurrent autoimmune diabet in NOD mice //Diabet.-2003.-Vol.52.-N7.-P. 1683-1688.

364. Sun A.Y, Cheng J.S. Neuropijtective effects of poly (ADP-ribose) polymerase inhibitors in trancient focal cerebral ishhemia of rats // Chung Kuo Yao Hsuen Pao.-1998.-Vol. 19, N2.-P. 104-108.

365. Suzuki M, Muraoka H, Kurata M, et al. Glutathione reductase activity and flavin concentration in guinea pig tissues // Exp. Anim.-1999.-Vol.48, N.3.-P.199-202.

366. Suzuki T, Yanagihara H, Goto M. et al. Meglumine salt ursodeoxycholic acid// Chem. Abst.-1986.-Vol.l04„N7.-P.51023.

367. Szabados E., Fisxher G.M., Galyas F.J., et al. Enhanced ADP-ribosylation and its diminuton by lipoamide after ishemia-reperfiision in perfused rat heart // Free Radic. Biol. Med.-1999.-Vol.27., N.9-10.-P.1103-1113.

368. Szulk B., Piasecki E. Effects of interferons, interferon inducers and growth factors on phagocytosis measured by quantative determination // Arhivum immunologiae et therapiae experimentalis.-1988.-Vol.36., N5.-P.537-545.

369. Szulk Z., Inglot A.D. Synthesis of halogen derivatives of 9-oxo-10-acridinacetic acide as potential interferon inducers // Journ. Pract. Chem.-1987.-Vol.329., N4.-P.741-744.

370. Szulk Z., Mlochowski J. Synthesis of the choline ester of 9-oxo-10-acridinoacetic acid and of congeners as potential interferone inducers // Polish Jour. Chem.-1986.-V60., N4-6.-P.615-619.

371. Tabarrini O., Cecchetti Vol., Fravoli A. et al. Design of antitumoral acridones // J. Med. Chem.-1999.-Vol.42., N12.-P.2136-2144

372. Takahashi T., Hohda T., Sugimoto N., Mizobuchi S., Okamoto T. Antioxidant roles of cellular ubiquinone and related redox cycles // Biol. Pharm. Bull.- 1999.-Vol.22., N11.-P.1226-1233.

373. Tang Y.M., Travis E.R., Wightman R.M., et al. Sodium-calcium exchange affects local calcium signal decay and rate of exocytotic secretion in single chromaffin cells // J. Neurochem.-2000.-Vol.74., N2.-P.702-710.

374. Taraporewala I.B, Kauffman J.M. Synthesis and strucrure-activity relationships of anti-inflammatory 9,10-dihidro-9-oxo-2-acridinalkanoic acida // Jour. Harm. Sci.-1990.-Vol.79.-N2.-P.173-178.

375. Taylor G.A, Feng C.G, Sher A. et al. p47 GTPases: regulators of immunity to intracellular pathogens //Nat. Rev. Immunol.-2004.-Vol.4, N2.-P. 100-109.

376. Taylor J.L, Little S.D, O' Braien W.J. The comparative antiherpes simplex virus effects of human interferons // J. Interferone Cytokine Res.-1998.-Vol.18, N.3.-P.159-165.

377. Taylor J.L, Schoenherr C.K, Grossberg S.E. et al. High-yield interferon induction by 10-carboxymethylacridanone // Antimicrob. Agents Chemotherapy. -1980-Vol. 18, N1 .-P.20-26.

378. Taylor P.C. Anti-cytokines and cytokines in treatment of rheumatoid arthritis // Curr. Pharm. Des.-2003.-Vol.9, N14.-P.1095-1096.

379. Thiermermann C, Bowes J, Myint F.P, et al. Inhibition of activity of poly-ADP-ribose synthetase reduces ishemia-reperfusion injury in the heart nad skeletalmuscle // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1997.-Vol.94, N.2.-P.679-683.

380. Thirell L, Erickson S, Zhivotovsky B. et al. Mechanisms of interferonalpha induced apoptosis in malignant cells // Oncogene.-2002.-Vol.21, N8.-P.1251-1262.

381. Toliou T, Stravoravdi P, Vakalikos J. Natural jkiller cells activation after interferon administration // Eur. Urology.-1996.-Vol.29, N.2.-P.252-256.

382. Trout G.E. Elevated glutathione reductase activity coefficients in erythrocytes after treatment in vitro with inosine and adenine // Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1989.-Vol.191., N1.-P.12-17.

383. Trout G.E. The dissotiation of flavine coenzymes from trypsin-solubilized

384. NADPH/Cytochrome C reductase of pig liver microsomes // Eur. J. Biochem.-1976.-Vol.71, N2.-P.533-577.

385. Torres B.A., Perrin G.Q, Mugtaba M.G. et al. Superantigen enhancement of specific immunity: antibody production and signaling pathways // J. Immunol.-2002.-Vol.169., N6.-P.2907-2914.

386. Torres Y, Medrano F.J, Rey C. et al. Evidence for role of T-helper type 2 cytokines in acquisition of human immunodeficiency virus syncyticum-including phenotype // Eur. J. Clin. Invest.-1998.-Vol.28, N11.-P.930-936.

387. Torreiles J, Marchand J, Guerin M.C. NAD adducts as protective agents against glutamate dehydrogenase inactivation by pyridohal-5 phosphate // Biochimie.- 1982.-Bd.64, N6.-S.429-434.

388. Turpin J.A, Fan S.X, Hansen B.D, Francis M.L. Regulation of HIV-replication in monocytes by interferon // Progress in Molecular & Subcellular Biology.-1994, N.14.-P.222-241.

389. Turusov V.S, Mohr U. Pathology of Tumors in Laboratory Animals. Vol.2.-Tumors of Mouse, 2nd ed. IARC, Lyon: International Agency on Cancer, 1994, P.lll.

390. Vagnozi R, Marmarou A, Tavazzi B. et al. Changes of cerebral energy methabolism and lipid peroxidation in rats leading to mitichondrial dysfunction after diffuse brain injury//J. Neurotrauma.-1999.-Vol. 16, N10.-P.903-913.

391. Valle A.B., Panek A.D., Mattoon J.R. Colorimetric determination of succinic acid using yeast succinate dehydrohenase // Anal. Biochem.-1978.-Vol.91, N2.-P.583-599.

392. Van Camp J.R, Brunsting L.A, Chalds K.F. et al. Functional recovery after ishaemia warm versus cold cardioplegia // Ann. Tharac. Surg.-1995.-Vol.59, N4.-P.795-802.

393. Van Heide R.S, Rim D, Hohl C.M, et al. An in vitro model of myocardial ishemia utilizing isolated adult rat myocytes // Jour. Mol. Cell Cardiol.-1990.-Vol.22, N2.-P.165-181.

394. Van Trieste M.G. Buffered proton acceptor composition for treatment acidosis I I Chem. Abstr.-1991.-Vol.114.,N26.-P.254033z.

395. Vejdelek Z.H. New types of synthetic c ompounds with g anglion-blocking effect 11 Arzneimittelforchung.- 1960-N. 10.-S.808-811.

396. Ueda K, Kagami K, Solomatsu S. Electron microscopic observations on lesions of herpes zoster topical application of interferon // J. Dermatol.-1977.-Vol.4, N4.-P. 129-135.

397. Westergaard N, Sonnewald U, Schousboe A. et al. Release of Alpha-ketoglutarate, malate and succinate from culterad astrocytes: possible role in amino acid neurotransmitter homeostasis // Neuroscience Letters.-1994.-Vol. 176, N1.-P.105-109.

398. Williams B.R, Haque S.J. Interacting pathways of interferon signaling // Oncology.-1997.-N24.-P.970-977.

399. Xia Y, Khatchikian G, Zweier J.L. et al. Adenosine deaminase inhibition prevents free radical-mediated in the postishemic heart // J. Biol. Chem.-1996.-Vol.271,N17.-P. 10096-10102.

400. Yamada Y, Merrill A.H, McCormick D.B. et al. Probable reaction mechanisms of flavokinase and FAD synthetase from liver // Arch. Biochem. Biophys.-1990-Vol.278, N1.-P.125-130.

401. Yamada Y, Oka M, McCormick D.B. et al. Purificaton anf properties od FAD-synthetases from liver // Methods Enzymol.-1997.-N.280.-P.407-413.

402. Yamamoto J.K, Kruzel M.L, Louie H. et al. Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by human interferons alpha, beta andgamma // Arhivum Immunologiae et Therapiae Experementalis.-1993.-Vol.41., N3-4.-P.185-191.

403. Yu F., Floyd-Smith G. Protein synthesis-dependet and independent induction p69 2,5-oligoadenylate synthetase by interferon alpha // Cytokyne.-1999.-Vol. 11., N.10.-P.744-750.

404. Zarubaev V.V., Slita A.V., Krivitskaya V.Z. et al. Direct antiviral effect of cycloferon against adenovirus 6 in vitro // Antiviral Res.-2003.-Vol.58., N2.-P.131-137.

405. Zempleni J. Biokinetic analysis of vitamin absorbtion nad disposition in humans // Methods Enzymol.-1997.-N.281.-P.405-425.

406. Zhang T., Sener A., Malaisse W.J. Metabolic effects and fate of succinic acid methyl esters in rat hepatocytes//Arch. Biochem. Biophys.-1994.-Vol.314., N.I.-P.186-192.

407. Zhang T.M., Nadi A.B., Malaisse W.I. et al. Insulinotropic efficiency of enterally administered succinic acid dimethyl ester // Med. Science Res.-1994.-Vol.22, N5.-P.365-368.

408. Ziyadeh F.N., Mills J.W., Kleinzeller A. et al. Hypotonicity and cell volume regulation in shark rectal gland: role of ofganic osmolytes and F-actin // Am. J. Physiol.-1992.-Vol.262., N3.-P.468-479.

409. Zuidema J. Ethylendiamine, profile of sensitizing excipient // Pharm. Weekbl. Sci.-1985.-Vol.7., N4.-P. 134-140.

410. ЖЙЙЕМ ПРАВИТЕЛЬСТЗА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИот 16 февраля 2004 года . ' ' ПРИСУЖДЕНА

411. КОВАЛЕНКО Алексею Леонидовичунового отечественного препарата "Цнкяоферо^ ^

412. Председатель Правительства Российской Федерации1. Фрадков.5564 МОСКВА

413. ЕВРАЗИЙСКАЯ: ПАТЕНТНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЕВРАЗИЙСКОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВОя ( 2Л/ 'Ж А 1 Г~>

414. Е В РАЗИ И С КИИ ПАТЕ ИТ • '№ ■ ■ 002.462' "1. Название изобретения:

415. ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ»

416. Патентовладелец (льцы): I.

417. ОБЩЕСТВО С -ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ ' "НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ' ФАРМАП^ВТИЧЕСКАЛ ФИРМА "ПОЛИСАН" (Щ) • '1. Изобретатель (й):

418. Алексеева Людаияа Евгеньевна, Коваленко Алексей Леонидович (ЕЛ)1. Заявка №:'- ■• * 1 . • Приоритет изобретения:1.■ •

419. Дата подачи заявки: Дата выдачи патента:200100348 22 февраля 2001 г. 26 марта 2001 г. 25 апреля 2002 г.1%

420. Настоящим" удостоверяется, что езразийский патент выдан на' изобретение, изложенное в прилагаемом описании и формуле изобретения. ■

421. Название изобретения: «ЙНФУЗИОННЫЙ РАСТВОР "РЕАМБЕРШГ

422. Охкл С1ШШ 1 ' ОбО иНТФФ^ "1. Пате.нтовладелец(дьцы):о'бпщстбо с ограниченной ответственностью" 11НАУЧНО-Ггттгтт~~---- ' '1. ФИРМА "ПОЛИСАН" (ДЦ).

423. Изобретатель(й)':' ( .'!. •• . ' I '•

424. Авсеев* Людмила Евгеньевна, Ковадешсо Алексей''лесйщов^

425. Евразийская заявка-№: . 199801066 . • • . Приоритет изобретения: '

426. Дата подача евразийской заявки: . • 02 декабря 1993 г. • Дата регистрации евразийского патента, з Реестре евразийских патентов: 23 карта2000 г .• евразийская патентная организация евразийское патентное ведомство1. Название изобретения:

427. ИНЪЕЕДИОННОЕ ЛЕКАРСТБЕНОЕ. СРЕДСТВО "ЦИТОФЛАВИНп, 0БЛАДА101ЦЕЕ ЦИТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ»

428. Патентовдаделец(льцы): ОВНЩСТВО"^ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ' .' • "НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ: ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ФИРМА ^'ПОЛИСАН" (НЩ. ; '• ,

429. Изо бр етателъ(и):. Алексеева Людмила Евгеньевна, Коваленко Алексей Леонидович <ЖТ)-•Евразийская заявка №: 199500510; • Црибритет изобретения: ' '

430. Дата подачи" евразийской заявки: 10 июня 1999 г. Дата регистрации .евразийского патента в Реестре еврЬийских -патентов:03 июля 2000 г.

431. Юёрете1ш.иРоссийской 20 пояоря 2004. ч

432. ЩШйР^гоехнрг 0 ¡щшер -2023 ШшЩжч^у-у"•" *• чиЧг -'-и-. 1 .'ч-ч ' ч- >ч- . -.-¿ч^ ' -чч:;• л • . ■ . : -.••■-•. > "Г' -чЧ.'' • ••-•• Г ч -V:

433. Й Ч-'^Ч-лЧ .,•• Ч . Л-- Ч гЧ^Л-.4-^; Э ~Г . ',<— •• ,' Ч;ЧЧгЧ'кЗ

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологическая активность оригинальных лекарственных препаратов на основе 1-дезокси-1(N-метиламино)-D-глюцитола

Оглавление диссертации Коваленко, Алексей Леонидович :: 2005 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Коваленко, Алексей Леонидович, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Коваленко, Алексей Леонидович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций