Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений рода дурнишник



На правах рукописи

САЛЕХ КАССИМ АЛЬ-ГИФРИ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИИ РОДА ДУРНИШНИК

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

о АНЭ 2011

Курск-2010

004619639

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова Валентина Николаевна Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Челомбнтько Вячеслав Александрович доктор фармацевтических наук, профессор Ермакова Валентина Алексеевна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при ГОУ ВПО "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Защита состоится

2011 г. в

часов

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время растения являются важным источником лекарственных средств. Растительные препараты легко включаются в обмен веществ и усваиваются организмом, при правильном применении безвредны, не вызывают побочных явлений и привыкания, а комплекс биологически активных веществ, содержащийся в них, оказывает разностороннее и взаимодополняющее действие. В связи с этим изучение новых видов растительного сырья и их внедрение в научную медицину является одной из задач современной фармакогнозии.

Источником новых лекарственных растений остается опыт народной медицины. В частности, в народной медицине стран Европы, Азии, Африки находят применение дурнишник обыкновенный (ХапШшт Б^итапит Ь.) и дурнишник беловатый (ХаШЫшп прагшт Иг. Е1 НейвсЬ) как потогонное, антимикробное, противоопухолевое, противогрибковое средство. В народной медицине Йемена дурнишник обыкновенный применяется в качестве анальгезирующего, кровоостанавливающего средства, а также для лечения кожных заболеваний. Надземная часть дурнишника обыкновенного официнальна в Китае как потогонное, спазмолитическое, седативное средство. Оба растения - дурнишник обыкновенный и дурнишник беловатый - произрастают в России во многих районах европейской части, на Кавказе, в Западной Сибири. Дурнишник обыкновенный достаточно широко распространен и на территории Йемена.

Из данных литературы известно, что из двух приведенных видов дурнишника, произрастающих в России, в химическом отношении изучен только дурнишник обыкновенный, для него характерно наличие сесквитерпеновых лактонов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ, флавоноидов. Однако до настоящего времени в России систематического изучения дурнишника беловатого не проводилось, так же как и не проводилось изучение дурнишника обыкновенного из флоры Йемена. Поэтому изучение дурнишника беловатого, произрастающего на территории Центральной России, и дурнишника обыкновенного из флоры Йемена с целью введения их в научную медицину является актуальным.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось фармакогностическое изучение дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого как перспективного лекарственного растительного сырья для введения в научную медицину.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

-проведение фитохимического изучения дурнишника беловатого, произрастающего в Центральной России, и дурнишника обыкновенного флоры Йемена;

- выделение и исследование полисахаридных комплексов;

- разработка методик количественного определения основных групп биологически активных веществ: суммы полисахаридов и суммы флавоноидов;

- проведение морфолого-анатомических исследований с целью выявления диагностических признаков для определения подлинности сырья;

- разработка и обоснование товароведческих показателей для определения доброкачественности сырья;

- проведение предварительных фармакологических исследований.

Научная новизна

Проведено фитохимическое изучение травы дурнишника беловатого флоры Центральной России и дурнишника обыкновенного флоры Йемена. Установлено наличие углеводных производных, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов), эфирного масла. Исследован минеральный состав растений.

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве дурнишника беловатого идентифицировано 8, а в траве дурнишника обыкновенного 10 веществ фенольной природы. Новыми для травы дурнишника беловатого были дигидрокумарин, 7-метоксикумарин, кумарин, галловая кислота, хлорогеновая кислота, феруловая кислота, кверцетин, лютеолин 7-глюкозид; для травы дурнишника обыкновенного - кумарин, хлорогеновая кислота, апигенин, дигидрокверцетин.

Методом хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) установлен качественный состав эфирного масла из травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Идентифицировано 48 веществ у дурнишника беловатого и 39 веществ у дурнишника обыкновенного.

Впервые выделены и изучены полисахаридные комплексы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Полисахаридные комплексы представлены водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, ге-мицеллюлозами А и Б. Изучен их качественный и количественный моносаха-ридный состав. Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ.

Для объективной оценки качества травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого впервые разработаны методики гравиметрического оп-

ределения суммы полисахаридов и спектрофометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на цинарозмд.

Проведено морфолого-анатомкческое изучение надземной части дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Установлены диагностические признаки для определения подлинности сырья. Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

Фармакологические исследования показали наличие у дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного анапьгезируюшего, диуретического, жаропонижающего, антимикробного действия.

Практическая значимость

Полученные результаты позволяют расширить сведения о химическом составе, фармакологической активности дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Результаты фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного изучения данных растений с целыо введения их в научную медицину.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- методика количественного определения суммы полисахаридов в траве дурнишника беловатого (Акт внедрения № 80 в работу ОКК ЗАО Фирма "Здоровье" от 20.11.2009 г);

- методика количественного определения суммы полисахаридов в траве дурнишника обыкновенного (Акт внедрения № 15 в работу кафедры фармацевтической химии и клинической фармации ВГМА им. Бурденко от 02.08.2010 г.);

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве дурнишника обыкновенного (Акт внедрения № 52 в работу ОКК ЗАО Фирма "Здоровье" от 20.11.2009 г).

Положения, выносимые на защиту:

-результаты фотохимического исследования травы дурнишника беловатого флоры России и дурнишника обыкновенного флоры Йемена;

-данные по выделению полисахаридных комплексов и изучению их состава;

- методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов;

- результаты морфолого-анатомическнх исследований с установлением диагностических признаков сырья;

- результаты разработки и определения показателей доброкачественности для травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного;

-результаты предварительных фармакологических исследований травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного.

Апробация работы Основные положения диссертации апробированы и представлены на 74-й и 75-й межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых "Молодежная наука и современность" (Курск, 2009, 2010), "Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов" (Курск, 2008); на 74-й научной конференции КГМУ, сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН "Университетская наука: теория, практика, инновации" (Курск, 2009); на межвузовской научной конференции, посвященной памяти профессора В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ (Курск, 2009); на 3-й и 4-й международной научной конференции "Актуальные проблемы регионоведения" (Курск, 2008, 2009); на IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010); на международных научно-практических конференциях: "Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология" (Белгород, 2008), "Биологически активные соединения природного происхождения: фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника" (Белгород, 2008), "Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании" (Белгород, 2008), "Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения", посвященной 10-летию образования ботанического сада Белгородского государственного университета, (Белгород, 2009), "Фитодизайн в современных условиях" (Белгород, 2010), "Молодые ученые в решении актуальных проблем науки" (Владикавказ, 2010); на международных форумах "Интегративная медицина" (Москва, 2008, 2009); на XVI и XVII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2009, 2010); на научной конференции "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции" (Пятигорск, 2010); на юбилейной научно-практической конференции с международным участием "Фармакогноз1я XXI стол1ття. Досягнення та перспективи" (Харюв, 2009); на международной научно-практической конференции "Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства" (Казахстан, 2009); International medizinscher congress. Program Abstracts. Euromedica Hannover 2009, (Ганновер, 2009) на II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2010 г).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.2009.50639).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 24 работы, из них 2 в журналах, рекомендуемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 174 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы "Объекты и методы исследования", экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, приложения. В тексте содержится 26 таблиц, 106 рисунков. Список цитируемой литературы включает 180 источников, из них - 91 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цель и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе (обзор литературы) приведены сведения, отражающие современное состояние изучения дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого, их применение в народной медицине, фармакологические исследования, обоснован выбор объектов исследования.

Во второй главе содержатся сведения об объектах исследования, используемых методах фотохимического, фармакологического, микробиологического, микроскопического и товароведческого анализа.

Материал третьей главы отражает результаты изучения качественного и количественного состава групп биологически активных веществ травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого, а также выделения и исследования полисахаридных комплексов, эфирного масла.

Четвертая глава посвящена исследованию морфологических и микродиагностических признаков, товароведческих показателей травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого, разработке методик количественного определения полисахаридов, флавоноидов.

В пятой главе приведены результаты изучения фармакологической активности травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого.

В приложении содержатся материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты исследования

Объектом наших исследований являлась трава дурнишника беловатого (Xanthium riparium Itz. Et Hertsch), заготовленная в различных областях Центральной России в фазу цветения растения, и трава дурнишника обыкновенного (Xanthium strumarium L.), заготовленная в различных областях Йемена в фазу цветения растения. Сырье заготавливали в течение 2007-2009 годов.

Изучение качественного и количественного состава биологически акгивных веществ растений рода Дурнишник

Предварительное фитохимическое изучение травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного показало наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, флавоноидов, кумаринов, фенол-карбоновых кислот), эфирного масла, минеральных элементов.

Проведенный количественный анализ биологически активных веществ показал, что содержание суммы азотистых оснований в траве исследованных видов составляет от 0,17% (дурнишник беловатый) до 0,20% (дурнишник обыкновенный), в том числе холина 0,10% и 0,15% соответственно, аскорбиновой кислоты от 0,33% (дурнишник обыкновенный) до 0,36% (дурнишник беловатый), тритерпеновых сапонинов от 0,11% (дурнишник беловатый) до 0,13% (дурнишник обыкновенный), дубильных веществ от 9,06% (дурнишник обыкновенный) до 12,74% (дурнишник беловатый), каротиноидов от 4,95 мг% (дурнишник беловатый) до 7,46 мг% (дурнишник обыкновенный).

Изучен минеральный состав травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого методом элементного спектрального анализа. Проведенные исследования показали присутствие в изучаемых растениях 15 элементов: 5 макроэлементов и 10 микроэлементов. Наиболее богата минеральными элементами трава дурнишника обыкновенного, отличающаяся значительным содержанием эссенциальных микроэлементов: железа, марганца, хрома, меди.

Для изучения эфирного масла его получали методом гидродистилляции, количественное содержание эфирного масла определяли объемным методом по ГФ XI издания. Содержание эфирного масла в траве дурнишника беловатого составляет 0,19%, а у дурнишника обыкновенного 0,15%. Анализ полученного эфирного масла проводили методом хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) с помощью масс-спектрометра Agilent АТ-5975 SMART. Идентификацию соединений осуществляли по времени удерживания пиков и сравнением масс-спектров компонентов эфирного масла с данными библиотек масс-спектров.

Расчет количественного содержания отдельных соединений проводили на основании площади пиков. Состав эфирного масла дурнишника беловатого включает 48 компонентов, дурнишника обыкновенного - 39. Преобладающими компонентами среди идентифицированных у эфирного масла дурнишника обыкновенного являются гексо-оксифарнезил ацетон (2-пентадеканон,6,10,14- триме-тил), спатуленол, а дурнишника беловатого - фитол, кариофилен-оксид, кадина-3,9-диен.

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) и ряда диагностических реактивов изучен качественный и количественный состав фенольных соединений травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого. Идентифицировано 12 веществ фенольной природы. Среди них ку-марины: дигадрокумарин, 7-метоксикумарин, кумарин; 1 фенолокислота - галловая кислота, 3 оксикоричные кислоты: хлорогеновая, кофейная, феруловая; флавоноиды: рутин, кверцетин, дигидрокверцетин, лютеолин 7-глюкозид, апи-генин (табл. 1).

Таблица 1

Фенольные соединения травы дурнишника беловатого

и дурнишника обыкновенного, идентифицированные методом ВЭЖХ

Группа БАВ Идентифицированные вещества Трава дурнишника беловатого Трава дурнишника обыкновенного

Количественное соотношение, % Количественное соотношение, %

Фенолокислота Галловая кислота 23,61 35,22

Оксикоричные кислоты Хлорогеновая кислота 13,52 8,55

Феруловая кислота 1,34 2,05

Кофейная кислота - 3,43

Кумарины Кумарин 12.52 3,70

Дигидро кумарин 4,74 -

7-метоксикумарин 4,11 -

Флавоноиды Лютеолин7-глюкозид 5,63 2,59

Кверцетин 0,44 0,53

Дигидрокверцетин - 0,33

Рутин - 4,35

Апигенин - 0,01

Для выделения полисахаридных комплексов сырье предварительно обрабатывали спиртом этиловым 70% для удаления фенольных соединений, шрот сырья использовали для выделения полисахаридных комплексов. Полисахариды получали последовательно фракционно: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы (ГЦ А и ГЦ Б) (рис. 1).

Шрот сырья дурнишников,

после экстракции полифеиолыплх соединений

Экстракция

Концентрирование

Водный концентрат

1.1 Горячей водой

Водное извлечение |

\ 4

1,2 Смесыо 0,5% 1

растворов кислоты ; щавелевой и аммония !

1

оксаяата(1:1) [

Кислое ичкдечение

Кислый концентрат

Осаждение 3 объемами спирта этилового 96%

Водорастворимый полисахаридный ко к

1.3 10% водным раствором катрия гидрокекда

Щелочное извлечение

2 ооъема кислота уксусной. фильтрация

Осаждение 5 объемами спиртаэти-;юв01 о 96%

Осадок на фильтре

Фильтрат

Пектиновый комплекс

Геыииеллю.юи А в

Осаждение ! объемами спирта этилового 96%

ГСМИЦСЛЛЮЛО'И В

Рис. 1. Схема выделения полисахаридных комплексов из травы дурнишника беловатого н дурнишника обыкновенного

Водорастворимые полисахаридные комплексы экстрагировали горячей водой при нагревании, осаждали трехкратным количеством спирта этилового 96%, отфильтровывали, промывали спиртом этиловым 96%, ацетоном, высушивали. Выход их составил: из травы дурнишника беловатого 14,24%, из травы дурнишника обыкновенного 9,26% (табл. 2). После выделения полисахаридов из шрота выделяли пектиновые вещества путем экстракции смесью 0,5% растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1) с последующим упариванием и осаждением пятикратным объемом спирта этилового 96%. Выход их составил: из травы дурнишника беловатого 16,48%, из травы дурнишника обыкновенного 13,66% (табл. 2). Из шрота, оставшегося после выделения пектиновых веществ, выделяли гемицеллюлозы А и Б. Экстракцию проводили 10% раствором натрия гидроксида в соотношении 1:5 при комнатной температуре в течение 24 ч. При добавлении кислоты уксусной ледяной образовывался осадок гемицеллюлозы А, который отфильтровывали, высушивали и взвешивали. Выход гемицеллюлозы А составил: из травы дурнишника беловатого 1,18%, из травы дурнишника обыкновенного 6,78% (табл. 2). Далее к фильтрату добавляли двукратный объем спирта этилового 96%, при этом образовывался осадок гемицеллюлозы Б, который промывали спиртом, высушивали и взвешивали. Выход гемицеллюлозы Б из травы дурнишника беловатого - 3,24%, из травы дурнишника обыкновенного - 2,01% (табл. 2). Для анализа полисахаридных комплексов их подвергали гидролизу раствором кислоты серной (1 моль/л). Хроматографией в гидролизатах ВРПС обнаружили 7 веществ моносахаридно-го характера, из которых идентифицировали 5: галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу, галаюуроновую кислоту; в гидролизатах пектиновых веществ идентифицировали 4 моносахарида: галактозу, арабинозу, рамнозу, галактуроновую кислоту; в гидролизатах ГЦ А и ГЦ Б 5 моносахаридов: галактозу, глюкозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу. Содержание моносахаридов определяли денсито-метричёски после хроматографии гидролизатов в тонких слоях сорбента в системе растворителей: н-бутанол-кислота уксусная-вода в соотношении 3:1:1. Установлено, что в водорастворимых полисахаридных комплексах преобладающими моносахаридами являются арабиноза, содержание которой составляет 15,9% (у дурнишника беловатого) и 11,6% (у дурнишника обыкновенного), галактоза - 11,3% (у дурнишника беловатого) и 14,2% (у дурнишника обыкновенного). Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота, содержание которой составляет 91,3% (дурнишник беловатый) и 90,8% (дурнишник обыкновенный). В гемицеллюлозе А и Б преобладающим моносахаридом

является ксилоза (8,6% - 9,8%), что указывает на наличие полисахаридов типа ксилана.

Таблица 2

Выход фракций полисахаридов из травы изучаемых видов рода дурнишник

Вид Фракции полисахаридов, %

Водорастворимый полисахаридный комплекс Цектиновый комплекс Гемицеллюлоза А Гемицеллюлоза Б

Дурнишник беловатый 14,24 16,48 1,18 3,24

Дурнишник обыкновенный 9,26 13,66 6,78 2,01

Функциональные- группы пектиновых веществ определяли титрометриче-ским методом: содержание свободных карбоксильных групп колеблется от 6,64% до 9,67%, метоксилированных карбоксильных групп - от 1,15% до 1,75%, метоксильных групп - от 0,79% до 1,21%. Все исследуемые пектиновые вещества характеризуются невысокой (Х<50%) степенью этерификации.

Исследование подлинности, показателей качества травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного

Возможность применения в медицинской практике травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного делает необходимым разработку показателей качества и характеристик подлинности для данных видов сырья.

Для определения подлинности сырья нами изучены микродиагностические признаки травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого. При этом установлено, что стебель на поперечном сечении округлый, неравномерно слегка ребристый, пучкового типа строения; в паренхиме сердцевины встречаются мелкие друзы оксалата кальция; наряду с этим у дурнишника обыкновенного в паренхиме коры располагаются вместилища схизогенного типа, в коре и сердцевине - группы клеток с инулином (рис. 2); волоски простые: гусеницеобразные; многоклеточные толстостенные коленчатые (дурнишник беловатый) и с клетками бочковидной формы (дурнишник обыкновенный).

Клетки нижнего эпидермиса листа более извилистые, чем верхнего, устьица анамоцитного типа встречаются преимущественно на нижнем эпидермисе. Эпидермис опушен простыми тонкостенными гусеницеобразными волосками. Наряду с ними для дурнишника беловатого характерно наличие многоклеточных волосков: тонкостенных с заостренной верхушкой и округлым или расширенным основанием и толстостенных с широким округлым или многорядным основанием.

А Б

Рис. 2. Фрагмент поперечного среза стебля (увел, х 120). А - дурнишник беловатый; Б - дурнишник обыкновенный; 1 - эпидермис; 2 - клетки с инулином; 3 - основная паренхима; 4 - эндодерма; 5 - вместилище; 6 - склеренхима; 7 - флоэма; 8 - ксилема.

в г

Рис. 4. Фрагменты эпидермиса с многообразными простыми многоклеточными волосками и эфиромаслич-ными железками. А, Б, В - дурнишник обыкновенный (увел, х 400. 400, 100); Г - дурнишник беловатый (увел, х 300); 1 - толстостенный; 2 - тонкостенный с пузыревидной базальной клеткой и вытянутой в острый носик конечной клеткой; 3 - эфиромасличная железка; 4 - тонкостенный гусеницеобразный; 5 - однорядный тонкостенный; 6 - многорядные тонкостенные;? - друзы оксалата кальция.

А Б

Рис. 3. Поперечный срез черешка (увел. х. 24,5). А - дурнишник беловатый; Б - дурнишник обыкновенный; 1 - эпидермис; 2 - колленхима; 3 - основная паренхима; 4 - проводящие пучки; 5 - основная паренхима сердцевины; 6 - воздухоносная полость; 7 - вместилище.

У дурнишника обыкновенного встречаются двухклеточные тонкостенные волоски с пузыревидной базальной клеткой и заостренной верхушкой, многоклеточные толстостенные волоски двух типов: с клетками бочковидной формы с заостренной верхушкой (рис. 46), и конические с грубобородавчатой кутикулой, конечная клетка которых спадается, образуя длинный носик.

Черешок листа в поперечном сечении имеет форму от почковидной (дурнишник беловатый) до округло - слегка почковидной (дурнишник обыкновенный); закрытые коллатеральные пучки располагаются в два круга; в центре черешка клетки разрушаются и образуют 2-3 воздухоносные полости (дурнишник беловатый); в паренхиме черешка видны вместилища схизогенного типа (дурнишник обыкновенный) (рис. 3); волоски простые: гусеницеобразные; многоклеточные толстостенные с заостренной верхушкой и тонкостенные с клетками бочковидной формы (дурнишник беловатый); многоклеточные толстостенные с бородавчатой кутикулой (дурнишник обыкновенный) (рис. 4а).

При исследовании элементов женских и мужских корзинок отмечено наличие простых волосков, характерных для листа и стебля, а также друз оксала-та кальция на эпидермисе женских корзинок (рис. 4в, г).

На всех органах растения (лист, стебель, женская корзинка, мужская корзинка) встречаются двухрядные 8-10-клеточные эфиромасличные железки.

Для установления доброкачественности сырья определены числовые показатели: содержание общей золы не более 17% для дурнишника обыкновенного и не более 15% для дурнишника беловатого, золы нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной - не более 4% для двух видов сырья; влажность не более 13% для двух видов. Экстрактивных веществ, извлекаемых 30% спиртом этиловым, не менее 30% (табл. 3).

Таблица 3

Результаты определения числовых показателей травы дурнишника

беловатого и дурнишника обыкновенного

Показатель Дурнишник беловатый Дурнишник обыкновенный

Содержание суммы флавоиоидов, не менее, % 1,8 0,8

Содержание суммы полисахаридов, не менее, % 14,0 10,0

Влажность, не более, % 13,0 13,0

Зола общая, не более, % 15,0 17,0

Зола нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более, % 4,0 4,0

Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых 30% спиртом этиловым, не менее, % 30,0 30,0

Для объективной оценки качества травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного впервые разработаны методики количественного определения суммы полисахаридов и суммы флавоноидов.

Для количественного определения суммы флавоноидов разработана методика спектрофотометрического определения непосредственно в извлечениях из сырья. В основу данной методики положена реакция комплексообразования с алюминия хлоридом в сочетании со спектро-фогометрическим дифференциальным способом определения оптической плотности комплексов.

Изучение условий количественного определения флавоноидов показало, что оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход из сырья, являются: степень измельчения сырья - 1 мм, спирт этиловый 70% в качестве экстрагента при соотношении сырье-растворитель 1:100, экстракция в течение 75 минут. Измерения проводили в области максимума светооглощения при длине волны 400 нм. Расчет содержания суммы флавоноидов вели по удельному показателю поглощения цинарозида (лютеолин7-глюкозида) с алюминия хлоридом в среде 70% спирта этилового.

Установлено, что максимальное количество флавоноидов накапливается в траве дурнишника беловатого до 2,15%, а в траве дурнишника обыкновенного до 0,89%.

Для количественного определения полисахаридов использовали гравиметрический метод, основанный на экстракции полисахаридов из сырья с последующим их осаждением 96% спиртом этиловым.

Изучение условий количественного определения полисахаридов показало, что оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход из сырья, являются: степень измельчения сырья - 1 мм, пятикратная экстракция горячей водой в течение 150 минут (5 раз по 30 минут). Полнота осаждения полисахаридов достигается при использовании пятикратного количества спирта этилового 96%.

Установлено, что содержание суммы полисахаридов в траве дурнишника беловатого колеблется от 14,31% до 15,41%, а в траве дурнишника обыкновенного от 10,08% до 12,10%.

Изучение фармакологической активности растении рода дурнишник

Исследование острой токсичности настоев травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного в дозах от 1 г/кг до 5 г/кг, показало, что иссле-

дуемые настои согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм можно отнести к классу «вещества малоопасные».

Изучено анальгезирующее действие настоев из травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого на модели "горячая пластинка" и модели "корчи". В тесте "горячая пластинка" выявлено, что настой из травы дурнишника обыкновенного оказывает обезболивающее действие, проявляющееся в увеличении продолжительности переносимости термического раздражения, а в тесте "корчей" настои из травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного достоверно снижают уровень болевой чувствительности у мышей при химическом раздражении брюшины и превышают таковое у препарата сравнения - анальгина.

Изучение диуретической активности показало, что мочегонным эффектом по сравнению с контролем (0,20 мл мочи на 100 граммов массы крысы) обладает настой травы дурнишника обыкновенного (1,12 мл мочи на 100 граммов массы крысы). Применение же настоя дурнишника беловатого не приводило к достоверному изменению показателей диуреза (0,38 мл мочи на 100 граммов массы крысы).

Исследование жаропонижающего действия настоев травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного оценивали по уменьшению гипертермии, вызванной внутрибрюшинным введением пирогенала у крыс. В качестве препарата сравнения использовали парацетамол (рис. 5). При этом установлено, что настои травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного обладают жаропонижающим действием по сравнению с контролем, снижая температуру на максимуме лихорадки на 2,26 и 1,81 градуса соответственно. Жаропонижающая активность настоя травы дурнишника беловатого близка по отношению к раствору сравнения.

—Контроль пирогенала^. _дуриищник обыкновенный

—* ■ Дурнишникбелоеатый —Парацетамол

Изучение антимикробной активности настоев из травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного показало, что они обладают выраженной антимикробной активностью в отношении Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus и Candida в концентрации (1:2, 1:4).

ВЫВОДЫ

1. Проведено фотохимическое изучение травы дурнишника беловатого флоры Центральной России и дурнишника обыкновенного флоры Йемена. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот), эфирного масла, минеральных элементов.

2. С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного идентифицировано 12 веществ фенольной природы. Среди них кума-рины: дигидрокумарин, 7-метоксикумарин, кумарин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота; флавоноиды: рутин, кверцетин, дигидрокверцетин, лютео-лин 7-глюкозид, апигенин. Большинство из них идентифицированы впервые.

3. Впервые проведено изучение полисахаридов по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС) - выход от 9,26% до 14,24%; пектиновые вещества (ПВ) - выход от 13,66% до 16,48%; гемицеллюлоза А (ГЦ А) - выход от 1,18% до 6,78%; гемицеллюлоза Б (ГЦ Б) - выход от 2,01% до 3,24%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ.

4. Проведено выделение и изучен компонентный состав эфирного масла. Методом хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) идентифицировано 48 компонентов эфирного масла у дурнишника беловатого и 39 у дурнишника обыкновенного. Преобладающими компонентами среди идентифицированных у эфирного масла дурнишника обыкновенного являются гексо-оксифарнезил ацетон (2-пентадеканон,6,10,14-триметил), спатуленол, у дурнишника беловатого - фи-тол, кариофилен-оксид, кадина-3,9-диен.

5. Проведено морфолого-анатомическос изучение травы (стебля, листа, корзинки) дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Установлены диагностические признаки: стебель в поперечном сечении округлый, неравномерно слегка ребристый, пучкового типа строения; клетки нижнего эпидермиса листа более извилистые, чем верхнего, устьица анамоцитного типа; в попереч-

ном сечении черешок листа имеет форму от почковидной (дурнишник беловатый) до округлой или слегка почковидной (дурнишник обыкновенный). Все изучаемые органы опушены разнообразными простыми волосками, встречаются двухрядные 8-10-клеточные эфиромасличные железки, мелкие друзы ок-салата кальция. Наиболее важными анатомическими особенностями изучаемых растений являются многообразие и расположение простых волосков.

6. Установлены числовые показатели доброкачественности сырья: содержание общей золы не более 17% для дурнишника обыкновенного и не более 13% для дурнишника беловатого; золы нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной - не более 4%; влажность не более 13%; экстрактивных веществ, извлекаемых 30% спиртом этиловым, не менее 30%.

7. Впервые разработана методика гравиметрического определения суммы полисахаридов длятравы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого. Содержание суммы полисахаридов в траве дурнишника беловатого колеблется от 14,31% до 15,41%, а в траве дурнишника обыкновенного -от 10,08% до 12,10%.

8. Впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов для травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и абсолютно сухое сырье в траве дурнишника беловатого составило от 1,87% до 2,15%, а в траве дурнишника обыкновенного - от 0,80% до 0,89%.

9. Результаты фармакологических исследований показали наличие у настоев травы дурнишника беловатого и дурнишника обыкновенного анальгези-рующей, диуретической, жаропонижающей, антимикробной активности.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бубенчикова, В.Н. Фотохимическое изучение травы и плодов дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Материалы междунар. науч.-практ. конф. "Лекарственные растение и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология" (8 февраля 2008г., г. Белгород). - Белгород: БелГУ, 2008. - С. 96-99.

2. Салех Кассим Аль-гифри. Содержание дубильных веществ в траве и плодах дурнишника беловатого / Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов: 73-я итог, межвуз. конф. студентов и молодых ученых: в 2 ч., Ч. II. - Курск: КГМУ,

2008. - С. 70.

3. Бубенчикова, В.Н. Полисахаридный состав травы дурнишника беловатого / В Л. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Молодежный форум "Интегративная медицина 2008" (6-8 июня 2008 г.; г. Москва): в 3 ч., Ч. III: Лекарственные растительные средства. Фитотерапия. - М., 2008. - С. 102.

4. Бубенчикова, В.Н. Изучение полисахаридного состава плодов дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Материалы междунар. научно-практ. конф. "Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника" (30 июня - 3 июля 2008 г.; г. Белгород). - Белгород: БелГУ, 2008. - С. 45-48.

5. Бубенчикова, В.Н. Изучение пектиновых веществ травы дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: сб. материалов Междунар. науч.-практ. конф. (г. Белгород, 20-21 ноября 2008 г.). - Белгород: БелГУ, 2008. - С. 242-244.

6. Бубенчикова, В.Н. Изучение водных извлечений из травы дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // Университетская наука: теория, практика, инновации: сб. тр. 74-й науч. конф. КГМУ и сес. Центрально-Черноземного науч. центра РАМН и отд. РАЕН: в 3 т. - Курск: КГМУ,

2009. - Т. 2. - С. 200-202.

7. Бубенчикова, В.Н. Тритерпеновые соединения дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // Фармакогноз1я XXI столптя. Досягнення та перспективи: Marepiarm ювшейна науково-практична конференшя 3 м1жнародного участю.- Харюв, 2009. - С. 14.

8. Бубенчикова, В.Н. Фотохимическое изучение травы дурнишника обыкновенного / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Тр. 3-й междунар. науч. конф. "Актуальные проблемы регионоведения". -Курск, 2008,- 4.1. -С. 38-40.

9. Бубенчикова, В.Н. Полисахаридный состав травы дурнишника обыкновенного /' В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // Кубанский науч. мед. вестн. - 2009. - № 2 (107). - С. 46-48.

10. Бубенчикова, В.Н. Изучение фенолкарбоновых кислот растений рода Дурнишника / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // XVI Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство" (6-10 апр. 2009 г.): тез. докл. - М„ 2009. - С. 625.

11. Бубенчикова, В.Н. Стандартизация сырья "Травы дурнишника беловатого" по содержанию флавоноидов / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Материалы междунар. научно-практ. конф. "Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения" (18-21 мая 2009 г.; г. Белгород). - Белгород, 2009. -С. 414-416.

12. Бубенчикова, В.Н. Определения числовых показателей сырья "Травы дурнишника беловатого" / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Материалы междунар. научно-практ. конф. "Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства". - Шымкент, Казахстан, 2009.-Т. 1.-С. 211-212.

13. Medical plants of the central Russia and their rational use / V.N. Bubenchi-kova, Yu, A. Kondratova, R.A. Bubenchikov et al. // International medizinscher congress "Euromedica" (4-5 Juni 2009). - Hannover, 2009. - P. 22-23.

14. Салех Кассим Аль-гифри. Содержание азотистых оснований в траве дурнишника обыкновенного / Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Молодежная наука и современность: материалы 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых: в 2 ч., Ч. II. - Курск: КГМУ, 2009. - С. 213-214.

15. Бубенчикова, В.Н. Изучение пектиновых веществ из травы дурнишника обыкновенного / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева// Междунар. форум "Интегративная медицина - 2009" (5-7 июня 2009; г Москва): сб. науч. тр. - М„ 2009. - Вып. 4. - С. 247-248.

16. Бубенчикова, В.Н. Изучение анальгезирующей активности дурнишника обыкновенного/ В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, М.П. Гладчен-ко // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. межвуз. науч. конф. посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск: КГМУ, 2009.-С. 132-133.

17. Салех Кассим Аль-гифри. Изучение состава фенольных соединений дурнишника беловатого / Салех Кассим Аль-гифри, О.И. Пугачева // Материалы IV междунар. науч. конф. молодых ученых-медиков: в 3 т. - Курск: КГМУ, 2010. -Т. 1,-С. 36-38.

18. Салех Кассим Аль-гифри. Стандартизация сырья "Травы дурнишника беловатого" по содержанию полисахаридов / Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Тр. 4-й междунар. науч. конф. "Актуальные проблемы регионо-ведения". - Курск, 2009. - С. 21-22.

19. Салех Кассим Аль-гифри. Исследование потенциального мочегонного эффекта настоев из травы дурнишника обыкновенного и дурнишника беловатого / Салех Кассим Аль-гифри, О.И. Пугачева // Молодежная наука и современность: материалы 75-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, посвящ. 75-летию КГМУ. - Курск, 2010. - Ч. II. - С. 242.

20. Бубенчикова, В.Н. Применение ВЭЖХ для идентификации фенолкар-боновых кислот дурнишника обыкновенного / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри // XVII Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство" (12-16 апр. 2010 г.; г. Москва): тез. докл. - М., 2010. - С. 586.

21. Бубенчикова, В.Н. Изучение антимикробной активности настоев из травы растений рода дурнишник / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, О.Д. Печенин // Фитодизайн в современных условиях: материалы междунар. на-учно-практ. конф. (14-17 июня 2010 г.; г. Белгород). - Белгород, 2010. -С. 317-318.

22. Бубенчикова, В.Н. Разработка числовых показателей травы дурнишника обыкновенного / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Е.В. Паршева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2010. - Вып. 65. - С. 16-17.

23. Бубенчикова, В.Н. Изучение анатомических признаков травы дурнишника беловатого / В.Н. Бубенчикова, Салех Кассим Аль-гифри, Л.И. Прокоше-ва // II Рос. фитотерапевтический съезд: сб. науч. тр. (22-23 октября 2010 г.; г. Москва). Приложение к журналу "Традиционная медицина" № 3 (22) 2010. -М.: Изд-во Профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2010. - С. 104-107.

24. Салех Кассим Аль-гифри. Изучение состава фенольных соединений дурнишника обыкновенного методом ВЭЖХ / Салех Кассим Аль-гифри // Междунар. науч.-практ. конф. "Молодые ученые в решении актуальных проблем науки". Сборник работ молодых ученых. - Владикавказ, 2010. - С. 100-101.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 24.12.2010 г. Подписано в печать 27.12.2010 г. Формат 30x42V8 Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 143 "А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.