Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение некоторых растений народной медицины Узбекистана

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ТАШКЕНТСКИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 581.8+547.454:547.918:547.98.04 (043 3)

р г ь оП

АХМЕДОВ Узар П

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ РАСТЕНИЙ НАРОДНОЙ МЕДИЦИНЫ

УЗБЕКИСТАНА

Специальность: 15.00.02 — фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Ташкент—1999

Работа выполнена в Ташкентском фармацевтическом институте Министерства здравоохранения Республики Узбекистан и в Институте химии растительных веществ АН Республики Узбекистан.

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор X. М. КОМИЛОВ

доктор химических наук У. Н. ЗАЙНУТДИНОВ

доктор фармацевтических наук Р. С. САБИРОВ

Ведущая организация:

Узбекский научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им. А. Султанова.

" сс

Защита состоится « 1999 г. в ^ @ часов на за-

седании Специализированного совета Д.087.12.01 при Ташкентском фармацевтическом институте (700015, Ташкент, проспект Айбека, 45).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ташкентского фармацевтического института.

Автореферат разослан « "/""» (СкУ 1999 г

Ученый секретарь

специализированного совета Д.087.12.01

доктор фармацевтических наук ¿У&Ч НАЗАРОВА

РМ&.-И , 0

ОБЩАЙ ХАРАКТЕРИСТИКА РАКОТЫ

Актуальность темы. В сохранении здоровья населения, лечении сольных и профилактике'Заболеваемости наряду: сядрупши основными факторами большое значение имеет своевременное обеспечение лечебных, саннтарно-' профилактических учреждений и населения высокоэффективными лекарственными препаратами. Эта проблема разрешается, в основном, за счет вы-.пуска или закупки известных, давно используемых лечебных средств и соз-- дания новых эффективных лекарственных препаратов. .

В качестве источников создания новых лекарственный препаратов особая роль принадлежит лекарственным растениям. Народной и традиционной медицины, пока еще не используемым в официальной медицине: ' -

Растения и их продукты всегда были и остаются основными лечебными средствами народной и традиционной медицины; 'Научная медицина долгое время в своей практической деятельности пользовалась лекарственными растениями. И в настоящее время более 1/3 лечебных средств официальной медицины составляют растительные препараты л их комплексы. - -, л

Сердечно-сосудистые и желудочно-кишечные заболевания в Узбекистане относятся к серьезной краевой патологии. Определенная часть населения страдает от сердечно-сосудистых заболевший и язвенной болезни, желудка и двенадцатиперстной кишки. Для лечения вышеуказанных заболеваний, наряду с кардиотоннче-скими препаратами, применяются мочегонные и противоязвенные средства.

Несмотря на наличие достаточного" количества высокоэффективных, в-основном, синтетических диуретиков и противоязвенных средств, медицин-, ские работники всегда нуждаются в новых, более эффективных и -мягко действующих средствах, так как не всегда возможно использование имеющихся синтетических лекарственных препаратов из-за их побочного, нежелательного действия и противопоказаний к применению- в. данной ситуации, особенно при лечении хронических больных. В этих случаях необхо-" димы мягко действующие растительные препараты, которые даже при длительном использовании не вызывают серьезных осложнений, Поэтому изучение лекарственных растений народной и традиционной медицины с целью создания новых эффективных лечебных препаратов н внедрение их в медицинскую практику всегда является актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение растений народной медицины Узбекистана для пополнения отечественных лекарственных средств диуретического и противоязвенного действия.

В задачи исследования входили: ;;

- фармакологический скрининг растений народной и традиционной ме-' дицнны с целью отбора объектов дальнейшего изучения вг качестве

диуретического и противоязвенного средств;

- выявление биологически активных пещёсго изучаемых растений, определение их количественного содержанка, выделение, исследование физико-химических свойств и идентификация;

- изучение микроскопического етрогкпа исследуемых и ряда других дикорастущих растений отечественной флоры с целью разработки диагностических признаков, необходимых для их кгйятпфихацни;

- определение числовых показателей, нормирующих качество сырья изучаемых растений;

- составление НТД на основании полеченных ¡анных и представление се для рассмотрения в Главное управление по контролю качества лекарственных дедов и медицинской техники МЗ РУз с целью пэ;туче -ня разрешение на применение в медицинской практике предлагаемых лекарлвешг ,к растительных средств.

Научная новизна исследований. Подтверждена обоснованносгь использования изучаемых растений в народной медицине в качестве мочегонных и противоязвенных средств. Изучен химический состав грыжника голого, унг.би обыкновенного, янтака рыхлолистного, василька иберийского и дурнишника обыкновенного, произрастающих в Узбекистане. Из изучаемых растений впервые выделено 10 флавоноидов, 11 проантоцианидинов, в том числе 6 новых, 8 катехинов, 2 сесквитерпеновых лактона, сапонины. Впервые разработаны показатели подлинности и доброкачественности сырья изучаемых растений, послуживших основой для составления соответствующей НТД (ВФС).

Впервые изучены анатомо-диагностические признаки сырья еще 20 растений народной медицины

Теоретическое и практическое значение работы. Показано, что влияние исследованных растений на организм обусловлено комплексом содержащихся в них биологически активных веществ, в частности, диуретическое действие грыжника голого и листьев унаби обыкновенного - сапонинами, флавонои-дами и слизями, ранозаживляющее действие травы василька иберийского, янтака рыхлолистного и дурнишника обыкновенного - флавоноидами, слизкми, сесквитерпеновыми лактонами и дубильными веществами (катехиыами и про-антоцианидинами).

Выявлен синергизм в совместном диуретическом действии выделенных из изучаемых растений флавоноидов с сапонинами или слизью и сапонинов со слизью. С учетом этого сделано заключение о целесообразности получения из растительного сырья суммарных лекарственных препаратов.

Установлена структура 6 новых проантоцианидинов ((-)-зпиафзелехин-(4р-8)-(~)-эпнгаллокатехина, проантоцианидина 1, проантоцнашщшт PZ■2, проантоцианидина Р2-3, проантоцианидина Р2>4, (-)-эпнкатехан-(4р-8)-(+)-галлокатехина), выделенных из изучаемых растений.

В результате проведенных исследований предложены новые перспективные отечественные лекарствен; ше растеши диуретического и противоязвенного денстшгя.

Проекты ВФС, разработанные на рекоме!щуемое сырье, представлены для рассмотрения в Главное управление по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники МЗ РУз. Решением Фармакологического комитета МЗ РУз трава грыжника голого (протокол № 2 от II апреля 1997 г.) и листья унаби обыкновенного (протокол № 2 от 30 июня 1998 г.) разрешены к широкому применению в медицинской практике.

Основные положения, выносимые на защиту: ,

- изучение химического состава грыжника голого, унаби обыкновенного, яитаха рыхлолистного, василька иберийского и дурнишника обыкновенного;

- выделение и установление химического строения биологически активных веществ изученных растений - флавоноидов из травы грыжника голого, янтака рыхлолистного и василька иберийского, листьев унаби обыкновенного и дурнишника обыкновенного; проантоцианидинов из травы янтака рыхлолистного и листьев унаби обыкновенного; сесквитерпеновых лак-тонов ш травы василька иберийского;

- изучение микроскопе, емкого строения отдельных видов

растений Узбекистана.

Связь задач исследования с проблемным планом фарм"цев-* г 1 чнате. Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом НИР Ташфарми (регистрационный Л'э 01910000744), ИХРВ им. С.Ю. Юну-сова АН РУз (регастрацнонный ]\гз 1860026966), а также ГКНТ (регистрационный № 02960008084).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава Ташкентского фармацевтического института (Ташкент, 1972, 1974, 1993, 1995 гг.); юбилейной научной конференции, посвященной 60-летшо Ташкентского фармацевтического института (Ташкент, 1997); научной конференции Института ботаники АН РУз (Ташкент, 1995); I Международном симпозиуме' по химии природных соединений (Ташкент, 1934); II Международном симпозиуме по химии природных соединении рсхишехр, Турция, 1996); III Международном симпозиуме по. химии природных соединений (г. Бухара, 1998); XII Международном симпозиуме по лекарствам из сырья растительного происхождения (Анкара, Турция, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 225 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, выводов, заключения, списка использованной литературы, включающего 256 ссылок, и приложения. Работа иллюстрирована' 16 таблицами и 48 рисунками.

В первой главе (обзор литературы) приведены данные о народной медицине и обоснована необходимость изучения лекарственных растений, применяемых в народной медицине, в том числе с диуретическим и противоязвенным действием.

Вторая глава включает краткое описание изучаемых растений, заготовки, сушки н подготовки сырья для анализа, а также результаты их фармакологического изучения,

В третьей главе приведены результаты химического исследования изучаемых растений на содержание основных групп биологически активных веществ.

Четвертая глава посвящена выделению и идентификации основных биологически активных веществ, обусловливающих диуретическое и противоязвенное действие изучаемых растений.

В пятой главе представлены результаты микроскопического анализа 23 дикорастущих лекарственных растений народной медицины Узбекистана.

В шестой главе приведены результаты определения числовых показателей, нормирующих качество сырья изучаемых растений.

В приложение (вторую часть диссертации) вынесены результаты фармакологического исследования изучаемых растений, материалы по разработке состава и технологии рекомендуемых из них лекарственных форм, а также документы о внедрении.

Изучение проантоциатщинов унаби обыкновенного, янтаха рыхлолиспю-го и сескв!ггерпеновых лактонов василька иберийского выполнено в Институте химии растительных веществ АН Республики Узбекистан в лаборатории химии кумаринов и терпеновдов (зав. - доктор химических наук Саидходжаев А.И.) и в лаборатории физических методов исследования - кандидатом, химических наук Абдуллаевым Н.Д. и научным сотрудником Вдовиным А.Д. [12,13].

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Выделение и изучение бислогическч акпони х веществ изучаемых растений В результате химического исследования и?"чаемых растений выявлено наличие и определено количественное содер"-кайле рада биологически активных веществ. Основные из них подвергнуты более глубокому изучению,

1. Исследование надземной части грыжника голого -Herniaria glabra L.

В народной медицине настой и отвар, приготовленные из надземной часта грыжника голого, применяют в качестве мочегонного средства при водянке, остром катаре мочевого пузыря, воспалениях почек и других заболеваниях мочевых путей, как вяжущее - при сифилисе, легочных и других заболеваниях.

Фармакологические исследования подтвердили диуретическое действие настоя травы и сумм сапонинов и флавоноидов, выделенных из надземной части грыжника голого (увеличение мочеотделения у крыс на 73.1, 16.5-76 и 27.160%). Поэтому данные биологически активные вещества стагш объектом исследования.

1.1. Изучение флавоноидов грыжника голого 1.1.1. Выделение флавоноидов Из воздушно-сухого измельченного сырья флавоноиды извлекали смесью ацетона с водой (6:4). Фильтрат концентрировали в вакууме до удаления всего ацетона. В остатке обнаружили 9 флавоноидов, обознач'енных Г1-Г9. Половину водного экстракта последовательно обрабатывали хлороформом и этилацетатом для выделения флавоноидов. Этилацетатный экстракт содержал пять флавоноидов - Гэ, П, Гв, Гв и Гв (рис. 1.1).

' 1.1.2.Выделение агликонов Для выделения агликонов флавоноидов. этилацетатный экстракт, содержащий пять флавоноидных веществ, упаривали в вакууме и гидролизовали 5% раствором HCl. После охлаждения к реакционной смеси добавляли очищенную воду. Этилацетатную фракцию трижды обрабатывали эфиром. Эфирные вытяжки объединяли, концентрировали и добавляли к ним очищенную воду. При этом на дно колбы выпадал желтый осадок. Анализ методом ТСХ показал, что осадок состоит из смеси двух агликонов, которые присутствуют в растении в свободном виде. Разделение их проводили препаративной ТСХ (ПТСХ). При этом получили агликоны Tai и Гаг. В углеводной части методом БХ идентифицировали глюкозу и галактозу.

Tai - лимонно-желтое кристаллическое вещество с т. пл. 300-310°С. Данные УФ-спектра, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

^ди, НМ

I II

С2Н50Н 370 255

+CHiCOONa 390 274

+СНзСООЫа+НзВОз 388 269

+А1С1з 450 270

+А1С1з+НС1 420 265

Следовательно, Га| имеет свободные гндроксильные группы в положениях С-3,5,7,3',4'. Продуктами щелочной деструкции вещества являются про-токатеховая кислота и флороглюцин.

Рис. 1.1. Схема выделения и разделения флавоноидов грыжника голого

Полученные данные и результаты хроматографического анализа с достоверным образцом указывают на то, что выделенный агликон является 3,5,7,3',4'-пентагидроксифлавоном, известным в литературе как кверцетин.

Гаг - желтое кристаллическое вещество с т.пл. 300-305°С. Данные УФ-спектроскопии следующие:

ллпах»

С2Н5ОН 365 250

+СНзСО(Жа 390 . 270

+СНзСООЫа+НзВОз 365 255

+А1С1з 435 265

+А1С1з+НС1 420 260

Щелочная деструкция приводит к образованию флороглюцина и ванилиновой кислоты.

Сравнение полученных данных с литературными показало, что агликон содержит гидроксильные группы в положениях С-3,5,7,4' и метоксильную группы в положении С-3', т.е. является 3,5,7,4'-гидрокси-3'-метокси-

флавоном, известным ъ литературе под названием изорамнеггин.

1.7.3. Ви.}гля$:;е гла* озидоа ; их идентификация Оставшуюся часть зишацетагнс • фу ж: ш упаривали до конца, промывали несколько раз хлороформом, растр эрлли в смеси спирт-ацетон (1:1).

Разделением этилацетатной фракции методом колоночной хроматографии выделили два индивидуальных флавоноида - П и Гб.

Флавоноид Гб - желтое кристаллическое вещество. Данные его УФ-спектра, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

_Хшах, НМ_

С2Н5ОН 350 250

+СНзСООЫа 375 265

+СНзСО(Жа+НзВОз 355 255

+А1С1з 385 260

+А1С1э+НС1 355 255

Полученные характеристики показывают, что в соединении имеются свободные гидроксильные группы в положениях С-5,7,4'.

Вещество гидролизовали 3% HCl. Из реакционной смеси агликон выделяли экстракцией эфиром. Водный остаток нейтрализовали и анализировали БХ. Сравнивая с достоверными образцами, углеводный компонент глл-козида Гб идентифцировали с глюкозой, агликон - как изорамнетин.

Таким образом, флазоноид Гб имеет строение 5,7,4'-гидрокси-3'-мегокси-З-О-р-Р-глюкопиранозилфлавона:

зультаты УФ-спектра, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

_Я.шдх, НМ _

С2Н5ОН 365 260

+СНзСООЫа 385 ' 275

+СНзСООЫа+НэВОэ 365 260

+А1С1з 395 ' 275

+А1СЬ+НС1 375 260

Из этих данных следует, что гликозвд имеет свободные гидроксильные группы в положениях С-5,7,3',4'. Кислотным гидролизом получали агликон с т. пл. 307-310°С п сахар. Аглшсон идентичен кверцепшу, сахар - галактозе. Сравнение УФ-спектров гликозида и агликона, снятых с добавлением диагностических реактивов, показывает, что углеводный компонент при-

соединен в положении С-3 кверцетина.

Анализируя полученные результаты и сравнивая их с л:ггературными данными, флавоноид Гц охарактеризовали как 5,7,3',4'-гидрокси-3-0-р-0-

глюкозида показаны на рис. 1.2.

Таким образом, установили, что в надземной части грыжника голого содержится 2.49% суммы флавоноидов.'В сумме флавоноидов методами БХ и ТСХ обнаружили наличие девяти веществ флавоноидной природы, из которых четыре выделили в индивидуальном виде и идентифицировали как П - 3,5,7,3',4'-гидроксифлавон (кверцетин); Гг - 3,5,7,4'-гндрокси-3'-метохси-флавон-изорамнетин; Гб - изорамнетин-З-О-р-О-глюкозид и Г4 - кверцетнн-З-О-р-О-галактозид (гиперозид).

1.2. Изучение сапонинов грыжника голого При помощи качественных реакций в надземной части грыжника голого обнаружено наличие сапонинов. Их количественное содержание, установленное весовым методом, составляет 12.2%. Сумма сапонинов получена в виде серовато-белого порошка.

Фармакологическое изучение суммы сапонинов показало ее высокую диуретическую активность (увеличение диуреза у крыс на 64.5% при дозе 50 мг на 1 кг животного и на 76% в дозе 10 мг/кг).

Сапонины грыжника голого не подвергали подробному анализу, ограничившись только определением их тритерпеновой природы и наличия в сумме двух веществ.

2. Химическое изучение листьев и плодов уиаби обыкновенного - гоурЬиэ ^ц'иЬа МШ.

Листья и плоды унаби обыкновенного богаты разными биологически активными веществами, которые обусловливают широкий спектр их фармакологической активности, в том числе и диуретическое действие. Из биологически активных веществ листьев и плодов более подробно изучали слизи, сапонины, флавоноиды и проантоцианидины (дубильные вещества).

2.1. Изучение слизи унаби обыкновенного Наличие слизи в водных извлечениях листьев и плодов изучаемых сортов унаби определяли при помощи качественных реакций. При этом установ-

лено наличие ее в листьях всех изучаемых сортов унаби и отсутствие в плодах. Поэтому в дальнейшем выделяли и подробно изучали слизь только из листьев унаби обыкновенного.

Рис. 1.2. Схема химических превращений кверцетин-З-галактозида (П) н изорамнепш-3-глюкозида (Гб)

Выделение и количественное определение слизи проводили по методу В.И. Орлова. Получили слизь в виде аморфного порошка белого «.пета. Ее количественное содержание а листьях определяли в динамике (табл. 2.1).

Из табл. 21 видно, что наиболее богаты елгоыо листья унаби культивируемого. Максимальное накопление слизи в листьях изучаемых сортов совпадает с моментом плодоношения унаби. Полученная слизь обладает мочегонным эффектом.

Таблица 2.1

Динамика накопления слизи в листьях изучаемых сортов унаби

(% на абсолютно-сухой вес)

Изучаемое растение Период сбора листьев

до цветения массовое цветение начало плодоношения полная зрелость плодов после снятия плодов

Унаби обыкновенный дикорастущий 5.34 7.04 8.84 8.21 8.60

Унаби обыкновенный культивируемый 6.01 7.40 8.95 8.38 8.75

Сорт Та-ян-цзао 5.14 6.79 7.14 6.96 7.08

Сорт Да-бай-цзао 5.28 6.80 7.95 7.15 7.34

Для определения химического состава слизь листьев унаби подвергли кислотному гидролизу 6% раствором НгБО* в течение 8 ч на кипящей водяной бане. Гидролизат нейтрализовали бария карбонатом, упаривали досуха, хроматографировали методом БХ. Обнаружили два пятна, соответствующие по значению Яги окраске глюкозе и арабинозе.

2.2. Изучение сапонинов унаби обыкновенного При помощи качественных реакций установили наличие сапонинов в листьях унаби и отсутствие их в плодах. Количественное содержание сапонинов в листьях унаби определяли весовым методом в динамике (табл. 2.2).

Таблица 2.2

Динамика накопления сапонинов в листьях изучаемых сортов унаби __ (%на абсолютно-сухой вес)_

Изучаемое растение Период сбора листьев

до цветения массовое цветение начало плодоношения полная зрелость плодов после снятия плодов

Унаби обыкновенный дикорастущий 0.20 0.27 0.36 0.23 0.19

Унаби обыкновенный культивируемый 0.18 0.24 0.32 ' 0.21 0.17

Сорт Та-ян-цзао 0.27 0.40 0.44 0.35 0.24

Сорт Да-бай-цзао, 0.20 0.31 0.38 0.29 0.17

Как видно из табл. 2.2, максимальное накопление сапонинов в листьях унаби совпадает с фазой начала плодоношения (0.36-0.38%), минимальное наблюдается после снятия плодов (0.19-0.17). При помощи качественных

реакций и методом БХ и ТСХ установили наличие двух сапонинов, относящихся к группе тритерпсновых соединенш!

Из листьев унаби сумму сапонинов получали осаждением 95% этанолом из водного извлечения. Сумму получили с виде аморфного порошка серого цвета. Определяли гемолитический индекс (1:250-1:235) и пекное число (1:1666) суммы.

Сумму сапонинов подвергали гидролизу 5% раствором НгБО.». Осадок аг-ликонов фильтровали, промывали водой, растворяли в эфире и анализировали методом ТСХ в присутствии "свидетелей". На хроматограммах проявилось два сапогенина, соответствующие гипсогенину и бетулину. Гидролизат нейтрализовали, упаривали, до небольшого объема и хроматографировали методом ТСХ в присутствии сахаров-"сввдетелей"..При этом на хроматограммах проявились два пятна, соответствующие фруктозе и глюкозе.

2.3. Изучение флавоноидов унаби обыкновенного

Качественными реакциями в листьях и плодах унаби обнаружили флаво-новые соединения. Количественное содержание их в листьях и плодах определяли фотоколориметрическим методом в динамике (табл. 2.3, 2.4). Калибровочный график строили по рутину,

■Таблица 2.3

Динамика накопления флавоноидов в листьях унаби

Период сбора листьев

Изучаемое до цве- массовое начало полная после

растение тения цветение плодо- зрелость снятия'

ношения плодов плодов

Унаби обыкновен-

ный дикорастущии 2.4 3.1 3.7 2.9 2.1

Унаби обыкновен-

ный культивируе-

мый 2.1 2.5 3.1 2.6 1.8

Сорт Та-ян-цзао 1.8 2.2 2.7 2.1 1.4

Сорт Да-бай-цзао • 1.9 2.2 ' 2.6 2.0 1.6

Таблица 2.4

Динамика накопления флавоноидов п плодах унаби _(% на абсолютно сухой вес)_

Изучаемое растение Период сбо оа плодов

незрелые плоды зрелые плоды

Унаби обыкновенный дикорастущий 1.4 2.3

Унаби обыкновенный культивируемый 1.3 2.0

Сорт Та-ян-цзао 1.1 1.6

Сорт Да-бай-цзао 1.2 1.8

2.3.1. Выделение флавоноидов из листьев и плодов унаби Сумму флавоноидов из воздушно-сухого измельченного сырья извлекали смесью ацетона с водой (4:1). Из объединенного экстракта ацетон полностью отгоняли под вакуумом. При бумажной хроматографш1 водного остатка экстракта из листьев обнаружили три вещества, экстракта плодов -

одно вещество.

Водный остаток последовательно обрабатывали этилацетатом и к-бутанолом. После нх концентрирования путем препаративной хроматографии из этилацетатной фракции выделили в индивидуальном виде вещество I и из н-бутанольной фракции - вещества II, III.

Вещество I после трехкратной перекристаллизации из смеси ацетона и воды (10:3) представляло собой желтые кристаллы с т.пл. 246-248°С. Результаты

Хтах, нм

I II

372. ' 257

371 258

396 260

430 267

388 259

С2Н5ОН +СН3СООЫа +СНзСООИа+НзВОз +А1С1з

+А1С1з+СНзСООЫа

Данные УФ-спектра вещества I и проведенные дифференциальные качественные реакции показывают, что у этого соединения в положениях С-3, С-5, С-3' И С-4' имеются свободные гидроксильные группы, в положении С-7 гидроксильная группа гликозилирована.

ИК-спектры вещества I и заведомо известного кверцимеритрина оказались идентичными. В смешанной пробе вещества I и чистого кверцимеритрина не наблюдали депрессии температуры плавления.

Провели гидролиз вещества I 5% раствором НгБО.». Из продуктов гидролиза выделили агликон, который был идентифицирован как кверцетин.

В гидролизате вещества I методом БХ идентифицировали один сахар -Р-глюкозу.

По результатам изучения физико-химических свойств вещество I идентифицировали как кверцетин-7-0-р-0-глюкопиранозид (кверцимеритрин).

Вещество II - светло-желтые кристаллы с т. пл. 190-191 °С. Данные УФ-спектра вещества II, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

_Я.Ш8Х, НМ_

I II

С2Н5ОН 369 262

+СНзСООЫа 400 272

+СНзСООЫа+НзВОз 398 268 +А1С1з 398 268

ИК-спектры вещества П и заведомо известного рутина оказались идентичными. В смешанной пробе вещества II и рутина не наблюдали депрессии температуры плавления.

При ацетилировании вещества П получили его ацетильное производное с т.пл. 124°С, не дающее депрессии температуры плавления в смешанной пробе с полным ацетильным производным заведомо известного рутина. Из продуктов пиролиза выделили и идентифицировали агликон -кверцетин.

, Для рупша характерно наличие в углеводной части дисахарида рутинозы. Поэтому гидролиз вещества П проводили в мягких условиях, чтобы сохранить углеводную часть в виде дисахарида. Методом БХ в гидролизате обнаружили одно пятно, совпадающее по окраске и значению Яг с рутинозой. По результатам изучения физико-химических свойств вещество П идентифицировали как

кверцеган-3<>Р-0-тгокопирапоз1ш<><6--»1)ч1-Ь-рамнопирангавдфушн).

Вещество 1П - желтые кристаллы с т.пл. 278-282'С. Кислотным гидролизом вещества Ш получили агликон с т.пл. 307-310°С и сахар. Агликон идентичен кверцетину, сахарная часть - галактозе.

Сравнение УФ-спектров гликозида и агликона, снятых с добавлением диагностических реактивов, показывает, что углеводная часть присоединена в положении С-3 кверцетина. В смешанной пробе вещества Ш и чистого ги-перозида не наблюдали депрессии температуры плавления,

2.4. Изучение проантоцианидинов унаби обыкновенного 2.4.1. Разделение и идентификация мономерных катехинов Из высушенных и измельченных листьев (5.8 кг) дубильные вещества (катехины и проантоцианидины) извлекали 80% этанолом, экстрагируя шестикратно. Экстракты объединяли, фильтровали и упаривали в вакууме при температуре 40°С до 2 л. Сгущенный экстракт обрабатывали последовательно диэтиловым эфиром, этилацетатом и и-бутанолом. Получили соответственно 18.2 (0.36%), 21.1 (0.36%) и 165 г (2.8%) вытяжки, из водного остатка получили 510 г суммы высокомолекулярных проантоцианидинов (рис. 2.1).

Измельчение сырья 1

Водно-спиртовая экстракция Сгущенный экстракт

Экстракция

Днэтиловый эфир Этилацетат н-Бутанол Водная часть

Рис. 2.1. Схема выделения и разделения катехинов и проантоцианидинов из унаби обыкновенного

Эфирный экстракт хроматографировали на колонке с силикагелем. Для элюирования использовали систему этилацетат-гексан. В результате выделили и идентифицировали по физико-химическим константам, спектраль-. ным параметрам и результатам сравнения с истинными образцами следующие соединения (рис. 2.2): (-)-эпиафзелехин (1) (0.118 г, 0.65%), (-)-эпикатехин (2) (0.222 г, 1.21%), (-)-эпигаллокатехин (3) (0.308 г, 1.69%), (-)-эпикатехингаллат (4) (0.081 г, 0.45%), (->-эпигалло-катехингаллат (5) (0.213 г, 1.17%), (+)-катехин (6) (0.096 г, 0.53%), (+)-катехингаллат (7) (0.053 г, 0.29%), (+)-галлокатехин (8) (0.038 г, 0.21%).

2.4.2. Разделение и идентификация димерных проантоцпанидинов

Этилацетатную фракцию хроматографировали на колонке с сефадексом LH-20. Для элюирования использовали 80% водный метанол. Получили четыре димерных проантоцианидина (рис. 2.3).

На основании результатов изучения физико-химических свойств (кислотный гидролиз, тиолиз и т.д.) и спектральных характеристик (ЯМР •Н и |3С) соединения 9—11 идентифицировали с (-)-эпиафзелехин-(4р-8)-(-)-эпикатехнном (9), процианидином В-2 (10) и (-)-эпикатехин-(4р-8)-(-)-эпигаллокатехином (11).

(-)-Эпнафзслехин-(4р-8)-(-)-эпикатех11н (9). Аморфный порошок состава СэоНиОп, М 562, [а]"о +28.3° (с 1.0; ацетон). Спектр ПМР 2.84 (2Н, м, Н-4'), 4.01 (1Н, с, Н-3), 4.33 (1Н, м. Н-3'), 4.70 (1Н, с, Н-4), 4.94 (1Н, с, Н-2'), 5.15 (1Н, с, Н-2), 6.00-6.03 (ЗН, м) - протоны циклов А, 6.7-7.2 м.д. (7Н, м) -протоны циклов В.

Процнанпднн В-2 (10). Аморфный порошок состава СзоНмО^, М 578, [o]22d +25.1° (С 1.0; ацетон). Спектр ПМР: 2.84 (2Н, м, Н-41), 3.99 (1Н, с, Н-3), 4.32 (1Н, м, Н-3'), 4.71 (1Н, с, Н-4), 4.92 (1Н, с, Н-2'), 5.09 (1Н, с, Н-2), 6.,01-6.08 (ЗН, м) - протоны циклов А, 6.71-7.19 м.д. (6Н, м) - протоны циклов В.

(-)-Эпикатехин-(4Р-8)-(-)-эпигаллокатехин (11). Аморфный порошок состава СзоНмСЬ, М 594, [а]22 +42.3° (С 0.78; ацетон). Спектр ПМР: 2.82 (2Н, м, Н-4'), 4.03 (1Н, уш. с, Н-3), 4.29 (1Н, уш. с, Н-3'), 4.73 (1Н, с, Н-4), 4.91 (1Н, с, Н-2'), 5.07 (1Н, с, Н-2), 5.80-6.10 (ЗН, м) - протоны циклов А, 6.64 (2Н, е.), 6.82-6.90 (2Н, м), 7.08 м.д. (IH, уш. с)-протоны циклов В.

он

он

1. R=Ri=R2=H

2. R=R2=H; Ri=OH

3. R=H; RI=R2=OH

4. R=GaIloil; Ri=OH; R2=H

5.R=Galloil; Ri=R2=OH

6. R=Ri=H

7. R=Galloil; Ri=H

8. R=H; Ri=OH

Рис. 2.2. Мономерные катехины унаби

Таблица 2.5

Соединения, выделенные из унаби обыкновенного, _и их физико-химические»онстанты _

Соединение . / Состав мм* град Т. пл., °С

1. (-КЭпиафзелихин СиНпОз 273 -52 249-250

2. (-У-Эпикатехин СиНмО« 290 -69 241-243

3. (-УЭпигаллокатехин . > С15Н14О7 306 -55 216-218

4. (-)-Эпикатехин-З-О-галлат СгзНиОю 442 -176 253-255

5. (-УЭпигаллокатехингаллат СггНцОн 458 -185 210-211

6. (+)-Катехин С|зНиОб 290 + 18 178-179

7. (+)-Катехингаллат СиНиОю 442 +2 195-197

8. (+)-Галлокатехин С15Н14О7 306 + 15 186-188

9. (-)-Эпиафзелихин-('4Р-8)-(-)-эпикатехин СзоНгбОи 562 +28.3

10. Процианидин СзоНгвОп 578 +25.1

И. (-')-Эпикатехин-(4р-8>-(-)-эпигаллокатехин СзоНиОн 594 +42.3

12. (-)-Эпиафзелихин-(40-8)-(-)-эпигаллокатехин СзоНиОи 594 +42.3

13. Проантоцианидин Рг-1 СдзНзаО^ 866 +58.1

14. Проантоцианидин Р2-2 г С45Нз»0|7 850 +51.4

15. Проантоцианидин Рг-З С75Н62032 1474 +77.8

16. Проантоцианидин Р2-4 Смзнмо« 2084 +73.6

(-)-Эпиафзелехи11-(4р-8)-(-)-эпигаллокатехнн (12). Аморфньш порошок состава СзоНмОи, М 578, [а]" +43.4° (с 1.2; ацетон). Спектр ПМР: 2.82 (2Н, м, Н-4'), 3.98 (1Н, с, Н:3), 4.29 (1Н, уш„ Н-3'), 4.75 (1Н, с, Н-4), 4.94 (1Н, с, Н-2'), 5.04 (1Н, с, Н-2), 5.91; 6.08 (ЗН, Н-6, Н-8 и Н-6') циклов А, 6.65 (2Н, с) - кольцо В галлокатехина, 6.76 (2Н, ;д, 1=8 Гц, Н-3', Н-5') и 7.28 м.д. (2Н, 1=8 Гц, Н=2', Н-6') - протоны цикла В афзелехина.

• Таблица 2.6

Атом углерода • Фрагмент

а 6

С-2 7/. 2 79.0

С-3* 72.6 ' 66.Й .

С-4 36.5 —* .

С-6 97.0е 97.0«

С-8 96.6« 106.6

С-10 103.1 103.1

С-5.7,9 156.4 156.4

С-Г 130.1« 131.5"

С-2' 129.4 106.6

С-3' 114.4 145.0

С-4' 156.Ь 133.7

С-5' 114.4 145.0

С-6' 129.4 106.6

одинаковыми надстрочными буквами, можно инвертировать.

Сравнительный анализ спектров ЛМР |3С соединений 9 и 12 показал идентичность заместителей колец А и С и близость их структуры. В отли-

чие от спектра соединения 9 в спектре ЯМР |3С соединения 12 (табл. 2.6) отсутствуют характерные сигналы от углеродных атомов (-)-эгтикатехнна и наряду с резонансными сигналами (-)-эпиафзелехнна наблюдаются сигналы углеродных атомов (-)-зпигаллокатехина. Действительно, при кислотном и тиолитическом расщеплении этого проантоцианндина из «нижней» часта получили (-)-эпигаллокатехин (3), а из «верхней» - пеларгонидии (20) и после каталитического расщепления тиоэфира (22) никелем Реися - (-)-эпиафзелехин (1), Следовательно, соединение 12 является димером - эпиаф-зелехин-(4р-8)-эпигаллокатехшюм.

я.я-^-н

Ш.Я-0Н;Я|.Н

и. к-Я|ЮН

12. Я-Н; Я1-0Н

ОН

Рис. 2.3. Димерные катехины укаби

2.4.3. Разделение и идентификация олпгомерпых проантоцишшдипов Бутанольное извлечение смешивали с целлюлозой и помещали в колонку с мелкокристаллической целлюлозой. Эгаоировали смесью хлороформ-этилацетат, этилацетатом, ацетоном. Контроль вели с помощью ТСХ. Элюаты фракций, содержащие смесь относительно низкомолекулярных проантоцианидинов, объединяли, упаривали и рехроматографировали на целлюлозе. Элюировали этилацетатом, смесью этилацетат-ацетон. Изолированные проаитоцианиднны унаби обыкновенного растворяются в метаноле, этаноле, ацетоне, диметилформамиде, хорошо растворяются в их сме-

сях с водой, трудно растворяются в хлороформе и эфире. Водные растворы имеют слабокислый характер, pH около 5.

Проантоциашздин PZ-1 имеет элементный состав С45Н66О43, М +866, [а]25с +58.1°, хорошо растворяется в спиртах, ацетоне, диметилформамиде и их смесях с водой, не растворяется в гексане, эфире и хлороформе.

УФ-спектр проантоцианидина имеет максимум в области около 210 нм и минимум при 252 нм с плечом при 220 нм и слабым поглощением при 245 нм. За минимумом следует характерный максимум при 278 нм, который затем постепенно сдвигается в сторону видимой области спектра.

И K-спектр проантоцианидина характерен для олигомерных проашхщианвдинов. В ИК-спеетре имеется интенсивная широкая полоса поглощения в области 35003200 см-' (-ОН группы), 1610, 1535,1440 (ароматические кольца) и 1535, 1515, 1150, 1040,830,805,770,747 елг1 (1,4; 1,3,4 и 1,3,4,5 замещенные бензольные кольца).

При щелочном расщеплении проантоцианидина в атмосфере азота обнаружили три ароматические кислоты: параоксибензойную (17), галловую (18) и протокатеховую (19), что указывает на его сложный состав (рис. 2.4).

После кислотного расщепления проантоцианидина PZ-1 хлористоводородной кислотой в буганоле в пщролизате обнаружили три соединения - пеларгошщин (20), дельфинвдин (21) и (+)-катехин. Результаты изученш спектра ЯМР |3С показывают, что проангоцианидин PZ-1 является производным нескольких флаван-3-ольных систем (табл. 2.7). Сигналы от С-2 во фрагментах проантоцианидина PZ-1 проявляются при 77.1 и 81.7 мл., что однозначно указывает на наличие как 2-3-цис-, так и 2-3-транс-стсреохишш флаван-3-олов в этом соединении.

Таблица 2.7

Атом углерода Фрагмент

а б в

С-2 77.1 77.1 81.7

С-3 72.2 72.2 67.7

С-4 36.8 36.8 -

С-6 96.7е . 96.0° 96.0е

С-8 96.0» .107.2 107.2

С-10 101.7 101.7 101.7

С-5,7,9 1536-1578

С-Г 131.6" 130.3" 131.6»

С-2' 129.8й 106.8 115.4х

С-3' 114.6х 145.4е . 145.1е

С-4' 156.7 133.9 145.1е

С-5' 114.6» 145.4е 116.5

С-6' 129.4й 106.8 119.1.

♦Сигнал перекрывается сигналом растворителя. Сигналы, отмеченные одинаковыми надстрочными буквами, можно инвертировать.

Резонансный сипиш при 72.2 м.д. относится к С-3 «верхних» блоков, сигнал данного углеродного атома «нижнего» катехинового блока проявляется при 67.7 м.д. Замещенные углеродные атомы С-4 резонируют при 36,8 м.д., а сигнал одноименного углерода «нижнего» катехинового блока перекрывается с таковым рас!вор1П"еля при 29 м.д. Резонансный сигнал при 107.2 м.д. относит-

ся к углеродному атому С-8 кольца А, образующему межфлавонопую связь, а сигналы малой интенсивности при 96.0 и 96.7 м.д. относятся к С-6 и С-8 углеродным атомам, не принимающим участия в межфлавоновых связях.

он

Интенсивные резонансные линии при 145.4 и 145.1 мд. относятся к С-3', С-4' кольца В катех1ша и С-3', С-5' эпипишокатехина. Углеродный атом С-4' эпигаллока-

Тайна экранирует д вумя щцроксильными группа: ш в ортоположении и резонирует при 133.9 мд. Углерод ные атомы С-2', С-5', С-С катехина дают характерные сигналы соответственно при 115.4,116.5 и 119.1 мд. Наличие сигналов при 129.8, а также в области 114-115 и около 130-131 мд. указывает на то, что одним из блоков в проангоцианидане PZ-1 является афзелехин.

Тиолитическое расщепление проантоцианидина PZ-1 в присутствии фе-шшмеркаптана привело к получению (+)-катехина (6), замещающего «нижнее» положение, и смеси двух тиоэфиров (22,23).

В результате изучения спектров ПМР и физико-химических свойств продуктов каталитического расщепления тиоэфиров установили, что одним из «верхних» блоков является (-)-эпигаллокатехин, а другим - (-)-эпиафзелехин. Исходя из приведенных выше данных, а также учитывая элементный состав проантоцианидина PZ-1, можно предположить. структуру этого соединения как зпиафзелехин-(4-р-8)-эпигаллокатехин-(4-р-8)-катехин (рис. 2.4).

Проаитоцианиднн PZ-2 представляет собой аморфный порошок светло-коричневого цвета, разлагается при температуре 290-300°С, имеет элементный состав С«Нз80(7, молекулярную массу 850, [а]2Ъ +51.4°.

Физико-химические свойства проашоцианвдинов PZ-1 и PZ-2 очень близки. Раз-личакяся они тем, что в спектре ЯМР 13С проантоцианвдина-Ргг2 имеются характерные резонансные сигналы углеродных атомов эпиафзелешна, эпикатехина и ка-техина и отсутствуют характерные сигналы зпигаллокатехина (табл. 2.8).

Таблица 2.8

Атом углерода Фрагмент

а б в

С-2 77.2е 77.0е 82.1

С-3 ' 72.5 72.5 67.6

С-4 36.7 . 36.7 mv

С-6 96.2« 96.2" 96.2»

С-8 96.7» • 107.8 107.8

С-10 1Ö2.Ö 102.0 1Ö2.0

С-5,7,9 154.1-156.9

С-Г . 131.3 • 131.3 131.3

С-2' ^ 128.9 115.4 115.4

С-3' 114.5 145.4 145.4

С-4' 156.9 145.4 145.4

С-5' 114.5 116.8 116.8

С-6' 128.9 119.9 119.9

одинаковыми надстрочными буквами, можно инвертировать.

После кислотного расщепления проантоцианидина Р2-2 в гидролизате обнаружили три соединения: пеларгонидин (20), цианидин (24) и (+)-катехии. Тиолитическое расщепление вещества в присутствии фешшмер-каптана дает три продукта - два тиоэфира (22, 25) и (+)-катехин. После деградации тиоэфиров установили структуру «верхних» блоков проантоцианидина: одним из блоков оказался эшгафзелихин, другим - зпикатехин (2). Сопоставление данных проаяггоцнанидинов PZ-l и ?Ъ-2 показывает, что структура проантоцианидина Р2-2 соответствует эпиафзелехин-(4-р-8)-эпикатехш1-(4-р-8)-катехнну (рис. 2.5).

ОН

ХО^" "ХОР

и 1

Рис. 2.5. Схема химических превращений PZ•2

Прсаитоциаиндин РХ-З представляет собой аморфный порошок коричневого дзета состава С75НМО32, М 1474, [а]22о +77.8°, разлагается при температуре 290-300°С.

В УФ спектре проантоцианидина PZ-3 наблюдаются максимумы поглощения, характерные для проантоцианндинов, при 220 и 280 им с плечом при 245 и минимум при 255 нм.

В его ИК-спектре имеется сильная широкая полоса поглощения в области 3500-3200 см-', обусловленная валентными колебаниями гидроксильных

групп, образующих межмолекулярные и внутримолекулярные водородные связи. Полоса в области 1615, 1545, 1450, П20. 1038 см-1 указывает на присутствие ароматических колец и гетероцикпоь ; кислородным гетератомом.

В спектре iIMP |3С проантоцианидина PZ-3 проявляются сип'алы углеродных атомов эпиафзелехина, эпигаллокатехина и катехина. Отнесение сигналов приведено в табл. 2.9.

По данным УФ- и ИК-спектров, а также молекулярной массе проанто-цианидии PZ-3 отнесли к олигомерным проантоцианидинам (рис. 2.6).

Проашхщианццин PZ-4 - оптически активное, аморфное вещество, с элементным составом CiosHsr.O-«, имеет молекулярную массу 2084, [ocPd +73.6°. В УФ-спектре проантоцианидина PZ-4 имеются характерные для проангоциашщинов полосы поглощения (Яши 220, 245, 280 нм, Я^т 258). ИК- спектр также характерен для высокомолекулярных проатоцианидинов, где наблюдаются широкие полосы поглощения в области 3500-3100 (пщроксильные группы), 1618, 1545, 11455, 1343,1111,1040 см"1 (аромати-ческие кольца, связанные с гетеюоциклом).

Таблица 2.9

Химические сдвиги (м.д.) в спектре ЯМР 13С проантоцианидина PZ-3

Атом углерода Фрагменты

а б Е

С-2 77.2 77.2 81.8

С-3 72.1 72.1 67.9

С-4 36.8 _j 36.8

С-6 96.1е 96.1е 96.1е

С-8 97.0° 107.4 107.4

С-10 . 101.5 101.5 101.5

С-5,7,9 155.1-158.0"

С-Г 131.3" 131.3* 131.2*

С-2' 129.7 107.4 115.5е

С-3' 114.5" 145.5 145.2

С-4' 157.0» 134.0 145.2

С-5' 114.5е ' 145.5 116.9.

С-6' 229.7 107.4 119.3

* Сигнал перекрывается сигналом растворителя. Сигналы, отмеченные одинаковыми надстрочными буквами, можно инвертировать.

Результаты химических исследований показывают, что процт'оциашщни PZ-4 имеет сложный состав и относится к олигомерным проантоцнанидннам. Расщеплением проантоцианидина PZ-4 5% раствором НС1 в //-буганоле в запаянной ампуле полуиши пеларгошщин (20), дельфишщин (21) и (+)-катехин (б).

Щелочное сплавление проантоцианидина PZ-4 в условиях, исключающих окисление продуктов расщепления, в атмосфере азота привело к получению флороглюцина (26), галловой (18), протохатеховой (19) и параоксибензон-ной (17) кислот (рис. 2.7). При тиолитическом расщеплении в присутствии феншшеркаптана в слабокислой среде из «нижнего» блока образовался (+)-катехин (6), а из «верхних» блоков - смесь тиоэфиров (27). Продукты каталитического восспшовления тиоэфиров разделяли методом гель-хроматографии на сефздексе LH-20. Получили два соединения и идентифицировали их с (-)-

эпиафзелехшюм (1) и (-)-зпг.галлокатехин-3-0-галлатом (5).

он

Рис. 2.6. Схема химических превращений PZ-3

Следовательно, полученные данные химической деструкции доказывают, что проантоцианидин РХ-4 - олигомерный проантоцианидин, состоящий из

молекул (-)-эпиафзелехина, (-)-эпигалцокатехич-3-0-галлата и (+)-катехина. Спектры ЯМР ,3С проаш оцншшдинсз похожи, с той разницей, что в спектре проантоцианвдина PZ-4 проявляются характерные сигналы, кроме эпиафзеле-хина и (+)-катехина от (-)-зпикатехин-3-0-гр лл&та (табл. 2.10).

Рис. 2.7. Схема химических превращений Р2>4 Смещение в более сильное поле и проявление в области 71.2 и 34.4. м.д.

сигналов, относящихся к атомам С-3 и С-4 гетероцнкла С, показывает, что «средние» блоки галлоилированы в положении С-3. Резонирование же сиг налов «верхнего» блока, а также сигналов при 68.6 и 73.2 и 68.6 м.д. в области 30 м.д. (перекрывается сигналом растворителя) «нижнего» блока показывает, что эти блоки не галлоилированы.

Таблица 2.10.

Химические сдвиги (м.д.) в спектре ЯМР ПС проантоцианидина Р2^-4

Атом углерода Фрагмент

а б в Галлоил

С-2 . 76.8 77.9 81.3

С-3 73.2 71.3 68.6

С-4 37.1 34.4 _*

С-6 95.8е 95.8° 95.8е

С-8 96.9е 107.5 107.5

С-10 101.2 101.2 101.2

С-5,7,9 . 154.2-157.7

С-Г 131.1 131.1 131.1 121.3

С-2' 129.6 107.5 115.6 109.9

С-3' 114.4 145.3 145.3 145.5

С-4' 157.3 133.8 145.3 138.9

С-5' 114.4 145.3 116.4 145.5

С-6' 129.6 107.5 119.6 109.9

-соо- 166.3

* Сигнал перекрывается сигналом растворителя. Сигналы, отмеченные одинаковыми надстрочными буквами, можно инвертировать. Подчеркивание означает гадлоилкро вание гидроксильной группы.

Таким образом, на основании результатов изучения физико-химических характеристик, химического состава и молекулярной массы, можно заключить, что проантоцианидин Р2-4 является гептамером, т.е. эпиафзелехин-. (4р-8)-[эпигаллокатехин-3-0-галлат-(4р-8)]5-катехииом.

3. Исследование надземной части янтака - АШа^ 8раге1Го55а 8Ьар.

При фармаколоппеском исследовании надземная часть янхака рыхлолиспгого проявила высокую акшвносп» в качестве даурепнеского и ранозалатл'ттощего средства, благодаря содержипно разных биологически активных Еоцесга. Поэтому подробно I пу ¡аш I флаги ю; щы, ста сь и проа ггощ гш пто агьпраш л ггака рь клоп: :сп юга.

3.1. Изучение флссзопоидоз яптакарыхлолиапсго

Из воздушно-сухого измельченного сырья сумму флавоноидов извлекали смесью ацетона с водой (4:1). Из объединенного экстракта ацетон полностью отгонял:! под вакуумом. При хроматсграфирсвании на бумаге водного остатка обнаружили шесть веществ, которые предварительно в присутствии «свидетелей» идентифицировали как кверцетин, изорамнетин, кверцимерит-рин и рутин. Водный остаток последовательно обрабатывали этилацегатом и .ч-бутанолом. Этилацетатный и бутанольный экстракты концентрировали и каждый отдельно пропускали через колонку, заполненную полиамидным сорбентом. Наличие флавоновдов в аксатах ко!прол1фовали методом БХ или

ТСХ. Из этилацетатного экстракта получили в чистом виде вещества I, П и IV, из бутанольного экстракта - вещество Ш и V.

Вещество I - лимоиио-желтые кристаллы с т.пл. 308-309°С. Данные анализов (результаты УФ-спектра, температура плавления, хроматографический анализ и проба смешения с достоверным образцом кверцетина) подтверждают, что вещество I является 3,5,7,3',4'-пентапщроксифлавоном (кверцетином).

Вещество II - желтые кристаллы с т.пл. 306-309°С.

Температура плавления смешанной пробы вещества II с достоверным образцом изорамнетина не изменилась. Следовательно, вещество II является 3,5,7,4'-пщрокси-3'-метоксифлавон (изорамнетином).

Вещество III - желтые кристаллы с т.пл. 221-223°С.

Исходя из данных анализов и сравнения их с литературными, вещество III идентифицировали как 5,714'-пщроксн-3'-метокснфлавон-3-0-р-В-глюкоз1Щ.

Вещество IV после трехкратной перекристаллизашш га смеси ацетона и воды (10:3) представляло ообой желтые кристаллы с т. пл. 246-248Х?. В смешанной пробе вещества IV и чистого кверцимеритрина не наблюдали д епрессии температуры плавления.

В продуктах кислотного гидролиза вещества IV идентифицировали агли-кон - кверцетнн, в гидролизате методом БХ - Б-глюкозу.

По результатам изучения физико-химических свойств вещество IV идентифицировали как кверцетин-7-0-Р-0-глюкопиранозид (кверцимеритрин).

Вещество V - светло-желтые кристаллы с т.пл. 189-191°С.

По результатам изучения физико-химических свойств, дифференциальных качественных реакций и'сравнения полученных данных с литературными вещество V идентифицировали как кверцетин-З-О-Р-Е)-глюкопиранозило(б-И)-а-1—рамнопиранозид (рутин).

3.2. Изучение аизи янтака рыхлолистного

Из высушенной и измельченной надземной части янтака рыхлолистного слизь извлекали водой на кипящей водяной бане. Экстракт фильтровали и упаривали в вакууме до 1/3 части первоначального объема и после охлаждения слизь осаждали 95% спиртом (в соотношении 1:3). Осадок собирали на стеклянном фильтре, промывали смесью спирта с эфиром (1:1) и сушили.

Для определения химической природы выделенную слизь подвергли гидролизу 6% раствором НаЭОц. На хроматограммах гидролизата слизи янтака рыхлолистного проявилось три пятна, идентифицированные при помощи сахаров-«свидетелей» как глюкоза, арабиноза и рамноза соответственно.

3.3. Изучение катехииов и проантоцианидинов янтака рыхлолистного

Катехины и проантоцианидины из высушенной и. измельченной травы янтака рыхлолистного шестикратно извлекали 80% этанолом. После фильтрации экстракт упаривали в вакууме при температуре 40°С до 2 л. Затем сгущенный экстракт исчерпывающе, обрабатывали последовательно эфиром, этилацетатом и л-бутанолом (см. схему). Соответственно получили 42.1 (0.53%), 48.8 (0.61%) и 138.2 г (1.73%) вытяжки. Из водного остатка после обработки вышеуказанными растворителями получили 352 г (4.4%) густого экстракта. Как известно, в эфирный экстракт переходят катехины, в этилацетатную фракцию - димерные проантоцианидины.

Для разделения катехииов эфирный экстракт хроматографировали на колонке

с сефадексом ЬН-20, элюируя системой этилацетат-гексан и этанол. При этом выделили шпъ соединений - мономерных катехинов (соединения 2,3,5,6 и 8).

Для разделения димерных проантоцианидинов этилацетатную фракцию хроматографировали на колонке с сефадексом ЬН-20. Для элюирования использовали этанол. Получили пять димерных проантоцианидинов (соединения 10, 28, 29, 30 и 31).

Соединения 2, 3,5, 6,8 по физико-химическим и спектральным параметрам, а также результатам сравнения с заведомо известными образцами идентифицировали соответственно как (-)-зпнгаллокатехин-3-0-галлат (5), (-)-эга1галлокатехин (3), (-)-зпикатехин (2), (+)-катехин (6), (+)-галлокатехин (8) (рис. 3.1).

На основании результатов кислотного гидролиза, щелочного и тиолитиче-ского расщепления (рис. 3.2), спектральных характеристик (УФ, ИК, ПМР) и сравнения (табл. 3.2) их с литературными данными установили структуру выделенных димерных проантоцианидинов 10, 28—31. Соединения 10 и 30 идентифицировали соответственно как проантоцианидины В-2 и В-1.

Таблица 3.1

Соединения, выделенные из янтака рыхлолистного, и их Физико-химические константы

Соединение Состав ММ+ град Т. пл.. °С

(-)-Эпикатехин (2) С15Н14О6 290 -69 241-243

(-)-Эпигаллокатехин (3) С15Н14О7 306 -55 216-218

У-Эпигаллокатехингаллат (5)_ С22Н18011 468 -185 210-211

(+)-Катехшг (6) С15Н1407 290 + 18 178-179

(+)-Галлокатехин (8) 306 + 15 185-188

Процианидин В-2 (10) С30Н26О12 578 +25.1

(-)-Зпнгаллокатехин-(4р-8)-(-)-эпикатехин (28) ■ СзоШбОв 594 +48.6

(-)-Эп:игаллокагехш1-(4р-8)-(-)-эпикатехин (29) С37Н30О18 762 +69.8

Процианидин В-1 (30) 'СмНгвОи 578 +32.8

(-)-Эпихатехш1-(4р-3)-(+)-гашгокатехин (33) С30Н25О13 594 +22.5

Проантоцпашдам В-2 (соединение 10) - аморфный порошок (0.088 г; 0.18%) состава СзоН2бО|2. Молекулярная масса (М) 578, [а]и0+25Л° (с 1.0; ацетон). ИК-спекгр: nw 3335 (ОН), 1621 cvr1 (аром, циклы). Cneicrp ПМР-см.^бл. 3.2.

2. R=Rj=H б- R=H

3. R=H; R,=OH 8- R"0H 5. ROalloil; R,=OH

Рис. 3.1. Мономерные катехины янтака рыхлолистного

Таблица 3.2

Величины ХС (5, м.д.) и КССВ (J, Гц) протонов в спектрах ПМР _проантоцианидинов 10, 28-31__

Соединение Н-2 Н-3 Н-4 Н-2' Н-3' Н-4' Цикл A Цикл В

10 5.08у.с 4.32у.с а4.72у.с 4.93у.с 3.98у.с 2.73-2.91м 5.96-6.08 6.71-7.13

28 5.1 ly.c 4.31м а4.74у.с 4.97у.с 4.01м 2.76-2.86м 5.93-6.11 6.69-7.20 6.78c

29* 5.66у.с 5.53м а4.81д U i=3 4.95у.с 4.04м 2.68-3.01м 5.95-6.13 6.71-7.08 6.80c

30 5.10у.с 4.15м а4.69д 4.79Д J¡.3-8 4.08м а2.80дд ha,i=6 J4a,4p=16 Р2.56ДД JA з=7 J4p. 4ct=16 5.92-6.09 6.54-6.98

31 5.12у.с 4. Юм а4.71д h.^2 4.75д 4.06м а2.89дд J4oc, з=6 J4a, 4p=16 Р2.55ДД J4P,3=8 J4P.4 а=16 5.94-6.11 6.59-6.99 6.67c

♦Галлоил (Gal): 6.9Sc

Проантоцнапидин В-1 (соединение 30) - аморфный порошок (0.59 г; 0,12%) состава СзиНмОи; молекулярная масса (М) 578. [а]:зп+32.8° (с 0.41; ацетон). ИК-спектр: v,„ax 3330 (ОН), 1620 см-' (аром, циклы). Данные спектра ПМР - см. табл. 3.2.

(-)-Эп11гал.10кате.\ин-(4-Р-8)-(-)-зп!1катехш1 (28) - аморфный порошок (0.387 г; 0.79%) состава CwHü.Ob, М 594, [сх]:з» +48.6° (с 1.1. ацетон). И К-спектр: v„m 3400, 1625, 1545, 1510, 1435, 1320, 1200, 1038, 831, 770, 732 см-'. Данные спектра ПМР - см. табл. 3.2.

При тиолизе соединения 28 образуются (-)-эпикатехин и тиоэфнр (27). Расщепление последнего никелем Ренея приводит к получению (-)-эпигаллокатехина. При кислотном гидролизе из «верхней» части получили дельфиниднн (21), а из «нижней» - (-)-эпикатехин. Следовательно, данный проантоцианидин является смешанным: «1шжний» блок представляет собой (-)-эпикатехнн, а «верхний» - (-)-зпнгаллокатехин (рис. 3.2).

Изучение величин химических сдвигов (ХС) и констант спин-спинового взаимодействия (КССВ) сигналов в спектре ПМР соединения 28 (табл. 3.2) подтверждает данные о строении, полученные с помощью химических превращений. Двухпротонный еннглет при 6.78 м.д. относится к протонам кольца В эпигаллокатехина, а протоны кольца В зпнкатехина проявляются в виде мультиплетов в области 6.69-7.20 м.д.

Протоны кольца С эпигаллокатехина и эпикатехина дают сигналы, соответственно, при 5.11 (1Н, у.с, ctH-4) и 4.97 (1Н, у.с, Н-2'), 4.01 (1Н, м, Н-3'), 2.76-2.86 м.д. (2Н, м, Н-4'). Три протона циклов А и А' Н-6, Н-8 и Н-6' проявляются в области 5.93-6.11 м.д., следовательно проантоцианидин 28 име-

ет строение (-)-эпигаллокатехин-(4р-8)-(-)-эпикатехина.

Рис. 3.2. Схема химических превращений 10, 28, 29

(-)-3n!!raaicrcaTav.\'n-34?-iax::aT-(4p-S)-(-)-2í!!::cnTa',3!:! (29) - аморфный порошок (0.307 г; 0.63%) состава CvHxOis, М 762, [ot]22n +69.8° (с 1.1, этанол). ИК-спеетр: 3500, 1695, 1615,1450, 1320,1250,1040, 830, 805,775,740 гаг'. Данные спектра ПМР - см. табл. 3.2.

Физико-химические параметры и спектральные характеристики соединения 29 близки к таковым соединения 23. Однако в отличие от последнего в

спектре ПМР 29 кроме характеристик сигналов (-)-эпикатехина и (-)-эпигаллокатехина имеется характерный сигнал остатка галловой кислоты при 6.98.м.д. (2Н, с, Н-2, Н-6). Следовательно, один из блоков галлоилиро-ван. На галлоилирование указывает и парамагнитный сдвиг сигнала про-

Рис. 3.3. Схема химических превращений 30, 31 Результаты тиолитического расщепления с последующим восстановлени-

ем тиоэфира показывают, что именно «верхний», т.е. эпигагшокатехиновын блок галлоилирован (рис. 3.2). Таким образом, можно однозначно констатировать, что димерный проантоцианидин является (-)-эпигаллокэтехин-3-0-галлоил-(4р-8)-(-)-эпикатехином.

(-)-Эпн1сатех1иЦ4р-8)-(+)-галлокатех1ш (31) - аморфный порошок (0.213 г; 0.44%) состава СзоНгвОи, М 594, [a]22D +22.5° (с 0.62, этанол). ИК-спектр: v„ax 3400, 1620, 1545, 1510, 1435, 1320, 1200, 1040, 830, 774, 733 см-1. Данные спектра ПМР - см. табл. 3.2.

Соединение 31 при кислотном гидролизе образует цианидин (24) и (+)-галлокатехин. При тиолизе 31 получили (+)-галлокатехин и тиоэфир (23), восстановление деградации которого привело к получению (-)-эпикатехи-на. Эти результаты однозначно указывают, что проантоцианидин состоит из «верхнего» блока - эпикатехина и «нижнего» - галлокатехина (рис. 3.3).

Величины химических сдвигов сигналов и КССВ в спектре ПМР 31 следующие: протоны кольца С «верхнего» блока проявляются при 5.12 (1Н, у .с, Н-2), 4.10 (1Н, м, Н-3) и 4.71М.Д. (1Н, д, ^аз=2Гц, аН-4), a протоны кольца С «нижнего» блока резонируют при 4.75 (1Н, д, 12,з=8Гц, Н-2'), 4.06 (1Н, м, Н-3'), 2.89 (1Н, дд, 1»аз=6Гц, ^04р=1бГц, аН-4'), 2.55 м.д. (1Н дд, 14р,з=8Гц, 14р,4а=16Гц, рН-4). Три протона циклов А и А' Н-6 и Н-8 проявляются в области 5.94-6.11 м.д. Протоны кольца В эпикатехина проявляются в виде мультиплета в области 5.59-6.99 м.д., а протоны цикла В' галлокатехина резонируют в виде синглета при 6,67 м.д. (см. табл. 3.2).

На основании приведенных выше результатов можно констатировать, что проантоцианидин 31 имеет структуру, и стереохимию (-)-эпикатехин-(4Р-8)-(+)-ггшлокатехина.

4. Исследование надземной части василька иберийского - Centaurea ibérica Trcv.

В народной медицине настой и отвар листьев и травы применяют как мочегонное средство и для лечения малярии. При фармакологическом исследовании настои листьев и цветущих (плодоносящих) соцветий василька иберийского показали высокое мочегонное действие; увеличив диурез у крыс на 19.6 и-69.2% соответственно, а также выраженную противоязвенную активность.

4.1. Изучение флавоиоидов василька иберийского

Флавоноиды из надземной части василька иберийского извлекали смесью ацетона с водой (6:4). Экстракцию повторяли ещё 4 раза. Полученные извлечения объединяли, концентрировали в вакуум-испарителе;.

Для выделения флавоиоидов сгущенный экстракт обрабатывали исчерпывающе этилацетатом. При этом на границе соприкосновения воды с этилацетатом образовывалась эмульсия. Эмульсию соб"ирали отдельно, высушивали и хроматографировали. В этилацетатном растворе присутствовал весь набор флавоиоидов растения, поэтому флавоноиды, в основном, выделяли из этилацегатной эмульсии (схема выделения приведена на рис. 4.1).

Этилацетат отгоняли, остаток растворяли в ацетоне и разделяли на две части. К одной части добавляли воду в соотношении 1:5 и оставляли в холодильнике. Через неделю полученный осадок отфильтровывали и анализировали методом ТСХ. В осадке, выпавшем из воды, содержались шесть флавоиоидов. Ко второй части ацетонового раствора добавляли бензол.

| Сырье "}

60% ацетон

Э.а.змульсия Э.а. фракция Вод.фракция

Тепл.вода +ацетон

гидролиз 5% НС1д°

Мутный раст. Перег онка

тех

ВМ Ш-6 В1-8 Глю. Гал.

конц.

■Сухой остаток

конц.веществ.

тог

Вода+ацетон

Ацетон

ВМ

Раствор 1-ЬоД4 I '+б6шол

Гидро. Ус НС11 В!-4[Ь15|К-6[В!-'!| Ы41Ш) [В1-4|К5;

ХЛФ метод.

тех

Ш^ТБГГ!

Препарат.

Щ

Ацетон

1ди1

КХ Вода-ацетон

В>8

ВМ I

' Лед. сода

Рис. 4.1. Схема выделения и разделения флавоноидов из василька иберийского

Выпадал осадок, в котором содержались четыре флавоноида. Этилаце-татную эмульсию растворяли в теплой воде. Далее смесь концентрировали, разделяли методом колоночной хроматографии. При этом выделили в индивидуальном виде вещество флавоноидной природы, обозначенное ВН.

Вещество Ш-1 -кристаллы бледно-желтого цвета ст.пл. 220°С.

Результаты УФ-спектров, снятых с диагностическими реактивами, представлены ниже:

Xmaxt HM

СНзОН 340 275

+CH3COONa 335 275

+CH3COONa+H3BO3 340 275

+A1C1J 385 295

+AICI3+HCI 355 275

Для химического изучения провели гидролиз вещества Bi-1 5% HCl, но даже 12-часовое нагревание его не привело к образованию агликона. Тогда вещество Bi-1 гидролизовали в более жестких условиях, апробированных на глюкуронидах. Флавоноид нагревали 6 ч в смеси 18% хлористоводородной и 50% уксусной кислот. Углеводный компонент хроматографировали на бумаге с достоверными образцами глюкозы, галактозы и глюкуроновой кислоты. При этом углеводный компонент флавоноида по значению Rr совпал с глюкуроновой кислотой.

Агликон Bi-1 выделили экстракцией из реакционной смеси эфиром. Результаты его УФ-спектра, снятого с диагностическими добавками, следующие:

_Я.шак, HM_

СНзОН 335 285

+СНзСО(Жа 380 295

+СНзСО(Жа +Н3ВО3 335 280

+А1С1з 385 305

+А1С1з+НС1 340 285

Данные спектра показывают, что агликон имеет гидроксильные группы в положениях С-5, С-6, С-7, С-4'. Положение С-6 весьма трудно поддается идентификации, о нем можно судить только по понижению интенсивности максимумов поглощения в УФ-спектрах.

В продуктах щелочной деструкции обнаружили только я-оксибензойную кислоту. Продукт кольца А не обнаружили, что указывает на присутствие гадроксила в положении Се, так как при этом должен образоваться фенол, но его структура неустойчива и он быстро разрушается. Химические превращения флавоноида В1-1 приведены на рис. 4.2.

4.1.1. Метилирование флавспоида В1-1 Флавоноид Вь1 метилировали диметилсульфатом. Полученное метилированное производное подвергали щелочной деструкции. В качестве "свидетеля" использовали достоверный метиловый эфир флавоноида ску-теллярина. Бумажная хроматография продуктов деструкции показала их идентичность. Таким образом, агликон действительно имел гидроксильные —в положениях С-5, С-6, С-7, С-4' и был идентичен скутелляреину.

Сравнительной анализ УТ Г"."™ов, снятых с диагностическими реактивами, показывает, что агликон гликозидирован в положении С-7. Суммируя полученные результаты изучения химических и физических свойств, для флавоноида ВЫ установили структуру как 5, 6, 4'-гидрокси-7-0-0-глюкуро-опиранозилфлавон.

Рис. 4.2. Схема химических превращений флавоноида ВЫ

Скугелляреин-5, 6,4'-гидроксн-7-0-р-0-глюкуронидопиранозилфлавон

Осадок, полученный осаждением водой, обрабатывали хлороформом, концентрировали и затем анализировали методом ТСХ. Обнаружили три вещества флавоноидной природы. Одно из них, преобладающее количественно, выделили в чистом виде методом колоночной хроматографии и обозначили как Bi-8. Данные его УФ-спектра, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

A, max, HM

СНзОН 350 270

+CHjCOONa 365 272

+CH3COONa +НзВОз 350 270

+А1СЬ 380 . 280 пл

+А1С1з+На 360 280 пл

УФ-спектр показал наличие свободных гидроксильных групп в положениях С-5, С-7. Но такой флавоноид, известный в литературе как хризин, не растворяется в хлороформе № имеет более низкое значение Rr. Провели щелочную деструкцию Bi-8.

4.1.2. Щелочная деструкция флавопоида Bi-8 Образец помещали в колбу, добавляли едкий кали, воду к нагревали на песчаной бане. После охлаждения к реакционной смеси добавляли очищенную воду. Фенолы и фенолокнслоты извлекали из воды этилацетатом, хро-матографировали на бумаге. В результате из кольца В получили З-окси-4-метокси бензойную кислоту, из кольца А - фенол, строение которого не удалось установить. Если бы кольцо А содержало гидроксильные группы в положениях С-5, С-7, то из него образовался бы флороглюцин. Однако полученное нами вещество имело значение Rr намного выше. Тогда полученное вещество сравнили с продуктом щелочной деструкции метилированного скутелляреина. Результаты сравнения показали их идентичность, что указывает на присутствие мегоксильной группы в положении С-6. Схема химических превращений Bi-8 приведена на рис. 4.3.

Чтобы подтвердить наличие метоксильных групп во флавоноиде, сняли его ЯМР-спектр. Сигналы метоксильных групп — это отчетливые синглеты при 3.72, 3.96 и 5.2 м.д. с интенсивностью в 3 протона, что указывает на наличие метоксильных групп при С-6, С-4'; С-3, соответственно. Совокупность полученных данных дает основание предложить вероятную структуру флавопоида Bi-8 как 5,7,3'-гидрокси-3,6,4'-метоксифлавон (центауреидин).

Это соединение ранее было выделено из других видов василька и, возможно, является хемотаксоном рода Centaurea.

Далее исследовали осадок, являющийся смесью четырех флавоноидов. Его хроматографировали с достоверными "свидетелями" - кверцетином, кемпферо-

лом, хргоином, мирицегином. При этом два соединения из смеси по значению Rr совпадали с кверцетином и кемпферолом.

РН

ОСНз

НзСО ■ у Y 0СНз ОН О Центауреидиь

4.2. Изучение сесквитерпеповыхлаптопов василька иберийского Сескв1гтерпеновые лактоны обладают спазмолитическим, противовоспалительным, противоопухолевым, ранозаживляющим и другими свойствами.

Воздушно-сухое, измельченное сырье исчерпывающе экстрагировали хлороформом. Экстракт упаривали под вакуумом и остаток обрабатывали 60% водным спиртом, выпавший осадок удаляли и обработкой фильтрата хлороформом получили 52 г суммы веществ. Полученную сумму хромато-графировали на колонке с силикагелем. При этом выделили четыре индивидуальных вещества.

Вещество 1 состава С30Н50О с т.пл. 186-187°С (из спирта). Масс-спектр: m/z 426,411, 408, 356,314,272, 257, 218, 207, 203, 199. Пики ионов с m/z 218,207,203 свидетельствуют о принадлежности соединения к пентациклическлм тригерпенам ряда а-, ß-амиршгов. На основании химических и спектральных данных вьщелешюе соединение (вещество 1) вденшфицировали с а-амирлном.

Вещесгво'.2 состава СэНжО, с т.пл. 137-139°С (ацетон). Вещество 2 идентифицировали с ß-cirrocrepiiHOM (М+414) по физическим константам и данным масс-спектра. В выделенном образце обнаружили также незначительную примесь стигма-стерина (М+412) и кампесгерина (М+400).

Вещество 3 состава СлоШбО; (M+37S), [a]D20+158°C (с 2.3; спирт), с т.пл. 143°С (с разложением из этанола) по температуре плавления, данным: ИК-, масс-, ПМР-спектров и результатам сравнения хга с литературными данны-, мн идентифицировали с кницином. В ИК-спехтре (КВг) вещества 3 имеются полосы поглощения: Хтгх 3355, 3270 (ОН), 1755 см-1 (С=0) у-лактока в сопряжении с зкзометилеиовой группой), 1700, 1265 (-С=С-СОО-), 1660, !625 см-'(С=С). . •

Четвертый минорный лактон состава С15Н20О4 (вещество 4) М+264 с т.пл. 135°С (с разложением; из смеси хлороформ-ацетон) согласно химическим и спектральным данным идентифицировали с салонитенолидом. Соединения 1,2 и 4 из данного вида василька выделены впервые.

5. Исследование надземной части дурнишника обыкновишого - Xanihimn siruraarium L. Флавоноиды являются одним из основных биологически активных веществ изучаемых растений. Поэтому анализ надземной части дурнишника обыкновенного начали с исследования флавоноидов.

5.1. Выделение флавоноидов Измельченную воздушно-сухую надземную часть дурнишника обыкно-

венного обессмоливалн (экстрагировали) хлороформом и сумму флавонои-дов извлекали 70% водным ацетоном. Из водно-ацетонового экстракта отгоняли ацетон под вакуумом и остаток (водную часть) подвергали анализу методом БХ и ТСХ. При этом обнаружили шесть флавоноидов.

Количественное определение флавоноидов показало содержание их в надземной части дурнишника обыкновенного 2.1%.

Водный экстракт (после упаривания ацетоновой части) исчерпывающе обрабатывали последовательно этилацетатом (фракция 1), смесью этилацетата с изо-пропиловым спиртом (9:1) (фракция 2), водный остаток - фракция 3 (см. рис. 5.1).

Фракции 1 и 2 наносили сплошным слоем .на пластинки "БМоГ и хроматогра-фировали в системе БУВ (40:12:28). Пятна с 0.28 (гликозвд Гл-1), 0.38 (гликозид Гл-2) и Яг 0.64 (агликон) вырезали, затем этоировали этилацетатом и, упарив досуха, получили чистые вещества: Гл-1 - 30 мг, Гл-2 - 25 мг и агликон -10 мг (вещество 3).

Гл-1 - это желтое кристаллическое вещество, с т.пл. 245-250°С.

Данные УФ-спекгра, снятого с диагностическими реактивами, следующие:

_ ^-тэх, ИМ_

I 1 11

+С2Н50Н 350 250

+CH3COONa. 375 270

+СНзСОСЖа+НзВОз 370 275

+А1СЬ 380 260

+А1СЬ+НС1 .. 360 260

+NaOH 400 . 330, 275

Данные УФ-спектра Гл-Г с диагностическими добавками (батохромные сдвиги) и дифференциальные качественные реакции ясно показывают, что 5, 7, 3' и 4' углеродные атомы вещества Гл-1 имеют свободные гидроксилы, у углеродного атома 3 гидроксил глнкозилирован.

Поэтому провели кислотный гидролиз Гл-1 5% HCl. Сахарную часть Гл-1 идентифицировали как галактозу и арабинозу.

Агликон Гл-1 - кристаллическое вещество желтого цвета с т.пл. 305-308°С. Исходя из результатов анализов и сравнения с достоверным образцом, агликон Гл-1 идентифицировали как 3,5,7,3',4'-пентагидроксифлавон (кверцетин).

Спектральный анализ вещества Гл-1 с диагностическими реактивами пока зал, что молекулы обоих Сахаров присоединены последовательно к одному углеродному атому в положении С-3. Чтобы установить, какой сахар непосредственно присоединен к С-3, провели гидролиз Гл-1 2% уксусной кислотой и продукты гидрочиза анализировали через 10, 15, 20, 30, 60 мин методом БХ. Через 30 мин на хроматограмме проявилась арабиноза, через 60 мин - араби ноза, галактоза и агликон (сравнивали со «свидетелями»). Следовательно, к агликону непосредственно присоединена галактоза.

Полученные данные и результаты их сопоставления с литературными позволили идентифицировать вещество Гл-1 как 5,7,3',4'-тетраоксифлавон-3-О-р-О-галактозило-О-а-Ь-арабинозид.

Высушенная надземная часть

--— Экстракция'

-__ хлороформом

Рбессмоленное сырье 1 Экстракция 70% ацетоном

Рис. 5.1. Схема выделения и разделения флавоноидов дурнишника обыкновенного

Гл-2 - желтое кристаллическое вещество с тлл. 230-235°С. Гл-2 вьщелен ш згалаце-татной фракции суммы флаЕсновдов методом препаративной хроматографии на ТСХ.

На основании изучения физико-химических свойств, хроматографичесзсога анализа и результатов их сопоставления с литературными данными вещество Гл-2 идеитнфицировали как 5,7)3\4'-тетраскеифлаЕсн-ЗЮ-р-0-г?л1?лсгоз1;д (гапе-рози^).

Эфирные фракцга! суммы флавопопдов при хроматографическом анализе показали наличие одного вещества. Эфир отгоняли, сухой остаток растворяли в спирте и после перекристаллизации получали вещество Гл-3 -кристаллический порошок желтого цвета с т.пл. 305-308°С. ;

По результатам изучения физико-химических свойств, спектрального и хроматографического анализов и результатам сопоставления их с литературными данными Гл-3 идентифицировали как 3,5,7,3',4'-пентагидрокси-флавон (кверцетин).

При кислотном гидролизе гликозидов Гл-1 и Гл-2 в качестве их агликона выделили кверцетин.

5. Изучение микроскопического строения растений народной медицины

Микроскопическому анализу подвергли 23 растения, используемых в народной медицине, с целью выявления их диагностических признаков, необходимых при составлении на них НТД (ВФС и др.).

Впервые изучено микроскопическое строение надземной части нижеследующих растений: императа цилиндрическая, сорго алеппское, марь белая, шпинат туркестанский, кохия веничная, ломонос восточный, горицвет мелкоцветный, клоповник широколистный, донник белый, клевер ползучий, астрагал Северцова, астрагал Сиверса, янтак рыхлолистный, чина луговая, чина клубненосная, цельнолистник исколотый, унаби обыкновенный, кевдырь шероховатый, линделофия длинностолбиковая, паслен черный, горчак ползучий, дурнишник колючий, дурнишник обыкновенный. В результате исследований установлены диагностические признаки для изученных органов.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Для фармакологических исследовшшй с целью выявления диуретического и противоязвенного действия отобраны следующие дикорастущие растения Узбекистана, применяемые в народной медицине: грыжник голый, унаби обыкновенный, жггак рьшюлнепплй, василек ибернйскийи дурнишник обыкновенный.

2. Результаты фармакологических исследований показали, что изучаемые растения являются потенциальными диуретическими и проотивоязвенными средствами. В частности, экспериментально установлено увеличение диуреза при использовании травы грыжника голого на 73.1%, листьев унаби обыкновенного - на 48.6%, плодов унаби обыкновенного - на 35.4%, а также уменьшение средней площади изъязвления при использовании травы василька иберийского - на 62.4%, янтака рыхлолистного - на 36% и дурнишника обыкновенного - на.37.1%.

3. В результате химического исследования изучаемых растений на содержание основных групп биологически активных веществ в них установлено наличие сапонинов, полифенольного комплекса (флавоноидов, кумаринов, проантоцианидинов), полисахаридов (слизи и др.), эфирного масла и др. веществ, которые могли бы обусловливать их диуретическое и ранозажив-ляющее действие. ■ . . ' . "

4. Показано, что влияние исследованных растений на организм обусловлено комплексом содержащихся в них биологически активных веществ, в частности, диуретическое действие грыжника голого и листьев унаби обыкновенного - сапонинами, флавоноидами и слизями, раиозаживляющее действие травы василька иберийского, янтака рыхлолистного и дурнишника обыкновенного -флавоноидами, слизями, сесквитерпеновыми лактонами и дубильными веществами (катехнпамн и проантоцианндинами).

Выявлен синергизм в совместном диуретическом действии выделенных из изучаемых растений флавоноидов с сапонинами или слизью и сапонинов со слизью. С учетом этого сделано заключение о целесообразности получения из растительного сырья суммарных лекарственных препаратов.

5. В результате глубокого химического исследования изучаемых растений выделены и идентифицированы 33 индивидуальных вещества, в том числе из травы грыжника голого - флавоноиды: кверцегин, изорамнетин, гнперо-зид и изорамнетин-З-О-р-О-глюкозид; из листьев, плодов и коры унаби • обыкновенного - флавоноиды: кверцимеритрин, рутин, гиперозид; катехи-ны мономеры: (-)-эпиафзелихин, (-)-эпикатехин, (-)-эпигаллокатехин, (-)-эпикатехингаллат, (+)-катехин, (+)-катехингаллат, (+)-галлокатехин и (-)-эпигаллокатехин-З-О-галлат; проантоиианидины днмерные: (-)-,

эпиафзелехин-(4р-8)-(-)-эпикатехин, процианидин В-2, (-)-эпикатехин-(4р-8)-эпягаллокатехин ir (-)-эпиафзелехин-(4р-8)-эпигаллока-техин; олигоиер-ные: (-)-эпиафзелехин-(4р-8)-(-)-эпнгаллокатехнн-(4р-8)-(+)-катехин; (-)-эпиафзелехин-(4р-8)-(-)-эпикатехин-(4р-8)-(+)-катехин; зпиафзелехин-(4р-8)-[зпигаллокатехин-(4р-8)]з-хатехпн и эпиафзелехин-(4р-<8)-[эпигаллокатехин -3-0-галлат-(4р-8)]5-катехин; из травы янтака рыхлолистного - флавоноиды: кверцетин, изорамнегин, нзор^-'летин-З-О-р-О-глюхозид, кверцимеритрин и ругин; катехины мономегм: (-)-эпигаллокатехин-3-0-галлат; (-)-эпнгаллокатехин; (+)-катехин и (+)-галлокатехин; димерные птоантоциаготаины: проаитсцнглнднны В-1 и В-2; (-)-зпигаллокатехин-(4р-8)-(-)-эпикатехин; (-)-эга1галлокатех]ш-3-0-галло-1ш-(4р-8)-(+)-зга1катех1ш; (-)-эпикатехин-(4р-8)-(+)-галлокатех1ш; из травы василька иберийского - Флавоноиды: кверцетин, схутея-лярин, центаурецдш! и схутеяляршш; сесквитерпеновые ллктоны: ккиции и сало-нитенол1щ; а-амирин, ß-cirrocTcpim; из травы дурнишника обыкновенного -флавоноиды: кверцетин, пшерозид и квфцепш-З-О-Р-О-галактозило-О-а-Ь-арабшюзид.

6. Установлено строение б новых проантоциапидинов ((-)-эпиафзелехнн-(4р-8)-(-)-эяигаллокатехш1а, проантоцианидина PZ-1, проантоцианидика PZ-2, преантоцианндина PZ-3, проантоцианидина PZ-4, (-)-эпикатехин-(4р-8)-(+)-галлокатехина), выделенных из изучаемых'растений.

7. Исследовано микроскопическое строение отдельных органов 23 видов растений народной медицины, выявлены диагностические признаки, необходимые для идентификации лекарственного сырья.

3. Разработаны научнообоснованные показатели подлинности и доброкачественности, необходимые для стандартизации сырья.

9. На основании результатов исследования составлены проекты ВФС на сырье изученных растеши!, представленные для рассмотрения в Главное управление по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники МЗ РУз. • . ■ •

10. Решением Фармакологического комитета МЗ РУз трава грыжника голого и листья унабн обыкновенного разрешены к широкому применению в-медицинской практике.

11. Проведенные исследования показали большое значение изучения лекарственных растений народной и традиционной медицины для создания на их основе новых лекарственных препаратов.

Основное содержание диссертации пзло-секо в следующих работах:

1. Лаврухина Л.Ф., Ахмедов У.А. О некоторых признаках строения паслёна черного - представителя однолетней формы рода Solanum // Узб. биол. журн. -1984. -№1. -С. 36-39.

2. Махкамсва Х.Ф., Ахмедов У.А. Морфолого-анатомическое юучение дурнишника обыкновенного и колючего // Сб. науч. тр. "Фнтохнмическое и фармакологическое изучение лекарственных растений". -Ташкент, 1989. -С. 78-82.

3. Алиев Х.У., Ахмедов У.А., Халматов Х.Х. Влияние некоторых лекарственных растешш на регенерацию экспериментальных язв желудка // Киме ва фармация. -1993. -№5'. -С. 68-69.

4. Ахмедов У.А. Супурги изен усимлигининг анатомик туз1шиши // Кимё

ва фармация.-1993.-№6.-С. 16-18,

5. Ахмедов У.А., Халматов Х.Х. Микроскопическое строение отдельных органов сорго алеппского // Киме ва фармация. -1993. -№6. -С. 18-20.

6. Исамухамедова М.П., Ахмедов У.А., Халматов Х.Х. Фармакогности-ческое изучение грыжника голого, произрастающего в Узбекистане II Киме ва фармация.-1994. -№6. -С. 29-32.

7. Максудова Б.Т., Норманова Б., Ахмедов У.А. Химическое исследование дурнишника обыкновенного И Киме ва фармация. -1995. -№4/5. -С. 21.

8. Янтщ ер устки цисмидан таблетка яратиш / М.У. Усуббаев, О.Д. Тожие-ва, У.А. Ахмедов, Х.Х. Холматов // Кимё ва фармация. -1995. -№4/5. -Б. 34.

9. Противоязвенное действие василька иберийского / H.A. Шарипова, Х.У. Алиев, У.А. Ахмедов, Т.А. Атабеков // Кимё ва фармация. -1995. -№4/5. -С. 50.

Ш.Ахмедов У. А., Халматов Х.Х. Анатомическое строение отдельных органов императы цилиндрической // Кимё ва фармация. -1996. -№5. -С. 8-10.

11. Алиев Х.У., Ахмедов У.А. Противоязвенные свойства некоторых лекарственных растений Узбекистана II Кимё ва фармация. -1997. -№2. -С. 36-37.

12. Проантоцианидины Ziziphus jujuba / А.Малик, З.А.Кулиев, У.А. Ахмедов и др. // Химия природ, соедин. -1997. -№2. -С. 221-231.

13. Катехины и проантоцианидины Alhagi sparsifolia / А.Малик, 3.А.Кулиев, У .АЛхмедов и др. // Химия природ, соедин. -1997. -№2. -С. 232-237.

14. Махкамова Х.Ф., Ахмедов У.А. Анатомическое изучение чины клуб-неносной//Кимё ва фармация. -1997. -№5/6. -С. 17-18.

15. Халматов Х.Х., Ахмедов У.А., Юлчиева М.Т. Микроскопическое изучение донника белого (Melilotos albus Desr.) // Кимё ва фармация. -1998. -№3. С. 27-28.

16. Шамьянов И.Д., Ахмедов У.А., Саидходжаев А.И. Сесквитерпеновые лактоны и другие компоненты Centaurea ibérica И Химия природ, соедин. -1998.-№3.-С. 377-379.

Выражаю искреннюю благодарность заслуженному деятелю науки Республики Узбекистан, докт. фарм. наук, профессору Х.Х. Халматову за постоянную консультативную помощь при выполнении настоящей работы.

ХУЛОСА

АХМЕДОВ У. "УЗБЕКИСТОН ХААК ТАБОБАТИНИНГ БАЪЗИ УСИМАИКДАРИНИ ФАРМАКОГНОСТИК УРГАНИШ" Диссертацион иш хал^ табобатида фглланиладиган Узбеки стон ус им— ликларидан сийдик ^айдовчи (диуретик) ва яраларни даволовчи препа— ратлар олйб, уларни тиббиёт амалиётига жорий щлиш мацсадида туксиз саминчуп, оддий жилонжийда, сийрак барг янто^, Иберия бутакузи (куз тикон) ва оддий 1$уйтиконларни урганишга багишланган.

Туксиз саминчуп ер устки ^исмини ^айвонларда текширилгавда сийдик ажралишини 73.1% га, оддий жилонжийда барги ва мевасини текширил— ганда—48.6% ва 35.4% га ошгани э^амда Иберия бутакуз ер устки цисмини ишлатилгацда яра сат^ини 5фтача 62.4% га, сийрак барг янтовда—36% ва оддий куйтикотш ишлатилганда—37,1% га камайгани анш^ланди. Урганилган усимликларни организмга таъсири улар таркибида

булган биологик фаол мод&длар комплексига, жумладан, туксиз са — минчуп ер устки ^исми ^амда оддий жилонжийда баргини диуретик таъсири —сапонинлар, флавоноидлар ва шиллиц моддалар, Иберия бутакузи, сийрак барг янто!$ ва оддий ^уйтикон ер устки ^исмларини яраларни даволаш таъсири —флавоноидлар, шилли^ моддалар, сеск— витерпен лактонлар ва ошловтн моддалар (катехинлар ва проанто — цианидинлар) га боздиз эканлгги курсатилди. Шуларни ^нсобга олиб, усимлик ма^сулотларидан ш инди доривор препаратлар олиш ма^садга мувофи^ эканлиги ту.рисида хулоса ^илинди, айни ва^тда йиганди препаратларни яратиш мураккаб технологик жараён ва ап — паратларни талаб цилмайди ^амда и^тисодий фойдалидир.

Чу^ур кимёвий текшириш натшхасида урганилган усимлнклардан 33 та ало^ида модда ажратиб олицди ва идентификация ¡риинди, жумладан 6 та янги модда: (-)-эпиафзелехин-(4р-8)-(-)-эпигаллокатехин, Р2-1, Ш.-2, Р7-3 ва Р7-4 прошггоцианидннлар здемда (-)-эпикатехин-(4р-8)-(+)-галлокатехин.

Ишлатишга тавсия ^илинадиган усимликларни анатомик (микроскопик) тузилиши урганилди ва топилган диагностик (уз и га хос) белгиларидан, анш^ланган сон ^урсаткичлари билан бир ^аторда доривор ма^сулотларга норматив—техник хужжатлар (ВФМ ва б.) тузишда фойдалаиилди. УзР ССВ фармакологик ^умитасининг 11 апрель 1997 йил, 2 —сонли ^арорига биноан туксиз саминчуп ер устки Уупсмп ва 30 июнь 1998 йил, 2 —сонли ^арори буйича оддий жилонжийда барга медицина амалётига сийдик ^айдовчи восита сифатида кенг мщёсда ишлатишга рухсат этилди.

Хал1? табобатида ^уллаииладиган яна 20 тур доривор усимликларни анатомик тузилиши урганилди ва уларнинг ма^сулотларини идентификация цилишга зарур булган диагностик белгилари аню^ланди.

• SUMMARY

AKHMEDOV U. "PHARMACOGNOSTICAL STUDY ON SOME PLANTS -OF THE FOLK MEDICINE OF UZBEKISTAN" The dissertation is devoted to study on some plants of Uzbekistan which are used in' folk medicine: Herniaria glabra, Zizyphus jujuba, Alhagi sparsifolia, Centaurea iberica and Xanthium strumarium with the aim of introduction of their preparations into medical practice as diuretics and wound healing agents. Increase of diuresis has been established while using Herniaria glabra herb by 73.1%, Zizyphus jujuba leaves - by 48.6%, Zizyphus jujuba fruits - by 35.4%, and also decrease of ulceration average area while using Centaurea iberica herb - by 62.4%, Alhagi sparsifolia - by 36.0% and Xanthium strumarium - by 37.1%. It has been shown that the influence of the investigated plants on organism is stipulated by a complex of the biologically active substances to be present in these plants; in particular, diuretic effect of Herniaria glabra is provided by saponins, flavonoids and mucilages; of Zizyphus jujuba leaves - by saponins, flavonoids and mucilages; a wound healing effect of the herb of Centaurea iberica, Alhagi sparsifolia and Xanthium strumarium - by flavonoids, mucilages, ses-quiterpenic lactones and tannins (catechol and proanthocyanidins). Taking into consideration the above mentioned we have concluded that it was necessaiy to obtain the

summaiy medicinal preparations from lliis plant raw material, because the creation of complex preparations didn't require the complicated technological processes and apparatus and was economically profitable.

As a result of chemical study 33 individual substances were isolated and identified from the investigated plants. Among them there were 6 new ones: (-)-epiaphzelechin-(4p-8)-(-)-epigallocatecliir> proanthocyanidin PZ-l, proanthocyanidin PZ-2, proantho-cyanidin PZ-3, proanthocyanidin PZ-4, (-)-epicatechin-(4p-8)-(+)-gal!ocatechm.

Anatomic structure of llie recommended plants was studied and their diagnostical signs were established to be used for making up normative-technical documentation (PPP and others) for this plant raw materia!.

By decree of the Pharmacological Committee of the Health Ministry of Uzbekistan (April 11, 1997, protocol N 2 - Herb of Hemiaria glabra and June 30,1998, protocol N 2 - of leaves Zizyphus jujuba) these plants were permitted for use in medicine as diuretics.

In addition other 20 species of medicinal plants of the folk medicine were studied. The diagnostical signs were revealed for identification of their raw materials.