Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение и оценка фармакологической активности седативного сбора

На правах рукописи

Морохина Светлана Львовна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СЕДАТИВНОГО СБОРА

14.04.02 -фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 9 «ЮЛ 2012

Москва -2012

005046354

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор, профессор кафедры фармакогнозии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

Сорокина Алла Анатольевна

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор, заведующая кафедрой фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России Раменская Галина Владиславовна

Кандидат фармацевтических наук, доцент, заведующая кафедрой организации фармацевтической деятельности ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова

Иващенко Нина Васильевна

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия.

Защита состоится « » 2012г. в 14.00 часов на заседании

диссертационного совета Д.208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова по адресу: 119992, г. Москва,ул.Трубецкая, д. 8.стр 1, НИЦ

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздравсоцразвития России по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49.

Автореферат разослан 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.040.09 доктор фармацевтических наук, профессор И ' Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Широта терапевтического действия, хорошая переносимость и отсутствие серьезных побочных эффектов седативных лекарственных растительных средств позволяют использовать их в повседневной амбулаторной практике, особенно при лечении больных пожилого и старческого возраста. Показания к применению седативных растительных средств достаточно широки: вегетоневрозы, легкие неврозы с фобическими расстройствами, проблемы с засыпанием, повышенная возбудимость, неврастения. При этом в отличие от «классических» транквилизаторов растительные седативные препараты не представляют опасности, связанной с привыканием, психической и физической зависимостью. Однако, имеющийся литературный материал не позволяет в полном объеме судить о характере нейротропной активности ЛРС, обладающего седативным действием. Не изучены многие аспекты психотропной активности, не существует картины сравнительного анализа эффективности ЛРС, не изучен механизм действия.

Комбинированное применение лекарственного растительного сырья (ЛРС) в виде растительных сборов позволяет получить синергизм в действии и более широкий спектр фармакологического действия за счет влияния каждого компонента, что способствует повышению эффективности фитотерапии. Входящее в состав сборов ЛРС может корректировать лечебное действие друг друга. Сборы хорошо сочетаются с методами лечения официальной медицины, совместимы с другими лекарственными средствами и друг с другом, оказывают мягкое воздействие на организм, при этом достигающийся стойкий лечебный эффект обладает высокой эффективностью. Вместе с тем в Государственном реестре лекарственных средств, разрешенных к медицинскому применению в Российской Федерации, зарегистрировано всего 4 успокоительных сбора. Поэтому изучение седативной активности отдельных видов ЛРС и существующих успокоительных сборов в сравнительном аспекте, разработка на научной

3

основе новой прописи седативного сбора и его фармакогностическое изучение являются актуальными задачами отечественной фармации.

Все вышеизложенное определило цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключается в проведении комплекса фармакологических исследований по сравнительному изучению седативной активности ЛРС, разработке научно-обоснованной прописи седативного сбора и его фармакогностическом изучении. Задачи исследования:

• провести информационно-аналитические исследования по вопросам изучения седативной активности ЛРС, номенклатуре ЛРС и сборов седативного действия;

• изучить виды седативной активности отдельных видов ЛРС и сборов (в сравнении), разрешенных к медицинскому применению и разработать максимально эффективную новую композицию;

• провести макроскопическое и микроскопическое изучение нового сбора и его отдельных компонентов для изучения вариабельности диагностически значимых признаков при измельчении ЛРС;

• с использованием современных физико-химических методов анализа провести углубленное изучение биологически активных веществ (БАВ) предложенного сбора;

• на основании полученных данных разработать характеристики подлинности и показатели качества сбора;

• изучить настой предлагаемого сбора и возможность получения из него других лекарственных форм.

Научная новизна результатов исследований заключается в углубленном сравнительном фармакологическом изучении седативной активности отдельных видов ЛРС и успокоительных сборов, разрешенных к медицинскому применению. На основании полученных данных разработана

научно-обоснованная пропись сбора, обладающего седативной активностью. По результатам фармакогностического изучения сбора предложена система его стандартизации: разработаны характеристики подлинности, показатели качества сбора, методики определения действующих веществ. В целях идентификации компонентов сбора изучены морфолого-анатомические диагностические признаки сбора. С использованием современных физико-химических методов изучен качественный состав БАВ сбора и полученных из него настоя, стандартизованного экстракта и сложной настойки. Определено содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой, содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин, дубильных веществ, суммы свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту, эфирного масла. Показана возможность получения из предлагаемого седативного сбора жидкого стандартизованного экстракта и сложной настойки.

Практическая значимость полученных результатов состоит в разработке научно-методических подходов к созданию прописи седативного сбора на основании данных сравнительного анализа седативной активности отдельных видов сырья. Разработана пропись нового седативного сбора. Результаты исследований по стандартизации сбора и настоя могут быть использованы при разработке проектов нормативной документации на сбор и инструкции по применению сбора.

Результаты, полученные по сравнительному изучению седативной активности ЛРС и созданию нового седативного сбора, материалы исследований по стандартизации сбора и настоя используются в учебном процессе кафедры фармакогнозии Первого МГМУ в дисциплинах по выбору.

Апробация диссертации.

Основные положения диссертации доложены на

1. научно-практическом семинаре НИИ фармации Первого МГМУ им. И.М.Сеченова «Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья», Москва, 2009,

2. Гаммермановских чтениях ,Санкт-Петербург , 2010,

3. Научно-практической конференции «Стандартизация готовых лекарственных средств», Москва, 25.05.2010 г.

4. Научно-практической конференции «Стандартизация готовых лекарственных средств», Москва, 27.05.2011 г.

5. XXII Московской международной гомеопатической конференции "Развитие гомеопатического метода в современной медицине", Москва, 2012.г.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 печатных работы, в том числе три статьи в издании, рекомендуемом ВАК РФ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом кафедры фармакогнозии Первого МГМУ им. И. М. Сеченова по теме: «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образований на основе достижений медико-биологических исследований» (код темы 24.10.07 проблема № 1056 АМН РФ, номер Госрегистрации 01.2.006 06352).

Личный вклад автора.

Автором проведен анализ отечественной и зарубежной нормативной и справочной документации и других источников информации. Вся экспериментальная работа выполнена автором самостоятельно. Автором проведено сравнительное изучение седативной активности отдельных видов ЛРС и успокоительных сборов по методикам доклинических исследований «Руководства по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ». Изучение вариабельности диагностических признаков с использованием микроскопического метода измельченного ЛРС

6

проводилось в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи СССР XI издания (вып. 1). Автором изучены спектральные и хроматографические характеристики и качественные реакции исследуемой группы ЛРС, разработаны характеристики подлинности ЛРС с использованием современных физико-химических методов анализа, оптимизированы методики определения содержания биологически активных веществ в успокоительном сборе с использованием современных физико-химических методов анализа.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Научные положения диссертации соответствуют заявленной специальности 14.04.02 «фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 6 и 7 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия. Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты сравнительного изучения седативной активности отдельных видов ЛРС и успокоительных сборов;

- материалы фармакогностического изучения сбора (характеристики подлинности сбора - макроскопические, микроскопические, разработка качественных реакций, определение числовых показателей)

- данные по изучению состава и определению содержания БАВ (экстрактивных веществ, флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот) в сборе, настое, стандартизованном экстракте и сложной настойке;)

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 114 страницах, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей 7 глав, выводов, списка литературы, состоящего из 66 источника, из них 16 - на иностранных языках. Диссертация содержит 27 таблиц, 7 рисунка, в том числе 5 фотографий.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе на основании литературных данных обобщены сведения по изучению эффектов и механизма седативного действия ЛРС, проанализирована современная номенклатура ЛРС и сборов седативного действия, определена роль растительных лекарственных средств в лечении заболеваний центральной нервной системы. В экспериментальную часть диссертационной работы включена глава «Объекты и методы исследований» (вторая глава) и 5 глав (3-7 главы) с описанием экспериментальной работы и обсуждением результатов. Глава третья содержит результаты изучения седативной активности отдельных видов ЛРС и успокоительных сборов 2 и 3, а также данные по установлению механизма действия корневищ с корнями валерианы. Четвертая глава посвящена разработке характеристик подлинности седативного сбора, компоненты которого были подобраны на основании результатов сравнительного изучения седативной активности ЛРС, с использованием макроскопического и микроскопического методов анализа. В пятой главе излагаются результаты комплексного изучения химического состава и содержания гидрофильной фракции БАВ успокоительного сбора и его отдельных компонентов: флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот. В шестой главе приведены материалы по установлению числовых показателей, характеризующих качество предложенного успокоительного сбора. В седьмой главе обобщены результаты изучения водных и водно-спиртовых извлечений успокоительного сбора.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Изучение седативного действия лекарственного растительного сырья и успокоительных сборов.

Изучение седативной активности лекарственного растительного сырья и сборов проводили на базе кафедры фармакологии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М.Сеченова при

8

консультативной помощи доктора медицинских наук, профессора Р.Н.Аляутдина.

В ходе экспериментов изучали седативную активность успокоительных сборов №2 и №3, а также отдельных компонентов: корневищ с корнями валерианы, травы пустырника, травы душицы, травы чабреца, шишек хмеля, корневищ и корней пиона, травы донника, а также не входящей в указанные сборы травы мелиссы. Для скрининга использовали поведенческие методы оценки специфической активности исследуемых веществ: тест «Открытое поле» (седативное или анксиолитическое действие) и тест «Отчаяния» (антидепрессивное действие). Психотропное действие оценивали на белых нелинейных мышах массой 18-20г, содержащихся в стандартных условиях. Из лекарственного растительного сырья и сборов, изготавливали настои в концентрации 1:20 по фармакопейной методике, которые вводились животным интрагастрально в дозе 10мк/кг с помощью атравматического желудочного зонда 1 раз в сутки в течение 7 дней. Контрольная группа животных получала через зонд такое же количество дистиллированной воды. Каждая серия экспериментов длилась 6 суток. Опыты ставили ежедневно в одно и то же время с 12.00 до 16.00.

При изучении седативного действия оценивали «норковый рефлекс» мышей и поведение «патрулирования», когда животные проявляли поисковую активность. При этом регистрировали горизонтальную и вертикальную двигательные активности, обнюхивание отверстий, а также прочие реакции (груминг, дефекацию). Уменьшение двигательной и исследовательской активности расценивалось как седативное действие препарата. Наибольшее снижение двигательной активности при повторном введении (с 80% до 37%) обнаруживалось в первой группе животных, принимавших настой корневищ с корнями валерианы (рис.1) В последующие дни действие препарата нарастало. В группе животных, получавших настой пустырника, снижение двигательной активности было менее значительным и не столь отчетливо зависело от кратности приема настоя, тенденция к

9

нарастанию эффекта в зависимости от продолжительности применения не наблюдалась. Аналогичные результаты были получены для остальных препаратов (настои травы душицы, чабреца, зверобоя, мелиссы, донника, шишек хмеля, корневищ и корней пиона).

Результаты приведенной серии экспериментов свидетельствуют о том, что наиболее выраженное седативное действие по тесту снижения двигательной активности оказывает настой корневища с корнями валерианы. Остальные препараты уступают по активности препаратам валерианы.

Успокоительные сборы 1 и 2 достоверно уменьшали двигательную активность животных в «открытом поле», эффект нарастал со временем (рис. 2), причем под воздействием успокоительного сбора № 3 действие проявлялось более плавно. Седативное действие сборов превосходило действие каждого из отдельно взятых компонентов сбора.

При изучении влияния ЛРС и сборов на исследовательскую активность животных установлено, что наиболее выраженное седативное действие характерно для настоев травы мелиссы, корневищ с корнями валерианы и пиона. Седативное действие указанных видов ЛРС нарастает при повторном применении. Введение животным настоев успокоительных сборов № 2 и № 3 также в итоге приводило к снижению исследовательской активности, однако картина проявления этого действия была иной.

В результате проведенных исследований показано, что наиболее значительное седативное действие отмечается при применении настоя корневища с корнями валерианы (как в тесте снижения двигательной активности, так и в тесте снижения исследовательской активности) и настоя травы мелиссы (в тесте снижения исследовательской активности). Эти два вида ЛРС представляют интерес для комбинирования в сборах с успокоительной активностью.

Результаты изучения антидепрессивной активности ЛРС и сборов показали, что настои зверобоя и валерианы обладали антидепрессивным эффектом. Действие настоя зверобоя было сопоставимо с действием

10

амитриптилина, настой валерианы несколько уступал амитриптилину (табл.1). Механизм седативного действия изучали на настоях корневищ с корнями валерианы и травы зверобоя, обладающих наиболее выраженной седативной и антидепрессивной активностью, и настоях успокоительных сборов №2 и №3.

Таблица 1. Антидепрессивное действие настоев валерианы и зверобоя (п=6,р=0,95)

Лекарственные средства, получаемые животными

Дистиллированная вода (контроль) Амитриптилин Настой

зверобоя валерианы

Число активных попыток выбраться из воды 6,20 ± 1,68 10,40 ± 1,32 10,20±0,73 8,20± 1,14

В ходе эксперимента было показано, что антагонист бензодназепиновых рецепторов флумазенил, введенный в дозе 0.05 мг/кг внутрибрюшинно на фоне максимального эффекта настоев, восстанавливал параметры исследовательской и двигательной активности животных до исходных показателей в тесте «открытое поле».

Полученные данные свидетельствуют о том, что седативное действие лекарственных растительных препаратов, в состав которых входят корневища с корнями валерианы, частично опосредуются через бензодиазепиновые рецепторы.

Изучение характеристик подлинности седативного сбора «Мевал».

На основании экспериментальных данных по изучению седативной активности ЛРС была предложена пропись успокоительного сбора следующего состава:

корневища с корнями валерианы трава мелиссы

трава пустырника (все в равных количествах)

Для дальнейшей работы сбору было присвоено условное название «Мевал».

Для разработки характеристик подлинности сбора были проведены исследования по изучению диагностических признаков.

£

О

I

Ш день 2 ; ОденъЗ |

Настои ЛРС: 1 - валериана, 2 - пустырник, 3 - душица, 4 - чабрец, 5 -зверобой, 6 -хмель, 7 - пион, 8 - мелисса, 9 - донник.

Рис. 1. Влияние настоев ЛРС на двигательную активность животных (по сравнению с контрольной группой).

12

дни экспериментов

Рис. 2. Влияние настоев успокоительных сборов на двигательную активность животных (по сравнению с контрольной группой).

□ УС N82 ; ¡■УСИдз ;

При изучении внешнего вида сбора под лупой (10х) видны: -кусочки корней и корневищ различной формы, светло-коричневого, коричневого и темно-коричневого цвета с зернистой структурой (корневища с корнями валерианы);

-кусочки стеблей серовато-зеленого цвета, листьев от серовато-зеленого до зеленого цвета, цветков, бутонов различной формы (трава мелиссы); -кусочки зеленых стеблей четырехгранной формы; листья светло-зеленые, опушенные; кусочки чашечки и двугубого венчика, грязно-розового цвета. Фрагменты стеблей, листьев, чашечки густо покрыты тонкими волосками, хорошо видны блестящие, прозрачные, золотисто-желтого цвета эфирномасличные железки (трава пустырника).

На основании полученных данных внешние признаки сбора «Мевал» были охарактеризованы следующим образом: смесь неоднородных частиц растительного сырья серовато-зеленого цвета со светло-желтыми и серовато-коричневыми вкраплениями, проходящих сквозь сито с отверстиями

диаметром 7 мм. Запах сильный, ароматный. Вкус водного извлечения слегка горьковатый.

При изучении микропрепаратов из крупных частиц измельченного сбора под микроскопом видны:

-обрывки эпидермиса с устьицами диацитного типа, эфирно-масличные железки, мелкие простые одноклеточные волоски сосочковидные и конусовидные {трава мелиссы) - рис 3.

- обрывки спиральных, сетчатых или лестничных сосудов, обрывки эндодермы с утолщенными радиальными стенками, клетки паренхимы с каплями эфирного масла (гиподерма), обрывки паренхимы с мелкими крахмальными зернами (овальными или круглыми), отдельные крахмальные зерна (корневища с корнями валерианы)- рис 4.

- обрывки эпидермиса с устьицами аномоцитного типа, железки на короткой ножке, многочисленные простые волоски грубобородавчатые, расширенные в местах соединения клеток; мелкие головчатые волоски на одно -двухклеточной короткой ножке с округлой головкой (трава пустырника)-рис 5.

Рис 3. Трава мелиссы (препарат с поверхности) 1- Устьица диацитного типа.

14

2-Эфирно-масличные железки. З-Простой многоклеточный волосок, (ув. х125)

шыл

Рис 4. Корневища с корнями валерианы («давленный» препарат) Обрывки сетчатых сосудов (ув. х 250)

Рис. 5. Трава пустырника (препарат с поверхности) 1-Устьица диацитного типа. 2-Эфиромасличная железка З-Простой многоклеточный волосок (ув. х125)

Подлинность сбора характеризуется также по составу БАВ, входящих в отдельные компоненты сбора. Анализ НД на отдельные виды сырья, входящие в сбор «Мевал», показал отсутствие в ней раздела «Качественные реакции». По литературным данным известно, что компоненты сбора -

корневища с корнями валерианы, трава пустырника, трава мелиссы -содержат следующие группы биологически активных веществ (БАВ): эфирные масла, флавоноиды, дубильные вещества, сапонины, органические кислоты и др. Анализ сбора с использованием качественных реакций, проведенный с 10% водным и 5% спиртовым извлечениями по общепринятым методикам, дал положительный результат на дубильные вещества и флавоноиды. Учитывая неспецифичность этих реакций, были проведены исследования по хроматографическому определению флавоноидов сбора с использованием ТСХ.

Для проведения хроматографического анализа готовили спиртовые извлечения из сбора и его компонентов в соотношении 1:10 и растворы достоверных образцов лютеолина, рутина и кверцетина. Исследования проводили на пластинках «Silufol» (Чехия) в подвижной фазе бензол : этанол ¡уксусная кислота (45:8:3) с использованием в качестве детектора УФ-света и 1% спиртового раствора алюминия хлорида. На хроматограмме обнаруживается 6 зон адсорбции, из которых идентифицированы лютеолин и крарцетин.

Качественный состав эфирного масла, полученного из седативного сбора, определяли с помощью газожидкостного хроматографа Carlo Erba Instruments (Италия), с пламенно-ионизационным детектором.

На хроматограмме обнаруживалось 35 пиков; 8 из которых идентифицировано как а-пинен, цинеол, лимонен, линалоол, камфора, борниол, борнилацетат, тимол. Доминирующим компонентом эфирного масла является борнилацетат и тимол.(рис.б).

-1 - Ч " " 24 26 48 30 ¿1 Ц 3$ '<У« ^ «

Рис.6. Газожидкостная хроматограмма эфирного масла, полученного из седативного сбора.

Определение содержания биологически активных веществ в сборе «Мевал»

Основной лекарственной формой сборов является настой, в связи с чем в сборе «Мевал» определяли содержание гидрофильных БАВ (флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот), а также, поскольку все компоненты сбора содержат эфирное, определяли содержание последнего в сборе. Среди гидрофильных БАВ сбора приоритет принадлежит флавоноидам, т.к. два компонента сбора (трава мелиссы и трава пустырника) богаты этими соединениями.

Предварительно были получены УФ-спектры комплексов флавоноидов отдельных видов ЛРС (пустырника, валерианы и мелиссы) и сбора с алюминия хлоридом. Максимумы поглощения были обнаружены при следующих длинах волн: 377 нм - трава пустырника, 371 нм - трава мелиссы, 370 нм - корневища с корнями валерианы. Параллельно был получен спектр ГСО лютеолина с алюминия хлоридом, у которого максимум поглощения наблюдался при длине волны 372 нм. На основании анализа УФ-спектров длина волны 372 нм была принята за рабочую (рис.7).

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в отдельных компонентах (трава мелиссы, корневища с корнями валерианы и трава

пустырника) и сборе «Мевал» определяли спектрофотометрически (табл.2,3).

17

Для количественной оценки содержания дубильных веществ, суммы свободных органических кислот и эфирного масла в сборе и его отдельных компонентах были использованы известные фармакопейные методики. Результаты приведены в табл. 4.

Определение числовых показателей сбора «Мевал»

В экспериментальном образце сбора, в соответствии с фармакопейными требованиями и с использованием методик ГФ XI, помимо действующих веществ были определены влажность, содержание золы общей, золы нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, органической и минеральной примесей.

Так как сбор «Мевал» предполагается использовать для изготовления настоя, был определен такой показатель как «Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой». Результаты представлены в табл. 4,5. Получение и анализ жидких лекарственных форм седативного сбора.

Сбор «Мевал» предполагается использовать в форме настоя (соотношение сырья и экстрагента 1:20), который получали по фармакопейной методике.

Настой сбора представлял собой мутную жидкость темно-коричневого цвета, с сильным запахом, ароматным, слегка горьковатым вкусом. Давал положительные результаты при проведении качественных реакций на флавоноиды и дубильные вещества. Водное извлечение было проанализировано на содержание основных групп БАВ. Установлено, что настой содержит сумму флавоноидов - 0,178 ± 0,006%, дубильные вещества-0,88 ±0,08%, сумму свободных органических кислот - 0,24 ±0,04%. Сухой остаток настоя сбора составлял 1,39± 0,03%.

Рис.7. УФ-спектр комплекса флавоноидов сбора с алюминия хлоридом

(разведение 1:63)

Таблица 2. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин в седативном сборе «Мевал» и отдельных компонентах сбора (п=9, р=0,95)

объект исследования

корневища с корнями валерианы трава пустырника трава мелиссы сбор «Мевал»

Содержание суммы флавоноидов, % 0,199±0,004 1,149±0,003 2,086±0,006 1,248±0,005

Таблица 3. Метрологические характеристики результатов определения

флавоноидов в успокоительном сборе

Ї X Б2 Б 5Х Р ИРО Ах Е

8 1,248 0,000038 0,0062 0,0022 0,95 2,26 0,005 0,004

Таблица 4. Содержание биологически активных веществ в успокоительном сборе «Мевал» (п=6, р=0,95)

БАВ Содержание, %

корневища с корнями валерианы трава пустырника трава мелиссы сбор «Мевал»

дубильные вещества 7,48 ±0,36 1,85±0,42 6,22±0,74 5,34±0,14

свободные органические кислоты 2,49 ±0,39 1,75 ±0,05 1,46 ±0,30 1,37 ±0,06

эфирное масло 0,27±0,04 0,09±0,05 0,18±0,11 0,13±0,03

экстрактивные вещества, извлекаемые водой 29,07±0,10 28,56±0,18 23,77±0,25 25,85±0,27

Таблица 5. Числовые показатели экспериментального образца

успокоительного сбора «Мевал» (п=6, р=0,95)

Числовые показатели

влажность зола общая зола, нерастворимая в 10% НС1 примеси

органическая минеральная

содержание, % 6,00±0,23 9,40±0,25 5,24±0,21 1,55±0,25 0,72±0,21

Помимо ЛРС для изготовления настоев можно использовать стандартизованные экстракты - концентраты для быстрого изготовления настоев и отваров. В лабораторных условиях методом ускоренной дробной мацерации по типу противотока с использованием 25% спирта этилового был получен жидкий стандартизованный экстракт (1:2) сбора «Мевал». Он представлял собой прозрачную жидкость бурого цвета с сильным запахом, ароматным, горьковатым вкусом и отвечал всем фармакопейным требованиям, предъявляемым к экстрактам. В полученном экстракте было проведено определение содержания БАВ (табл.6).

Также из сбора в лабораторных услових была получена и

проанализирована сложная настойка (1:5) на 70% спирте этиловом.

Проведенный анализ показал, что она отвечает требованиями статьи

«Настойки» ГФ XI. В ходе эксперимента было показано, что получение

20

сложной настойки методом дробной мацерации непосредственно из сбора «Мевал» предпочтительнее чем смешивание настоек из отдельных компонентов сбора. В полученной сложной настойке было установлено содержание БАВ (табл.6).

Проведенные исследования по изучению жидких лекарственных форм, полученных из сбора «Мевал», показали, что он может быть использован для изготовления водно-спиртовых лекарственных форм, которые по качественному составу БАВ не отличаются от настоя сбора.

Таблица 6. Содержание биологически активных веществ в стандартизованном экстракте и сложной настойке успокоительного сбора «Мевал» (п=6, р=0,95)

№ БАВ Содержание, %

стандартизованный экстракт сложная настойка

1 Сухой остаток 7,0 ± 0,8 3,9 ±0,6

2 Дубильные вещества 1,46 ±0,04 0,64 ± 0,03

3 Сумма свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту 0,72 ± 0,03 0,18 ±0,02

4 Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин 0,60 ±0,01 0,15±0,01

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное изучение седативной активности 9 видов лекарственного растительного сырья и успокоительных сборов № 2 и 3. Установлено, что наиболее выраженное седативное действие оказывает настой корневища с корнями валерианы, которое нарастает при повторном применении, стабилизируясь с третьих суток. Остальные препараты уступают по активности препаратам валерианы.

2. Экспериментально показано, что седативное действие сборов превосходит действие каждого из отдельно взятых компонентов сбора и имеет тенденцию к нарастанию при повторном применении. Успокоительные

сборы достоверно уменьшают двигательную и исследовательскую активность животных, отличаясь между собой по характеру проявления этой активности.

3. В экспериментах на животных показано, что настои корневищ с корнями валерианы и травы зверобоя обладают антидепрессивным эффектом. Действие настоя зверобоя сопоставимо с действием амитриптилина, настой валерианы несколько уступает амитриптилину

4. Седативное действие лекарственных растительных препаратов, в состав которых входят корневища с корнями валерианы, частично опосредуется через бензодиазепиновые рецепторы.

5. На основании проведенных исследований предложена научно-обоснованная пропись успокоительно сбора, получившего условное название «Мевал». В состав сбора входят в равных количествах корневища с корнями валерианы, трава пустырника и трава мелиссы.

6. Проведено фармакогностическое изучение успокоительного сбора «Мевал» и выявлены диагностические признаки внешнего вида и анатомического строения сбора.

7. При микроскопическом изучении сбора установлено, что диагностическое значение при идентификации компонентов сбора имеют признаки анатомического строения отдельных компонентов, не изменяющиеся при измельчении сырья и в ходе получения сбора: обрывки спиральных, сетчатых или лестничных сосудов; клетки паренхимы с каплями эфирного масла (гиподерма) и крахмальными зернами; обрывки эпидермиса с устьицами диацитного и аномоцитного типов; эфирно-масличные железки; простые волоски - одноклеточные сосочковидные и конусовидные; многоклеточные, грубобородавчатые, расширенные в местах соединения клеток; головчатые волоски на одно -двухклеточной короткой ножке с округлой головкой.

8. С использованием хроматографических методов и химических реакций изучен качественный состав биологически активных веществ сбора

22

«Мевал». Установлено наличие флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот, эфирного масла.

9. Проведено определение содержания биологически активных веществ в сборе: суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин - 1,248±0,005%; дубильных веществ - 5,34±0,14 %; свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту - 1,37±0,06%; эфирного масла -0,13±0,03 %, экстрактивных веществ, извлекаемых водой — 25,85 ± 0,27%.

10. На основании проведенного фармакогностического изучения сбора разработаны необходимые для его стандартизации числовые показатели: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты, органическая примесь, минеральная примесей.

11 .Проведено изучение настоя сбора «Мевал», полученного фармакопейным способом. Дана его характеристика и установлены числовые показатели, характеризующие качество полученного настоя - сухой остаток (1,39±0,03%), содержание дубильных веществ (0,88±0,08%), суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин (0,178 ± 0,006%), суммы органических кислот в пересчете на яблочную кислоту (0,24 + 0,04%).

12.Показана возможность получения из успокоительного сбора «Мевал» стандартизованного экстракта и сложной настойки, отвечающих требованиям ГФ XI. Даны характеристики полученных лекарственных форм и установлены числовые показатели, характеризующие их качество.

Основное содержание диссертационной работы отражено в публикациях:

1. Морохина C.JI., Сорокина A.A., Халцонен А.Ю. Изучение настоя успокоительного сбора «Мевал» // Гаммермановские чтения 2011 (сборник научных трудов). Санкт-Петербугр - С. 49 - 51.

2. Морохина С.Л., Аляутдин Р.Н., Сорокина A.A. Изучение седативного эффекта успокоительных сборов // Фармация. - 2010. - № 6. - С. 39—41.

3. Морохина С.Л., Марахова А.И., Сорокина A.A. Флавоноиды седативного сбора // Фармация. -2011. - № 3,- С. 25-27.

4. Морохина С.Л., Петров В.Е., Аляутдин Р.Н., Сорокина A.A. Седативные растительные средства: сравнительный анализ действия // Фармация. - 2011,- № 8. - С. 36-39.

5. Морохина С.Л., Скалозубова Т.А., Марахова А.И., Сорокина A.A., Проблемы спектрофотометрического анализа фловоноидов в водных извлечениях. // Гомеопатический ежегодник. Москва. -2012. - С.229-231.

6. Морохина С.Л., Бобкова Н.В., Ермакова В.А., Сорокина A.A. Морфолого-анатомическое изучение нового успокоительного сбора // Фармация. - 2012. - № 3,- С. 21-24.

Автор выражает глубокую признательность доктору медицинских наук, профессору Ренаду Николаевичу Аляутдину за оказанную помощь при проведении фармакологических исследований.