Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка и стандартизация седативных растительных сборов

«л*

'. V г I«

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ имени И.М.СЕЧЕНОВА

На правах рукописи

УДК 615.32:615.453.87:615.07

ЛОБАНЧИКОВА Наталия Викторовна

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СШТИБШ РАСТИТЕЛЬНЫХ СБОРОВ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1991

Работа выполнена з Московской медицинской акад мш имени И.М.Сеченова.

Научный руководитель - кандидат фармацевтических наук,

доцент И.А.Самылина

официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор Д.Д.Муравьева - доктор фармацевтических наук, профессор Б.Е.Чичиро

Ьедузгя организаия - Ташкентский государственник

фармацевтический институт.

Защита состоится '' 1992г. в /д ^

часов на гаседани.. специализированного соиета Д.074.05.06 при Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова по адресу: Мэсквй, Е.Пироговская ул., 2/6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке фармацевтического факультета им.И.М.геченова

Автореферат разослан "_"__1992г.

Ученый секретарь специализированного совета

хсндндат Фармацевтических наук,

юцент Н.П.Садчикова

.....' ^

'!->!<,£, . . ¡1

';' ! ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Т'\<Л I

[^¿Актуальность темы. В связи с тем, что в последнее время проис-одит относительное увеличение удельного веса заболеваний,в возкик-овении и течении которых существенную роль играет фактор нерзно-сихического перенапряжения /стресс,конфликтные ситуации,огромный оток информации/, их предупреждение и лечение является одной из ктуальных проблем, стоящих перед современной медициной.

Арсенал лекарственных средств, используемых при лечении зврозов и непосредственно связанных с ними невротических асстройств внутренних органов, постоянно пополняется,увеличивается пело транквилизаторов, расширяется использование растительннх репаратов в качестве . седативных средств .

Расширение арсенала седативных средств растительного эоисхоздения является * весьма вакннм, поскольку растительные эепаратн легче усваиваются организмом, как правило, не обладают анцерогенным,мутагенным и эмбриотоксическин действием. Кроме того, дарственные растения и,особенно,их оптимальные сочетания - сбора, сазывают на больной организм комплексное воздействие, обеспечивая ¡рмоничное взаимодействие биологически активных: соединений разных эуш.

Таким образом, актуальность' фармакогносгического и ¡рмакологического изучения растительных сбот.- седативного |йствия обусловлена кап спецификой действия 1<ш;.гокомпонеЕТКых ютительных смесей по сравнению с отдельными видами лекарственного ютктельвого сырья, так и имевшимся дефицитом лекарственных 1эдств седативного действия.

В свою очередь, необходимость изучения лекарственного стательного сырья и препаратов растительного происхождения с временных позиций становится логическим развитием традиционных

работ, К-Лючавди. фарыакэгностичесга ■ и фармакологические исследования.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлись разработка и внедрение в практику здравоохранения новых седатквных сЗоров для расширения арсенала отечественных седативных средств растительного происхождения.

Для достижения поставленной цели нам необходимо было решить следзкщпе задачи:

I. Теоретически обосновать подбор компонентов нового содативного сбора.

о. Экспериментально, путем фармакологического скрининга, подобрать оптимальную композицию седативного сбора.

3. Изучить специфическую фармакологическую активность и токсичность седативного сбора в соответствии с требованиями Фармакологического комитета МЗ СССР.

4 С использованием современных физико-химических методов анализе изучить химический состав растительного сбора, его лекарственной формы и разработать характеристики подлинности и числовые показатели, характеризующие качество сбора.

5. Обобщить полученные данные и на их основании разработать нормативно-техническую документацию /временную фармакопейную статью, БФС-/ ка седа^таний сбор. Передать в установленном порядке документы в Фармакологический комитет ЫЗ СССР с целью получить разрешенгэ на клинические исш-тания к медицинское применение седативного сбора.

Научная новизна результатов исследования. Яа основании проведенного фармакологического скрининга разработана пропись с3дативного сбора из 5-ти видов лекарственного растительного сырья.

Изучена его специфическая фармакологическая активность по г,«точкам, характерным для выявления и оценки различиях проязлений

действия психотропных веществ в соответствии с требованиями Фармакологического комитета MS СССР. Установлено, что растительный сбор обладает Еыраженным седативннм действием.

Изучена токсичность исследуемого сбора. Показано, что разработанный нами седативный сбор практически безвреден.

С использованием современных физико-химических методов анализа проведено подробное изучение химического состава седатиЕнсго сбора и лекарственной формы из него.

Установлено, что в еодный настой сбора переходят в основном соединения полифенольной природы /флавоноиды, фенолкарбпноЕые кислоты, дубильные вещества/.

Впервые изучен качественный состав эфирного масла растительного сбора в сравнении с составом эфирных масел отдельных компонентов. Установлено, что в составе эфирного масла сбора присутствуют все доминируйте компонента эфирных масел отдельных составных частей сбора.

Проведено определение количественного содержания химических элементов Pe, Mn, Си, Со, Ni, Pb, Cd в седатииюм сборе и его компонентах.

Разработаны характеристики подлинности и числовые показатели сбора.

Практическое значение работы. Разработан новый седативный сбор, отличающийся выраженным седативным агентом.

Наработана опытная партия седатиЕНОто сбора на ПАС "Житомирлекраспром".

Данные по стандартизации сбора включены в ВФС 42-2061-31"Сбор успокоительный /седативный/ * 2" /"Speoies seda ti vac JS 2"/.

Седативный сбор разрешен для медицинского применения в качестве седативного средства решением Президиума Фармакологического комитета МЗ СССР /протокол $ 9 от 27.OS.91/.

Пртсазом МЗ СССР Л 194 от .23.07.91 сбору при свое г регистрационный номер Л г.р. 91/194/10.

Апробация работы.Материалы диссертации доложены на Всесоюзно! научной конференции молодых ученых и студентов "Молодежь -практическому здравоохранению", посЕященной 225-летию I ММИ имеш И.М.Сеченова, декабрь 1990г.; конференции молодых ученых ВНИИЗ "Вклад молодых ученых в решение проблем фармации", январь 1991г.; научной конференции, посвященной 50-лети» Томского медицинскогс института "Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и не Дальнем Востоке", сентябрь 1991г.: республиканской научной конференции "Реализация научных достижений в практически фармации", посвященной 70-летию Харьковского фармацевтического института, октябрь 1991г.; мекреспубликанс* зй научной конференции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средстЕ", посЕяденной 20-летию ^'ИИСКЛС, декабрь 1991г..

Публикации. По материалам исследования опубликовано 5 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена но проблеме АМН СССР "Фармация" *1006, секции "Изучен :е лекарственной флорц СССР" в соответствии с планом научно-технических работ ММА им.И.!«!.Сеченова по теме:"Фармакогностическое изучение лекарственных растений с цель создания лекарственных сборов, методов стандартизации сырья и рационального использования растител ь них ресурсов : " /номер государственной регистрации 0186.004.3872/.

Диссертация изложена на

_ 4 и состоит из введения, обзора

литературы, 2 глав . собственных исследований, еыводое, онбдгогрифнческого указателя и приложений. Работа иллюстрирована

__таблицами и схемами. Библиографический указатель включает

источников, и? них иностранных.

В первой главе приведен оОзор литературы по характеристике едативных средств растительного происхождения, их месту в терапии еврозов и невротических расстройств.внутренних органов; краткие ведения о лекарственном растительном сырье, входящем в состав едативных сборов; изложены современные подхода к стандартизации астительных сборов и лекарственных форм из них /настоев и твароЕ/.

В начале каждой главы собственных исследований приводится одробная характеристика объектов и методов исследования.

Во второй главе излокены общие принципы подхода к состг тлении ногокомпонентных прописей лекарственного растительного сырья

результаты экспериментальных исследований по выбору птимальных вариантов . композиций , растительных сборов

едативного действия . в результате проведения фармакологического скрининга ' 8 сборов и изучению их. специфической шр/акологической активности и- токсичности.

Третья глава посвящена вопросам стандартизации седативного мстительного сбора. В ней приводятся результаты изучения юлифенольного комплекса, мккроэлементного состава и качественного юализа эфирного масла растительного сбора и его компонентов с ^пользованием современных физико-химических методов исследования; результаты разработки характеристик подлинности и показателей :ачесгва сбора.

На защиту еыносятся: данные фармакологического исследс-¡ания растительных сбороЕ седативного действия; результаты разра->отки прописи многокомпонентного седативного сбора на основе [зучения его специфической фармакологической активности и токсичности; результаты изучения химического состава растительного :бора и его лекарственной форлы, а также результаты стандартизации :Сора.

001экты и методы исследования. Объектами исследования служили сооры, составленные из официального лекарственного расти -тельного сырья, отвечающего требованиям соответствующих нормативно-технических документов, в соответствии со статьей ГФ XI,вылЛ "Сборы".

Для работы использовали лекарственное растительное сырье, заготовленное в 1988-19Э0гг., а также опытные серии сырья и опытные партии сбора, поступившие от ПАО "Житомирлекрастпром" в феврале 1991 года.

Настои из растительных сборов готовили в соответствии с требованиями статьи ГФ Х1,выпЛ "Настои и отвары", кгомэ того при соотношении сырья и готоеого продукта 1:20 и 1:40.

При выполнении работа использовались современные фармакологические и физико-химические методы анализа /бумажная и тонкослойная хроматография, ВЭ':Х, ГХ/МС, атомно-абсорбционная спектроскопия, УФ- спектроскопия, дериватография /.

Изучение фармакологических и токсикологических свойств сбора проводили на различных видах лабораторных животных /нелинейные белые мыши-самцы массой 18-20г к крысы-самцы массой 180-210 г/, используя два типа введения настоев сборов /внутрибрюаишшй и пероральный/.

Исследование подлинности сбора проводили по методикам Государственной Фармакопеи XI издания; опоеделение доброкачественности отдельных компонентов - в соответствии с норма-лвно-технической документацией на эти виды лекарственного растительного сырья; разработку ч"*слоеых показателей качества сбора - в соответствии с требованиями ОСТ 42-7-71 и Государственной Фармакопеи XI издания, предъявляемые к ВФС на растительный ссор.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием и-критерпя Вилкоксока-Макна-^итш и Т-критерия Стьюдекта.

Таблица I

Прописи седатишпгх растительных сборов, используемых в работе

п7п Название компонента ! 1 Количество компонентов в сборо (¡¡5)

| Офиш-;нальный ¡успокоитель- • • ний Сбор Щ Сбор Ж!¡Сбор Ш ; Сбор !Н Сбор ! Сбор сбор т Сбор Ш

I. Цветки боярыиишка 33,3 20,0 20,0 • 10,0 20,0 15,0

2. Плода боярышника 33,3

Корновища о корнями валерианы 16,7 10,0 15.0 17,0

4. Лист мят перечной 33.3 15,0 33,0 . 10,0

5. Трава пустырника 33,3 40,0 40,0 40,0 40,0 40,0 17,0 40,0

6. Цвоткя ромашки 17,0

Корень солодки 20,0 10,0 10,0

8. Лист трифоли 33.3 . -

9. Плоды шиповника 10,0 15,0

10. Шшьки хг/.еля 16,7 40,0 20,0 40,0 20,0 20,0 17,0 20,0

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Разработка оптимального состава седативного растительного соора и изучение его специфической фармакологической активности и токсичности

I. Фармакологический скрининг растительных сборов.

Подбор компонентов седативного сбора осуществляли на основе анализа литературных данных об использовании отдельных лекарственных растений и их сборов в качестве седативных лекарственных средств, а также основываясь на результатах фармакологического скрининга 8 растительных сборов /таблица I/.

Я качестве ппепарата сравнения использовали -фициналышй успокоительный сбор, вишченный в номенклатуру лекарственных средств /* г.р. 72/267/54/ в соответствующих „озах и концентрациях.

Настси сборов, приготовленных в соотношениях 1:10, 1:20, 1:40 вводили перорально с помощью а ревматического зонда за 20, 60, 90,120 минут до опыта в дозе 10 мл/кг.

Контрольные животные получали дистиллированную году.

Критерием оценки фармакологического действия исследуемых сборов являлось снижение уро! л двигательной и ориен-' тировочно - исследовательской активности белых мышей, определяемое в опто-элек'тронн'ой камере /актометре/ ЗРА-1 /СССР/, которая представляет собой автоматизированный вариант "Но1е-ьоаг<1". Прибор позволяет'раздельно фиксировать спонтанную двигательную /У?/ а ориентировочно-исследовательскую /УС/ активность животных.

Проведенные исследования позволили установить, что оптимальным является соотношение 1:2С при введ чии сборов за 60 минут до опыта, при котгрсм наблюдается -максимальное снижение двигательной и сри^нтироьэчко-исслэдовательской активности животных. В таблице 2 грздстаьлени поведенческие показатели после пероралькогс ев&дьния

Таблица 2

Влияние настоев растительшос сборов & 1-8 на показатели орпонтировочно-иеелодовательской и двигатольной активности белих мышей в актометро ЭРА-1

И сбора Усовень горизонтальной активности (УГ) Уровень вертикальной активности (число стоек) (УС)

1 контроль ; опит % О/К ! контроль I 1 опыт ) % О/К

I. 577,3 1 52,2 449,9х + 44,3 78,0 25,8 + 2,5 13,6х 1 1,1 52,9

2. збо.о78,5 291,5х + 43,7 81, <} 12,44^ 1,1 8,2 ^ 1,0 66,2

3. 427,4 :: 37,7 413,0 + 51,5 96,6 31,8 + 6,1 15,0х 1 1,2 47,2

4. 556,2 11 67,6 414,7х + 48,1 74,6 27,8 1 2,5 . 7,4х + 0,7 2Б,7

5. 377,8 79,4 287,3х" 1 21, Б 76,1 15,9 1 3,0 4,СР1 0,7 25,2

е. 427,4 + 37,7 252,7х + 46,9 59,1 31,6 ± 6,1 Э.в^! 1,0 30,0

7. 429,1 * 50,7 429,6 + 83,7 100,1 28,7 + 3,5 19,4х + 1,8 67,6

3. 429Д 1 50,7 ' 333,9х + 33,3 77,8 28,7 1 3,5 13,1 I 2,1 45,6

I

<о

Примзчатю; Поведенческие показатели представлены в абсолютных величншх и п % от контрой (% О/К), принятого за 100/'. Б каждой группе 0-12 животных

л Г < 0.05

хх I1 < 0,01 по «равнению с контролем

Таблица 3

Влияние настоев растительных сборов й 4,6 на показатели ориентировочно-исследовательской и двигательной активности белых мзде* в актометре ЭРА-Х ;В -сравнении с Ьфициналь-ным успокоительным сбором.

Условия опита

Сбор, коч-пснтра-luif

Уровень горизонтальной активности ОТ)

Уровень вертикальной активности (УС, число стоек

20

Згаич после введения 'препарата в мкн. 1—m—„„ | :—ггт—ГЛ—ГГ-Г-

Su i 100 ! 20

т . OU \

120

X. v.-ИЦИ-, KSJIbHKIi yCHOKCZ-тельнкй сбор

1:10 1:20 1:40

-23,8*-29,8* -25,4 -14,5 -24,1*-31,9 -19,7*-20,1 -31.9* -3*1,3*-25,6 -11,4 -44,4* -61,6*-54,4* -36,2* -22,I*-18,7*-19,.. -17,7 -36,4*-60,4*-35,3*-37,2"

2. Сбор -¿4 1:10

21,5*-27,б' -19,4" -15,3 -44.7*-43,6 32,4 -41,1 1:20 -32,4Ч -37,5* -25,3*-II,5 -45,2А-73,4"-57,9*-39,2

1:40

-27,3 -29,8 -18,7 -16,3 -40,СЛ-ЗСД1-46,0'-32,2

3. Сбор Д6

1:10 -25,Э*-36,7*-23,8*-17,4 -43,6*-58,4*-48,8*-37,6*

1:20 -41,7*-40,9*-30,6*- 9,9 -63,Э*-7'., 1*-49,6*-35,0*

1:40 -29,7'-40,54 -20,9 -12,5 -45,2* -77,2*-52, 4*-31,4"

примечание: результаты црсдстааленн в % от контроля, принятого за 100%.

В каждой грутте 8-12 ответных

* Р С С,С5 ••»?<. .0,01 по сравнению с контроле;'/:

настоев сборов * 1-6 в концентрации 1:20 в дозе 10 мл/кг за 60 минут до опыта.

Анализ данных, представленных в таблице 2, показывает, что введение животным настоев сборов * 1-8 достоверно вызывает снижение двигательной и ориентировочно-исследовательской активности мышей.

Анализ динамики угаоения двигательного и ориентировочно-исследовательского компонента реакции на новизну показал, что и в опытной груше и в группе сравнения происходит равномерное снижени. этих видов активности.Следует отметить,что особенностью действия исследуемых сборов является снижение вертикальной активное?« /числа стоек/, а также качественные изменения характера локомоторной активности у опытных животных, что однозначно указывает на снижение у них уровня эмоционального напряжения и наличие седативного зффекта у изучаемых сборов.

На основании результатов фармакологического скрининга для подробного изучения спектра ■ психотропной активности растительных сборов нами были выбраны сборы й 4,6 проявившие наиболее выраженный сэдативный эффект. Влияние настоев этих сборов на снижение поведенческих показателей в широком диапазоне доз и временных интервалов в сравнении с официальным успокоительным сбором подробно отражено в таблице 3.

I

П. Экспериментальное изучение специфической фармакологической активности растительных сборов * 4,6 проводили в соответствии с

действующими методическими рекомендациями по экспериментальному /доклиническому/ изучению психотропных лекарственных средств.

I. Наличие снотворного действия оценивали по способности растительных сборов потенцировать снотворный эффект наркотических веществ. Пролонгирование снотворного действия хлоралгидрата /350

- И-

КГ/Ш" ири иодооашоы иисдошш/ И ГСКССПсЬ.а' /120 мг/кг при подкожном введении/ определяли по времени нахождения животных в Соковом положении. Настои сборов вводили перорально за 30 и 60 минут до введения анализатора. Установлено, что растительные сборы * 4,6 статистически достоверно увеличивают продолжительность хлоралгидратного и гексеналового сна у мышей практически во всех изученных дозах.Для модели хлоралгидратного сна эти цифры составили в среднем 31,3 - 40,2% и 27,7 - 41,3", для модели гексеналового сна 23,1 - 24,5? и 45,6 - 47,6% соответственно для сборов А 4 и 6.

Пролонгирующее снотво^чый эффект действие препарата сравнения ~ официального успокоительного сбора составило в среднем 42,8 -43,0% / модель хлоралгидратного сна/ и 39,0 -42,3% /модель гексеналового сна/.

2. Про ШЕО с у дорохны е свойстьи исследуемых сборов оценивали по тесту коразслсЕых судорог. Исследовали способность растительных сборов предупреждать клонико-тонический компонент судорожного припадка. Острые генерализованные судороги у животных вызывали введением пороговой дозы коразола /110 мг/кг подкожно/ за 10 минут до получения максимального эффекта растительного сбора. Установлено, что настои сборов Л 4,6 статистически достоверно увеличивали время жизни животных на 38,2% и 45,6% соответственно. Кроме тсго, под вли. лием растительных сборов у животных щгчсходило увеличение лат нтного периода наступления судорог на 26,3% и 28,7% соответственно, а также наблюдалось изменение характера судорог. У животных опытной группы преобладал.. судороги клонического характеры к нэ наблюдалось тонической экстензии,в отличие от животных контрольной группы, у которы*" тонические судороги отмечались в 100% случаев.

В группе сравнения, получавкей официальный успокоительный сбор

продолжительность сна животных увеличивалась на 35,4%, и латентный период наступления судорог на 7,1а.

3. Оценка влияния исследуемых растительных сборов на координацию движений животных в условиях вызванной двигательной активности при помощи"вращзодегося стержня"показало,что настои сборов и 6 ухудшали координацию движений и вызывали миорелаксантный эффект соответственно у 36,4% и 45,5% предварительно тестированных животных. Для группы сравнения эта цифра составила 58,2%.

Экспериментальное изучение токсичности седативных сборов Л 4 и Л 6 проводили в соответствии с "Требованиями к доклиническо: у изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ".

При изучении токсичности /острой, подострой, субхронической, хронической/ использовали два вида животных /мыши и крысы/ и два пути введения /пероральннй и внутрибршшшый/. Из сборов готовили настои сборов с концентрацией 1:10 и 1:20. Дальнейшее увеличение дозы вводимого настоя достигалось за счет увеличения объема настоя, а не концентрации. При внутриСршинном введении мыши получали 0,5 мл и 0,7 мл настоя сборов. При пероральном введении у мышей использовалась доза 0,2 мл и 0,4 мл, у крыс - 0,5 мл/100 г и 1,0 мл/100 г массы животного. Контрольные животные получали дистиллированную воду в соответствующих объемах и содержались в аналогичных условиях. В течение всего эксперимента гибели животных не произошло, опытные животные не отличались по внешнему виду, поведению от контрольных.Нам не удалось установить дозу,при которой погибает хотя бы одно животное.

Отсутствие местнораздражаэдего действия настоев сборов на слизистые оболочки было подтверждено опытами аа крысах. Слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта животных после однократного перорального приема настоя сбора /1:20/ в дозе I мл/100 г массы и регулярного приема в течение 5-ти дней, были нормальными, без

признаке^ раздражения и изъязвлений.

Таким образом, проведенные исследования позволили отнести сэдативные растительные сборы * 4 и 6 к группе практически безвредных веществ по существующей классификации.

В качестве объекта фармакогностического исследования нами был Еыбран сбор Ж.поскольку в сравнении с офнциниальным успокоительным сбором он проявил высокую специфическую фармакологическую активность и включает в себя лекарственное растительное сырье, обеспеченное достаточной сырьевой базой на территории нашей страны.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ МНОГОКОМПОНЕНТНОГО СЕДАТИВНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СБОРА * 6

Изучение химического состава растительного сборя и его лекарственной формы (настоя) с использованием современных физико-химических методов анализа

Предварительное фитохимическое исследование.

При предварительной фитохимическоГ оценке седа-гивного сбора на присутствие основных групп биологически активных веществ /БАВ/ с помощью качественных реакций установлено, что водные извлечения сбора содержат в основном соединения полифенольной природы -флавоноида, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты.

Не обнаружены алкалоиды, сердечные гликозида, кумар-ны, ант-раценпроизБодг 'е.

Наличие интенсивной реакции на соединения флавоноидной природы (цианидиновая реакция по Брианту, реакция со щелочью) и возможность использования этой группы для разработки методов стандартизации растительного сбора служили предпосылкой для их детального исследования.

Изучение полифенольного комплекса растительного сбора проведено с помощью методов одномерной бумажной, тонкослойной, высокоэффективной хроматографии и УФ-спектроскопии.

Еумажно-хромато^рафический анализ показал наличие не менее II веществ флавоноидной природы и 2 вещества, которые были отнесены нами к фенолкарбоновым кислотам.

В ходе оптимизации хроматографического анализа методом ТСХ изучали влияние состава подвижней фазы, степени активности сорбента на качество разделения.

Наилучшее разделение было достигнуто на силикагеле в системе эгалацетат .'уксусная кислота: вода (10:4:1).

Идентификацию осуществляли по присутствию на хроматограммах зон адсорбции основных действующих веществ - флазоноидов, фенолкарбеновых кислот и сравнением с достоверными образцам'..

Таким образом, хрсмагографическим исследованием в настое сбора были идентифицированы следующие вещества: гиперозид, рутин, кверцетин, кемпферол, хлорогеновая и кофейная кислота.

При визуальном сравнении хроматограмм до и после обработки их соответствующими реактивами обнаружено большое сходство по набору фенольных соединений в водных извлечениях седативкого сбора и его компонентов, отличающихся лишь величиной и интенсивностью их пятен в УФ-свете.

Предложена методика определения основных компонентов полифенольного комши-.;са непосредственно в водных извлеч^ лиях седативного растительного сбор- с помощью ВЭЖХ.

Условия хроматографического разделения: хроматограф "вШтайги-1.С-6А." (ппония), укомплектованный компьютерным интегратором. Колонка из нержавекзцей стали длиной 300 м, диаметром 3,9 мм, заполненная сорбентом "м-вопйаргс с18" с размером частиц 10 мхм. Подвижная фаза : метанол:вода:уксусная кислота (,45:^5:3). Сксростч движения потока - 2 мл/мин-Детектирование при длине годна - 254йм.

- 15 -

Рис.2. Хроматограмма полного ионного тока эфирного масла седатирного сбора.

6

2

2 3ч ^и«

Рис Л. Хроматограмма разделения фенолькнх соединений водного новлечения седативного сбора.

I - кофейная кислота, 2 - хлорогеновая кислота, 3 ■ ванилиновая нкслота, 4 - квериетин, 5 - гесперидин 6 - рутин, 7 - гипероэид.

Количественное определение проводили методом внутренней нормализации площадей пиков.

Разработанные хроматографические условия позволили получить удовлетворительное разделение фенольных соединений. Хроматограмма разделения фенольных соединений водного . извлечения растительного сбора представлена на рисунке I..

Таким образом, с помощью разработанной методики в водных извлечениях седативного сбора J* 6 идентифицированы 7 фенольных соединений и установлено их содержание: рутин ( 15,61%), гиперозид (3,295), гесперидин (0,345), кверцетин (1,973), ванилиновая кислота (1,512), хлорогеновая кислота (7,215), кофейная кислота (I2.92X).

Изучение качественного состава эфирного масла растительного сбора в сравнении с составом эфирных масел отдельных компонентов проводили методом ГХ/МС на хроматографе "Hewlett Packard" 5390 (П) с масс-селектизным детектором HP - 5971, компьютер HP "Vectra" 196/16 S.

Условия хроматографирования.

Колонка: Hethylsilioone cross linked капиллярная из плавленной окиси кремния 12,5 м х 0,2 мм, толщина пленки 0,22 мга».

Скорость газа-носителя: I мл/мин.

Т° инжектора = 250° С.

Т° интерфейса = 280 0 С. I80 С

Т° источника = 230° С. / 5 мин.

Температурная программа:

6 °/мин

80° G 0,5 мин.

Режим сканирования : от 50 до 6£0 ам со скоростью 4 есап/зек. Обьем вводи!»"^й проба - I мкл.

Хромзтг.пзамма полного ионного токз эйгиногс ма'ЛЛс

растительного соора представлена на рисунке 2.

Е состаье эфирного маслэ растительного сборл идентифицированы 9 соединения, которые доминируют в качественном составе эфирного масла отдельных компонентов сбора ( цдшек хмеля, листьев мяты перечной, корневищ с корнями валерианы). Кроме того, в эфирном масле сбора присутствует доминирующий компонент эфирного масла травы пустырника со временем удерживания 13,11, идентифицировать который, к сожалению, нам не удалось. Экспериментальные данные представлены в таблице 4.

Таблица 4.

Результаты изучения качественного состава эфирного масла растительного сбора в сравнении с составом эфирных масел отдельных компонентов

Анализируемый 121 образец

Время удерживания Идентифицированное * пика

—--на ри-

при ана- соединение сунке

при анализе образца эфирного масла сырья

зе образца эфирного масла сбора•

I.Эфирное масло пипек хмеля

3,83 5,56 20,83

3,62

3,85 5,56 20,81

мирцен

лин8лоол

хумулен

пинек

I 3 10

2.Эфирное мае- 16,12 16,13 борнилизовалерианат 7

валевианы 19,90 19,90 борнеол 9

17,91 17,91 изовалериановая

кислота 8

3.Эфирное мае- 3,91 - ментсн

ло листьев 4,06 - изоментон

мяты переч- 4,44 4,41 ментол 2

1 2 3 4 5 в

ной 6,78 6,74 ментолизсзалериаяат 4

9,73 9,71 цинеол 5

4.Эфирное мае- 13,11 13,11 невдэнтафициро- 6

ло травы ванное вещество

пустырника

Таким образом, проведанные исследования позволяют предложить определение качественного состава эфирного масла растительного сбора, как одну из объективных характеристик его подлинности.

Изучение. минерального состава растительного сбора и его компонентов проведено нами на базе Всесоюзного научно-методического центра по микроэлеменгнему анализу лекарственных средств к растительного сырья МЗ СССР.

Методом атсмно-абсорбционной спектроскопии (.атомно-абсорбционный спектрофотометр ааб-3 "Карл Цейс") с использованием сухой минерализации определено содержание следующих химических элементов - Ре, Мп, Си, гп, Со, N1, рь, сд., в се дативном сборе Я б и его компонентах.

Усредненные значения 5-ти параллельных определений содержания тяжелых металлов в пересчете на абсолютно сухое сырье представлены в таблице Я 5.

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что соде}, лние тяжелых металлов (РЬ и С4) в се дативном растительном сборе не превышающей ПДК, установленных для продуктов питания (окопной продукции).

Таблица 5

Содержание микроэлементов (в ррш) в лекарственном растительном сырье и седгтивном сборе

Сырье <серия; Анализируемый элемент

77 -X С5 Кп Си Ъ\ Со ги РЬ Сй

Трава пустырника 13678) ■164,70 31,74 10,72 15,99 1,96 1,096 0,027

!аш:<Е хмеля (4592) 542,48 76,89 5,15 23,08 4,32 1,465 0,028

Листья мяты пе ое- чно£ (4ь80) 336.4Э 86,22 10,44 23,14 0,49 5,28 0,777 0,111

Корень солодки (1661.) 130,06 3,41 6,97 7,11 0,73 Г ,336 0,006

Коше вила с корнями валерианы (4871) 532,97 24,44 8,35 16,03 3,34 0,221 0,016

Сбор седаткв-ний ;серил I) 353,44 46,18 5,97 13,68 0,25 2,78 0,180 0,005

Примечание: в таблице приведоны усредненные значения 5-ти параллельных определен!®

Разработка характеристик подлинности и показателей качества седативного сбора.

Для получения разрешения Фармакологического комитета МЗ СССР на клинические испытания ъ медицинское применение седативного сбора необходимо разработать на него проект ВФС.

Согласно современным требованиям, предъявляемым к проекту ВФС, ..и провели морфолого-анатомическоэ изучение се дативного сбора с целью разработки макроскопических и микроскопических, характеристик его подлинности; разработали числовые показатели( определявшие качество сбора.

При разработке критериев доброкачественности растительного сбора за основу были взята соответствуйте показатели НТД на лекарственное растительное сырье, входящее в состав исследуемого сбора, проведен их анализ и экспериментальное определение как в отдельных видах сырья, так и в сборе. Результаты анализов опытных серий седатавного сбора представлены в таблице-6.,

Учитывая современные тенденции к.; использовании дериватографического анализа для определения таких- показателей качества лекарственного растительного сырья как влажность и общая зола, данные показатели определялись нами в сопоставлении с методами, рекомендуемыми Государственной Фармакопеей XI изд. Исследования проводили на приборе "Дериватограф-1050 МОМ (Венгрия}.

Для получения дериватограмм с хорошей разрешающей способностью подобраны следующие оптимальные условия: наЕеска - 100-0,5 мг, скорость нагрева 4° С/мин - ТО0 С/мин, эталон атмосфера -

динамическая/воздух, чувствительность потери массы - 0,5%, тигли -Pt, тарелвчатые.

Данные дернватографического анализа сэпостаЕИУы с результатами, полученными по методикам XI, однако оттаглте-лькая ои::бка сила меньше при использования метода Еериватсгра^-».

Таблице 6

Результаты анализов опытных серий седатиъного сбора, приготовленных яг лекарственного растительного сырья,

т стгепл-с? тточп'^'П'ч х: ТООЛ-пл \ и тт*~1лт!г*тггс*!ттг7 ''чт ПАП

"Ентомярлекрастпром" е феврале 1991г. (П).

Содержание (%) I Б

I 2 3 I 2 3

I. Ьдакность 9,22 10,67 12,20 10,32 12,75 13,06

2. Золы общей 11,04 9,95 10,80 10,76 10,20 11,57

3. Золы н/р в IOS HCl 4,80 4,12 4,76 5,02 4.93 5.10

4. Органической примеси 1,10 0,84 1,32 0,19 1,03 1.50

5. Минеральной примеси 0,64 0,43 0,70 0,04 0,17 0,30

6. Частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 5 мм 0,50 1,25 0,84 2,75 2,10 1,35

7. Частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 мм 2,70 3,04 1,50 4,25 4,60 4,95

8. Эфирного масла 0,218 0,234 0,223 0,215 0,210 0,221

9. Окисляемых вэвеств 3,93 4,63 5,37 6,95 5,04 4,97

10.Экстрактивных веществ 26,89 28,30 26,82 28,86 28,29 27,93

II.Сухой остаток водного настоя с саг, а концентрацией 1:10 1,620 1,716 1,655 1,711 1,598 1,703

1:20 1,095 1,126 I.-I94 1,163 1.206 1,124

Примечание: в таблице приведены усредненные• значения 5-ти параллельных определений.

При выборе метода количественного определения действуюх ещеотв мы исходили из того, что седативный сбор является ногокомпонентным и его фармакологическое и терапевтическое ействие обусловлено суммой БАВ, содержащихся в отдельных омпонентах сбора и переходящих в водное извлечение, которое ршшмает больной. Основываясь на анализе НГД на компоненты сбора о показателю качества "содержание действующи. веществ", итературных данных и результатах собственных исследований, мы роводили работу по выбору метода количественного определения сбора следующих направлениях : I) определение содержания эфирного асла; 2) определение содержания суммы полифенольных (окисляемых) .еществ; 3) определение содержания экстрактивных вецестз, :звлекаемых водой; 4) определение массы сухого остатка водного •астоя сбора, рекомендуемого для приема больному.

Полученные результата представлены в таблице б.

Анализ литературы показал, что эфирное масло в различных ;оличествах входит в состав всех компонентов сбора, что позволило ¡пм предложить методику определения зфирного масла в седативнсм :ооре и ввести в проект В-Ю показатель качества "содержание эфирного масла не менее 0,25".

Кроме этого, нами были проведены исследования по определению удержания экстрактивных веществ, извлекаемых водой по методике ГФ (I изд.о выл.1, стр. 295. Этот показатель регламентируется ЯТД для грех видов лекарствен! >го сырья, входящего з состав сбора ! т "зва кустарника, корневища с корнямг валерианы, корень солодки;. Но поскольку предлагается использовать седэтивный сбор е гаде водного настоя, извлечение экстрактивных веществ мы провел«.- дадой. Результаты, представле1шые в таблице S, позволяют предложить з качестве критерия, опекивзкЕего доброкачественность ссоря - "содержание экстрактивных веществ, агвлвкз*мых вод^л - не менее 25'".

Б связи с тем, что изучаемы® сбор используется в виде водного ньгтоя, Е2?Л! предложена мэтсж-сз определения ма^ты сухого остатка водного кастоя сбора, которая позволяет определить качество именно той лекарственной формы, которую принимает больной.

Метрологические характеристики методики отработаны нами на водном настое сбора (1:20), приготовленном в соответствии со статьей ГФ XI "Кастой и отвары":

г, Г г" 52 Зх Р Л X 5

,1625 0,076477 0,028306 ЭЪ% 0,0145 . 1,245«

На основании проведенных исследований установлен показатель качества для водного ' настоя сбора (1:20) - "содержание сухого остатка не менее 1%".

Сложный химический состав растительного соора, представляющего собой смесь 5-ти видов лекарственного растительного сырья делает целесообразной постановку вопроса о проведении стандартизации сбора по комплексу ЕЛВ, в частности, по сумме соединений полифенольной природа. При выборе данной группы БАВ в качестве критерия доброкачественности сбора мы руководствовались литературными данными о широком спектре фармакологическсй активности данной химической группы к основывались на той большой массовой доле, которую занимают ее представители (флавсшиды, дубильные вещества и др.) в химическом составе растительного сбора. Определение содержания суммы полкфенольных (окисляемых) веществ в сборе и его компонентах проводили офщиналышм методом перманганатометрического титрования.

По результатам собственных исследований мы предложили установить норму содержания окисляемых веществ в сборе не менее 3%.

Таким образом, проведенное исследование позволило выявить наутаообоснованные критерии доброкачественности седативного

растительного ссора:

влажность - не болев 14 %; зола общая - не более 12 зола, нерастворимая ь 10% НС1 - не Солее 6%; органическая примесь - не более 3%

минеральная примесь - не более 1%;

частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 мм по ГОСТ 4404-77, - не более 5 %;

частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 5 мм по ГОСТ 214-83, - не более 3 %;

содержание полифевольных (окисляемых) веществ - не менее 3 содержание эфирного масла - не менее 0,2 i; содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой, - не менее 25 %;

масса сухого остатка настоя сбора tl:20) - не менее IS. Изучение стабильности внешних признаков, числовых показателей при хранении сбора в течение 2,5 лет позволило рекомендовать срок хранения сбора 2 года. Во время всего срока хранения не наблюдалось изменения внешних признаков, числовых показателей качества сбора.

ВЫВОДИ

1.B результате проведения фармакологического скрининга восьми растительных сборов разработан оптимальный состав нового седативного сбора, вк.тающий 5 видов лекарственного растите/" чого сырья.

Исследована специфическая фармакологическая активность растительного сбора и установлено, что он обладает выраженной седативной активностью и может быть рекомендован для медицинского применения в качестве седативного средства.

2. проведено экспериментальное изучение токсичности

седативного растительного сбора. Установлено, что предлагаемый в качестве седгтивного средства растительный сг"?р, не оказывает токсического влияния на организм.

3. с использованием современных физико-химических методов проведено изучение химического состава эфирного масла седативного сбора. Ь составе эфирного масла идентифицированы: мираен, линалоол, хумулен, Оорнилизовалерианат, изовалерианоЕая кислота, борнеол, Ментол, ментон, изоментон, ментолизовалерианат, цинеол.

4. Изучен состав полифенольного комплекса седативного сбора. Установлено, что в водный настой сбора переходят в основном сое-диненкя полифенольной природы(флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты).

5. Проведено изучение минерального состава (Ре, Мп, Си, Со, Hi, ръ, cd; седативного сбора и его компонентов.

6. Разработаны характеристики подлинности (макроскопические, гжкроскопические, характеристика качественного состава эфирного масла) седативного растительного сбора.

7. Разработаны числовые показатели качества сборз : влажность - не более 14%; зола обвал - не более 122; зела,

нерастворимая в 1055 HCI - не более 65; органическая примесь - не более 32: минеральная примесь - не- более 1%; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0.J8 мм по ГОСТ 4404-77, не более 52; частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 5 мм по ГОСТ 214-83, не более 3?; содержание суммы полифенолькых iокисляемых) вецеств - не менее 35; содержание эфирного масла - не менее 0,21; содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой -не менее 25% масса сухого остатка настоя сбора (1:20) - не менее IS. Данные по стандартизации сбора включены в ВФС 42-2061-91 "Сбор успокоительный (седативный) JG2" ("Species sedativae Я2").

8. Наработана опытная партия сбора на ПАО "Житсмирлекрастпром". Материалы по всестороннему изучению седативного сбора переданы в

Фармакологический коштет МЗ СССР. ' Решением Президиума Фармакологического комитета МЗ СССР растительный сбор разрепен для медицинского применения в качестве седатквного средства (протокол .4 3 от 27.06.91), Приказом МЗ СССР Л 194 сбору присвоен регистрационный номер Л г.р. 91/194/10.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. Лобанчикова II.В., Киселева Т.Л., Самылина И.А. Разработка методики количественного определения действующих веществ в настойке плодов боярышника.// Молодежь - практическому здравоохранению: Тез.докл. Всесоюз.няуч.конф. мол.ученых и студентов, посвящ. 225-летию I ШИ. 1990г.-Москва, 1990.-с.52-53.

2. Самылина И.А., Лобанчикова Н.З., Киселева Т.Д., Сарычев Е.й. Изучение антиаритмической и седагивно.. активности некоторых представителей рода Crataegus L.Тез.докл.науч.конф., посвящ. SG-летию Томского медицинского института 3-5 сентября 1991г.-Томск,1991.-с.94-95.

3. Лобанчикова Н.В., Сарычев Е.И., Самылина И.А.. Фармакологический скрининг растительных сборов.-М.,1991.-Зс.-Деп.в ЫТО "Сомме динформ" II.09.91, й Д 21726.

4. Самылина И.А., Лобанчикова Н.В., Киселева Т.Д., Сарычев Е.М. Изучение сэдативной активности растительных сборов.//Реализация ручных достижений в практической ф'рмащя: Тез. докл. Республиканской нгтч.яонф. 16-18 октября 1991г. Харьков, 1991.-е. 204.

5. Лобанчикова Н.В., Самылина И. А. Стандартизация многокомпонентного седативного сбора.// Проблемы стандартизации и контроля качег"ва лекарственных средств: Тез. дскл. межреспубликанской научной конф., посвященной ?Т-летию 1ШКСКЛС. 18-21 декабря 1991 г. - М., 1991. - T.I, с 84.