Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка составов седативных лекарственных сборов для детской практики, их фармакогностическоеи фармакологическое изучение

На правах рукописи

¿ ( '■а с ^, —

РГБ ОД

1 < МАП /СО?

Хаесельхорст Ольга Анатольевна

Разработка составов седатсшных лекарственных сборов для детской практики, их фармакогностическое и фармакологическое изучение

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Санкт-Петербург 2002

Диссертационная работа выполнена на кафедрах фармацевтической химии, фармакогнозии I фармакологии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научные руководители: Доктор фармацевтических наук, профессор Е.И. Саканян Доктор медицинских наук, профессор Е.Е. Лесиовская

Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук, профессор Л.А. Николаева Кандидат фармацевтических наук, доцент И.К. Никитина

Ведущая организация: Ботанический институт РАН им. В.Л. Комарова (С.-Петербург)

Защита состоится 28 мая 2002 года в 12 часов на заседании Диссертационного Советг Д208.088.01 в Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, д. 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии по адресу: Санкт-Петербург, ул Проф. Попова, д. 4/6

Автореферат разослал 25 апреля 2002 г. Ученый секретарь Диссертационного Совета,

канд. фарм. наук, доцент

М.В. Рыжкова

2 л

Актуальность темы.

В структуре заболеваемости детей в последнее время значительное место занимает патология ервной системы. Особенно часто встречаются бессонница, повышенная нервная возбудимость, раз-ичные формы неврозов [Алахвердиев А.Р, Хорунжев Ю.А., 1989]. По данным «Государственного сестра лекарственных средств» (2002) и «Регистра лекарственных средств России» (2001) в настоя-;ее время в России для профилактики и лечения детских неврозов используют 22 лекарственных репарата синтетического происхождения. Анализ литературных данных позволяет сделать вывод, то применение синтетических препаратов для коррекции заболеваний нервной системы у детей не-селательно, так как они имеют значительное количество побочных эффектов и противопоказаний, озтому актуальна проблема разработки лекарственных средств на основе субстанций природного [роисхождения, которые могут быть рекомендованы для нормализации функций нервной системы у ;етей.

Среди лекарственных и лечебно-профилактических средств растительного происхождения, [рименение которых целесообразно в детской практике, наше внимание привлекли лекарственные боры. Однако номенклатура официнальных лекарственных растений, обладающих седативным эффектом и рекомендуемых к применению в детской практике, невелика и нуждается в существенном 1асширении и дополнении. В связи с этим представляло интерес изучение вербены лекарственной Verbena officinalis L.) - сем. Вербеновых (Verbenaceae Juss.), известной с античных времен и исполь-уемой в разных странах, как в традиционной, так и в научной медицине. Фармакологические иссле-давания, проведенные российскими и зарубежными учеными, показали, что вербена лекарственная >бладает успокоительным, антидепрессивяым, болеутоляющим, жаропонижающим, отхаркивающим, фотивосудорожным, потогонным, мочегонным, желчегонным и ранозаживляющим действием, одна-со наиболее выражена седативпая активность, которая может быть сравнима с аналогичным действи-:м корневищ с корнями валерианы [Weber R., 1995; Madaus G., 1938; Braun П., 1987; Dörfler Н.-Р., 1990]. Поэтому представлялось целесообразным проведение фармакогностического и фармакологического изучения этого перспективного лекарственного растения для введения его в шело официнальных в РФ видов. Это позволит расширить возможности использования седативных текарственных фитопрепаратов, в том числе сборов, что особенно актуально в детской практике.

Цель и основные задачи исследования:

Разработка составов двух седативных лекарственных сборов для детей и их

фармакогностическое и фармакологическое изучение.

Для достижения указанной цели предстояло решить следующие задачи:

• разработать составы седативных лекарственных сборов, предназначенных для детской прак ки;

• провести фармакогностическое изучение травы вербены лекарственной - Verbena officinalis сем. Вербеновых - Verbenaceae Juss., собранной в фазу цветения и начала плодоношения, одного из компонентов седативных сборов;

• провести фармакологическое исследование извлечений из травы вербены лекарственной;

• разработать нормативную документацию на лекарственное растительное сырье «Вербе лекарственной трава»;

• провести фармакогностическое изучение двух седативных лекарственных сборов для детей;

• изучить специфическую активность и безвредность извлечений из разработанных сборов;

• разработать нормативную документацию на два седативных лекарственных сбора для детс практики.

Работа выполнена на кафедрах фармацевтической химии, фармакогнозии и фармаколо Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии в соответстви тематическим планом научно-исследовательских работ СПХФА по теме. «Исследова лекарственных растений, перспективных для создания фитопрепаратов» и входит в комплекс] план научно-исследовательских работ по фармации и перспективный план подготовки докторе кандидатов фармацевтических наук на 1999-2002 гг. Научная новизна.

Впервые было доказано сходство химических составов корневищ с корнями валери лекарственной и травы вербены лекарственной по содержанию в обоих видах лекарствен! растительного сырья таких групп БАВ, как валепотриаты и терпеноиды.

Показано, что извлечения из травы вербены лекарственной не токсичны и обладают bi женной седативной и антигипоксической активностью. У них выявлены также иммунотроп противовоспалительное, ранозаживлякщее, жаропонижающее, анальгетическое, гипотерм ское и отхаркивающее действие. Изученные эффекты наиболее выражены у водно-спирто] извлечения, полученного при экстракции травы вербены лекарственной водой очищенной и этанолом.

Впервые проведено фармакогаосгическое изучение травы вербены лекарственной, определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья и такие числовые показатели как: содержание эфирного масла, валепотриатов, экстрактивных веществ, влажность, содержание золы общей и золы, не растворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, измельченность, органическая и минеральная примесь.

На основе перспективных видов лекарственного растительного сырья впервые разработаны оригинальные прописи лекарственных растительных сборов, предназначенные для профилактики и лечения неврозов у детей.

Впервые проведено фармакогностическое изучение разработанных сборов, определены их макро- и микродиагностические признаки и такие числовые показатели как: содержание эфирного масла, валепотриатов, экстрактивных веществ, содержание примесей, влажность, зольность, измельченность. Проведен фитохимический анализ сборов, подтверждено наличие флавоноидных соединений, валепотриатов, эфирного масла.

Доказано, что сборы нетоксичны, обладают седативным, антигипохсическим, иммунотропным, противовоспалительным, ранозаживляющим, жаропонижающим и анальгетическим действием, причем по многим показателям фармакологической активности они превосходят офяцилальный сбор успокоительный Ш 3.

Практическая значимость.

Для лекарственного растительного сырья «Вербены лекарственной трава» определены необходимые показатели качества, которые использованы при составлении нормативной документации (НД): основные макро- и микродиагностические признаки сырья и его числовые показатели.

Показана возможность использования извлечений из лекарственного растительного сырья «Вербены лекарственной трава» для профилактики и лечения неврозов у детей. Доказана перспективность создания галеновых препаратов на основе травы вербены лекарственной, обладающих седативным, антигипоксическим, иммуномодулирующим, противовоспалительным, жаропонижающим и анальгетическим действием. Разработаны методики количественного определения содержания основных групп биологически активных веществ в сборах. Доказана возможность использования исследованных, сборов для профилактики и лечения неврозов у детей.

Составлеш НД на лекарственное растительное сырьё «Вербены лекарственной трава» и разработаны составы детских седативных сборов. Материалы по фармакологическим испытаниям указанных растительных объектов использованы при составлении отчетов по доклиническим ис-

следованиям, подготовленных к представлению в Фармакопейный и Фармакологический Государственные комитеты МЗ РФ.

Положения, выносимые на защиту:

• Результаты фармакогностического и фармакологического изучения травы вербены лекарственной - Verbena officinalis L., сем. Вербеновых --Verbenaceae Juss.

• Составы двух седативных сборов, рекомендуемых к применению в детской практике для профилактики и лечения детских неврозов.

• Результаты фармакогностического и фармакологического изучения двух детских седативных лекарственных сборов.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на VIII и IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002), на заседании общества фармакологов Санкт-Петербурга (2001), тучной юбилейной конференции «Итоги и перспективы развития традиционной медицины в России» (Москва, 2001).

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 179 страницах машинописного текста, работа иллюстрирована 69 таблицами, 40 рисунками и состоит из введения, 6 глав, обсуждения результатов, выводов, приложения и списка литературы, включающего 163 источника, из них 24 на иностранных языках.

Приложение включает проест нормативной документации на сырье - ФСП «Вербены лекарственной трава».

Во введении дано обоснование актуальности, новизны и практической значимости ыполненных исследований, сформулированы цели и задачи исследования.

В первой главе представлен обзор литературы, который посвящен анализу современного со-тояния проблемы профилактики и лечения детских неврозов с помощью лекарственных средств [риродного происхождения. Кроме того, представлены сведения о растениях, применение которых гелесообразно в случаях профилактики и лечения детских неврозов. Особое внимание при этом уде-[ено одному из основных компонентов детских седативных сборов - траве вербены лекарственной.

Материалы и методы исследования (Глава 2)

Объектами фармакогностического и фармакологического исследования служили 4 вида офици-1ального лекарственного растительного сырья: корневища с корнями валерианы лекарственной, (ветки боярышника, трава чабреца, трава сушеницы топяной и 1 вид неофициального растительного :ырья: трава вербены лекарственной (Verbena officinalis L.) - сем. вербеновых (Verbenaceae Juss.), а акже 2 сбора, составленные на их основе (табл. 1).

Таблица 1.

Наименование и состав седативных сборов

Состав сборов Содержание компонентов, %

"бор седативный № 1 Сбор седативный № 2

<орневища с корнями валерианы лекарственной Трава вербены лекарственной 30

Дветки боярышника Цветки боярышника 30

Грава чабреца Трава чабреца 30

Грава сушеницы топяной Трава сушеницы топяной 10

Лекарственное растительное сырье для проведения исследований было заготовлено в районе питомника лекарственных растений пос. Лемболово Ленинградской области или приобретено в аптеках Санкт-Петербурга. Трава вербены лекарственной была заготовлена на юге Воронежской области, 5 районе г. Россошь.

Для проведения предварительных фотохимических и фармакологических исследований были получены водные и спирто-водные извлечения из травы вербены лекарственной (ИВЛ):

№ 1 - водное извлечение (экстрагент- вода очищенная) (ИВЛ 1);

№ 2 - спирто-водное извлечение (экстрагент - 40% этанол) (ИВЛ 2);

№ 3 - спирто-водное извлечение (экстрагент - 70% этанол) (ИВЛ 3);

№4 - спирто-водное извлечение (экстрагент - 96% этанол) (ИВЛ 4);

а также водные извлечения из сборов.

Фармакогностическое, в том числе фитохимическое изучение JIPC и сборов проводили i кафедрах фармакогнозии и фармацевтической химии СПХФА. При этом использовали общепринят! методики, регламентируемые соответствующими статьями ГФ XI.

Подлинность определяли с помощью цветных химических реакций, а также методаи бумажной и тонкослойной хроматографии.

Количественное определение эфирного масла проводили методом № 1и № 2 (ГФ XI, вып.1,с 290), валепотриатов и флавоноидов - методом спектрофотометрии.

Определение товароведческих показателей и микробиологической чистоты сырья выполнено соответствии с методиками, приведенными в ГФ XI издания.

Фармакологические исследования извлечений были проведены на 1364 белых половозрелых неполовозрелых беспородных крысах самцах и 1135 белых мышах обоего пола, 108 кроликах по о щепринятым методикам [Руководство по доклиническим исследованиям, 2000], для чего готов и. водные и водно-спиртовые извлечения из JIPC и сборов по ГФ XI.

Острую токсичность оценивали по методу Миллера - Тейнтера (Беленький МЛ., 1963).

Экспериментальную оценку антигипоксической активности проводили на моделях ocrpi гипоксической гипобарической гипоксии (ОГБГ), острой гемической гипоксии (ОГГ) и смешанн гипоксии. Моделирование ОГБГ осуществляли при помощи барокамеры с приточно-вытяжн вентиляцией, где постепенно создавали разряжение до давления, которое соответствовало 12000 над уровнем моря - для крыс, для мышей - 11000 м над уровнем моря. ОГГ моделировали пут введения крысам нитрита натрия. Моделирование смешанной гипоксии осуществляли п перегревании мышей в термокамере до температуры 45 °С.

Для исследования особенностей поведения животных использовали усовершенствованный сг соб оценки их психофизиологического профиля. В работе были применены модифицированные тес «Открытое поле» и «Норковый рефлекс» (Е.Е. Лесиовская, 1993). Иммунотропные свойства извле' ний изучали на моделях реакции торможения миграции лейкоцитов (PTMJI) и в луночной реакц гемагглютинации (РГА), отражающей напряженность первичного иммунного ответа. Противовоа лительные свойства извлечений оценивали на модели «бутадионовой» язвы желудка и "ватной г] нулемы" у крыс. Оценку обезболивающей активности проводили на модели уксуснокислых корче! мышей. Жаропонижающие свойства оценивали на модели пирогеналовой лихорадки у крыс. Изу ние ранозаживляющего действия извлечений проводили на модели линейной кожной раны у кр]

>тхаркивающую активность изучали по влиянию извлечений на транспортную функцию мерцатель-ого эпителия слизистой оболочки носа кролика.

Микробиологические испытания проводили на кафедре микробиологии СПХФА под руково-;ством доцента Т.С. Потехиной по методикам общей статьи ГФ XI «Методы микробиологического :онтроля лекарственных средств».

Фармакогностическое изучение травы вербены лекарственной (Глава ЗУ С целью разработки проекта ФСП «Вербены лекарственной трава» в соответствии с требованиями ОСТ '1500.05.001-00 проводили морфологические и анатомические исследования лекарственного растительного сырья. Нами были определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья, включающиеся в характеристике макроскопических признаков травы вербены лекарственной, а шенно стеблей, листьев, цветков и плодов. При микродиагностическом анализе объектов следует об->ащать внимание на наличие одноклеточных толстостенных волосков по краю листа и вдоль жилок мжней стороны листовой пластинки, которые у основания окружены одним рядом округлых клеток шидермиса, а также железистых волосков с четырехклегочной головкой (Приложение 2, рис. 1,2, 3).

Следующим этапом исследования явилось определение групп БАВ в траве вербены 1екарственной.

Определение присутствия валепотриатов проводили методом ТСХ на пластинках «ЭПиГо!» ЦУ-254 восходящим способом в системе растворителей метилэтилкетон-гексан (3:7). Определение присутствия других классов биологически активных веществ было проведено с помощью качественных химических реакций, а также методом ТСХ. Для определения качественного состава герпеноидных соединений использовали ТСХ в системе метилэтилкетон-гексан (3:7) с последующей детекцией хроматограмм 1% раствором ванилина в концентрированной серной кислоте. Результаты фитохимического анализа представлены в табл. 2.

Анализ показал присутствие в извлечениях валепотриатов, терпеноидов и флавоноидов. Алкалоиды, сапонины и кумарины в сырье травы вербены лекарственной не обнаружены (табл. 2).

Таблица ^

Результаты фотохимического анализа извлечений из травы вербены лекарственной на

присутствие основных групп БАВ

№ Наименование Наименование группы биологически активных веществ

п/п исследуемого Флавоно- Терпеноиды Валепот- Алкало- Сапонины Кумарин

извлечения иды (эфирное масло) риаты иды

1. Водное + ■н- ++ - - -•

2. Водно-спиртовое + ++ ++ - - -

Примечание: «+» установлено наличие группы БАВ, «-» группа БАВ отсутствует.

Сравнение фотохимического состава травы вербены лекарственной и корневищ с корнями вале рианы показало, что и то и другое сырье содержит такую группу БАВ как валепотриаты. Изучени УФ - спектров спирто-водных извлечений корневищ с корнями валерианы лекарственной и трав вербены лекарственной показало наличие при длине волны 595 нм характерных максимумов попк щения. В этой связи для количественного определения содержания валепотриатов в траве вербен лекарственной нами были использован метод определения этой группы БАВ в корневищах с корням валерианы, изложенный в «Изменениях и дополнениях к Фармакопейной статье на лекарственж растительное сырье «Корневища с корнями валерианы лекарственной». Результаты исследован! представлены в табл. 3.

Для определения количественного содержания эфирного масла экспериментально бы; установлена необходимость использования метода № 2 (ГФ XI, вып. 1). Результаты количественно] определения эфирного масла для травы вербены лекарственной указаны в табл. 3.

Таблица

Результаты определения содержания эфирного масла и валепотриатов в траве вербены

лекарственной

Номер серии Эфирное масло Валепотриаты

Содержание, % Метрологические характеристики Содержание, % Метрологические характеристики

000901 1,61 х= 1,60 в = 0,01 вх = 0,0045 р =95% 1 - 2,78 Дх = 0,033 Д е = 2,6% 1,401 х=1,40 8 = 0,0016 Эх = 0,0007 р =95% г-2,78 Дх = 0,02 Д Е = 1,14%

000902 1,60 1,398

000903 1,61 1,40

000904 1,59 1,399

000905 1,59 1,402

Как видно из результатов, представленных в табл. 3, содержание эфирного масла в траве :рбены лекарственной должно составлять не менее 1,2%, а валепотриатов - не менее 1 %.

Следующим этапом исследования явилось определение числовых показателей сырья, олученные результаты представлены в табл. I (приложение 1).

Исследование микробиологической чистоты ЛРС свидетельствует о том, что все анализируемые :рии соответствовали по уровню микробиологической чистоты требованиям, предъявляемым ГФ XI лекарственному растительному сырью (категория 5.2).

Фармакологическое изучение травы вербены лекарственной (Глава 4)

При изучении спектра антигипоксической активности установлено, что извлечения из травы ;рбены лекарственной обладают выраженным эффектом на основных моделях гипоксических со-■ояний. По активности извлечения из травы вербены лекарственной не только не уступали, но в ряде 1учаев превосходили препараты сравнения гутимин и экстракт валерианы. Наиболее выраженный [)фект наблюдали у ИВЛЗ (экстрагент - 70% этанол) а дозе 1,0 мл/кг для мышей и 1,5 мл/кг - у

)ЫС.

У извлечений из травы вербены лекарственной выявлен седативный эффект. Он проявлялся в гажении у животных агрессивности, ориентировочной и поисковой активности. Эффект ИВЛЗ эевосходил действие экстракта валерианы (ЭВ). У извлечений из травы вербены лекарственной [кже были выявлены иммунотропное, противовоспачительнос, анальгетическое, ранозаживляющее, аропонижающее и отхаркивающее действия. Результаты исследования представлены в табл. 4.

Таблица 4.

Фармакологическая активность извлечений из травы вербены лекарственной

.ктивность Модель Извлечения, расположенные по убыванию активности (эффективная доза в мл/кг) Результаты исследований

1 2 3 4

нтигипок-иеская ОГБГ (280 мышей) ИВЛ 3 (1,0) > ИВЛ 1 (2,5) > > Гутамин (50 мг/кг) > > ИВЛ 2 (1,5) > ИВЛ 4 (1,5) У всех исследуемых извлечений выявлена антигипоксическая активность. Наиболее выраженное влияние на переносимость гипоксии отмечено у ИВЛ 3 в дозе 1,0 мл/кг

1 2 3 4

ОГБГ (290 крыс) ИВЛ 3 (1,5) > Гутимин (50 мг/кг)»ИВЛ1(1,5)> >ИВЛ 2 (1,5) > ИВЛ 4 (1,0) У всех исследуемых извлечений выявлен антитипоксическая активность. Наиболс выраженное влияние на переноси мост гипоксии отмечено у ИВЛ 3 в дозе 1,5 мл/кг

Перегревание (90 мышей) ИВЛ 3 (1,5)>ИВЛ4(1,0)> > Гутимин (50 ж/кг) к и ИВЛ 1 (1,5) и ИВЛ 2 (1,5). Выявлен фервопротекторный эффект, наиболс выраженный у ИВЛ 3 в дозе 1,5 мл/к продление жизни животных на 55%

ОГГ (70 мышей) ИВЛ 3 (1,5) > ИВЛ 2 (1,5) > ИВЛ 4 (1,0) > Гутимин (50 мг/кг)> ИВЛ 1(1,5) У всех исследуемых извлечений выявла антитипоксическая активность, у ИВЛ 3 в до: 1,5 мл/кг, продление жизни животных на 69%

Седативная Тесты «Открытое поле» и «Норковый рефлекс» в модификации (150 крыс) На ориентир, активность: ИВЛ 3 (1,0) > ЭВ > ИВЛ 4 (0,5) На поисковую активность: ИВЛ 3 (2,5) > ИВЛ 2 (5,0) » ИВЛ 1 (5,0) > ЭВ > ИВЛ 4 (1.5) Эмоциональная лабильность: ИВЛ 3 (5,0) < ИВЛ 1 (5,0)< контр.< ЭВ< ИВЛ 4 (2,5) < ИВЛ 2 (5,0) На агрессивность: ИВЛ 3 (1,2)>ИВЛ 2 (5,0) > ЭВ Снижение ориентировочной активности г сравнению с контролем у ИВЛ 3 (-58% в до: 1,0 мл/кг) и ИВЛ 4. Снижение поисковс активности у всех извлечений, у ИВЛ 3 (2 мл/кг) - на 61%. Увеличение эмоциональной лабильности пс влиянием ИВЛ 2 и ИВЛ 4. ИВЛ 1 и ИВЛ снижали эмоциональную лабильность. ИВЛ 2, ИВЛ 3 — снижали агрессивность кры эффект превосходил препарат сравнения. ИВЛ 1 и ИВЛ 4 не выявлено влияния 1 агрессивность

Наркоз, вызванный гексеналом (60 крыс) Увеличение времени наркоза: ИВЛ 3 (1,5)> ИВЛ 1 (1,5) > ИВЛ 2 (1,5) « ИВЛ 4 (1,0) а ЭВ У всех ИВЛ выявлено седативное действи Наиболее выраженный эффект наблюдали ИВЛ 3 (увеличение времени наркоза на 77%)

Иммуно-тропная РТМЛ (63 крысы) ИВЛ 3 (2,5) > ИВЛ 1 (1,5) > > левамизол (25 мг/кг) » » ИВЛ 2 (1,5) »ИВЛ 4 (1,0) Все ИВЛ снижают индекс мигращ лейкоцитов. Наиболее выраженный эффе! наблюдали у ИВЛ 3 в дозе 2,5 мл/кг (-56%)

1 2 3 4

РГА (110 мышей) Уровень тах разведения плазмы крови: ИВЛ 4 (1,0)< ИВЛ 2 (1,5) < ИВЛ 1 (1,5) < ИВЛ 3(1,0) Все исследуемые извлечения ограничивали снижение влияния циклофосфана на гуморальный иммунитет

¡отивовос-алительная «Бутадионо-вая язва» (60 крыс) Противоязвенная активность: ИВЛЗ (1,0)> масло облепихи> > ИВЛ 1 (1,5) в ИВЛ 4 (1,0)> > ИВЛ 2 (1,5) Все извлечения проявили противоязвенную активность, сопоставимую с действием масла облепихи. Действие ИВЛ 3 превосходило аналогичный эффект масла облепихи, ПА =3,43

«Ватная гранулема)) (60 крыс) ИВЛЗ (1,5) >ортофен (2,5 мг/кг) > ИВЛ 2 (1,5) >ИВЛ 4 (1,0) «ИВЛ 1(1,5) Все извлечения проявили противовоспалительную активность, главным образом за счет влияния на эксеудативную фазу воспаления

Таким образом, доказана перспективность использования травы вербены лекарственной в каче-ггве седативного средства для профилактики и лечения детских неврозов и целесообразность исполь-¡ования её в составе детских седативных лекарственных сборов.

Фармакогностическое изучение двух седативных сборов (Глава 5)

На основании анализа дачных литературы и результатов исследований, проводимых в СПХФЛ, ими были разработаны прописи двух детских седативных сборов, составы которых приведены выше.

В качестве сбора сравнения для оценки фармакологической активности был взят эфицинальный «Сбор успокоительный № 3» из-за сходства его по составу и фармакологическому действию (корневища с корнями валерианы лекарственной, трава чабреца) с исследуемыми сборами.

С целью установления макро- и микродиагностических признаков проведены исследования знешнего вида сборов и анатомического строения их компонентов. По полученным результатам составлены показатели подлинности сырья.

В сборе № 1 обнаружено наличие цельных или разрезанных кусков корневищ (корневища с корнями валерианы лекарственной), смесь цельных щитковидных соцветий и их частей (цветки боярышника), смесь цельных или частично измельченных тонких веточек, листьев, кусочков стеблей ^ цветков (трава чабреца), а также кусочки стеблей с серовато-белым войлочным опушением, стержне вых корней, листьев (трава сушеницы томной).

В сборе № 2 обнаружены куски четырехгранных стеблей, обрывки продолговатых листьев бледно-фиолетовых цветков и плодов (трава вербены лекарственной), смесь цельных щитковидны) соцветий и их частей (цветки боярышника), смесь цельных или частично измельченных тонких вето чек, листьев, кусочков стеблей и цветков (трава чабреца), а также кусочки стеблей с серовато-белы» войлочным опушением, стержневых корней, листьев (трава сушеницы топяной).

При микроскопическом исследовании сборов № 1 и № 2 установлены наиболее характерны! диагностические признаки, которые присущи каждому из компонентов сбора (Приложение 2, рис. 1 2, 3,4,5,6,7,8,9).

В соответствии с фотохимическим составом изучаемых сборов в их водных вытяжках должш присутствовать флавоноидные соединения, эфирные масла, валепотриаты, что было подтвержден! качественными химическими реакциями, а также бумажной и тонкослойной хроматографие! (флавоноиды, валепотриаты). Результаты ориентировочного фитохимического анализа сборо представлены в табл. 5.

Таблица'

Результаты ориентировочного фитохимического анализа изучаемых сборов

№ Наименование Наименование группы биологически активных веществ

п/п исследуемого сбора Флавоноиды Терпеноиды (эфирное масло) Валепотриаты Алкалоиды Сапонины Кумарины

2. Сбор Х° 1 + + + - - -

2. Сбор №2 + + + - - -

Таким образом, для оценки качества сборов было использовано содержание в них флавонощ ных соединений, эфирных масел и валепотриатов, так как именно эти группы биологически активны веществ обусловливают основной терапевтический эффект сборов.

Так как основной группой БАВ большинства компонентов сборов № 1 и № 2 были флавонои, ные соединения, нами было проведено количественное определение содержания суммы этой групп БАВ. Анализ агликонового состава флавоноидных соединений в сборах, полученных

юсле их гидролиза, показал, что они преимущественно относятся к производным фяавонола и мак-;имум поглощения УФ-спектров комплекса суммы агликонов сборов с аллюминия хлоридом близок к максимуму поглощения УФ-спекгра комплекса кверцетина-стандарта с аллюминия хлоридом (рис.10, триложение 2). Измерение оптической плотности комплекса суммы агликонов сбора с алюминия «лоридом проводили при длине волны 430 нм. Результаты количественного определения суммы фла-зоноидных соединений в сборах седативных X» 1 и № 2 представлены в табл. б, 7.

Количественное определение эфирных масел проводили с использованием метода № 1 по ГФ XI. Для определения содержания валепотриатов использовали методику их количественного определения в корневищах с корнями валерианы, приведенную в «Изменениях и дополнениях» к ФС на это лекарственное растительное сырье. Определения проводили в 5 партиях сырья (табл.б, 7).

Таблица 6.

Результаты определения количественного содержания основных групп БАВ в седативном сборе №1

Номер серии Эфирное масло Флавоноиды Валепотриаты

Содержание, % Метрологические характеристики Содержание, % Метрологические характеристики Содержание, % Метрологические характеристики

000901 0,089 х = 0.09 S = 0,002 Sx = 0,001 р =95% t = 2,78 Д х = 0,003 Д Е = 3,1 % 0,198 х = 0,208 S-0,0117 Sx = 0,0052 р =95% t = 2,78 Дх = 0,0145 Д в = 6,9% 0,259 х = 0,260 S-0,011 Sx= 0,0051 р = 95% t = 2,78 А х = 0,014 Д е = 3,25

000902 0,093 0,210 0,262

000903 0,090 0,212 0,260

000904 0,087 0,210 0,261

000905 0,089 0,211 0,259

Таким образом, в сборе седативном № 1 количественное содержание эфирного масла должно быть не менее 0,08%, валепотриатов - не менее 0,2%, флавоноидов- не менее 0,2%.

Результаты определения содержания флавоноидов и валепотриатов в ссдативпом сборе № 2

Номер серии Флавоноиды Валепотриаты

Содержание, % Метрологические характеристики Содержание, % Метрологические характеристики

000901 0,211 х = 0,206 Б = 0,0112 Бх = 0,0048 р =95% 1 = 2,78 Дх = 0,0138 Д Е = 3,6% 0,322 х = 0,320 8 = 0,0179 Бх = 0,008 р =95% 1-2,78 Дх = 0,022 Д £ = 3,9%

000902 0,211 0,319

000903 0,210 0,320

000904 0,199 0,321

.000905 0,198 0,320

Таким образом, в сборе седативном № 2 количественное содержание валепотриатов должно быть не менее 0,3%, флавоноидов - не менее 0,2%.

Основные числовые показатели сборов были определены в соответствии со статьей ГФ XI «Сборы». Результаты анализа сборов, а также регламентируемые показатели, предложенные для проекта ФСП представлены в табл. 2 (приложение 1).

Исследование микробиологической чистоты ЛРС и его водных извлечений показало, что анализируемые серии соответствуют по уровню микробиологической чистоты требованиям, предъявляемым ГФ XI к лекарственному растительному сырью.

Хранение ЛРС осуществлялось в естественных условиях при температуре 15-25 °С и относительной влажности 30-60%. На основании изучения стабильности сборов при хранении установлен срок годности - 2 года.

Полученные результаты использованы при разработке НД на детский седативный сбор № 1 и детский седативный сбор № 2.

Фармакологическое изучение двух седативных сборов (Глава б)

Показаниями к применению разработанных сборов могут служить неврозы различного происхождения, повышенная возбудимость нервной системы, головные боли, неврастения, вегетоневрозы, истерия, мигрень, бессонница, гипертоническая болезнь в ранней стадии, неврозы сердечнососудистой системы.

Противопоказаниями могут быть гломерулонефрит, хронический энтероколит, гипотония, тромбофлебит, желчекаменная болезнь.

Оценку фармакологической активности изучаемых сборов проводили в экспериментах на 3-х видах лабораторных животных (мыши, крысы, кролики). В качестве сбора сравнения в исследования*

был выбран сбор успокоительный № 3. Для изучения острой токсичности готовили водные извлечения из сборов, используя соотношения сырья и экстрагента 1:5, 1:10, 1:50. Извлечения вводили внутрибрюшинно в широком диапазоне доз от 10 до 200 мл/кг массы тела. Определить ЛД50 не представлялось возможным, поскольку гибели животных при введении максимально возможных доз не отмечено. Таким образом установлено, что водные извлечения из сборов нетоксичны.

При изучении спектра антигипоксической активности сборов было установлено, что извлечения из сборов № 1 и № 2 обладают выраженным эффектом на основных моделях гипоксических состояний. По активности извлечения из сборов № 1 и № 2 не уступают, а в ряде случаев превосходят препараты сравнения гутимин и сбор успокоительный № 3. Наиболее выраженный антигипоксический эффект наблюдался у извлечения из сбора № 2.

Извлечения из сборов вызывали снижение у животных агрессивности, ориентировочной и поисковой активности, которое бы по сопоставимо с действием сбора успокоительного № 3 или превышало его. Наибольшим седативным действием обладало извлечение из сбора № 2. Результаты исследований представлены в табл. 8.

Таблица 8.

Фармакологическая активность водных извлечений из сборов

Активность Модель Извлечения, расположенные по убыванию активности (эффективная доза в мл/кг) Результаты исследования

1 2 3 4

Антигипок-сическая ОГБГ (230 мышей) сбор № 2 (1,5) > сбор № 1 (1,0)> гутимин (50 мг/кг) > > сбор № 3 (2,5) У всех исследуемых извлечений выявлена антигипоксичсская активность. Наиболее выраженное влияние на переносимость гипоксии отмечено у извл. из сбора № 2 в дозе 1,5 мл/кг

ОГБГ (240 крыс) сбор № 2 (1,5) > гутимин (50 мг/кг) » сбор № I (1,0)> > сбор № 3 (2,5) У всех исследуемых извлечений выявлена антигипоксическая активность. Наиболее выраженное влияние на переносимость гипоксии отмечено у извл. из сбора № 2 в дозе 1,5 мл/кг

Перегревание (70 мышей) сбор № 2 (1,5) > гутимин (50 мг/кг) > сбор № 3 (2,5> > сбор № 1(1,0) У извлечения из сбора № 2 выявлен фервопротекторный эффект, продление жизни животных составило 27%

1 2 3 4

огг (70 мышей) сбор № 2(1,5) > сбор № 3 (2,5)> > гутимин (50 мг/кг)« » сбор № 1(1,0) У всех извлечений выявлена антигипоксичес-кая активность, извлечение из сбора № 2 продлевало жизнь животных на 92%

Седатишая Тесты «Открытое поле» и «Норковый рефлекс» в модификации (110 крыс) Влияние на: 1) ориентировочную активность сбор № 2 (2,5) > сбор Jfe 3 (1,5)« сбор № 1(1,5) 2) поисковую активность сбор № 2 (2,5) > сбор 3 (5,0) > сбор №1(5,0) 3) Снижение агрессивности: Сбор № 2 (5,0)> Сбор № 1 (1,0)« Сбор №3 (0,5) Снижение ориентировочной активности по сравнению с контролем: сбор № 2 на 46% в дозе 2,5 мл/кг. Снижение поисковой активности по сравнению с контролем: сбор № 2 (2,5 мл/кг) - на 70 %, сбор № 1 (5,0 мл/кг) - на 27 %. У сбора Ха 2 было обнаружено седативное действие, превосходившее сбор успокоительный № 3

Наркоз, вызванный гексеналом (40 крыс) Увеличение времени наркоза: сбор № 2 (1,5) > сбор № 3 (2,5) и сбор № 1(1,0) У всех сборов выявлено седативное действие. Наиболее выраженный эффект наблюдали } сбора № 2 (увеличение времени наркоза на 84%)

Иммуно-тропная РТМЛ (47 крыс) Индекс миграции: сбор № 2 (1,5) > сбор № 3 (2,5)« сбор № 1(1,0) Все ИВЛ снижают индекс миграцт лейкоцитов. Наиболее выраженный зффег наблюдали у сбора N2 2 в дозе 1,5 мл/кг (-52%)

РГА (95 мышей) Уровень max разведения плазмы крови: сбор № 2 (1,5) > сбор № 3 (2,5) > сбор № 1(1,0) Все исследуемые извлечения обеспечивав снижение влияния циклофосфана н; гуморальный иммунитет. Наиболее выражен ный эффект был - у извлечения из сбора № 2

Потивовос-палительная «Бугадионо-вая язва» (50 крыс) Противоязвенная активность: сбор № 2 (1,5) > масло облепихи « сбор № 3 (2,5) « сбор № 1(1,0) Под влиянием извл. из сборов наблюдал! снижение числа средних и крупных язв : индекса Паульса. Действие извл. из сбора № : превосходило эффект масла облепихи

«Ватная гранулема» (50 мышей) Ортофен (2,5 мг/кг)» сбор № 2 (1,5) > сбор №3 (2,5) > > сбор № 1 (1,0) Все извлечения из сборов подавляли стади экссудации и пролиферации. Действие извл. и сбора№ 2 сопоставимо с ортофеном

У извлечений из сборов № 1 и № 2 выявлены также анальгстические, жаропонижающие, рано-заживляющие и отхаркивающие свойства.

Таким образом, фармакологическими исследованиями подтверждена рациональность прописей сборов седативных № 1 и № 2, предлагаемых для профилактики и лечения неврозов у детей.

Выводы

1. Выявлены наиболее перспективные виды лекарственного растительного сырья для профилактики и лечения неврозов у детей, такие как корневища с корнями валерианы лекарственной, цветки боярышника, трава чабреца, трава сушеницы топяной, трава вербены лекарственной.

2. Проведено фармакогностическое изучение травы вербены лекарственной, определены основные макро- и микродиагностические признаки сырья и такие числовые показатели как: содержание эфирного масла, валепотриатов, экстрактивных веществ, влажность, содержание золы общей и золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, измельченпость.

3. Определено количественное содержание основных групп биологически активных веществ в сырье: валепотриатов в траве вербены лекарственной должно быть не менее 1%, а эфирного масла - не менее 1,5 %. Эти показатели включены в проект ФСП на траву вербены лекарственной.

4. Впервые проведено изучение фармакологической активности четырех извлечений из травы вербены лекарственной и доказано, что они не токсичны, проявляют выраженную седативную и антигипоксическую активность на основных моделях гипоксий.

5. Для извлечений из травы вербены лекарственной характерно наличие иммунотропного, противовоспалительного, анальгетического, жаропонижающего, ранозаживляющего и отхаркивающего действия.

6. Впервые проведено фармакогностическое изучение разработанных сборов, определены макро- и микродиагностические признаки сборов и такие числовые показатели как: содержание эфирного масла, валепотриатов, экстрактивных веществ, содержание примесей, влажность, зольность, измельчегаюсть. Проведен фотохимический анализ сборов. Предложены методики количественного определения содержания основных групп биологически активных веществ в сборах.

7. Впервые проведено изучение фармакологической активности извлечений из сборов и доказано, что они не токсичны, проявляют выраженную седативную и антигипоксическую активность на основных моделях гипоксий.

8. Извлечения из сборов проявляют иммунотропный, противовоспалительный, ранозаживляю-щий, анальгетический, жаропонижающий и отхаркивающий эффекты, не уступающие ил у. превосходящие действие препаратов сравнения.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. JI.B. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская, Н.Ю. Фролова, С.М. Бахтина, В.Ц. Болотова, Е.В Дрожжина, Н.В. Марченко, Е.Л. Тамм, А.Г. Терещенко, O.A. Хассельхорст, Фитопрофилактика и фитотерапия гипоксических состояний // Ремедиум Северо-запад, 2001 г №6(10). -С. 9-17.

2. ЕЕ. Лесиовская, Л.В.Пастушенков, Е.И. Саканян, К.Э.Кабишев, Л.Ф. Мельникова, О.А Хассельхорст. Фитотерапия в комплексном лечении дерматитов // Фармэкспресс, №12, 2000 г - С. 5-8.

3. Е.Е. Лесиовская, O.A. Хассельхорст, Н.Ю. Фролова. Фитотерапия в реабилитации больных перенесших острый гепатит вирусной этиологии // Aqua Vitae, №3,2000 г. - С.34-37.

4. O.A. Хассельхорст, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская. Фитохимическое и фармакологически изучение травы вербены лекарственной // Материалы научной юбилейной конференцш «Итоги и перспективы развития традиционной медицины в России», М., 2001. С. 221-223.

5. O.A. Хассельхорст, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская. К вопросу о разработке детски* седативных сборов // Материалы научной юбилейной конференции «Итоги и перспективь развития традиционной медицины в России», М., 2001. С. 218-221.

6. O.A. Хассельхорст, Е.И.Саканян, К.Э.Кабишев Разработка методики определения количест венного содержания валепотриатов в траве вербены лекарственной Verbena officinalis L. (По дана в печать в журнал «Растительные ресурсы», 2002 г.).

7. О.А.Хассельхорст. Антигипоксические свойства вербены лекарственной Verbena officinalis L //Материалы IX Российского конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2002 г., С. 716.

8. Lessiovskaya Е., Sakanyan Е., Bachtina S., Bolotova V., Marchenko N., Hasselhorst О. Herbal anti hypoxants in the therapy of stress И Abstracts of the 3rd Meeting of the Federation of the Europeai Pharmacological Societies - Ephar, 6-9 July 2001.- Lyon, France - P. 97.

Приложение 1.

Числовые показатели сырья «Трава вербены лекарственной»

Наименование показателей Среднее содержание, % Регламентируемый показатель для проекта ВФС, %

Цельное сырье Измельченное сырье

Экстрактивных веществ, извлекаемых воюй очищенной 26,12 ± 1,1 Не менее 25,0 Не менее 25,0

Содержание валепотриатов 1,40 ±0,002 Не менее 1,0 Не менее 1,0

Содержание эфирного масла 1,6 + 0,013 Не менее 1,2 Не менее 1,2

Содержание влаги 5,84 ±0,1 Не более 8 Не более 8

Содержание золы общей 6,11 ±0,1 Не более 8 Не более 8

Содержание золы, нерастворимой в 10% >астворе хлористоводородной кислоты 1,34 ±0,03 Не более 2 Не более 2

Содержание органической примеси 1,10±0,031 Не более 1,5 Не более 1,5

Содержание минеральной примеси 0,60 ±0,009 Не более 1 Неболее1

1астиц, не проходящих сквозь сито с от-:ерстиями диаметром 7 мм 3,2± 0,05 Не более 5

1астиц, проходящих сквозь сито с отвер-тиями диаметром 0,25 мм 2,8± 0,02 Не более 5 Не более 5

Приложение 1.

Числовые показатели сборов

Наименование показателей Наименование сбора

Сбор седативный № 1 (содержание, %) Сбор седативный № 2 (содержание, %)

Среднее значение Регламент, показатель Среднее значение Регламеш показател

1 2 3 4 5

Эфирное масло 0,09 ±0,003 Не менее 0,08 следы -

Валепотриаты 0,26 ±0,014 Не менее 0,2 0,32 ±0,022 Не менее 0

Флавоноиды 0,21 ±0,015 Не менее 0,2 0,21+0,014 Не менее 0

Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой очищенной 15,42 ±0,25 Не менее 12 12,71 ±0,14 Не менее ]

Влажность 7,8 + 0.11 Не более 10 8,3 ±0,305 Не более 1

Зола общая 12,9 + 0.20 Не более 15 8,7 ±0,065 Не более 1

Зола, не растворимая в 10%-ном растворе хлористоводородной кислоты 3,52 + 0,039 Не более 5 3,0 ±0,027 Не более

Частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,315 мм 5,0 + 0,07 Не более 5 5,0 ± 0,09 Не более

Частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм 10,1 ±0,16 Не более12 10,1 ±0,07 Не более 1

Содержание других частей растений:

Валерианы лекарственной (остатков листьев, стеблей) Отсутствуют Не более 3

Боярышника (веточек, листьев) 4,8 + 0,02 Не более 5 5,0 ±0,07 Не более

Чабреца (кусочков стеблей, толщиной больше 0,5 мм) Отсутствуют Не более 1 Отсутствуют Не более

Органическая примесь 1,16 + 0,015 Не более 2 1,0 ±0,03 Не более

Минеральная примесь 1,0 ±0,025 Не более2 1,0 ±0,039 Не более

Рие.1. УФ-спектры раствора 2.6-дихяорфенсяиндофенолятэ натрия в фосфатном буферном растворе (1), хлороформного извлечения из корней о корневищами валерианы (2) и травы вербены (3). Па оси обсцисс - длина волны, нмг; по оси ординат -оптическая плотность.

Содержание валтрата, мг/мл Рис.2. Калибровочный график

длина когоы, ны

Рис.3. УФ-спеетры спиртового раствора флааокоцдных соединений сбора седзтданого №1 в еяирте этиловом 95% с добавлением алюминия хлорида (1), без алюминия хлорида (2), раствор кверцегина в спирте этиловом 95% с

добавлением алюминия хлорида (3) j

На правах рукописи

ХАССЕЛЬХОРСТ Ольга Анатольевна

Разработка составов седативных лекарственных сборов для детской практики, их фармакогностическое и фармакологическое изучение

15.00.02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ЛР № 021251 от23.10.97. Подписано в печать 23.04.2002. Формат 60 х 90/16. Бумага тип.

_Печать ризограф. Заказ 406. Тираж 100 экз._

Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Издательство СПХФА — член Издательско-полиграфической ассоциации вузов Санкт-Петербурга 197376, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14