Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакодинамика и некоторые аспекты механизма противовоспалительного действия суппозиториев с облепиховым маслом

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ НИИ ФАРМАКОЛОГИИ И ТОКСИКОЛОГИИ

На правах рукописи

ПЕТРЕНКО ИРИНА ГРИГОРЬЕВНА

УДК 615.454.2: 547.995.17: 616.348-002

ФАРМАКОДИНАМИКА И НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ МЕХАНИЗМА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ОБЛЕПИХОВЫМ МАСЛОМ

14.00.25 — Фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Харьков — i960

Работа выполнена в Харьковском государственном фармацевтическом институте.

Научные руководители:

— доктор медицинских наук, профессор А. И. Березнякова;

— доктор биологических наук, профессор А. К. Гулевскнй.

Официальные оппоненты:

— доктор медицинских наук В. С. Даниленко;

— доктор медицинских наук Ю. А. Фурманов.

Ведущая организация — 2-й Московский ордена Ленина медицинский институт им. Н. И. Пирогова.

Защита состоится „_"_1990 года в_ час.

_мин. на заседании специализированного совета Д 088.19.01

при Киевском научно-исследовательском институте фармакологии и токсикологии ¿по адресу: 252057, г. Киев, ул. Эжена Потье, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Киевского научно-исследовательского института фармакологии и токсикологии.

Автореферат разослан .,2/7 * Н-Р-М*,^ 1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

А. П. ЗАИКА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы наблюдается значительный рост заболеваний прямой киаки. Так, по данным В.Д.Федорова", Ю. В.Дульцева (1934), болезни прямой и толстой кишок встречаются в среднем у 300 из 1000 обследуемых. В 70-е и 80-е годы они начали приобретать все большее социальное значение, поскольку-стали причиной длительной нетрудоспособности и инвалидизадаи людей как покилого, так и молодого возраста. В связи с этим, актуальной проблемой современной медицины является разработка новых методов лечения данной нозологической группы болезней. Важность проблемы обусловлена также и тем, что лечение воспалительных заболеваний одновременно является и основным методом профилактики рака прямой и ободочной кишок (А.М.Аминев,1971; 1979).

Несмотря на то, что среди методов лечения в проктологии преобладают хирургические, многие формы проктита нуждаются в консервативной медикаментозной терапии. При этом все большее внимание привлекают препараты различных лекарственных форм из растений и продуктов их переработки. Анализ исследований биологической активности препаратов из лекарственных растений, употребляемых в проктологии, позволил выделить облепиховое масло в жидкой лекарственной форме. Оно' оказывает ранозат.ивлягощее, болеутоляющее, бактерицидное, противовоспалительное действие (В.Г.Коноплева,1963; Б.А.Файман,1968; Э.Г.Баэарон и др. ,1985; Н.Е.Акмолова, Л.Д.Лебедева, 1985).

Особое внимание в проктологии уделяют таким лекарственном формам, как ректальные суппозитории. Они обеспечивают удобное и экономичное дозирование, способствуют быстрому и полному всасыза-што лекарственного препарата, не требуют иммобилизации пациента.

Отечественная промышленность выпускает пять наименований

суппозиториев, содержащих лекарственные растения (М.Д.Машков-ский,1987). Однако все они содержат только экстракт красавки и обладают, в основном,- спазмолитическим и болеутоляющим действием. Широкий спектр биологической активности облепихового масла и недостаток ректальных суппозиториев противовоспалительного действия на основе сырья из лекарственных растений делают актуальными исследования, направленные на изучение новой лекарственной формы - суппозиториев с облепиховым маслом.

Цель работа. Изучение специфической активности, возможного общетоксического действия и некоторых механизмов противовоспалительного эффекта суппозиториев с облепиховым маслом.

Задачи исследования:

1. Определить острую токсичность и эффективную дозу суппозиториев с облепиховым маслом.

2. (Ьучить лечебное действие суппозиториев с облепиховым маслом на модели экспериментального проктита.

3. Исследовать некоторые стороны механизма противовоспалительного действия, изучив при этом влияние облепихового масла на эффективность окислительного фосфорилирования, ионный транспорт

и перекисное окисление липидов в изолированных митохондриях печени крыс, а также суппозиториев с облепиховым маслом на спонтанную и индуцированную хемилюминесценцию гомогенатов ткани прямой кишки цри экспериментальном проктите.

4. йивить влИ). ¡ие суппозиториев с облепиховым маслом на органы и системы организма при длительном введении.

Научная новизна состоит в том, что предложена новая" лекарственная форма - ректальные суппозитории с облепиховым маслом. Впервые установлено, что суппозитории с облепиховым маслом обладают противовоспалительным действием. Дрказана безвредность на

органы и системы организма в хроническом эксперименте. Впервые показано, что облепиховее масло вызывает увеличение ионной проницаемости внутренней мембраны митохондрий и снижает эффективность окислительного фосфорилирования. Установлено, что суппозитории с облепиховым маслом ингибируют Н^О^-индуцированную хемилюминесцен-цию гомогенатов прямой кишки крыс при экспериментальном проктите.

Практическая значимость. Результаты доклинического изучения специфической активности и безвредности суппозиториев с облепихо-вым маслом и инструкция по их применению представлены е Фармакологический комитет МЗ СССР. Согласно протоколу Фармакологического комитета I? 12 от 28 июля 1987 г. ректальные суппозитории с об-лепиховым маслом проходят клинические испытания в 5 клиниках страны.

Основные полояения диссертации, выносимые на за:г,иту:

1. Суппозитории с облепиховым маслом обладают выраженным противовоспалительным действием при экспериментальном проктите и не оказывают отрицательного влияния на органы и ткани при длительном' применении.

2. Механизм противовоспалительного действия суппозиториев с облепиховым маслом связан с их влиянием на эффективность окислительного фосфорилирования и на перекисное окисление липидов.

Апробация работы проведена на объединенном заседании сотрудников кафедры фармакологии Харьковского фармацегтического института, Украинского института усовершенствования врачей ; физиологии, биохимии, патологии, микробиологии, аптечной технологии Харьков- -ского фармацевтического института.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Второй республиканской конференции по медицинской ботанике (Киев, 1988) ; областной конференции молодых ученых и специалистов (Харьков, 1988) ; научно-практической конференции молодых ученых-медиков

"Научно-технический прогресс в медицине" (Харьков, 1989) ; заседании областного общества фармакологов (Харьков,1990).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ, в которых отракено ее основное содержание.

Структура диссертации. Диссертация изложена на ПО страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 181 источник, в том числе 120 отечественных и 61. зарубежных авторов. Результаты исследований представлены в 25 таблицах и на 13 рисунках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования были проведены на 412 животных, в том числе: 264 беспородных белых крысах обоего пола массой 180-200 г, 60 Кролях породы шинпилла массой 2,9-3,0 кг, 88 морских свинках массой 400-600 г.

Специфическую активность суппозиториев с- облепйховьм маслом изучали на модели экспериментального проктита, разработанной во ШЮКТЛС и у совершенство ванной на ка-• федре заводской технологии лекарств ХГФИ (Г.В.Оболенцова, Я. И.Хад-кай, И.Л.Егоров,1972). Проктит вызывали 40 %- нм водным раствором формальдегида в форме пенного аэрозоля, который вводили в прямую кишку крыс, кроликов, морских свинок в дозе 0,1 мл на глубицу 23 см. Аэрозоль ввс или I раз в сутки в течениз 3-х дней. Митохондрии почеки крыс выделяли методом дифференциального центрифугирования (И.М.Мосолова и др.,1975). Срэда выделения содержала 300 мМ сахарозы, 10 кМ трис- Н(£ , 0,5 мМ ЭДГА (рЦ 7,4). Острую токсичность суппозиториев с облепиховым маслом изучали при ректальном пути введения на морских свинках обоего пола. Свечи вводили в рав-. номерно возрастающих дозах от 2 (1,64 г облепихового масла/кг

массы тела) до 5 (4,10 г/кг) с интерсалом в 45 мин. Наблюдение за животными вели в течение 14 дней. Эффективную дозу суппозиториев с облепиховым маслом рассчитывали методом Б.М.Штабского (1980), основанным на зависимости эффекта от испытанных доз.

Анализ крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, СОЭ) определяли унифицированным методом (Е.А.Кост,1975 ; В.В.Меньшиков,1987).

0 действии суппозиториев с облелиховым маслом на органы и системы при длительном применении судили по:

- состоянию сердечно-сосудистой системы - ЗКГ и по артериальному давлению (Е.К.Приходькова,1961 ; Л.Д.Нурик,1971) ;

-функциональному состоянию печени - количеству белка в сыворотке крови и его фракционному составу (5. И.Комарова и др.,1976; Н.А.Кравченко, О.П.Самарина, М.Г.Кри^ан, 1953) ; количеству билирубина (О.И.Комарова и др., 1975), холестерина (В.Г.Колб,1902), активности трансаминаз (В.Г.Колб,1982) ;

-функциональной активности почек - количеству белка в моче, удельной массе,.остаточного азота мочевины в сыворотке крови (В. В.Меньшиков, 1987) ;

- функциональному состоянию поджелудочной

к е л е з ц, косвенно печени и надпочечников по уровню сахара в сыворотке крови (О.И.Комарова и др., 1976).

Дыхательную активность митохондрий измеряли полярографически (Я.Кута, Я.Тейровский,1959) с помощью закрытого электрода Кларка на полярографе ПА-3 (Венгрия) в I мл среды инкубации, содержащей 250 мМ сахарозы, 30 мМ трис- М(Х , 5 мМ JltQtti , 5 мМ KHiPOt, , 8 мМ сукиината.

0,5 мМ ЭДТА (рН 7,4) при 26 °С. По кривым потребления кислорода рассчитывали скорость дыхания в различных метаболических состояниях, величину дыхательного контроля (Ж) и коэффициент фосфорилирования

Протонную проницаемость мембран митохондрий исследовали по их набуханию в изотоническом растворе нитрата аммония {¡¡Р^Ьюе/ьС'У' ,1970) на спектрофотометре (ГДР,) цри 546 нм. Умеренно интенсивности перекисного окисления липидов мембран митохондрий проводили по накоплению малонового диальдегида, образующего окрашенный комплекс с тиобарбитуровой кислотой (Ю.А.Владимиров, А.И. Арчаков, 1972).

Интенсивность спонтанной и Н^О^-индуцированной хемилгоминес-ценции в гомогенатах прямой кишки определяли согласно работе ( Мол ,1985) на жидкостном сцинтиляционном счетчике импульсов " ЬосКмаи 7800" (США).

Определение белка в митохондриях проводили методом Лоури

Данные биохимических, клинических и лабораторных исследований сопоставляли с данными гистоморфологического изучения внутренних органов. Для этого экстирпированные органы фиксировали в 10 %- ом нейтральном растворе формалина, уплотняли в спирте возрастающей концентрации, заливали в целлоидин; каждый пятый срез окрашивали гематоксилин-эозином Эрлиха и выборочно микрофуксином по Ван-Гизону.

' Статистическую обработку данных проводили по методу Стью-дента-'' тпера (П.Ф.Рскитский,1967).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При определении острой токсичности ни в одной из опытных групп гибели животных не наблюдали. ЛДзд при ректальном способе введения установить не удалось. По классификации К.К.Сидорова (1973) суппозитории с облепиховым маслом относятся к практически нетоксичным соединениям.

1Ьучение эффективности лечебного действия суппозиториев с облепиховым маслом было проведено на модели экспериментального проктита. Экспериментальный проктит вызывали введением в прямую киэку водного раствора формальдегида в виде пенного аэрозоля. Воспалительный процесс, вызванный формальдегидом, имеет продолжительное течение, что удобно для оценки эффективности препарата.

Эксперименты были проведены на двух видах животных: 25 кроликах породы шикяилла обоего пола и 25 морских сг.инках обоего пола. Суппозитории с облепихоЕим маслом вводили в эффективной дозе - 2,38 г/кг. Препарат пун сравнения служили облепиховое масло в жидкой лекарственной форме и пенный аэрозоль "гипозоль", содержащий облепиховое масло.

Выраженный воспалительный процесс развивался на третий день • введения формальдегида. При оценке эффективности суппозиториев учитывали общее состояние животных: поведение, состояние шерстного покрова, массу тела, ректальную температуру; клинические проявления воспаления: гиперзмию вокруг анального чтвзретия, отек слизистой прямой хкаки ; гематологические показатели: количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитарную формулу; Суппозитории с облепиховым маслом и препараты сравнения начинали вводить па пике воспаления один раз в день.

Результаты исследования показали, что у животных после воспроизведения проктита нарастали как местные, так и общие признаки

воспаления. Клинически это проявлялось резкой гиперемией пери-анальной области, гнойными выделениями из ануса. Проявлением тяжести воспаления явилось повышение ректальной температуры на 2° С по сравнению с исходными величинами. Значительные изменения были выявлены со стороны периферической крови. На высоте проктита лейкоцитоз наблюдался во всех исследуемых группах животных с экспериментальным проктитом. У нелеченых животных число лейкоцитов увеличивалось и достигало максимального уровня к 0-м сут развития проктита (рис.1). В это время число лейкоцитов более чем в 2 раза превшало значения исходных величин оутоконтроля и у интактных животных. Резко увеличивалось СОЭ (рис.2). На пике воспаления значение СОЭ возрастало в 4-5 раз по сравнению с интактными животными и с исходным уровнем аутоконтроля. У животных без лечения увеличение СОЭ наблюдали и в последующие дни заболевания (рис.2).

16

т 2 12

о «

Ю

ч

о ю к о

О)

о Й5

г

3 6 Лни 9

Рис.1. Содержание лейкоцитов у морских свинок при экспериментальном проктите без лечения (4), при лечении суппозиториями с облепиховым маслом- (I), облепиховым маслом (2) и "гипозолем" (3). Пунктир - показатели аутоконтроля

3

8 С1

со о о

12

3 4

3 4

• 3 6 9 Дней лечения

Рис.2. СОЭ при экспериментальном проктите у морских свинок: 1-исходные данные; 2-нз пике проктита; 3-дри лечении суппозиториями с облепиховым маслом; 4-без лечения

При подсчете лейкоцитарной формулы установлено, что на пике проктита увеличивалось количество нейтрофилов во всех исследуемых группах животных. Бресте с тем, при развитии экспериментального проктита не было выявлено изменений в содержании гемоглобина и количества эритроцитов.

При лечении проктита суппозиториями с облепиховым маслом, "гипозолем" и облепиховым маслом "наблюдали улучшение общего состояния животных: исчезала отечность перианальноЬ области, уменьшалась гиперемия, прекращались гнойные выделения из ануса и диарея. Температурная реакция была непродолжительной. Так, у кроликов, которым вводили суппозитории с облегшховчм маслом и облепи-ховое масло, ректальная температура после 3-х дней лечения была еще на 1,5 °С выше исходных величин, и через б дней лечения практически не отличалась от значений в аутэконтроле и у интактных

Ю -

животных. Ректальная температура у групп животных, получаших "гипозоль", оставалась повышенной и на 3-й, и на 6-й дни лечения более чем на 1,0 °С, а нормализовалась только к 9-му дню. В группе нелеченых животных температура снижалась медленно, и через 9 дней после развития проктита оставалась повыленной на 1,4 °С.

Лейкоцитоз, как правило, был менее выражен в случае использования суппозиториев с облепиховым маслом. Цри употреблении об-лепихового масла и "гипозоля" на 6-й день лечения количество лейкоцитов у морских свинок составляло 9,4 и 13.0 Г/л соответственно, против 7,8 Г/л в аутоконтроле и 14,5 Г/л в контроле, и только к 9-му дню лечения нормализовалось (рис.1). Аналогичные изменения были выявлены у кроликов.

Исследования динамики СОЭ показали, что в группах животных, получаших суппозитории с облепиховым маслом, она достигала уровня исходных величин к 6 -му дню лечения, а при применении "гипозоля" и облепихового масла - к 9-му (рис.2).

Масса тела животных, а также содержание эритроцитов и гемоглобина не изменялись в течение всего периода опыта. Полученные на кроликах й морских свинках данные свидетельствуют о том, что специфическое лечебное действие суппозиториев с облепиховым маслом. не зависит от пола и вида животных.

Клиническое течение проктита и лечебный эффект суппозиториев .с облепиховым маслом подтверждалис: гистоморфологическими исследованиями. Анализ результатов подтвердил развитие проктита на 3-й день введения формальдегида: некроз охватывал всю толщу стенки прямой кишки и параректальные ткани. У животных без лечения наблюдали обильную полиморфно-клеточную инфильтрацию с преобладанием сегментоядерных лейкоцитов. При лечении экспериментального прокти та суппозиториями с облепиховым маслом и "гипозолем" уже на 3-й

день отмечали значительное улучшение морфологической структуры прямой кийки. Лечение стимулировало развитие грануляционной ткани. Наблюдали постоянное опережение репаративных процессов у леченых животных по сравнению с нелечеными. На 6-е сутки у животных, почучавлих "гипозоль", отмечали завершающий этап репаративных процессов - созревание соединительной ткани, а у животных, которым вводили суппозитории с облепиховнм маслом, морфологическая картина прямой кишки не отличалась от нормы. Таким образом, была доказана эффективность противовоспалительного действия суппозиториев с облепиховам маслом при экспериментальном проктите и их преимущество перед аэрозолем "гипозоль" и облепиховым маслом в жидкой лекарственной форме. Сроки выздоровления сокращались на 3 дня.

Сведения о механизме противовоспалительного действия облепихового масла малочисленны и сводятся, в основном, к определению его эффективности в условиях острого опыта на моделях формалинового, каррагонинового, каолинового отеков. Влияние облепихового масла на патогенетические звенья воспалительного процесса на мембранном уровнем практически не изучены. Митохондрии являются удобной моделью для изучения механизма действия различных факторов на биологические мембраны, поскольку их функциональная активность тесно связана со структурной целостностью внутренней мембраны. В связи с этим исследовали действие облепихового масла! на эффективность окислительного фосфорилировакия и ионную проницаемость изолированных митохондрий печени крыс.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что облепихо- • вое масло в диапазоне концентраций 20-200 мкг/мг белка дозозави-симо влияло на функцию митохондрий (рис.3). Так, в концентрации 40 мкг/кг белка оно приводило к снижению ДК по Ларди до 2,3+0,2 (контроль - 4,0_ь0,2), коэффициента фосфорилирования АД®/0 до 1,56+0,10 (контроль - 1,89+0,10). При увеличении концентрации об-

лепихового масла наблюдали дальнейшее угнетение эффективности окислительного фосфорилирования.

| 90 Г А

т

4.0

ф ю

да з.о

2.0

О

1.0

О 40 80 120 160 200 Облешковое масло, мкг/мг белка

Рис.3. Влияние различных концентраций облепихового масла на скорости дыхания митохондрий в-состояниях 3 (I) и 2 СП), а также Ж по Ларди (Ш)

Снижение биоэнергетических параметров обусловлено увеличением скорости дыхания в состоянии 2 по Ларди и Вельмацу (скорость аэробного окисления субстрата в присутствии фосфата до внесения АД5) и в состоянии 4 по Чансу и Вильямсу (скорость аэробного окисления субстратов после исчерпания Ада). При этом дыхание в состоянии 3 (в присутствии Ада) и Зр (в присутствии разобщителя) не изменялось. Ранее 'Абгоеп, U al ,1982) было показано, что скорость дыхания в состояниях 2 и 4 на 90-95 % зависит от величины пассивной проницаемости внутренней мембраны для ионов водорода. Поэтому результаты, свидетельствующие об увеличении скорости дыхания мк.охондрий в состояниях 2 и 4, позволили предположить, что разобщение окислительного фосфорилиро вания d щшсутствии облепихового масла обусловлено возникновением протонной проницаемости

внутренней мембраны.

Для проверки этого предположения были проведены эксперименты по изучению влияния облепихового масла на пассивную проницаемость внутренней мембраны митохондрий для ионов водорода. № рис. 4 видно, что внесение 40 мкг/мг белка облепихового масла вызывало набухание деэнергизированных митохондрий в изотоническом растворе нитрата аммония (скорость набухания в условиях эксперимента определяется проницаемостью внутренней мембраны для ионов Н+). При увеличении концентрации облепихового масла скорость набухания увеличивалась, а последующая добавка разобщителя ускоряла этот процесс (рис.4).

Рис.4. Влияние облепихового масла на протонную проводимость внутренней мембраны митохондрий:

1-в отсутствии облепихового масла; 2-40 мкг/мг белка облепихового масла; 3-80 мкг/мг белка облепихового масла. Добавка разобщителя 2,4-динитрофенола (ДНФ) -

50 мкМ

Одной из причин увеличения протонной проницаемости мембран митохондрий в присутствии облепихового масла может быть высокое

содержание в нем свободных жирных кислот, способных связывать ионы водорода и переносить их через внутреннюю мембрану митохондрий, вызывая разобщение окислительного фосфорилирования ( Ч.Р. СЯчп, ,1978).

Разобщение окислительного фосфорилирования и, как следствие, уменьшение энергообеспечения в очаге воспаления, очевидно, является одним из механизмов противовоспалительного действия облепи-хового масла.

К настоящему времени накоплен обширный экспериментальный материал, свидетельствующий о том, 'что увеличение ионной проницаемости мембран митохондрий приводит ш развитию цепи биохимических реакций, включающих перекисное окисление липидов. Индукция ПОЛ может явиться причиной необратимых изменений структуры и функции биомембран. В связи с этим исследовали динамику накопления одного из продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдеги-да в изолированных митохондриях печени крыс в присутствии и отсутствии облепихового масла. Результаты экспериментов свидетельствуют о том; что облепиховое масло (80 мкг/мг^белка)- ингибирует ПОЛ мембран митохондрий, индуцированное ионами железа и аскорба-том.

Перекисным процессам принадлежит существенная роль в инициации и развитии воспаления (Л1с. СшС- , 1982 -А % (ил., V*/, ¡ккёсАгь ,1985). Одним из информативных методов оценки ПОЛ является метод хемилюминесценции, который позволяет определить тяжесть патологического процесса и степень участия лекарственных препаратов в ликвидации воспаления (Л. И.Журавлев, А.И.Куравлева, 1975; Г.В.Маргулис,1973). В связи с этим было изучено влияние суппозиториев с облепиховым маслом на спонтанную и Н^О^-ин-дуцированную хемилюминесцэнцио гомогенатов прямой кишки крыс при экспериментальном проктите. Установлено, что параметры спонтанной

хемилюминесценции (амплитуда и светосумма) при развитии проктита, а также в ходе его лечения суппозиториями не изменялись.

йадуцируя перекисью водорода сверхслабое свечение, мы имели возможность оценить устойчивость биообъекта к действию ПОЛ. Результаты проведенных исследований свидетельствовали о том, что амплитуда Н202~индуцированной хемилюминесценции гомогенатов примой кишки у животных с экспертлентальным проктитом без лечения и леченых суппозиториями с облепиховым маслом на отличалась от таковой в контрольной (интактной) группе животных. Однако светосумма, определенная за 3 мин, на пике воспаления увеличиваюсь в 2 раза по сравнению с контрольной группой. У животных с экспериментальным проктитом без лечения сЕетосумма возрастала еще на 42 % по сравнению с пиком проктита.

Лечение животных суппозиториями с облепиховым маслом сопровождалось снижением хемилюминесценции гомогенатов прямой кишки на 32 % уже на 3-й 'день лечения, а через б дней светосумма достигала уровня контроля. При этом светосумма была в 3 раза ниже све-тосуммы хемилюминесценции животных без лечения.

Исследование динамики хемилюминесценции показало, что интенсивность свечения гомогенатов прямой кишки контрольных животных быстро снижалась в течение первых 2-х мин, а затем медленно еыхо-дила на стационарный уровень (рис.5). У животных с экспериментальным проктитом на пике воспаления высокий уровень хемилюминесценции сохранялся 1,5 мин и лишь потом начинал снижаться. У крыс с экспериментальным проктитом без лечения динамика хемилюминесценции сходна с пиком воспаления (существованием латентного периода, амплитудой), однако скорость снижения свечения была ниже и сохранялась на относительно высоком уровне до конца исследуемого времени (рис.О).

На рис.6 видно, что уже через 3 дня лечения экспериментально-

Рис.5. Динамика Н^О^-индуцированной хемилшинёсценции гомоге-на*ов прямой кишки интактных (I) крыс и на пике воспаления (2)

Рис.б. Динамика Н^О^, -индуцированной хемилюмкнесцзнции гомо-генатов прямой кишки крыс с экспериментальным проктитом без лечения (I) и при лечении суппозиториями.с оолепиховым маслом б течение 3-х (2) и 6-ти (3) дней

го проктита суппозиториями с облепиховым маслом существенно уменьшалась продолжительность свечения. Через 6 дней лечения динамика хемилюминесценцш не отличалась от контроля.

Биохекилюминесцэкция отражает не только интенсивность ПОЛ, но и степень ее контроля защитными системами клетки, к которым относятся биоантиоксиданты и специализированные ферментные системы, осуществляющие дезактивацию токсических продуктов свободно-радикального окисления. Исследования спонтанной хемилюминесценции показывают, что в условиях проведенного эксперимента защитные системы клетки способны контролировать перекисные процессы, развивающиеся при воспалении прямой кишки.

При индуцировании ПОЛ перекисью водорода защитите системы клеток прямой кишки контрольных животных способны с высокой скоростью утилизировать перекиси до безопасного для организма уровня. В то же время при экспериментальном проктите эндогенные ан-тиоксидантные системы не в состоянии справиться с избытком перекисей, которые сохраняются в системе продолжительное йремя. При этом скорость снижения индуцированного свечения отражает, очевидно, активность систем, участвующих в обезвреживании токсических продуктов ПОЛ. Уменьшение латентного периода и увеличение скорости снижения хемилюминесценции уже через 3 дня лечения экспериментального проктита суппозиториями с облепиховым маслом можно объяснить действием биологически активных веществ - витаминов Е, С, Кр каротиноидов» флавоноидов, входящих в состав облепихового масла.

Возможное общетоксическоэ действие суппозиториев с облепихд-вым маслом на органы и системы экспериментальных животных при длительном применении изучали на крысах, кроликах и морских свинках. Известно, что терапевтические средства, используемые при лечении неспецифических проктитов, обычно назначают курсами не бо-

лее 10-20 дней. Согласно требованиям к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ хроническую токсичность исследовали на протяжении 3-х мес. Кроликам вводили 0,165 г/кг облепихового масла. (I свеча), морским

свинкам 1,17 г/кг облепихового масла (I свеча), крысам - 1,34 г/кг облепихового масла (0,5 свечи). В течение указанного срока определяли массу тела, общее состояние, морфологический состав периферической крови животных. О влиянии суппозиториев с облепи-ховым маслом на органы и системы судили также по функциональному состоянию сердечно-сосудистой'системы, почек, печени. По окончании курса лечения проводили гистоморфологические исследования внутренних органов и слизистой прямой кишки.

При ежедневном введении суппозиториев в течение 3-х мес в дозах 1/5 и 1/10 от максимальной, вводимой морским свинкам при определении острой токсичности не обнаружено каких-либо отличий в общем состоянии и поведении животных опытной группы по сравнению с контрольной.

Прибавка массы тела животных контрольных и опытных групп свидетельствовала об отсутствии отрицательного действия суппозиториев с облепиховым маслом на организм. К концу эксперимента масса тела крыс увеличивал-ась на II % в опытной группе и .а 10 7 б контрольной; масса тела морских свинок увеличивалась в контрольной и опытной группах соответственно на 12,5 % и 12 %.

При исследовании состава периферической крови установили, что у всех видов животных в течение опытного периода отсутствовала достоверная разница в количестве лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, показателях лейкоцитарной формулы, в значениях СОЭ опытных и контрольных групп.

При изучении функциональной системы кровообращения определили, что длительное введение суппозиториев с облепиховым маслом

не вызывало изменений со стороны артериального давления и электрической активности сердца. Анализ ЭКГ показал, что число сердечных сокращений существенно не изменялось в течение опытного периода (255,5+258,2 сокращений в мин). Продолжительность сердечного цикла на протяжении исследуемого периода оставалась в пределах физиологических значений. Показатели зубцов и интервалов ЭКГ достоверно не отличались от исходных величин. Так, зубец Р был хорошо выражен в первом отведении. Продолжительность интервала Р-Р составляла 0,245-0,235 с, интервала ОТ - 0,135-0,138 с; систолический показатель равен 57,7-58,0.

Поскольку одним из наиболее часто поражаемых органов при длительном применении лекарственных препаратов является печень, мы исследовали белоксинтетическую, пигментообразовательцую и хо-лестеринобразовательную функции. Содержание общего белка кроЕИ у кроликов к концу опита достоверно увеличивалось (68,8+2,4 г/л -исходные денные; 76,8+0,7 - через 3 мес). Это связано, по-видимому, с тем, что облепиховое масло является неспег^фическим стимулятором защитных реакций организма и усиливает белоксинтетическую функцию печени (Р.П.Молчагина,1978; В.Н.Иванов, Л.П.Никитина, 1973).

• Через 3 мес несколько увеличивалось, оставаясь в пределах физиологических значений, количество ©¿-глобулинов (9,6+2,6 -исходные данные; 11,9+1,5 - через 3 мес), однако это не отразилось на А/Г коэффициенте (1,2+0,1 ), что можно объяснить относительным снижением '¿Р -глобулиново.й фракции (20,6+7,8 - исходные данные ; 18,8+2,0 - через 3 мес).

Содержание билирубина и холестерина в конце эксперимента оставалось в пределах физиологической нормы. Значения маркерных ферментов цитолиза - аланинаминотрансферазы и аспартатаминотранс-феразы не изменялись на протяжении эксперимента как у контрольных

групп животных, так и в опытных группах.

Длительное применение суппозиториев с облепиховым маслом не оказывало отрицательного действия на углеводный обмен, о чем свидетельствуют достаточно стабильные показатели содержания сахара в крови (6,6_*0,2 ммоль/л - через 3 мес в опытной группе,6,5+0,4 ммоль/л - исходные данные у морских свинок; 6,2+0,1 ммоль/л - через 3 мес в опытной группе и 6,1+0,1 ммоль/л - исходные данные у крыс; 5,1+0,2 ммоль/л через 3 мое и 5,2+0,2 ммоль/л - исходные данные у кроликов).

Функционачыюе состояние почек оценивали по данным измерения объема суточной мочи, ее удельной массы, содержания в ней белка, азота мочевины и мочевины сыворотки крови. Установлено, что длительное применение суппозиториев с облепиховым маслом не вызывает существенных изменений мочевыделительной системы. Удельный вес мочи находился в пределах физиологических норм. Белок б моче всех исследуемых групп животных отсутствовав Показатели диуреза у крыс опытной группы достоверно не отличались от исходных величин и данных контрольной группы. Содер^'.чнио азота мочевины и концентрация мочевины в сыворотке крови составляли 2,78+0,24 ммоль/л ; 5,96+0,49 ммоль/л в опытной группе и 3,24+0,25 ммоль/л и 6,96_ь1,17 ммоль/л-соответственно в контрольной.

Отсутствие отрицательного влияния суппозиториев с облепиховым маслом на органы и системы организма подтвердили результаты гистоморфологических исследований экспериментального материала.

ВЫВОДЫ

1. Суппозитории с облепиховым маслом обладают выраженным Противовоспалительным действием.

2. По эффективности лечебного действия при экспериментальном проктите суппозитории с облепиховым маслом превосходит облопихо-

воэ масло в кадкой лекарственной форме и пенный аэрозоль "гипо-зсль". Сроки шздоровлекия кивоткых при лечении суппозиториями о облепиховым маслом сокращаются на три дня по сравнению со сроками лечения "гипозолем" и облепиховьм маслом.

3. Суппозитории с облепиховым маслом в опытах на морских свинках при ректальном способа введения в максимально допустимых дозах (4,1 г/кг) нетоксичны.

4. Суппозитории с облепиховым маслом нз оказывают отрицательного влияния на состав периферической крови,сердечно-сосудистую

систему, на функции 'печени, почек в условиях длительного применения.

5. Механизм противовоспалительного действия суппозиториев с облепиховым маслом связан с уменьшением энергообеспечения очага воспаления и ингибированием перекисного окисления липидов.

6. Облепиховоо масло дозозависимо угнетает эффективность окислительного фосфорилкрования митохондрий печени крыс вследствие увеличения протонной проницаемости внутренней мембраны, а танке подавляет железо-аскорбат индуцированное накопление продуктов ИОЛ.

7. Суппозитории с облепиховым маслом не штилю т на спонтанную хемилшинесценцию.и снижают Н^О^-нндуцированную зеемилюмикгецэн-цию гомогенатов прямой кишки крыс при экспериментальном проктите.

8. Наличие.выраженного противовоспалительного, антиоксидант-ного, мембраностабилизирующего действия суппозиториев с облепиховым маслом при лечении экспериментального проктита, отсутствие побочнух эффектов и общетоксичестого воздействия при длительном введении позволили рекомендовать их для клинического'применения.

Материалы работы опубликованы:

1. Влияние суппозиториев с облепиховым маслом на течение экспериментального проктита и кольпита. В кн.: Вторая республиканская конференция по медицинской ботанике/:Тез. докл. Киев, 1988, -С.318 (соавтор Л.Д. Халеева).

2. Изучение возможного аллергиэирущего действия ректальных суппозиториев с облепиховым маслом и гепарином. Аннотированная программа конференции молодых ученья и специалистов ХГОИ. Харьков, 1988.

3. К механизму действия суппозиториев с облепиховым маслом. В кн.: Научно-технический прогресс в медицине/:Тез. докл. областной научно-практической конференции молодых ученых-медиков. Харьков, 1989.

4. Влияние суппозиториев с облепиховым маслом на хемилюминес-

>

ценцию гомогенатов прямой кишки крыс при экспериментальном проктите. В кн.: Состояние и перспективы создания новых готовых лекарственных средств и фотохимических препаратов/:Тез, докл. Всесоюзной научно-технической^конференции. Харьков, 1990,. - С.208-209 (соавтор А.И.Березнякова).

5. Методические указания по биологической химии. Харьков, 1990. - 214 с. 1соавт. А.К. 1>левский и др.).

6. Действие обл&пихового масла на окислительное фосфорилиро-вание митохондрий. В кн.: Состояние и перспективы создания новых готовых лекарственных средств и фитохимических препаратов/:Тез. докл. всесоюзной научно-технической конференции. Харьков, 1990. -С.225-226.