Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Фагоцитзависимые механизмы воспаления и репаративной регенерации

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ РЕГИОНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОМОРФОЛОГИИ

РГ5 ОД

На правах рукописи

- 9 ИЮЛ 19Р7

ЩЕРБАКОВ Владимир Иванович

ФАГОЦИТЗАВИСИМЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВОСПАЛЕНИЯ И РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

НОВОСИБИРСК 1997

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте общей патологии и экологии человека СО РАМН

Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Д.Н.МАЯНСКИЙ доктор медицинских наук С.В.КАЗНАЧЕЕВ

Официальные оппоненты: академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Л.Д.СИДОРОВА доктор медицинских наук, профессор В.И.ФЕДЕНКОВ доктор медицинских наук, профессор В.И.ХАСНУЛИН

Ведущая организация: Сибирский медицинский университет МЗ РФ

Защита диссертации состоится " %Р " 1997 г.

в часов на заседании Диссертационного совета

Д 001.40.01 в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Академика Тима-кова, 2; тел. 8 (383-2) 32-31-56, факс 8 (383-2) 32-43-39.

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН

Автореферат диссертации разослан " " 1997 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 001.40.01

доктор биологических наук Е.Л.ЛУШНИКОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Основная масса исследований фагоцитов связана с выяснением их роли в системе иммунитета (Земсков А. М. и др., 1994; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. 1995; Козлов В. А., 1995). Менее изученными остаются вопросы их участия в патогенезе гранулематозного воспаления и его осложнений, репа-ративной регенерации. Период, когда воспалительный процесс потерял остроту, но еще не стал хроническим, является наиболее интересным с позиции изучения механизмов хронизации и в то же время наименее изученным, по сравнению с собственно острым и хроническим процессом, так как в первом случае механизмы хронизации еще не начали работать, а во втором — они уже сформированы и трудно понять, что первично, а что вторично.

Вклад макрофагов как клеток-эффекторов хронического воспаления в патогенезе таких заболеваний реализуется по различным каналам. Прежде всего макрофаги в силу своей способности сек-ретировать флогогенные вещества, становятся своеобразным пусковым механизмом воспаления. Затем в ходе его реализации оно может пойти по пути свертывания с выходом в выздоровление или же происходит затягивание с переходом в хроническую форму. Так, в настоящее время треть острых воспалительных процессов принимает затяжное течение. Например, переход острых пневмоний в затяжные, по данным Сильвестрова В. П., Федотова П. И. (1987), наблюдается у 30—40%, по данным других авторов, он колеблется от 24 до 60% (Пилипчук Р. Р. и др., 1985). В последующем у 56,2% больных отмечается переход в хронические неспецифические заболевания легких (Палеев Н. Р. и др., 1985). Средняя продолжительность больничного листа у этих пациентов составляет 53,6 дня (Сидорова Л. Д. и др., 1984). Особую значимость эта проблема имеет на северо-востоке страны.

С другой стороны, макрофагам присущ регенераторный потенциал, который в паренхиматозном органе реализуется через межклеточные взаимодействия в системе "строма-паренхима". В ходе воспаления, а именно на начальной стадии, макрофагу приходится включать свой провоспалительный потенциал, на конечной же стадии он реализует свои регенераторные возможности в виде секреции различных рострегулирующих факторов. И именно на стыке воспалительного и регенераторного компонента и решается, вероятно, вопрос о дальнейшей судьбе процесса. Изучение этого узла взаимодействия имеет важнейшее значение для понимания основ хронизации.

Центральным в проблеме регенерации внутренних органов остается вопрос о происхождении и природе первичного стимула, запу-

екающего генетически детерминированную программу регенерации паренхиматозного органа. До сих пор его связывали как с гормонами (Епифанова О. И., 1965), лимфоцитами (Бабаева А.Г., 1972, 1985; Бабаева А. Г., Зотиков Е. А., 1987), так и с сывороточными факторами (Kubo S. et al., 1987). Тем самым место зарождения сигнала выносилось за пределы регенерирующего органа.

Наряду с внепеченочными факторами этот сигнал следует искать и в самом регенерирующем органе, что также осуществлялось различными авторами как у нас в стране (Романова JI. К., 1957; Сидорова В. Ф., 1969; Конышев В. А., 1974; Романов Ю. А. и др., 1984; Абакумова О. Ю. и др., 1985; Проскурякова И. С., 1995), так и за рубежом (La Brecque D. R„ 1979; Starzl Т. E. et al., 1980; Francavilla A. et al., 1984, 1986).

' Выясняется, что рострегулирующая функция макрофагов опосредуется многими факторами, которые активированные макрофаги секретируют во внеклеточное пространство (Щербаков В. И., 1990). Среди таких веществ можно отметить ангиотропин (Höckel М. et al., 1988) — фактор, стимулирующий рост сосудов, фактор роста фибробластов (Denholm Е. М., Phan S. Н., 1989), трансформирующий фактор роста (Кетлинский С. А., Калинина Н. М., 1995) и ряд других.

Слабо разработанными остаются клинические аспекты изучения роли фагоцитов при воспалении и репаративной регенерации. К тому же, современные методы оценки функциональной активности фагоцитов слабо внедряются в клиническую практику (Петров Р. В. и др., 1995; Хаитов Р. М., Пинегин Б. B.,"l995).

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Изучение гранулематозного воспаления и репаративной регенерации паренхиматозных органов в зависимости от функционального состояния фагоцитирующих клеточных систем.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Изучить реактивность фагоцитов крови и тканей при грануле-матозном воспалении печени и легких.

2. Исследовать роль клеток Купфера и макрофагов других локализаций при репаративной регенерации печени.

3. Провести сравнительное исследование гранулематозного воспаления в нормальной и регенерирующей печени.

4. Изучить влияние экстрактов гепатоцитов и клеток Купфера на пролиферацию клеток печени.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. Показано, что элиминация части популяции печеночных макрофагов путем их нагрузки инертным коллоидом является стимулом к пос-туплен'лю в печень прекурсоров макрофагов.

Впервые выявлено, что стойкая стимуляция купферовских клеток ведет к активации системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) в целом и индукции воспалительного процесса в печени.

Предложен новый подход к комплексной оценке функций фагоцитов в клинике при воспалительных заболеваниях. С помощью него удается точнее оценить остроту воспалительного процесса и риск перехода острого воспаления в затяжные формы (Авторское свидетельство №1407251, 1988).

Выявлено, что при гранулематозном воспалении легких (туберкулезе) резко меняется миграционная активность фагоцитов, нарушается смена нейтрофильного пула моноцитарным в зоне "кожного окна" (Авторское свидетельство №1548694, 1990).

Показано, что уровень пролиферативной активности клеток интактной и регенерирующей печени зависит от функционального состояния купферовских клеток. Данные позволяют сформулировать положение о возможности управления репаративной регенерацией печени через купферовские клетки. Выявлено, что клетки мононуклеарных инфильтратов стимулируют репаративную регенерацию печени, впервые показано, что репаративный процесс в печени блокирует развитие в ней воспалительного процесса, что проявляется как в торможении формирования мононуклеарных инфильтратов, так и их обратном развитии в случае, когда репаративный процесс запускается на фоне выраженных мононуклеарных инфильтратов в печени. Обнаружено, что экстракты купферовских клеток стимулируют пролиферативную активность клеток печени (Авторское свидетельство № 11421088, 1988).

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Результаты экспериментальных исследований позволили сформулировать положение о ключевой роли макрофагов печени в индукции и поддержании гепатита. Развиваемые в работе представления о патогенезе мононуклеарной инфильтрации и гепатолиеналь-ного синдрома позволяют разрабатывать новые подходы к лечению гепатитов человека. Они связаны с блокадой ингибиторами или мо-ноклональными антителами цитокинов, секретируемых макрофагами, таких как интерлейкин — 1, 6, 8 или фактора некроза опухолей —а.

На основе разработанной модели гранулематозного воспаления печени можно проводить скрининг противовоспалительных веществ, изучать различные стороны воспалительного процесса, основную роль в котором играют макрофаги (Авторское свидельство №1272246, 1986).

Показана важная роль макрофагов печени в регуляции пролиферации как интактной, так и регенерирующей печени. Ре-

зультаты исследований указывают на возможность запуска регенерации печени со стороны макрофагов.

Разработаны методические рекомендации "Комплексная оценка функций фагоцитов при воспалительных заболеваниях", (1985, 1988). Методические рекомендации внедрены в лечебные учреждения различного уровня: клинику Института клинической и экспериментальной медицины, (Новосибирск), 1-ю детскую клиническую инфекционную больницу, (Новосибирск), Новосибирский НИИ туберкулеза МЗ РСФСР, детский легочный туберкулезный санаторий (Новосибирск), Новосибирскую областную клиническую больницу, 4-ю городскую специализированную детскую поликлинику (Новосибирск), 333 окружной военный госпиталь.

Комплексный подход оценки функций фагоцитов, предложенный в рекомендациях, позволяет повысить уровень диагностики за счет выявления полома ключевой флогогенной функции фагоцитов, а также направить терапию на устранение выявленного дефекта.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Сокращение пула функционально активных клеток Купфера служит стимулом к растормаживанию СМФ в целом, и как результат — восстановлению числа печеночных макрофагов.

2. Инициация развития гранулематозного воспаления в печени определяется активностью печеночной РЭС (эндотелий сосудов + печеночные макрофаги-резиденты).

3. Повторная стимуляция макрофагов вызывает меньший ответ с их стороны, что может быть важным механизмом хронизации воспалительного процесса в условиях повторной инфекции.

4. В рамках стромально-паренхиматозных взаимоотношений в нормальной и регенерирующей печени стимуляция печеночной РЭС и прежде всего клеток Купфера ведет к усилению пролиферации ге-патоцитов. Первичный толчок к репаративной регенерации печени поступает от клеток Купфера.

5. Гранулематозное воспаление в регенерирующей печени существенно тормозится в связи с наработкой этим органом веществ с антивоспалительной активностью. Регенерирующая печень может служить источником биопрепаратов с противовоспалительным действием.

6. Функциональная активность фагоцитов может быть индикатором механизмов, способствующих затяжному течению воспалительного процесса.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения докладывались на конференции ИКЭМ СО АМН СССР (г. Новосибирск, 1979), 5-й Всесоюзной конференции "Физиология и патология соединительной ткани" (г. Новосибирск, 1980), 2-м Всесоюзном симпозиуме

"Структура и функции лизосом" (г.Новосибирск, 1980), Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы иммунологии "(г. Алма-Ата, 1981), 3-й Всесоюзной конференции "Адаптация человека в различных климато-географических и производственных условиях" (г. Ашхабад, 1981), 9-th Internatonal RES Congress (Davos, Switzerland, 1982), 3-й Всесоюзной конференции по патологии клетки (г. Москва, 1982), 3-м Всесоюзном съезде патофизиологов (г. Тбилиси, 1982), Всесоюзном симпозиуме "Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике" (г. Горький, 1983), Всесоюзном симпозиуме, посвященном 100-летию создания И.И. Мечниковым фагоцитарной теории иммунитета (г. Москва, 1983), конференции морфологов Сибири (г. Тюмень, 1983), днях советской науки в Чехословакии в Пражском и Градец Кралове университетах, (1983), объединённом пленуме правления Всесоюзного научного общества патофизиологов и научного совета по общей патологии АМН СССР (г.Новосибирск, 1984), IV Pathophysiologic Congress, Leipzig, DDR (1984), Всесоюзной конференции "Профилактика, диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний и вторичных иммунодефицитов" (г. Новосибирск, 1985), объединённом пленуме проблемных комиссий "Общая и прикладная иммунология" и научного совета по медицинским проблемам Сибири и Дальнего Востока (г. Красноярск, 1986), 4-й Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы адаптации человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика" (г. Новосибирск, 1986), на семинаре лаборатории клеточной биологии (Брюссель, Бельгия, 1986), конференции "Медицинская наука — практике" (г. Новосибирск, 1987), ВДНХ СССР (г. Москва, 1988), конференции "Проблемы гистофизиологии соединительной ткани (г. Новосибирск, 1989), Всесоюзном симпозиуме (г. Новосибирск, 1990), Международном конгрессе по патофизиологии (г. Москва, 1991), 2-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (г. Новосибирск, 1995).

ПУБЛИКАЦИИ. Результаты исследований и основные положения диссертации опубликованы в 61 печатной работе, 4-х изобретениях, 15 рацпредложениях и методических рекомендациях.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа написана по классическому типу и представляет рукопись объемом 219 страниц машинописи, содержит 39 рисунков и 38 таблиц. Указатель литературы содержит 112 отечественных и 260 зарубежных источников. Данные литературы и собственный экспериментальный материал изложен в 8 главах, обсуждении полученных данных и выводах

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Эксперименты выполнены на 501 крысах-самцах Вистар, массой 120—300 г, 704 мышах самцах и самках линии (СВАхС57В1) Fi массой 18—26 г, полученных из питомника РАМН "Столбовая". В пределах одного опыта максимальная разница между весом отдельных животных не превышала 40—60 г у крыс и 3—5 г у мышей.

Клинические исследования проведены у 175 человек — мужчин и женщин в возрасте 20—50 лет, часть из которых были здоровыми и входили в контрольную группу, у остальных имелись специфические или неспецифические заболевания легких.

Операция: Регенерацию печени изучали на модели частичной резекции печени (ЧРП) по методу (Higgins G.M., Anderson R.M., 1931) с удалением 2/3 печени. Операции проводили в одно и то же время суток с 9-00 до 10-00 (Лиознер Л.Д., 1973). Операцию осуществляли под эфирным наркозом. Животные голодали в течение 12 ч до забоя. Потребление жидкости не ограничивали. Ложную резекцию печени (ЛРП) — лапаратомию без резекции печени — проводили параллельно с ЧРП при тех же условиях.

Воздействия на купферовские клетки. С целью изменения функционального состояния купферовских клеток (КК) были использованы следующие воздействия: 1) нагрузка инертными частицами коллоидного железа и микросферами латекса; 2) стимуляция продигиозаном, зимозаном, БЦЖ; 3) депрессия гидрокортизоном. Для нагрузки купферовских клеток крысам вводили в бедренную вену частицы коллоидного железа марки Р-100Ф с диаметром частиц 0,8—1,5 мкм в дозе 100 мг, взвешенных в 5% изотоническом растворе крахмала, или микросферы латекса (фирма "Koch-Light, Laboratories, Ltd", Великобритания) диаметром 0,2— 0,5 мкм, взвешенных в 0,85% растворе хлористого натрия, в дозе 10 мг. Для стимуляции купферовских клеток мышам вводили в хвостовую вену 2 мг зимозана, или 10 мкг продигиозана, или 3 мг БЦЖ в 0,5 мл 0,85% хлористого натрия. Крысам вводили внутривенно 20 мг зимозана, 50 мкг продигиозана, БЦЖ подкожно в нарастающей дозе 0,05, 0,15 мг и внутрибрюшинно 0,25 мг. Депрессию купферовских клеток осуществляли путем внутри-брюшинного введения гидрокортизон-ацетата (фирма "Гедеон Рихтер", Венгрия) в дозе 125 мг/кг массы тела (Claman H.D.,1972).

Получение и фиксация материала. Для гистологического и авторадиографического исследований кусочки ткани из центральных участков правой доли печени, тимус, селезенку, легкое и почку фиксировали в нейтральном 10% формалине и жидкости Карнуа А. В последнем случае через 2 ч фиксации ткань переносили в 70° этиловый спирт. При постановке гистохимической реакции на

б

кислую фосфатазу по Гомори ткань фиксировали в формол-кальциевой смеси с добавлением 4% сахарозы, при 4°С (Hannibal M.J., Nachlas М.М., 1959). Время фиксации не превышало 12—14 часов.

Приготовление и окрашивание гистологических срезов. После окончания фиксации осуществляли проводку материала в аппарате АТ-4 с последующей заливкой в парафиновые блоки. Срезы ткани толщиной 4—5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином Майера.

Гистоавторадиография. Для исследования ДНК-синтезирующей способности адер клеток печени, почки, лёгкого, селезёнки был использован Н-тимидин с удельной радиоактивностью 0,473ТБ к/ммоль. Его вводили внутрибрюшинно в дозе 37 КБк на 1 г массы тела. Окрашенные гематоксилин-эозином срезы органа покрывали фотоэмульсией типа М (НИИхимфотопроект), предварительно подогретой в микротермостате при 37°С. После подсыхания срезы экспонировали в темноте при 4°С в течение 2 нед, после этого проявляли в амидоловом проявителе в течение 3 мин, фиксировали в 25 % растворе гипосульфита натрия, проводили через спирты возрастающей концентрации, ксилол и заключали в канадский бальзам.

Кислая фосфатаза на фиксированных, замороженных криостат-ных срезах печени и селезенки выявлялась по методу Гомори в модификации А.К. Агеева (1969).

Электронно-микроскопическое исследование. Для электронной микроскопии печень перфузировали через портальную вену 1,5% раствором глутарового альдегида на фосфатном буфере (рН-7,4) по методу Wisse Е. (1977) в модификации Алексеева В. А. и Прохорова В. А. (1973). Материал заливали в аралдит. Срезы толщиной 1 — 1,5 мкм окрашивали метиленовым синим. Ультратонкие препараты, контрастировали цитратом свинца исследовали под микроскопом JEM-100B. Клетки синусоидов идентифицировали по морфологическим критериям Е. Wisse (1977).

Весовые показатели. Массу исследуемого органа выражали, как абсолютно, так и как отношение массы тимуса, селезёнки, печени к массе правой почки, соответственно, тимусно-почечные индексы (ТПИ), селезёночно-почечные индексы (СПИ), печеночно-почечные индексы (ППИ). Процент регенерационной способности печени определяли по Fisher В. et al. (1979).

Подсчёт общего количества лейкоцитов и лейкоформулы осуществляли стандартным методом, кровь у животных забирали пастеровской пипеткой из ретроорбитального синуса и окрашивали по Папенгейму. Отпечатки костного мозга окрашивали азур Ii-эозином.

Определение митотического индекса и индекса меченых ядер. Для определения митотического индекса (МИ) гепатоцитов

подсчитывали процент клеток с митозами на 5000 гепатоцитов под увеличением 100x10 на срезах печени толщиной 4—5 мкм, окрашенных гематоксилин-эозином. Для вычисления индекса меченых ядер (ИМЯ) подсчитывали 3000 ядер клеток на радиоавтографах. Меченными считали ядра, содержащие не менее 10 зёрен восстановленного серебра.

Морфометрия срезов печени. Определение площади среза печени под инфильтратами проводили с помощью окулярной морфометриче-ской сетки в соответствии с основными правилами проведения мор-фометрического анализа (Автандилов Г. Г., 1973).

Получение купферовских клеток и гепатоцитов и экстрактов из них. Фракционирование гепатоцитов и купферовских клеток осуществляли по методу Зубаирова Д. М. с соавт. (1970). Условия получения экстрактов из купферовских клеток и гепатоцитов были идентичными. Полученные клетки отмывали от сахарозы физиологическим раствором и разрушали в гомогенизаторе Поттера-Эльвейма в течение 60 сек при скорости вращения пестика 1500 об / мин на холоду. Затем клеточный гомогенат центрифугировали на центрифуге "К-24" при 12500 д в течение 30 мин при + 4°С. В супернатанте определяли количество белка по методу Lowry О. Н. et al. (1951) и вводили внутривенно мышам-самцам (СВАхС57В1) Fi, массой 18—20 г или крысам-самцам Вистар массой 80—100 г в пересчёте на белок в дозе 4 мг белка на 100 г массы тела.

Для изучения спектра эстераз 10% гомогенаты клеток центрифугировали 1 ч при 15000 об/мин. Супернатант подвергали вертикальному электрофорезу в 14% крахмальном геле. Активность эстераз выявляли гистохимически с использованием в качестве субстрата а-нафтилацетата.

Общую активность кислой фосфатазы определяли по Bessey О. А. et al. (1946).

Активность кислой ДНК-азы определяли по Покровскому А. А. с соавт. (1968).

Активность катепсина Д определяли по Barrett A. i. (1972).

Бромсульфалеиновая проба выполнялась с использованием бром-сульфалеина ("Ferak Berlin", Германия) вводимого внутривенно в дозе 2,5 мг на 100 г массы тела под тиопенталовым наркозом. Забор крови для изучения элиминации бромсульфалеина осуществляли через 1,5, 10 и 15 мин после его введения. Интенсивность окрашивания определяли на СФ-16 при 580 нм.

Определение / 1-оксикортикостероидов (11-0КС) в сыворотке крови осуществляли по методу Панкова Ю. А., Усватовой И. Я. (1965).

Количество ДНК определяли по методу Спирина А. С. (1958).

Тест восстановления нитросинего тетразолип (НСТ-тест). НСТ-тест ставили по методу Park В. Н. (1968) в модификации Ба-жора Ю. И. с соавт. (1981) в двух вариантах — спонтанном (с-НСТ) и индуцированном (и-НСТ). В качестве стимулятора использовали: зимозан, продигиозан, трипсин, пептидогликан, лизоцим, левамизол, фактор некроза опухолей альфа.

Оценка хемотаксиса фагоцитов. Для изучения миграционной активности нейтрофилов и моноцитов был использован метод "кожного окна" (КО) по Рибаку (Rebuck J. W., Crowley J. H., 1955) в модификации Дал M. В. (1983). Оценивали "раннюю фазу" клеточной миграции — через 4 ч и "позднюю фазу"- через 24 ч после постановки реакции.

Статистически обработку материала проводили по методу Стъю-дента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Изучение роли фагоцитов в патогенезе воспалительного процесса

1.1. Обновление популяции макрофагов-резидентов печени при индукции воспаления

Для изучения саморегуляции системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) нами выбрана проба с нагрузкой инертным коллоидом. Инертные коллоидные частицы взяты такого размера, что в печени их способны поглощать только макрофаги (Widmann J., Fahimi H., 1975), из-за чего получается избирательное воздействие на макрофагальную систему. С другой стороны, данная модель является неспецифическим воспалением, определение дается по Fauve R. M. (1985), где в качестве флогогена взято бионедег-радируемое вещество — коллоидное железо. Основное внимание было уделено перестройке печёночных макрофагов. Главным образом, нас инте- ресовало, как быстро происходит восстановление функционально активного пула купферовских клеток.

Через 30 мин после введения коллоида он распределялся преимущественно в клетках Купфера из субкапсулярной зоны. Кроме того, отмечалось его неравномерное распределение по отдельным печеночным долькам. Через 2 ч коллоидное железо распределялось более равномерно по отдельным печёночным долькам, хотя внутри дольки оно поглощалось более активно клетками Купфера периферических зон. В среднем гранулы коллоидного железа обнаруживались в 57 % купферовских клеток. Общее количество клеток Купфера уже через 2 ч после нагрузки начинало увеличиваться, а через 4 ч достоверно

возрастало по сравнению с контролем (рис. 1). Через 8 ч их количество достигало максимума, а затем начинало снижаться к 16 ч и ещё более к 24 ч после нагрузки, оставаясь в то же время больше нормы. Увеличение числа клеток шло за счёт макрофагов, свободных от коллоида. Приток свежих макрофагов в печень был наиболее демонстративным через 4 ч после введения коллоида и продолжался до 24 ч (срок наблюдения). Через 4 и 8 ч происходил более интенсивный приток свежих клеток, чем через 16 и 24 ч. Количество клеток Купфера, поглотивших коллоид, в сроки от 2 до 8 ч мало менялось, после чего начинало уменьшаться, что можно было наблюдать через 16 ч и, особенно, через 24 ч (Р <0,01).

Таким образом, нагрузка части клеток Купфера инертным коллоидом служит стимулом к поступлению в печень новых порций прекурсоров макрофагов, благодаря чему численность функционально активной популяции клеток Купфера довольно быстро восстанавливается. Дальнейшая судьба нагруженных клеток в отдельных опытах нами прослежена в течение месяца. Через 2 сут в печени начинают образовываться скопления из нагруженных макрофагов, которые концентрировались в различных участках печёночных долек. В более поздние сроки — через 2 недели и 1 месяц в местах

хЮ

в -

7 -б -54 -3 2 -1-

--4 б

I

0.5

16

I

24

Рис. 1. Изменение численности популяции макрофагов печени после их нагрузки инертным коллоидом, а, б — количество всех макрофагов соответственно в опыте и контроле; в, г — количество соответственно ненагруженных и нагруженных макрофагов в опыте.

По оси абсцисс — время после введения коллоид;', (в ч), по оси ординат — количество макрофагов.

скопления происходило слияние отдельных нагруженных макрофагов с образованием гигантских коллоид-содержащих клеток.

В регенерирующей печени после её 2/3 резекции процесс замены нагруженной популяции макрофагов ненагруженной происходил более быстро, чем в интактной печени.

При изучении 11-ОКС отмечались незначительные изменения их уровня в контроле на всех изучаемых сроках, в то время как в опыте он почти вдвое снижался через 24 ч после нагрузки СМФ. Вероятно, это имело приспособительное значение и создавало благоприятные условия для усиления миграции моноцитов из костного мозга в печень и другие органы с элементами СМФ с восстановлением численности функционально активных периферических макрофагов. Следовательно, для успешной замены пула нагруженных макрофагов необходима адекватная реакция со стороны костного мозга в виде наработки предшественников, а также со стороны эндокринной системы, способствующие повышенному притоку прекурсоров макрофагов в печень.

Сходный процесс репопуляции в печени макрофагов наблюдали Яооцеп N. е1 а1. (1990) при повреждении макрофагов инкапсулированным в липосомы дихлорметилдифосфатом, причем оказалось, что на смену разрушенным в первую очередь появляются макрофаги печени и красной пульпы селезенки, а затем уже в маргинальных зонах селезёнки.

1.2. Изучение роли макрофагов в развитии воспалительного процесса в печени

Важными показателями функционирования СМФ в ходе воспалительной реакции являются её реактивность и функциональные резервы, которые во многом определяют течение и исход воспалительного процесса. Их необходимо оценивать и исследовать с целью прогнозирования исхода острого воспаления. Один из путей решения этой проблемы — изучение ответных реакций СМФ на микробные стимуляторы (Маянский Д. Н., 1981). В качестве стимуляторов использованы зимозан, продигиозан, БЦЖ.

Начиная со 2-х суток после введения зимозана развивалась соче-танная гепато- и спленомегалия. После введения продигиозана масса печени закономерно нарастала, достигая максимума через 2 сут после стимуляции. В то же время печеночно-почечные индексы не достигали той величины, как у мышей, стимулированных зимоза-ном. Более заметно нарастала масса селезёнки: ко 2-м и 9-м суткам её масса нарастала почти вдвое. При обоих видах стимуляции спленомегалия сочеталась с уменьшением массы тимуса. После однократной стимуляции БЦЖ происходило синхронное нарастание массы печени, селезёнки и тимуса.

В крови наиболее характерным признаком в ответ на стимуляцию СМФ был выраженный моноцитоз. Абсолютное количество моноцитов крови со 2-х по 15-е сутки после стимуляции зимозаном увеличивалось в 3—5 раз, а при введении продигиозана в 2—6 раз. Введение БЦЖ также увеличивало количество моноцитов крови.

Через 24 ч после введения зимозана в печёночных синусоидах появлялись мелкие скопления из мононуклеаров, располагающиеся как периваскулярно, так и внутри долек. В клетках инфильтратов определялась высокая активность кислой фосфатазы. Площадь, занятая инфильтратами, постепенно нарастала и к 5-м суткам достигала 25% от всей площади среза (табл. 1), Общее число фокусов инфильтрации увеличивалось в 5 раз со 2-х к 5-м суткам опыта, это говорит о том, что инфильтраты могут образовываться как в ранние, так-и в более поздние сроки после введения зимозана. Среди вновь образованных инфильтратов около 7,5% клеток включали 3Н-тимидин, т.е. синтезировали ДНК, тогда как в остаточных единичных инфильтратах через 2 мес после введения зимозана синтез ДНК отсутствовал. Вначале инфильтраты имели локальный характер, а через 9 сут они приобретали размытые очертания. На этом же сроке отмечаются митозы гепатоцитов (4,1 ±0,46 °/оо). В последующие сроки — 15 и 21 сут уровень инфильтрации постепенно снижается.

Через 2 сут после введения зимозана, т.е. к моменту появления очагов мононуклеарной инфильтрации в клетках Купфера регулярно встречались крупные полиморфные включения частиц зимозана. Иногда они достигали размера ядра и ограничивались тонкой однослойной мембраной от цитоплазматического матрикса клетки. Вместе с тем увеличивался объем лизосомального аппарата в клетках Купфера.

Таблица 1

Изменение стромы печени в различные сроки после введения зимозана

Исследуемый показатель Время после введения зимозана (сут)

1 2 У

Площадь среза, занятая инфильтратами 0,34±0,П 4,1 ±0,83 25,6+3,84

Количество инфильтратов на условную площадь срезов — 125,0+11,6 610,0+143,0

Среднее количество клеток в инфильтратах 7,0+0,912 18,0±1,38 33,0+3,02

Процент клеток инфильтратов, синтезирующих ДНК (ИМЯ) 7,46+0,56

После введения продигиозана мононуклеарная инфильтрация в печени наступала позднее, в меньшем объеме, не имела тенденции к распространению и носила кратковременный характер. При введении БЦЖ в печени повышалось количество клеток Купфера, дающих положительную реакцию на кислую фосфатазу. Одновременно шло формирование фокусов мононуклеарной инфильтрации, в которых через 21 и 50 сут появлялись гигантские многоядерные клетки.

При проверке "доза-эффект" были выбраны три дозы — 2,0, 0,2 и 0,02 мг зимозана. Оказалось, что все основные эффекты, вызываемые стимулирующим действием зимозана на СМФ дозозависимы. Так, площадь среза печени, занятая инфильтратами через 3 суток после стимуляции СМФ при дозе 2,0 мг составляла 11,9±1,25 %, при 0,2 мг — 1,66±0,15%, при 0,02 мг — 0,17±0,035 %, в таком же направлении изменялся и пул моноцитов крови. Гидрокортизон блокирует эффекты, вызываемые введением зимозана, в том числе развитие гепатолиенального синдрома, мононуклеарной инфильтрации, моноцитоза.

Изучение формы отвечаемости СМФ на повторные стимуляции проводилось после троекратного введения зимозана с интервалами в 2 месяца. Как видно из таблиц 2, после второго введения зимозана масса печени на ранних сроках была такой же, как после первого, достигая максимума на 9 сутки, однако, затем на 15 и 21 сутках идёт более быстрое снижение массы. Масса селезёнки через 2 сут была достоверно выше, а на последующих сроках не отличалась от таковой после первого введения.

Уровень мононуклеарной инфильтрации через 2 сут превышал таковой показатель вдвое, чем после первого введения. В последующие сроки имелась тенденция к снижению этого показателя.

Наиболее значимые различия наблюдались по абсолютному количеству моноцитов. При втором введении зимозана число моноцитов было снижено от 1,65 до 2,2 раза по сравнению с первым введением.

В ответ на третью стимуляцию реакция со стороны СМФ была значительно слабее, чем после первого и второго введения. Так, уровень мононуклеарной инфильтрации в 1,5 раза, а количество моноцитов в 2 раза был меньше по сравнению с первым введением. Количество митозов гепатоцитов также уменьшалось от первого к третьему введению (см. табл. 2), что мы связываем со снижением уровня мононуклеарной инфильтрации.

Таким образом, повторные стимуляции СМФ зимозаном вели к ослаблению ответа данной системы на стимулятор, т.е. развивалась частичная толерантность — феномен, практически не изученный в отношении СМФ, несомненно являющийся важным механизмом хронизации воспалительного процесса.

Таблица 2

Эффект одно- и многократной стимуляции системы мононуклеарных фагоцитов зимозаном (М±т)

Показатель

Сроки исследования после введения зимозана (сутки)

0 2 5 9 15 21

ППИ 8,9±0.17 1-е 9,5±0,25 введение зи 11,8+0,4 мозана 13,8+0,6 12,2+0,72 10,4±0,18

СПИ 0,66+0,02 0,78+0,04 1,43+0,18 1,7+0,14 1,22+0,08 0,89+0,03

П — 4,1+0,83 25,6+3,84 32,6+2,41 19,1 + 1,61 2,9±0,56

м 3,43±0,03 9,31 ±0,1 11,4+0,3 15,6+0,2 16,6+0,26 9,76±0,1

м/г — — — 4,1 ±0,46 — —

ППИ 2-е 9,9+0,53 введение зи 10,3 + 0,68 мозана 13,9+0,65 10,7 + 0,47 9,7±0,245*

СПИ — 1,46±0,2* 1,41+0,14 2,17+0,26 1,23+0,09 1,26±0,16

П — 8,9+0,48** 18,6+1,83 29,8 + 1,45 17,3+1,41 4,6±0,66,

м — 8,97+1,0 6,87±0,8** 8,19±0,6** 7,49+0,7** 5,14+0"15**,

м/г — — — 3,2+0,37 — —

ППИ 3-е 11,8 + 0,9* введение зи 12,8+0,53 мозана 12,7 + 0,66 9,8±0,09** 11,5+0,375*

СПИ — 1,01+0,28 1,67+0,15 1,54 + 0,26 1,35+0,38 0,94±0,,11

П — 3,41+0,49 12,7+0,09** 21,5+1,0** 3,6±0,44** 1,2±0,25*

м — 3,96+0,8** 7,59±0,7** 7,45+0,6** 6,69±0,4** 5,5,37+0,45**

м/г — — — 1,75+0,22**

Примечание: ППИ — печёночно-почечный индекс; СПИ — селезёночно-почечный индекс; П — относительная площадь печени, занятая мононуклеарными инфильтратами, в %; М — абсолютное количество моноцитов в периферической крови, х 109/л; м/г-количество гепатоцитов с митозами, в °/оо- * — Р<0,05; ** — Р<0,01 по сравнению с !-м введением зимозана.

При стимуляции СМФ в сыворотке крови снижается концентрация 11-ОКС, причем, если при зимозане оно составляло 3,4 раза, то при продигиозане оно было почти пятикратным. Снижение уровня 11-ОКС несомненно, как и в случае с нагрузкой инертным коллоидом, имеет приспособительный характер, в результате чего, усиливается наработка предшественников макрофагов в костном мозге и их миграция в печень.

Таким образом, стойкая стимуляция купферовских клеток различными агентами ведет к развитию гепатолиенального синдрома, индукции в печени воспалительного процесса, общими признаками которого является растормаживание моноцитопоэза, и как следствие этого увеличение количества моноцитов крови и миграция предшественников макрофагов — моноцитов в печень.

2. Изучение функциональной активности фагоцитов при воспалительных процессах в легких

Направленное движение (хемотаксис) фагоцитов, полиморфноя-дерных лейкоцитов и моноцитов в сторону высокого градиента хемо-аттрактантов, исходящих из очага внедрённых микроорганизмов, является основной начальной реакции организма, направленной на локализацию бактерийных и других агентов. Для оценки хемотаксиса нами выбран метод "кожного окна" (КО).

У здоровых лиц в "раннюю фазу" (4 ч) в зону КО мигрируют в основном нейтрофилы (табл. 3). Это обусловлено тем, что скорость продвижения нейтрофилов наиболее высока среди всех типов клеток крови. Через 12 ч процент нейтрофилов снижается, а моноцитов увеличивается, соотношение между ними становится 1:1. В позднюю фазу (24 ч) преобладающими клеточными элементами являются моноциты-макрофаги (см. табл. 3).

Воспалительный процесс в лёгких существенно модифицирует миграцию клеток в зону КО. При острой пневмонии наиболее характерно торможение миграции нейтрофилов в зону КО в раннюю фазу. Соответственно процент моноцитов-макрофагов в раннюю фазу у этих больных выше, чем у здоровых лиц (см. табл. 3). В позднюю фазу, через 24 ч, определялось в среднем вдвое больше нейт-

Таблица 3

Показатели "кожного окна" при острых и затяжных пневмониях

Типы клеток Здоровые Острые пневмонии Затяжные пневмонии

Нейтрофилы Ранняя фаза (че 90,9+0,6 рез 4 ч) 84,2±2,66** 73,2±6,15*

Моноциты-макрофаги 9,1 ±0,58 15,8±2,65* 26,8±6,1*

П Нейтрофилы оздняя фаза (че 8,7±0,8 рез 24 ч) 20,б±3,8* 21,7±5,2*

Моноциты-макрофаги 91,3±0,83 79,4±3,81* 78,3±5,21*

* —Р<0,05 по сравнению со здоровыми.

рофилов, чем у здоровых лиц. Соответственно число моноцитов-макрофагов меньше, чем в норме.

При затяжных пневмониях в раннюю фазу количество нейт-рофилов снижается, а процент моноцитов-макрофагов увеличивается втрое по сравнению с контролем. В позднюю фазу количество нейт-рофилов в 2,5 раза превышало контрольные значения, а число моноцитов-макрофагов снижалось (см. табл. 3). Показатели КО восстанавливались в ходе реализации воспалительного процесса при острых пневмониях, в то время как при хроническом воспалении полного восстановления не происходило. Резервные возможности макрофагального звена фагоцитов определяли путём постановки КО до и через 24 ч после инъекции продигиозана.

У больных с активным туберкулёзом отмечалось резкое торможение миграции моноцитов-макрофагов, и как следствие этого отмечалось нарушение смены нейтрофильного пула моноцитарным. В позднюю фазу КО количество нсйтрофилов превышало в 4,5 раза таковой показатель у здоровых лиц, и соответственно количество моноцитов было в 1,5 раза меньше, чем в норме. Степень снижения миграции моноцитов в зону КО коррелировала с распространённостью и остротой процесса. При нанесении туберкулина на зону КО эта закономерность была ещё более выраженной. Процент нейт-рофилов был в 5,4 раза выше, а макрофагов в 2 раза меньше, чем у здоровых, т.е. торможение миграции было двукратным.

Таким образом, при неспецифическом и туберкулезном воспалении в легких меняется миграционная активность клеток-эффекторов воспаления — нейтрофилов и моноцитов, что является отражением и характеристикой протекающего процесса в данном органе. Троекратное повышение моноцитов в раннюю фазу КО при затягивании процесса в легких трактуется нами как неблагоприятный признак, показывающий, с одной стороны, что нейт-рофильное звено не способно ликвидировать инфекционное начало и поэтому в реализацию этого процесса вовлекается второе звено "профессиональных фагоцитов". С другой стороны, вовлечение моноцитов-макрофагов в процесс резко повышает вероятность его перехода в хроническую форму.

Изучена чувствительность нейтрофилов крови к разным классам стимуляторов для обоснования возможности использования этого показателя в подборе стимулятора для системы фагоцитов. В качестве тест-системы для этого использован НСТ-тест.

У здоровых лиц показатели спонтанного НСТ-теста (с-НСТ) были равны 7,12±0,4% с диапазоном колебаний 4—10%. Применение стимуляторов повышало количество НСТ-позитивных нейтрофилов. Степень повышения была различной для использованных

стимуляторов: большая у зимозана, трипсина и продигиозана, меньшая у пептидогликана, лизоцима и левамизола. Индуцированный НСТ-тест (и-НСТ) позволял выявить скрытую гетерогенность пула нейтрофнлов. У здоровых лиц показатели с-НСТ представляли собой гомогенную группу, после стимуляции показатели представляли собой гетерогенную группу. Причём, оказалось, что чем сильнее стимулятор, тем явственнее он проявлял гетерогенность пула нейт-рофилов.

При затяжных бронхитах показатели с-НСТ достоверно превышали таковые у здоровых лиц. Применение стимуляторов повышало количество НСТ позитивных нейтрофилов. Здесь, как и у здоровых лиц, зимозан и трипсин сохраняли более сильные стимулирующие свойства, чем другие стимуляторы. При данной патологии индивидуальные показатели с-НСТ имели значительную вариабельность и были представлены как низкими, так и высокими показателями. В индуцированном варианте эти показатели возрастали, однако, вариабельность сохранялась, и у определенной части больных, несмотря на стимуляцию показатели оставались низкими. Индексы стимуляции, характеризующие резервные возможности исследуемой системы, были наиболее высокими у здоровых лиц и меньшими у лиц с воспалительным процессом, где эти резервы частично задействованы. Анализ отвечаемости на стимуляторы в зависимости от различных исходных показателей с-НСТ — низких — 4—10 % , средних — 11—30% и высоких — 31—50 % — показал неоднозначность их ответа на различные стимуляторы. Так, если в первых двух случаях применение стимуляторов способно увеличить количество активных нейтрофилов, то в третьем случае это увеличение было незначительным, или его не было совсем. В третьей группе повысить число НСТ-позитивных нейтрофилов могли только зимозан, трипсин и продигиозан.

Таким образом, чувствительность нейтрофилов к стимуляторам различных классов, тестируемых с помощью НСТ-теста различна, что может быть полезным при выборе конкретного стимулятора для иммунотерапии.

3. Изучение роли макрофагов в регуляции пролиферации клеток печени

3.1. Роль макрофагов в регуляции пролиферации гепатоцитов регенерирующей печени

Есть все основания предполагать, что меняя реактивность купфе-ровских клеток, являющихся важнейшим компартментом СМФ, можно модифицировать пролиферацию гепатоцитов. Для изменения

реактивности СМФ, в том числе купферовских клеток были использованы продигиозан, зимозановые гранулы, БЦЖ, коллоидное железо, микросферы латекса.

При стимуляции СМФ БЦЖ синтез ДНК в гепатоцитах был более синхронизирован, чем в контроле и на пике через 24 ч после частичной резекции печени (ЧРП), Индекс меченых ядер (ИМЯ) был почти в 2 раза выше, чем в контрольной серии. Эффект синхронизации наблюдался и по митотической активности. Митозы гепатоцитов начинали увеличиваться через 24 ч после ЧРП, как в контроле, так и в опыте, однако, уже на 30 часе пика митотической активности в опыте их количество было в 1,5 раза больше, чем в контроле. Затем в опыте происходил более быстрый спад митотичес-кого индекса (МИ), чем в контроле, и через 72 ч после ЧРП количество митозов в контроле более чем в 2 раза превышало таковой показатель в опыте. Другими словами, при данном виде стимуляции СМФ отмечалось усиление пролиферативной активности гепатоцитов, что проявлялось в более синхронном синтезе ДНК, а также митотическом делении гепатоцитов.

При стимуляции купферовских клеток продигиозаном также обнаружено стимулирующее действие на пролиферацию гепатоцитов, что проявлялось в виде ускорения и синхронизации синтеза ДНК и митотической активности гепатоцитов. Для решения вопроса о том, не действует ли прямо продигиозан на гепатоциты исследована скорость элиминации бромсульфалеина после введения продигиозана. Оказалось, что функциональная активность гепатоцитов, измеряемая по экскреции бромсульфалеина через 1 сут после введения продигиозана, т.е. к моменту проведения ЧРП, не изменялась.

При стимуляции купферовских клеток зимозаном решались следующие задачи. Играют ли роль клетки инфильтратов в регенерации гепатоцитов, для чего регенерационный процесс запускался в условиях стимулированных купферовских клеток, но в отсутствие мо-нонуклеарных инфильтратов: ЧРП проводилась через 1 сут после введения зимозана — первая серия, а также в условиях широко представленных мононуклеарных инфильтратов — ЧРП проводилась через 5 сут после введения зимозана — вторая серия. Решался также вопрос о том, как долго сохраняется след в строме органа после стимуляции купферовских клеток — ЧРП проводилась через 2 мес после введения зимозана — третья серия.

Как видно из рис. 2, процент регенерации печени в опытных сериях был выше, чем в контроле, и наиболее выраженное превышение наблюдалось во второй серии. В первой серии через 24 ч процент регенерации печени был выше, чем в контроле в 3,8 раза. На более поздних сроках он постепенно нарастал, превышая контроль-

% / 80

хх

24

48

72

95 ч

Рис. 2. Процент регенерации печени в контроле (1) и при введении зимозана за 1 сутки (2), 5 суток (3) и 2 месяца (4) до частичной резекции печени.

По оси абсцисс — время после ЧРП в ч, по оси ординат — процент регенерациинной способности. • — Р< 0,05; ••-Р<0,01.

ную величину через 4 сут почти в 1,2 раза (см. рис. 2). ИМЯ в опыте более быстро повышался и на пике через 42 ч превышал контроль в 2,1 раза. Стимулирующий эффект просматривался и по митотической активности. Таким образом, стимуляция СМФ зимоза-ном за 1 сут до ЧРП существенно модифицирует ход регенерации печени, что проявляется в увеличении процента регенерационной способности, более интенсивном синтезе ДНК и митотической активности гепатоцитов.

Во второй серии ЧРП проводилась на фоне выраженных мононук-леарных инфильтратов, занимающих 20—25% площади среза печени. Через 24 ч процент регенерации печени в 3,5 раза превышал таковой в контроле (см. рис. 2). В дальнейшем этот показатель нарастал и через 4 сут превышал контроль в 1,5 раза. ИМЯ гепатоцитов в этой серии повышался через 24 ч после ЧРП, быстро достигая максимума к 30 ч (табл. 4). За этот период в опыте ИМЯ возрастали в 10 раз, тогда как в контроле в 3,4 раза. Через 36 ч ИМЯ резко снижался в 5,4 раза, в то время как в контроле отмечался пик ИМЯ. МИ через 24 ч составляли 1,4±0,17 °/0о, в контроле в это время митозы не регистрировались. Через 30 ч этот показатель превышал контроль в 12,5 раз, пик МИ наступал раньше и был более выражен, чем в контроле.

В третьей серии процент регенерационной способности через 24 ч после ЧРП мало отличался от контроля, а через 72—96 ч был выше, чем в контроле (см. рис. 2).

ИМЯ гепатоцитов через 24 ч в опыте был несколько выше, чем в контроле (табл. 5). Через 36 ч он достигал пика, превышая контроль в 2 раза, в контроле ИМЯ достигали пика к 48 ч, т.е. отставание составляло 12 ч. МИ изменялись в том же направлении.

Изучен вопрос о том, прослеживается ли стимулирующий эффект на поздних сроках регенерации. Для этого выбрана модель, когда

Таблица 4

Индексы меченых ядер (в %) гепатоцитов регенерирующей печени при введении зимозана за 5 сут (опыт 2) до частичной резекции

Время после операции (ч) Контроль Опыт 2

24 1,7±0,46 1,9±0,52

30 5,7±0,21 20,4± 1,02**

36 31,5±1,13 3,8+0,24**

42 9,5±0,66 12,4 ±1,56

48 7,2±0,15 7,6±0,37

54 4,2± 1,96 8,6±0,37*

60 6,3±0,77 7,5±0,57

72 3,2±0,95 2,4±0,34

96 1,5+0,3 1,5±0,12

На каждую точку взято по 5 животных * —Р<0,05; *' — Р<0,01 по сравнению с контролем

Таблица 5

Индексы меченых ядер (в %) гепатоцитов регенерирующей печени при введении зимозана за 2 мес (опыт 3) до частичной резекции

Время после операции (ч) Контроль Опыт 3

24 0,7±0,15 0,9±0,16

30 15,7±1,81 21,6±3,95

36 17,3±0,9 35,0±3,76**

42 47,8±5,37 15,9+3,05**

48 19,6±4,89 10,7±3,62

54 9,5±1,4 21,7±2,4**

60 15,3±2,1 9,7±1,49

72 10,8±1,9 7,9+0,86

96 7,7±1,3 4,0±0,9

На каждую точку взято по 5 животных * —Р<0,05; ** — Р<0,01 по сравнению с контролем

ЧРП проводилась через 5 сут после введения зимозана, где стимулирующий эффект выражен наиболее четко. Так, через 11 сут масса печени в контроле восстанавливалась на 81% от интактного уровня, в опыте этот показатель составлял 87%. Через 16 сут эти показатели были 85 и 93 % соответственно. Другими словами, и на поздних сроках регенерации печени отчётливо прослеживается стимулирующий эффект восстановления массы печени после активации купферовских клеток.

3.2. Роль макрофагов в регуляции пролиферации гепатоцитов натАктной печени

Макрофаги печени способны регулировать пролиферацию гепатоцитов, не только регенерирующей, но и интактной печени, что показано нами при введении интактным животным коллоидного железа, микросфер латекса, зимозана, продигиозана, БЦЖ. При введении этих модификаторов функциональной активности купферовских клеток происходит растормаживание митотической активности гепатоцитов. Так, при стимуляции купферовских клеток интактной печени зимозаном происходит повышение включения Н-тимидина в ядра синусоидных клеток уже через 4 ч после стимуляции (рис. 3). В дальнейшем, к 24 и 48 ч ИМЯ синусоидных клеток возрастали соответственно до 2 и 12 %, тогда как у интактных мышей они достигали всего 0,4%. Число меченых ядер гепатоцитов нарастало, но с некоторым отставанием по сравнению с ростом включения Н-тимидина в ядра синусоидных клеток. ИМЯ гепатоцитов достоверно увеличивались через 48 ч после стимуляции купферовских клеток (см. рис. 3).

Таким образом, макрофаги печени способны индуцировать и регулировать пролиферацию клеток печени, как интактной, так и регенерирующей печени.

Рис. 3. ИМЯ паренхимных (А) и сунусоидных (Б) клеток после введения зимозана. По оси абсцисс - время после введения зимозана (ч). По оси ординат - ИМЯ (в °/оо).

4. Влияние экстрактов гепатоцитов и клеток Купфера на пролиферацию клеток печени

Полученные факты стимулирующего действия макрофагов печени на пролиферацию клеток и регенерацию печени поставили вопрос о возможности существования в купферовских клетках вещества, стимулирующего пролиферацию гепатсцитов.

В первой группе экспериментов, выполненных на крысах-самцах Вистар было показано, что введение экстрактов купферовских клеток способно повысить митотическую активность гепатоцитов. Динамика подъема митозов была схожа с таковой после ЧРП — рас-тормаживание через 24 ч, 0,11±0,03°/о(к пик на 48 ч — 4,9±0,4°/оо и спад через 72 ч — 0,042±0,019°/оо.

Во второй серии, выполненной на мышах, печёночные макрофаги получали от интактных животных, после ложной резекции печени (ЛРП) и после ЧРП 24 и 48 ч. Оказалось, что введение экстрактов купферовских клеток и гепатоцитов повышает синтез ДНК в клетках печени. Как видно из табл. 6, ИМЯ синусоидных клеток при введении экстрактов купферовских клеток интактной печени уже через 36 ч были в 2 раза выше, чем при введении экстрактов гепатоцитов, что указывает на более сильное и синхронизированное действие экстрактов купферовских клеток по сравнению с экстрактами гепатоцитов на данную клеточную популяцию. Действие этих экстрактов было более эффективно и на поздних сроках, а именно, через 54 ч, где ИМЯ превышали в 1,5 раза таковые при введении экстрактов гепатоцитов. Растормаживание синтеза ДНК в гепа-тоцитах было менее значимо, чем ь синусоидных клетках при введении обоих видов гомогенатов и происходило в более поздние сроки, чем в синусоидных клетках.

Экстракты купферовских клеток и гепатоцитов, полученных из печени через 48 ч после ложной резекции, имели несколько более выраженный стимулирующий эффект по сравнению с интактной печенью (см. табл. 6).

Экстракты гепатоцитов, полученных через 48 ч после ЧРП, т.е. в период интенсивного митотическош деления гепатоцитов, в регенерирующей печени были более активны, чем если они были получены через 24 ч после ЧРП, как в отношении синусоидных клеток, так и гепатоцитов (см. табл. 6).

Экстракты купферовских клеток, полученные из регенерирующей печени, через сутки после ЧРП обладали наименьшими стимулирующими свойствами из всех исследуемые групп. В то же время экстракты купферовских клеток, полученные через 48 ч после ЧРП, обладали наибольшей стимулирующей активностью среди всех групп. Так, ИМЯ синусоидных клеток через 36 ч превышал интакт-

Таблица 6

ИМЯ гепатоцитов и синусоидных клеток печени после введения экстрактов гепатоцитов и купферовских клеток (в °/00)

Источник получения клеток Экстракты клеток Клетки Время после введения экстрактов в ч

36 48 54

Интактная печень ГП СК 8,44+3,48 12,9±1,06** 9,5+2,06*

ГП 3,3±0,59 4,5+0,8* 3,15±0,96

КК СК 16,37±7,64 11,5±2,1* 14,49±5,9

ГП 1,93+0,28 2,5±0,6 5,24+0,98*

Ложнорезецированная печень (48) ГП СК 11,0±4,0 19,6±2,66** 11,07±1,47*

ГП 1,5+0,16 1,44+0,17 3,74±0,7

КК СК 30,14±1,85** 8,83±1,9* 9,43±1,91*

ГП 2,15±0,16 2,24±0,06 5,46+0,53**

ЧРП (24 ч) ГП СК 9,47 ±1,39* 13,3±1,6** 6,15±0,64*

ГП 2,25+0,8 2,82±0,79 5,07±1,13*

КК СК 8,32+2,19 7,77 + 3,39 6,88±0,62*

ГП 1,86+0,47 1,25±0,27 4,46±0,89*

ЧРП (48 ч) ГП СК 11,46+1,3** 9,52±2,28 15,86±5,07*

ГП 1,6+0,57 4,8±1,01 4,75±0,7*

КК СК 33,2+9,25* 33,17±8,93* 27,86±8,2*

ГП 2,74+0,77 3,92±1,0 5,52±1,16*

Примечание: интактный контроль —ГП — 1,98±0,6°/оо, СК — 4,05±0,55%о; ГП — гепатоциты, КК — купферовские клетки, СК — синусоидные клетки, ЧРП — частичная резекция печени, в каждой группе использовано по 5 животных; * — Р<0,05; ** — Р<0,01 по сравнению с интактным контролем.

ный контроль в 8,2 раза, через 48 ч их количество оставалось на этом же уровне, несколько снижаясь через 54 ч, однако, превышая контроль в 6,9 раза. ИМЯ гепатоцитов этой группы уже через 36 ч имели тенденцию к повышению против контроля, через 48 ч эта тенденция усиливалась, где превышение над контролем составляло 1,9 раза. Через 54 ч ИМЯ гепатоцитов в 2,8 раза превышали контроль (см. тдбл. 6). Определение включения Н-тимидина в ДНК печени подтвердило наличие стимулирующего эффекта как при введении экстрактов гепатоцитов, так и купферовских клеток.

Экстракты гепатоцитов и купферовских клеток повышали синтез белка в переживающих печёночных срезах.

При проверке на органоспецифичность оказалось, что экстракты гепатоцитов проявляют строгую органоспецифичность, в то время как таковые из купферовских клеток абсолютной специфичности не проявляли.

Таким образом, экстракты клеток Купфера и гепатоцитов способны стимулировать пролиферацию и синтез ДНК в клетках печени в системе in vivo, а также стимулировать синтез белка в системе in vitro, а значит процесс пролиферации в печени может быть запущен наряду с внепечёночными и внутрипечёночными веществами, причём как с территории стромы в виде печёночных макрофагов, так и с территории паренхимы — гепатоцитов.

5. Зависимость мононуклеарной инфильтрации печени от пролиферации гепатоцитов

Выраженный стимулирующий эффект мононуклеарной инфильтрации на пролиферацию гепатоцитов поставил вопрос об изучении влияния регенерации на мононуклеарную инфильтрацию. У одних мышей через 2—4 ч, а также через 1 и 5 сут после введения зимозана удаляли 2/3 печени, соответственно первая, вторая и третья серии.

В печени контрольной группы через 2 сут формировались моно-нуклеарные инфильтраты с последующим нарастанием и затем снижением мононуклеарной инфильтрации (табл. 7). У животных опытной группы развитие мононуклеарной инфильтрации резко тормозилось. Через 2 сут после ЧРП мононуклеарных инфильтратов в печени не было. Первые признаки инфильтрации отмечались на 5-е сутки, причем ее интенсивность была в несколько раз ниже, чем в контроле. На 9-е сутки в контроле инфильтрация достигала максимума, тогда как в опыте лишь 50% этой величины. Пик

Таблица 7

Площадь среза печени (в %), занятая инфильтратами, в контроле (ложная резекция печени) и в опыте (зимозан + ЧРП через 2—4 ч)

Время после введения зимозана (сут) Контроль Опыт

2 3,49±0,24 —

5 14,9±1,33 1,6±0,3**

9 35,4+2,52 16,76±2,56**

15 14,05+0,88 29,4± 1,84**

21 3,52±0,32 21,08±1,44**

35 — 8,33±0,55

На каждую точку взято по 5 животных ** —Р<0,01; по сравнению с контролем

9 сут

Рис. 4 Площадь среза печени (в%), занятая инфильтратами (серия 3). Звёздочка — ложнооперированные контрольные животные.

инфильтрации в опыте приходился на 15-е сутки. Обратное развитие инфильтрации в контроле происходило быстрее, чем в опыте, где даже через 35 сут сохранялся довольно высокий уровень мононуклеар-ной инфильтрации, период реализации мононуклеарной инфильтрации в опыте удлинялся на 14 дней по сравнению с контролем.

Во второй серии, когда ЧРП проводилась через 1 сут после введения зимозана, также происходило торможение формирования инфильтратов и они появлялись только к 5-м суткам.

В третьей серии, когда ЧРП проводилась на фоне выраженных мононуклеарных инфильтратов, происходило обратное развитие уже сформированных фокусов из мононуклеаров (рис. 4). Так, если к

моменту проведения ЧРП инфильтраты занимали около 25% всей площади среза, то через 1 сут после ЧРП процент инфильтрации снижался до 20%, через 2-е сут до 12%, через 3-й сутки до 7%, через 4 сут до 6%, т.е. в 4 раза меньше по сравнению с исходным уровнем на момент резекции. У ложнооперированных животных этой серии к 9 сут инфильтрация нарастала и занимала 30—35%, площади среза. Из графика видно, что наиболее интенсивное снижение инфильтрации приходилось на 2-е и 3-й сутки после ЧРП, т.е. по времени совпадало с периодом наиболее интенсивного митотического деления гепатоцитов. Обращало на себя внимание, что ЧРП не отменяла моноцитоз. Другими словами, растор-маживание моноцитопоэза происходило, но фиксации свежих порций моноцитов крови в ткани печени с образованием мононукле-арных инфильтратов не было. Прежде всего возникло предположение, что нарушение "рекрутирования" моноцитов в печень могло быть связано с каким-то изменением микросреды в интенсивно регенерирующем органе. Однако, оказалось, что после ЧРП индуцированная зимозаном инфильтрация тормозилась не только в самой печени, но и в лёгком, где избыточной пролиферации паренхимы не было.

Был поставлен вопрос и о том, не обусловлен ли полученный эффект торможения мононуклеарной инфильтрации изменением уровня эндогенных глюкокортикоидов после ЧРП. Для этого вместо ЧРП проводили введение гидрокортизона через 2 ч после инъекции зимо-зана. В отличии от ЧРП после введения гидрокортизона тормозилась не только мононуклеарная инфильтрация, но и моноцитоз.

При введении сыворотки от животных с ЧРП, она тормозила образование мононуклеарных инфильтратов, это указывает на то, что фактор (ы), блокирующий реактивность макрофагов-резидентов, может быть пассивно перенесён с сывороткой.

ВЫВОДЫ

1. По моноцитарной реакции крови и характеру мононуклеарной инфильтрации печени в ответ на введение стимулятора можно судить о реактивности и функциональных резервах СМФ. Реакцию на зимо-зан можно использовать в качестве тест-системы при оценке функционального состояния СМФ в различных ситуациях.

2. Стойкое раздражение купферовских клеток ведёт к развитию воспалительного процесса в печени. Активированные печёночные макрофаги могут стать центром формирования очага мононуклеарной инфильтрации. При повторной стимуляции СМФ ее реакция снижена.

3. Нагрузка клеток Купфера инертными коллоидными частицами служит стимулом к поступлению в печень прекурсоров макрофагов, в

в результате чего численность функционально активной популяции печеночных макрофагов быстро восстанавливается.

4. Миграция предшественников печёночных макрофагов в печень зависит от эндогенных кортикостероидов, уровень которых снижается после активации СМФ. Однократное введение гидрокортизона в дозе 125 мг/кг отменяет миграцию предшественников в печень.

5. Пролиферация клеток интактной и регенерирующей печени зависит от активности купферовских клеток. Их стимуляция продигиозаном, БЦЖ, зимозаном ведет к ускорению синтеза ДНК и появлению митозов гепатоцитов интактной печени. Введение этих стимуляторов до частичной резекции печени вызывает усиление пролиферативной активности гепатоцитов и ускорение как ранних, так и поздних этапов репаративной регенерации печени.

6. Репаративная регенерация печени с мононуклеарными инфильтратами усилена. Максимальное ускорение регенерации происходит в том случае, когда резекция печени осуществляется на пике мононуклеарной инфильтрации.

7. Пролиферирующая паренхима снижает реактивность макрофагов и их предшественников-моноцитов. В результате этого моноциты не мигрируют в ткань печени и тормозится формирование инфильтратов. Резекция печени, проведенная на фоне выраженных мононуклеарных инфильтратов, вызывает их обратное развитие.

8. Экстракты купферовских клеток стимулируют митотическую активность и синтез ДНК клеток интактной печени. Растор-маживание синтеза ДНК происходит вначале в синусоидных клетках, а затем в гепатоцитах. Наиболее выраженный рост-стимулирующий эффект выявлен у экстрактов купферовских клеток, полученных из печени через 48 часов после ее резекции.

9. Исследование фагоцитов в клинике дает возможность объективно судить о характере, активности и тенденции хронического воспалительного процесса, лежащего в основе инфекционно-вос-палительной патологии внутренних органов.

Практические рекомендации

1. Показания "кожного окна" можно использовать как один из объективных критериев излечённости при острых и затяжных пневмониях.

2. Экстракты из купферовских клеток могут служить основой для получения препарата, ускоряющего регенерацию печени.

3. "Кожное окно" в сочетании с введением продигиозана может применяться в клинической практике для прогноза течения воспалительного процесса в легких и коррекции терапии при его персистенции.

4. На базе НСТ-теста можно осуществлять подбор иммуностимулятора, выбирая для лечения тот, который более эффективно восстанавливает нарушенную функцию фагоцитов.

5. Необходимо оценивать у больного не только текущее функциональное состояние фагоцитов, но и их резервы по реакции на стимул.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние стимуляции макрофагальной системы печени на репаративную регенерацию гепатоцитов/ / Современные аспекты физиологической адаптации и патологии.—Новосибирск, 1979.— С. 88—91.

2. ' Ультраструктура клеток печёночного синусоида у частично ге-патэктомированных крыс//Бюлл. эксперим. биол. мед.—1979.— Т.88, № 12,—С. 729—733. (соавт.Правоторов Г.В., Маянский Д.Н.).

3. Multiple esterase forms in isolated hepatocytes and Kupffer cell of partially hepaectomized rats//Experieritia, 1980.—V.36.—P. 856-857 (соавт. Маянский Д.H., Гришанова А.Ю.).

4. Изменение стромы печени в ответ на стимуляцию клеток Куп-фера микробными полисахаридами//Труды 5-й Всесоюз. конф. "Физиол. и патол. соед. ткани".—Новосибирск, 1980.—Т. 2.— С.174—175. (соавт. Мелихова А.Н.).

5. Влияние функционального состояния лизосом клеток Купфера на репаративную регенерацию печени//Труды 2-го Всесоюз. симп. "Структура и функции лизосом".—Новосибирск, 1980.—С. 114— 115. (соавт. Маянская H.H.).

6. О состоянии лизосом клеток Купфера печени при стимуляции бактерийными полисахаридами//Труды 2-го Всесоюз. симп. "Структура и функции лизосом".—Новосибирск, 1980.—С. 203— 204. (соавт. Кутина С.Н., Правоторов Г.В.).

7. Опыт экспериментального моделирования мезенхимальных гепатитов. / / Новые методы научных исследований в клинической и экспериментальной медицине.—Новосибирск, 1980.—С. 62—66. (соавт. Маянский Д.Н.).

8. Зависимость репаративной регенерации печени от функционального состояния клеток Купфера//Современные проблемы общей патологии в аспекте адаптации.—Новосибирск, 1980.—С. 65—71 (соавт. Маянский Д.Н.).

9. Lysosomal enzyme activity in hepatocytes and Kupffer cells from intact and partially hepatectomized rats//Biochem. Experim. Biology.— 1980.—V. 16,—N 3.—P. 309—314. (соавт. Маянский Д.Н., Маянская H.H., Панин JI.E.).

10. О восстановлении популяции клеток Купфера после их нагрузки инертным коллоидом//Бюлл. эксперим. биол. мед.—1981.— T. XCI, N 3.—С. 374—376. (соавт. Маянский Д.Н.).

11. Реакция макрофагов печени на нагрузку инертным коллоидом//Труды 1-й областной конф. "Внедрение новых методов в практическое здравоохранение и научно-исследовательскую работу".— Новосибирск, 1981—С.90—91.

12. О роли макрофагов в формировании иммунопатологического процесса в печени/ /Труды Всесоюз. конф. "Актуальные вопросы иммунологии".—Алма-Ата, 1981.—Т.1.—С. 121 —122. (соавт. Маянский Д.Н., Кутина С.Н.).

13. Адаптивные изменения стромы печени под действием бактерийных стимуляторов//Труды 3-й Всесоюз. конф. "Адаптация человека в различных климато-географических и производственных условиях".—Новосибирск, 1981.—Т. 2,—С. 175—176.

14. Реактивные изменения стромы печени при введении зимоза-на//Бюлл. эксперим. биол. мед.—1981.—T. ХС11.—№12.—С. 731—734 (соавт. Маянский Д.Н., Правоторов Г.В.).

15. Реакция стромы печени на микробные полисахариды//"Актуальные исследования в генетике и практическая реализация их результатов".—Минск, 1982.—С.108.

16. Kupffer cells: their role in liver injury and regeneration//Abst. 9-th Internat. RES Congress.—Davos, Switzerland, 1982.—P. 21 (co-авт.Маянский Д.Н., Маянская H.H., Кутина С.Н.).

17. Электронно-микроскопическое исследование печени при стимуляции клеток Купфера бактерийными полисахаридами//Труды 3-й Всесоюз. конф. по патологии клетки.—Москва, 1982.—С. 111 (соавт.Правоторов Г.В., Кутина С.Н.).

18. Особенности роста in vitro печени частично гепатэктомирован-ных крыс/ /Деп. в ВИНИТИ, 1982, No 2209-82 (соавт. Маянский Д.Н., Бакулина Л.Ф.).

19. Саморегуляция системы мононуклеарных фагоцитов как важное условие резистентности//Труды 3-го Всесоюз. съезда патофизиологов.—Москва, 1982.—С. 25 (соавт. Маянский Д.Н., Рудакова С. А.).

20. Особенности пролиферации гепатоцитов после стимуляции системы мононуклеарных фагоцитов БЦЖ//Бюлл. эксперим. биол. мед.—1982.—T.XCIV.—No 11.—С. 96-98.

21. Пролиферативный ответ паренхимы печени после воздействия на её макрофагальную систему//Труды конф. "Теоретич. и практич. вопросы профилактики, диагностики и лечения наиболее распространенных заболеваний Сибири и Дальнего Востока".—Новосибирск, 1983.—С. 184—185.

22. Взаимоотношения между мононуклеарной инфильтрацией и репаративной регенерацей печени//Труды конф. "Теоретич. и практич. вопр. профилактики, диагностики и лечения распростр. за-бол. Сибири и Дальнего Востока".—Новосибирск, 1983.—С. 185— 186 (соавт. Комлягина Т.Г.).

23. Новый принцип изучения реактивности системы мононукле-арных фагоцитов//Новые методы для мед. практики и медико-биол. исследований.—Новосибирск, 1983.—С. 57—59 (соавт. Маянский Д.Н., Рупакова С.А.).

24. Растормаживание системы мононуклеарных фагоцитов микробными стимуляторами//Патол. физиол. эксперим. терапия.— 1983.—Вып. 4.—С. 52—55 (соавт. Маянский Д.Н., Правоторов Г.В.).

25. Печёночные макрофаги как возможные инициаторы пролиферации гепатоцитов//Труды Всесоюз. симп. "Медиаторы иммунного ответа в эксперименте и клинике".—Горький, 1983.— С. 182—183 (соавт. Маянский Д.Н.).

26. Растормаживание пролиферации гепатоцитов при изменении функционального состояния ретикулоэндотелиальной системы / / Бюлл. эксперим. биол. мед.—1983.—Т. XCVI, N 9.—С. 106—108 (соавт. Маянский Д.Н.).

27. Макрофаг в общепатологических процессах//Труды Всесо-юзн. симп., посвящ. 100-летию создания И,И. Мечниковым фагоцит, теории иммунитета.—Москва, 1983.—С .147—148 (соавт. Маянский Д.Н., Кутана С.Н.).

28. Купферовская клетка как модулятор пролиферации гепатоцитов//Труды Всесоюзн. симп., посвящ. 100-летию создания И.И. Мечниковым фагоцит, теории иммунитета.—Москва, 1983.—С. 243 (соавт. Комлягина Т.Г.).

29. Макрофаг как индуктор пролиферации//Труды конф. морфологов Сибири "Эпителий и соед.ткань в норм, экспер. и патол. условиях".—Тюмень, 1983.—С. 22—23 (соавт. Маянский Д.Н.).

30. Клетка Купфера регенерирующей печени: ультраструктура и функции лизосом//Ультраструктурная патология печени. Сер. Экспериментальная медицина.—Рига, Зинатне, 1984.—N 17.—С. 99—106 (соавт. Маянский Д.Н., Правоторов Г.В., Маян-ская Н.Н.).

31. Зависимость мононуклеарной инфильтрации печени от пролиферации гепатоцитов//Бюлл. эксперим. биол. мед. 1984.— Т. XCII.—N 5,—С. 621—624 (соавт. Маянский Д.Н., Комлягина Т.Г.).

32. Развитие повреждения и репаративной регенерации в зависимости от реактивности макрофагов//Abstract Band IV Pathophysiologic — Kongress rait internationalen Beteilung "Umwelt und gestorte Function" (IV-th Congress of Pathophysiology, Environment and Disturbed Function).—Leipzig, DDR, 1984.—C.138

(соавт. Маянский Д.Н., Кутина С.Н., Воронин А.Ю., Шишкина Л.Н., Воронина Н.П., Рудакова С.А., Зубахин АЛ.).

33. Регенерация печени в разные периоды мононуклеарной инфильтрации, индуцированной зимозановыми гранулами//Бюлл. эксперим. биол. мед.—1985.—Т. XCIX, N 3—С. 288—290. (соавт. Маянский Д.Н., Комлягина Т.Г.).

34. Об особенностях воспалительной инфильтрации регенерирующей печени / / Труды конф. "Актуальные вопр. патофизиологии".—Новосибирск, 1985.—С. 50—51 (соавт. Комлягина Т.Г.).

35. О комплексном изучении реактивности фагоцитов при воспалительных заболеваниях легких//Труды Всесоюзн. конф. "Профилактика, диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний и вторичных иммунодефицитов".—Новосибирск, 1985.—Т.1.— С.110—111.

36. Комплексная оценка функции фагоцитов при воспалительных заболеваниях. Методические рекомендации. Министерство здравоохранения РСФСР.—Новосибирск, 1985.—17 с. (соавт. Маянский Д.Н., Макарова О.П.).

37. Влияние стимуляции макрофагов на регенерацию гепа-тоцитов//Патол. физиол. эксперим. терапия.—1985.—Вып. 5.— С.50—55 (соавт.Маянский Д.Н., Шимек И.).

38. Проблемы воспаления в общей патологии//Бюлл. Сибирского отделения АМН СССР.—1985.—N 6,—С.82—86 (соавт. Маянский Д.Н., Маянская H.H.).

39. Роль макрофагов в восстановительных процессах//Труды пленума правления Зап.-Сибирского об-ва патофизиологов "Механизмы патологических реакций"/Под ред. Е. Д. Гольдберга.— Томск, 1986.—Т.4.—С. 93—95 (соавт. Кутана С.Н., Зубахин A.A., Комлягина Т.Г., Шварц Я.Ш., Цырендоржиев Д.Д., Маянский Д.Н.).

40. Адаптивные изменения функции фагоцитов при острых и затяжных пневмониях//Труды 4-й Всесоюзн. конф. "Адаптация человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика".—Новосибирск, 1986.—Т. 1.—С. 155—156 (соавт. Макарова О.П.).

41. Отвечаемость нейтрофилов на стимуляторы при затяжных пневмониях//Труды 1-го съезда пульмонологов Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера.—Благовещенск, 1986.—Ч. 1.—С. 270— 271.

42. Миграция лейкоцитов и показатели HCT-теста при острых и затяжных формах пневмоний//Врач. дело.—1986.—№ 12.—С.72— 75 (соавт. Макарова О.П.).

43. Комплексная оценка функции фагоцитов при воспалительных заболеваниях//Медицинская наука — практике.—Новосибирск, 1986.—С.20—21 (соавт. Маянский Д.Н., Макарова О.П.).

44. Функциональная активность фагоцитов и лимфоцитов при затяжных пневмониях//Труды 9-й науч. конф. терапевтов МЗ Латв. ССР.—Рига, 1986.—Т. 1.—С.220-222 (соавт. Лазаренко Л.Л.).

45. Effect of the activation of Macrophages on the course of regeneration of rat liver following partial Hepatectomy / / Physiologia Bohemoslovaca.—1986.—V. 35.—P. 473—480 (соавт. Simek I., Mayansky D.N., Vosvrdova H., Cervinkova Z., Holecek M.).

46. Способ определения противовоспалительной активности.— Авторское свидетельство Nol272246. 23.11.86. Бюлл.—№ 43 (соавт. Маянский Д.Н.).

47. Общие законы развития хронического воспаления/ /Труды 19-го Всесоюзн.съезда терапевтов.—Ташкент, 1987.—Т. 1.—С. 17— 18 (соавт. Маянский Д.Н., Рупакова С.А., Шварц Я.Ш., Кутина С.Н., Цырендоржиев Д.Д.).

48. Оценка дыхательной активности нейтрофилов с помощью НСТ-теста и хемилюминесценции/ /Новое в эксперим. и клинич. медицине.—Новосибирск, 1987.—С. 96—98 (соавт. Зенков Н.К.).

49. Способ определения резерва миграционной функции фагоцитов.—Авторское свидетельство Nol407251. 1988 (соавт. Маянский Д.Н.).

50. Определение показателей и выбор иммуностимулятора для лечения затяжных воспалительных заболеваний легких / / Труды науч. конф. "Эксперим.и клинич. иммунология на Востоке страны".— Красноярск, 1988.—Т. 1.—55 с.

51. Способ получения вещества стимулирующего пролиферацию клеток печени//Авторское свидетельство Nol421088, 1988 (соавт. Маянский Д.Н., Комлягина Т.Г.).

52. Изучение функциональной активности нейтрофилов при затяжных неспецифических заболеваниях лёгких//Матер, к распространению передового опыта мед.обеспечения войск.—Новосибирск, 1988.—Ч. 1.—С. 78—79 (соавт. Смирнов В.М., Кремнёв Ю.А.).

53. Применения метода "кожного окна" для оценки миграции фагоцитов при неспецифических заболеваниях лёгких//Матер, к распространению передового опыта мед. обеспечения войск.—Новосибирск, 1988.—4.1.—С.82—83 (соавт. Смирнов В.М., Кремнёв Ю.А.).

54. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам//Лаб. дело.—1989.—№ 1.—С. 30—33.

55. Разные варианты реагирования системы мононуклеарных фагоцитов на модификацию функции периферических макрофагов//Труды республ. конф. "Проблемы гистофизиологии соед. ткани",—Новосибирск, 1989.—С. 200—202.

56. Роль комплексного обследования функции фагоцитов в диагностике иммунодефицита, обусловленного дефектами фагоцитов// Труды 1-го Всесоюзн. иммунол.съезда.—Москва, 1989.—Т .2.—С.

57. Новый подход к подбору иммуностимуляторов для лечения затяжных воспалительных процессов//Труды Всесоюзн. конф. "Развитие производит, сил Сибири и задачи ускорения науч.-технич.прогресса".—Новосибирск, 1989.—Ч. 1.—С. 204.

58. Способ дифференциальной диагностики постинфекционной и поствакцинальной аллергии на туберкулин у детей и подростков. Авторское свидетельство Nol548694, 07.03.90. Бюл. № 9 (соавт. Аксютина Л.П., Маянский Д.Н.).

59. Макрофаги: новая функция — рострегулирующая//Успехи соврем, биол.—1990.—Т. 109.—№ 1.—С. 106—119.

60. Migration activity of monocytes in pneumonia and pulmonary tuberculosis/ /Abst. "Mononuclear phagocyte system in normal and pathological states"/ All Union Simposium with the participation of foreign Scientists.—Novosibirsk, 1990.—P. 125—126 (соавт. Аксютина JI.П.). .

61. Использование показателей функциональной активности фагоцитов для оценки активности воспалительного процесса / / Матер, к распространению передового опыта мед. обеспечения войск.—Новосибирск, 1990.—Ч. 2.—С. 147—148 (соавт. Галузо В.В., Смирнов В.М.).

62. Peculiarities of Interaction of Mononuclear Infiltration and Reparative Regeneration of liver / / In Abst. 5-th Internat. Simposium on Cells of the Hepatic Sinusoid.—Tucson, Arizona, USA, 1990.

63. Macrophages and Liver Regeneration//Abstr. "Constituent Congress Internat.Soci for Pathophysiology".—Moscow, 1991.—P. 288.

64. Купферовская клетка как элемент поддержания хронического воспаления печени//Труды Всесоюзн. симп. с международным участием.—Новосибирск, 1991.—С. 57—58.

65. Активированные макрофаги и гранулематозное воспаление / / Бюлл. Сиб. отд-ния РАМН.—1992.—№ 4.—С. 104—106 (соавт. Цы-рендоржиев Д.Д., Маянский Д.Н.).

66. Фагоцитарные механизмы хронизации воспаления/ /Труды Первого Российского конгресса по патофизиологии с международным участием. "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы".—М., 1996.—С. 2273.

309.

Соискатель

В. И. ЩЕРБАКОВ

Зак. 27. Тир. 100. Печ. л.. 2. Формат 60x84Vlo- Подписано в печать 25.02.97.