Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Эпизоотологическое значение блохи в тувинском природном очаге чумы

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ■ КОМИТЕТ РОССИИ Ш САКЙТАРНО-ЗЩДЕМИОДОГИЧЕЗКОУУ НАДЗОРУ I

РОССИЙСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО - КРАСНОГО ЗНАМЯШ НАУЧНО- .—А-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ. ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ "МИКРОБ"

На правах рукописи

БАЗАНОЗА Любовь Петровна

УДК 595,775:579.842.23(571.52)

ЭШЗО ОТОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕЩ£ ЕЕОХИ Сс^еЩоЛ^^ ¿е^^с/^у» В ТУВИНС1Ш ПРИРОДНОМ ОЧАГЕ ад 14.00.20 - Эпидемиология-

Автореферат

диссертации на ссисяание ученой степени кандидата биологических . наутг.

Л"

/ Л /' ✓ Слрътоё /Р05

/■ ' с ' иг/ Г- /

Работа выполнена в Иркутском ордена Трудового Красного Знамени государственном научно-исследовательском противочумном институте Сибири и Дальнего Востока.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РСаСР И.Ф.ШЙ1ЫЙ, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник М.П.11А.ЕВСК1Й.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук П.А.ЧИРОЗ; кандидат биологических наук Т.В.КНЯЗЕВА.

Ведущая организация - Ставропольский НИШИ.

Защита состоится 30 карта 1993 г. в 1300 часов на заседании специализированного совета Д 074.32.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Российском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском противочумном институте "¡¿икроб" (410071, г.Саратов, ул.Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института.

Автореферат разослан 22 февраля 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

КОРНЕЕЗ Г.А.

ЗВ5ДШИ2-

• АКШЛЬНССТЬ ПРОЕДЕЫЫ. Механизм передачи инфекции зараяекной >лохой здоровому животному иозет быть весьма разнообразным (Иоф£> ;941). В последние десятилетия работы многих авторов, исследующих ¡роблему передачи возбудителя чумы блохами, лосвяцены з основном (зучениг образования а предаелудхе насекомого бактериального блока, юторый принимается в качестве единственного механизма трансмис-:ии. При этом не всегда учитываются различные условия, складываю-1иеся в природном очаге: сезон года, возрастной л половой состав юпуляцик переносчика, возможность образования блока э отдаление после заражения блохи сроки я др. Передача укусом - не ецин-:тзенный способ распространения возбудителя чумы блохами, однако, забот, посвяденных возможности осуществления других способов пэ-зедачи» крайне недостаточно.

Одной из наименее решенных проблем теории природной очаговс-:ти чумы является механизм сохранения возбудителя в межэпизооти-1ескиЯ период. Знание мест и формы переживания возбудителя позвонит более целенаправленно осуществлять его поиски в период отсут-:тзия зпнзоотий в очаге. Изменчивость чумного микроба а организме 5лохи должна предусматривать я специальные методы его выделения г измененных формах.

Таким образом, изучение особенностей,блокообразоаания у блох з зависимости о? различиях факторов (пола и возраста насекомого, сезона года), других способов пэррдачи возбудителя блохами и его изменчивости в организме переносчика представляется актуальным хал для Тувинского, так л для других природных очагов, а также алл дальнейшего развития теории природной очаговости чумы.

Ц£ЛЬ РАБОТЫ. Изучить в эксперимента разл::чянз способы передата чу»кого микроба блохой С. ь. аНаасиз, язменчквость цкркулх-рупдего з очагэ возбудителя э организме данной блох:» для установлен:^ дополнительных ^актсрсэ, обослеч/загяцих е:1 роль основного перенос-гика з Тувинском природном очагэ чутчз..

- еылэнть основные- свойства популяции С.1.а1га1смз ч Тузе, спог.обетзугглке распространение возбудителя туш блохой спели зверьков длиннохвостого суслика я сохранение зозбудптелл з огз.-низме домной блохи;

- провести анализ естественной зараженности популяции в Ту-винскок природном очаге чумы;

- исследовать особенности блокообразовакпя в зависимости от сезона года, с учетом разнородности популяции до полово^' в возрастному составу;

- определить возможность к условия осуществления всех известных способов передачи возбудителя чумы блохой;

- установить длительность сохранения возбудителя чумы в организме блохи к возможность-блокообразоваяия е отдаленные после за ранения переносчика сроки;

- изучить фенотилическут? изменчивость возбудителя чумы в организме денной блохи, выявить условия к формы его существования в переносчике в межсезонный период.

НАУЧНАЯ Н0Б23НА.. Впервые для Тувинского природного очага чумы изучена заражающая способность блохи С.1.а11&1сиз с учетом сезона года, возраста и пола переносчика, эффективность всех известных способов передачи чумного микроба блохой к фенсткличе-скак изменчивость возбудителя в организме основного переносчика.

Установлено, что частота блокирования меняется по сезонам к ее повышение по времени совпадает с периодом активизации эпизоотического процесса в очаге. Образование блока лреджелудка происходит в широком диапазоне температурных условий. Каблзадаются различия в частоте блокирования блох разного пола -л возраста. Возыот-но образование блока преджелудка в отдаленные после заражения блох сроки.

Выявлена возможность осуществлзния различных способов передачи кнфекиик блохой длиннохвосто^* суслику; наиболее эффективным для заражения сусликов в эксперименте оказался способ инфицирования через ловрезденнув козу зверька при внедрении возбудителя иг раздавленных на теле животного блох и их экскрементов.

Доказана возможность заражения длиннохвостого суслика чумой при контакте с субстратов гнезда, зара^екны:.-. экскрекентаии к трупами блох.

Остановлено, что обычным проявлением с е к от кг.: :ч е с к с Г:: изменчивости возбудителя чукк, циркулирующего в очаге, г организме С. является Л-трзксформация микроорганизм, которая

выражается в переходе из палочковидной формы в шароввднув. Зри поступлении бактерий чумы ь организм блох:; начинается процесс

ipeобразования их в измененные формыу которые стойко сохраняется 1ишь у голодающих насекомых.

' ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬРезультаты" проведенных. исследований ' 'сворят о необходимости учета различных способов .трансмиссии воз-5удителя чуьы и форм его сохранения в организме переносчиков для уточнения прогноза эпизоотической обстановки в природных очагах 1умы. По материалам выполненных исследований разработаны и внедрены в.практику эпизоотологического обследования сибирских природных счаговчумы "Методические рекомендации ¡то повышения результативности исследований эктопаразитов з. природных очагах чумы" (Иркутск, 1990).

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации представлялись на региональном совещании.противочумных учреждений по:эпидемиологии, эпизоотологии и. профилактике.особо опасных инфекций'(19-20 декабря IS39 года, г.Уральск), ка научных конференциях Иркутского научно-исследовательского-противочумного института м IS88-I99I гг., а также на научно-производственном совете специалистов Тувинской противочумной станции- в -I99I году. ' . -

ГШОНЫЭДН, ВЫНООШЕ НА.. 2А2ЩУ.. Раскрывается свойства популяции, обусловливающие C.t.altalcua роль основного переносчика чумы в Тувинском природном очаге. При оценке эпизоотологического Зпачения блохи, необходимо учитывать как специфический, так и дру-. гие способы передачи возбудителя, которые в отдельных случаях могут играть сущеетзеннуп роль в тррдсынссии чумного микроба. Установлена зависимость активности.бяокоабразапания у блохи'от пола, возраста насекомого и сезона- года... Возбудитель чумы а организме переносчика подвергается Л-тралсформярущему зоздействи-с. изменяя при этом свою морфологии и улмраструктуру, что должно учитываться при бактериологическом исследовании -блох. .

ПУаоИКАДИИ. По материалам диссертации1 опубликовано 6 работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИХгР1й1£ГЛ., Диссертация изложена на 151 странице машинописного текста. Состоит' из- введения, б глаз, обсуждения полученных.результатов и выводов, содержит 20 таблиц и 9 рисунков. Список использованной литературы включает. 232 отечественных и 20 иностранных работ.

СОДЕРйаНИЕ РАБОТЫ

Результаты эпизоотологического обследования Тувинского приро, ного очага не да;от оснований д.:я игнорирования трансмиссивного пут;: передача чумы, который осуществляется, главном обрезок, бл хоГ; C.t.altaicus. Показано, что частота образования блока у данной блохи не греьызаст 5,8 продолжительность тизни инсг;ган< рованных блох составляет 33-9-1 дня (срок наблюдения), а блокированных 9-15 дней (срок наблюдения), максимальные сроки обнаружения чумного микроба у зараженных блох - Г7-78 дней (£ео:-:тистов ; др., 1271; Лкуба и др., 1374; Воронова, Краков, 157а; Воронова, 1Э7е). По результатам дакшх исследований зта блоха отнесена к группе видов со слабой способность» к блокообразованию, е'е свя; с этим к малоактивным переносчикам возбудителя чу:.:-.' (Важенок, 1Л38), что не соответствует представления:.: с C.t.altaicus как основном переносчике чумы в Тувннско:- природном очаге, ¡¿а лрзд.и лехили, что слабая способность к блокообразовалию, невысокие индексы обилия, отра-аг^ие численность переносчика (всобпе характерные для горних очагов), компенсируются у C.t.altaicus какими-то другими факторами (возможно механизмами) передачи, способствующими активному распространению возбудителя чумы данной блохой. Для проверки нашей гипотезы было необходимо проведение кокс лексных экспериментальных исследований по изучекнз опкзоотолеги-ческой роли блохи в Тув'.аюком природном очаге чум:.

ЫАТЕРИДЛ И метода

Б основу диссертационной работы положены многолетние полевые и экспериментальные исследования, проведенные на базе лаборатор; У.снгун-Тайгинского эпидотрлда Тувинской противочумной станции и ь Иркутском противочумном институте. Проанализированы архивные материала Тувинской противочумной станции с 1254 по 1930 годи. В опитах использовано 10600 блох C.t.altaicus, 950 Z.chsopis, 552 длиннохвостых суслика и 385 белых килей. Изучены биологичее: свойства 25 субкультур исходного стажа чумного микроба.

Для заражения зверьков и блох использовали типичней для очаг; штамп чумного микроба И-3226, изолированный от блохи c.t.altai-cus, ДД50 штамма, определенная по методу Кербера, составляла

для длиннохвостого суслика а весенний период 100 м.к., для белой мыз и - I м,к. Елох з арата ли на агонирующих сусликах при наличии у них интенсивной бактериемии. Насекотх содержали в помещении, где температура и златлость зездуха были близки к такозым в природных условиях очага, т.е. зависел;: от с из сна года, го время которого проводили опыт. Отдельные свойства популяции блохи изучали в условиях искусственного гнезда длиннохвостого суслика.

При изучении возможности инфицирования суслика через слизи-стуо рта п.рл рглгрыззлпи и поедании блох з опыт брали голодных .зверьков. Сусликов западали суспензией из 1-5 блох, которую а объеме 0,1 мл при по:.таци микропипетки наносили на слизистуз рта.

Для изучения возможности инфицирования сусликов возбудителем чумы через повретденнус кожу з предварительно скарифицированную коту зверька втирали раздавленных блох или их экскременты.

Трупы и сухие фекалии блох оставляли на длительное хранение з песке, на котором содержали зараженных насекомых. Сухой, инфи-дирезакннй возбудителем чумы субстрат, был гепользован для заражения бпопребных :г.и20т:гых. Он служил сусликам подстилкой в 10-гитрсзсЛ стеклянной банке.

Бактериологическим, биологические и сгрологическим методами ¡¿следовали органы животных, трупы блох, субстрат, в котором юдэсяаяи инфицированных блох. Нивых блох исследовали иидивиду-льно и групповым кетодоы. Объекты исследования высевали на агар .оттннгера с гениканвиолетом (1:20ССС0), среды УДС и ЛС-2, разра-отаннкэ а Иркутском протизочумшм институте.

Особенности возбудителя в организме C.t.altaicas изучали у тем жкрсскопнрозания содержимого келудочно-кизечного тракта яфлцирезанкых блох с помощью сзето-сптического, фазово-контраст-ого электронного микроскопов.. Суспензию, приготовленную из эдерпсимсго желудков зара-.тенных блох, фильтровали через мекбран-ie фильтры с диаметром пор 0,45 Лсс:л и зысезали полученные фильтры на збычнчэ среды и сред;' для культивирования Л-форм. Улзки i соазр-?::у.ого гкалудког :жфиш!ро«ан!г^х блох готовили по методике с соавтора»'/. (1974). :1одготозку матэриала для злгктрсн-|-микроскопачес:<ого нссл?дсзон::я проводили по методике, разр.ю'о-нной з Золгоградском научно-исследовательском лретпзочуглно;.« стнтуте (1383).

Часть тлвотннх, на которых корккли "яерезимозавдах" и инйгщи-

рованшх блох без "видимого" блока, дополнительно исследовали в иммунологических тестах. По методу В.И.£радкина (1952) определяла показатель повреждения нейтрофилов' (ГШ), исследовали органы сусликов на наличие антигена 11 чумного микроба с лсмодьз радиоиммунного метода (?*1А).

Блох х.сЬеор!в использовали для изучения способности к блокообразованис у измененных форм возбудителя чумы и возможности передачи таких форм трансмиссивным путем.

Цесто С.г.ьНаасив в таксоценозе блох длиннохвостого суслика. Основные свойства популяции С.г.а.ЗЛаз.сиа и их значение для эпизоотологии чумы

Елоха С.г.а1га1сш; специфический паразит длиннохвостого

суслика. Это самый многочисленный вид блох на зверьках, во. входах нор к второй по численности в летнее время в гнездах суслика. По данным ¿¿окгун-Тайгинского стационара за 1376-1533 гг. его доля среди других видов $дах составляла на зверьках - 47,8 %, во входах нор - 55,5 %, в гнездах - 24,4 %.

Помимо основного хозяина блоха встречается на других водах животных, обитающих в тех же биотопах и вступающих с сусликом в экологические контакта. В Туве регистрируется на монгольской (и.д. 9,6 %) и даурской (и.д, 9,0 %) пищухах, реке ка лласкоче-репнсй полевке (и.д. 0,8 %).

Ыикропопуляция блохи в естественных условиях размещается в гнезде, во входах кор к на самом зверьке. Основным местом обитания блохи является гнездо. Здесь находится основная часть имаго (от 59,6 % до 99,5 %) и все лргимагинальные фазы. Количественное распределение микропопуляцик в микробиотопе по сезона:.: -ке остается постоянны:.'.. Так, в мае отмечен высокий индекс верности на ззеры:ах; б квне - этот индекс ка зверьках снижается и возрастаем б гнездах. В киле, с началом вы^лода имаго нового поколения, индексы верности на зверьках вновь увеличиваются, а б гнездах падают. 3 августе индекс верности в гнездах начинает расти и достигает ь сентябре 91,8 %.

Зимуют, е основном, молодые имаго в неактивном, состоянии, кьк в присутствии хозяина, так к без него. С.г.аНазхив способны перезимовывать в летних гнездах суслика.

кассовое размножение блохи приходится на ишь - первую половину ичля, когда разложение сусликов сознает в аыводкозих гнездах особо благоприятные условия для блох (постоянное присутствие лрокормителя, устойчивый микроклимат). Размножение популяции

С. 1.аИа1сиз на длиннохвостом суслике продолжается с мая по сентябрь.

Соотношение физиологических возрастов самок в популяции меняется в течение сезон;-. 5 апреле з популяции преобладают самки 1-П физиологических возрастов, размножающиеся особи астречавтся иа зверьл^.х э небольшом количестве. В летний сезон в популяции з основкс:.; блох:: £-1У физиологического возраста, а к осени значительно (до СО ,1) увеличивается доля молодых особей с хорошо развитии жировнм тзлом. Процент старых блох в популяции небольшой (5,3 £-6,3 55), максимум приходится на июль (10,9 %).

5 течение года у блохи полностью завершается развитие только одного почал-ния. Небольшая часть популяции успевает пройти два цикла развития. Подавляющее большинство имаго вступаот в зимовку, не приступая к разложению.

3 ерзднзм за сезон, по многолетним наблюдениям, а популяции С.г.а1га1сиз самцов почти здвое меньше, чем самсгк (половой индекс - 0,57). Низкий половой индекс на звэрьке и во лходах нор (0,4-0,5), несколько выпе в гнездах (0,5-0,7). Соотноление полов изменяется з течение сезона. Во входах нор и на зверьке половой состав популяции изменяется сходным образом, с минимумом самцов и голе, когда идет отмирание старой генерации блох, и максимумом а азгусте-сзнтябрэ, в езязи с выплодом нового поколения. В гнездах максимальное значение головой индекс достигает б мае, когда . начинается вчгплод им^го из перезимезгнпих преиматинальных фаз.

Продолжительность жизни'блох аесоннэго зналода составляет 4—э месяцев, л ссенц они пегнбажт. Нлохи осеннего еыллодз переживают зи;.=у, продолжительность их жизни достигает 10-11 мзсяцез. В калнх опытах отдельные особи С.*.а1га1сиз при температуре 1-3 °С ч относительней влажлости 67-50 % прожили 662 дня (срок наблюдения).

Сезонная численность лслулкции максимума достигает в. жене (облпй залас С2,3), когда к перезимовавшей части имаго назднлхт прибавляться блохи весеннего заплода. В июле общи;{ сапяс падает до минимума {13,4). Происходит отмирание старой генерации и начинается выплсд новой. В свгусте численность блох поднимается,

обций запас составляет 14,4 за счет увеличения их числового обилия в гнездах £12,9). Численность ка зверьках и во входах нор в этот период снижается. Б коше августа-еентябре обдий запас увеличивается до 15,2 такке за счет увеличения обилия особей в гнездах (14,0). Численность на зверьках и во входах нор продолжает сн^аться.

Поскольку основная часть популяции C.t.&itaicus находится е гнезде, индекса Бстреча-жости этого вида в гнездах длиннохвостого суслика еесъма высокие во все сезоны года. Сезонные изменения этого показателя б обдем повторяют сезонное движение числового обилия.

Значение С.t.altaicas как основного переносчика чумы в Тувинском природном очаге объясняется особеш.стямп ее экологии. Количественные показатели численности и их движение, доминирование данного в;ща на зверьках, высокий процент молодых, активно питах^ихся. блох в популяции, длительность пндпв;:дуалъкой киз-пи особей (от 5-6 до 10—II месяцев), способность •: переживанию низких температур в холодное время года обеспечивают гф.тектиб-ность блохи как переносчика и хранителя инфекции в очаге. При оценке эпизоотологической роли блохи следует учитывать /. способность данного вида переходить для питания на других животных, например, на монгольскую и даурскую лигух, что обеспечивает еы~.и-вание популяции при резком снижении численности основного хозяине осуществление мзезидовых эпизоотические контактов грызунов и рассеивание инфекции по территории очага.

^стестьенная зараженность популяции C.t.altaicus возбудителе:.', чумы е Тувинском природном очаге

Подавляющее большинство культур (около 50 %) возбудителя чуь^-т ь Тувинском природном очаге изолировано от длиннохвостого суслика и его эктопаразитов. С начала изучения очага (1954 г.) от блехи C.t.altaicus 'выделено 333 культур везбудстеля чумы (55,25 всех культур, изолированных от переносчиков). От блох, снятых с суслика - 137 культур, собранных из входов нор - 195 культур, выбранних из гнезд - б культур, ¿диничнь'е культуры возбудителя отмечены в мае и в 1-П декадах коня. Б Ш декаде июня число выделенных культур резко увеличивается, достигает своего пика ь икле

и с I декады августа начинает снижаться.. Зо П-Ш декаде сентября за все время изучения очага выделено зсего 2 культуры возбудителя чумы от блохи С.t.altaicaa.

Пик выделения культур от блохи C.t.altaic-из совпадает по времени с пиком индекса доминирования (и.д.) и вторым пиком индекса встречаемости (и.а.), который приходится на середину изля, т.е. естественная зар&гзкность блохи в Тувинском природном очаге чумы связана с индексами доминирования и встречаемости этого вида на длиннохвостом суслике.

скслерпментальное изучение зпизоотологкческого значения С. t.altaicT23 н Тув:шскоы природном очаге чумы

Длительность сохранения чумного микроба в организме блохи. Общеизвестна роль блох зимоспячих грызунов ч сохранении возбудителя чумы з з::мииЛ мехэпизоогический период. Находки зараженных чумой особей C.t.altaicus а гнездах длиннохвостого суслика при зимних раскопках позволили предположить, асзможссть сохранения зозбуд/.теля чумы з Тувинском природном очаге блохами этого пида (Ткаче ни о и тр., 19833 .

В налих экспериментах насекомые, га-йицировзкиыс осенью, пере-.живали зимний период лучпе, чем блохи, зараженные летом. Зимний период перевивали от 54,2 % до 77,3 % особей, инфицированных осенью предыдущего года. Чумной микроб при этом сохранялся более, чем у половины (50,0-64,3 %) перезимовавших особей в течение девяти месяцев (срок наблюдения). От одного эпизоотического сезсна до другого выбивали в разных сериях опытов от 0,7 до 19,4 % зараженных особей. Возбудитель чуш при этом сохранялся у 20 насекомых з течение одиннадцати месяцев. ¿дпя:г~;къ:г особи, в основном са:«::, пере-изали два зимних периода, сохраняли возбудителя чумн белее £00 суток (642-С43) и осуществляли передачу инфекции ззерь-Yäit. Отмечено блакоабразозание у перезимовавших особей з весьма отдаленные после инфицирования блох сроки: в первом опыте - на £82-?£3, во втором - на 392-394, а третьем - на 411 сутки. Пег.е-дача возбудителя чумы длижохзостому суслику перезимовавшими блохами в разных сериях опыта происходила на 2S0, 391, 400, 402, 404,. 642-644 и 646. сутки.

*I2

В весенний период перезимовавшие блохи слабо осуществляли переда^' возбудителя чумы здоровы:.; суслика.«.:, в надем опыте только б одном случае из 12. Более активно блохи передавали чумной микроб в летнее время - б конце квня-азгусте - е период активного проявления эпизоотического процесса б очаге. В зто гремя передача инфекции суслика:.' происходила при первой же подкормке ле-резиковаегих насекомых. Зимнее время в состоянии оцепенения, перевивали и С.'эху, с блоком дреджелудка, длительное время (более 200 дней) сохраняя возбудителя чумы.

Передача возбудителя "блокированными" блохами. 3 качестве универсального показателя сравнительной активности блох как переносчиков наиболее часто используется выраженная б процентах "частота блокирования'', ¡¿i: изучали динамику блокообразовалпя по сезонам года с учетом разнородности имагкнальноп части популяции по возрастному и половому составу, выявляли инфекциозность укусов блокированных блох.

5 опытах использовали блох двух возрастов. Первая группа -"молодые", вь'плода текущего года, вторая группа - "перезимован-Еие"., инфицированные осенью и содержавшиеся в условиях искусственной коры без прокорыктеля. Проведенные исследования установили нал:п4ие сезонных изменений частоты блокообразовакия. В конце квля-августе, е период активизации эпизоотического процесса е очаге, частота образования блока преджелудка среди молодых блох в эксперименте достигала максимума и составила 10,6 %. Срок от заражения до появления первого блока б это время минимальный -трое суток. Это способствует активной передаче возбудителя чумы длиннохвостому суслику. Осенью, в сентябре,- процент блокирующихся особей заметно уменьшается и составляет уже 6,0, что приходится на Есемя"спада эпизоотического процесса в очаге. Зимний период значительная часть инфицированных осенью имаго переживает в состоянии оцепенения. Весной, среди перезимовавших наеекокых блокируется менее 2 % особей. Передачи возбудителя зверькш.'. с активным проявлением инфекционного процесса в это время не отмечено. В июне, к началу активизации эпизоотии, частота образования блока у перезимовавших эктопаразитов начинает увеличиваться (4,6 %) и происходит передача возбудителя длиннохвостому суслику.

Установлены различия в блокообразовании по половому признаку. Частота блокирования самцов (7,0-21,7 %) среди.молодых особеГ

Bfce, чем самок (5,4-14,0 %). Среди самцов появление первых блокированных особей отмечено намного раньше (на 3 сутки), чем среди самоу (на 15 сутки). 0 разнице в блокировании среди перезпмо-вандих самок и самцов судить довольно трудно, поскольку зимний ' период ь состоянии оцепенения переживают в основном сажи. Вероятно, что рель самцов и самок с.t.altaicas в энзоотии чуьы в Туве не равнозначна. Образование блока у сакцов наступает в более ранние сроки и в период активизации эпизоотии гораздо чаше, чем у самок. Но посколоку продолжительность их гсизнк меньше, их роль, видимо. заключается в более активное, чем у самок, распространении инфекции. Самки же в данном случае выступают как хранители инфекции, что связано с большей приспособленностью их к неблагоприятный условиям внешней среды и длительностью индивидуальной жизни. Отдельные особи самок могут сохранять возбудителя чумы около двух лет (срок наблюдения).

Показатель инфек-инозности (Бибикова, Классовский, 1974) блокированных C.t.altaicus довольно высок в сравнении с другими видам: блох. Зарегистрировано колебание этого показателя в зависимости от времени проведения опыта. Самый высокий показатель инфекцисзности укусов блокированных блох (0,60-0,70) в lü декаде июля-гзгусте. В это же время отмечена и наиболее высокая частота образования блока у инф;:цираванных блох.

Передача возбудителя чу мы з а -раненными н е б л о к к р о в а н н ы ы и б л о -х а к и. Известно несколько возмогных неспецифических способов передачи чумного микроба блохами. Одним из них является передача возбудителя зараженными неблоккрованными блохами.

Нами изучена возможность передачи возбудителя чумы при укусах неблокирсвачных блох C.t.altaicus во вро:.1я питания их на длпн-нохвосто:.; суслике. Натичке крови в передних отделах лицеЕ-ри-телького тракта кэблоккрованкых блох зарегистрировано почти у о % особей, использованных в экспериментах. При массовом питании (150 ссобей) на длиннохвостом суслике укусы инфицированных небло-кирозанных Олох в некоторых случаях вызывали генерализованную форму инфекции, которая заканчивалась гибелью животного. Возможность такой передачи вероятнее всего при питании молодых 5лох, выпледз текучего года, с высокой (90-100 %) интенсивностью заражения. Генерализованная форма инфекции в чалих опыта?: была заре-

гистрирована у 36,3 % сусликов, на которых кормились молодые особи. Укусы неблокирозанных блох, инфицированных осенью предыдущего года, с интенсивностью заражения 40-50 вызывали, у сусликов неинтенсивную бактериемию с последующим выживанием животного. Питание единичных (до 10 особей) неблокированных блох на длиннохвостом суслике, как молодых, тая и яерезимовавпих, вызываю иммуно-аллерглческую перестройку организма зверьков, о чем свидетельствовал показатель теста ППН. Положительный тест ППН был зарегистрирован у 50,0 % зверьков, взятых в опыт. По данным надих опытов инфицированные неблскированные блохи могут играть довольно существенную роль в реализации эпизоотического процесса в Тувинском природном очаге чумы- Возможность такой реализации будет зависеть от количества блох, питавшихся на суслике, интенсивности заражения насекомых и физиологического состояния как носителя, так и переносчика.

Передача возбудителя чумы при поедании инфицированных блох. Одним иг способов передачи чумного микроба блохами является инфицирование 'животного .через слизистую рта, при разгрызании зверьком зараженных блох- Установлено, что при самоочищении длиннохвостого суслика от блох, зверек может поедать от 4,6 до 14,0 % находящихся на нем эктопаразитов (Жовтый, Васильев, 1952).

Мы в своих опытах, моделировали алиментарный путь заражения, :нанося на слизистую рта суслика суспензию из раздавленных блох. Количество блох, используемых для. заражения одного ззерька, было близким к индексу, обилия (и.о.) С.г.а1га1сиз на длиннохвостом суслике в Туве. При .этом установлено, что длиннохвостый суслик чувствителен к заражению возбудителем чуга через слизистую оболочку рта. Положительные результаты получены как при инфицировании зверьков суспензией молодых-блох, с интенсивностью заражения 100 %, так и перезимовадших, с интенсивностью заражения 50 %, »'нф'.гцфеаание сусликов через слизистую рта вызызалс заболевание в среднем у 40 % зверьков, взятых..в опыт. Передача возбудителя при таком способе зар&жения сопровождалась генерализацией инфекционного процесса у сусликов,, сроки гибели животных■составили 4-10 суток. Необходима отметить, что. во время-проведения весеннего опыта (апрель-май) зарегистрирована передача возбудителя только при заражении зверьков через "слизистую рта". Поставленные

одновременно опыта по заражению ззерьков укусами блох, как небло-кированных, так и блокированных, не сопровождались передачей чумного микроба.

Проникновение возбудителя через повреаденнуи кожу. Проникновение возбудителя через поврежденную коку возютло из раздавленных на теле .г.ивотного насекомых мк их выделений. Количество вносимых при этом микробов мсг.ет увеличиваться при расчеса:-: коки, так как создается большая, чем при укусы; зона нарушения поверхности кохи.

В нша опытах передача инфекции при проникновении возбудителя через повременную кожу из раздавленных блох произошла в 14 случаях из 20, ил1'. 70 % зверьков, взятых в опыт. При проникновении возбудителя через ксау из выделений блох погибло от чумной инфекции 13 ззерьков из 20, или 65 % сусликов, взятых в опыт. У сусликов отмечена как затяжная форма инфекции с неинтенсивной бактериемией, так и генерализованная, с выделением возбудителя ил всех органов. Полученные нами данные не противоречат предположения;.! И.Г.Исффа (1541) и В.А.Бибкковсй с Л.Н.Класссзским (1974) о более высокой вероятности внесения возбудителя чугсы через нарушенную ко:-::/ хозяина., чем при поедании грызуном згра~енкых блох.

Передача возбудителя через субстрат, инфицированный энское м е н т а-м и и трупа м и блох. Наиболее вероятным субстратом для сохранения микроба чумы в почве нор является экскременты инфицированных блох и трупы этих насекомых. Изучения данного вопроса лосвяцены работы К.й.Кондралкинзй и Л.Н.Величко с соавтора-' м-и (1575, 1978, 1550).

Установлено, что возбудитель чумы до 427 суток (срок наблюдения) сохраняется в инфицированном окскремектс-ми и трупами блох субстрате гнезда. При ¡¡ндинндуальнсм бактериологическом и следовании трупов блох (255) изолировано 54 субкультуры исходного стажа :*—322С, тесть из нк только на специальной среде для ленпя возбудителя в Л-форме. При исследовании 22 проб субстрата возбудитель выделен только через бислрсбных гиьотыих (белая м-ыл>) в трех случаях. Возбудитель чумы после длительного пребывания (.--надих экспериментах 240-427 суток) вне кивого организма сохранил его:; вирулентность. Это доказывается случаями заражения длн;:н:<~ хвостсго суслика при контакте с субстратом гнезда, длительно со-

хранязземся при температуре от 8 до-10 °С и относительной влажности 87-90 %. Во время проведения весеннего опыта, при наличии возбудителя чумы з инфицированном субстрате, о чем свидетельствует выделение культуры от биопробы (белая мыль) и получение 42 субкультур от трупов блох, заражения сусликоз контактным путем не произошло. 3 летнее время (июль-август), в период активного проявления эпизоотии в природном очаге, че-рез контакт с субстратом гнезда в эксперименте заразились чумой четыре зверька из 16, взятых в опыт. Возможно, что физиологическое состояние сусликов влияет на их чувствительность к данному способу заражения.

Фенотяпическая изменчивость возбудителя чумы в организме блохи С.Ъ.а1Ла1си8

Возможность изменения возбудителя чумы в организме блохи определяется длительностью его пребывания в желудочно-кипечном тракте насекомого. Изменение морфологии чумного микроба характеризуется переходом из палочковидной формы в ¡лаповидную, что отмечено многими исследователями (Яунскпй, Бакаева, 1958; Бейер и др., 1974; Суворова и др., -Г378; Брвханова и др., 1984; Защенск, 1984, 1988). Очевидно, что только при полней или частичной утрате клеточной стенки микроорганизм способеь'из палочковидной переходить а ааро-взднущ или близкие к ней формы. 3 связи с этим нами была сделана попытка объяснить подобное превращение с позиции .¡¡-трансформации микроорганизмов.

Яри изучении морфологии и ультраструктуры зззС>удитзля чумы, циркулирующего в Тувинском природном очаге, а организме блохи с.г.аХгахсив нами нспольловаш молодые блохи, однократно ли-тивгиеся перед заражением и блохи, перезимовавшие бег. прокорми-теля. В первые десять суток после заражения одну группу блох содержали без лсдлормск, вторую периодически подкармливали на здо-резух сусликах.

3 блохах, содерзазлиуся без подкормки, лпоовидные фоа-гл отмечен:.: на атсрыь сутки. Размеры этих &орм от Г ыкм цо 2-3 мчм. Соетнелзнке полпчпоекднцх и ларовидных форм Т:Т. На треть;: сутки л в пеплгдутскз дни - только ааровх^зше формы микроба, з основном мол:-:.:е (0,3-0,5 мям), эдпнпчшэ и в "конгломератах", а г.елже коль-цесбраяныв фор.-ы - интенсивно скраденные по периферии.

В блохах, периодически подкармливаемых, встречаются постоянно и палочковидные и паровидше фор;/ы. В.. основного палочки и шаровидные формы расположены одиночно, реже - парами и совсем не отмечено скопления микробов в "конгломераты". У блох с блоком пред-желудка - только шаровидные формы,- очень мелкие, размером 0,20,5 хкм, бледно окрашенные, единичные и в "конгломератах".

. У перезимовавшие в состоянии оцепенения блох через лесть часов после кормления на суслике отмечены в основном палочковидные фор-га. Палочки короткие, есть среди них о'кполярные и окрашенные только с одного конца. Встречаются необычной формы - утолщенные с обоих концов - гантелевидные. Шаровидные формы средних размеров (1,5-2 ккм), бледно окрашенные. Соотношение палочковидных и шаровидных форм 2:1. У блокированных блох отмечены только шаро-вияные £ор:.ы, едгаичные и в "конгломератах", очень мелкие (0,2-С-,5 мкм), бледно окрашенные.

С немощью электронной микроскопии исследовали в основном длительно голодающие насекомых. 3 срезах желудочно-кишечного тракта зараженных блох было обнаружено, что через сутки после заражения насекомых бактерии чумы поодикочно или парами располагались среди разрушенных форменных элементов крови. Значительная часть бактериальных клеток в этот период округляется. На 10 сутки на срезах можно видеть в основной массе округлившиеся бактериальные клетки, некоторые значительно увеличившиеся з размерах, т.е. прослеживаются изменения, сопровождающие процесс образования протопластов или сферопластов у бактерий. Через 20 суток наблюдаются з основном деструктированные бактериальные «летки. На срезе отдельной клетки отчетливо видна тонкая внешняя мембрана (клеточная стенка) и более электронно-плотная - внутренняя. Такие особенности возможны за счет концентрации с внутренней стороны чумного микроба рибосом, поскольку условия нахождения возбудителя б длительно голодающих блохах способствуют иному метаболизму микроорганизма. 3 центре бактерии конденсирован куклеовд, что свойственно бактериям в неблагоприятных условиях среды обитания.

Дпепараты тонких срезов желудка блокированных .блох, образование блока у которых наступило через 9,5 месяцев после заралхкия, свидетельствуют о полиморфизме чужого микроба в организме насекомых. Это выражается небольшой величиной бактериальных клчток по отношению истинного размера возбудителя чумы, своеобразной

ультраструктурай самих микроорганизмов, которая включает дополнительные мембранные'структуры, а также формированием элементарных тел, образующихся в нуклеоиде.

Проведенные исследования показали, что в организме блохи С.г.аЗлаасиэ имеет место естественная Л-трансфермация чумного млкрсба, выражающаяся в переходе возбудителя э шаровпдну» форму. В отдельных случаях эти формы способны проходить через бактериальные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм. Образукциес;: в организме блохи Л-форкы способны к реверсии как на питательных средах, так и в организме лабораторных животных. Эта формы можно идентифицировать, как нестабильные Д-формы, которые, способны.длительное время пзрелсивать в организме переносчика, о чем свидетельствует сам факт нахождения возбудителя чумы после 9,5 месяцев пребывания в блохе.

Возможо обнаружение измененных форм чужого микроба в природных условиях, в местах циркуляции возбудителя чумы. Нами показана способность измененных форм к блокообразованию в организме Слохи Х.сЬвор1з и к- передаче трансмиссивным путем (Логачев, Базаноэа, 1988).

¿Исходя из полученных нами данных по Л-трансформации возбудителя чумы в организме С.г.аДЛаасиз и классификации подобных форм микроорганизмов С.В.Прозоровского с соавторами (1981) как условно стабильных и нестабильных, не диагностирующихся при использовании обычных методик бактериологического исследования, н<ы разработали свол методику исследования эктопаразитов с применением среды для выделения Л-форм. Применение среды "ЛС" посылает результативность бактериологического исследования эктопаразитов. в природных очагах чуш на 25-30 %.

вывода

I. Зпизсотологичзское значение блохи С.г.аДЛаасиз в Тузин-ском природном очвге чумы обусловлено свойства:« популяции данного нзда, такими, как: количественные показатели численности .дз:.зо4«ровзкие.блохи на оверьках и ьо входах нор), высокая лсс-доллихелзность жизни особей в естественных услсзиях очага, высокая- мигоздиокная и алиментарная активность, способность л лоре-гсиваниа иыаго низких температур в холодное время года, зыоокая

естественная зараженность блох возбудителем чуш в очаге.

2. Частота блокирования у с.1.аЛЛа1сиб меняется по сезона!/, у. ее повышение по времени совпадает с периодом активизации эпизоотического процесса в очаге: наибольшее количество блокированных особей в эксперименте отмечено в июле-августе. Образование блока преджелудаа происходит в аироком диапазоне температурных условий: от 5 до 18 °С. Установлены различия в частоте блокирования у блох ь зависимости от пола и возраста. Более часто по сравнению с перезимовавшими блохами блокируются "молодые", вы-ллода текущего года, а среди "молодых" блок образуется час;е у самцоЕ.

3. Доказана возможность передачи возбудителя чум;»- длиннохвостому суслику блохой С. 1.а1га1сиз различными способен.. Инфицированные неблокированные блохи способны в течение года (срок наблюдения) сохранять Еозбудителя чумы и осуществлять его передачу суслика;.:. Исход такой передачи мокет заключаться в зависимости от количества питавшихся блох в иммуноаллергической перестройке организма суслила или развитии инфекционного процесса - от под-острого течения с интенсивной бактериемией до острой генерализованной фермы инфекции. Высока эффективность заражения сусликов е эксперименте через слизистую рта при разгрызании и поедании ими зараженных блох и при проникновении возбудителя через поврежденную кожу из раздавленных блох и их экскрементов. Возможно, что такие способы передачи чумного микроба блохами оказывают влияние на скорость течения и распространения эпизоотии в очаге.

4. В организме С.г.а11а1сиз чумной шшроб сохраняется длительное зремя. Более половины (50,0-64,3 %) насекомых, инфицированных осенью, сохраняют возбудителя чуиы 10-11 месяцев; а около 30 % блох - 13-15 месяцев. Отдельные особи, в основном самки, могут сохоанкть возбудителя чумы 21,5-22,0 месяца (срок наб.-здения). Блокообразоволие возможно в очень отдатенные сроки на 282—411 сутки (срок наблюдения) после инфицирования Слох.

5. Л-трансфориация чумного микроба в организме блохи С.1.а11пз-сив является обычны« проявлением его фенотппичг-ской изменчивости, которая выражается в переходе из палочковидной Форм.' в шаро-ввдпую. При поступлении бактерий в организм блохи кач;я1аэт:я процесс превращения их в измененные формы, которые стойко сохраняется лиль г' голодающие насекомых. Во время периодические подкормок

блох возможна реверсия измененных форм. Образование блока пред-желудка приводит- к появлении в нем только измененных форм.

6. Возможно сохранение возбудителя чумы в .инфицированном экскрементами и трупами блох субстрахе гнезда длиннохвостого суслика. Чумной микроб сохранялся в инфицированном субстрате гнезда до 427 суток 'срок наблюдения) и служил причиной заражения сусликов. В трупах блсх, находящихся в субстрате гнезда, чумной микроб в отдельных случаях существует а измененной форме.

7. При бактериологическом исследовании блох в природных очагах чумы целесообразно наряда1 с обычными средами применять среды для выделения Л-форм чумного микроба.

СПИСОК РАБОТ, ОЯШЖОЗДШЫХ.. Ш ТИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Логачев А.И., Базанова 1.Д. Образование блока у блох Zeaopsylla cheopia при заражении.их измененным вариантом штамма чумного микроба улэгейского подвида. - Дегг.. в ВИНИТИ 15.03^68, № 2047-В88. - б е.. - Реф. в. РЖ Зоопаразитология.- 1988. - » 8.

2. Базанова 1.П.Ыаевский М..П., Ковтый И.Ф.» ЕЬлков А.Г., Галацевич Н.5. О переживании зимнего периода блохами Citellophi-lus tesquorum altaict« инфицированными возбудителем чумы в эксперименте // Материалы регионального совещания противочумн. учрежд. по зяидемиол.,. эпизоотол. и профилакт. особо опасн. инф.--(Куйбышев, 1990. -С»'. 29-32.

3. Базанова-Л.П.Новтый И.Ф., МаевскиЯ М.П., Климов В.Т., Попков A.fi_ Сезонная динамика бдойообразования у блохи Citello-philaa tesquorua altaicus laff (1936) из.Тувинского природного очага чумы.// Мед. паразитов". и паразитарные болезни. - 1991. -» I. - С. 24-26.

4. Базанова Д.Л.,'Маевский. iT.IL, Косилко С.А.,, Ковалева Н.И. Передача-возбудителя чумы инфицированными."неблокирэванными" блохами Citellophilus tea'quorua altaicus- (Siphonaptera> из ТуЕН- -Дел. в ВИНИТИ 23.05.9,1. - » 2155 B-9I. - Юс. - Реф. з Р£ Зоопаразитология. - 1991.. — »9.

. 5. Базанова Л.П., Маевский.У.П.., Вылков А.Г..-Чувствительность цл^лнохвостого суслика из. Тувы, к: инфицирования возбудителем чуьч через слизистую рта при разгрызании, зараженных блох. - Дел; в ¿ИНИН" II.QI.SI.- - 7'с. -.Реф..в FJL-Биология..-- 1991. - £ 5-

6. Баранова Л.П., Сахаров C.B., Хабаров A.B., Федоров C.B. Изучение возможности инфицирования длиннохвостого суслика возбудителем тг/Kjj через позрегдекнув колу в эксперименте // Организация эпиднгдзсра при чуме и меры ее профилактики: Ият-льг межгосударств . кауч.-практ. конф. - Алма-Ата, 1992. - I. - С. 77-79.