Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Эпидемиология и клиника бруцеллеза у подростков в эпидемиологически неблагополучном регионе

г \ ш

1397

На правах рукописи

СЫЗДЫКОВ МАРАТ СУЛЕЙМЕНОВИЧ

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И КЛИНИКА БРУЦЕЛЛЕЗА У ПОДРОСТКОВ В ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИ НЕБЛАГОПОЛУЧНОМ РЕГИОНЕ

14.00.30 - эпидемиология 14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских паук

Москва -1997

Работа выполнена в научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней министерства здравоохранения Республики Казахстан.

Научные консультанты: академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор, Покровский В.И.

академик НАК "Экология", доктор медицинских наук, Цирельсон Л.Е.

доктор медицинских наук, профессор, Амиреев С.А.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

член-корреспондент РАМН, профессор Черкасский Б.Л.

• доктор медицинских наук, профессор

Лучшее В.И.

доктор медицинских наук, академик МАИ, профессор Джасыбаева Т.С.

Ведущая организация: Московская медицинская академия

им. И. М.Сеченова

Защита диссертации состоится 1997 г в час. на

заседании диссертационного совета Д 074.19.01 в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии МЗ РФ (111123, Москва, Новогиреевская ул, д.З-а).

С диссертацией можно ознакомиться в бибилиотеке ЦНИИЭ Автореферат разослан " " г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Пименова М.Н.

Актуальность проблемы. На протяжении многих лет в Республике Казахстан по сравнению с другими странами СНГ регистрируется наибольшая заболеваемость бруцеллезом людей и пораженность сельскохозяйственных животных (С.А.Амиреев, 1986, 1989; М.М.Ременцова, 1988; Ю.М.Федоров, В.В.Горшенко, 1989). В последние годы эпизоотолого-эпидемиологическая ситуация еще более обострилась, приблизившись к показателям в 50-е годы (в 1992 году показатель заболеваемости - 19,2, в 1955 -20,5), когда они были наиболее высокими (К.Н.Бекзатов, 1995; С.А.Амиреев с соавт., 1995).

Новые формы хозяйствования в животноводстве, рост поголовья скота в личных подворьях привели к увеличению заболеваемости молодых лиц, занятых на сезонных животноводческих работах, а также владельцев скота, включая детей и подростков (С.А.Амиреев, 1989, 1995; А.И.Саттаров, Н.Н.Варламов, 1989; Г.А.Ельшина с соавт., 1991).

Наряду с эволюцией эпидемического процесса в целом (С.А.Амиреев с соавт., 1986, 1987; М.М.Ременцова, 1988), значительные изменения произошли и в клинической картине бруцеллеза (В.И.Покровский с соавт., 1996; Ю.А.Ильинский с соавт., 1985 и др.). Определенную роль здесь, наряду с другими факторами, возможно, сыграл изменившийся в республике за последние 30 лет микробиологический пейзаж бруцелл в сторону значительного возрастания изоляции нетипичных биоваров бруцелл, в частности, претерпел изменения 3 биовар Вг.теМемз. В этой связи К.Б.Курманова, Т.А.Грушина (1989), М.А.Мирзаева (1992) высказали мнение о возможной взаимосвязи наиболее тяжелых форм болезни с циркуляцией 3-го, а не 1-го биовара бруцелл, а Л.Е.Цирельсон (1992) выявила более частую изоляцию 3 биовара у лиц, занятых обслуживанием животных общественных хозяйств, а не индивидуальных.

Эпидемиология и клиника бруцеллеза у детей представлена достаточно- широко (Я.М.Касымов, 1951; О.Д. Соколова-Пономарева, 1955; Л.А.Юрьева, 1955; Н.И.Дьяконова, 1964; В.П.Бисярина, 1971,1975, 1991; Е.С.Белозеров, Г.И.Нуралинова, 1980; Г.И.Нуралинова, Л.Г.Нестерова, 1983; А.И.Саттаров, 1984), значительно меньше - у подростков (А.М.Минасян, 1974; К.Д.Джалилов с соавт., 1985; У.Н.Имомалиев, 1986; К.А.Жуманбаев,1989). В настоящее время в литературе нет сведений об исходе острых форм бруцеллеза у подростков и частоте трансформации их в хронические. В связи с этим изучение роли различных биоваров бруцелл в эпидемиологии и клиническом течении бруцеллеза у подростков, в том числе и отдаленных последствий у заразившихся тем или иным биоваром, является актуальной проблемой инфектологии.

Вместе с тем бруцеллез у подростков и его исходы имеют большую социальную значимость, поскольку этот контингент является не только активным трудовым резервом, но и резервом Вооруженных Сил.

Значительные социально-экономические преобразования, произошедшие в Казахстане за последние годы, заставляют по-новому смотреть на проблему зоонозных инфекций, особенно бруцеллеза, который поражает прежде всего молодой контингент населения. В связи с этим актуальным является установление причин, способствующих рецидивирующему течению бруцеллеза у больных, заразившихся в различных эпидемиологических условиях. Имеются лишь отдельные работы, выполненные в 60-70-х годах, по оценке трудоспособности при бруцеллезе, без анализа влияния эпидемиологических и социальных факторов среды (Х.А.Касымова, 1967; К.В.Бунин, В.Н.Лейман, 1970; Г.Я.Высоцкая, 1979).

Достаточно низкая эффективность медикаментозного лечения больных хроническим бруцеллезом, очевидно, связана с возросшей сенсибилизацией населения к бруцеллезному антигену, изменениями биологической активности возбудителя, что, в свою очередь, способствует ранним очаго-

вым поражениям опорно-двигательного аппарата и нервной системы. В связи с этим поиск каких-либо физических эффективных методов воздействия на местные воспалительные очаги является оправданным. Одним из них является лазеротерапия, получившая широкое распространение в клинической медицине. Используется этот метод лечения и при заболеваниях опорно-двигательного аппарата неинфекционной природы (У.Я.Богданович, 1980,1988; И.Л.Райстенский, 1988; В.Е.Илларионов, 1990; Т.В.Кончугова с соавт., 1996; Bieglio С., 1986; Lonauer G., 1986; Walker J., 1986; Blid Ze.a., 1987; Miyagi K„ 1989 и др.).

Исходя из современных концептуальных положений об эпидемическом процессе (Б.Л.Черкасский, 1985), необходим адекватный его анализ и интерпретация изменений в свете социально-экологической системы эпидемического процесса при бруцеллезе, включая анализ эффективности лечения и биологических механизмов взаимодействия возбудителя во взаимосвязи с окружающей средой.

Цель исследований: Установить клинико-эпидемиологические осо-_ бруцеллеза

бенноспру подростков, а также значимость социально-эпидемиологических факторов в формировании неблагоприятного трудового прогноза у больных профессиональным бруцеллезом.

В соответствии с настоящей целью в процессе исследования решались следующие задачи:

1. Изучить за длительный период (1950-1995 гг.) эпизоотологическую и эпидемиологическую ситуацию по бруцеллезу в Казахстане и выявить причины, обусловливающие неблагополучие и ее ухудшение за последние годы.

2. Провести анализ заболеваемости бруцеллезом у подростков и изучить особенности его эпидемиологии в связи с выделением от них различных биоваров бруцелл (1 и 3 Br.melitensis).

3. Определить особенности клинического течения бруцеллеза у подростков в зависимости от выделенных биоваров, и выяснить характер ближайших и отдаленных исходов заболевания.

4. Провести сравнительный анализ клинико-эпидемиологических данных у больных бруцеллезом различных профессиональных групп с неблагоприятным трудовым прогнозом и оценить значимость социальных и эпидемиологических факторов, его обусловивших.

5. Изучить эффективность лечебного действия гелий-неонового лазера в эксперименте и клинике при бруцеллезе.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Высокий уровень заболеваемости бруцеллезом населения Казахста-

/

на указывает на продолжающееся повсеместное распространение этой инфекции среди животных. Выраженная зависимость эпидемического процесса при бруцеллезе от активности эпизоотического, усугубленная неадекватной оценкой степени распространенности очагов на фоне тяжелого социально-экономического положения страны создает крайне неблагоприятный эпидемиологический, клинический и социальный прогноз по этой инфекции.

2. Частота заболеваемости бруцеллезом подростков значительно выше официальных статистических данных, при этом эпидемический процесс у подростков имеет свои особенности, связанные с характером эпизоотического очага:

- у подростков, занятых обслуживанием новорожденных ягнят в общественном стаде, основную эпидемиологическую значимость, как фактор заражения, имеет молоко овцематок. Заражение происходит в основном 3-им биоваром бруцелл козье-овечьего вида благодаря "мамматропносги" последнего;

- подростки, занятые уходом за мелким рогатым скотом в личных хозяйствах (выпас), заражаются преимущественно 1-ым биоваром бруцелл.

Выявлены клинико-иммунологические различия у подростков с изоляцией 1 -го и 3-го биоваров бруцелл, которые влияли на степень тяжести инфекционного процесса. Установлена высокая частота хронизации (58-60%), что в немалой степени обусловлено неблагоприятными социальными условиями.

3. На особенности клиники бруцеллеза у различных групп больных профессиональным бруцеллезом, а также сроки и глубину формирования инвалидизации влияли в разной мере социальные факторы среды и предшествовавший эпидемиологический фон.

В результате проведенного исследования получен ряд данных, составивший научную новизну работы:

1. Впервые изучена роль различных биоваров Вг.теШегшз в эпидемиологии и клинике бруцеллеза у подростков. Показана ведущая роль молока овцематок в инфицировании подростков, занятых в обслуживании новорожденных ягнят общественного животноводства, и заражение их преимущественно 3-им биоваром в связи с "мамматропностью" последнего (77%). При контакте подростков с мелким рогатым скотом индивидуальных хозяйств (выпас) инфицирование происходит преимущественно 1-ым биоваром (84,3%).

2. Впервые установлены различия в клинико-иммунологических проявлениях бруцеллеза у подростков в зависимости от выделенных биоваров, заключающиеся в более выраженных симптомах интоксикации при инфицировании 1-ым биоваром и сенсибилизирующих свойствах - 3-го биовара. Впервые показана высокая частота хронизации бруцеллеза у подростков (58-60%), которая не отличалась от взрослого контингента. Исход болезни в немалой степени связан с неблагоприятными социальными факторами -поздней диагностикой и лечением, низким охватом диспансеризацией переболевших.

3. Острый бруцеллез у подростков, в отличие от взрослого контингента, развивался на фоне гипосенсибилизации, что способствовало фор-

мированию метастатических очагов в крупных и средних суставах с частыми рецидивами одних и тех же локализаций на всех этапах болезни, усу-гублящими прогноз заболевания.

4. Впервые изучено и установлено влияние эпидемиологических и социальных факторов на сроки и степень формирования инвалидизации у больных профессиональным бруцеллезом с неблагоприятным трудовым прогнозом.

Практическая ценность работы. Проведенные исследования позволили автору разработать и внедрить в практику:

- профилактические меры, упреждающие заражение подростков через молоко овцематок;

- внести дополнения в Приказ Министра Обороны РК в отношении призывников, переболевших бруцеллезом, и призывников со свежим инфицированием возбудителем бруцеллеза - первичной латенцией (Пр. № 61 от 28.03.1995 г.).

- метод лечения гелий-неоновым лазером больных хроническим бруцеллезом с поражениями опорно-двигательного аппарата и периферической нервной системы;

- изданные 4-е методических рекомендаций по вопросам эпидемиологии, клиники, лечения и диспансеризации, утвержденных Минздравом РК.

Теоретические положения и практические рекомендации проведенного исследования используются в учебном процессе кафедр эпидемиологии, инфекционных болезней и детских инфекционных болезней медицинских вузов Казахстана и России (Казахский государственный медицинский университет, Карагандинский государственный медицинский институт, Алма-тинский институт усовершенствования врачей, Институт повышения квалификации Федерального Управления медико-биологических и экстремальных проблем Минздрава Российской Федерации).

Апробация работы: Материалы диссертации доложены и обсуждены

на:

- Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным", 1989, г.Новосибирск-Москва.

- 1 Всесоюзной научно-практической конференции, 1989, г.Москва - Ворошиловград.

- III Всероссийском съезде инфекционистов, 1989, г.Москва-Смоленск.

- Межтерриториальной научно-практической конференции "Современные проблемы использования физических факторов в комплексном лечении и реабилитации больных заболеваниями опорно-двигательного аппарата, нервной системы и женских половых органов", 1989, г.Одесса.

- Регионарной конференции "Актуальные вопросы диагностики бруцеллеза и туберкулеза в условиях Центрального Казахстана",

1990, г.Караганда.

- Регионарной научно-практической конференции "Влияния факторов внешней среды на реактивность организма", 1990, г.Киев.

- V объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана, 1991, г. Алма-Ата.

- Всесоюзной конференции по клинической витаминологии,

1991, г.Москва.

- II съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов республики Кыргызстан, 1991, г.Бишкек.

- Республиканской конференции "Внешняя Среда и охрана здоровья населения", 1991, г.Ижевск.

- Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций", 1991, г.Москва.

- Мел.д тародном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии, 1992, г.Алма-Ата.

- Съезде врачей-инфекционистов в г.Суздаль, 1992, г.Москва-Киров.

- Республиканской конференции "Актуальные вопросы военной медицины", 1994, г.Алматы.

- II научно-практической конференции "Медицинские, социальные и экологические проблемы Приаралья", 1994, г.Алматы.

- Научно-практической конференции, посвященной 70-летию образования НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней МЗ РК ,1995, г.Алматы.

- Научной конференции "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций", 1996, г.Алматы.

- В завершенном виде диссертация обсуждена и одобрена на объединенном заседании проблемной комиссии по эпидемиологии и вирусологии, лаборатории бруцеллеза, клиники инфекционных болезней НИИЭМИБ МЗ РК, кафедры эпидемиологии Казахского государственного медицинского университета и кафедры эпидемиологии Казахского института усовершенствования врачей (г.Алматы, 1996 год).

Публикации. Г1о материалам диссертации опубликовано 43 научные работы, в том числе 4 методических рекомендаций и 1 монография.

Структура и о.б'ьам работы. Диссертация изложена на 237 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 7 рисунками и 46 таблицами. Указа-

тель литературы включает 306 работ на русском и 72 на иностранном языках.

Диссертация является фрагментом комплексных НИР НИИЭМИБ МЗ Республики Казахстан:

- Пути повышения эффективности системы эпидемиологического надзора и этиопатогенетической терапии бруцеллеза (№ госрегистрации 0194 РК 00085, 1991-1995 гг.)

- Совершенствование системы эпидемиологического надзора и тактики лечебно-диагностической работы при бруцеллезе, адаптированных к экологическим и хозяйственно-экономическим условиям (без № госрегистрации, 1996-1998 гг.).

Работа выполнялась в лаборатории бруцеллеза и клинике инфекционных болезней НИИ ЭМИБ МЗ РК.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Анализ эпизоотологических данных проведен на основании материалов ЦСУ ветеринарных отделов Облагропромов и Главного ветеринарного Управления Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан за 1954-94 гг.

Эпидемиологические показатели анализированы на основании данных районных, областных и республиканских СЭС (статистические и отчетные данные) за 1956-95 гг., в том числе у детей. За последние 10 лет (1985-94 гг.) изучена заболеваемость бруцеллезом у подростков (в более ранние годы статистические показатели отсутствуют).

Информация о животноводческих хозяйствах республики в неблагополучных по бруцеллезу районах получена в результате паспортизации хозяйств ("Паспорт неблагополучного по бруцеллезу района", разработанный С.А.Амиреевым с соавт. и утвержденный МЗ РК 4.01.1987 г.) и исполь-

зования ф.№ 391-У ("Карта эпизоотолого-эпидемиологического обследования очага зоонозного заболевания" и вкладыш к ней "Сведения о больном", разработанные в ЦИЗМЗ РФ и НИИЭМИБ Б.Л.Черкасским и С.А.Амиреевым и утвержденные МЗ СССР).

Проведен клинико-эпидемиологический и лабораторный анализ у 235 подростков в возрасте 15-17 лет (96 - острый бруцеллез, 51 - подострый, 88 -хронический), лечившихся в Республиканской клинической больнице (198591 гг.) и Центральном военном клиническом госпитале МО РК (1993-96 гг.), являющихся клинической базой отдела бруцеллеза НИИЭМИБ. Клинический диагноз устанавливался в соответствии с классификацией, принятой в Казахстане (Н.Д.Беклемишев, 1957). При этом клиническая картина бруцеллеза у подростков сравнивалась с таковой у взрослых больных, лечившихся в тех же клиниках в указанные годы.

Проведен анализ изолированных биоваров бруцелл (1 и 3 биоваров Вг.теНгегшБ) в зависимости от эпидемиологических условий у 110 подростков. Для этого изучена частота их изоляции у подростков, заразившихся во время ухода за животными в общественном стаде и в индивидуальных хозяйствах. Результаты сравнивались с частотой изоляции указанных биоваров от аборт-плодов овцематок и молока овцематок общественного стада из наиболее неблагополучных по бруцеллезу хозяйств южных областей республики (работа выполнена совместно с канд.мед.наук Б.И.Бекетовым из НИИ противочумного института МЗ РК). При этом дан сравнительный анализ клинико-иммунологических проявлений у подростков в зависимости от выделенных биоваров. Изучены исходы болезни (хронизация) у 110 переболевших острым и подострым бруцеллезом, в том числе у 37 - с изоляцией 1 и 3 биоваров, путем наблюдения в катамнезе через 3-5 лет от начала болезни. С целыо изучения вопроса о состоянии диагностики бруцеллеза у подростков на местах проведен ретроспективный анализ историй болезни 112 военнослужащих срочной службы в возрасте 18-19 лет. перебо-

левших бруцеллезом преимущественно до призыва в Вооруженные Силы. Дана оценка профпригодности военнослужащих, переболевших бруцеллезом.

Проведен клинико-эпидемиологический анализ историй болезни 192 больных бруцеллезом, ставших инвалидами. Из них у 158 (82,3%) заболевание носило профессиональный характер. Среди последних 94 (59,5%) больны* были с вторично-хроническим бруцеллезом, 52 (32,9%) - первично-хроническим и 12 (7,5%) - остаточными явлениями после перенесенного бруцеллеза. Возрастной состав инвалидов был следующим: до 30 лет составляли 6,3%, 30-40 лет - 10,7%, 40-50 - 34,2%, старше 50 лет - 48,8%.

Больные профессиональным бруцеллезом были условно распределены на 5 групп: а) постоянные животноводы - чабаны и их помощники - 36 (22,7%); \б) ветеринарный и зоотехнический персонал - 33 (20,8%); в) скотники, доярки - 29 (18,3%); г) рабочие мясокомбинатов - 32 (20,2%); д) прочие - рабочие совхозов, трактористы, временно привлекаемые на животноводческие работы, эпидемиологи СЭС, работники лабораторий - 28 (17,7%). Дан сравнительный анализ клинических проявлений, послуживших причиной неблагоприятного трудового прогноза, при этом учитывалось состояние специфической сенсибилизации, наличие предшествовавшей заболеванию вакцинации и повторных инфицирований (супер- и реинфек-ция), а также характер эпизоотического очага и особенности труда больного.

Изучена эффективность наружного (накожного) облучения гелий неоновым лазером (ГНЛ) воспалительных очаговых поражений суставов, позвоночника и периферических нервов у 64 больных вторично-хроническим бруцеллезом (78,4% - декомпенсация, 21,8% - субкомпенсация) в возрасте 16-30 лет (56 человек - 87,5% - до 20 лет).

Облучение ГНЛ проводили расфокусированным лучом аппарата "Ягода" (УЛФ-01) по методу М.И.Исаковой (1972). Плотность потока

мощности на коже составляла 1-1,5 мВт/см2 с длиной волны 0,63 мкм. Время облучения суставов зависело от их величины (1-5 мин на 1 поле). Облучали наиболее болезненные точки, определяемые при пальпации - область проекции позвонков,паравертебральные точки, по ходу периферических нервов. Суммарная продолжительность сеанса ГНЛ не превышала 12-15 минут. На курс лечения назначали 10-12 ежедневных процедур (кроме выходных дней). Доза облучения за один сеанс составляла 1,0-1,5 Дж/см2, на курс лечения - 10-22,5 Дж/см2. Облучение ГНЛ проводили спустя 2-3 недели от начала антибактериального, противовоспалительного лечения, после снижения активности инфекционного процесса. Лечение ГНЛ осуществлялось под контролем иммунограммы. При этом кожно-аллергическую чувствительность на специфический антиген выявляли пробой Бюрне; показатели Т- и В-систем иммунитета с выделением "активных" Т-лимфо-цитов - Е-РОК и ЕАС-РОК, Еакт-РОК; иммунорегуляторные клетки - тео-филлиновым тестом (Етфр-РОК и Етфч-РОК) с учетом их коэффициента (Етфр-РОК/Етфч-РОК). Состояние неспецифической резистентности оценивали лизосомально-катионным тестом (ЛКТ) и комплементарной активностью сыворотки крови по 50%-ному гемолизу (ТК). Все перечисленные реакции ставились по методикам, указанным в методическом пособии "Оценка иммунного статуса организма в лечебных учреждениях Советской Армии и Военно-морского флота" под ред.Е.В.Гембицского (М., 1987).

Эффективность лечения ГНЛ оценивали по непосредственному клиническому результату: 1) если после проведенной терапии обострения болезни не было, купировался местный воспалительный процесс и восстанавливалась функция суставов, позвоночника, то исход болезни расценивали как выздоровление; 2) если после лечения отсутствовали рецидивы болезни, угасал местный воспалительный процесс со стороны костно-суставной и нервной систем при сохранении нерезко выраженных симптомов (слабый болевой синдром при нагрузке, небольшое снижение функции суставов и

позвоночника, небольшая гипотрофия мышц конечностей у больных с туннельным синдромом), то результат считался удовлетворительным; 3) если после курса лечения сохранялись жалобы и объективные изменения со стороны костно-сусгавной и нервной систем с выраженным нарушением функции, то результат лечения расценивался как неудовлетворительный.

Бактериологические исследования крови больных проводили в первые два дня госпитализации. Все изолированные культуры подвергались дифференциации, согласно общепринятым методам, предложенным ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (Методические рекомендации по лабораторной диагностике бруцеллеза. М., 1980). Все выделенные культуры бруцелл относились к козье-овечьему виду с преобладанием 1 и 3 биовариантов. 1 биовар имел М-поверхностный антиген (melitensis), реагировал с анти-М моноспецифической сывороткой. 3 биовар имел 2 поверхностных антигена

- A (abortus) и М (melitensis), реагировал с обеими моносыворотками. Бактериологические исследования у больных бруцеллезом осуществлены кандидатами наук Т.А.Грушиной и Р.Ж.Ищановой.

Экспериментальные исследования проведены с целью изучения эффективности сочетанного воздействия антибиотика гентамицина и лазерного излучения при бруцеллезе у лабораторных животных.

Опыты проведены на 60 белых мышах, массой 16-18 г, и 15 беспородных свинках, массой 250-270 г. Все животные заражались свежеоттитро-ванной минимальной заражающей дозой высоковирулентного эталонного штамма (ФАО/ВОЗ) Brucella abortus 544. На белых мышах выполнено 4 серии (1-4) и на морских свинках одна (5-я) серия экспериментов. В каждой серии было по 15 животных. Через 3 недели (к моменту развития генерализованной инфекции) приступали к лечению. При этом каждая серия делилась на 3 группы (по 5 животных), соответственно задачам исследования: 1

- зараженные, нелеченные (контроль); 2 - леченные гентамицином; 3 - леченные гентамицином в сочетании с лазерной терапией. Гентамицин белым

мышам вводили внутримышечно в разных дозах: 1 -я серия - 0,62 мг/кг; 2-я -1,25; 3-я - 2,5 и 4-я - 5 мг/кг, согласно рекомендациям В.П.Поздняковой и др.(1985). Низко-интенсивное лазерное излучение на область печени и селезенки экспериментальных животных проводилось по методике чрезкожно-го лазерного облучения крови по Б.Б.Сагандыкову (1995) с использованием гелий-неонового лазера ЛГ-75, работающего в постоянном режиме, мощностью 25 мВт, с диаметром нерасфокусированного луча лазера 2 мм. Выбор для облучения брюшка животного в области печени и селезенки связан с их более поверхностным расположением под кожей по сравнению с другими кровенаполняемыми органами. Длительность одного сеанса облучения составляла 2-3 мин. На курс лечения назначали 10 ежедневных процедур. По окончании лечения животные подвергались бактериологическому и иммунологическому исследованию. При этом учитывался индекс инфи-цированности (ИИ) бруцеллами в процентах; индекс интенсивности обсеменения органов (ИИОО), рассчитываемый по балльной оценке (от 1+ до 4+) интенсивности роста колоний бруцелл при посеве каждого органа животных; степень колонизации селезенки (СКС) возбудителем бруцеллеза у морских свинок (учитывалось количество выросших колоний в пересчете на 1 г органа), а также прослеживалась динамика иммунологических показателей (до и после лечения) - комплементарной активности сыворотки крови (титр комплемента) и опсоно-фагоцитарной реакции нейтрофилов (ОФР). Объем и характер исследований представляется в таблице 1.

Таблица 1

Объем эпизоотологических, эпидемиологических анализов, клинических, иммунологических и экспериментальных исследований

Материалы, методы, анализы Объем

I. Анализ эпизоотических и эпидемиологических данных по бруцеллезу в Казахстане, в т.ч.: а) анализ заболеваемости бруцеллезом детей б) анализ заболеваемости бруцеллезом подростков в) анализ заболеваемости профессиональным бруцеллезом за 1955-1994 гг. за 1961-94 гг. за 1985-94 гг. за 1961-94 гг.

2. Клинико-эпидемиологический и лабораторный анализ больных бруцеллезом, в т.ч.: а) подростки 15-17 лет б) юноши 18-19 лет из числа военнослужащих в) взрослый контингент 539 чел. 235 чел. 112 чел-. 192 чел.

3. Сравнительный эпидемиологический анализ клинико-иммунологических проявлений у подростков в зависимости от выделенных биоваров 110 чел.

4. Изучение катдаТеза у подростков, переболевших острым, подострым бруцелезом (через 3-5 лет от начала болезни), в т.ч. с изоляцией 1 и 3 биоваров бруцелл 110 чел. 37 чел.

5. Ретроспективный анализ историй болезни у военнослужащих срочной службы (18-19 лет), переболевших бруцеллезом до призыва в Вооруженные Силы 112 чел.

6. Клинико-эпидемиологический анализ больных бруцеллезом с неблагоприятным трудовым прогнозом (инвалидизацией), в т.ч. профессиональным бруцеллезом 192 чел. 158 чел.

7. Изучение клинической и иммунологической эффективности гелий неонового лазера (ГНЛ) в комплексной терапии больных хроническим бруцеллезом ¿4 чел.

8. Экспериментальное изучение эффективности воздействия гентамицина и ГНЛ при бруцеллезе 75 животных

Результаты собственных исследований Эпизоотология и эпидемиология бруцеллеза

В своих исследованиях мы уделили внимание анализу эпизоотической и эпидемической ситуации за длительный период, выявлению причин устойчивого сохранения ее напряженности, особенностям эпидемиологии бруцеллеза у взрослых и подростков в новых условиях хозйствования в животноводстве, клиники бруцеллеза у подростков в связи с изоляцией различных биоваров Вг.шеН1еп515, а также анализу причин формирования неблагоприятных исходов болезни (инвалидизация) у лиц, профессионально связанных с животноводством.

Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу мелкого рогатого скота за 1960-95 гг. показал, что она складывалась неодинаково в различные периоды в разных хозяйственно-экономических зонах. До 1955 года борьба с бруцеллезом в Казахстане ограничивалась проведением диагностических исследований, убоем выявленных больных животных и последующим проведением общих ветеринарно-санитарных мероприятий. Однако радикальных мер по отношению к источнику инфекции все же принято не было, поэтому пораженность скота была повсеместно высокой (1,92,9%), особенно в южной, восточной и северных зонах (соответственно 33,8%, 32,1 и 23,0%), хотя в целом к началу 70-х годов количество выявленного больного скота сократилось вдвое, снизилось и число неблагополучных пунктов.

Тем не менее, с середины 70-х годов количество больного скота вновь стало возрастать и к 1985 г. пораженность его достигла уровня 1955 года. Затем до 1989 г. происходило заметное снижение процента пораженности мелкого рогатого скота - до 1,2. Однако, начиная с 1990 года, прослеживается явная тенденция роста этого показателя с пиком в 1992 году - 2,9; в 1993 - 2,7, в 1994 - 2,9, в 1995 - 2,9. В то же время нами обнаружено,что ухудшение эпизоотической ситуации по бруцеллезу мелкого рогатого ско-

та в республике С 90-х годов не соответствует количеству подтверждений абортов и мертворождений бруцеллезной этиологии, которое с конца 70-х годов заметно снизилось. Пораженность скота оценивалась в основном серо-аллергическими методами. При росте пораженности скота число официально зарегистрированных хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу, как это ни пародоксально, продолжает снижаться из года в год. Следует иметь ввиду, что приведенные нами статистические данные о снижении за последние 20 лет в республике бактериологических подтверждений абортов бруцеллезной этиологии у овцематок могут быть связаны с организационными погрешностями-несвоевременностью сбора и доставки в бакл;;-бораторию биоматериала, а также недостаточной разрешающей способностью применяемых питательных сред и контроля их ростовых качеств.

Использование нами селективной питательной среды при исследовании молока и абортплодов овцематок существенно повысило бактериологическое подтверждение бруцеллеза.

Логически можно предполагать, что путь заражения людей через молоко овцематок, да еще атипичным биоваром менее активный, чем классический - через околоплодную жидкость после родов или аборт-плод. Однако наши наблюдения показали, что 3 биовар имеет повышенную жизнеспособность и может активизировать эпидемический процесс в определенных условиях. Данный вопрос представляет интерес как для ветеринарной, так и медицинской службы и нуждается в более углубленном исследовании.

Известно, что эпизоотическое состояние по бруцеллезу скота, находящегося в индивидуальном пользовании, может служить дополнительным индикатором неблагополучия общественных хозяйств по этой инфекции. Результаты проведенного нами анализа показали, что пораженность овец в личных хозяйствах практически не отличалась от таковой в общественном стаде (2,5 и 2,4 соответственно), а в некоторых областях этот показатель оказался даже выше, чем в общественных хозяйствах

' (Актюбинская - 8,0, Северо-Казахстанская - 5,1, Алматинская - 3,2, ЮжноКазахстанская - 3,1).

Таким образом, анализ эпизоотического состояния по бруцеллезу мелкого рогатого скота в Казахстане за длительный период показал, что оно характеризуется неравномерностью распространения в отдельных регионах республики, различной степенью пораженности животных как в общественных, так и индивидуальных хозяйствах, несоответствием между пораженностью животных и количеством неблагополучных по этой инфекции пунктов и явной тенденцией к росту пораженности скота. Сдерживающим моментом последней в значительной степени является специфическая вакцинация животных. Однако просчеты ветеринарной службы с ее планированием и проведением в сочетании с нарушениями других санитар-но-ветеринарных мер (несвоевременная изоляция и убой положительно реагирующих животных, нарушения при формировании отар по возрастным группам и др.) не позволили с эффективностью использовать столь

действенный механизм упреждения инфицирования животных.

\

Эпизоотическая обстановка по бруцеллезу крупного рогатого скота остается также сложной. Эпизоотия бруцеллеза имеет распространенный характер и охватывает практически все регионы республики. В целом по республике показатель пораженности скота варьирует в пределах 2,3-4,4%, прослеживается явная тенденция к его дальнейшему росту. В последние годы заметный рост инфицированное™ животных регистрируется в южных областях (Южно-Казахстанская - 43,7%, Алматинская - 7,3, Кзыл-Ординская - 7,2%). Ввиду относительно меньшей патогенности коровьего вида бруцелл для человека и некоторых экономических соображений, больной крупный рогатый скот сдается на убой несвоевременно и далеко не полностью. Так, на конец 1994 г. в республике 77 хозяйств имели давность неблагополучия в течение 15-20 лет и 175 хозяйств - свыше 20 лет. Многие

хозяйства вообще не объявляются неблагополучными, несмотря на наличие абортов бруцеллезной этиологии.

Неудовлетворительное проведение профилактических прививок животным и других санитарно-ветеринарных мероприятий, ухудшение общей хозяйственно-экономической ситуации в республике не смогли удержать наметившуюся тенденцию (с 1975 по 1989 гг) к снижению пораженностй1 общественного поголовья и с 90-х годов эпизоотическая ситуация вновь' ухудшилась.

Нами установлено, что на фоне объективного интенсивного роста пораженное™ крупного рогатого скота бруцеллезом и увеличения сроков его передержки в хозяйствах, наблюдалось уменьшение количества официально значащихся пунктов (аналогичные расхождения истинных данных зараженности животных с отчетными, как указано выше, отмечались и с мелким рогатым скотом). Так, количество неблагополучных по бруцеллезу мелкого и крупного рогатого скота пунктов сократилось с 1641 в 1970 году до 335 - в 1994 году.

Сложившаяся напряженная эпизоотическая обстановка в общественном стаде не могла не отразиться на пораженности крупного рогатого скота, находящегося в индивидуальных хозяйствах. Анализ отчетных данных ветеринарных отделов облагропромов за 1981-1990 гг. показал, что в це- ' лом по республике пораженность частного крупного рогатого скота варьирует от 1,3 до 2,6%. Эти данные далеко не полны, поскольку объем исследований в целом по республике не превышает 55-58% от учтенного поголовья, принадлежащего владельцам. Наиболее напряженная эпизоотическая обстановка сложилась и продолжает оставаться в северной зоне республики, где неблагополучными по бруцеллезу крупного рогатого скота оказались от 48 до 86% коров от общего числа в регионе. Это неблагополучие имеет : перманентный характер

Наши исследования показали, что эпидемический процесс бруцеллезной инфекции был тесно взаимосвязан со сложившейся эпизоотической обстановкой и социально-экономическими особенностями Республики Казахстан.

С целью характеристики эпидемической обстановки в республике мы провели сравнительный анализ заболеваемости людей с 1960 по 1995 гг. Установлено, что до начала 70-х годов происходило неуклонное снижение заболеваемости с впервые установленным диагнозом. В последующие годы эпидемическая обстановка стала постепенно ухудшаться. Число заболевших людей с впервые установленным диагнозом возросло с 335 в 1970 году до 2982 - в 1994 году, т.е. в 7,8 раза. Наиболее интенсивно рдст заболеваемости происходил с середины 80-х годов и ее показатели в 1992-94 гг. достигли уровня тяжелой эпидемии бруцеллеза, при этом обстановка напоминала военный и послевоенный период (1941-1955) с той лишь разницей, что от 61,0 до 71,1% заболеваемости было сосредоточено в южных областях, а не в северных, как было в указанный выше период.

Как и прежде, основным источником инфекции служит мелкий рогатый скот (64,1% - в 1961-80 гг., 78,1% - в 1981-94 гг.) и его значение с годами возрастает. Из всех культур бруцелл, изолированных от людей, в 98% выделена Вг.теШегшБ. Такая закономерность характерна для всех регионов, кроме севера республики, где наряду с мелким, существенную роль в заражении людей играет крупный рогатый скот.

В поддержании напряженной эпидемической обстановки в республике /в последние годы существенную роль играют и животные в личных хозяйствах. На их долю в 1986-1995 году приходилось в среднем 45,7% от общего числа установленных источников инфекции, особенно на террито-\

риях с высокой пораженностью скота индивидуальных хозяйств (северной -Кокшетауская, Павлодарская, Северо-Казахстанская, Торгайская области; западной - Актюбинс^ая, Западно-Казахстанская; центральной - Караган-

динская область и особенно - южной - Алматинской, Южно-Казахстанской, Жамбылской области).

Происходящие изменения в эпизоотической ситуации существенно повлияли на профессиональный и возрастной состав заболевших. По официальной статистической отчетности, за последние 35 лет заболеваемость профессиональных животноводов снизилась с 36,5% до 19,7%, особенно с начала 90-х годов. Однако ретроспективный анализ этой категории больных с неблагоприятным трудовым прогнозом позволил нам установить, что у многих из них (50%) происходит супер- и реинфекция, которая не учитывается статистикой и повторные заболевания расцениваются как обострения ранее перенесенной бруцеллезной инфекции. Отсюда и кажущееся представление о значительном снижении заболеваемости животноводов. Наиболее "горючим материалом" все чаще становятся контингенты, привлекаемые на сезонные животноводческие работы, преимущественно из числа молодых лиц. Заболеваемость среди них с 1960 года возросла более чем в 3 раза.

Клинико-эпидемиологическая характеристика бруцеллеза у подростков

Удельный вес заболеваемости детей и подростков в среднем по республике составляет за последнее десятилетие 19,7%. По статистической отчетности, источником заражения последних является преимущественно частный скот (более 80%). Однако, при углубленном изучении эпиданамнеза получается иная картина. Многие подростки приходят работать самостоятельно с целью получения заработка и их зачастую никто не контролирует и не учитывает, хотя существует "Положение... о запрещении использования лиц, моложе 18 лет, в овцеводческих хозяйствах, неблагополучных по бруцеллезу". Основной обязанностью подростков в период проведения массовой животноводческой кампании является уход за новорожеднными ягнятами. Анализ показал, что за последнее десятилетие заболеваемость

подростков возросла в 2,5 раза. Как показали исследования, подростки в случаях заболевания зачастую не обращаются за медицинской помощью или обращаются в поздней стадии (хронической), когда экстренное извещение не передается, или они лечатся под другим диагнозом.

Ретроспективный анализ историй болезни 112 военнослужащих срочной службы в возрасте 18-19 лет, страдающих бруцеллезом, показал, что острый и подострый бруцеллез (25 человек) не был диагностирован до начала службы ни в одном случае, и только 28% заболевших обращались за медицинской помощью до призыва. Вместо бруцеллеза им установлен ошибочный диагноз - ОРВИ, пневмония, артрит, радикулит, заболевание крови. У части из них начало клинических проявлений острого бруцеллеза совпадало с первыми месяцами службы, что свидетельствовало о том, что они были призваны в период первичной латенции (свежее инфицирование), не распознанной призывной комиссией. Не диагностированными до призыва в Вооруженные Силы оказались и все случаи (16) с первично-хроническим бруцеллезом, клинические проявления которых имелись за 1 месяц - 2 года до начала службы, по поводу чего подростки редко обращались за медицинской помощью (12,5%). Вторично-хронический бруцеллез установлен впервые в Армии более чем в половине случаев (56,4%), при этом острую форму бруцелеза военнослужащие перенесли за 2-11 лет до призыва, то есть в детском и подростковом возрасте, оставшуюся неучтенной. Между тем неучтенный и нелеченный бруцеллез во время службы в Армии принимал тяжелые варианты течения под влиянием профессионально-экологического стресса, каковым является служба, и даже имел неблагоприятный трудовой прогноз (8% переболевших нуждались в комиссовании на ВТЭК, а 72,2% - вообще были уволены в запас как профессионально непригодные). Это позволило нам внести коррективы в Приказ Министра Обороны Республики Казахстан в отношении призывников, переболевших

острым бруцеллезом (удлинить отсрочку от призыва до 2 лет) и призывников с первично-латентным бруцеллезом (предоставить отсрочку на 6 мес.).

Клинико-эпидемиологический анализ историй болезни 235 подростков показал, что источником заражения у 40% из них послужил скот общественного стада, 44% - индивидуальных хозяйств. Это свидетельствует о возрастающем участии данного контингента в трудовом процессе в период массовых животноводческих работ.

При этом нами впервые установлена ведущая роль молока овцематок в инфицировании подростков при уходе за животными общественного стада, преимущественно 3 биоваром Вг.теШеггаз (77,0% случаев). При контакте с животными индивидуальных хозяйств (выпас) инфицирование происходило в основном 1 биоваром (84,3%). Выявленные различия в инфицировании 1 и 3 биоваром Вг.теШегшв мы связываем с разным характером работ, выполняемых подростками в тех или иных эпидемиологических условиях (уход и кормление молодняка в общественном хозяйстве и выпас, игра с молодняком - в индивидуальном). Специальными бактериологическими исследованиями аборт-плодов и молока овцематок с использованием селективной питательной среды для выращивания бруцелл в ряде неблагополучных по бруцеллезу овцеводческих хозяйств южных областей республики была установлена преимущественная изоляция из молока овцематок 3 биовара Вг.теМе^Б (76,9%), а от аборт-плодов - 1 биовара (65,4%). Такая закономерность выявлена во всех областях, где проводились исследования. Полученные результаты позволили нам высказать мнение о "мамматропности" 3 биовара Вг.теШеп51Б. По-видимому, молочная железа выполняет роль своеобразного "контейнера", обеспечивающего длительное сохранение бруцелл данного биовара, его большую устойчивость, что может являться причиной перезаражения животных, поддержания эпизоотического неблагополучия и заражения людей при сдаивании молока с целью кормления молодняка. Не исключено происхождение этого атипичного

биовара из 1 биовара (классического). О такой возможности сообщали еще Ю.Парнас и П.Меличевский (1958).

Со времени внедрения дифференциации бруцелл до биоваров (60-е годы) в республике произошла эволюция в сторону учащения регистрации 3 биовара как у животных, так и, особенно, людей. Изоляция 3 биовара за последние 30 лет возросла у людей в 25 раз, что следует связать с изменившимися социально-экологическими условиями.

Нельзя исключить влияние на возбудителя бруцеллеза искусственного иммунопресса в результате длительного применения (40 лет) вакцинопро-филактики животных и людей, включившего механизмы саморегуляции внутри биогеоценоза. В результате произошли не только адаптивные сдвиги возбудителя в сторону регрессии, но и смена экологической ниши (молочная железа). Не случайно имеются расхождения между бактериологическими подтверждениями аборт-плодов, которые значительно уменьшились за последние 20 лет, и ростом пораженности животных (диагностированных, кроме бактериологических, серологичесими реакциями) и заболеваемости людей с изоляцией 3 биовара. Все это диктует необходимость пересмотра тактики проведения противобруцеллезных мероприятий и дальнейшего, более углубленного изучения этого вопроса.

Установленная нами эпидемиологическая роль молока овцематок, и в том числе 3 биовара бруцелл козье-овечьего вида для подростков, требует, с одной стороны, разработки специальных профилактических мер в период окота овец, с другой - более детального изучения его антигенных и аллергенных свойств.

Изучение клиники бруцеллеза у подростков позволило установить более частую, по сравнению со взрослыми больными, бактериемию (в острой стадии бруцеллеза у 40% по сравнению с 25,4% у взрослых) и более частые генерализации инфекционного процесса (одна генерализация в 34,3% случаев, у взрослых - в 52,3%). В то же время клинические проявления

у подростков характеризовались постепенниым началом, меньшим объемом, по сравнению со взрослыми больными, поражений костно-суставной системы. Преобладали моноартриты над полиартритами во всех стадиях заболевания, включая хроническую (в острой стадии моноартрит - 32,2%, подострой - 46,9%, полиаритрит - соответственно 13,4% и 9,9%; у взрослых больных - 26,9% и 24,5% - моноартрит, 34,9% и 19,0% - полиартрит). Не регистрировались у подростков и такие тяжелые метастатические поражения позвоночника, как спондилит. Значительно более редкими были и поражения половых органов. Поражения центральной нервной системы были более редкими, менее глубокими и распространенными, лишь в виде менингита и энцефалитического синдрома, имели доброкачественное течение. Вероятно, эти различия связаны с меньшей сенсибилизацией организма на ранних этапах болезни (отрицательный результат пробы Бюрне в остром периоде встречался почти вдвое чаще - 21,8%, чем у взрослых - 13,3%, в последующие же сроки болезни степень сенсибилизации выравнивалась), на которых и приходятся эти осложнения.

Между тем выявленный нами рецидивирующий характер поражений одних и тех же суставов (крупных и средних) на всех этапах болезни свидетельствует об их метастатическом генезе, что обычно бывает при недостаточной сенсибилизации (Н.Д.Беклемишев, 1965). Так, коленные суставы в острой стадии поражались в 26% случаев, из них в 12,5% - повторно, в подострой стадии эти цифры составляли соответственно 25,5% и 21,5%, хронической - 32,9% и 21,6%. Это обстоятельство является одной из причин хронизации процесса и вносит новизну в представление о патогенезе бруцеллеза у подростков.

Особенностью клинических проявлений у подростков являлась также более частая реакция органов РЭС (лимфоузлы, печень, селезенка) по сравнению со взрослыми, что сближает их с детьми. У подростков также чаще имелись поражения сосудов и сердца (геморрагический синдром, стойкие

изменения на ЭКГ), что связано с высокой степенью интоксикации, сочетающейся с частой бактериемией. Однако по качественным критериям течение болезни было менее тяжелым, по сравнению со взрослым контингентом ввиду более редких осложнений со стороны жизненно важных органов. В целом острый бруцеллез, как и у взрослых больных, протекал в основном в среднетяжелом варианте (82,4%).

Анализ клинических проявлений в зависимости от изоляции 1 и 3 биоваров бруцелл показал, что 3 биовар высевался только при высокой (50%) и субфебрильной (50%) температуре, тогда как 1 биовар - во многих случаях (44,4%) и при нормальной температуре. С нашей точки зрения, это свидетельствует о факте латентного микробизма 1 биовара бруцелл и угнетающем его действии на фагоциты.

Костно-суставная система при изоляции 3 биовара поражалась значительно чаще (100%), чем 1 биовара (68,7%), процесс носил более распространенный характер - (полиартриты встречались у 70% больных против 43,7% - с изоляцией 1 биовара). На эти особенности клинических проявлений влияла более высокая степень сенсибилизации при заражении 3 биоваром бруцелл (отрицательный результат пробы Бюрне был у 18,2% больных, резко положительный - у 9%, при изоляции 1 биовара - соответственно у 31,2% и 6,3%). Более выраженную аллергическую перестройку у подростков, инфицированных 3 биоваром, можно связать с более частой возможностью инфицирования в условиях отгона. Нельзя исключить и влияние сенсибилизирующего действия самого 3 биовара, содержащего, в отличие от 1 биовара, два антигена - M(melitensis) и A (abortus). Именно с последним антигеном и можно связать более интенсивную аллергическую перестройку, по аналогии с возбудителем Br.abortus, вызывающим более распространенный, по сравнению с Br.melitensis, гранулематозный процесс (Roux, 1961). Возможно, что сенсибилизирующие свойства 3 биовара потенцируют активацию тех лимфокинов, которые участвуют в пирогенной

реакции организма (например, лимфокин ФНО). М.А. Мирзаева (1992) в Узбекистане не нашла разницы в вирулентности 1 и 3 биоваров Вг. melitensis в эксперименте. Гуморальный ответ был сильнее выражен у подростков с изоляцией 1 биовара (резко положительный результат р.Райта отмечался у 75% больных против 50% с изоляцией 3 биовара).

Наблюдения в катамнезе за подростками с изоляцией 1 и 3 биоваров бруцелл не выявили разницы в частоте хронизации инфекционного процесса (она состоялась' у 58,3% больных, инфицированных 1 биоваром и 60% -

; о

. 3).Такое нивелирование исходов болезни при явной разнице клинических проявлений и иммуноаллергической реактивности при инфицировании тем или иным биоваром Br.melitensis в немалой степени связано с рядом неблагоприятных социальных факторов: поздней диагностикой и несвоевременно начатым лечением, почти полным отсутствием диспансерного наблюдения за переболевшими, и, следовательно, невыявлением рецидивов инфекционного процесса, а также повторных инфицирований, и отсутствием их лечения. С этими факторами связан и общий высокий процент хронизации у подростков (не отличающийся от взрослых), независимо от биоваров.

Клинико-эпидемиологическая характеристика больных профессиональным бруцеллезом с неблагоприятным трудовым прогнозом (инвалидизацией)

Анализ историй болезни 192 больных бруцеллезом с неблагоприятным трудовым прогнозом, лечившихся в бруцеллезном стационаре за последние 25 лет, позволил установить у большинства из них (82,3%) профессиональный характер заболевания. 51,2% этих больных были в возрасте до 50 лет, в том числе 17% - в молодом возрасте (до 40 лет).

Исследования показали более высокую степень инвалидизации у животноводов (2 группа инвалидности - 77,7%, I группа - 5,5%) и скотников, доярок (соответственно 62,0% и 3,4%). В остальных категориях больных 2 и 3 группы инвалидности встречались или с одинаковой частотой, или пре-

обладала 3 группа. Сроки формирования инвалидизации были разными, наиболее короткими они были у животноводов. Так, при давности заболевания до 5 лет инвалидность регистрировалась у животноводов в 52,6% случаев, ветеринарного и зоотехнического персонала - в 27,8%, скотников, доярок - 41,3%,рабочих мясокомбинатов - 12,4%, прочего состава - 32%. При давности заболевания свыше 10 лет у животноводов она формировалась реже всего (соответственно. 27,7%; 60,6; 41,3; 62,0 и 53,5%). Наблюдения за больными в динамике (по данным многократных поступлений в стационар) позволили установить частые повторные инфицирования в очагах инфекции. Так, суперинфекции регистрировались у 27,7% постоянных животноводов, 42,4 - ветфинарного, зоотехнического персонала, 41,3 - скотников, доярок, 50,0 - рабочих мясокомбинатов и 32,1% - прочего контингента. Реинфекция отмечалась преимущественно у животноводов (соответственно 22,2%; 3,0; 3,4; 6,2 и 0,0%)^^большинстве случаев она протекала в остром варианте на фоне слабой аллергической перестройки или отсутствии таковой. На таком же фоне протекала у них и суперинфекция, что свидетельствует о достаточно большой, постоянной антигенной нагрузке на организм, вызывающей его десенсибилизацию и ослабление антимикробного иммунитета (Н.Д.Беклемишев, 1965). Характерно, что повторные инфицирования у животноводов в 50% случаев развивались при давности болезни 5-10 лет, в 30,7% -10-15 лет, т.е. в ранние сроки. В других группах больных суперинфицирование с последующими клиническими проявлениями происходило на фоне выраженной сенсибилизации и гиперсенсибилизации и в более отдаленные сроки болезни (доярки, скотники -66,6% при давности свыше 15 лет, рабочие мясокомбината - 60% в эти же сроки).

Анализ клинических проявлений бруцеллеза у профессиональных больных выявил поражения опорно-двигательного аппарата как наиболее частую причину инвалидизации (70,2%). Крупно- метастатические пораже-

ния тазобедренных суставов и позвоночника с грубыми остаточными проявлениями (коксартроз, спондилоартроз) были характерны для групп больных, контактирующих с большой дозой возбудителя (постоянные животноводы, ветеринарный и зоотехнический персонал и временно привлеченный в животноводство контингент из числа прочей группы). При таких массивных восп;шительных очагах (метастатические очаги внутрихостной деструкции) происходило исключительно быстрое развитие репаративных явлений, сильно деформирующих пораженную область, что? не могло не отразиться на сроках и глубине инвалидизации больных.

Поражения мелких суставов отмечались чаще у больны^ контактирующих с малой дозой возбудителя (рабочие мясокомбинатов) или слабовирулентным видом бруцелл (скотники, доярки). У последних во много раз чаще, чем в других группах, поражались кисти и стопы, для; ниж же бьш характерным так называемый системно-прогрессирующий полиартрит типа ревматоидного. Он развивался обычно спустя 10 лет от начала заболевания и имел аутоиммунный генез. Условия для аутоиммунных расстройств создавал коровий вид бруцелл, ввиду его большей фиксации в тканях. В этой же группе наиболее частыми были поражения позвоночника в виде остеохондроза, спондилеза, кифоза и сколиоза. Дегенеративно-дистрофические изменения со стороны позвоночника вызваны мелкограну-лематозным поражением с медленным развитием вторичных (репаративных) изменений, а потому обнаруживаемыми рентгенологически и функционально в поздних стадиях болезни. В деформации позвоночника (кифоз, сколиоз) играли роль определенная статика его во время дойки коров и физическая нагрузка при уходе за ними при отсутствии механизации ручного труда.

Значительное место среди причин инвалидизации больных занимали поражения центральной нервной системы (ЦНС), особенно у животноводов (33,3%) и ветеринарного, зоотехнического персонала (36,3%), которые

отличались глубиной и распространенностью поражений (менингоэнцефалит), грубыми остаточными явлениями (параличи, буль-барный синдром и др.). Менингоэнцефалит встречался у 16,6% постоянных животноводов и 6,0% - ветеринарного, зоотехнического персонала, в других группах его не было. Он развивался в острой (ранней) стадии болезни и был вызван токсическим действием возбудителя в период разгара инфекции (Е.И.Тараканов, 1939). С этим же действием связано развитие церебро-васкулита у данных групп больных (2,8% и 3,0% соответственно), закончившихся летальным исходом спустя 4-7 лет от начала болезни. В то же время у животноводов, в отличие от ветеринарного, зоотехнического персонала, а также всех других групп не встречались такие поражения ЦНС аллергического характера, как церебральный арахноидит, развивающийся в поздней стадии болезни (хронической), то же и в отношении энцефалита, подкоркового гиперкинетического синдрома. Это связано с меньшей сенсибилизацией животноводов, обусловленной большой антигенной нагрузкой на организм, вызывающей десенсибилизацию (Н.Д.Беклемишев, 1965).

В группе рабочих мясокомбинатов чаще, чем в других, отмечались функциональные расстройства нервной системы, которые можно связать с повторными ревакцинациями, вызывающими стойкие сдвиги со стороны ЦНС (С.Ж.Тлеулин, 1965).

Среди других причин, способствовавших инвалидизации, были поражения глаз, которые регистрировались в подавляющем большинстве у ветеринарного, зоотехнического персонала (кератоконъюнктивит с помутнением роговицы -12,1%), и были связаны, вероятно, с наибольшей сенсибилизацией этой группы больных и воздействием на глаза специфических аллергенов, каковыми являются профилактические вакцины для животных -при манипуляции с ними с нарушением правил техники безопасности (работа без защитных очков).

Следовательно, на прогноз заболевания откладывали свой отпечаток не только эпидемиологические условия (доза заражения, вирулентность возбудителя, повторные заражения), но и социальные факторы (характер труда, вакцинация, состояние иммунитета). Вместе с тем, скорость формирования необратимых изменений со стороны костно-суставной, нервной и других систем, ведущих к нарушению функции указанных органов, а следовательно, неблагоприятному трудовому прогнозу, степень инвалидизации связаны с характером эпизоотического очага и труда больного. Чем выше вирулентность возбудителя и инфицирующая доза, тем быстрее наступала инвалидизация и серьезнее был прогноз для жизни больного. Немаловажную роль здесь играли реинфекции. Менее вирулентный возбудитель вызывал аутоиммунные повреждения и сильнее сенсибилизировал организм. Дополнительная сенсибилизация организма в результате вакцинации и повторных ревакцинаций увеличивала дистрофические изменения в тканях и лишь отсрочивала наступления инвалидизации, но не предотвращала ее.

Изучение эффективности гелий-неонового лазера (ГНЛ) в эксперименте и клинике В условиях эксперимента на морских свинках (15) и белых мышах (60) мы изучили влияние ГНЛ в сочетании с антибиотиком гентамицином на инфекционный процесс. Установлено, что наилучший эффект при экспериментальном бруцеллезе мышей наблюдался при терапии гентамицин+лазер в 4-й серии экспериментов (гентамицин в дозе 5 мг/кг): ИИ составил 60,0%, ИИОО - 0,453+0,278 (контроль ИИ=83,3, ИЖЮ=0,687+0,338, т.е. Р<0,001). Благоприятное воздействие оказывала и монотерапия гентамици-' ном, т.к. ИИ снизился на грани достоверности до 70,0%, ИИОО- до 0,546±0,142 (Р=0,05 по сравнению с контрольной группой). При терапии гентамицин+лазер в этой группе животных несколько повысилась (Р=0,05) комплементарная активность сыворотки крови (титр комплемента 1:265±40,2 против 1:204+25,3 у леченных гентамицином), но активность фа-

гоцитоза уступала таковой при лечении одним гентамицином (соответственно 12,2±0,4% и 20,8±0,1%, Р<0,001). Следовательно, лазер действует на другие неспецифические механизмы защиты.

В опытах на морских свинках у леченных животных ИИ и ИИОО были несколько ниже, чем в контрольной группе, но без достоверных различий. Более убедительными были результаты исследования уровня колонизации бруцеллами селезенки: СКС в опытной группе гентамицин+лазер составил 2690±640 колоний/г, гентамицин - 3432+139 и в контроле - 3640+566 кол/г. (Р>0,05). Следовательно, лечение гентамицином уменьшает обсеменение селезенки, а воздействие лазера снижает этот показатель еще на 25%. Полученные результаты позволяют с оптимизмом рассматривать возможность использования ГНЛ в клинике с целью повышения эффективности антибактериальной терапии.

Учитывая высокий процент инвалидизации у больных профессиональным бруцеллезом, мы проводили поиск дополнительных методов лечения, воздействующих на местные воспалительные очаги, определяющие прогноз болезни. Таким методом явилась лазеротерапия, положительно зарекомендовавшая себя при костно-суставных поражениях другой этиологии. В связи с этим была изучена эффективность ГНЛ для реабилитации таких больных.

Под наблюдением находились 64 больных хроническим бруцеллезом в возрасте 16-30 лет (78,1% - декомпенсация, 22% - субкомпенсация) с давностью заболевания до 1 года - 40,4%, от 1 до 2 лет - 28,1%, 2-3 года - 14%, свыше 3 лет - 17,5%. Поражения суставов регистрировались у всех больных, в группе декомпенсации преобладали полиартриты (68,0%), субкомпенсации - моноартриты (66,6%). Остеоартрозы отмечались только у больных с декомпенсацией (25%), артрозо-артриты - одинаково часто (25%) при де- и субкомпенсации, эксудативно-пролиферативный характер воспаления суставов имел место в 50% случаев при декомпенсации и 75% - субкомпенса-

ции. Поражения позвоночника имелись у половины больных с субкомпенсацией и 78,1% - декомпенсации. Такие поражения, как спондилоартрит (10%), остеохондрит (8%) и сколиоз (14,5%) имелись только при декомпенсации, у них же более частыми были сакроилеиты (50% против 16,6% - при субкомпенсации), а более редкими - остеохондрозы (25,0% и 33,3%). Поражения периферической нервной системы были представлены в основном в виде компресионно-ишемической нейропатии (туннельный синдром), связанной с поражениями суставов и позвоночника (35,0% - декомпенсация, 16,6% - субкомпенсация).

Исследования показали, что уже спустя 4 сеанса лазеротерапии у 64% больных с декомпенсацией отмечались положительные клинические сдвиги: уменьшение болевого синдрома, увеличение амплитуды движения суставов и показателей статико-динамической функции позвоночника. По окончании полного курса клиническое выздоровление наступило у 18% больных с декомпенсацией и 50% - субкомпенсацией, улучшение - соответственно у 80% и 50%.

Клиническая эффективность лазеротерапии сочеталась с нормализацией исходно сниженных показателей неспецифических механизмов защиты (лизосомально-катионный тест, титр комплемента) и специфической сенсибилизации (проба Бюрне). В связи с этим ГНЛ может быть рекомендован для реабилитации больных с очаговыми поражениями с целью упреждения неблагоприятных исходов заболевания (инвалидизации), а при наличии таковых - улучшения трудового прогноза в молодом возрасте.

ВЫВОДЫ.

1. Эпизоотологическая ситуация в Казахстане характеризуется отчетливым ростом пораженности общественного скота с конца 80-х годов: мелкого - с 1,3-1,2% в 1988-89 гг. до 2,9-2,5% в 1992-95 гг., крупного - с 1,31,2% в 1988-89 гг., до 4,4-4,1% в 1991-95 гг., а также значительным заниже-

нием официальных статистических данных о наличии неблагополучных по бруцеллезу пунктов, стабильной передержкой пораженного бруцеллезом крупного рогатого скота - с 45-55% в 70-х годах до 80% и более - в 90-х. Аналогичная эпизоотологическая ситуация выявлена среди животных индивидуальных хозяйств: зараженность мелкого рогатого скота в 90-х годах колеблется от 2,1% до 2,5%, крупного -1,3-2,6%.

2. Длительная напряженная эпизоотологическая ситуация по бруцеллезу в республике, отсутствие должного ветеринарного надзора в животноводстве на фоне негативных перемен за последние годы в социальной сфере способствовали росту заболеваемости бруцеллезом людей. Реальный уровень заболеваемости подростков значительно выше официальных статистических данных. Выявлен рост инфицирования людей атипичным - 3-им биоваром бруцелл козье-овечьего вида - в 25 раз за последние 30 лет.

3. Эпидемический процесс у подростков имеет свои особенности, который зависит от характера эпизоотического очага: а) у подростков, занятых обслуживанием новорожденных ягнят в общественном стаде, основную эпидемиологическую значимость имеет молоко овцематок. Заражение происходит в основном 3-им биоваром бруцелл за счет его "мамматропности"; б) подростки, занятые уходом за мелким рогатым скотом в личных хозяйствах (выпас), заражаются преимущественно 1-ым биоваром бруцелл.

. 4. Установлены различия в клинико-иммунологических проявлениях бруцеллеза у подростков в зависимости от выделенных биоваров бруцелл (1 и 3), которые влияли на степень тяжести процесса (преобладало среднетя-желое течение - 82,4% и 83,4%): 1-ый биовар чаще обусловливал выраженный интоксикационный синдром, 3-ий биовар - распространенные очаговые поражения, связанные с гиперсенсибилизацией. Выявлена высокая частота хронизации у подростков (58,3% - 1-ый биовар, 60% - 3-ий биовар), которая не отличалась от взрослого контингента больных. Исход болезни во многом обуславливался неблагоприятными социальными условиями -

поздней диагностикой и лечением, низким охватом диспансерным наблюдением переболевших бруцеллезом.

5. Клиническое течение бруцеллеза у подростков отличалось от взрослых более постепенным началом, частыми генерализациями и бактериемией, поражениями органов РЭС и сердечно-сосудистой системы, меньшей распространенностью локальных поражений, в том числе в жизненно важных органах, что, по-видимому, связано с гипосенсибилизацией на начальных этапах болезни. Метастатический характер ранних поражений крупных и средних суставов в результате слабо выраженной сенсибилизации и инфицирования высоковирулентным возбудителем способствовали рецидивам одних и тех же локализаций на всех этапах болезни и служили одной из причин стойкой хронизации.

6. Особенности клинического течения бруцеллеза у разных по профессии групп больных, сроки формирования инвалидизации и ее степень в разной мере зависели от эпидемиологических и социальных факторов среды: вирулентности возбудителя, инфицирующей дозы, повторных заражений, характера труда, состояния иммунитета, предшествующей вакцино-профилактики. Так:

а) инфицирование в массивных дозах высоковирулентным возбудителем в условиях отгона вызывает у постоянных животноводов крупнометастатические поражения позвоночника и крупных суставов с быстрыми и мощными репаративными процессами, деформирующими опорно-двигательный аппарат; ранние и глубокие поражения центральной нервной системы токсического характера с грубыми остаточными явлениями, ускоряющими сроки формирования инвалидизации и углубляющими ее степень (I и II группы инвалидности у животноводов - 82,2%; скотников, доярок - 65,4; ветеринарного, зоотехнического персонала - 46,7; рабочих мясокомбинатов - 43,8%; прочих - 50,0%).

б) инфицирование малой дозой возбудителя вызывало мелкогрануле-матозные поражения опорно-двигательного аппарата с замедленной репарацией. У рабочих мясокомбината органические и функциональные изменения ЦНС аллергического генеза происходили преимущественно в хронической стадии заболевания на фоне гиперсенсибилизации, которая развивалась после неоднократных прививок, стимулирующих дегенеративно-дистрофические изменения в позвоночнике и суставах. Сходные клинические проявления выявлены при плохом трудовом прогнозе у скотников и доярок, инфицированных слабовирулентным возбудителем (Br.abortus), который в большой степени обусловливал аутоиммунный процесс, проявляющийся системно-прогрессирующим полиартритом; наряду с этим тяжелая физическая работа при отсутствии эффективной механизации ручного труда усиливала деформацию опорно-двигательного аппарата, вызывая сколиозы, кифозы и деструкцию мелких суставов кистей.

7. Ретроспективный анализ клинико-эпидемиологических данных у разных по профессиям групп больных с инвалидизацией свидетельствует о частых повторных заражениях и заболеваниях (от 32,0-56,2% случаев), не учитываемых статистикой, что опровергает имеющиеся данные о резком снижении заболеваемости бруцеллезом, в частности, животноводов за последние годы, на фоне напряженной эпизоотической ситуации.

8. Низкоинтенсивное лазерное излучение при экспериментальном бруцеллезе уменьшало обсеменение возбудителем бруцеллеза селезенки на 25% и умеренно стимулировало комплементарную активность сыворотки крови животных.

Включение в комплексную терапию больных хроническим бруцеллезом метода чрезкожного облучения местных воспалительных очагов гелий-неоновым лазером повышало эффективность лечения (на 18% - при декомпенсации, 50% - субкомпенсации). Клиническая эффективность лазеротерапии сопровождалась умеренной стимуляцией неспецифических механиз-

мов защиты (лизосомально-катионный тест, титр комплемента) и аллергической реактивности (реакция Бюрне) до уровня нормальных величин.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Осуществлять выборочный бактериологический контроль молока овцематок с использованием селективной питательной среды в случаях:

а) при неизвестной эпидемиологической и эпизоотологической ситуации, в том числе при отсутствии официально зарегистрированных абортов и мертворождений бруцеллезной этиологии у животных и в то же время наличия заболеваемости людей, обслуживающих этих животных;

б) при расхождениях между бактериологическим подтверждением абортов бруцеллезной этиологии и пораженностью животных по данным серологических исследований.

2. Включить в перечень законодательных актов Республики Казахстан по здравоохранению и ветеринарии документы, регламентирующие юридическую и административную ответственность руководителей хозяйств всех форм собственности и частных лиц за невыполнение и нарушение про-тивобруцеллезного режима, повлекшего инфицирование и заболевания подростков.

3. При многопрофильной больнице создать подростковый реабилитационный центр по бруцеллезу, где, наряду с лечением, будет осуществляться экспертиза пригодности к призыву в Вооруженные Силы Республики Казахстан при участии НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава Республики Казахстан.

4. Подростки со свежим инфицированием возбудителем бруцеллеза (первично-латентный бруцеллез) должны подлежать отсрочке от призыва в Вооруженные Силы Республики Казахстан на срок максимального инкубационного периода при бруцеллезе (6 месяцев). Подростки, переболевшие

острым бруцеллезом, должны подлежать отсрочке от призыва в Вооруженные Силы Республики Казахстан на 2 года.

5. У больных хроническим бруцеллезом с очаговыми поражениями опорно-двигательного аппарата и периферической нервной системы для получения стойкого клинического эффекта рекомендуется включать в комплексное лечение метод чрезкожного облучения гелий-неоновым лазером пораженных областей. Плотность потока мощностей расфокусированного луча лазера на коже должна составлять 1-1,5 мВт/см2, экспозиция выбирается пропорционально величине сустава (крупные - 5 мин., средний - 3 мин., мелкий - 1 мин. на одно поле). Продолжительность сеансов составляет 12-15 процедур.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертациям

1. Лечение различных клинических форм бруцеллеза / Сыздыков М.С., Ильинский Ю.А., Никифоров Н.Д. и др. // Тез.докл. Всесоюзн. конф. "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным". //Тез.докл. Всесоюзн. конф. Новосибирск, 24-25 октября 1989 г. - М., 1989. с.216-217.

2. Клинико-функциональная характеристика состояния сердечно-сосудистой системы при бруцеллезе / Джангалиев Т.Т., Булычев В.В., Сейсембеков Т.З., Сыздыков М.С. и др. // Тез.докл. Всесоюзн. конф. "Актуальные вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицинской помощи больным". //Тез.докл. Всесоюзн. конф. Новосибирск, 24-25 октября 1989 г. - М., 1989. с.201-203.

3. К клинике бруцеллеза у студентов / Жуманбаев К.А., Джангалиев Т.Т., Срымбеков М.С., Сыздыков М.С., Кузьмин А.И. //Респуб. сб. "Медицинские и социально-гигиенические проблемы охраны здоровья студентов", Караганда, 1988, с.86-89.

//Респуб. сб. "Медицинские и социально-гигиенические проблемы охраны здоровья студентов", Караганда, 1988, с.86-89.

4. Лечебное применение низкочастотного магнитного поля при костно-сусгавной форме бруцеллеза / Сыздыков М.С., Ульянов А.Ф., Кузьмин А.И., Семенова Т.И. // Матер, межтер. науч.-практ. конф. "Соверменные проблемы использования физических факторов в . комплексном лечении и реабилитации больных заболеваниями опорно-двигательного аппарата, нервной системы и женских половых органов", Одесса, 1989. с.15-16.

5. Некоторые показатели метаболизма медиаторов вегетативной нервной системы и кининов при бруцеллезе / Ильинский Ю.А., Двуреченская Г.С., Жуманбаев К.А., Сыздыков М.С. //Тез.докл. 3 Всерос. съезда инфекционистов, Москва-Смоленск, 1989. с.315-317.

6. Взаимосвязь рожи и бруцеллеза / Сыздыков М.С., Лоба-шевский А.Б., Филатова Л.Г., Бездетко Т.В. // 1-ая Всесоюзная научно-практическая конференция. Москва-Ворошиловград, 1989, с. 102.

7. Изучение изменений иммунного статуса при бруцеллезе и туберкулезе / Сыздыков М.С., Козаченко A.B., Бескова А.И. и др. //Матер.регион, научно-практ. конф. "Влияние факторов внешней среды на реактивность организма", Киев, том 1, 1990, с.66-67.

8. Состояние иммунного статуса у больных бруцеллезом / Сыздыков М.С., Козаченко Н.В.,Курманова К.Б., Кузьмин А.И. //Сб.статей респуб. конф."Социальные, философские, экономические, политические и медицинские проблемы экологии и демографии", Караганда, 1990, с.301-302.

9. Фукнциональная оценка некоторых показателей иммунитета при бруцеллезе / Сыздыков М.С., Козаченко H.A., Курманова К.Б. и др. // Тез.докл. регион.конф. "Актуальные вопросы диагности-

ки, лечения и профилактики бруцеллеза и туберкулеза в условиях Центрального Казахстана". 29-30 марта, 1990, Караганда, с. 14.

10. К проблеме лечения бруцеллеза / Сыздыков М.С., Курма-нова К.Б., Кузьмин А.И. и др. Там же. с. 18.

11. Сыздыков М.С., Кузьмин А.И. Способы лечения бруцеллеза и вирусных гепатитов //Тез. научн. конф. "Актуальные проблемы профилактической медицины", Караганда, 1990. с.138-140.

12. Влияние внешей среды на иммунный статус больных бруцеллезом. / Сыздыков М.С., Покровский В.И., Курманова К.Б., Ами-реев С.А. //Тез.докл. на респуб. конф.:"Внешняя среда и охрана здоровья населения", Ижевск, 1991, с.122-123.

13. Использование витамина А в терапии различных форм бруцеллеза / Сыздыков М.С., Курманова К.Б., Покровский В.И., Никифоров Н.Д. // Тез.Всесоюзн. конф. по клинической витаминологии,

, 18-20 июня 1991, М., с.254-255.

14. Сыздыков М.С. Использование дискретно-динамического анализа в изучении иммунной системы при бруцеллезе. //Матер. V объедин. съезда гигиен., эпид., микробиол., паразит, и инфекционистов Казахстана, т.7. Алма-Ата, 1991, с.204-205.

15. Рациональная химиотерапия острого и подосгрого бруцеллеза / Сыздыков М.С., Покровский В.И., Курманова К.Б., Кузьмин А.И. //Тез.докл.Всесоюзн.конф."Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций". 22-24 октября 1991 , Москва, часть 4, с.626-628.

16. Сыздыков М.С. Современное течение бруцеллеза и принципы его лечения. //Матер.2 съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов республики Кыргызстан .15-16 ноября 1991 г, Бишкек, с. 187-188.

17. Курманова К.Б., Сыздыков М.С. Основные факторы нарушения функции фагоцитов и их патогенетическая роль в развитии обострений бруцеллеза. Там же. с. 170-172.

18. Сыздыков М.С. Иммунный статус при различных вариантах бруцеллезной инфекции. //Тез.докл. Междунар. симпозиума по аллергологии и клинической иммунологии, Алма-Ата, 1992, раздел 2, с.201.

19. Лечение и фукнциональная оценка иммунитета при различных клинических формах бруцеллеза / Сыздыков М.С., Покровский В.И., Курманова К.Б., Кузьмин А.И. //Съезд врачей-инфекционистов в г.Суздале, Москва-Киров, 1992, том 2, с. 191-192.

20. Сыздыков М.С. Степень сенсибилизации при различных формах бруцеллеза. //Матер.2 научно-практ. конф. "Медицинские, социальные и экологические проблемы Приаралья", Алматы, 1994, часть 1, с.111-112.

21. Эволюция клинического течения бруцеллеза / Сыздыков М.С., Салов В.Д., Цирельсон Л.Е., Поляков Б.А. //Респуб. сб."Актуальные вопросы военной медицины", Алматы, 1994, часть2, с.88-91.

22. Цирельсон Л.Е., Сыздыков М.С., Салов В.Д. Особенности клинического течения бруцеллеза у больных с различным эпидемиологическим анамнезом. Там же. с. 125-128.

23. Анализ причин заболеваемости бруцеллезом военнослужащих срочной службы / Салов В.Д., Окапов Н.К., Цирельсон Л.Б-, Сыздыков М.С. и др. //Респуб. сб. "Актуальные вопросы военной медицины", Алматы, 1994, часть 2, с.71-73.

24. Функциональное состояние печени у больных острым бруцеллезом / Нурманова М.Ш., Сыздыков М.С., Салов В.Д. и др. Там же. с.67-69.

25. Совершенствование эпидемиологического надзора за бруцеллезом на современном этапе / Амиреев С.А., Каральник Б.В., Сыздыков М.С. и др. II Сб.мат.науч.-практ. конф., посвященной 70-летию образования института, Алматы, 1995. с.11-14.

26. Особенности клинического течения бруцеллеза у военнослужащих срочной службы I Сыздыков М.С., Цирельсон Л.Е., Салов В.Д. и др. // Сб.мат.науч.-практ. конф., посвященной 70-летию образования института. Алматы, 1995, с.67-72.

27. Сыздыков М.С., Цирельсон Л.Е., Салов В.Д. Исходы бруцеллеза у больных в зависимости от эпидемиологического анамнеза. //Сб.мат.науч.-практ. конф., посвященной 70-летию образования института, Алматы, 1995, с.63-66.

28. Джубангалиев М.У., Сыздыков М.С., Бекетов Б.И. Материалы эпизоотолого-эпидемиологического и клинико-иммунологи-ческого обследования в некоторых районах Казахстана, эндемичных по бруцеллезу. //Сб.мат.науч.-практ. конф., посвященной 70-летию образования института, Алматы, 1995, с.22-25.

29. Особенности клинического течения бруцеллеза у военнослужащих срочной службы / Салов В.Д., Цирельсон Л.Е., Сыздыков М.С. и др. //Журнал "Вестник военной медицины Казахстана", № 1, 1996, с.60-63.

30. Клинико-эпидемиологическая характеристика бруцеллеза у подростков с выделением различных биоваров бруцелл / Сыздыков М.С., Цирельсон Л.Е., Амиреев С.А. и др. // Деп. в КазгосИНТИ, 15.07.96 г., №7130-Ка96 -с.1-9.

31. Клинико-эпидемиологические особенности бруцеллеза у подростков. Сообщение 4. Причины хронизации, пути инфицирования, исход заболеваний / Бекетов Б.И., Сыздыков М.С., Цирельсон Л.Е., Амиреев С.А. // Матер, научн. конф. "Экологические аспекты

эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций" (4-5 сентября 1996 г., г.Талдыкорган), Алматы, 1996, с. 10.

32. Клинико-эпидемиологические особенности бруцеллеза у подростков. Сообщение 3. Сравнительное изучение клиники в связи с выделением из молока разных биоваров бруцелл / Бекетов Б.И., Сыздыков М.С., Цирельсон JI.E. и др. // Матер.научн. конф. "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций" (4-5 сентября 1996 г., г.Талдыкорган), Алматы, 1996, с.9-10.

33. Клинико-эпидемологические особенности бруцеллеза у подростков. Сообщение 2. Эпидемиологическая характеристика в связи с выделением различных биоваров бруцелл / Сыздыков М.С., Цирельсон Л.Е., Бекетов Б.И., Амиреев С.А. //Матер.науч.конф. "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций" (4-5 сентября 1996 г., г.Талдыкорган), Алматы, 1996, с.30-31.

34. Клинико-эпидемиологические особенности бруцеллеза у подростков. Сообщение 1. Заболеваемость в Казахстане и эпидемиологическая ситуация по группам населения / Сыздыков М.С., Бекетов Б.И., Цирельсон Л.Е. и др. // Матер.научн.конф. "Экологические аспекты эпизоотологии и эпидемиологии чумы и других особо опасных инфекций" (4-5 сентября 1996 г., г.Талдыкорган), Алматы, 1996, с.29-30.

35. Сыздыков М.С. Лазеротерапия в комплексном лечении больных хроническим бруцеллезом. //Журнал "Клиницист". №4, 1996 г, с.81-86.

36. Сыздыков М.С. Клинико-эпидемиологическая характеристика больных профессиональным бруцеллезом с инвалидизацией. //Дот, в КазгосИНТИ. 14.11.96 г., №7270-Ка96 -с.1-26.

37. Сыздыков М.С. Клинико-эпидемиологическая характеристика бруцеллеза у подростков. //Журнал "Медицина и экология", № 1, 1996, с.68-71.

38. Сыздыков М.С. Эпидемиология бруцеллеза у подростков. //Деп. в КазгосИНТИ. 5.12.96 г., № 7306-Ка96. - с.1-12.

Методические рекомендации

39. Бруцеллез (патогенез, клиника, алгоритмы дифференциальной диагностики и лечения) / Сыздыков М.С., Кузьмин А.И., Курманова К.Б., Шуратов И.Х. //Метод.рекомендации. Караганда, 1991, с. 1-28.

40. Патогенез, классификация, клиника и диагностика бруцеллеза / Сыздыков М.С., Белозеров Е.С., Амиреев С.А. и др. //Методич.рекоменд. Алматы, 1995, с. 1-11.

41. Эпизоотолого-эпидемический надзор при бруцеллезе. / Сыздыков М.С., Амиреев С.А., Белозеров Е.С. и др. // Методич. рекомендации. Алматы. 1995. с.1-15.

42. Лечение, диспансеризация и оформление професииональ-ной заболеваемости бруцеллеза / Сыздыков М.С., Белозеров Е.С., Цирельсон Л.Е. и др. //Метод, реконмендации. Алматы, 1995, с. 1-19.

Монография

43. Сыздыков М.С. Вопросы эпидемиологии, клиники бруцеллеза и инвалидизации у взрослых и подростков в эпидемиологически неблагополучном регионе. //Деп. в КазгосИНТИ. 14.11.96 г., № 7269-Ка96. - 223 с.

Тип. Парламента PK. Зак. № 204-L30.

14 5' О А

На правах рукописи

, ¿1 НИ»

ЩЕРБАКОВА Светлана Анатольевна

РАСПРОСТРАНЕНИЕ И ЭКОЛОГИЯ ВИРУСОВ БАТАИ, ТЯГИНЯ И ИНКО (СЕМЕЙСТВО ВиМУАУтШАЕ) В НИЖНЕМ ПОВОЛЖЬЕ

(специальности - 14.0030 - эпидемиология, 03.00.06 - вирусология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САРАТОВ-1996

Работа выполнена в Российском научно-исследовательском противочумном институте "Микроб"

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: кандидат мед. наук М.II. Лякип доктор бнол. наук, профессор A.M. Бутснко

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

почетный академик ЛЕН 1'Ф, заслуженный деятель науки РФ, доктор мел. наук-, профессор С.Я. Гайдамовнч доктор Сиол. наук Н.В. Поиов

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Институт элидеммологнн и микробиологии им.Н.Ф. Гамалеи

Зашита диссертации состоится г. O.IL часов

на ыседанни диссертационного Совета Д 07432.01. при РосНИПЧН "Микроб" (410005 г. Саратов,ул. Уиммрситггсюш,46)

С диссертацией можно ошакомитъея в научной библиотеке РосНИПЧИ "Микроб"

Аиюреферат разослан 4km/S£^\vn г.

Ученый секретарь диссертационного совет»,

доктор быол. иаук I'.A.k'opneea

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В настоящее время известно более 500 арбовпрусов, однако в результате интенсивных исследований, проводимых во многих странах мира, перечень вирусов, передаваемых членистоногим» и патогенных для человека и животных, продолжает увеличиваться. Во многих случаях вторжение человека в неосвоенные или малоосвоенныерегионы сопровождается вспышками "неожиданных" природ-но-очаговых заболеваний. Значительная их доля приходится на арбови-русные ннфекцип, в том числе малоизученные или ранее неизвестные (Львов Д.К. п др.,1989). В связи с этим сохраняют актуальность такие направления научного поиска, как установление спектра арбовпрусов, циркулирующих па конкретных территориях, выявление условий формирования, существования н сохранения их природных очагоп, идентификация н классификация арбовирусов, разработка методов диагностики, лечения и профилактики вызываемых ими заболевании.

В результате проведения широкомасштабных исследований, выполненных в течение последних лет в рамках программы Центра'экологин возбудителен инфекционных заболеваний на территориях республик СССР, а затем в Российской Федерации, была установлена циркуляция целого спектра арбовирусов в изучаемых регионах (Львов Д.1С. и др., 1974, 1989), в том числе различных представителей семейства Випуау«п<];(е.

Несмотря на успехи, достигнутые в выявлении прнродно-очаговон активности бунъявирусов Тягана, Пико и Батаи в Поволжье (Алексеев Е.В. и др., 1990, Галкина И.В. и др., 1992, Киороз М.Ю. и др., 1991), многие

особенностн их распространения, экологии и эпидемиологическая роль в Саратовской области остались недостаточно выясненными, что определяет актуальность настоящей работы.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ заключалась в выявлении циркуляции вирусов Тяпшя, Иико и Батан на территории Саратовской области, изучении их распространения, экологии и роли в краевой патологии.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

- Выявление потенциальных переносчиков и резервуаров вирусов Тягиня, Кико и Батаи.

- Обследование сывороток крови крупного рогатого скота на антитела к этим возбудителям с целью изучения их распространения и эпнзоотоло-гической напряженности природных очагов.

- Изучение показателей гуморального иммунитета к вирусам Тягиня, Иико и Батан у жителей Саратовской области.

- Изучение роли эндемичных арбовирусов в патологии человека.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ:

- Проведенная работа явилась комплексным научным исследованием, направленным па изучение актуальных аспектов циркуляции вирусов Тяпшя, Иико и Батан на территории Саратовской области.

- Установлена роль комаров родов Aedes и Culex в качестве естественных переносчиков указанных арбовирусов.

- Получены данные о вовлечении в процесс циркуляции буньявирусов в изучаемом регионе фоновых видов мелких млекопитающих.

- Доказано значение вирусов Иико ч Тягиня как возбудителей сезонных лихорадочных заболеваний у жителей Саратовской области.

- Показано, что конкурентный вариант ИФА может успешно при-

меияться в качестве скрининг-теста для обследования сывороток* крови крупного рогатого скота на наличке антител к вирусам Тягння, Инко и Батан. Этот метод характеризуется высокой чувствительностью, специфичностью, воспроизводимостью и доступностью.

Полученные данные расширяют имеющиеся представления о распространении н экологии вирусов Тягння. Инко и Багаи, а также их рол» в региональной патологии человека.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ. Результаты проведенной работы служат основой для рекомендаций по усовершенствованию существующих подходов к тучешчо природных очагов б. иыпшрусоэ и внедрению методов специфической диагностики арбовнрусных инфекций.

Показано важное значение конкурентного варианта ИФА для пропеде-иия сероэпнюбтологнческнх исследований.

По материалам диссертаций составлены к утвер'.кдены Ученым Советом РосНИПЧИ "Микроб": " Методические рекомендации по серологическим исследованиям на арбовирусные инфекини с двукратным нсиольтопани-ем мммуноглобулиновых" Й антигенных компонентов, применяемых в : ИФА"

(Саратов, 1995 г.) и "Методические рекомендации по выявлению антител к вируса»« Тнгння, Инко н Катам метолом конку рентного ИФА" (Саратов, 1996 г.).

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

- На территории Саратовской области подтверждена циркуляция вирусов Тягиня, Инко и Батан.

- и» активными переносчиками являются доминирующие виды комаров ролов Ае^« к Сикх, а в процесс циркуляции вовлекаются фоновые виды мелких грьиунив н насекомоядных..

- На территории Саратовской области возможно существование смешанных природных очагов арбовнрусов Тягния, Инко, Батаи.

- На основании обнаружения диагностических показателен ^М- и антигел к вирусам Тяпшя и Инко установлена этиологическая роль этих возбудителен в развитии острых лихорадочных заболеваний человека в Саратовской области.

- Конкурентный вариант ИФЛ предлагается лля использования в качестве скрининг-теста при обследовании сывороток крови крупного рогатого скота на наличие антител к вирусам Тягния, Инко н Батан.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты проведенных исследований были предешвлены на:

-научной конференции РосНИПЧИ "Микроб" (1995 г.);

- 3-ей Международной конференции студентов и молодых ученых "Актуальные вопросы современной медицины" (г. Бишкек, 1996);

- иаучио-практнчсскон конференции "Современные аспекты эшмечно-логин н профилактики природноочаговых инфекций (г. Омск,1996);

- научной конференции "Эколого-эпндемкологический надзор за прн-родпо-очаговыми ннфекцнймн в Северном Ирнкаспнн" (г. Астрахань, 1996);

- Международной конференции Акалемкн Естествошаниа "Гомеостаз и инфекционный процесс" (г. Саратов, 1996);

научной конференции "Эпидемиологические и кликмко-иммунологическне аспекты профилактики важнейших инфекционных заболеваний" (г. Астрахань, 1996).

Работа выполнена о рамках нланавой научной темы института "Микроб" "Экологические л медицинские аспекты циркуляции арбовн-

русов на территории Юго-Восточных с ¡стонов Приволжской возвышенности и прилегающей к ним пой.лы реки Волги" гос. регистрации 01930005810).

ПУБЛИКАЦИИ. Основные положения диссертации отражены в ? опубликованных научных работах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы (123 отечественных и 35 зарубежных источников). Общий объем работы составляет 10? страниц машинописного текста, включающего 15 таблиц и 2 рисунка.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа по сбору полевого материала для исследований прЬводилась на ■территории Саратовской области в 1991-1994 гг. во время экспедиционных выездов (с мая по сентябрь каждого года). Точки сбора были подобраны тагаш образом, «.тобы наиболее полно охарактеризовать обследованную территорию в отношении распространения арбовнрусов с учетом ландшафтной зональности области. Кроме того, опираясь на ранее проведенные нс-сдсдовап т!, сбор материала проводили а местах, где циркуляция арбозиру-соз могла быть папболсе вероятной. Исходя из этого на территории области была определены 10 пунктов сбора материала, которые находились в 10 ад-»яшнетратпвных районах области и на территории 2 ландшафтных зон

(лессгтешюй и степной). Было собрано и обследовано 12700 экземпляров комаров 9 видов, принадлежащих к родам Aedes, Anopheles, Culex и Mansonia, а также 167 проб внутренних органов от 426 мелких млекопитающих из отрядов Rodentia и Insectívora.

Кроме полевого материала в исследование были включены 337 сывороток крови доноров, 72 сыворотки кропи больных с подозрением на ар-бовнрусные инфекции и 288 сывороток крови крупного рогатого скота (КРС).

Для обследования суспензий комаров и органов мелких млекопитающих на присутствие вирусных антигенов Тяпшя, Инко и Баган применяли сэндвич-вариант ИФА с использованием коммерческих диагностических тест-систем, выпускаемых в Институте вирусологии им. Д.И.Ивановского, РАМН, Москва.

Сыворотки КРС на наличие антител к вирусам Тяпшя, Инко л Батан обследовали методом конкурентного нммуноферментиого анализа.

Анализ сывороток крови больных с острыми лихорадочными заболеваниям« неясной этиологии на наличие IgG- и IgM-аитител к вируса»! Тяги-ия, Инко и Батаи проводили в непрямом варианте ИФА с использованием компонентов диагностических тест-систем производства Института вирусологии им. Д.И.Ивановского, РАМН. В случае анализа этого материала' на наличие противовирусных IgM-антител в систему вносили овечьи IgG-антитела против IgM-антител человека, меченные перок»..дезой хрена (рабочее разведение 1:1000), полученные по методу P.ICNakane et al., 1966. При аиализе сывороток крови больных на противовирусные IgG-антитела' в лунки добавляли пероксидазиый конъюгат кроличьих антител против IgG-aiM гел человека в рабочем разведении 1:20, выпускаемый предприятием по производству бакпрепаратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток.

Исслсдовапня сывороток крови доноров к части сывороток крови КРС проводили с помощью реакции нейтрализации (РН). РН выполняли микрометодом в перевиваемой культуре клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ). В работе использовали адаптированные к мозгу новорожденных белых мышей музейные штаммы вирусов Тягиия (шт. 92), Инко (шт. KN-3641) и Батан (шт. ММ 2222).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Выявление потенциальных лергнесчиков и резервуаров вирусов Тягиня, Инко и Батан

В настоящей работе было обследовано 12700 экземпляров комаров, собранных в Саратовской области и сгруппированных в 127 проб. Антигены вирусов Тягиня, Инко и Сатан были обнаружены соответственно в 7 (5.5 %), 2 (1,6 %) и 6 (4,7 %) пробах. Расчетные показатели индивидуальной зараженносгн комаров ithmh вирусами составляют 0,055 %, 0,016% и 0.047 %,соответственно (табл.1).

В .материале, собранном от грызунов (156 проб), антигены вирусов Тягиня, Инко и Батан были обнаружены в 16 (103 %), 15 (9,6%) и 10 (6,4 %) пробах. В образах от насекомоядных (11 проб) антигены вируса Тя1ния били обнаружены в 1 (9,1%) пробе, и по 2(18,2 %) пробы содержали антигены вирусов Инко и Батаи (таблД и 3).

Шштсвные ответы на антигены вирусов Тягиня, Инко я Натай в материале, собранном в лесостепной зоне, рсгистрировхикь чаще, чем и пробах

Таблнца1

Результаты ИФА 127 суспензий комаров (12700 экземпляров) на присутствие антигенов вирусов Тягинн, Инко и Батан

Вирусы. число положительных суспензий % положительных cvcucmiiii % инливнлуал. заражен, комаров

ТЯПШЯ 7 5.5 0,055

ИНКО ■ 2 . 1,6 0,016

БАТЛИ 6 4,7 0.047

Таблица 2

Результаты ИФЛ суспензий нечсии грызунов на прнсу тствне антигенов вирусов Тяпшя, Инко л Батан

Вирусы число обслед. число положи- % ио.южшель-

суспензий тельных »JIJS *

суспензин

ТЯГИНЯ 156 16

1ШКО ■ 156 ■ 15 9.6

БАТАИ ■ 156 10 6.4

* Суммарный показатель позитивности суспензий печени в ИФЛ с противовирусными антнтеламн составил 19.9 % (31 проба)

Таб.шиа 3

Результаты ИФА суспензий печен» иасекомоялнич ни npiu-\ icibhc антнгсиои вирусов Твпшя, Инко и L.i i an

Вирусы число обследо- ЧИСЛО ПОЛОЖИТ. V» положи иль-

ван. суспензии шлх •

cvciietoiiii

ТЯПШЯ 11 9.1

ИНКО !1 " 1НЛ

БАТАИ 11 ' ■ is.:

* Суммарный показатель позитивности суспензий печени в ИФЛ с противовирусными антителами составил 36,4 % (4 пробы)

iij степной зоны. Так, среди комаров, отловленных в лесостепной зоне, положительные находки антигенов вирусов Тягння, Инко и Батан были зафиксированы в 3 (7,7 %), 1 (2,6 %) и в 2 (5,1 %) пробах соответственно. Антигены этих же вирусов в суспензиях комаров, собранных в степной зоне, встречались несколько реже: 4 (4,6 %) пробы содержали антиген вируса Тягиня, 1 (1,1 %) вируса Инко и 4 (4,6 %) - вируса Батан. Такая же динамика наблюдалась и при исследовании материалов от мелких млекопитающих. При этом в суспензиях органов грызунов из лесостепной зоны частота встречаемости антигена вируса Тягння составила 12,2 % (16 проб), вируса Икко -12,2 % (16 проб), вируса Батан-7,6 % (19 проб). Для материала из степной зоны эти показатели составили 2,8 % (1 проба) - Тягння, 2,8 % (1 проба) - Инко п 5,6 % (2 пробы) - Батаи (табл.4). Представленные данные позволяют предположить, что на территории области циркуляция вирусов Тягиия, Инко н Батаи в лесостепной зоне более интенсивна, чем в степной. Это заключение иаходнт подтверждение и в работах, выполненных па территории Центрально-Европейской части России, Русской рашкшы п Поволжья (Галкина Й.В. и др., 1992, Кандау-ровЕЛСндр., 1991, Кузнецов АЛ. н др., 1992).

. Наряду с выяснением закономерностей лаидшафтно-географического характера проведенные исследования позволили определить круг членистоногих и млекопитающих, вовлекаемых в процессы циркуляции вирусов Тягиня, Инко и Батан на территории Саратовской области.

Анализ видового состава проб комаров, дающих положительные результаты на вирусные антигены Тяпшя, Инко и Батаи, предоставил возможность определения наиболее вероятных переносчиков вирусов. По все»! видимости, на территории области вирус Тягиня экологически связан

с комарами рода Acdes: Ae.vexans, Ae.cantans, Ae.geniculatus, Ac.pulchiritatus, Ac.cataphvlla, а та¡слсс с комарами других родов: М. ricíiiardii и C.pipicns. Для вируса Инко установлена связь с комарами Ae.vexans, Ae.cantans, Ae.geniculatus и C.pipicns. Антиген вируса Батаи был выявлен в пробах, содержащих комаров видов Ae.vexans, C.pipicns, Ae.cantans, Ae.geniculatus, Ae.cataphylla и An.maculipennis (табл. 5). Тем не менее, полученные данные не отрицают возможной роли в циркуляции арбовирусов комаров других видов, имеющих распространение на территории Саратовской области. По литературным данным, преимущественная экологическая связь с комарами рода Aedes установлена для вирусов Серогруппы Калифорнийского энцефалита (СКЭ), а для вируса Батаи характерна ассоциация с комарами рода Anopheles, хотя в качестве второстепенных переносчиков указываются комары и других родов (Butenko A. et al., 1993). Нашн результаты не противоречат устоявшимся взглядам во этому вопросу, а лишь дополняют нх применительно к конкретной территории.

Согласно полученным данным, состав мелких млекопитающих, включенных в циркуляцию вирусов Тягиия, Инко и Батаи, довольно разнообразен 21 представлен видами, входящими в отряды Rodentia и Insectívora. В результате проведенных исследований выявлен 21,0 % проб от мелких млекопитающих, положительно реагировавших с референтными противовирусными антителами различной специфичности. Прк !ем наиболее часто положительные находки антигенов изучаемых арбовирусо» отмечались при исследовании суспензий органов млекопитающих из отряда Insectívora (от 20 % до 40 % исследуемых проб). Среди представителей отряда Rodentia в круг циркуляции вируса Тяпшя наиболее часто

Тзблица 4

Результаты ИФА суспензий печени мелких млекопитающих m различных районов Саратовской области на присутствие вирусов Тягиня, Инко н Сатан

Районы сбора чнсло проб Ш)ликаци:1 антигенов Тяшня Инко Батан

Лесостепная зона

Аткзрский р-н 100 16 13 10

Вольский р-п 14 3

Воскресенский {»-и 15 - -

Хпалынскин р-н 2 -

Степная зола

Балаковскш~> р-н 5 -

Краснопартнганский P-!I 2 -

К"рас(!ои->тск!(й р-н | 7 I 1 1

Лысогорсккй р-н j 2

Марксозский р-н 1 2 j-

< 1 Знгельсскнй р-н ; 18 j-

Таблица 5

Видовой состав комаров, обследованных методом ИФА на присутствие вирусов Тягиня, Инко и Батан ■

Районы <.иори .....— число Видовой состав и % со- шаикзюы шпнкашя шиааисы

проб отношение шгштюи Ткпшп шпкгаюз Нт» шгпаа»» Бяпя

Лссости таи

зона

Аткарский 25 С.р1ркп5 - 66,7 % Аел ехап* - 30,0 % Ас.ЕстсиЫи* - 3,3 % * 2

Польский 4 Аслсхапь -' 93,0"/. Лс.ехсгиссп$ - 7,0 % - - ■

Носкрссснскгий 7 Лслехап* -70,0% М. псЫагин - 14,8 % Ае.саШзгн - 6,0 "/• Ае.^еп1си1а(и5 - 5,2 % Ас.ри!с|ппиш^ 4,0 % 3

Хвалыискш! Ac.cataph.vlla -100,0 % - - -

Степная юна

Балакоискиб 14 Лелехяп» -80,0% Ае.сашао$ -20,0 У« - - -

Красиоиартт. 35 Аел схаги - 78,0 % Ае.сапгзп* -22,0% - р •

Красиокугский 15 At.vi.ians -75,0% Ас.сашапч - 20,0 % Ае.гхсгиссв! - 5,0 % 1 I 1

ЛысоюрскиЯ Ае-сашат -823 % С.р<р1гп5- 11,8% Лс.4'хсгисеи» - 5,9 % I 1

Марксоьскнй 12 Лсл'схапэ -55,0% Ае.сл5арЬу1!а - 30.5 % Ас.саШав» -14,5% I 1

Эшслисскнй 4 Аслчхзп» - 53,4 % М. гкЬиЫм - 333 V» Ап.гаисыИргппЬ - 73 % I 1

- отрицательный результат обследовании

включаются следуюшне вилы: полевая мышь, обыкновенная и рыжая полевки, лесная мышь. Оценка экспериментальных данных, полученных в ИФА на наличие вирусных антигенов, свидетельствует о том, что вирус Инко на территории области ассоциирован с грызунами рола Аро<]ети$: нолевой, лесной и желтогорлой мышами. Индикации антигена вируса Батаи наиболее часто происходила п материале, собранном от рыжеи полевки. Кроме этого отмечена связь вируса Батан с нолевой, лесной и жел-тогорлой мытами. Таким образом, представленная выше оценка фактов выявления вирусных антигенов п материале от млекопитающих позволяет рассматривать названные виды мелких животных, обитающих на территории Саратовской области, как возможные прнролные резервуары изучаемых буньяанрусов.

• 2. Материалы серологических исследований сывороток кропи крупного рогазого скота на антитела к вирусам Тягння, Инко и Катан

В снят с поставленной тадачей изучения активности и распространенна вирусов Тяпшя, Инко н Башк было обследовано методом конкурентного ИФА 288 сьшороток крови КРС, собранных в Саратовском и Энгельсом« рааинах Саратовской о илист». 36 сывороток (!2,3±0,2 %) содержали антитела к вирусу Тигння, 6 сиаороток (2,(Ш>,1 %) положительно реагировали с антигеном вируса Инка и и ЫЗ случаях (49Д±К).5 %) ('или зарегистрированы наложи тельные ответы с антигеном вируса Батан (гибл.6). И обшей сложности было выявлено 167 положительных проб (58,1 ¿ОД %). Оценка полученных результатов позволила определить различный уровень гуморального ответа в зависимости от сезона сбора сывороток.

Срсдние геометрические титры суммарных противовирусных антител к антигенам вирусов Тигиня, Инко и Батан в осенних пробах составили соответственно 1:64, 1:105 и 1:128. В апреле следующего года наблюдалось даукрг юе еншкенне титров суммарных антител к вирусам Тяпшя (3:32) и Батаи (1:64) при отсутствии существенных различий титра (1:160) единственной позитивной пробы к вирусу Инко. Преобладание значений осенних пиров суммарных антител закономерны и объясняются, по всей вероятности, предшествующим октябрю периодом максимальной активности и нифекциозиосги комаров, являющихся наиболее типичными переносчиками изучаемых арбовирусов (Аристова В.Л. и др., 1991). Более веские доказательства поздней летней и ранней осенней активности природных очагов циркуляции изучаемых арбовирусов" на территории Саратовской области представлены в экспериментах по выяснению чувствительности сывороток крови КРС к 2-меркаптоттаколу (2-МЕ). Как известно, этот под vu традиционно используется в иммунологии для дифференциации роли ¡<¿G и IgM в формировании специфической активности сывороток, поскольку пентамеры 1»М теряют способность взаимодействовать с антшеиачи после обработки 2-М Г., а мономеры h¿(¡ рез.чеишны к этому редуцирующему агенту. Обрабо»ка 2-МЕ сывороток крови, собранных осенью, привела к снижению средних геометрических Tin ров антител к вирусам Тшш:» м 2,7 paja (от 1:64 до 1:24), Инко в 10,0 pal (от 1:105 до 1:10,5) и Батзн в 12,8 (от 1:128 до 1:10). После обработки "весенних" (взятых в апреле) сывороток 2-МЕ средние геометрические титры аиштсл к вируса» Ткгни», Инко к Батаи уменьшились лишь в 1,6; 1,6 и 1,3 раза, соответственно. Эти данные позволяют сделать заключение о том, что специфическая активность аиштсл, выявляемая у КРС но окончании летнего «тона, определяете» в значительной степени наличием иммуноглобулинов класса М.

Отмеченное нами резкое снижение титров сывороток после обработки 2-МЕ свидетельствует о ведущей роли ТцМ в формировании сероиозитивности проб, собранных в октябре. В противоположность этому в позитивных сыворотках, полученных а апреле следующего года, отмечено преобладание 1gG, поскольку их титры после обработки 2-МЕ изменялись незначительно.

Высокие титры ^М в сыворотках кропи, собранных в октябре, а также существующие представления о динамике синтеза этих иммуноглобулинов и продолжительности их циркуляции в крови позволяют заключить, что наиболее вероятный период инфицирования обследованного поголовья КРС приходился на конец лега-начало осени, когда, согласно литературным данным, отмечается максимальная выделяемость вирусов из суспензий комаров (Аристова В.А., и др., 1991). В дальнейшем п течение зимнего периода (5-6 месяцев) титр закономерно снижался при одновременном возрастании уровня сывороточных антивирусных ^С, время циркуляции которых более продолжительно. Последнее, по-видимому, и определило ^б-позитивность сывороток, собранных весной. Полученные данные о сезонной зависимости показателей гуморального иммунитета КРС расширяют представления о региональной экологии арбовирусов. 1

Взятый за основу серологический метод, используемый в наиболее распространенном на сегодня ввде тшуноферментного анализа, позволил не только получить информацию о циркуляции изучаемых вирусов, но и рекомендовать разработанный в ходе научно-нсследовательской работы конкурентный вариант ИФА для скрининга сывороток крови КРС в качестве адекват». ^й замены РН в культуре клеток, считающейся референс-ме годом при исследовании специфических антител. О надежности предложенного

иа.м:: конкурентного варианта ИФА свидетельствуют результаты параллельного исследования сывороток крови КРС в РН и ИФА (табл.7). Коэффициент ассоциации га достигал при этом 0,84±0,03 (р<0,001).

3. Изучение гуморального иммунитета к вирусам Тяпшя, Инко и Батаи у жителей г. Саратова

В реакции нейтрализации с вирусами Тягиня, Инко и Батан были обследованы 337 сывороток крови практически здоровых жителей г. Саратова. Из них 43 (12,9±0Д %) обладали нейтрализующей активиостыо в отношении вируса Тягиня, 37 (11,4±0,5 %) нейтрализовали вирус Инко. Положительных результатов с вирусом Батан зарегистрировано не было (табл.8). Избирательной нейтрализующей активностью к вирусам Тягиня и Инко обладали, соответственно 19 (5,1±0,5 %) и 13 (3,7±0,1 %) проб. 24 сыворотки (7,7±0,6 %) нейтрализовали одновременно вирусы Тяпшя И Инко. Таким образом, 56 сывороток (1б,5±0,19 %) содержали вцрусоспе-цифические (к вирусам Тягиня и Инко) пли группоспецнфнческие антитела, выявляемые в РН с этими представителями СКЭ.

Последующее титрование перекрестно реагирующих сывороток показало, что в 47,3 % случаев (11 проб) определялось четырехкратное н более преобладание титров антител к вирусу Тягиня, в 21,1 % (5 проб) - к вирусу Инко, а в остальных 8 пробах (31,5 %) были отмечены практически равные титры антител к обоим вирусам. Такое разнообразие обнаружен-иых вариантов гуморального ответа соответствует данным литературы • (Галкина И.В. и др., 1992, Кузнецов А.А. и др., 1992, Ви(еико А, & а!., 1992). Показат ¡и гуморального иммунитета у мужчин (обследовано 176 человек)

Таблицаб

Результаты определения антител к вирусам Тягния, Инко и Батан в сыворотках кров» КРС з Саратовской области методом конкурентного ИФА

Вирусы Число обслед. сывороток Число положит, сывороток % положит, сывороток * М±ш

ТЯГИНЯ 288 36 12.3*0,2

ИНКО 288 6 2,0*0,1

БАТАИ 288 143 4»3±0,5

* Суммарный показатель позитивности исследованных сывороток на антитела к вирусам Тягння, Инко и Батан составил 5Я,1±0,2 % (167 проб)

Таблица 7

Риу.нлатм сравнительного обследования 80 сывороток крепи КРС на ан плела к вирусам Тягиня, Инко и Батан » РН и ИФА

Вирусы 1 » рн 1 1 1 ифа совпадения *

1 число положил'. ¡число по-'% положи г. число %

: положит. < ¡ложи г. 1

тягиня 10 ! 12.5 1 4 ! 11,3 9 94,7

инко ' 1 | 1 ■■'■! и" 1 ТТоо.о

катай Т~ й ; 61,3 Г 52 ! 65.0 48 1 95.1

*Ка »ффицнеи! ассоциации п» суммарных результатов РИ и ИФА с греми вирусами сооавляет 0,8-Ш),03 (р<0,001)

были незначительно выше (18,1 %), чем у женщин (14,9 %) (обследован 161 человек). Проведенная оценка иммуноструктуры населения г. Саратова в отношении вирусов 'Гягння и Инко дает основание предполагать наличие эпидемиологически активных очагов лихорадок Тягиня и Инко в этом регионе Поволжья.

4. Изучение роли эндемичных арбовирусов в патологии человека

Результаты наших и предшествующих исследовании но выявлению в Саратовской области инфнцированности комаров и мелких млекопитающих вирусами Тягиня, Инко и Батан, а также обнаружение высоких показателен гуморального иммунитета у крупного рогатого скота н люден (за исключением антител к вирусу Батан) явились основанием ял я постановки вопроса об этиологической роли этих эндемичных для Саратовской области арбовирусов в патологии человека. Сыворотки крови Сольных острыми сезонными лихорадочными заболеваниями, ненроинфск-циями, пневмонией и ОРЗ были обследованы методом ИФА на IgM- и IgG- антитела к: вирусам Тяшня, Инко и Каган. Из 72 обследованных сывороток крови 11 (153%) имели IgM н 7 (9,7 %) IgG-антнгела, реагирующие с антигеном вируса Тятмня, 7 проб (9,7%) оказались положительными на IgM- н lgG-антитела к вирусу Инко и 2 сыворотки (2,8 %) содержали IgM- н IgG-антнтела к вирусу Батаы. Пять сывороток (NN 6,8, 50, 51,67) содержали IgM- н IgG «аититс.та, выявляемые одновременно с вирусам Тяпшя и Инка. В сыворотках NN 4 и 20 обнаружены IgM- антитела к вирусу Тягиня, а также IgM- и JgG-антитела к вирус)- Инко.

В пробе N 9 присутствовали 1«М- и ]£С-антитела к антигену вируса Тяги-ия и 1йС -антитела к антигену вируса Инко. У больного N 11 обнаружены только 1дМ- антитела, реагирующие с вирусами Тягиня (титр сыворотки 1:160) и Инко (титр сыворотки 1:1280) при отсутствии иммуноглобулинов класса в. Первая проба сыворотки крови больного N 53 была отрицательна на ^М- и - антитела со всеми тремя антигенами, однако в повторной пробе, взятой через 4 дня (на 10 день болезин), обнаружены ['¿М- антитела к вирусу Тппшя. Сыворотка крови больного N 64 содержала (1:160) и 1«С- антитела (1:320) только к вирусу Тягиня. У больного N 67 были выявлены ^М- антитела (недиагностического титра) и антитела ко всем трем использованным антигенам, что может свидетельствовать о ретроспективном инфнциропяпик чтогс пациента вирусами Тяг:!::п, Инко и Батан. На анамнестический характер перенесенной инфекции Батаи указывают также результаты обследования сыворотки крови больного N 69, а заболевания, связанные с вирусами СКЭ, в прошлые годы очевидно перенесли больные NN 6,8,9,20,50,51, 64 н 67 (табл.9). Необходимо отметить, что' пациенты NN 67 и 69 (серопозитнвные к вирусу Батаи) являлись сельскими жителями и представляли одну профессиональную группу животноводов, что позволяет отнести их к контингенту повышенного риска заражения вирусом Батаи через укусы членистоногих.

Особого внимания заслуживают результаты обследования сывороток крови больных NN 11, 50 и 53. Характеристики титров противовирусных антител у этих пациентов соответствуют принятым диаг ностическим критериям острой инфекции, вызванной вирусами СКЭ: обнаружению ^М- в титре 1:800 и выше или четырехкратному нарастанию тнтра или

ТаблнцаВ

Результаты обследования сывороток крови здоровых жителей г.Саратова в реакции нейтрализации с вирусами Тяпшя, Инко и Батаи

Вирусы число обслед. сывороток ЧИСЛО ПОЛОЖИТ. сывороток % ПОЛОЖИТ, сывороток * М±га

ТЯГИНЯ 337 , 43 ■ 12,9 ±0,1

ИНКО 337 37 П,4±0,5

БАТАИ 337 -

* Общее количество сывороток, нейтрализующих вирусы Тяпшя и Инко (одновременно или избирательно), составило 56 (16,5±0,19 %)

Таблица 9

Титры сывороточных и/^С-антител к вирусам

Тягиня, Инко и Батаи у серопозитивных больных острыми

лихорадочными заболеваниям)! неясной этиологии .

но результатам ИФА

N пробы День шнпш крови Титр еигпгтел к вирусам

ТЯГИНЯ ' ' 1ШКО БАТАИ

1еМ 1йС ш 1йС

4 7 1:80 0 1:160 1:40 0 0

б 6 1:320 1:160 1:169 • 1:40 0 0

3 7 1:320 1:80 1:80 1:40 0 0

9 14 1:320 1:640 С 1:320 0 0

И 7 1:160" 0 1:1280 0 0 0

20 7 1:160 0 1:80 1:1280 0 0 '

50 7 1:80 : 1:320 1:1280 1:540 0 0

51 6 1:160 1:160 1:80 1:40 0 0

53* 10 1:80 0 0 0 0 0

64 3 1:160 1:320 0 0 0 0

67 4 1:80 1-160 1:160 1:640 1:160 1:1280

69 3 0 0 0 0 1:80 1:1280

*Первая сыворотка данного больного, взятая иа 6 день болезни, не реагировала.ни с одним из вирусных антигенов.

антител (Недялкова М.С., 1991). Исходя из этого, двое больных 11 н 50) могут оцениваться как инфицированные вирусом Инко, а больной N 53 - вирусом Тягнмя (табл.9).

Так, сыворотка крови больного "И" с клиническим диагнозом ОРЗ содержала ^М-а нтитма к вирусу Инко в титре 1:1230. При этом титр антител к вирусу Тягння у данного пациента составлял 1:160, а 1цС- антитела против этого возбудителя не определялись. При обследовании пробы крови, взятой у больного "50" с клиническим диагнозом "пневмония", 1йМ- антитела против вируса Инко выявлялись также в титре 1:1280, а титр антнгсл с антигеном вируса Тягиия составлял 1:80. Тнтры антнтел к этим вирусам сосгавили соответственно 1:6-10 и 1:."20. Учитывая известный фактор перекрестной антигенной связи между вирусами СКЭ, диагностическое значение в данных случаях имею г только титры 1е>1- аитнгел (1:1280) к вирусу Инко. Обследование первой пробы кропн, взятой на 6 день заболевания, у пациента N 53, госпитализированного с диагнозом "лихорадка нснснон этнологии", не выявило наличия в ней 1йМ- н 1дС- антител против вирусов Тягшш и Инко. По второй сыно-ротке кропи этого больного, взятой спустя 4 дня, был» обнаружены 1йМ- антитела нротна вирус« Тнпшя а тигре 1:80 при отсутствии гомологичных антител. Таким образом, имеются все основания говорить о том, что .вирус Тятина явился нркчнниым агентом заболевания нациста 53. ■ .

Таким образом, можно заитчмть, что пнероые я Саратовской области установлено значение вирусов Тлгиня ц Инко в этологии сеюнных лихорадочных заболеваний человека, характеры »уюшнхея острым началом, воспалительным» процессами верхних дыхательных путей и носоглотки, ывленничн бронхопневмонии, подъемом температуры до 37 - 33 °С. Их до-

ля составляет 4,4 % от числа обследованных нами случаев острых сезонных лихорадочных заболеваний неясной этиологии.

ВЫВОДЫ

1. В лесостепной и стенной зонах Саратовской облзсти обнаружена активная циркуляция вирусов Тягнн», Инко, Батаи. Возможно существование смешанных очагов этих инфекций.

2. Переносчиками вирусов Тягиня, Инко и Батан являются доминирующие виды комаров родов Aedcs и Culex.

3. В процесс циркуляции вирусов Тягиня, Инко и Батан вовлекаются фоновые вилы мелких млекопитающих из отрядов Rodentia и Insectívora.

4. Обнаружение достаточно высоких показателен гу морального иммунитета у местного населения н популяции крупного рогатого скота свидетельствует о выраженной эпизоотологнчсской н эпидемиологической напряженности природных очагов вирусов Тягиня, Инко и Батан в Саратовской области.

5. Установлена роль вирусов Тягиня м Инко в этнологии острых сезонных лихорадочных заболеваний человека.

6. Конкурентный вариант ИФА может успешно использоваться для исследования сывороток крови крупного рогатого скота на наличие аитн-тел к антигенам вирусов Тягиня, Инко и Батаи.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Щербакова С.А., Куляш Г,Ю„ Ляпнн М.Н„ Головко Е.М. Двукратное использование некоторых компонентов тест-систем при серологичсс-

ких исследованиях // Актуальн. вопр. соврем, медицины. - Тез. докл.З-Межд. конф, студентов п молодых ученых. - Бишкек, 1996. - С.40.

2. Ляпин М.Н., Щербакова С.А., Ляпина Е.П., Фомичева O.A., Головко Е.М., Миронова Н.И., Малюкова Т.А., Куляш Г.Ю., Ермаков U.M. Серологическая диагностика заболеваний, вызываемых вирусами Тягиня и Инко // Гомеостаз и ннфекц. процесс. - Тез. докл. менад, конф. Акад. Естествозн. - Саратов, 1996. - Часть I. С.160.

3. Щербакова С.А., Куляш Г.Ю., Ляпин М.Н., Ермаков Н.М., Головко Е.М., Малюкова Т.А., Вышемнрскнн О.И., Бутенко A.M. Изучение специфических маркеров цирзеуляцин вирусов Тягиня, Инко и Батаи в Саратовской области //Соврем, аспекты эпидемиол., диагнос. и профнлак. Природно-очаговых инфекций. - Тез. докл. юбнл. научно-практнч. конф. Омск, 1996.- С.128-129.

4. Ляпин М.Н., Щербакова С.А., Куляш Г.Ю., Головко Е.М., Малюкова Т.А., Вышемнрскнй О.И., Бутенко A.M. Определение антител к вирусам Тягиня, Инко и Батаи методом конкурентного ИФА // Деп. В ВИНИТИ, N2590.-В. 96.

5. Щербакова С.А., Куляш Г.Ю., Ляпнн М.Н., Головко Е.М., Ермаков Н.М., Малюкова Т.А., Вышемирский О.И., Бутенко А.М. Изучение сывороток крови крупного рогатого скота на наличие антител к вирусам Тягиня, Инко и Батан па территории Саратовской области // Деп. в ВИНИТИ 11.11.96. - N 33271. - В.96.

6. Ляпин М.Н., Ермаков Н.М., Щербакова С.А., Малюкова Т.А., Куляш Г.Ю., Головко EJM. Выявление антигенов арбовирусов в комарах, отловленных на территории Саратовской области //Эколого-зпидемнол. надзор за природио-очаговыми инфекциями в Северном Прнкаспни. - Тез. докл. конф. Астрахань, 1996.-С. 201-202.

7. Ляпии М.Н., Ермаков М.Н., Малюкова Т.А., Головко Е.М., Куляш Г.Ю., Андреева Л.Б., Алексеев Е.В., Сиухнн Б.И., Щербакова С.А. Прогнозирование и выявление циркуляции арбовирусов в Саратовской области // Вопросы рнккетсиологни н вирусологии. - Сб. научн. тр. - Астрахань-Москва, 1996. - С. 88-93.

Автор выражает глубокую благодарность доктору биологических наук, профессору А.М.Бутенко и кандидату медицинских наук М.НЛяпнну за предложенную тему и научное руководство при проведении исследований. .

Приношу особую благодарность за оказанную консультативно помощь и продуктивное сотрудничество старшему научному сотруднику РосНИПЧИ "Микроб" ГЛО.Куляшу.

Выражаю благодарность научному сотруднику НИИ вирусологии им. Д.И.Изановского О.И.ВыЩсмирскому за оказанную помощь в работе.

Выражаю глубокую благодарность своим основным соавторам, в сотрудничестве с которыми была выполнена экспериментальная часть работы, а также собран полевой и клинический материал для исследований по теме диссертации научным сотрудникам РосНИПЧИ "Микроб" Е.М.Головко, Т.А.Мали>ковой, Н.М.Ермакову, Л.Б.Андреевой.

Автор благодарит сотрудников лаборатории вирусологии Т.А.Алферову, М.Н.Исляеву, Ц.М-Самсонову, Э.Ю.Селезневу, А.Ф.Рудяк за добросовестную и квалифицированную помощь.

Выражаю искреннюю признательность зав. лабораторией гибридом доктору медицинских наук 3Л. Девдариани и зав. лабораторией диагностики инфекционных болезней доктору медицинских наук А.Н. Кулнчснко за предоставленную возможна л ь завершения данной работы.

Автор выражает искреннюю благодарность Н.НЛСошшвой и И.В. Кон-нову за проявленное участие и товарищескую поддержку.

Выражаю глубокую благодарность Д.И. Головко, К Л. Головко и В.В.Коныш)иу за помощь в оформлении и печатании диссертации.

ит г.'