Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Эндотелио- и кардиопротективные эффекты препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном

На правах рукописи

к л

Бобраков Константин Евгеньевич

ЭНДОТЕЛИО- И КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ ПРЕПАРАТА МЕКСИПРИМ В КОМБИНАЦИИ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 б ЛЕК 2010

Старая Купавна - 2010

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Покровская Татьяна Григорьевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Митрохин Николай Михайлович доктор медицинских наук, профессор Демидова Марина Александровна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

с"") Зсз

Защита состоится «**•- \ » 2010 г. в

/о-

часов

на заседании диссертационного соЦта Д 21||004.01 при ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (ОАО ВНЦ БАВ) (142450, Московская область, г. Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук,

профессор

Корольченко Л.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время среди всех контуров регуляции сосудистого тонуса именно эндотелий является объектом пристального изучения. Эндотелий регулирует вазомоторику, влияет на сосудистую проницаемость и контролирует рост гладкомышечных клеток сосудов. Под дисфункцией эндотелия понимают - дисбаланс между медиаторами, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов.

Многие традиционные факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний (артериальная гипертония, гиперлипидемия, инсулинорезистентность, сахарный диабет, курение) сопровождаются нарушением нормальной функции эндо-телиальных клеток. Главным механизмом эндотелиальной дисфункции является снижение биодоступности N0 при одновременном повышении уровня супероксид-аниона вследствие увеличения окислительной активности НАДФ. Избыточное содержание свободных радикалов в сосудистой стенке приводит к окислению N0 до нитрита, нитрата и пероксинитрита, что ведет к дальнейшему образованию свободных радикалов и активации цитокинов.

На сегодняшний день в коррекции эндотелиальной дисфункции перспективным считают использование препаратов, оптимизирующих клеточный энергообмен, уменьшающих содержание липопероксидов в сосудистой стенке и крови и увеличивающих биодоступность N0 за счет «улавливания» свободных радикалов кислорода (Голиков А.П. и соавт., 2003).

Как показывает анализ литературных данных, в настоящее время не существует целенаправленных способов коррекции дисфункции эндотелия. Но вместе с тем обращает на себя внимание информация, в которой, наряду с доказанной эндотелиальной активностью традиционных сердечно-сосудистых средств (ингибиторов АПФ, блокаторов АТ1-рецепторов, дигидропиридиновых антагонистов кальция, статинов, В-блокаторов), указывается на возможность фармакологической коррекции данной патологии препаратами, обладающими антиоксидантной активностью (Маколкин Б.И., Подзолков В.И., Бранько В.В., 2004).

Исходя из вышеизложенного, существует необходимость исследования эндотелиотропных свойств производного 3-оксипиридина, нового препарата Мексиприм (2-этил-б-метил-З-оксипиридина сукцинат) производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в комбинации с представителями группы иАПФ и блокаторов АТ1 -рецепторов.

Номер государственной регистрации темы - 0120.0 805726.

Цель исследования: провести оценку фармакологической коррекции метаболического пути Ь-аргинин/МО дополнительным введением препарата Мексиприм и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном, при экспериментальной модели дефицита оксида азота.

Задачи исследования:

1. Изучить эндотелиопротективную активность аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол и Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла, блокатора АТ1 -рецепторов лозартана калия при Ь^АМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

2. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при L-NAME-индуцированной модели дефицита N0.

3. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора ATI-рецепторов лозартана калия при L-NAME- индуцированной модели дефицита N0.

4. Проведение интегрального векторного анализа для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности, нитроксидерги-ческой системы, показателей сократимости и морфометрии миокарда с последующим расчётом вероятностного коэффициента аддиции препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном при L-NAME-индуцированной модели дефицита NO.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что препарат Мексиприм 60 мг/кг оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0 при однократном внутримышечном введении в течение 7 суток. Эналаприл 0,5 мг/кг, лозартан калия 6 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Соче-танное использование препарата Мексиприм с вышеперечисленными представителями основных групп антигипертензивных препаратов показало аддитивное эндотелиопротективное действие.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность сочетанного применения препарата Мексиприм с ингибитором АПФ эналаприлом, блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет улучшать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазоди-латация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилатация) с уменьшением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), который в 5 раз увеличивается при L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total N0, экспрессию эндотелиальной NO-синтазы), а также добиться положительной динамики морфофункциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр кардиомиоцитов и прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением, диаметр кардиомиоцитов и адренореактивности).

Проведены целенаправленные доклинические исследования эндотелио-протективных эффектов препарата Мексиприм при эндотелиальной дисфункции («Протокол доклинического исследования препарата «Мексиприм» раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл, производства ОАО «Фармстандарт - УфаВИТА» в сравнении с препаратом «Мексидол» раствор для инъекций, производства ООО МЦ «Эллара»),

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и эндотелиопротек-тивной активности лозартана калия «Блоктран», эналаприла малеата «Рениприл

производства ОАО «Фармстапдарт-Лексредства», включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01 -2000).

Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения анти-гипертензивной и эндотелиопротективной активности препарата Мексиприм производства ОАО «Фармстапдарт-Лексредства» включены в состав регистрационного досье, поданного на регистрацию в МЗ РФ (регистрационный номер препарата Мексиприм Р № 00916-02 от 10.09.2008 г., зарегистрирован на ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм»), Результаты работы используются в лекционных курсах кафедры фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета, кафедры фарм-химии, фармакогнозии и фармакологии Белгородского государственного университета.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и международных конференциях молодых ученых КГМУ в 2006 -2010 гг., XIV - XVII Национальных конгрессах «Человек и лекарство», I Национальном конгрессе терапевтов, Vil съезде аллергологов и иммунологов СНГ. Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии, анатомии, гистологии, внутренних болезней № 1, 2 внутренних болезней ФПО, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах, рекомендуемых ВАК для диссертационных работ.

Положения, выносимые на защиту

1. Аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутримышечно оказывают эндотелио-протективное действие на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия проявляют эндотелиопротективные эффекты на выбранной модели патологии.

' 2. Сочетанное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с энала-прилом (0,5 мг/кг) оказывает выраженное эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом достигаются целевые цифры АД, в отличие от монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата Мексиприм с эналаприлом увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6,0 мг/кг) оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO, выражающееся в снижении КЭД, положительной динамики результатов нагрузочных проб и морфологических исследований, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не отмечается предотвращение развития гипертензии.

4. Мексиприм потенцирует эндотелиопротективную активность энала-прила и лозартана, и по расчётному значению вероятностного коэффициента адциции комбинация препарата Мексиприм с эналаприлом является предпочтительнее комбинация препарата Мексиприм с лозартаном в комплексной эндо-телио- и кардиопротекции.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 150 источников, из них 79 отечественных и 71 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, содержит таблиц - 18, рисунков - 42, схем - 2.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Моделирование L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и оценка эидотелийзависимых и эндотелийиезависимых сосудистых реакций.

Опыты проводились на белых крысах-самцах линии Wistar массой 250300 г. Животные были разделены на 8 групп (п=10). N-numpo-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводился ежедневно один раз в сутки, внутрибрюшинно, в дозе 25 мг/кг. На 8-й день от начала эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 250 мг/кг) вводили катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей гемодинамики, болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) - измеряли непрерывно посредством датчика и компьютерной программы Bioshell. Функциональные пробы: внутривенное введение ацетилхолина (40 мкг/кг) и нитропруссида натрия (30 мкг/кг) (Покровский М.В. и соавт., 2005, 2006,2007).

Исследование сократимости миокарда после моделирования патологии проводили у наркотизированных крыс, находящихся на управляемом дыхании. Полость левого желудочка зондировали иглой через верхушку сердца и посредством датчика P23ID Gould, США, АЦП L-154 и компьютерной программы Bioshell регистрировали показатели кардиогемодинамики (ле-вожелудочковое давление (ЛЖД), максимальную скорость сокращения (+dp/dt шах), максимальную скорость расслабления (-dp/dt шах), частоту сердечных сокращений (ЧСС).

Для оценки функциональных возможностей миокарда у животных проводили нагрузочные пробы в представленной последовательности:

1. Проба на адренореактивность - внутривенное одномоментное введение раствора адреналина гидрохлорида МО" моль/л, из расчёта 0,1 мл па 100 г (Меерсон Ф.З., 1980).

2. Нагрузка сопротивлением - пережатие восходящей аорты на 30 сек (Меерсон Ф.З., 1980).

3. 3-минутная гипоксия (Пашин E.H., 1993).

Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции. Использована модификация метода определения стабильных метаболитов NO, позволяющая проводить одноэтапное количественное определение суммарных нитратов и нитритов. Принцип метода в одновременном восстановлении нитратов в нитри-

ты в присутствии хлористого ванадия и реакции диазотирования с последующим развитием окраски, интенсивность которой определяли спектрофотомет-рически при длине волны 540 нм. Чувствительность метода на приборе Labsystems Multiskan МСС/340 составляет 1,7 мкМ. Для колориметрического определения нитрит-иона использовали реактив Грисса, состоящий из равных частей раствора I (0,05% раствор N-нафтилэтилендиамина в воде) и раствора II (1% раствор сульфаниламида в 30% уксусной кислоте). Для приготовления раствора хлористого ванадия 400 мг VCI3 растворяли в 50 мл IN НС1.

Суммарную концентрацию нитратов и нитритов, NOx определяли колориметрическим методом по развитию окраски в реакции диазотирования нитритом сульфаниламида, входящим в состав реактива Грисса. Для построения калибровочной кривой использовали 1М раствор NaN02 в воде, который хранили при температуре -20°С; перед употреблением его разводили в 1000 раз и готовили серию разведений для построения кривой.

Для морфологического подтверждения развития моделируемых патологических процессов и для комплексной оценки эффективности препаратов проведено гистологическое исследование сердца (во всех сериях эксперимента, почек, надпочечников, участков брюшной и сонной артерий). Материал фиксирован в 10% формалине с последующей заливкой в парафин. Использованы окраски гематоксилином Pero и эозином для выявления ранних повреждений кар-диомиоцитов, по Ван Гизон, ставилась ШИК-реакция. При морфометрии сердца использован метод раздельного взвешивания миокарда с определением индексов, а также определение диаметра кардиомиоцитов по методике Г.Г. Ав-тандилова. Определялись абсолютная и относительная масса надпочечников, в почках оценивался диаметр почечных телец и их клубочков. Определялось соотношение интима/медиа в участках сонной артерии и брюшной аорты.

Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардиопро-тективных эффектов исследуемых препаратов. Для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности, сократимости миокарда, нитроксидергической системы и морфологических характеристик миокарда на основе интегрального анализа всего спектра проводимых исследований, мы представили значение каждого показателя в виде вектора. Все вектора были построены на плоскости в прямоугольной декартовой системе координат Оху, полюсом для всех векторов было выбрано начало прямоугольной декартовой системы координат, полярной осью служило положительное направление оси Оу, длина вектора равнялась величине шести показателей комплексного морфофункционального исследования в изучаемых группах. Направление каждого вектора задавалось жестко, 1-й вектор - САД (систолическое артериальное давление) совпадал с осью Оу, последующие вектора располагались по часовой стрелке, угол между соседними векторами составлял 60°. Следующими векторами соответственно обозначены показатели - ДАД - диастолическое артериальное давление; КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; КМЦ -диаметр кардиомиоцитов - нагрузка объемом; NOx - суммарное количество нитратов и нитритов (Total NO); ПА 5-25 - нагрузка сопротивлением (отноше-

ние прироста сократимости миокарда на 5-й сек пережатия аорты к 25-й сек пережатия). Координаты вектора каждой нагрузочной пробы изначально выражались как полярные (р0, ф0), где р0 - полярный радиус, ср0 - полярный угол, переход от полярных координат к прямоугольным (х0, у0) осуществлялся по формулам: Х0 = ро COS ф0, у0 = ро sin ф0.

Площадь векторной диаграммы рассчитывали по формуле:

где в - площадь векторной диаграммы, х, и у;— прямоугольные координаты соответствующих векторов, п - количество векторов.

Различия между соответствующими функциональными, биохимическими и морфологическими показателями при проведении исследований между изучаемыми группами интактных, контрольных и опытных групп животных отражаются площадью диаграмм, образованной соединением конечных точек векторов вышеуказанных показателей.

Обоснование доз и дизайн эксперимента. В работе целенаправленно использованы минимальные из терапевтических доз исследуемых аитигипертен-зивных препаратов с доказанной эндотелиопротективной активностью энала-прила и лозартана, пересчитанные с учётом соотношения поверхности тела биологического объекта к его массе по общепринятой формуле межвидового переноса доз, с использованием коэффициентов пересчёта в зависимости от массы тела по Рге!ге1сЬ М. а1. и Улановой И.П. и др.

Ингибитор АПФ энапаприла малеат («Рениприл», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), блокатор АТ-1 рецепторов к ангиотензину II ло-зартан калия («Блоктран», производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства»), использовали в дозах 0,5 мг/кг, 6 мг/кг соответственно и вводили внутрижелу-дочно 1 раз в сутки на фоне введения Ь-ЫАМЕ. Выбор доз соответствует данным доступной литературы и выявляет эффективное гипотензивное и кардио-протективное действие препаратов в экспериментах, ранее проведённых в нашей лаборатории.

Эндотелиотропная активность препаратов с антиоксидантными свойствами аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол (производства ООО МЦ «Эл-лара») и Мексиприм (производства ОАО «Фармстандарт») исследованы в дозе 60 мг/кг, что соответствует максимальной разрешенной терапевтической суточной дозе. Препараты вводили один раз в сутки внутрибрюшинно в течение 7 дней через 30 минут после введения Ь-ЫАМЕ.

При комбинированном использовании препарата Мексиприм с эналапри-лом и лозартаном использовались те же дозы, пути введения и продолжительность применения.

Достоверность изменений параметров, как абсолютных, так и в процентах от исходного уровня, определяли разностным методом вариационной статистики с нахождением средних значений сдвигов (М), средней арифметической (+т) и вероятности возможной ошибки (Р) по таблицам Стыодента. Раз-

личия оценивали как достоверные, начиная с р<0,05. Для расчётов использовали программу для статистического анализа Microsoft Excel 7.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1.1. Динамика функциональных, биохимических и морфологических показателей при моделировании L-NAME- индуцированного дефицита NO.

Показатели гемодинамики сосудистых функциональных проб на эндоте-лийзависимое и эндотелийнезависимое расслабление существенно отличаются в группах с моделированием дефицита оксида азота введением блокатора N0-синтазы - L-NAME и проведением билатеральной овариэктомии.

На рисунке ] (А, Б, В, Г) на примере L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота представлены сверху вниз на каждом фрагменте кривые АД систолического, диастолического и ЧСС. Треугольник над кривой восстановления артериального давления после окончания брадикардитического компонента на фоне введения ацетилхолина и после прохождения точки плато на фоне введения нитропруссида принимались нами как площади эндотелийзависимой (ЭЗВД) и эндотелийнезависимой вазодилатации (ЭНВД).

на эндотелийзависимую (внутривенное введение ацетилхолина 40 мкг\кг) и эн-дотелийнезависимую вазодилятацию (внутривенное введение нитропруссида натрия 30 мкг/кг) у интактных животных (А, В) и животных с Ь-ЫАМЕ-иидуцированным дефицитом оксида азота (Б, Г) соответственно.

Примечание. Здесь и везде далее САД - систолическое артериальное давление (мм рт.ст.); ДАД - диастолическое артериальное давление (мм рт.ст.); ЧСС - частота сердечных сокращений (уд. мин).

Отношение площади ЭНВД к ЭЗВД по показателю среднего артериального давления математически представлено нами в виде коэффициента эндо-телиальной дисфункции (КЭД). В наших экспериментах КЭД в группе интакт-ных животных составил 1,1±0,09 (усл. ед.), при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота - в 5 раз больше, его значение составило 5,4±0,08. Зарегистрировано повышение цифр САД и ДАД - до 190,3±6,7/145,0±3,9 соответственно. L-NAME-индуцированный дефицит оксида азота и привел к увеличению абсолютных значений ЛЖД в пробе на адренореактивность и снижению миокардиалъного резерва в пробе с нагрузкой сопротивлением.

У интактных самцов ЛЖД к 25-й секунде пережатия аорты снижалось до 83,6±7,7%, а у животных с L-NAME-индуцированной патологией - до 66,0±5,5%.

Так, концентрация нитрит-ионов (NOx) у животных, получавших L-N AME, составила 61,2 ±3,6, тогда как у интактных 3 14,1 ±4,1 мкМоль.

Экспрессия эндотелиальной NO-синтазы (eNOS) сывороткой интактных животных составила 72,9±3,8, тогда как у животных, получающих L-NAME, 21,4±4,7%.

Подтверждением функционально-биохимических показателей, отражающих развитие L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции, явились результаты морфологических исследований (рис. 2). На представленных гистологических препаратах [(а) - интактные миокардиоциты, (б) - кардиомиоциты животных на 7-е сутки с L-NAME-индуцированной патологией] видно, что площадь поперечного сечения резко увеличена при сохранённом диаметре ядер (при одном увеличении). Морфометрические исследования показали, что у интактных животных поперечное сечение составило 9,1±],1, а у животных, поучавших L-NAME, - 18,4±1,1 мкМ.

Вышеизложенное свидетельствует о том, что длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение L-NAME в дозе 25 мг/кг вызывает у лабораторных животных комплекс функциональных, биохимических и морфологических изменений, связанных с развитием дефицита N0, вследствие блокады NO-синтазы.

Шм^Шшшт

Рис. 2. Морфология миокарда у интактных и опытных животных:

а) гистологическая картина миокарда у интактных крыс на поперечном срезе;

б) гипертрофия кардиомиоцитов и их ядер у крысы с артериальной гипертензи-ей в модели с L-NAME на поперечном срезе. Окраска гематоксилином и эозином. Рис. а, б - в 440-кратном увеличении.

В частности, на 8-е сутки развивалась выраженная гипертензия и эндоте-лиальная дисфункция, гиперреактивность на адреналовую пробу, снижалась сократительная способность миокарда при пробе на нагрузку сопротивлением, резко уменьшался уровень нитрит-ионов и экспрессия еМ08. Гистологически обнаруживалась гипертрофия миокарда и мышечного слоя сосудистой стенки. Описанный симптомокомплекс клинически можно экстраполировать на злокачественную гипертензию.

2. Изучение эндотелиопротективной активности препарата Мекси-прим в сравнении с препаратом Мексидол и аскорбиновой кислотой при Ь-КАМЕ-нндуцированной модели дефицита N0.

Исследуемые антиоксиданты Мексиприм 60 мг/кг, Мексидол 60 мг/кг, аскорбиновую кислоту 60 мг/кг вводили внутрибрюшинно однократно через 60 минут после введения Ь-ИАМЕ в течение 7 суток.

По протоколу на восьмые сутки наркотизированное животное брали в эксперимент.

Влияние препаратов Мексиприм, Мексидол и аскорбиновой кислоты функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 представлены на рис. 3.

Антиоксиданты Мексиприм 60 мг/кг, Мексидол 60 мг/кг и аскорбиновая кислота 60 мг/кг снижали КЭД до 1,4±0,1 и 1,9±0,2, 2,1±0,2 соответственно, тогда как в группе животных, получавших Ь-ЫАМЕ, он составлял 5,4±0,6.

Антиоксидант Мексиприм 60 мг/кг проявлял выраженное эндотелиопро-тективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцировапного дефицита N0, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и приближении значений коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД к уровню интактных животных.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адренореактивности.

Мексидол 60 мг/кг также проявил эндотелио-и кардиопротекгивную активность, а аскорбиновая кислота 60 мг/кг уступала препарату Мексиприм 60 мг/кг.

Все препараты в изученных дозах не достигали заданных значений артериального давления и, следовательно, не могут рассматриваться в виде монотерапии на модели с Ь-ЫАМЕ-индуцированной артериальной гипертензией.

В связи с вышеизложенным в последующих исследованиях нами изучено влияние сочетанного использования эналаприла с препаратом Мексиприм и ло-зартана с препаратом Мексиприм на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0.

АД 1

КЖ-

ш

12 3 4 5

АДр

НС

— -А — 1^АМЕ+мексидол 60 мг/кг

_— -О" - Ь-Ь'АМЕ+аскорбиноиая кислота 60 мг/кг

12 3 4 5

10"

15" 20"

25"

N0*

еЯОв

Рис. 3. Влияние использования препаратов Мексиприм, Мексидол и аскорбиновой кислоты на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0. * - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой ин-тактных животных.

1 - интактные; 2 - Ь-ЫАМЕ; 3 - Ь-ЫАМЕ+ Мексиприм 60 мг/кг; 4 - Ь-Т\'АМЕ+ Мексидол 60 мг/кг; 5 - Ь-ЫАМЕ + аскорбиновая кислота 60 мг/кг.

дкмц

3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при ЫЧАМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

Исследуемые препараты Мексиприм 60 мг/кг вводили внутрибрюшинно, эналаприл 0,5 мг/кг вводили перорально с помощью зонда, аналогично вводилась комбинация Мексиприм (60 мг/кг) с эналаприлом (0,5 мг/кг) однократно за 30 мин до Ь^АМЕ в течение 7 суток.

Обнаружено, что сочетанное использование препарата Мексиприм 60 мг/кг и эналаприла 0,5 мг/кг, в отличие от монотерапии, приводило артериальное давление к заданным значениям при моделировании Ь-КАМЕ-индуцированной АГ, которые достоверно не отличались от показателей у ин-тактных животных (рис. 4АД).

Сочетанное использование препарата Мексиприм 60 мг/кг и эналаприла 0,5 мг/кг оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь^АМЕ-индуцированного дефицита N0. При этом КЭД составил 2,5±0,3. Обращает на себя внимание, что это лучше чем при монотерапии эналаприлом (3,3+0,3) (рис. 4кэД).

Полученные данные свидетельствуют об эффективности сочетанного использования препарата Мексиприм с эналаприлом для коррекции Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологии, что позволяло достичь заданных цифр АД при эффективном снижении КЭД.

Эналаприл, а также сочетанное использование эналаприла и препарата Мексиприм предотвращало повышение адренореактивности у животных с моделированием Ь-КАМЕ-индуцированной патологии, данные достоверно не отличались от таковых у интактных животных. Так, в группе Ь-КАМЕ + Мексиприм + эналаприл ЛДЖ составило 214,5±6,6, Ь-ЫАМЕ - 247,3±4,8, а у интактных 199,2±8,3 мм рт.ст. (рис. 4АДр).

При проведении пробы на нагрузку сопротивлением (рис. 5Нс) сочетанное использование препарата Мексиприм и эналаприла также оказалось предпочтительнее монотерапии. Значение ЛЖД к 25-й секунде пережатия восходящей аорты в группе с моделированием Ь-ХАМЕ-индуцированного дефицита N0 составило 66,0% по отношению к 5-й секунде, тогда как у интактных животных 83,6%, при монотерапии эналаприлом - 82,7%, а в группе Ь-ЫАМЕ + Мексиприм + эналаприл - 87,7%. Последнее указывает на сохранение значительного сократительного резерва у животных, леченных комбинацией препарата Мексиприм с эналаприлом.

На модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита азота комбинированное использование препарата Мексиприм с эналаприлом предотвращало падение содержания концентрации нитрит-ионов ЫОх и увеличивало экспрессию эндо-телиальной ТчЮ-синтазы (е-М08) (рис. 4тх, 4с.\о«)-

Использование комбинированного -применения препарата Мексиприм с эналаприлом эффективно предотвращало развитие гипертрофиии кардиомио-цитов на фоне Ь-НАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота (рис. 4ДКмц)-Монотерапии препаратом Мексиприм 60 мг/кг и эналаприлом 0,5 мг/кг проявляли протективное действие в меньшей степени (рис. 4дкмц)-

100 90 80 70 60

-Ж- - Интактнй —«— Ь-КАМЕ

- --Ъ-КАМЕ+эналаприл

-■А—' Ь^АМЕ-гэналаприл+Мексипр:

90,1%*

86,8%* 84,3%*

83,б%* 66,0%**

20" 25"

Рис. 4, Влияние комбинированного использования препарата Мексиприм 60 мг/кг и эналаприла 0,5 мг/кг па функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0. * - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-ЫАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой ин-гактных животных.

1 - интактные; 2 - Ь-ИАМЕ; 3 - Ь-ЫАМЕ+ Мексиприм 60 мг/кг; 4 - Ь-ЫАМЕ+ энала-прил 0,5 мг/кг; 5 - Ь-ЫАМЕ+ Мексиприм 60+эналаприл 0,5.

е!Ч08

дкмц

Таким образом, комбинацию препарата Мексиприм с эналаприлом на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 следует рассматривать как оправданную и рекомендовать к широкому клиническому изучению.

4. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора АТ1-рецепторов лозартана калия при Ь^АМЕ-индуцнрованноп модели дефицита N0.

Исследуемые препараты Мексиприм 60 мг/кг вводили внутрибрюшинно, лозартан калия 6 мг/кг вводили перорапьно с помощью зонда, аналогично вводилась комбинация препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6 мг/кг) однократно за 30 мин до Ь-ЫАМЕ в течение 7 суток.

Обнаружено, что сочетанное использование препарата Мексиприм 60 мг/кг с лозартаном калия 6 мг/кг, в отличие от монотерапии лозартаном, приводило к снижению артериального давления при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированной АГ, которое достоверно отличалось от показателей у животных, получавших Ь-ЫАМЕ. В то же время целевой уровень АД, как при монотерапии, так и комбинированной, не достигнут (рис. 5 ад).

Сочетанное использование препарата Мексиприм 60 мг/кг и лозартана калия 6,0 мг/кг оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0. При этом КЭД составил 1,6±0,1.

Обращает на себя внимание, что это лучше, чем при монотерапии лозартаном - 2,5±0,3 (рис. 5кэд)-

Сочетанное использование препарата Мексиприм и лозартана калия полностью предотвращало повышение адренореактивности у животных с моделированием Ь-ЫАМЕ-индуцированной патологии. Так, в группе Ь-ЫАМЕ + Мексиприм + лозартан ЛДЖ составило 194,6±11,4, Ь-ЫАМЕ - 247,3±4,8, а у интакт-ных 199,2+8,3 мм рт.ст (рис. 5АДр).

При проведении пробы на нагрузку сопротивлением (рис. 5цс) сочетанное использование препарата Мексиприм и лозартана калия также оказалось предпочтительнее монотерапии. Значение ЛЖД к 25-й секунде пережатия восходящей аорты в группе с моделированием Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0 составило 66,0% по отношению к 5-й секунде, тогда как у интактных животных 83,6%, а в группе Ь-ЫАМЕ + Мексиприм + лозартан - 89,1%. Последнее указывает на сохранение значительного сократительного резерва у животных, леченных комбинацией препарата Мексиприм с лозартаном.

Мексиприм сам значительно увеличивал концентрацию нитрит-ионов ЫОх, тогда как лозартан не оказывал существенного влияния. Последнее позволяет предполагать, что именно Мексиприм оказывает влияние на предотвращение падения концентрации нитрит-ионов ЫОх в плазме лабораторных животных в условиях Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита ЫО (рис. 5ко»).

Комбинированное использование препарата Мексиприм 60 мг/кг, лозартана калия 6,0 мг/кг вызывает статистически значимое увеличение экспрессии е-ЫОБ (рис. 5е[чоз)' При этом лозартан калия и Мексиприм в виде монотерапии оказывали гораздо более слабое влияние на исследуемый показатель. Комбинированное применение препарата Мексиприм с лозартаном калия предотвращало увеличение поперечного диаметра кардиомиоцитов (рис. бдкмц). Монотерапия

препаратом Мексиприм 60 мг/кг также оказалась эффективной, лозартан калия 6,0 мг/кг проявлял протективное действие в меньшей степени (рис. 5дКМц).

Рис. 5. Влияние комбинированного использования препарата Мексиприм 60 мг/кг и эналаприла 0,5 мг/кг на функциональные, биохимические и морфологические показатели при моделировании Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0. * - р < 0,05 в сравнении с группой Ь-МАМЕ животных,

** - р < 0,05 в сравнении с группой ин-тактных животных.

1 - интактные; 2 - Ь-ЫАМЕ; 3 - Ь-ЫАМЕ+ Мексиприм 60 мг/кг; 4 - Ь-МАМЕ+ лозартан 6,0 мг/кг; 5 - Ы\"АМЕ+ Мексиприм 60 + лозартан 6,0.________

дкмц

89,1%* 86,8%« 8.1,6%"

■ • "Инпкпше -е-ШЛМЕ

—А-~1.^ЛМВмеи:Н!1рим 60 мгкг —♦ -Ь-МАМЕ+-|ЮМ|шн бмг/кг —• ■ бмг/кг^мигснприм 6Й иг/Я'

_е!\'08

Таким образом, комбинацию препарата Мексиприм с лозартаном калия на модели Ь-ИАМЕ-индуцированного дефицита N0 следует рассматривать как оправданную, что позволяет за счет патогенетически обоснованного воздействия на нитроергическую и ренин-ангиотензиновую системы рекомендовать к широкому клиническому изучению.

5. Интегральный векторный анализ гемодипамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардиопротективной активности препарата Мексиприм и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном.

Сравнивая площади векторных диаграмм, мы получили выраженные различия между группой интактных животных и животных с моделированием Ь-НАМЕ-индуцировашюго дефицита оксида азота - в 2 раза (рис. 7).

Препарат Мексиприм в комбинациях с эналаприлом и лозартаном усиливает интегральную протективную активность в отношении Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота, что выражается в большем приближении значения площади к группе интактных животных, что представлено на рис. 6. Наибольшее относительно монотерапии снижение площади происходило в комбинации препарата Мексиприм с лозартаном.

При последующем рассмотрении мы рассчитали дельту аддиции

(Дадаг ^препарат ~ $Мексиприм+препарат). ПРИ этом дельта Ь-ЫАМЕ-

индуцированного дефицита оксида азота - Дь-ЫАМЕ= ^ь-ЫАМЕ ~' 8И1Г[-10,12

- 5,48 = 4,64 (усл.ед.), и её вероятностный процент (Радд)' рассчитываемый по

формуле: Радд^Дадд /Лы*аме * 100%. При проведении расчётов получаем следующие данные дельта аддиции комбинаций препарата Мексиприм с исследуемыми препаратами (табл. 1).

Таблица 1

Расчётные показатели дельта аддиции (Аадд) и её вероятностного

процента (Радд) комбинаций препарата Мексиприм с эналаприлом и лозаратном при Ь-1ЧАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота __________(М±т; усл. ед., %)_

Ь^АМЕ-индуцированный дефицит оксида азота

Группы комбинаций Лцдд (усл. ед.) Р 1 адл (%)

Мексиприм 60 мг/кг+ энала-прил 0,5 мг/кг 1,28±0,1 27,6±1,9%

Мексиприм 60 мг/кг+ лозартан 0,5 мг/кг 0,62±0,08 13,4±1,5%

После проведения соответствующих расчётов, вероятностный процент аддиции упрощённо, но интегративно описывает вклад препарата Мексиприм при комбинированном использовании его с каждым препаратом для коррекции Ь-1ч[АМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

Гипотетическое объяснение логики предлагаемого подхода с использованием простого расчёта дельта аддиции и её вероятностного процента состоит в следующем. Из таблицы видно, что при Ь-ЫАМЕ-индуцированном дефиците оксида азота добавление препарата Мексиприм к эналаприлу даёт наиболее существенную аддицию, вероятностный процент которой колеблется или варьирует от 25 до 30%, а в случае комбинации препарата Мексиприм с лозартаном от 12 до 15%. Следовательно, аддитивный эффект максимален там, где патогенетически точки приложения фармакодинамического действия препарата Мексиприм, как фармакологического агента, предотвращающего разобщение еЫ08 и образование пероксинитрита (ОМОО~), индуцируемого введением Ь-ЫАМЕ, принципиально отличны от механизма эндотелиопротекции традиционными препаратами.

Рис. 7. Схема механизма возможных путей реализации эндотелиопротек-тивных эффектов препарата Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла и блокады ATI-рецепторов лозартана.

Обозначения: ATI, ATII- ангиотензин I и II, ATI - ангиотензиновые рецепторы подтипа 1, L-NAME - №-нитро-Ь-аргининметиловый эфир, L-NMMA - №-нитро-Ь-монометиларгинин, N0 - оксид азота, 02- - супероксид-анион, ADMA - асимметричный диметиларгинин, нуклеарный фактор-каппа-В (NF-каррВ), ОксЛПНП - окисление липопротеидов низкой плотности.

На рис. 7 схематично представлены разные точки приложения действия препарата Мексиприм и вышеуказанных препаратов. В случае комбинации препарата Мексиприм и лозартана наблюдается наиболее выраженный аддитивный эффект в отношение проявления эндотелиопротективного и кардиоге-

Клетка эндотелия

модинамических корригирующих эффектов при моделировании Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

Данные рассуждения, конечно, имеют строгую привязку к условиям моделирования эндотелиальной дисфункции, вызванной дефицитом оксида азота, вследствие введения блокатора еТ\'08 №-нитро-Ь-аргининметилового эфира (Ь-МЛМЕ). Очевидно, что будущие исследования должны осуществляться с учётом всех привходящих факторов, могущих спрогнозировать необходимость и лучшую терапевтическую эффективность препарата Мексиприм. Для этого исследования должны контролироваться определением тех маркеров, способных прогнозировать высокую степень вероятности реакции/отклика на дополнительное введение препарата Мексиприм (например, отсутствие повышения концентрации нитрит-ионов в сыворотке крови или в моче в ответ на дополнительное введение Ь-аргинина - эндогенного субстрата для синтеза оксида азота). Также необходимо проводить и долгосрочные исследования для определения того, имеют ли место какие-либо отличия в доступности дополнительного введения препарата Мексиприм, принимаемого в течение коротких или длительных периодов времени.

Таким образом, наши исследования раскрывают перспективу целенаправленного и обоснованного использования препарата Мексиприм как биологически активного вещества с антиоксиданой активностью, повышающего величину эндотелиопротекции препаратов эналаприл и лозартан. в условиях АОМА-подобного дефицита оксида азота.

ВЫВОДЫ

1. Препараты антиоксидантной направленности действия аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг), ингибитор АПФ эналаприл (0,5 мг/кг), блокатор АТ1 -рецепторов лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток проявляли эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в приближении значения КЭД к уровню интактных животных. Препарат Мексиприм по результатам нагрузочных проб проявляет кардиопротективные эффекты, предотвращая повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию, сопоставимые с препаратом Мексидол и превосходящие таковые при использовании аскорбиновой кислоты. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (б мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно, как монотерапия, проявляют эндотелио- и кардиопротективные эффекты на выбранной модели патологии. Монотерапия каждым препаратом в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений артериального давления.

2. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с эналаприлом (0,5 мг/кг) оказывало дополнительное эндотелиопротективное действие на модели Е-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов МОх. При этом достигалось значительное снижение цифр АД, что не наблюдалось при монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Резуль-

таты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов под влиянием комбинации препарата Мексиприм с энала-прилом.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с ло-зартаном калия (6,0 мг/кг) оказывало также дополнительное эндотелиопротек-тивное действие на модели L NAME-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. При этом не отмечалось предотвращение развития гипертензии. Сходную и сопоставимую с эналаприлом (0,5 мг/кг) положительную динамику продемонстрировали результаты нагрузочных проб и морфологических исследований.

4. Расчёт вероятностного коэффициента адциции показал, что препарат Мексиприм в случае комбинации с эналаприлом проявляет наиболее выраженное положительное фармакодинамическое взаимодействие в отношение проявления эндотелиопротективного и кардиогемодинамических корригирующих эффектов при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эндотелиопротективные эффекты препарата Мексиприм при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте / Т.Г. Покровская, К.Е. Бобраков, М.В. Покровский и др. // Сб. матер. XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - М., 2008. - С. 685.

2. Бобраков, К.Е. Эндотелиопротективные эффекты препарата Мексиприм при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота в эксперименте / К.Е. Бобраков // Матер. Всероссийской науч.-практ. конф. «Биомедицинская инженерия и биотехнология» (29-30 апреля 2008 г., г. Курск). -Курск: КГМУ, 2008. - С. 145-146.

3. Метаболическая и антиоксидантная терапия L-NAME-нндуцированнрй эндотелиальной дисфункции / Е.Б. Артюшкова, М.В. Покровский, Е.В. Артюшкова, М.В. Корокнн, К.Е. Бобраков // Кубанский науч. мед. вести. - 2008. - № 3-4 (102-103). - С. 73-78.

4. Эндотелиопротективные, кардиопротективные н коронаролитиче-екпе эффекты производных 3-оксипиридина / М.В. Корокнн, E.H. Пашни, К.Е. Бобраков и др. И Курский науч.-практ. вест. «Человек н его здоровье». - 2009. - № 4. - С. 11-19.

5. Изучение эндотелиопротективного и коронарного действия производных З-окснпиридина / М.В. Корокнн, E.H. Пашин, К.Е. Бобраков и др. // Кубанский науч. мед. вестн. - 2009. - № 4 (109). - С. 104-109.

6. Использование металлокомплексных соединений с антиоксидант-ными свойствами для фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции / Л.М. Даниленко, Э.А. Парфенов, М.В. Покровский, Н.Г. Гу-

манова, В.А. Метельская, К.Е. Бобраков // Кубанский науч. мед. вестн. -2009. - № 5 (110). - С. 20-24.

7. Изучение кардиопротективных эффектов препарата «Мексиприм» при моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / К.Е. Бобраков, М.В. Корокин // Съезд терапевтов Юга России. «Врач XXI века: сегодня и завтра» (17-18 сентября 2009). - Ростов н/Д, 2009. - С. 27.

8. Фармакологическая коррекция эндотелиальной дисфункции препаратом Мексиприм / К.Е. Бобраков, М.В. Корокин // Съезд терапевтов Юга России. «Врач XXI века: сегодня и завтра» (17-18 сентября 2009). - Ростов н/Д, 2009. -С. 27.

9. Бобраков, К.Е. Эндотелиопротективные эффекты препарата «Мексиприм» при моделировании L-NAME-индуцированного дефекта оксида азота в эксперименте / Бобраков К.Е. // Матер. 74-й межвуз. итог. науч. конф. студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность», посвящ. Году молодежи в России (21-22 апреля 2009). - Курск, 2009. - Ч. И. - С. 163-164.

10. Изучение кардиопротективных эффектов препарата Мексиприм при моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции / К.Е. Бобраков, М.В. Корокин, О.С. Гудырев и др. // Актуальные вопросы фармакологии и фармации. Матер, межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск, 2009. - С. 120-121.

11. Фармакологическая коррекция эндотелиальной дисфункции препаратом Мексиприм / К.Е. Бобраков, М.В. Корокин, О.С. Гудырев и др. // Актуальные вопросы фармакологии и фармации. Матер, межвуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. Владислава Васильевича Пичугина и 75-летию КГМУ. - Курск, 2009.-С. 121-122.

12. Сравнительный анализ эндотелиопротективных эффектов синтетических антиоксидантов производных 3-оксипиридина - препаратов Мексиприм и Мексидол / К.Е. Бобраков, М.В. Покровский, Т.Г. Покровская II Биотехнология и биомедицинская инженерия. Сб. трудов III Всероссийской науч.-практ. конф. с междунар. участием. К 75-летию КГМУ. - Курск, 2010. - С. 175-176.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

лжд - левожелудочковое давление

-fdp/dt - максимальная скорость увеличения левожелудочкового давления

-dp/dt - максимальная скорость снижения левожелудочкового давления

NO - оксид азота

L-NAME - №-иитро-Ь-аргинин метиловый эфир

ЧСС - частота сердечных сокращений

кэд - коэффициент эндотелиальной дисфункции

AT - ангиотензин

АД - артериальное давление -

ГМК - гладкомышечная клетка

эк - эндотелиальная клетка

САД - систолическое артериальное давление

ДАД - диастолическое артериальное давление

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 16.11.2010 г. Подписано в печать 18.11.2010 г. Формат 30x42% Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 137А. Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

ГЛАВА 1. РОЛЬ И МЕСТО ВЕКТОРА КОРРЕКЦИИ ОКСИДАНТ-НОГО СТРЕССА В ФАРМАКОТЕРАПИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА. (Обзор литературы). 17

1.1. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия 17

1.2. Использование антиоксидантной терапии в фармакологической коррекции заболеваний сердечно-сосудистой системы. 30

1.3. Сердечно-сосудистые препараты модулирующие эндогенную биоактивность оксида азота. 51

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 56

2.1. Моделирование Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота и оценка эндотелийзависимых и эндотелийнезависимых сосудистых реакций. 56

2.2. Проведение функциональных проб в острых экспериментах на наркотизированных крысах. 57

2.3. Биохимические маркеры эндотелиальной дисфункции. 57

2.4. Морфологические методы оценки сердечно-сосудистых изменений при моделировании дефицита оксида азота. 60

2.5. Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндоте-лио- и кардиопротективных эффектов исследуемых препаратов 60

2.6. Исследуемые химические соединения и дизайн эксперимента. 62

2.7. Статистическая обработка результатов исследования. 70

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 71

3.1. Разработка комплекса методических подходов для количествен- 71 ной оценки развития эндотелиальной дисфункции при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита N0 в эксперименте с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.

3.2. Исследование эндотелиопротективной активности аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол и Мексиприм, эналаприла, лозартана калия при Ь-№АМЕ- индуцированной модели дефицита N0 с использованием результатов функциональных проб, биохимических маркеров и морфологических исследований. 96

3.3. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при Ь-КАМЕ-индуцированной модели дефицита N0. 108

3.4. Изучение эндотелиопротективной активности сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора АТ]-рецепторов лозартана калия при Ь-КАМЕ-индуцированной модели дефицита N0. 122

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 136

ВЫВОДЫ. 153

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. 155

ПРИЛОЖЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ - артериальная гипертензия АцХ - ацетилхолин АТФ - аденозинтрифосфат ИБС - ишемическая болезнь сердца ЛЖД - левожелудочковое давление dp/dt - максимальная скорость увеличения левожелудочкового давления -dp/dt - максимальная скорость снижения левожелудочкового давления NO - оксид азота

L-NAME - №-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир

ЭД - эндотелиальная дисфункция

ЧСС - частота сердечных сокращений

КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции

ГЛЖ - гипертрофия левого желудочка

AT - ангиотензин

АД - артериальное давление

ГМК - гладкомышечная клетка

ЭК - эндотелиальная клетка

РААС - ренин - ангиотензин - альдостероновая система ИАПФ - ингибитор ангиотензинпревращающего фермента АК - антагонист кальция цГМФ - циклический гуанозин - монофосфат мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота НАДФ - никотинамидадениндинуклеотидифосфат ЛПНП - липопротеиды низкой плотности ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности ЛПВП - липопротеиды высокой плотности САД - систолическое артериальное давление ДАД - диастолическое артериальное давление

ВВЕДЕНИЕ

Эндотелий - это тонкий, моноклеточный слой, покрывающий всю внутреннюю поверхность кровеносных сосудов и отделяющий циркулирующую кровь от тканей. В' настоящее время стало очевидным, что эндотелий сосудов* - это активная метаболическая система, поддерживающая сосудистый гомеостаз путём осуществления ряда важнейших функций: модулирования тонуса сосудов; регуляции транспорта растворенных веществ в клетки сосудистой стенки, роста этих клеток; формирования внеклеточного матрик-са; защиты сосудов от возможного неблагоприятного действия циркулирующих клеток и субстанций; регуляции хемотаксических, воспалительных и репаративных процессов в ответ на локальное повреждение.

Эндотелиальные клетки сосудистого русла, осуществляя,, синтез локально действующих медиаторов, морфофункционального ориентированы на оптимальное регулирование органного кровотока [9, 19, 102', 103]. С того момента, как эндотелиальньда слой,был обнаружен в результате микроскопического исследования, он всегда рассматривался как покров, действующий в качестве* барьера, останавливающего внутрисосудистое свёртывание/коагуляцию. Тем не менее, в последние десятилетия изучение его-различных функций показало; что он (эндотелиальный слой) является настоящим регулятором кровотока и тканевого гомеостаза. Хотя эндотелий ^является монослоем, покрывающим внутреннюю поверхность всей сосудистой системы, его общий вес превышает вес печени. Его масса равна массе некоторых сердец. По этой причине, был выдвинут постулат, что он (эндотелий) является самой- крупной и важной ауто- паракринной железой в организме [105, 128, 138, 139, 146].

Он не является1 пассивным органом, а совсем наоборот: он функционирует как рецепторно-эффекторный орган, реагирующий на любой физический или химический стимул/раздражитель с выделением/секрецией соответствующего вещества, с помощью которого он может поддерживать^ вазомоторный баланс и сосудисто-тканевый гомеостаз. Он имеет свойство вырабатывать как агонистические, так и антагонистические вещества, поддерживающие гомеостаз и его функцию. Это не только аутокринные, но и пара-кринные и эндокринные вещества. Таким образом, он модулирует релаксацию или сокращение сосудистых клеток гладкой мышцы, т.е. модулирует процессы вазодилатации и вазоконстрикции. Эндотелий регулирует гомеостаз, осуществляя контроль выработки протромбиновых и антитромботиче-ских компонентов, а также фибринолитических и антифибринолитических агентов. Он также участвует в процессах клеточной пролиферации и миграции, адгезии лейкоцитов и их активации, а также в иммунологических и воспалительных процессах.

Факторы сердечно-сосудистого риска обуславливают оксидантный -окислительный стресс, что вызывает изменение функциональной активности эндотелиальных клеток и приводит к так называемой эндотелиальной «дисфункции» (ЭД), т. е. к снижению способности эндотелия поддерживать гомеостаз, ведущей к развитию патологических, воспалительных процессов и сосудистых заболеваний. В настоящее время дисфункция сосудистого эндотелия рассматривается как один из ведущих факторов патогенеза болезней сердца и сосудов [42, 45, 66, 78, 89, 94, 122]. Этот термин применяется для обозначения таких патологических состояний, как снижение эндотелийзави-симого расширения сосудов, нарушение антикоагулянтных и антивоспалительных свойств эндотелия, регуляция им роста и структуры сосудистой стенки (включая дисрегуляцию процессов ее ремоделирования) и др. [46, 47, 66, 120]. В основе окислительного стресса лежит изменение продукции синтезируемых сосудистыми эндотелиальными клетками (ЭК) биологически активных соединений, среди которых наибольшее значение с точки зрения рассматриваемой проблемы имеют реактивные формы кислорода (РФК) [83, 142]. В эту группу высокореактогенных молекул входят молекулярный кислород и ряд его производных, образующихся во всех аэробных клетках. РФК вызывают дефицит оксида азота в эндотелиальных клетках, опосредованный подавлением биосинтеза и/или биоактивности N0, связанный с торможением экспрессии и активности эндотелиальной Ж)-синтазы (еМЭБ).

Исследования последних лет убедительно свидетельствуют о том, что в небольших концентрациях оксид азота (N0) - представляет уникальный по своей природе и механизмам действия вторичный мессенджер в большинстве клеток организма. Оксид азота (N0) - ведущий гуморальный эндотелиальный модулятор дилатации, релаксирующий сосуды, который вырабатывается эн-дотелиоцитами [66, 93, 94]. Клетки эндотелия выделяют большое количество различных веществ как в кровь, так и в окружающие ткани, поэтому их можно рассматривать как самую большую эндокринную систему [102, 128, 134, 146].

Эндотелиальная дисфункция связана с большинством форм сердечнососудистых заболеваний (таких как артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз, болезни периферических артерий, диабет и хроническая почечная недостаточность). Как указано выше, к механизмам, участвующим в формировании сниженной вазодилатации (в результате эндотелиальной дисфункции), относятся снижение образования окиси азота, избыточная продукция РФК и пониженная выработка гиперполяризующего фактора. Повышение функциональной активности адгезивных молекул эндотелия, образование химических агентов (хемокинов), например, макрофа-гального аттрактантного пептида-1, и выработка ингибитора-1 активатора плазминогена принимают участие в воспалительных реакциях и способствуют развитию протромбогенных состояний. Вазоактивные пептиды (например, ангиотензин II и эндотелии-1), накопление ассиметричного диметилар-гинина - эндогенного ингибитора оксида азота, гиперхолестеринемия, гипер-гомоцистеинемия, инсулинорезистентность также способствуют нарушению механизмов вазодилатации. При этом отмечается усиление апоптоза эндоте-лиальных клеток, так называемое «старение» эндотелия. Эндотелиальная дисфункция — это важное, начальное явление патогенеза атеросклероза, способствующее возникновению и развитию бляшек (тромбов). Уменьшение количества циркулирующих эндотелиальиых клеток-предшественниц, принимающих участие в регенерации эндотелия, участвует в развитии патогенеза атеросклероза. Степень нарушения структуры и функции эндотелия имеет прогностическое значение для выявления сердечно-сосудистых заболеваний.

Таким образом, коррекция эндотелиальной дисфункции приводит к снижению риска возникновения, а также предупреждению патогенетических механизмов развития и клинических проявлений артериальной гипертонии, атеросклероза, сахарного диабета и их осложнений [5, 19, 38, 53, 64, 197, 115, 129]. Это связано с тем, что при этих заболеваниях дисрегуляторные изменения функции клеток эндотелиальной выстилки сосудов могут являться первопричиной развития данных заболеваний, так как во-первых, обнаруживаются у лиц без повышенного АД; предки которых страдали АГ, во-вторых, отсутствует чёткая корреляция с величиной АД, в третьих, существующая эндотелиальная дисфункция далеко не всегда нормализуется при снижении АД [5, 7, 9, 122]. Дисфункция эндотелия в настоящее время рассматривается также в качестве инициирующего фактора и ранней фазы развития атерот-ромбоза и инсулинорезистентности, а биохимические изменения (избыток свободных радикалов, деградация брадикинина, сниженная активность N0-синтазы), лежащие в основе этого относят к метаболическим нарушениям [22,24, 57, 60, 77, 101, 105].

Нарушения продукции, взаимодействия, разрушения эндотелиальных вазоактивных факторов наблюдаются одновременно с аномальной сосудистой реактивностью, изменениями в структуре и росте сосудов, которым сопутствуют сосудистые заболевания [53, 66, 123].

Кроме вышеперечисленных патогенетическая роль эндотелиальной дисфункции доказана при ряде наиболее распространенных заболеваний и патологических состояний: легочной гипертензии, сердечной недостаточности, дилатационной кардиомиопатии, ожирении, гиперлипидемии, сахарном диабете, гипергомоцистеинемии.[47, 48, 50]. Этому способствуют такие модифицируемые факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, как курение, гипокинезия, солевая нагрузка, различные интоксикации, нарушения углеводного, липидного, белкового обменов, инфекция и др. [9, 81, 86, 89, 95, 103, 105, 137, 138, 143, 149].

Экспериментальное моделирование дефицита оксида с помощью введения блокатора синтаз N0 N-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (L-NAME) в течение 7 дней обнаруживает увеличение маркеров воспалительных (адгезия и инфильтрация моноцитов) и пролиферативных (появление пролифери-рующих и ядерных антиген-позитивных клеток). Одновременно с этим повышается содержание в тканях ангиотензин-конвертирующего фермента и рецепторов к ангиотензину 1-го типа, приводящих к повышению активности ангиотензина II. Кроме того, происходит повышение активности гена, ответственного за экспрессию хемокинов, таких как протеин-I хемотаксиса моноцитов - МСР-1, цитокинов (транформирующий фактор роста (TGF), тканевой фактор [47]. Возникающий оксидантный стресс активирует большое количество оксидантчувствительных факторов транскрипции (таких как нуклеар-ный фактор каппа-В (NF-кВ), которые повышают экспрессию адгезивных молекул эндотелия (ICAM-1, VCAM-1), способствующих развитию воспалительных и других процессов (протекающих, в частности, при атеросклерозе). То есть, данная модель позволяет воспроизвести начальные патофизиологические изменения происходящие при наличии факторов риска или ранних признаках развития атеросклероза.

Для согласованной работы eNOS требуется много совместно действующих факторов, таких как никотинамиддифосфат (NADPH), динуклеоти-даденинрибофлавин (FAD), кальций, кальмодулин и тетрагидробиоптерин. N0 диффундирует в сосудистые гладкомышечные клетки и стимулирует гуанилатциклазу, что приводит к увеличению продукции cGMP и вазодила-тации [107, 108, 112, 115].

При снижении доступности L-аргинина eNOS начинает избыточно продуцировать реактивные формы кислорода (оксидативный стресс), что приводит к нарушениям защитных функций антиоксидантных механизмов клетки и становится сильным патогенным фактором развития эндотелиальной дисфункции. Этот феномен получил название «разобщение» (uncoupling) eNOS и был. убедительно продемонстрирован в опытах с очищенным; ферментом [82, 147, 147, 149]. Нарушение оксидантного" фона может вызываться диетическими факторами, повышением активности аргиназы (фермента, разрушающего L-аргинин) [86], окисленными липопротеидами низкой плотности [24, 46, 49, 50, 90], увеличением присутствия эндогенного ингибитора eNOS - асимметричного диметиларгинина (ADMA) и NG-monomethyl-L-arginine (L-NMMA) [132]. Как следствие, происходит нарушение метаболизма и мембранного транспорта L-аргинина, что в результате приводит к существенным сдвигам в редокс-окислительных компонентах eNOS, при этом1 биосинтез NO резко снижается.

Большое: значение в развитии эндотелиальной дисфункции" и последующего ремоделирования: сердечно-сосудистой системы имеют процессы' свободнорадикального окисления (СРО), активация которых наблюдается при артериальной гипертонии. Усиление СРО ускоряет распад оксида азота, подавляет экспрессию эндотелиальной NO-синтазы,. активирует процессы гиперкоагуляции и апоптоз эндотелиальных клеток [Беленков Ю.Н. и соавт., 2009, Иванов С.Г.и соавт., 2006].

Учитывая, что прогрессирующее рем одел ирование миокарда и сосудистой стенки сопровождаются нарушением внутриклеточного энергетического обмена и активацией свободнорадикальных процессов [Бувальцев В.И. и соавт., 2001, Грацианский Н.А. и соавт., 1998], применение при артериальной гипертензии цитопротекторов и антиоксидантных средств представляется перспективным и оправданным.

В настоящее время широкое применение в кардиологической практике получил цитопротекторы Мексикор и Мексидол (2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцинат). .

В основе действия цитопротекторов лежит способность оптимизировать внутриклеточный митохондриальный энергетический . обмен и уменьшать потребность клетки в кислороде путем переключения энергообмена с окисления жирных кислот на преимущественную утилизацию глюкозы (более выгодный с точки зрения экономии кислорода вариант метаболизма) за счет стимуляции сукцинатдегидрогеназного пути метаболизма глюкозы и элементов цитохромной цепи. При этом 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сук-цинат обладает антиоксидантными свойствами, что может позволить уменьшить негативное воздействие окислительного стресса на эндотелий сосудистой стенки [Голиков А.П. и соавт., 2006, Михин В.П. и соавт., 2009].

По предварительным данным, использование отдельных цитопротекто-ров у больных с артериальной гипертензией оказывает позитивное влияние на активность свободнорадикальных процессов, эндотелиальную функцию, уровень АД, СПАД, состояние сердца и сосудов [Голиков А.П. и соавт., 2006, Калвиныи И.Я., 2001, Михин В.П. и соавт., 2009, Хубеева ДМ. и соавт., 2005]. Вместе с тем комплексной оценки влияния цитопротекторов 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцината в сочетании с традиционной гипотензивной терапией на эндотелиальную дисфункцию и эффективность вторичной профилактики при моделировании L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота не проводилось. При гипертонической болезни ведущими гипотензивными препаратами являются ИАПФ и блокаторы ATI рецепторов. Гипотензивные эффекты данных препаратов, в значительной степени, обусловлены позитивным влиянием препаратов на эндотелиальные механизмы регуляции АД. В связи с этим, можно ожидать аддитивного влияния цитопротекторов на эндотелиотропные эффекты ИАПФ и Р-адреноблокаторов.

Очевидно, что в настоящее время достаточно большое внимание уделяется изучению роли и места 2-этил-6-метил-3-оксипиридина сукцината, повышающего биодотупность NO, в коррекции эндотелиальной дисфункции [88, 109, 110, 124], а вот сравнительное изучение комбинации производного 3-оксипиридина Мексиприм с представителями основных групп гипотензивных препаратов, обладающих эндотелиопротективными эффектами (ингибиторы АПФ, блокаторы АТ1-рецепторов) при экспериментальном моделировании эндотелиальной дисфункции в литературе нами не обнаружено.

Работа выполнена по инициативному плану, включена в программу «Разработка и совершенствование методов ранней диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний с целью улучшения качества и увеличения продолжительности жизни больных» на 2007-2012 гг., номер госрегистрации 0120. 0 710379. Номер государственной регистрации диссертационной темы - 0120.0 805726.

Цель исследования: провести оценку фармакологической коррекции метаболического пути Ъ-аргинин/Ж) дополнительным введением препарата Мексиприм и его комбинаций с эналаприлом и лозартаном, при экспериментальной модели дефицита оксида азота.

Задачи исследования:

1. Изучить эндотелиопротективную активность аскорбиновой кислоты, препаратов Мексидол и Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла, блокатора АТ1-рецепторов лозартана калия при Ь-1ЧАМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

2. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и ингибитора АПФ эналаприла при Ь-1ЧАМЕ-индуцированной модели дефицита N0.

3. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного применения препарата Мексиприм и блокатора АТ1-рецепторов лозартана калия при Ь-КАМЕ- индуцированной модели дефицита N0.

4. Проведение интегрального векторного анализа для комплексной оценки функциональных характеристик сосудистой реактивности, нитроксидер-гической системы, показателей сократимости и морфометрии миокарда с последующим расчётом вероятностного коэффициента аддиции препарата Мексиприм в комбинации с эналаприлом и лозартаном при Ь-ИАМЕ- индуцированной модели дефицита N0.

Научная новизна исследования. В работе впервые показано, что препарат Мексиприм 60 мг/кг оказывает эндотелиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO при однократном внутримышечном введении в течение 7 суток. Эналаприл 0,5 мг/кг, лозартан калия 6 мг/кг (однократно внутрижелудочно в течение 7 суток) как монотерапия также обладали эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии. Сочетанное использование препарата Мексиприм с вышеперечисленными представителями основных групп антигипертензивных препаратов показало аддитивное эндотелиопротективное действие.

Практическая значимость. В работе обоснована эффективность соче-танного применения препарата Мексиприм с ингибитором АПФ эналапри-лом, блокатором ATI-рецепторов лозартаном калия для коррекции L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции в эксперименте. Показано, что их сочетанное использование позволяет улучшать изменение соотношения сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзави-симая вазодилатация) и нитропруссид (эндотелийнезависимая вазодилата-ция) с уменьшением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД), который в 5 раз увеличивается при L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции, предотвратить снижение показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессию эндотелиальной NO-синтазы), а также добиться положительной динамики морфофукциональных показателей сердечно-сосудистой системы (диаметр кардиомиоцитов и прирост давления при пробе на нагрузку сопротивлением, диаметр кардиомиоцитов и адрено-реактивности).

Проведены целенаправленные доклинические исследования эндоте-лиопротективных эффектов препарата Мексиприм при эндотелиальной дисфункции («Протокол доклинического исследования препарата «Мексиприм» раствор для внутривенного и внутримышечного введения 50 мг/мл, производства ОАО «Фармстандарт - УфаВИТА» в сравнении с препаратом «Мек-сидол» раствор для инъекций, производства ООО МЦ «Эллара»).

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования, касающиеся антигипертензивной и эндотелиопро-тективной активности лозартана калия «Блоктран», эналаприла малеата «Ре-ниприл производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства», включены в состав документов, поданных на регистрацию в МЗ РФ (РУ № 000084/01-2000).

Материалы диссертационного исследования, касающиеся изучения ан-ти-гипертензивной и эндотелиопротективной активности препарата Мекси-прим производства ОАО «Фармстандарт-Лексредства» включены в состав регистрационного досье, поданного на регистрацию в МЗ РФ (регистрационный номер препарата Мексиприм Р № 00916-02 от 10.09.2008 г., зарегистрирован на ОАО «Фармстандарт-Томскхимфарм»), Результаты работы используются в лекционных курсах кафедры фармакологии, клинической фармакологии КГМУ, кафедры фармакологии Орловского государственного университета, кафедры фармхимии, фармакогнозии и фармакологии Белгородского государственного университета.

Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных сессиях и международных конференциях молодых ученых КГМУ в 2006 -2010 гг., XIV - XVII национальном конгрессе «Человек и лекарство», I национальном конгрессе терапевтов, VII съезде аллергологов и иммунологов СНГ. Апробация диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии, анатомии, гистологии, внутренних болезней № 1, 2 внутренних болезней ФПО, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 4 в журналах, рекомендуемых ВАК для диссертационных работ.

Положения, выносимые на защиту

1. Аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутримышечно оказывают эндоте-лиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированной N0-дефицитной ЭД. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия проявляют эндотелио-протективные эффекты на выбранной модели патологии.

2. Сочетанное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с энала-прилом (0,5 мг/кг) оказывает выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражается в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов 1ЧОх. При этом достигаются целевые цифры АД, в отличие от монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адрено-реактивности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинации препарата Мексиприм с эналаприлом увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6,0 мг/кг) оказывает эндотелиопротективное действие на модели Ь-1ЧАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, положительной динамики результатов нагрузочных проб и морфологических исследований, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов 1ЧОх. При этом не отмечается предотвращение развития гипер-тензии.

4. Мексиприм потенцирует эндотелиопротективную активность энала-прила и лозартана, и по расчётному значению вероятностного коэффициента аддиции комбинация препарата Мексиприм с эналаприлом является предпочтительнее комбинация препарата Мексиприм с лозартаном в комплекской эндотелио- и кардиопротекции.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 150 источников, из них 79 отечественных и 71 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста, содержит таблиц - 18, рисунков - 42, схем - 2.

ВЫВОДЫ

1. Препараты антиокидантной направленности действия аскорбиновая кислота (60 мг/кг), Мексидол (60 мг/кг), Мексиприм (60 мг/кг), ингибитор АПФ эналаприл (0,5 мг/кг), блокатор АТ1-рецепторов лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток проявляли эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в приближении значения КЭД к уровню интактных животных. Препарат Мексиприм по результатам нагрузочных проб проявляет кардиопротективные эффекты, предотвращая повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне повышения реакции на реоксигенацию, сопоставимые с препаратом Мексидол и превосходящие таковые при использовании аскорбиновой кислоты. Эналаприл (0,5 мг/кг) и лозартан калия (6 мг/кг) однократно в течение 7 суток внутрижелудочно как монотерапия проявляют эндотелио- и кардиопротективные эффекты на выбранной модели патологии. Монотерапия каждым препаратом в изученных дозах не позволяла достичь целевых значений артериального давления.

2. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с. эналаприлом (0,5 мг/кг) оказывало дополнительное эндотелиопротективное действие на модели Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Шх. При этом достигалось значительное снижение цифр АД, что не наблюдалось при монотерапии отдельно препаратом Мексиприм и эналаприлом. Результаты нагрузочных проб выявили способность комбинации предотвращать повышение адренореактивности и развитие скрытой сердечной недостаточности на фоне снижения реакции на реоксигенацию. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов под влиянием комбинации препарата Мексиприм с эналаприлом.

3. Комбинированное использование препарата Мексиприм (60 мг/кг) с лозартаном калия (6,0 мг/кг) оказывало также дополнительное эндотелиопротективное действие на модели Ь-МАМЕ-индуцированного дефицита N0, выражающееся в снижении КЭД, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Шх. При этом не отмечалось предотвращение развития гипертензии. Сходную и сопоставимую с эналаприлом (0,5 мг/кг) положительную динамику продемонстрировали результаты нагрузочных проб и морфологических исследований.

4. Расчёт вероятностного коэффициента аддиции показал, что препарат Мексиприм, в случае комбинации с эналаприлом, проявляет наиболее выраженное положительное фармакодинамическое взаимодействие в отношение проявления эндотелиопротективного и кардиогемодинамических корригирующих эффектов при моделировании Ь-ЫАМЕ-индуцированного дефицита оксида азота.

155

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время список заболеваний, имеющих эндотелийзависимое происхождение, обширен и разнообразен. Исходная и развивающаяся «механика» этих болезней связана с нарушением дисбаланса эндотелиальных субстанций — нерегламентируемым усилением роли одних и ослаблением «оппозиционной» работы других. Хорошо известно, что медиатором эндотелий-зависимой вазодилатации является оксид азота (N0), биологическая активность которого у людей с заболеваниями органов кровообращения может снижаться по двум основным путям: 1) нарушение его продукции из-за угнетения активности N0 синтетазы в условиях инсулинорезистентности и гипергликемии; 2) повышенного потребления, так как N0 может вступать в ре2 акцию с О , в результате чего образуется пероксинитрит (ОМЮ ), высокие дозы которого усиливают повреждающие эффекты продуктов свободного радикального окисления.

Исходя из ключевой роли активации свободнорадикального окисления (СРО) в формировании эндотелиальной дисфункции, а опосредованно — в патогенезе заболеваний органов кровообращения, перспективным подходом к профилактике данной патологии является применение антиоксидантов. Широко используемые в клинической практике антиоксиданты: а-токоферол, аскорбиновая кислота, селен, каротин, убихинон — требуют сочетанного и длительного применения для достижения в конечном итоге слабовыраженно-го антиоксидантного и антигипоксантного эффекта. Это дает основания для поиска и изучения новых антиоксидантов.

Изучение эндотелиальной дисфункции, вызванной моделированием дефицита оксида азота, приближенного к условиям оксидантного стресса в эксперименте, требует выбора патофизиологической модели с созданием наиболее приближенных условий к клинической ситуации. Принимая этот факт во внимание, установление взаимосвязи фармакологических изысканий с формированием объективной методологии оценки, явилось начальныым этапом наших исследований, который был посвящен разработке методологических подходов к экспериментальному моделированию дефицита оксида азота.

Так, в ходе наших исследований проведенных в эксперименте на белых крысах линии Wistar был разработан комплекс методических подходов, включающий моделирование патологии, и последующую оценку ее физиологическими, биохимическими и морфологическими методами.

Эндотелиальную дисфункцию, вызванную дефицитом оксида азота моделировали ежедневным в/б введением в течение 7 дней крысам-самцам ингибитора фермента eNOS N-нитро-Ь-аргинин метилового эфира (L-NAME-индуцированная ЭД. Механизм ингибирования выработки NO в случае, использования L-NAME заключается в конкурентном ингибировании фермента eNOS аналогом L-аргинина — L-NNA. L-NAME фактически является проле-карством: в организме этот эфир гидролизуется с участием специальных ферментов — эстераз, давая активный ингибитор — L-NNA. В свою очередь-дефицит сосудистого NO вызывает существенные изменения? функций сис-. темы кровообращения в целом. Эти нарушения включают: снижение эффектов эндотелийзависимых вазодилататоров и повышение; вазоконстрикторных, влияний; рост АД, нарушения системной и региональной гемодинамики, функций сердца, увеличение экспрессии адгезивных молекул эндотелия; аг4 регации тромбоцитов; прилипание их и лейкоцитов к сосудистой стенке; пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток с образованием неоинтимы, синтез внеклеточного матрикса и др;[9, 53, 63, Выданные результаты подтверждают и наши исследования. В/б введение в течение 7 дней крысам-самцам ингибитора фермента eNOS L-NAME приводит к выраженной АГ и эндотелиальной дисфункции. Соответственно АД У животных с патологией составило САД - 190,3 ± 6,7, ДАД - 145,0 ± 3,9 мм рт.ст., тогда как у интактных животных САД - 137,7 ±3,7, ДАД - 101,9 ± 4,3 мм рт.ст.

По данным литературы такой умеренно пролонгированный среднедо-зовый режим введения L-NAME приводит к провоспалительным (увеличение адгезивньтх и инфильтративных эффектов моноцитов) и пролиферативным появление пролиферирующих антигенпозитивных ядерных клеток) изменениям сосудистого русла, характерных для патофизиологических проявлений при развитии раннего первичного атеросклеротического процесса [92]. При этом повышается активность АПФ и AT I рецепторов, приводящая к повышению активности AT II, повышается экспрессия, хемокинов, хемотаксиче-ских пептидов моноцитов, адгезивных молекул эндотелия, транформирую-щего фактора роста [130]. Кроме того, повышается продукция супероксид-анионов и активность факторов транскрипции (нуклеарный фактор каппа В, активатор плазминогена 1) [92]. Кроме того, вышеперечисленные факторы являются взаимообусловленными, запускающими целый каскад механизмов, приводящий к снижению продукции оксида азота. Известно, что хемотакси-ческие пептиды моноцитов (MCP'— 1) способствуют увеличению адгезии моноцитов к эндотелию сосудов, особенно коронарных сосудов, активируя про-воспалительный механизм развития эндотелиальной дисфункции. Увеличение экспрессии MCP — 1, во-первых, может быть обусловлена активацией локальной« ренин-ангиотензиновой системы, что доказано в исследованиях' in vitro и in vivo в условиях введения L-NAME, в которых AT II вызывает повышение экспрессии MCP - 1 [92]. Во-вторых, известно, что ингибирование NO-синтазы в опытах с использованием культуры эндотелиальньгх человеческих клеток, приводит к развитию оксидантного стресса, независимо от цГМФ, вследствие избыточной продукции реактивных форм кислорода, что также увеличивает экспрессию МСР-1. С другой стороны, увеличение количества реактивных форм кислорода приводит к повышению активности нук-леарного фактора транскрипции NF-кВ, запускающего1 каскад образования цитокинов, что также приводит к увеличению экспрессии MCP -1. Кроме того, активация ATII приводит к изменениям в регуляции сигнальной системы гладкомышечных клеток, приводящих к вазоконстрикции [142]. Введение L-NAME снижало продукцию N0,, (общее количество нитратов и нитритов) в сегменте аорты, а совместное введение препарата Мексиприм с L-NAME повышало содержание NOx. Кроме того, Мексиприм препятствует адгезии моноцитов, одним из механизмов данного эффекта является непосредственное, а также обусловленное аутокринными и паракринными эффектами L-аргинина снижение хемотаксической активности эндотелиального слоя [124]. В литературе имеются данные о снижении под влиянием препарата Мекси-прим образования провоспалительных цитокинов - интерлейкина-113, интер-лейкина-6 и фактора некроза опухоли (TNF-a) и металлопротеаз, активированных NF-кВ на модели культуры мышечных клеток мышей [121]. Таким образом, дополнительное введение препарата Мексиприм приводит к нормализации и модулированию каскадных провоспалительных иммунологических ответов, возникающих при введении блокатора синтеза оксида азота L-NAME, аналогичных развитию первичного раннего атеросклероза доклинической фазы развития.

Сравнительное комплексное изучение потенциальных эндотелиотроп-ного аддитива - антиоксиданта - препарата Мексиприм выявило эндотелио-и кардиопротективные эффекты препаратов в эксперименте. Как показали, наши исследования, Мексиприм в дозе 60 мг/кг проявлял выраженное эндо-телиопротективное действие на модели L-NAME-индуцированного дефицита N0, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции КЭД. Обнаружено, что антиоксидант Мексиприм 60 мг/кг снижал КЭД до 3,3±0,2, тогда-как в группе животных, получавших L-NAME, он составлял 5,4±0,6.

Проведенные нами морфологические исследования также подтвердили наличие кардиопротективных эффектов исследуемых препаратов. Так, в контрольной группы (L-NAME-индуцированный дефицит NO) обнаружена гипертрофия кардиомиоцитов левого желудочка до 18,5+0,9 (в норме 9,1 ±0,1 мкм), сосудистые изменения в виде спастического состояния арте-риол, утолщения их стенок. При окраске гематоксилином Pero выявлялись очаговые сегментарные или тотальные повреждения кардиомиоцитов кон-трактурного типа.

Мексиприм 60 мг/кг способствовал предотвращению увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов, снижая его до 13 мкм, против 18 мкм в контроле. Отличительной чертой препарата Мексиприм служит его способность тормозить процессы свободнорадикального окисления, что позволяет использовать их для защиты миокарда и сосудистой стенки от последствий окислительного стресса.

Избыток реактивных форм кислорода вызывает существенные изменения функции эндотелия сосудов: торможение эндотелийзависимой вазодила-тации, увеличение синтеза адгезивных молекул, что ведет к прилипанию и проникновению моноцитов в сосудистую стенку, превращению их в макрофаги; увеличение продукции различного рода факторов роста, повышение агрегации тромбоцитов и тромбообразования, активности апоптоза и др. В целом возникает выраженная дисфункция сосудистого эндотелия [104, 132].

Показано, что супероксид-анион обладает способностью тормозить экспрессию и активность е!М08, а также связывать и инактивировать N0, уменьшая его концентрацию в эндотелиальных клетках [104].

В этой связи коррекция свободнорадикальных процессов при ЭД представляется крайне важной, т.к. позволяет предотвратить ускоренную деградацию N0, восстановить активность 1<Ю-синтазы, экспрессию N0 в кровоток и препятствовать развитию эндотелиальной дисфункции [116].

Мексиприм — антиоксидантный препарат, регулирующий метаболиче- -ские процессы в миокарде и сосудистой стенке, уменьшает проявления окислительного стресса, тормозит свободнорадикальное перекисное окисление липидов и повышает активность антиоксидантной системы ферментов [5, 24] (рис. 4.1,4.2).

Большинство используемых в настоящее время кардиопротекторов разными путями блокируют бета-окисление жирных кислот в митохондриях и на альтернативной основе стимулируют окисление глюкозы. Мексиприм является цитопротективным препаратом, стимулирующим ключевые звенья цикла Кребса, сукцинатдегидрогеназный путь окисления, гликолиз, элементы цитохромной цепи, но непосредственно не угнетающим окисление жирных кислот.

Хорошо известно, что медиатором эндотелийзависимой вазодилатации является оксид азота (N0), биологическая активность которого у людей с заболеваниями органов кровообращения может снижаться по двум основным путям: 1) нарушение его продукции из-за угнетения активности N0 синтета-зы в условиях инсулинорезистентности и гипергликемии; 2) повышенного* потребления, так как N0 может вступать в реакцию с О2-, в результате чего образуется пероксинитрит (ОМОСГ), высокие дозы которого усиливают повреждающие эффекты продуктов свободного радикального окисления [7]. Одним из подходов к поддержанию биодоступности N0 является снижение окислительного стресса, поэтому можно полагать, что применение соединений, обладающих свойствами антиоксидантов, в качестве ловушек супероксид-ионов, инактивирующих N0, будет способствовать повышению его биодоступности и улучшению регуляции тонуса сосудов.

В последние годы широко изучается действие янтарной кислоты, ее солей и эфиров; представляющих собой универсальные внутриклеточные метаболиты. Янтарная кислота, содержащаяся во всех тканях и органах, является продуктом 5-й и субстратом 6-й реакции цикла трикарбоновых кислот. Окисление янтарной кислоты в 6-й реакции осуществляется с помощью сукцинат-дегидрогеназы. Выполняя каталитическую функцию по отношению-к циклу Кребса, янтарная кислота снижает в крови концентрацию других продуктов' цикла: лактата, пирувата, цитрата, — продуцируемых и накапливающихся на ранних стадиях гипоксии, и тем самым включается в энергетический обмен, направляя процесс окисления по наиболее экономичному пути. Антиокси-дантное действие янтарной кислоты связано с ее влиянием на транспорт ме-диаторных аминокислот, а также с увеличением содержания в мозге амино-масляной кислоты за счет шунта Робертса [13].

Антигипоксантный эффект янтарной кислоты связан с активацией сук-цинатдегидрогеназного окисления и с восстановлением активности цитохро-моксидазы — ключевого окислительно-восстановительного фермента дыхательной цепи. Янтарная кислота как антиоксидант дезактивирует пероксида-зы в митохондриях, повышает активность МАО зависимых ферментов [13].

Результаты проведенных нами экспериментов свидетельствуют о том, что производное янтарной кислоты Мексиприм обладает выраженным терапевтическим эффектом в отношении восстановления регуляторной функции эндотелия и способствует восстановлению активности eNOS, о чем судили по возрастанию концентрации суммарного нитрат и нитрит- ионов, т.е. конечных метаболитов оксида азота. Более того, так как восстановление NO-продуцирующей функции эндотелия на фоне терапии антиоксидантами сопровождалось улучшением ЭЗВД, можно считать, что это связано с увеличением биодоступности NO, поскольку антиоксиданты, уменьшая окислительный стресс, препятствуют деградации оксида азота.

Исследуемые препараты в изученных дозах не достигали заданных значений артериального давления, и следовательно, не могут рассматриваться 1 в виде монотерапии на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензией.

Результаты изучения основных антигипертензивных препаратов, выявили в достаточной степени, как и Мексиприм эндотелио- и кардиопротек-тивную активность на моделях L-NAME, что выражалось в снижении КЭД, предотвращении снижения содержания нитрит-ионов NOx. Одновременно результаты нагрузочных проб выявили предотвращение повышения адрено-реактивности и развития скрытой сердечной недостаточности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под действием препаратов увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов.

Полученные результаты подтверждают существующие данные об эн-дотелипротективном действии ИАПФ, блокаторов ATI рецепторов.

Так, в опытах на животных и клинических исследованиях показано, что тканевые эффекты ИАПФ восстанавливают функцию эндотелия, подавляют пролиферацию и миграцию гладкомышечных клеток, нейтрофилов и моно-нуклеарных клеток, снижают свободнорадикальное окисление, усиливают , эндогенный фибринолиз, снижают агрегацию тромбоцитов, обладают анти-атерогенным действием и стабилизируют атеросклеротические бляшки у животных [8, 28, 39, 100]. Одна из возможностей воздействия на ЭД связана с восстановлением метаболизма брадикинина, нарушенного при сердечнососудистых заболеваниях. Блокада тканевого АПФ с помощью ИАПФ приводит не только к уменьшению синтеза АТ II, но и замедляет деградацию брадикинина. Одним из возможных механизмов действия этих препаратов могут быть снижение базальной и индуцированной инсулином секреции эн-дотелина-1 и увеличение продукции N0 [98]. Кроме того, доказано положительное действие на функцию эндотелия в результате повышения выработки эндотелиального гиперполяризующего фактора [136]. Экспериментально доказана способность ИАПФ предотвращать ЭД, опосредованную действием недоокисленных липопротеидов низкой плотности. Положительный эффект связывают с накоплением в эндотелии брадикинина, что, в свою очередь, ведет к повышению продукции N0. При изучении способности эналаприла и кандесартана восстанавливать функцию эндотелия артерий брыжейки крыс со спонтанной АГ была выявлена их одинаковая эффективность в отношении, эндотелиальной дисфункции, что в последующем было доказано и в других экспериментах, в частности с каптоприлом и лозартаном [22, 100, 133].

Благоприятное действие на эндотелиальную дисфункцию антагонистов ангиотензиновых рецепторов реализуется, по-видимому, за счет блокады АТ1-рецепторов, что приводит к снижению продукции супероксидных радикалов, уменьшению связывания N0 и его накоплению [32, 33, 54, 67, 80]. Так как стимуляция АТ1-рецепторов способствует образованию супероксидов, инактивирующих N0, а стимуляция АТ2-рецепторов приводит к вазодилата-ции и натрийурезу за счет активации системы брадикинина, N0 и цГМФ, то эффект АТ II (усиление синтеза или инактивация N0) зависит от того, с какими рецепторами он преимущественно взаимодействует. Поэтому очевидно, что на фоне блокады АТ1-рецепторов создаются условия для усиленного функционирования незаблокированных АТ2-рецепторов, что приводит к накоплению N0 [10, 11, 30, 71].

Просвет сосуда

ГР®активные. ' прюдукты

Тромбоциты, (агрегат)

АцетшТ u холин напря- серо- Тромбин жение тонин сдвига ддф / бра^г \\AT-i one \ /y'Hmu4%LMT-IU. лпнп \ /X \Л

V .О

Протеин Gi

L-NAME,7^\ L-NMMA,^ ADMA 1

L-аргинин L-цитруллин

AT-i У%Щ>\ AT-JI t a

Адгезивные модекуяь»

7 / * »(*{>?* В v у

Клетка эндотелия

Схема 4.1. Схема механизма возможных путей реализации эндотелио-протективных эффектов препарата Мексиприм, ингибитора АПФ эналаприла и блокады ATI-рецепторов лозартана.

Обозначения: ATI, ATII- ангиотензин I и II, ATI — ангиотензиновые рцепторы подтипа 1, L-NAME - №-нитро-Ь-аргининметиловый эфир, L-NMMA - №- нитро-L-мономети л аргинин, N0 - оксид азота, Ог' - супероксид-анион, ADMA - асимметричный диметиларгинин, нуклеарный фактор-каппа-В (NF-каррВ), ОксЛПНП - окисление липо-протеидов низкой плотности.

Клинические исследования у больных с эссенциальной АГ показали, что на фоне терапии лозартаном улучшается эндотелиальная функция рези-стивных артерий за счет увеличения синтеза NO [37, 62, 67, 69].

Однако использование всех исследуемых препаратов на модели с L-NAME-индуцированной артериальной гипертензии ни в одном случае не достигали значений по совокупности критериев оценки (АД, КЭД и др.) ЭД у интактных животных. Следовательно, не могут рассматриваться в виде монотерапии.

Сочетанное применение препарата Мексиприм с основными кардио-тропными препаратами с доказанными эндотелиопротективными свойствами оказывало выраженное эндотелиопротективное действие на модели Ь-КАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выражалось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) до уровня, приближающегося к интактным животным, а также в предотвращении снижения содержания нитрит-ионов Ж)х. При этом отмечалось существенное предотвращение развития гипертензии в сравнении с монотерапией этими препаратами.

Так, сочетанное применение препарата Мексиприм с эналаприлом на фоне снижения КЭД уровень АД приближался к целевым значениям. В комбинации с лозартаном калия не выявлено существенное предотвращение развития гипертензии в сравнении с монотерапией.

Одновременно результаты нагрузочных проб выявили способность комбинаций в большей степени предотвращать повышение адренореактивно-сти и развитие скрытой сердечной недостаточности. Морфологические исследования кардиомиоцитов обнаружили предотвращение под влиянием комбинаций препарата Мексиприм с антигипертензивными препаратами увеличения поперечного диаметра кардиомиоцитов у животных с патологией.

Очевидно, положительное фармакодинамическое взаимодействие со-четанного применения препарата Мексиприм с антигипертензивными препаратами связано с их разными точками приложения действия.

В частности, блокада тканевого АПФ с помощью эналаприла приводит к уменьшению синтеза АТ II, и замедляет деградацию брадикинина. Также одним из возможных механизмов действия эналаприла, по видимому, является снижение базальной и индуцированной инсулином секреции эндотелина-1 и увеличение продукции N0 [133].

Лозартан калия, очевидно, что на фоне блокады АТ1-рецепторов создает условия для усиленного функционирования ^заблокированных АТ2рецепторов, что приводит к накоплению NO [5, 6, 66, 88]. Блокада АТ1-рецепторов, в свою очередь снижает продукцию супероксидных радикалов [27, 28, 47, 59, 79].

Мексиприм в свою очередь при сочетанном применении с вышеуказанными препаратами дополнительно увеличивает синтез NO и увеличивает его биодоступность в эндотелиальных клетках. Механизм данного фармако-динамического эффекта проявляется за счет предотвращения блокады фермента eNOS [25], уменьшения инактивации NO [25], осуществляет кардио-протекцию за счет усиления противоишемических свойств оксида азота [26].

Уникальное сочетание способностей оптимизировать энергообмен клеток и противостоять окислительному стрессу за счет антиоксидантной активности определяет универсальную способность препарата Мексиприм улучшать клеточный метаболизм и восстанавливать функциональную активность тканей в условиях нарушения оксигенации.

Интегральный векторный анализ гемодинамических, биохимических и морфологических показателей в комплексной оценке эндотелио- и кардио-протективных эффектов препарата Мексиприм в комбинации с известными препаратами с эндотелипротективными свойствами эналаприлом и лозарта-ном, показывает эндотелиальную составляющую интегрального протектив-ного эффекта при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота. При всех патогенетических механизмах развития эндотелиальной дисфункции мы считаем, что звено оксидативного стресса при ADMA-подобном ингибирова-нии эндотелиальной NOS, можно вычленить как доминирующее в представлениях о точке приложения фармакологической коррекции данного патофизиологического состояния. В этой связи, представляется, что L-NAME-индуцированная патология в нашей интерпретации жёстко акцентуированной, прагматичной модели (конкретно внутрибрюшинное введение в дозе 25 мг/кг в течение 7 суток), не что иное, как патогенетически программируемое ингибирование eNOS в жёсткой аналогии с механизмом ADMA-индуцированной эндотелиальной дисфункции, описанной ранее.

Дальнейший анализ сочетаний препарата Мексиприм с эналаприлом и лозартаном проводился на основании результирующих площадей, полученный в результате интегрального векторного анализа, значения которых представлены в таблице. Сравнивая площади векторных диаграмм, мы получили выраженные различия между группой интактных животных, животных с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота и групп животных с фармакологической коррекцией вышеуказанными препаратами (табл. 4.1.). В группе интактных животных расчётная площадь составляет 5,48±0.30 усл. ед., в группе с моделированием L-NAME-индуцированного дефицита оксида азота - 10,12± 1.2 усл. ед., что принимается за наибольшую степень выраженности сочетанных сосудистых, гемодинамических, биохимических и морфологических нарушений в условиях данной модели.

Из таблицы видно, что по показателям площадей результирующих диаграмм Мексиприм, как монотерапия, занимает промежуточное (при L-NAME-индуцированном дефиците NO) по интегральной активности в коррекции нарушений метаболического пути Е-аргинин/NO в сравнении с известными препаратами, обладающими эндотелиопротективной активностью. Кроме этого, Мексиприм в обеих комбинациях усиливает интегральную про-тективную активность в отношении L-NAME- индуцированного дефицита оксида азота, что выражается в большем приближении значения площади к группе интактных животных.