Автореферат и диссертация по медицине (14.00.40) на тему:Экспрессия человеческого и вирусного интерлейкинов-6 при аденокарциноме предстательной железы
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.40
Автореферат диссертации по медицине на тему Экспрессия человеческого и вирусного интерлейкинов-6 при аденокарциноме предстательной железы
На правах рукописи
РЫБАЛЬЧЕНКО Александр Владимирович
ЭКСПРЕССИЯ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО И ВИРУСНОГО ИНТЕРЛЕЙКИНОВ - 6 ПРИ АДЕНОКАРЦИНОМЕ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
14 00 40 - «Урология» 14 00 14-«Онкология»
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва-2008
003164900
Работа выполнена в ГОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию РФ
НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ
Доктор медицинских наук, профессор Велиев Евгений Ибадович Доктор медицинских наук, профессор Тупицын Николай Николаевич
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ
доктор медицинских наук, Зайцев
профессор Андрей Владимирович
доктор медицинских наук Алексеев
Борис Яковлевич
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:
ГОУ ВПО «Московская медицинская академия имени И М Сеченова» Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию РФ.
Защита состоится « 2008 года в асов на заседании дис-
сертационного совета Д 208 041 06 при ГОУ ВПО «Московский госдарст-венный медико-стоматологический университет Росздрава» (127006 Москва, ул Долгоруковская, 4) Почтовый адрес 127473, г Москва, ул.Делегатская д 20/1
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета (127206, Москва, ул Вучетича, д 10а).
Автореферат разослан 2008г
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор М.М. Умаханова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Рак предстательной железы (РПЖ) сегодня представляет собой крупную медицинскую и социальную проблему В России РПЖ ежегодно диагностируется практически у 180 тысяч мужчин и 37 тысяч мужчин ежегодно умирают от этого заболевания Латентный РПЖ обнаруживается приблизительно у 25% мужчин в возрасте 40 лет [Давыдов M И , Аксель Е M , 2003, Заридзе Д Г, 1997, Матвеев Б П , Бухаркин Б В , Матвеев В Б, 1999]
В последние годы оптимизация оценки прогноза РПЖ и разработка эффективных схем противоопухолевой терапии связаны с поиском новых методов диагностики, среди которых особо важное место занимают биологические маркеры (сигнальные молекулы), синтезируемые в клетках уротелия и предстательной железы Иммунологическая верификация этих маркеров в ткани опухолей у онкологических больных позволяют во многих случаях своевременно выявить злокачественную опухоль и оценить степень ее прогрессии, инвазии, вероятности метастазирования и возникновения рецидивов
В исследованиях последних лет показано участие биологически активных соединений (цитокинов), в частности, интерлейкина-6 (ИЛ-6) в патогенезе РПЖ Как известно, биологическая активность ИЛ-6 осуществляется после его связывания с высокоаффинным рецепторным комплексом, состоящим из двух мембранных гликопротеидов 80 kDa (непосредственно связывающего ИЛ-6) и 130 kDA (обеспечивающего высокую аффинность связывающего комплекса) Роль ИЛ-6 при опухолях заключается в том, что он способствует пролиферации клеток и оказывает антиапоптотическое действие [Тупицын H H , 1998, Autissier Р , De Vos J , Liautard J , Tupitsyn N et al,
1998 Harris KA, Reese DM, 2001, Palmer J, Hertzog PJ, Hammacher A, 2004]
Клетки нормального эпителия предстательной железы рецептора для ИЛ-6 на мембране не имеют и, поэтому, неспособны к ответу на данный ци-токин При доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) клетки стромы продуцируют ИЛ-6, а эпителиальные клетки приобретают рецептор ИЛ-6 на мембране, и, таким образом, становятся подверженными пролиферативному и антиапоптотическому действию цитокина Таким образом, при ДГПЖ ИЛ-6 оказывает паракринное ростовое влияние на клетки эпителия предстательной железы На этапе же малигнизации происходит качественное изменение экспрессии эпителиальных клеток - они становятся способными сами продуцировать ИЛ-6 Именно таким образом клетки, на мембране которых имеются рецепторы к ИЛ-6, приобретают независимость от экзогенного ИЛ-6, т е на этом этапе уже идет речь об аутокринной регуляции опухолевого роста [Siegsmung М J et al, 1994, Тупицын Н Н, 2000, Palmer J et al, 2004]
Помимо человеческого, существует и вирусный ИЛ-6, ген которого находится в геноме человеческого герпес вируса 8 типа (HHV-8) Вирусный ИЛ-6 гомологичен человеческому на 25% В предстательной железе здоровых лиц гены HHV-8 не выявляются Однако у больных СПИДом в ткани предстательной железы наблюдается персистенция HHV-8, и методом гибридизации in situ было показано, что в отдельных случаях в железистом эпителии предстательной железы наблюдается экспрессия некоторых генов латентной инфекции HHV-8 [Гурцевич В Э , 2004, Гурцевич В Э , Кадырова Е Л, 2004]
Однако данные о наличии генома HHV-8 в опухолевой ткани РПЖ и об особенностях экспрессии вирусного ИЛ-6 при РПЖ отсутствуют Получение сведений такого рода позволит глубже понять роль HHV-8 в патогенезе
РПЖ, идентифицировать опухоли, продуцирующие ИЛ-6, и разработать новые методы их патогенетической терапии
Цель исследования, изучение наличия генов ННУ-8 и экспрессии человеческого и вирусного интерлейкинов-6 в ткани аденокарциномы предстательной железы
Задачи исследования:
1 Оценить наличие ННУ-8 в образцах ткани РПЖ
2 Изучить экспрессию человеческого ИЛ-6 в образцах РПЖ методом ОТ-ПЦР
3 Оценить наличие гена К2 и экспрессию вирусного ИЛ-6 в образцах ткани РПЖ
4 Охарактеризовать особенности нуклеотидного состава ДНК гена вирусного ИЛ-6 ННУ-8, выделенной из ткани РПЖ
5 Изучить взаимосвязь экспрессии человеческого ИЛ-6 в образцах ткани РПЖ с его основными клиническими характеристиками
Научная новизна работы. Впервые установлен факт наличия генома и экспрессии ИЛ-6 в тканях РПЖ
Впервые обнаружены гены вирусного ИЛ-6 в образцах опухолевой ткани у 12% пациентов и ОЯР-26 у 6% пациентов, страдающих РПЖ, что может свидетельствовать о патогенетической роли этого вирокина при раке предстательной железы
Впервые показано, что трансформирующий ген К1 ННУ-8 в ткани РПЖ отсутствует даже при наличии других фрагментов генома ННУ-8
Впервые выявлены нуклеотидные замены в ДНК гена вирусного ИЛ-6, присутствующего в ткани РПЖ, которые отражаются на аминокислотном составе вирокина в одном случае - замена 192Асп —» 192Асп, в другом - 3 аминокислотные замены 16Лей—>16Про, 70Фен—>-70Тир,
90Глу—*90Асп Часть из этих аминокислот находится в сайтах связывания вирокина с рецептором, что может влиять на функцию вирусного ИЛ-6
Впервые показано, что продукция человеческого ИЛ-6 обнаруживается в опухолевой ткани у 70% пациентов, страдающих РПЖ
Установлено, что экспрессия человеческого ИЛ-6 ассоциируется с большей агрессивностью распространенностью РПЖ Так, практически у всех больных в «ИЛ-6 позитивной» группе опухоли крупного размера (ТЗ и Т4), наблюдается поражение обеих долей, достоверно большая частота случаев с высокой степенью дисплазии железистого эпителия, преобладание низкодифференцированных аденокарцином и достоверно более высоких уровней ПСА в сыворотке крови
Практическая значимость работы. Полученные данные, в частности, выявление экспрессии ИЛ-6 в тканях РПЖ, могут служить дополнительным критерием идентификации наиболее агрессивных форм РПЖ, что в свою очередь может быть полезным при выборе адекватных подходов к лечению, основанных на блокаде продукции или биологического действия ИЛ-6
В случаях выявления фрагментов генома ННУ-8 в ткани РПЖ целесообразно изучать вопрос о показаниях к противовирусной терапии Вирусные белки (вирусный ИЛ-6, продукт гена К2), в случае их экспрессии в ткани РПЖ, могут явиться потенциальной мишенью иммунотерапии
Личное участие диссертанта в разработке проблемы. Автором было проведено обследование и лечение 85 пациентов различных возрастных групп, в основную группу вошло 17 пациентов с гистологически верифицированным диагнозом — аденокарцинома предстательной железы В ходе сбора материала для диссертационной работы Рыбальченко А В были освоены все необходимые лабораторные и инструментальные методы диагностики, консервативные и оперативные способы лечения аденокарциномы предста-
тельной железы Выбор методов исследования, планирование и проведение различных исследований, выполнение расчетов, обработка и обсуждение результатов, оформление диссертации и автореферата выполнены автором самостоятельно
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1 Применение метода ПЦР с ДНК, выделенной из образцов ткани РПЖ, позволило обнаружить комбинации генов ННУ-8, среди которых присутствовал ген вирусного ИЛ-6 Показано, что геном вируса неполноценен -отсутствует ген К1, присутствуют гены К2 и СЖР-26
2 Особенностями нуклеотидного состава гена вирусного ИЛ-6 в сравнении с последовательностями, приводимыми Генбанком, являются, как нуклеотидные замены, не ведущие к изменению аминокислотного состава вирусного ИЛ-6 (36С—>36А, 306Т—>306С), так и замены, ведущие к изменению структуры белка Последние ведут к изменениям двух типов а) вне функциональных сайтов цитокина (5740—о74А и 209Т—>209А, 47Т—>47С), б) в составе функциональных сайтов цитокина (27(Ю—>270Т)
3 У 70% пациентов, страдающих РПЖ, опухоль продуцирует человеческий ИЛ-6 ИЛ-6 позитивный РПЖ характеризуется большей агрессивностью и распространенностью опухолевого процесса
Апробация работы. Основные положения настоящей работы обсуждены на заседании кафедры урологии и хирургической андрологии ГОУ ДПО «РМАПО РОСЗДРАВА»
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы, в том числе 1 работа в журнале, рекомендованном ВАК Министерства образования и науки РФ
Внедрение результатов работы в практику. Предложенный новый метод определения ИЛ-6-продуцирующего РПЖ внедрен в клиническую практику урологических отделений ГКБ им С П Боткина
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов, 3 глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 177 источников (15 отечественных и 162 зарубежных) Работа иллюстрирована 20 таблицами, 5 диаграммами и 6 рисунками
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования
Исследование выполнено на кафедре урологии и хирургической андро-логии РМАПО совместно с лабораторией иммунологии гемопоэза РОНЦ им Н Н Блохина РАМН в 2004-2007 годах
Материалом исследования явились образцы биопсийного материала гистологически верифицированного РПЖ, полученные от 17 больных, находившихся на лечении в отделении урологии КБ им СП Боткина
Верификацию диагноза РПЖ проводили путем сбора анамнеза больных, их физикального обследования, морфологического исследования пункционного биоптата и хирургически удаленной опухоли, определения уровня ПСА в сыворотке крови, проведения УЗИ, ТРУЗИ, КТ, МРТ органов малого таза и сцинтиграфии костей скелета Морфологическая верификация РПЖ осуществлялась в патологоанатомическом отделении ФГУ «МНИОИ им П А Герцена Росмедтехнологий»
Все пациенты находились в возрасте старше 50 лет Средний возраст пациентов в исследуемой группе составил - 62,5±3,5 года
Сроки наблюдения за пациентами варьировали от 6 месяцев до 3 лет
Размеры опухоли у пациентов в исследуемой группе составляли 1,0 - 7,0 см в диаметре
У 4 пациентов опухоль находилась в пределах капсулы, у 7 пациентов наблюдалось поражение семенных пузырьков, у 6 пациентов опухоль прорастала за пределы капсулы
У 10 (59%) пациентов была поражена одна доля предстательной железы, а у 7 (41%) - обе доли
У 10 (59%) пациентов имела место высокая и умеренная степень диф-ференцировки клеточных элементов опухоли, а у 7 (41%) пациентов - низкая
У 13 (76%) пациентов наблюдалась аденокарцинома с инфильтратив-ным ростом, а у 4 (24%) пациентов - ацинарная аденокарцинома.
У 14 (82%) пациентов была 1-2 стадия РПЖ, а у 3 (8%) пациентов -распространенная (см таблицу № 1)
В эксперименте были использованы стандартные методы выделения ДНК и РНК, полимеразной цепной реакции (ПЦР) и обратной транскрипции Секвенирование ДНК проводили в Межинститутском Центре коллективного пользования «ГЕНОМ» ИМБ РАН (http //www genome-centre narod ru/), организованном при поддержке РФФИ (грант №00-0455000)
Таблица № 1
Распределение больных в зависимости от стадии РПЖ
Стадия Количество больных
Абс %
Т1с1Ч0М0 1 5,8
ПсЫхМО 2 11,6
Т2ЫхМ0 1 5,8
Т2ЫхМх 1 5,8
Т2аЫхМ0 2 11,6
Т2ЬЫхМО 2 11,6
Т2сШМ0 2 11,6
Т2сЫхМ0 3 17,4
ТЗаШМО 1 5,8
ТЗаЫхМО 1 5,8
Т4ЫхМх 1 5,8
Всего 17 100,0
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Результаты одновременного изучения экспрессии человеческого и вирусного ИЛ-6 тканью РПЖ суммированы в таблице № 2 В качестве положительного контроля изучалась мРНК Р-глобина (100% положительный результат)
Таблица № 2
Результаты ПЦР с обратной транскрипцией с РНК, выделенной из образцов аденокарциночы предстательной железы
Пациент Экспрессия мРНК
Ы1-6 \lL-6 р-%1оЫп
ВИ - - +
ТБ + - +
МИ + - +
ТК - - +
КО + - +
АМ + - +
МА - - +
ЭЛ + - +
БО + - +
АТ + - +
Как видно в таблице № 2, экспрессия вирусного ИЛ-6 не наблюдалась ни в одном из исследованных случаев. Экспрессия же человеческого ИЛ-6 была обнаружена у 70% пациентов. Полученные данные свидетельствует о том, что ИЛ-6 непосредственно секретируется in situ тканью РПЖ. Следовательно, концентрация ИЛ-6 в ткани опухоли является достаточной для индукции пролиферации или антиапоптотического эффекта в опухолевых клетках.
На рисунке 1 представлены результаты RT-PCR у 10 больных РПЖ, свидетельствующие о том, что даже следовых уровней экспрессии vIL-б не наблюдается.
маркер- 12 3 4 5 6 7 8
615п,о Йгш
А
Рисунок 1. Экспрессия мРНК ЫЬ-6 и у1Ь-6 при РПЖ. Экспрессия ЫЬ-6 - полосы 3, 5 (А), 1, 3, 7 (Б), 1, 3 (В). Отсутствие экспрессии у1Ь-6 - полосы 2, 4, 6, 8 (А, Б), 2, 4 (В), положительный контроль на экспрессию мРНК у1Ь-6 в линии клеток ВС-3 - линия 8 (В).
Анализ на наличие последовательностей вируса герпеса человека 8 типа дал положительный ответ у 2-х пациентов (см. таблицу № 3). У пациента МК были обнаружены ген у1Ь-6 и ген ОШ7-26. А у пациента ЧН только ген
Таблица № 3
Характеристика результатов ПЦР с ДНК, выделенной из образцов РПЖ
Пациент Гены ННУ-8 +контроль
у1Ь-6 ОКГ26 К1 вАРОИ
КВ - - - +
КС - - - +
мк + + - +
ви - - - +
ТБ - - - +
ВФ - - - +
МИ - - - +
тк - - - +
ФЯ - - - +
ЧН + - - +
БК - - - +
ко - - - +
АМ - - - +
МА - - - +
ЭЛ - - - +
БО - - - +
АТ - - - +
Учитывая имеющиеся на сегодняшний день экспериментальные знания о том, что продукция ИЛ-6 клетками РПЖ связана с поздними этапами опухолевой прогрессии и агрессивностью течения, мы провели клиническую и морфологическую характеристику указанных групп больных
Возраст больных в группах с продукцией ИЛ-6 опухолевой тканью и без таковой не различался и составил 63,0 ± 2,5 и 64,7 ± 3,8 лет соответственно (р = 0,73)
В таблице № 4 показано, что у 28,6% пациентов с экспрессией ИЛ-6 тканью РПЖ наблюдались опухоли крупных размеров, соответствующие индексам ТЗ и Т4 по ТЫМ В группе больных с отсутствием продукции ИЛ-6 опухолевой тканью опухолей ТЗ и Т4 не наблюдали Напротив, при отсутствии секреции ИЛ-6 тканью РПЖ у 1 из 3 (33%) пациентов имела место опу-
холь Т1, чего не наблюдалось ни в одном случае в более многочисленной группе с продукцией ИЛ-6 Что касается индекса Т2, то пациенты этой группы встречались с равной частотой вне зависимости от наличия или отсутствия продукции ИЛ-6 опухолевой тканью (71% и 67% соответственно) В целом эти данные не противоречат представлениям о продукции ИЛ-6 на более поздних стадиях РПЖ, однако, взаимосвязь не носит достоверного характера, необходимо накопление большего числа наблюдений
Таблица 4
Распределение больных в соответствии с размером опухоли в зависи-
мости от экспрессии ИЛ-6 опухолевой тканью
Экспрессия ИЛ-6 Индекс Т по Т^
Т1 Т2 ТЗ Т4
Отсутствует 1 2 0 0
33% 67% 0% 0%
Присутствует 0 5 1 1
0% 71,40% 14,30% 14,30%
В анализируемой группе больных при проведении гистологического исследования не обнаружено метастазов в удаленных лимфоузлах (индекс N0 во всех случаях) Отдаленные метастазы также отсутствовали у всех больных (МО во всех случаях) Следовательно, проведение сопоставлений по этим признакам в зависимости от продукции ИЛ-6 не представлялось возможным
У большинства больных (6 из 10) были поражены обе доли предстательной железы Интересно отметить, что у 3 из 4 пациентов с поражением одной доли предстательной железы продукция ИЛ-6 опухолевой тканью отсутствовала Иными словами, во всех случаях РПЖ с отсутствием секреции цитокина опухолевой тканью была поражена только одна доля предстатель-
ной железы В случаях с продукцией цитокина опухолью частота поражения только одной доли составила 14%
Во всех случаях, изученных нами на предмет экспрессии человеческою ИЛ-6 опухолевой тканью, имел место инфильтративный рост аденокарцино-мы По этим причинам анализ в зависимости от гистологического типа опухоли и наличия или отсутствия инфильтративного компонента не представился возможным
Степень выраженности дисплазии неинвазивного компонента (PIN -prostatic intraepithelial neoplasia) в 4 случаях была низкой и в 6 - высокой Сравнение этого показателя с наличием продукции ИЛ- 6 опухолевой тканью выявило интересные ассоциации Во всех случаях с отсутствием продукции ИЛ-6 опухолевой тканью наблюдалась низкая степень выраженности дисплазии эпителия (ПИН), в то время как у больных с секрецией ИЛ-6 опухолевыми клетками, напротив, в 86% случаев отмечена высокая степень выраженности ПИН Несмотря на малочисленность выборки, взаимосвязь между признаками (выраженностью ПИН и продукцией ИЛ-6 РПЖ) носит достоверный характер при р = 0,011
Прорастание капсулы предстательной железы имело место у половины больных, обследованных нами на предмет экспрессии ИЛ- 6 человека опухолевой тканью (5 из 10) В группе больных без экспрессии ИЛ-6 тканью опухоли преобладали случаи (67%) с отсутствием прорастания капсулы, а при наличии продукции цитокина - случаи с прорастанием капсулы Однако достоверной связи между принаками не обнаружено
Периневральная инвазия опухоли имела место в половине случаев, изученных на предмет экспрессии ИЛ-6 человека (5 из 10) Связи этого признака с продукцией ИЛ-6 тканью РПЖ не отмечено
Прорастание семенных пузырьков отмечено лишь у 2 из 10 больных Взаимосвязь этого признака с продукцией ИЛ-6 тканью опухоли также отсутствовала.
Весьма интересные данные получены относительно взаимосвязи продукции ИЛ-6 опухолевой тканью и степенью дифференцировки клеток опухоли (баллом по Глисону) В анализируемой группе больных преобладали случаи с 5 и 7 баллами (по 3 наблюдения), 4 балла отмечено у 2 больных, 3 и 6 баллов - по 1 наблюдению При сравнении среднего балла по Глисону в группах с продукцией ИЛ-6 и с отсутствием таковой отмечено некоторое преобладание среднего балла у ИЛ-6-позитивных больных (5,8 и 4,7 соответственно) Однако различия не достоверны, р = 0,37
В случаях отсутствия секреции ИЛ-6 преобладали высокодифференци-рованные опухоли, а при наличии экспрессии цитокина, напротив, умеренно-и низкодифференцированные Учитывая тот факт, что при наличии 5 групп сравнения, выделяемых на основании балла Глисона, количество больных в каждой группе крайне малочисленно и недостаточно для статистического анализа, мы объединили пациентов с высокодифференцированными опухолями (балл 3 и 4) в одну группу, а пациентов с умеренно- и низкодифферен-цированными - в другую В этом случае более отчетливо наблюдалась взаимосвязь продукции ИЛ-6 со снижением степени дифференцировки опухолевых клеток, ассоциация близка к достоверной при р < 0,1
Однако даже большее значение имеет другой вытекающий из представленных данных феномен - отсутствие экспрессии ИЛ-6 при умеренно-дифференцированных аденокарциномах предстательной железы
Так, у больного Т при гистологическом исследовании удаленной предстательной железы в двух фрагментах левой доли обнаружен инфильтратив-ный рост умереннодифференцированной, преимущественно мелкоацинарной аденокарциномы с прорастанием в фиброзную капсулу, периневральным ростом, врастанием в семенники, 5 баллами по Глисону (3+2)
Следует отметить, что низкодифференцированных аденокарцином у пациентов с отсутствием продукции ИЛ-6 клетками опухоли мы не наблюдали
Важным диагностическим показателем при РПЖ являются сывороточные уровни простатоспецифического антигена (ПСА) Мы проанализировали уровни маркера в группах с продукцией ИЛ-6 клетками РПЖ и без таковой Несмотря на малочисленность групп сравнения уровни ПСА при наличии продукции ИЛ-6 опухолью были достоверно выше (в среднем 22,4 ± 5,2 и 6,4 ± 0,9 соответственно, р = 0,05)
Следующим этапом исследования явился анализ нуклеотидных последовательностей генов, кодирующих вирусный ИЛ-6, выделенных из клеток РПЖ Как уже указывалось, у 2 из 17 больных (12%) РПЖ в опухолевой ткани обнаружены гены ННУ-8 У пациента М обнаружены 2 из 3 изученных генов (К2 и (ЖР26), а у пациента Ч - один ген - К2 Гены К2 кодируют вирусный ИЛ-6
Мы провели анализ нуклеотидной последовательности генов К2 у обоих пациентов
В таблице 5 представлены нуклеотидные последовательности генов вирусного ИЛ-6 согласно данным Генбанка (у1Ь-6) и соответствующие последовательности генов К2 пациентов М и Ч Верхняя строка — последовательность гена вирусного ИЛ-6 (у1Ь-6) по данным Генбанка, М - последовательность гена К2 (вирусного ИЛ-6) больного М, Ч - последовательность гена К2 (вирусного ИЛ-6) больного Ч Нижний ряд - звездочками отмечено совпадение нуклеотидных последовательностей, пробел - нуклеотидные замены Для удобства восприятия представлена последовательность не кодирующей, а комплементарной цепи ДНК, соответствующая мРНК, если заменить тимин (Т) на урацил (и)
Рассмотрим более подробно нуклеотидные последовательности, выделенные из ткани рака предстательной железы больных
Как видно из представленных в таблице 6 данных у пациента М, лишь одна нуклеотидная замена в положении 574 вела к аминокислотной замене в положении 192 - замена аспарагина на аспарагиновую кислоту Замена в положении 574 приводит к замене аспарагина на аспарагиновую кислоту, что, в свою очередь, приводит к замещению незаряженной полярной группы на отрицательно заряженную аминокислоту в данном участке полипептида. При этом данный аминокислотный остаток находится довольно далеко от сайтов взаимодействия у1Ь-6 с др 130 и 1Ь6Я, следовательно, скорее всего, не влияет на функциональную активность вирокина.
Как видно в таблице 7, при анализе последовательности гена вирусного ИЛ-6, выделенного из опухолевой ткани больного Ч, все три нуклеотидные замены вели к изменению аминокислотного состава вирокина На сегодняшний день достаточно затруднительно судит о том, насколько данные аминокислотные замены могут сказаться на функциональных свойствах вирусного ИЛ-6 Указанные замены являются уникальными и не встречались в других опубликованных исследованиях
Интересно отметить, замена 90-й аминокислоты Глу—>Асп находится в непосредственной близости от сайта Ы-гликозилирования вирусного ИЛ-6 Как известно, негликозилированная форма вирокина обладает в 3-4 раза меньшей функциональной активностью, чем гликозилированная Вместе с тем, этот участок цитокина является функциональным сайтом, ответственным за связывание с рецептором ИЛ-6 (§р80) Вполне возможно, что модификации в данном функциональном сайте вирусного ИЛ-6 приводят к изменению сродства вирокина к §р80, что может сказаться на сигналинге через §р130, минуя §р80
Таблица 5
Сопоставление нуклеотидной последовательности генов вирусного ИЛ-б по данным Генбанка с последовательностями, выделенными из ткани
РПЖ пациентов Ми Ч
VII,- м ч 6 АТвТССТСОТТСАЛОТТСТССТСТСТСТТССТОаТСООТТСАСТССТССТАТСТССААСй АТОТССТССТТСААСТТСТОаТСТСТСТТССТССТАССТТСАСТССТЕЕТАТСТССААСС АТСТССТССТТСААСТТСТССГСТСТСТТССТССГСССТТСАСТСССССТАТСТССААСС *********************************** ********** *************
VII,- м ч 6 ССССССААСТТССССЕАССССССССАСТТТСААААССАТСТТСТСАТТСАСАСАСТСААТ СйССССААСТТСССССАССССССССАСТТТСААААССАТСТТСТСАТТСАСАСАСТСААТ ССССССААСТТСССССАССССССССАСТТТСААААССАТСТТСТСАТТСАСАСАСТСААТ ************************************************************
VII,- м ч 6 ТОСАТССТАТСССТСАТССАТСААТССТТСССССАССТСТСГТАСССТАСССССАТСТСС ТССАТССТАТСССТСАТССАТСААТССТТСССССАССТСТСГТАСССТАСССССАТСТСС ТССАТССТАТСССТСАТСбАТСААТССТТСССССАССТСТСТТАСССГАСССССАТСТСС ************************************************************
VII,- м ч 6 ААСССТАТТСТАСАССССССТССТАТТТТТСАТСТСАААСТАССАСССАТСААССАТАСТ ААООСТАТТСТАСАССССССТССТАТТТТТСАТСТСАААСТАССАСССАТСААСбАТАСТ ААСССТАТТСТАСАССССССТССТАТТТАТСАТСТСАААСТАССАСССАТСААССАТАСТ **************************** *******************************
VII,-М Ч 6 САТСАСТаССССТТААТАССАТТТААТСАЙАСТАССТСССТТАААААбСТСОССаАТССС САТСАСТСССССТТААТАССАТТТААТСАСАСТАССТСССТТАААААОСТСССССАТССС САТСАСТСССССГТААТАССАТТТААТСАТАСТАССТСССТТАААААССТСССССАТССС ***************************** ******************************
VII,- М ч 6 Т ТТТТТС ААТ ТСС АССТСТ ТСТТТААСТТ ТТТ ААССАСССАСТТТССААААТСАСТСАТА ТТТТТССДАТТСдАсдтйттЕТТТДДСТТТТТДДССДС5ЕддттТЕ(;ДАДДТСАдТ(-дтд ттттттдддттсддддтдттдтттддетттттддсддсддддтттддддддтсддтддтд
VII,- м ч 6 ААССТССАССТСАТССАССТТСТСАССААСАССТТАССАТСССАСАТАСАССААСАЕСТС ААССТССАССТСАТССАССТТСТСАССААСАССТТАССАТСССАСАТАСАССААСАССТС ААССТССАССТСАТССАССТТСТСАССААСАССТТАСЙАТСССАСАТАСАССААСАССТС
VII,- м ч 6 ААТААССТСАСТААСАСССАСТАСАСТССАСССАААТТТСАССССССТСТАТТАСССАСС ААТААССТСАСТААСАСССАСТАСАСТССАСССАААТТТСАССССССТСТАТТАСССАСС ААТААССТеАСТААСАСССАСТАСАСТССАСССАААТТТСАССОСССТСТАТТАСССАСС ************************************************************
VII,-М ч 6 СТТСАСССАСТТААСТАТТССОТСАОАСАСТТТССТТССТТТТАТСТТСТСАСТССААТС СТТСАСССАСТТААСТАТТСССТСАОАСАСТТТССТТСОТТТТАТСТТСТСАСТССААТС СТТСАСССАСТТААСТАТТСССТСАбАСАСТТТССТТССТТТТАТСТТСТбАСТбСААТС ************************************************************
VII,- М Ч 6 САДААСТТТССАОСТСААССССТСССТСТТТТССАСТСТАТСССАСАСвТСАСТССТСАС СААААСТТТССАССГСААССССТСССТСТТТТСААСТСТАТСССАСАССТСАСТССТСАС СААААСТТТССАССТСААССССТСССТСТТТТССАСТСТАТСССАСАССТСАСТССТСАС ********************************* **************************
VII,- м ч 6 СТССАССАТААСТАА вТССАССАТААвТАА СТССАССАТААОТАА ***************
Таблица 6
Анализ нуклеотидных замен в гене ИЛ-б пациента М
Нуклеотид №п/п Замена 36 С—А
306 Т->С
574 О—А
Кодон
№п/п Замена
12 вТС—>ОТА
102 ТТТ—>ТТС
192 ОАС—ААС
Аминокислота №п/п Замена 12 Вал—»Вал 102 Фен—»Фен 192 Асп—>Асп
Таблица 7
Анализ нуклеотидных замен в гене ИЛ-б пациента Ч
Нуклеотид Кодон Аминокислота
№п/п Замена №п/п Замена №п/п Замена
47 Т-»С 16 СТО^ССО 16 Лей—»Про
209 Т—А 70 ТТТ—>ТАТ 70 Фен—>Тир
270 в—Т 90 вАС—ЮАТ 90 Глу—>Асп
Таким образом, в 2 случаях обнаружения гена вирусного ИЛ-6 в ткани рака предстательной железы аминокислотный состав цитокина был практически идентичен таковому вирусного ИЛ-6, приводимому Генбанком У пациента М обнаружена лишь 1 аминокислотная замена (вероятнее - особенность штамма) У пациента Ч имели место 3 замены, судить о функциональной роли которых в настоящее время затруднительно
20
ВЫВОДЫ
1 В работе получены новые данные относительно экспрессии ин-терлейкина 6 человека, его вирусного гомолога и персистенции ННУ-8 в ткани рака предстательной железы человека
2 На тканевом уровне в образцах опухолевой ткани больных раком предстательной железы показана высокая экспрессия (70% случаев) интерлейкина 6 человека, что свидетельствует о возможности паракрин-ной или аутокринной регуляции опухолевого роста этим цитокином
3 При наличии продукции ИЛ-6 опухолевой тканью рак предстательной железы имеет признаки большей агрессивности или распространенности процесса Это заключается в большей частоте опухолей крупного размера (ТЗ и Т4) в ИЛ-6-позитивной группе, поражении обеих долей, достоверно большей частоте случаев с высокой степенью дисплазии железистого эпителия (ПИН), преобладании низкодифференцированных аде-нокарцином и достоверно более высоких уровнях ПСА в сыворотке крови больных
4 Патогенетическая роль вирусного интерлейкина 6 в развитии рака предстательной железы представляется весьма вероятной, так как в 12% случаев в опухолевой ткани присутствовал ген вирусного интерлейкина 6
5 Впервые установлена персистенция неполного вирусного генома в ткани рака предстательной железы человека
Обнаружены следующие комбинации генов К2+ ОИР26+ К1- и К2+ ОИР26- К1- Во всех изученных случаях отсутствовал трансформирующий ген ННУ-8 - К1
6 В ДНК гена вирусного ИЛ-6, присутствующего в ткани рака предстательной железы, имелись нуклеотидные замены (в сравнении с последовательностью, приводимой Генбанком), которые отражались на аминокислотном составе вирокина в одном случае - замена 192Асп —► 192Асп, в другом - 3 аминокислотные замены (16Лей—ЧбПро, 70Фен—>70Тир, 90Глу—>90Асп) Часть из этих аминокислот находится в сайтах связывания вирокина с рецептором, что может влиять на функцию вирусного ИЛ-6
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1 При неуклонном росте РПЖ в последние годы, представленный в данной работе метод по существу является способом более эффективной диагностики ИЛ-6 продуцирующих опухолей А именно - продукции ИЛ-6 при аденокарциноме предстательной железы, что в свою очередь определяет степень прогрессии и регуляции опухолевого роста данным цитокином
2 Результаты проведенного исследования в дальнейшем позволяют дать практические рекомендации по идентификации ИЛ-6 продуцирующих опухолей при аденокарциноме предстательной железы
3 Полученные данные позволят повысить спектр разрабатываемых методов консервативной терапии данного заболевания, основанных на блокаде рецепторов, обладающих высокой афинностью к ИЛ-6 а также подавлении биологического действия интерлейкинов-6 непосредственно на ткани
Список сокращений
1 hIL-6 - интерлейкин - 6 человека
2 vIl-6 - вирусный интерлейкин - 6
3 IL6R - а - цепь IL-6-рецепторного комплекса
4 gpl30 - в- цепь IL-6-рецепторного комплекса
5 HHV-8 - вирус герпеса человека 8 типа
6 PCR - полимеразная цепная реакция
7 RT-PCR - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Велиев Е И , Рыбальченко А В , Широков Д А , Тупицын И Н Нуклеотидные последовательности HHV-8 в ткани рака предстательной железы взаимосвязь с экспрессией интерлейкина 6 человека и его вирусного гомолога //Материалы научно-практической конференции онкологов и врачей общей лечебной сети // Оренбург - 2006г - С 85-91
2 Велиев Е И , Рыбальченко А В , Широков Д А , Тупицын Н Н
Роль интерлейкина 6 человека и его вирусного гомолога (HHV-8) в индукции нейроэндокринной дифференцировки рака предстательной железы //Материалы научно-практической конференции посвященной 60-летию Национального центра онкологии // Ереван - 2006г - С 83-85
3 Велиев Е.И., Рыбальченко A.B., Широков Д.А., Тупицын H.H. Экспрессия интерлейкина-6 человека и его вирусного гомолога в ткани рака предстательной железы. //Журнал «Онкоурология №1».// Москва -2007г.-С 65-68.
Подписано в печать 19 02 2008 г Тираж 100 экз Заказ № 420 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 www allapnnt ru
Оглавление диссертации Рыбальченко, Александр Владимирович :: 2008 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Современные представления о патогенезе рака предстательной железы
1.1. Распространенность рака предстательной железы
1.2. Генотипические и фенотипические особенности патогенеза рака предстательной железы
1.3. Особенности течения рака предстательной железы
1.4. Биологическое значение интерлейкина-6 и его роль в регуляции опухолевого роста
1.5. Патогенетическая роль интерлейкина 6 при раке предстательной железы
ГЛАВА 2 Материалы и методы
2.1. Характеристика материала исследования
2.2. Выделение ДНК
2.3. Выделение РНК
2.4. Полимеразная цепная реакция
2.5. Обратная транскрипция
ГЛАВА 3 Наличие генома HHV-8 и экспрессия человеческого и вирусного интерлейкина 6 опухолевой тканью при аденокарциноме предстательной железы
ГЛАВА 4 Продукция человеческого интерлейкина 6 клетками опухолевой ткани больных аденокарциномой предстательной железы: клинико-морфологический анализ
ГЛАВА 5 Нуклеотидные последовательности генов, кодирующих вирусный интерлейкин 6, выделенные из образцов клеток аденокарциномы предстательной железы
ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ
Введение диссертации по теме "Урология", Рыбальченко, Александр Владимирович, автореферат
Актуальность проблемы. Рак предстательной железы (РПЖ) сегодня представляет собой крупную медицинскую и социальную проблему. В России РПЖ ежегодно диагностируется практически у 18 тысяч мужчин и 37 тысяч мужчин ежегодно умирают от этого заболевания. Латентный РПЖ обнаруживается приблизительно у 25% мужчин в возрасте 40 лет [Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2003, Заридзе Д.Г., 1997, Матвеев Б.П., Бухаркин Б.В., Матвеев В.Б, 1999].
В последние годы оптимизация оценки прогноза РПЖ и разработка эффективных схем противоопухолевой терапии связаны с поиском новых методов диагностики, среди которых особо важное место занимают биологические маркеры (сигнальные молекулы), синтезируемые в клетках уротелия и предстательной железы. Иммунологическая верификация этих маркеров в ткани опухолей у онкологических больных позволяют во многих • случаях своевременно выявить злокачественную опухоль и оценить степень ее прогрессии, инвазии, вероятности метастазирования и возникновения,-рецидивов.
В исследованиях последних лет показано участие биологически активных соединений (цитокинов), в частности, интерлейкина-6 (ИЛ-6) в патогенезе РПЖ. Как известно, биологическая активность ИЛ-6 осуществляется после его связывания с высокоаффинным рецепторным комплексом, состоящим из двух мембранных гликопротеидов 80 kDa (непосредственно связывающего ИЛ-6) и 130 kDA (обеспечивающего высокую аффинность связывающего комплекса). Роль ИЛ-6 при опухолях заключается в том, что он способствует пролиферации клеток и оказывает антиапоптотическое действие [Тупицын Н. Н., 1998, Autissier P., De Vos J., Liautard J., Tupitsyn N. et al., 1998. Harris KA, Reese DM., 2001, Palmer J., Hertzog P.J., Hammacher A., 2004].
Клетки нормального эпителия предстательной железы рецептора для ИЛ-6 на мембране не имеют и, поэтому, неспособны к ответу на данный цитокин. При доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) клетки стромы продуцируют ИЛ-6, а эпителиальные клетки приобретают рецептор ИЛ-6 на мембране, и, таким образом, становятся подверженными пролиферативному и антиапоптотическому действию цитокина. Таким образом, при ДГПЖ ИЛ-6 оказывает паракринное ростовое влияние на клетки эпителия предстательной железы. На этапе же малигнизации происходит качественное изменение экспрессии эпителиальных клеток — они становятся способными сами продуцировать ИЛ-6. Именно таким образом клетки, на мембране которых имеются рецепторы к ИЛ-6, приобретают независимость от экзогенного ИЛ-6, т.е. на этом этапе уже идет речь об аутокринной регуляции опухолевого роста [Siegsmung MJ. et al., 1994; Тупицын Н. Н., 2000, Palmer J. et al., 2004].
Помимо человеческого, существует и вирусный ИЛ-6, ген которого находится в геноме человеческого герпес вируса 8 типа (HHV-8). Вирусный ИЛ-6 гомологичен человеческому на 25%. В предстательной железе здоровых лиц гены HHV-8 не выявляются. Однако у больных СПИДом в ткани предстательной железы наблюдается персистенция HHV-8, и методом гибридизации in situ было показано, что в отдельных случаях в железистом эпителии предстательной железы наблюдается экспрессия некоторых генов латентной инфекции HHV-8 [Гурцевич В.Э., 2004, Гурцевич В.Э., Кадырова Е.Л., 2004].
Однако данные о наличии генома HHV-8 в опухолевой ткани РПЖ и об особенностях экспрессии вирусного ИЛ-6 при РПЖ отсутствуют. Получение сведений такого рода позволит глубже понять роль HHV-8 в патогенезе РПЖ, идентифицировать опухоли, продуцирующие ИЛ-6, и разработать новые методы их патогенетической терапии.
Цель исследования: изучение наличия генов HHV-8 и экспрессии человеческого и вирусного ИЛ-6 в ткани аденокарциномы предстательной железы.
Задачи исследования:
1. Оценить наличие HHV-8 в образцах ткани РПЖ.
2. Изучить экспрессию человеческого ИЛ-6 в образцах РПЖ методом ОТ-ПЦР.
3. Оценить наличие гена К2 и экспрессию вирусного ИЛ-6 в образцах ткани РПЖ.
4. Охарактеризовать особенности нуклеотидного состава ДНК гена вирусного ИЛ-6 HI IV-8, выделенной из ткани РПЖ.
5. Изучить взаимосвязь экспрессии человеческого ИЛ-6 в образцах ткани1 РПЖ с его основными клиническими характеристиками.
Научная новизна работы. Впервые установлен факт наличия генома? и экспрессии ИЛ-6 в тканях РПЖ.
Впервые обнаружены гены вирусного ИЛ-6 в образцах опухолевой*-ткани у 12% пациентов и ORF-26 у 6% пациентов, страдающих РПЖ, что может свидетельствовать о патогенетической роли этого вирокина при раке предстательной железы.
Впервые показано, что трансформирующий ген К1 HHV-8 в ткани РПЖ отсутствует даже при наличии других фрагментов генома HHV-8.
Впервые выявлены нуклеотидные замены в ДНК гена вирусного ИЛ
6. присутствующего в ткани РПЖ, которые отражаются на аминокислотном составе вирокина: в одном случае - замена 192Асп —» 192Асп, в другом - 3 аминокислотные замены: 16Лей—»16Про, 70Фен—»70Тир, 90Глу—>90Асп. Часть из этих аминокислот находится в сайтах связывания вирокина с рецептором, что может влиять на функцию вирусного ИЛ-6.
Впервые показано, что продукция человеческого ИЛ-6 обнаруживается в опухолевой ткани у 70% пациентов, страдающих РПЖ.
Установлено, что экспрессия человеческого ИЛ-6 ассоциируется с большей агрессивностью распространенностью РПЖ. Так, практически у всех больных в «ИЛ-6 позитивной» группе опухоли крупного размера (ТЗ и Т4), наблюдается поражение обеих долей, достоверно большая частота случаев с высокой степенью дисплазии железистого эпителия, преобладание низкодифференцированных аденокарцином и достоверно более высоких уровней ПСА в сыворотке крови.
Практическая значимость работы. Полученные данные, в частности, выявление экспрессии ИЛ-6 в тканях РПЖ, могут служить дополнительным критерием идентификации наиболее агрессивных форм РПЖ, что в свою' очередь может быть полезным при выборе адекватных подходов к лечению, основанных на блокаде продукции или биологического действия ИЛ-6. <
В случаях выявления фрагментов генома HHV-8 в ткани РПЖ целесообразно изучать вопрос о показаниях к противовирусной терапии:-. Вирусные белки (вирусный ИЛ-6, продукт гена К2), в случае их экспрессии в ткани РПЖ, могут явиться потенциальной мишенью иммунотерапии.
Заключение диссертационного исследования на тему "Экспрессия человеческого и вирусного интерлейкинов-6 при аденокарциноме предстательной железы"
ВЫВОДЫ
В работе получены новые данные относительно экспрессии интерлейкина 6 человека, его вирусного гомолога и персистенции HHV-8 в ткани аденокарциномы предстательной железы человека.
На тканевом уровне в образцах опухолевой ткани больных раком предстательной железы показана высокая экспрессия (70% случаев) интерлейкина 6 человека, что свидетельствует о возможности паракринной или аутокринной регуляции опухолевого роста этим цитокином.
При наличии продукции ИЛ-6 опухолевой тканью рак предстательной железы имеет признаки большей агрессивности или распространенности процесса. Это заключается в большей частоте опухолей крупного размера (ТЗ и Т4) в ИЛ-6-позитивной группе, поражении обеих долей, достоверно большей частоте случаев с высокой. степенью дисплазии железистого эпителия (ПИН), преобладании низкодифференцированных аденокарцином и достоверно более высоких уровнях ПСА в сыворотке крови больных.
Патогенетическая роль вирусного интерлейкина-6 в развитии аденокарциномы предстательной железы представляется весьма вероятной, так как в 12% случаев в опухолевой ткани присутствовал ген вирусного интерлейкина-6.
5. Впервые установлена персистенция неполного вирусного генома в ткани аденокарциномы предстательной железы человека.
Обнаружены следующие комбинации генов К2+ ORF26+ К1- и К2+ ORF26- К1-. Во всех изученных случаях отсутствовал трансформирующий ген HHV-8 - К1.
6. В ДНК гена вирусного ИЛ-6, присутствующего в ткани рака предстательной железы, имелись нуклеотидные замены (в сравнении с последовательностью, приводимой Генбанком), которые отражались на аминокислотном составе вирокина: в одном случае - замена 192Асп —> 192Асп, в другом - 3 аминокислотные замены (16Лей—>16Про, 70Фен—>70Тир, 90Глу—>90Асп). Часть из этих аминокислот находится в сайтах связывания вирокина с рецептором, что может влиять на функцию вирусного ИЛ-6.
ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
В настоящей работе мы поставили перед собой задачу изучить возможную этиологическую и патогенетическую роль герпес-вируса человека 8 типа в развитии рака предстательной железы. Говоря о патогенетической роли, мы, в первую очередь, имели в виду наличие и экспрессию в ткани рака предстательной железы гена вирусного интерлейкина 6, содержащегося в геноме HHV-8.
Основанием для проведения работы явились накопленные на сегодняшний день знания относительно патогенетической роли интерлейкина 6 человека и функциональное сходство с ним вирусного гомолога ИЛ-6, кодируемого в геноме HHV-8.
Представления о роли интерлейкина 6 человека основываются на знаниях, полученных при исследовании клеточных линий рака предстательной железы (андрогензависимых и андрогеннезависимых), а также клеток предстательной железы при доброкачественных гиперплазиях и раке. Результаты этих исследований убедительно доказали ассоциацию зависимости роста клеток рака предстательной железы от интерлейкина-6 с опухолевой прогрессией: доброкачественная гиперплазия предстательной железы —> андроген-зависимый рак предстательной железы —> андроген-независимый рак предстательной железы.
Эпителиальные клетки нормальной предстательной железы и гиперплазированного эпителия предстательной железы в своем росте и дифференцировке не зависят от интерлейкина 6. Это обусловлено тем, что на. мембране клеток нормального эпителия предстательной железы отсутствуют а-цепи специфического рецептора для интерлейкина 6 (IL-6R, gp80, CD126). Именно рецептор gp 80 специфически связывается с экзогенным интерлейкином 6. Однако наличия одного этого рецептора на мембране клеток не достаточно для осуществления сигнала ИЛ-6 в клетке.
Дело в том, что IL-6R принадлежит к семейству цитокиновых рецепторов I типа. кДНК IL-6R кодирует 468 аминокислот, из которых 19 составляют сигнальный пептид, 339 — внеклеточную часть, 28 — I трансмембранную и оставшиеся 82 — короткую цитоплазматическую часть. Именно отсутствием сигнальных доменов и сайтов фосфорилирования в коротком цитоплазматическом домене, IL-6R обусловлена неспособность IL-6R передавать сигнал внутрь клетки после связывания со специфическим линандом (интерлейкином 6). Зрелая форма IL-6R с молекулярной массой 80 кДа образуется из предшественника массой 50 кДа путем N-гликозилирования по трем сайтам. Кроме того, в. молекуле присутствуют 4 дисульфидных связи [Cole et al., 1999]. N-терминальный участок IL-6R представляет собой иммуноглобулин-подобный домен. Однако он не участвует в связывании IL-6 и gpl30, и его делеция не нарушает межмолекулярные взаимодействия. Оставшийся.^ внеклеточный участок разделен на два фибронектиновых домена III типа, каждый из которых состоит из приблизительно 100 аминокислот, составляющих 7 (3-тяжей, расположенных антипараллельно и формирующих бочкообразную структуру. В дистальном фибронектиновом домене расположены 4 консервативных цистеиковых остатка, а в ближнем к мембране - мотив триптофан-серин-Х-триптофан-серин (WSXWS). Таким образом, эти два домена формируют цитокин-связывающий модуль, который является характерной особенностью рецепторов этого семейства. IL-6R содержит также I трансмембранный и цитоплазматический домены. Последний не способен передавать сигнал внутрь клетки и состоит всего из 82 остатков [Kishimoto et al., 1995].
Показано, что даже без цитоплазматического домена данный рецептор способен к нормальному взаимодействию с IL-6 и gpl30 [Taga et al., 1989].
Интерлейкин 6 человека, согласно представленным выше положениям, может иметь патогенетическое значение на достаточно поздних этапах опухолевой прогрессии - только у тех больных раком предстательной железы, на мембране злокачественных клеток которых появляется экспрессия специфических а-цепей рецептора интерлейкина 6.
По этим причинам огромное внимание привлекают возможные этиологические факторы развития рака предстательной железы и онкогены, влияющие на рост и прогрессию злокачественных клеток на ранних этапах развития опухоли. В этой связи представляется совершенно непонятным, почему практически отсутствуют данные об этиологической и патогенетической роли HHV-8 при раке предстательной железы.
Вирус герпеса человека 8 типа - это последний из открытых • онкогенных вирусов. Он был выделен из ткани больного саркомой Капоши в 1994 году. Для 3 заболеваний ассоциация с ними HHV-8y доказана - саркома Капоши, болезнь Кастельмана, первичная лимфома серозных полостей. Для неходжкинских лимфом [Klussman et al., 2000; Gessain et al., 1997; Otsuki et al., 1996; Leach et al., 1999; Engels et al., 2001], пемфигуса [Memar et al., 1997], гемофагоцитарного синдрома [Low et al., 1998; Pastore 2000], болезни Кикучи [Huh et al., 1998] и саркоидоза [Di Alberti et al.,1997] патогенетическая роль HHV-8 не доказана.
Что касается рака предстательной железы, то исследования в этой области немногочисленны. Известно, что одним из резервуаров HHV-8 в организме человека является предстательная железа. Выполненные с помощью гибридизации in situ исследования показали, что в железистом эпителии простаты лиц из эндемичных по HHV-8 регионов могут быть экспрессированы некоторые гены латентной инфекции HHV-8 [1,2].
Маркеры HHV-8 — вирус-специфические антитела и/или нуклеотидные последовательности вируса — были обнаружены в сыворотке крови и эякулятах значительного числа пациентов с различной патологией простаты [1, 2]. О возможной роли HHV-8 в патогенезе РПЖ свидетельствует тот факт, что уровни антител к HHV-8 у больных РПЖ достоверно выше, чем у здоровых лиц [76].
Подтверждена возможность персистенции вируса в группах здоровых лиц и его активации в условиях иммуносупресии. Высокая частота выявления HHV-8 в эякуляте здоровых доноров жителей Италии, которая также является эндемичным по KS регионом, не исключает возможности полового пути передачи данной инфекции. В связи с этим представляют интерес данные о том, что у 13 из 30 ВИЧ-позитивных^ пациентов с наличием в эякуляте HHV-8 в течение 5 лет развилась KS, тогда как в эякуляте 30 ВИЧ-негативных пациентов без HHV-8 в те же-сроки наблюдения KS не развилась ни в одном случае.
Проведенные исследования отечественных авторов и полученные; ими данные свидетельствуют о том, что ткани урогенитального тракта в некоторых случаях могут быть местом латенции HHV-8. При этом высокая частота хронических воспалительных поражений мочеполовых органов в группе больных с KS должна рассматриваться в качестве фактора, нарушающего гематотестикулярный барьер и тем самым способствующего проникновению в эякулят клеток воспаления, включая инфицированные HHV-8 В-лимфоциты. Необходимо учитывать роль хронического воспаления в снижении общего иммунитета и местного иммунного контроля в тканях репродуктивной системы. Такое воспаление может приводить к активации персистирующего там HHV-8. Установлено, что до 10% вирусов HHV-8, выявляемых в очагах поражения KS, находятся в литической фазе, в связи с чем, этот вирус должен с высокой частотой обнаруживаться в лимфоцитах периферической крови. Однако HHV-8 в лимфоцитах периферической крови выявляется, как правило, только у больных с выраженной иммуносупрессией (СПИД-ассоциированным и иммуносупрессивным типом заболевания), тогда как у пациентов с другими типами KS инфицированные клетки содержатся в очагах поражения в эякуляте, а из крови, по-видимому, достаточно эффективно элиминируются. HHV-8 обнаруживали в эякуляте только при наличии у больных с KS хронического воспалительного процесса мочеполовых органов (хронический уретропростатит). Таким образом, эякулят у больных с KS является естественным резервуаром инфекции HHV-8. Инфицированные вирусом HHV-8 лимфоциты проникают в эякулят и сохраняются в нем в условиях аккумуляции CD8+ Т-лимфоцитов, ингибирующих иммунный ответ не только на сперматозоиды, но и на эти инфицированные клетки.
Для проверки возможного участия HHV-8 в трансформации эпителиальных клеток предстательной железы (малигнизации) мы изучили 17 случаев рака (аденокарциномы) предстательной железы на предмет наличия генов вируса герпеса человека 8 типа в опухолевой ткани. С целью подтвердить наличие геномов HHV-8 в ткани аденокарциномы предстательной железы мы поставили ПЦР на выявление в клетках ДНК 3 генов-мишеней: К2 (ген, кодирующий vIL-6), ORF26 (ген большого капсидного белка вируса) и К1 (ген, кодирующий трансмембранный белок, участвующий в трансформации клеток). Гены-мишени были подобраны таким образом, чтобы расстояния- между ними в вирусном геноме были достаточно большими и, следовательно, можно было с большей вероятностью оценить наличие в клетке полноценных геномов
HHV-8. Также известно, что все 3 гена необходимы для продуктивной репликации вируса.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Рыбальченко, Александр Владимирович
1. Лопаткин Н.А. (ред.) Руководство по урологии. Т. З.-М: Медицина, 1998. -671 с.
2. Лоран О.Б., Пушкарь Д.Ю., Франк Г.А. Простатспецифический антиген и морфологическая характеристика рака предстательной железы. -М.: Мед-пресс, 1999. 143 с.
3. Матвеев Б.П. Клиническая онкоурология /'М. 2003.-С.435-601. Матвеев Б.П., Бухаркин Б.В., Матвеев В.Б. Рак предстательной железы/М.1999.- С. 106-125.
4. Мерабишвили В.М. (ред.). Деятельность онкологической службы Санкт- Петербурга в 2000 г. СПб, 2001. - 23 с.
5. Тупицын Н. Н. /В кн.: Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека. (Руководство для врачей-морфологов), Ред. Петров С.В., Киясов А.П. // Изд-во "Дом печати", Казань 1998, -С.138 153.
6. Тупицын Н.Н. Роль рецептора цитокинов gpl30 в росте и дифференцировке нормальных и опухолевых гемопоэтических клеток I. Общие сведения. Функциональные эпитопы gp 13 0/80 рецепторного комплекса. Гематология и трансфузиология. 2001. Т.46, №4, С.9-14.
7. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Эпидемиология и биология рака предстательной железы. Практическая онкология, № 2(6), 2001.
8. Харченко В.П., Каприн А.Д., Гафанов Р.А. Гормоно-резистентныйрак предстательной железы. Возможности лечения // Андрология игенитальная хирургия. М., 2001. - №4: - С.13-18.
9. Широков Д.А. Экспрессия интерлейкина-6 человека и его вирусного гомолога при неходжкинских лимфомах и множественной миеломе. Автореф. Дис. Канд. биол. Наук. 2006. -32С.
10. Abate Shen С., Shen М.М. Molecular genetics of prostate cancer// Genes Dev.-2000-Vol. 14. P. 2410-2434.
11. Albertsen PC, Fryback DG, Storer BE, et al. The impact of co-morbidity on life expectancy among men with localized prostate cancer. J Urol 1998; 156:127-32.
12. Albreht W, Horenblas S, Marechal JM, et al. EMP versus EMP/VBL Chemotherapie beim hormonrefraktaren prostatakarzinom. Urol A 1998; 37:32.
13. Anderson J. Treatment of Prostate Cancer The Role of Primary Hormonal Therapy. EAU Update Series 1 (2003)32-39.
14. Aoki Y., Narazaki M., Kishimoto Т., Tosato G. (2001) Receptor engagement by viral interleukin-6 encoded by Kaposi sarcoma-associated herpesvirus. Blood, 98, 3042-3049.
15. Autissier P., De Vos J., Liautard J., Tupitsyn N. et al. // International Immunology. 1998. Vol.10.
16. Barton J, Blackledge G, Walkeling A. Growth factors and their receptors: new targets for prostate cancer therapy. Urology 2001; 58(suppl 2A): 11422.
17. Berry W, Dakhil S, Gregurich MA, et al. Phase II trial of single agent weekly docetazel in hormone-refractory, symptomatic, metastatic carcinoma of the prostate. Semin Oncol 2001 ;28 (4 Suppll5):8-15.
18. Body JJ, Bartl R, Burckhardt P. Current use of bisphosphonates in oncology. J Clin Oncol 1998; 16:3890-9.
19. Bolla M, Collette L, Blank L, et al. Long-term results with immediate androgen suppression and external irradiation in patients with locally advanced prostate cancer. Lancet 2002; 360:103-8.
20. Boulanger M. J., Chow D., Brevnova E., Martick M., Sandford G., Nicholas J., Garcia К. C. (2004) Molecular mechanisms for viral mimicry of a human cytokine: activation of gpl30 by HHV-8 interleukin-6. J. Mol. Biol., 335, 641-654.
21. Bravo J., Heath J. K. (2000) Receptor recognition by gpl30 cytokines. EMBO J., 19, №11, 2399-2411.
22. Brawer MK, Chetner MP, et al. Screening for prostate carcinoma i: with prostate-specific antigen. J. Urol. 1992; 147:841.
23. Bruchovsky N, Goldenberg SL, Akakura K, et al. Luteinizing hormone-releasing hormone agonists in prostate cancer. Elimination of flare reaction by pretreatment with cyproterone acetate and low-dose diethylstilbestrol. Cancer 1993; 72:1685-91.
24. Carter HB, Pearson JD, Metter EJ et al. Longitudinal evaluation of prostate-specific antigen levels in men with and without prostate disease. J am Med Assoc 1992; 267:2215-20.
25. Catalona WJ, Smith DS, et al. Measurment of prostatespecific antigen in serum as a screening test for prostate cancer. N Engl J Med 1991; 324:1156.
26. Chow D.-C., He X.-L., Snow A. L., Rose-John S., Garcia К. C. (2001) Structure of an extracellular gpl30 cytokine receptor signaling complex. Science, 291, 2150-2155.
27. Clarke NW, McClure J, George NJR, et al. Morthometric evidence for bone resorption and replacement in prostate cancer. Br J Urol 1991; 68:74-80.
28. Cole A. R, Hall N. E., Treutlein H. R., Eddes J. S., Reid G. E., Moritz R. L., Simpson R. J. (1999) Disulfide bond structure and N-glycosylation sites of the extracellular domain of the human interleukin-6 receptor. J. Biob.Chem., 274:7207-7215.
29. Corbellino M., Bestetti G., Galli M. et al. Absense of HHV-8 in prostate and semen. N.EnglJ.Med. -1996. -335(16). -P.1237.
30. Correa Cerro L., Berthon P., Haussler J. et al. Vitamin D receptor polymorphisms as markers in prostate cancer// Hum. Genet. — 1999:* -Vol. 105.-P. 281-287.
31. Crawford ED, Roseblum M, Ziada AM, et al. Overview: hormone-refractory prostate cancer. Urology 1999; 54(Suppl 6A):l-7.
32. Culiq Z., Hobisch A., Crohaner M.V. et al. Androgen receptor activation in prostatic tumour cell lines by insuline like growth factor 1, keratinocyte growth factor, and epidermal growth factor// Cancer Res. 1994. - Vol. 54.-P. 5474-5478.
33. Dahut WL, Arlen PM, Gulley J, et al. A randomized phase II trial of docetaxel plus thalidomide in androgen-independent prostate cancer. Proc ASCO 2002; 21:183a Abstract 730.
34. De Mulder P, Sclken J, Sternberg C. Treatment options in hormone resistant prostate cancer. Ann Oncol 2002; 13(Suppl 4):95-102.
35. Devies M.A., Koul D., Dhesi H. et al. Regulation of Ant/PKB activity, cellular growth, and apoptosis in prostate carcinoma cells by MMAC/PTEN// Cancer Res. 1999. - Vol. 59. - P. 2551-2556.
36. Di Alberti, L., A. Piattelli, L. Artese, G. Favia, S. Patel, N. Saunders, S. R. Porter, С. M. Scully, S. L. Ngui, and C. G. Teo. 1997. Human herpesvirus 8 variants in sarcoid tissues. Lancet 350:1655—1661.
37. Eastham JA, Chen SH, Sehgal I, et al. Prostate cancer gene therapy: HSV-tk gene transduction followed by ganciclovin in the mouse prostate reconstitution model. J Urol 1995; 153:307A.
38. Eastham JA, Kattan MW, Rogers E, et al. Risk factor for , urinary incontinence after radical prostatectomy. J Urol 1996; 156:1707-13.
39. Ellerhorst JS, Tu SM, Amato RJ, et al. A phase II trial of alterating,weekly chemohormonal therapy for patients with androgen-independent prostate cancer. Clin Cancer Res 1997; 3:3271.
40. Emilie D., Coumbaras J., Raphael M. et al. // Blood. -1991.Vol. 80.P. 498504.
41. Emilie D., Peuchmaur M., Maillot M. C. et al., //J. Clin. Invest. -1990.Vol. 86.P.148-159.
42. Engels, E. A., P. S. Rosenberg, M. Frisch, and J. J. Goedert. 2001. Cancers associated with Kaposi's sarcoma (KS) in AIDS: a link between KS herpesvirus and immunoblastic lymphoma. Br. J. Cancer 85:1298-1303.
43. Febbo P.G. Functional significance of the androgen receptor CAG repeat polymorphism// Prostate J. 2000. - Vol. 2. - P. 14-21.
44. Febbo P.G., Kantoff P.W., Platz E.A. et al. The V89L polymorphism in the 5alpha reductase type 2 gene and risk of prostate cancer// Cancer Res. 1999.-Vol. 59.-P. 5878-5881.
45. Ferlin-Bezombes M., Jourdan M., Liautard J. et al. //J. Immunol. -1998.Vol. 161.P. 2692-2699.
46. Figg WD, Arlen P, Gulley J, et al. A randomized phase II trial of docetaxel plus thalidomide in androgen-independent prostate cancer. Semin Oncol 2001; 28 (Suppl 15):62-6.
47. Fleshner NE, O'Sullivan M, Fair WR. Prevalence and predictors of a positive repeat transrectal ultrasound guided needle biopsy of the prostate. J Urol
48. Foster C.S., Cornford P., Forsyth L. et al. The cellular and molecular basis of prostate cancer// Brit. J. Urol. 1999. - Vol. 83. - P. 171-194.
49. Fowler Jr JE, Barry MJ, Lu-Yao G, et al. Patient-reported complications and follow-up treatment after radical prostatectomy. The .national medicare experience: 1988-1990 (update 1993). Urology 1993; 42:622-9.
50. Friedland D, Cohen J, Miller R et al. A phase II trial in hormone refractory prostate cancer: correlation of antitumor activity to phosphorylation of bcl-2. Proc ASCO 1999; 18: 322a.
51. Gastner S.A., DeFoy K.A.F., Harrington P. et al. The frequency of germ line mutations in the breast cancer predisposition genes BRCAI and BRCAII in familial prostate cancer// Cancer Res. 2000. - Vol. 60. - P. 4513-4518.
52. George DJ, Kanthoff PW. Prognostic indicators in hormone refractory prostate cancer. Urol Clin North Am 1999; 26:303-9.
53. Gibbs M., Stanford J.L., Jarvik G.P. et al. A genomic scan of families with prostate cancer identifies multiple regions of interest// Amer.J. Hum. Genet.-2000.-Vol. 67.-P. 100-109.
54. Gleave ME, Miayake H, Goldie J, et al. Targeting bcl-2 gene to delay androgen-independent progression and enhance chemosensitivity in prostate cancer using antisense oligodeoxynucleotides. Urology 1999; 54:36-46.
55. Goode E.L., Stanford J.L., Chakrabarti L. et al. Linkage analysis of 150 high risk prostate cancer families at lq24 25// Genet. Epidemiol. — 2000. -Vol. 18.-P. 251-275.
56. Goodin S, Rao KV, DiPaola RS. State-of-the-art treatment of metastatic^ „ hormone-refractory prostate cancer. The Oncologist 2002;7(4):360'-370.
57. Habuchi Т., Liqing Z., Suzuki T. et al. Increased risk of prostate cancerand benign prostatic hyperplasia associated with a CYP17 gene . polymorphism with a gene dosage effect// Cancer Res. 2000. - Vol. 60. -P. 5710-5713.
58. Hammacher A., Thompson E.W., Williams E.D. Interleukin-6 is a potent- , inducer of SI OOP, which is upregulated in andoreg-refactory and metastatic prostate cancer. //Int. J. Biochem. -2005. -V.37, N2. -P.442-450.
59. Hanks GE. External-beam radiation therapy for clinically localized prostate cancer: Patterns of care studies in the United States. Natl Cancer Inst Monogr 1998; 7:75-84.
60. Haqqman M.Y., Manoska J.A., Woino KJ., Oesterling J.E. The relationship between prostate intraepithelial neoplasia (PIN) and prostate cancer. Critical issues// J. Urol. 1997. - Vol. 158. - P. 12-22.
61. Harris KA, Reese DM. Treatment options in hormone refractory prostate cancer: current and future approaches. Drugs 2001; 61:2177-92.
62. Harris N. L., Jaffe E. S., Stein H. et al. // Blood. -1994.Vol. 84, N5.P.1361-1392.
63. Heidenreich A, Elbert A, Hofmann R. Ibandronate in the treatment of prostate cancer associated painful osseous metastases. Prostate Cancer Prostate Dis 2002;5:231-5. Prostate Cancer Prostate Dis 2002; 5:231-5,
64. Heidereich A, von Knobloch R, Hofmann R. Current status of cytotoxic chemotherapy in hormone-refractory prostate cancer. Eur Urol 2001;39:121-30.
65. Hobisch A., Rogatsch H., Hittmair A. et al. Immunohistochemical localization of interleukin-6 ant its receptor in benign, premalignant and malignant prostate tissue. J. Pathol. 2000. V. 191(3). -P.239-244.
66. Hoffman L.J., Bunker C.H., Pellett P.E. et al. Elevated seroprevalence of human herpesvirus 8 among men with prostate cancer. //J. Infect. Dis. -2004. —V.189, N1. —P. 15-20.
67. Holm HH, Juul N, Pedersen JF, et al. Transperineal seed implantation in prostatic cancer guided by transrectal ultrasonograthy. J Urol 1983;130:283-6.
68. Hsing A.W., Gao Y.T., Wu G. et al. Polymorphic CAG and GGN repeat lengths in the androgen receptor gene and prostate cancer risk: a population based case control study in China// Cancer Res. — 2000. — Vol. 60.-P. 5111-5116.
69. Huggins C, Hodges CV. Studies on prostatic cancer. I. The effect of castration, of estrogen and of androgen injection on serum phosphatases in metastatic carcinoma of the prostate. Cancer Res 1941; 1:293-7.
70. Huh, J., G. H. Kang, G. Gong, S. S. Kim, J. Y. Ro, and C. W. Kim. 1998. Kaposi's sarcoma-associated heipesvirus in Kikuchi's disease. Hum. Pathol. 29:1091-1095.
71. Isaacs JT. The biology of hormone-refractory prostate cancer. Why doe» it develop? Urol Clin North Am 1999; 26:263-73.
72. Iversen P, Melezinek I, Schmidt A. Nonsteroidal antiandrogens: a therapeutic option for patients with advanced prostate cancer who wish to " retain sexual interest and function. BJU Int 2001; 87:47-56.
73. Joseph A. Smith J, Soloway MS, et al. Complications of advanced prostate cancer: effect of prior hormonal therapy. J Urol 1998; 169(1):149-153.
74. Kabalin J.N., McNeal J.E., Price H.M. et al. Unsuspected adenocarcinoma of the prostate in patients undergoing cystoprostatectomy for other cancers: incidence, histology and morphometric observations// J. Urol. 1985.-Vol. 141.-P. 1091-1094.
75. Kalish J, Cooner WH, Graham Jr SD. Serum PSA adjusted for volume of transition zone (PSAT) is more accurate than PSA adjusted for total gland volume (PSAD) in detecting adenocarcinoma of prostate. Urology 1994; 43:601-6.
76. Kattan MW, Eastham JA, Stapelton AM, et al. A preoperative nomogram of disease reccurence following radical prostatectomy for prostate cancer. J Natl Cancer Inst 1998; 90:766-71.
77. Kawano M, Hirano T, Matsuda T et al. Autocrine generation and essential requirement of BSF-2X-6 for human multiple myeloma. Nature 332:83, 1988
78. Kelada S.N., Kardia S.L., Walker A.H. et al. The glutathione S transferase mu and theta genotypes in the etiology of prostate cancer: genotype environment interactions with smoking// Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2000. - Vol. 9. - P. 1329-1334.
79. Kim O., Jiang Т., Xie Y. et al. Synergism of cytoplasmic kinases in IL6-induced ligand-independent activation of androgen receptor in prostate cancer cells. //Oncogene. -2004. -V.23, N10. -P.l 838-1844.
80. Kim S.K., Ro J.Y., Kemp B.L. et al. Identification of two distinct tumour supressor loci on the long arm of chromosome 10 in smalLicell lung., cancer// Oncogene. 1998. - Vol. 17. - P. 1749-1753.
81. Kirby R. Treatment options for early prostate cancer.Urology 1998;52:948-62.
82. Kishimoto Т., Akira S., Narazaki M., Taga T. (1995) Interleukin-6 family of cytokines and gpl30. Blood, 86, №4, 1243
83. Klein B. //Curr. Opin. Hematol. -1998.Vol. 5.P. 186-191.
84. Klein В., Zhang S.G., Jourdan M. et al. //Blood. -1989.Vol. 73. -P.517-526.
85. Klussmann, J. P., A. Muller, M. Wagner, O. Guntinas-Lichius, M. Jungehuelsing, T. Sloots, D. V. Ablashi, and G. R. F. Krueger. 2000. Human herpesvirus type 8 in salivary gland tumors. J. Clin. Virol. 16:239-246.
86. Koivisto D.I., Kolmer M., Visakorpi Т., Kalliniemi O.P. Androgen receptor gene and hormonal therapy failure of prostate cancerII Amer.J. Pathol. 1998. - Vol. 152. - P. 1-9.
87. Lavabre-Bertrand Т., Exbrayat С., Liautard J. et al. //Brit. J. Haematol. -1995.-Vol.91.-P.871-877.
88. Lebbe C., Pellet C., Tatoud R. et al. Absence of human herpesvirus 8 • sequences in prostate specimens. AIDS 1997. V.l 1(2). -P.270.
89. Li H., Nicholas J. (2002) Identification of amino acid residues sof gpl30 . signal transducer and gp80 receptor subunit that are involved in ligand binding and signaling by human herpesvirus 8-encoded interleukin-6. J. Vir., 76, №11, 5627-5636.
90. Li C., Intreal J., Phelan C. et al. Identification of two distinct deletion regions on chromosome 13 in prostate cancer// Oncogene. 1998. — Vol. 16.-P. 481-487.
91. Liautard J., Gaillard J.P., Mani J.C. et al. //Eur. Cytokine Network. -1994. -Vol.5. -P.293-300.
92. Liautard J., Sun R.X., Cotte N. et al. //Cytokine. -1997. -Vol.9, N4. -P.233-241.
93. Maari E., Loda M. Role of p27 in prostate carcinogenesis// Cancer Met. Rev. 1999.-Vol. 17.-P. 337-344.
94. Manni A, Bartholomew M, Caplan R, et al. Androgen priming and chemotherapy in advanced prostate cancer: evaluation of determinants of clinical outcomes. J Clin Oncol 1988; 6:1456-66.
95. Matsuyama H., Pan J., Skooq L. et al. Deletion mapping of chromosomei8p in prostate cancer by fluorescence in situ hybridization//Oncogene. — 1994. Vol. 9. - P. 3071-3076. Г
96. Memar, О. M., P. L. Rady, R. M. Goldblum, A. Yen, and S. K. Tyring. 1997.
97. Human herpesvirus 8 DNA sequences in blistering skin from patients with/pemphigus. Arch. Dermatol. 133:1247-1251.
98. McDonnel T.J., Navone N.H., Troncoso P. et al. Expression „of bcl 2 oncoprotein and p53 protein accumulation in bone marrow matastases of • androgen independent prostate cancer// J. Urol. 1997. - Vol. 157. - P. 569-574.
99. McLeod DG. Tolerability of nonsteroidal antiandrogens in the treatment of advanced prostate cancer. Oncologist 1997; 2:18-27.
100. Miller G. Prostate cancer among the Chinese: pathologic, epidemiologic and nutritional considerations// Advanced therapy of prostate disease (eds. Resnick M.I., Thompson I.M.) -London: B.C. Decker, 2000. P. 18-27.
101. Molden, J., Y. Chang, Y. You, P. S. Moore, and M. A. Goldsmith. 1997. A Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-encoded cytokine homolog (vIL-6) activates signaling through the shared gpl30 receptor subunit. J. Biol. Chem. 272:19625-19631.
102. Montgomery J.D., Jacobson L.P., Dhir R. et al. Detection of human herpesvirus 8 (HHV-8) in normal prostates. Prostate -2006. —V.66 (12). -P.1302-1310.
103. Morris MJ, reuter VE, Kelly WK, et al. HER-2 profiling and targeting in prostate carcinoma. Cancer 2002; 94:980-6.
104. Mullberg J., Geib Т., Jostock Т., Hoischen S. H., Vollmer P., Voltz N., Heinz D., Galle P. R., Klouche M., Rose-John S. (2000) IL-6 receptor independent stimulation of human gpl30 by viral IL-6. J. Immunol., 164, 4672-4677.
105. Muhlbauer RC. BM 21.0955, a potent new bisphosphonate to inhibit bone resorption. J Bone Miner res 1991; 6:1003-11.
106. Myers CE, Cooper MR, Stein C. Suramin: A novel growth factor antagonist with activity in hormone-refractory metastatic prostate, cancer. J Clin Oncol 1992:10:881.
107. Nomura A.M.J., Kolonel L.N. Prostate cancer: a current prospective// Amer. J. Clin. Epidemiol. 1991. - Vol. 13. - P. 200-227.
108. Neipel, F., J. C. Albrecht, A. Ensser, Y. Q. Huang, J. J. Li, A. E. Friedman-Kien, and B. Fleckenstein. 1997. Human herpesvirus 8 encodes a homolog of interleukin-6. J. Virol. 71:839-842
109. Oesterling JE, Jacobsen SJ, Chute CG, et al. Serum prostate-specific antigen in community-based population of healthy men. Establishment of age-specific reference ranges, J Am Med Assoc 1993; 279:860-4.
110. Oh WK, Kanthoff PW. Management of hormone refractory prostate cancer: current standards and future prostects. J Urol 1998; 160:1220-9.
111. Otsuki Т., Kumar S., Ensoli B. Kingma D.W., Yano Т., Stetler-Stevenson M., Jaffe E.S., Raffeld M. Detection of HHV-8/KSHV DNA sequences in AIDS-associated extranodal lymphoid malignancies. Leukemia. 1996. 10: 1358-1362.
112. Palmer J., Hertzog P.J., Hammacher A. Differential expression and effects of gpl30 cytokines and receptors in prostate cancer cells. //Int. J. Biochem. -2004. -V.36, N11. -P.2258-2269.
113. Partin AW, Yoo J, Carter HB, et al. The use of prostate specific antigen clinical stage Gleason and reason score to predict pathological stage in men with localized prostate cancer. J. Urol. 1993: 150:110.
114. Pastore, R. D., A. Chadburn, C. Kripas, and E. J. Schattner. 2000. Novel association of haemophagocytic syndrome with Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-related primary effusion lymphoma. Br. J. Haematol. Ill: 1112— 1115.
115. Peters M.A., Jarvik G.P., Janer M. et al. Genetic linkage analysis of prostate cancer families to Xq27 28// Hum. Hered. 2001. - Vok 51. - P.-107-113.
116. Pienta KJ, Redman B, Hussain M. Phase II evaluation of oral estramustine and oral etoposide in hormone-refractory adenocarcinoma of the prostate. J Clin Oncol 1994; 12:2005-12.
117. Prendersagt N.J., Walter P.J. Genetic alteration in prostate adenocarcinoma// Surg. Oncol. Clin. N. Amer. 1995. - Vol. 4. - P. 241245.
118. Prostate Cancer Trialists' Collaborative Group. Maximum androgen blockade in advanced prostate cancer: an overview of the randomized trials Lancet 2000; 355:1491-8.
119. Ramasvamy S., Sellers W.R. PTEN: a prostate cancer tumour supressor gene. Prostate J. 2000. - Vol. 2. - P. 55-61.
120. Richie JP. Anti-androgens and other hormonal therapies for prostate cancer/ Urology 1999; 54(Suppl 6A):15-18.
121. Rosental MA. Advances in the management of prostate cancer. Ausrtal. And N.Z.J Med 2000; 30(5):593-599.
122. Ross J.S., Sheedan С., Harner Bucher A.M. et al. HER2/neu gene amplification status in prostate cancer by fluorescence in situ hybridization// Hum. Pathol. 1997. - Vol. 28. - P. 827-833.
123. Rubin M.A., Parry J.P., Sinhg B. Kaposhi's sarcoma associated herpesvirus deoxuribonucleic acid sequences: lack of detection in prostatic tissue of human immunodeficiency virus-negative immunocompetent adults. J.Urol. -1998. -V. 159(1). -146-148.
124. Ruijter E., van De Kaa C., Miller G. et al. Molecular genetics and epidemiology of prostate carcinoma// Endocrin. Rev. 1999. - Vol. 20. -P. 22-45.
125. Sanda MG, Ayyagari SR, Jattee EM, et al. Demonstration of a rational strategy for human prostate cancer gene therapy. J Urol 1994; 151:622-: 628.
126. Sanda MG, Simons JW. Gene therapy for urologic cancer. Urology 1994; 44: 617-624.
127. Saric Т., Brcanac Z., Troyer D. et al. Genetic pattern of prostate canceriprogression// Int. J. Cancer. 1999. - Vol. 81. - P. 219-224.
128. Schehl C., Berry R., Schaid D. et al. BRCA1 and BRCA2 have a limited role in familial prostate cancer// Cancer Res. 2000. - Vol. 60 - P. 13711375.
129. Scher H, Steinneck G, Kelly WK. Hormone-refractory (D3) prostate cancer: refining the concept. Urology 1995; 46:142-8.
130. Scher HI, Liebertz C, Kelly WK, et al. Bicalutamide for advanced prostate cancer: the natural versus treated history of disease. J Clin Oncol 1997; 15:2928-38.
131. Schmid H-P, McNeal JE, Stamey ТА.' Observation on the doubling time of prostate cancer. The use of serial prostate specific antigen in patientswith untreated disease as a measure of increasing cancer volume. Cancer 1993;71:2031-40.
132. Seidman AD, Scher HI, Petrylak D, et al. Estramustine and vinblastine: use of prostate specific antigen as a clinical trial and point for hormone refractory prostatic cancer. J Urol 1992; 147:931-4.
133. Siegall C.B., Schwab G., Nordan R.P. et al. //Cancer Res. -1990. -V.50, N24. -P.7786-7788.
134. Siegsmund Michael J., Yamazaki Hitoshi, Pastan I. Interleukin 6 receptor mRNA in prostate carcinomas and bening prostate hyperplasia. The Journal of Urology. Vol. 151, 1396-1399, 1994.
135. Sinclair C.S., Berry R., Schaid D. et al. BRCA1 and BRCA2 have a limited role in familial prostate cancer// Cancer Res. 2000. - Vol. 60. -P. 1371-1375.
136. Sinibaldi VJ, Carduci MA, Moore-Cooper S, et al. A phase Л1 study evaluating a one day course of stramustine phosphate and docetaxel in patients with hormone refractory prostate cancer. Proc ASCO 1999; 18:322a.
137. Small EJ, Bok R, Reese DM, et al. Docetaxel, estramustine, plus trastuzumab in patients with metastatic androgen-independent prostate cancer. Semin Oncol 2001; 28(Suppll5):71-6.
138. Small EJ, Srinivas S, Egan B, et al. Doxorubucin and dose- escalating cyclophosphamide with granulocyte colony stimulating factor for the treatment of hormone-resistant prostate cancer. J Clin Oncol 1996; 14:1617-25.
139. Smith DC, Dunn RL, Strawderman MS, et al. Change in serum prostate-specific antigen as a marker of response to cytotoxic therapy for hormone-refractory prostate cancer. J Clin Oncol 1998; 16:1835-43.
140. Smith DC, Strawderman M, Redman B, et al. Phase II trial of oral estramustine, oral etoposide, and intravenous paclitaxel in hormone-refractory prostate cancer. J Clin Oncol 1999; 17:1664-71.
141. Smith P.C., Hobisch A., Lin D.L. et al. Interleukin-6 and prostate cancer progression. Cytokine growth facror Rev. 2001. V.12(l). -Р.ЗЗ-40/
142. Snick V. //Ann. Rev. Immunol. -1990. -Vol.8. -P.253-257.
143. Sokoloff M, Belldegrun A. Gene therapy for prostate cancer. Prospectives 1995;5:1-8.
144. Stamey ТА, Yang N, et al. Prstate-specific antigen as a serum marker for adenocarcinoma of the prostate. N Engl J Med 1987; 317:909-916; 247
145. Strum SB, McDermed JE, Scholz MC. Anemia assiciated with androgen deprivation in patients with prostate cancer receiving combined hormone blockade. Br J Urol 1997; 79:933-41.
146. Taga Т., Hibi M., Hirata Y., Yamasaki K., Yasukawa K., Matsuda Т., Hirano Т., Kishimoto T. (1989) Interleukin-6 triggers the association of its receptor with a possible signal transducer, gpl30. Cell, 58, 573-581
147. Tasaka Т., Said J.W., Koeffle H.P. Absence of HHV-8 in prostate and semen. N.Engl. J.Med. -1996. V.335(16). -.P1237-1238.
148. Tavtigian S.V., Simard J., Teng D.H. et al. A candidate prostate cancer susceptibility gene at chromosome 17p// Nat. Genet. — 2001. Vol. 27. -P. 172-180.
149. Taylor CD, Elson P, Trump DL. Importance of testicular suppression in hormone-refractory prostate cancer. J Clin Oncol 1993; 11:2167-72.
150. The Non-Hodgkin's lymphoma classification project. //Blood. -1997. -Vol.89. -P.3909-3918.t
151. Trachtenberg J, Gittleman M, Steidle C, et al. Abarelix Study Group. A phase 3, multicenter, open label, randomized study of abarelix versus leuprolide plus daily antiandrogen in men with prostate cancer. J Urol 2002; 167:1670-4.
152. Trapeznikov N.N., Aksel E.M. Cancer incidence and mortality;Jn Russia and CIS in 1998. Moscow: N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center-2000.-270 p.
153. Tupitsyn N. N., Frenkel M.A., Rudinskaya T.D. et al. //Int. J. Cancer. -1996. -Vol.68,N2. -P. 160-163.
154. Tupitsyn N., Kadagidze Z., Gaillard J.P. et al. Functional interactions of gp80 and gpl30 receptors in human B-cell malignancies. Clin. Lab. Haematol. 1998; 20: 345-52.
155. VogelzangNJ, Crawford ED, Zietman A. Current clinical trial design issues in hormone-refractory prostate cancer. Cancer 1998; 82:2093-101.
156. Walsh PC, Donker PJ. Impotence following radical prostatectomy: insight into etiology and prevention. J Urol 1982; 128:492-7.
157. Wan, X., H. Wang, and J. Nicholas. 1999. Human herpesvirus 8 interleukin-6 (vIL-6) signals through gpl30 but has structural and receptor-binding properties distinct from those of human IL-6. J. Virol. 73:8268-8278.
158. Watanabe M., Nakayama Т., Shiraishi Т. et al. Comparative stadies of prostate cancer in Japan versus United States. A review// Urol. Oncol. — 2000. Vol. 5. - P. 274-283.
159. Weitzman A., Shelton G., Zuech N. et al. Phase II syudy of estramustine combined with docetaxel in patients with androgen-independent prostate cancer. Proc. ASCO 1999; 18:355a.
160. Xu L.L., Srikantan V., Sesterhenn I.A. et al. Expression profile of an androgen regulated prostate specific homebox gene NKX3.1 in primary prostate cancer// J. Urol. 2000. -Vol. 163. - P. 972-979.