Автореферат и диссертация по медицине (14.01.23) на тему:Диагностическая значимость ММП-9, белка Ki-67 и коллагена IV при заболеваниях предстательной железы

На правах рукописи

ЛОКТЕВ АРТЕМ ВАЛЕРЬЕВИЧ

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ММП-9, БЕЛКА Ю-67 И КОЛЛАГЕНА IV ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

(Клинико-морфологическое исследование) (14.01.23 -урология)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

4 ДЕК 2014

Москва 2014

005556189

005556189

Работа выполнена на кафедре урологии и оперативной нефрологии с курсом онкоурологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов»

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор М.И. Андрюхин

кафедры урологии и оперативной нефрологии с курсом онкоурологии

ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

доктор медицинских наук, профессор, И.И. Бабиченко

заведующий кафедрой патологической анатомии ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, ведущий научный С.Б. Уренков

сотрудник урологического отделения ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского

доктор медицинских наук, доцент кафедры Д.М. Ягудаев

хирургии с курсами урологии и эндоскопии ФГБУ «Учебно-научный медицинский центр» УД Президента РФ

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится «26» декабря 2014 года в «10» часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.01 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117333, г. Москва, ул. Фотиевой, д.6. С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов (117198, г. Москва, ул. Миклухо- Маклая, Д.6)

Автореферат разослан «_»_2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета М.Г. Лебедева

кандидат медицинских наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) и рак предстательной железы (РПЖ) являются двумя наиболее распространенными урологическими заболеваниями, влияющими на мужское здоровье в течение жизни. В последние десятилетия в большинстве стран мира отмечается выраженная тенденция к распространению ДГПЖ, что обусловлено старением населения и, соответственно, увеличением доли мужского населения старших возрастных групп (Bushman W., 2009). В России по официальным данным заболеваемость ДГПЖ с начала века выросла в 1,5 раза, составив к 2009 г. 2221, 5 на 100 тыс. взрослого мужского населения (Аполихин О.И. и соавт., 2011). РПЖ в настоящий момент занимает второе место среди злокачественных новообразований по распространенности и является второй по распространенности причиной смерти мужчин в США и многих западных индустриальных странах. В 2012 году в США 241,740 мужчинам был установлен диагноз рак простаты и 28,170 мужчин погибло от Hero(Siegel R., Naishadham D., Jemal A., 2012). РПЖ широко распространен в России и характеризуется высокими темпами роста заболеваемости и смертности. Последняя обусловлена поздней диагностикой и большим числом наблюдаемых пациентов с местно-распространенными и диссеминированными формами РПЖ. Поэтому разработка и внедрение в клиническую практику программ ранней диагностики РПЖ является не только важной медицинской, но большой социальной и экономической задачей государственного значения (Лопаткин H.A. и соавт., 2009). Существующие методы диагностики и стадирования РПЖ, такие как пальцевое ректальное исследование (ПРИ), трансректальное ультразвуковое исследование (ТРУЗИ), магнитно-резонансная томография (МРТ) и биопсия предстательной железы не всегда могут дать четкий ответ

о наличии и характере течения РПЖ. До недавнего времени считалось, что проблему точной диагностики РПЖ решает определение простатспецифического антигена (ПСА), однако в настоящее время существуют убедительные данные о недостаточной диагностической значимости этого маркера (O'Shaughnessy М., Konety В., Warlick С., 2010). В связи с этим существует необходимость в разработке новых методов ранней диагностики и прогнозирования течения РПЖ.

Основным критерием агрессивности рака предстательной железы является наличие метастазов. Метастазирование — многоступенчатый процесс, в результате которого опухолевые клетки диссеминируют из первичной опухоли к отдаленным вторичным органам и тканям путем деградации экстраклеточного матрикса (ЭКМ). Разобщение компонентов ЭКМ, ключевых факторов метастазирования, достигается посредством действия нескольких протеолитических ферментов, основными из которых являются матриксные металлопротеиназы (ММП). ММП-9 разрушает основные компоненты внеклеточного матрикса: коллаген IV, фибронектин и ламинин, и может использоваться как маркер злокачественного фенотипа опухолей (Авдошин В.П., Бабиченко И.И., Котельникова Е.В., 2011).

Белок Ki-67 является маркером пролиферативной активности клеток, экспрессию этого ядерного белка многие исследователи считают прогностическим фактором для большинства опухолей, включая и рак предстательной железы.(Fisher G. et al., 2013)

Необходимо отметить, что исследования данных маркеров и использование их в клинической практике в Российской Федерации находятся на начальной стадии, а за рубежом изучению этой научной проблемы уделяется много внимания.

В связи с этим проведение исследования, посвященного изучению уровней экспрессии матриксной металлопротеиназы-9, экспрессии белка Ki-67, распределения коллагена IV в клетках при доброкачественной

гиперплазии предстательной железы и при аденокарциноме предстательной железы, является актуальной научно-практической задачей.

Цель настоящего исследования — совершенствование диагностики доброкачественной гиперплазии предстательной железы и рака предстательной железы путем выявления иммуногистохимических особенностей экспрессии матриксной металлопротениназы-9, белка Кь67 и коллагена IV в предстательной железе.

Достижение указанной цели требует решения следующих задач

1. Дать сравнительную оценку диагностической информативности современных методов обследования больных с подозрением на рак предстательной железы.

2. Провести анализ экспрессии матриксной металлопротеиназы-9 в эпителиальных клетках предстательной железы пациентов с доброкачественной гиперплазией и аденокарциномой предстательной железы.

3. Изучить особенности экспрессии белка Кл-67 в эпителиальных клетках предстательной железы пациентов с доброкачественной гиперплазией и аденокарциномой предстательной железы.

4. Изучить показатели распределения коллагена IV в эпителиальных клетках предстательной железы пациентов с доброкачественной гиперплазией и аденокарциномой предстательной железы.

5. Определить информативность исследования матриксной металлопротениназы-9 , белка Кл-67 и коллагена IV в дифференциальной диагностике доброкачественной гиперплазии предстательной железы и аденокарциномы предстательной железы.

Научная новизна исследования

В работе впервые на клиническом материале проведено сравнительное исследование уровней экспрессии матриксной металлопротеиназы-9, белка Кь67 и коллагена IV при доброкачественной гиперплазии и аденокарциноме предстательной железы различных градаций по шкале Глисона. Подобный подход к исследованию вышеуказанных маркеров позволяет с высокой степенью достоверности осуществлять дифференциальную диагностику рака предстательной железы различных градаций и доброкачественной гиперплазии предстательной железы.

Практическая значимость работы

Описанный в настоящем исследовании анализ уровней экспрессии матриксной металлопротеиназы-9, белка Кл-67 и коллагена IV позволяет достоверно дифференцировать доброкачественную гиперплазию предстательной железы и аденокарциному предстательной железы, позволяет сделать прогноз о характере течения аденокарциномы простаты, что дает возможность диагностировать злокачественные новообразования предстательной железы, сократить число повторных мультифокальных биопсий предстательной железы и служить основой для адекватного лечения этих заболеваний.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Количество матриксной металлопротеиназы-9 в эпителиальных клетках предстательной железы уменьшается по мере нарастания анапластических изменений. Максимальные значения выявляются при доброкачественной гиперплазии, и уменьшаются при аденокарциноме предстательной железы.

2. Индекс пролиферации белка Кл-67 является чувствительным тестом для дифференциальной диагностики доброкачественной

гиперплазии предстательной железы и аденокарциномы простаты различных градаций по шкале Глисона.

3. Низкая экспрессия коллагена IV при аденокарциноме простаты характерна для анапластических эпителиальных клеток опухолей с прогрессирующим течением заболевания.

4. Определение уровня экспрессии ММП-9, белка Кл-67 и коллагена IV в предстательной железе повышает эффективность дифференциальной диагностики доброкачественной гиперплазии предстательной железы и рака предстательной железы, а также является надежным прогностическим маркером при раке предстательной железы.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации апробированы на совместном заседании кафедры урологии и оперативной нефрологии с курсом онкоурологии медицинского факультета Российского Университета Дружбы Народов, доложены и обсуждены на Пленуме Правления Российского Общества Урологов (Краснодар, 2010), III Международной Студенческой Научной Конференции с участием молодых ученых "Клинические и теоретические аспекты современной медицины" (Москва, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них 4 научных работы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Внедрение в практику

Метод диагностики заболеваний предстательной железы с использованием показателей экспрессии ММП-9, белка Кл-67 и коллагена IV в предстательной железе внедрены в практику работы урологического отделения ГБУЗ «ГП№19» Департамента здравоохранения города Москвы.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 104 листах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего в себя 20 отечественных источников и 88 зарубежных источников.

Работа содержит 20 рисунков и 15 таблиц.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В основу работы положено обследование 110 пациентов с подозрением на РПЖ, находившихся на стационарном лечении в урологическом отделении Городской клинической больницы № 29 с декабря 2010 по сентябрь 2013 года. Возраст пациентов с заболеваниями предстательной железы, включенных в исследование, составил от 53 до 82 лет; средний возраст пациентов составил 64,47 (8,73) лет. Всем пациентам было проведено комплексное обследование, включающее клиническое исследование, пальцевое ректальное исследование предстательной железы, ТРУЗИ предстательной железы, трансабдоминальное УЗИ печени, почек, мочевого пузыря и забрюшинных лимфатических узлов, определение уровня общего ПСА сыворотки крови, рентгенографию костей скелета, обзорную рентгенографию органов грудной клетки.

У 63 пациентов, включенных в исследование, производилось исследование уровней экспрессии ММП-9, белка Кл-67 и коллагена IV в биоптатах предстательной железы. По результатам патоморфологического исследования у 53 пациентов выявлен РПЖ и у 10 пациентов - ДГПЖ. Гистологическая оценка новообразований выполнена с использованием баллов шкалы Глисона, которое соответствовало наиболее выраженным анапластическим изменениям клеток опухолевых желез, выявленных при биопсии у данного пациента. Статистическую обработку полученных данных

проводили с помощью программы 8ТАТ18Т1СА 10.0. В таблицах приведены средние значения М+б, где в-среднее квадратичное отклонение. Учитывая ненормальное распределение полученных статистических показателей, сравнение двух независимых групп осуществляли непараметрическим методом при помощи и-критерия Манна-Уитни. Достоверным считали различия средних при уровне статистической значимости р<0,05. Корреляционные взаимоотношения между числом Глисона опухоли, индексом пролиферации клеток и выраженностью экспрессии ММП-9 оценивали с помощью коэффициента корреляции Спирмена (г5).

В качестве индикатора пролиферативной активности использован индекс пролиферации Ю-67 (ИП К1-67), который определялся долей интенсивно окрашенных ядер при учете 300 клеток, выраженной в %.

Распределение коллагена IV в базальной мембране желез простаты оценивали полуколичественным методом по следующим показателям: 0-отсутствие коллагена вдоль базальной мембраны; 1- наличие тонкой полоски коллагена; 2- толстая полоска коллагена вдоль базальной мембраны, сравнимая по толщине и интенсивности окрашивания стенки сосудов.

Оценку интенсивности иммуногистохимической реакции с ММП-9 проводили по следующим параметрам: 0-отсутствие коричневых гранул в цитоплазме клеток; 1- наличие отдельных мелких гранул в цитоплазме; 2-распределение в отдельных клетках крупных гранул; 3-наличие крупных гранул в цитоплазме большинства клеток.

Результаты исследования и их обсуждение

При поступлении в стационар большая часть пациентов предъявляла жалобы на дизурию. Самыми распространёнными были: ночная поллакиурия, ишурия, странгурия и гематурия. Часть больных (п=6) предъявляли жалобы на боли в пояснично-крестцовом отделе позвоночника и костях таза. Как показывают представленные данные, дизурия характерна как для ДГПЖ, так и для различных стадий РПЖ (Таблица 1).

Таблица 1. Характеристика жалоб в зависимости от заболевания предстательной железы.

ДГПЖ РПЖ

Жалобы всего I ст. Ист. Шст. 1Уст.

Число пациентов / процент от числа пациентов с

данной жалобой

Ночная поллакиурия 29 / 64,44 39 / 60,0 0 15 14 10

Странгурия 24 / 53,33 32/49,23 0 8 14 10

Гематурия 6/13,33 4/6,15 0 0 1 3

Ишурия 15/33,33 10/15,38 0 1 3 6

Боли в костях 0 6 / 9,23 0 0 2 4

Всего пациентов 45 65 16 20 18 11

Болевой синдром в поясничной области характерен для метастатического РПЖ, в то время как гематурия чаще встречается при ДГПЖ. У 15 пациентов (33,33%), страдающих ДГПЖ, возникла острая задержка мочеиспускания, что указывает на более частую встречаемость данного симптома у пациентов с ДГПЖ, чем у больных РПЖ.

При проведении ПРИ обращалось внимание на контуры железы, её консистенцию, подвижность, наличие узловых образований, выраженность междолевой бороздки, смещаемость слизистой прямой кишки. Изменения предстательной железы, которые позволили заподозрить ее злокачественное перерождение, такие как бугристая поверхность, нечеткие контуры железы и наличие изолированных узлов наблюдалось у 56 (50,9%) пациентов.

В ходе проведения ТРУЗИ обращалось внимание на искаженность контуров предстательной железы, неоднородность паренхиматозных

сигналов, наличие пенетрации капсулы железы. Такие изменения выявлены у 65 (59,09%) пациентов. Таким образом, трансректальное ультразвуковое исследование оказалось более чувствительным по сравнению с пальцевым ректальным исследованием.

При исследовании уровня ПСА в сыворотке крови обнаружено, что у 41 пациента (37,27%) уровень ПСА составлял менее 4 нг/мл. У 75 пациентов (68,18%) уровень ПСА находился в пределах до 10 нг/мл. Уровень ПСА более Юнг/мл выявлен у 35 пациентов (32%), в результате чего с высокой степенью вероятности можно прогнозировать выявление у данной группы пациентов РПЖ при последующей биопсии.

Всем 110 пациентам с целью верификации диагноза и определения дальнейшей тактики лечения произведена мультифокальная биопсия предстательной железы трансректальным доступом с последующим патоморфологическим исследованием образцов. По результатам патоморфологического исследования предстательной железы большую часть больных составили пациенты с диагнозом РПЖ - 65 пациентов, с диагнозом ДГПЖ - 45 пациентов. Количественное распределение больных по заболеваниям предстательной железы продемонстрировано на рис. 1.

Рис.1. Количественное распределение больных по заболеваниям предстательной железы.

В зависимости от стадии развития РПЖ системы ТЫМ пациентов разделили на 4 группы: I клиническая стадия - ТШ0М0- 16 пациентов, II-я клиническая стадия - Т2>}0М0 - 20 пациентов, III клиническая стадия -ТЗИоМо, ТЗЫХМ0- 18 пациентов, IV- клиническая стадия - Т4 ЫХМ0> ТЗК,МЬ Т41\ГХМ] - 11 пациентов.

Среди пациентов с морфологически верифицированным раком предстательной железы при пальцевом ректальном исследовании подозрение на РПЖ возникло у 31 (47,69%) обследуемого пациента, по данным трансректального ультразвукового исследования злокачественное новообразование простаты было заподозрено у 40 (61,54%) обследуемых пациентов. Как показывают результаты обследования пациентов, чувствительность определения концентрации ПСА в сыворотке крови с целью диагностики РПЖ составляет 74%.

Таким образом, установлено, что из трех основных исследований: пальцевого ректального исследования, трансректального ультразвукового исследования предстательной железы и определения уровня ПСА в сыворотке крови - определение простатспецифического антигена имеет наибольшую специфичность и наименьшее количество ложноотрицательных результатов.

Анализируя полученные результаты, мы не можем однозначно высказаться о высокой диагностической ценности ПСА как самостоятельном методе диагностики рака предстательной железы, так как в группе со значительно повышенным уровнем (более 10 нг/мл) у 5 пациентов из 45(11,11%) при обследовании не было выявлено РПЖ. Кроме того, полученные данные подтверждают, что уровень ПСА может повышаться и до значительных величин при таком заболевании как ДГПЖ (Таблица 2).

Таблица 2. Заболевания предстательной железы, диагностированные у пациентов в зависимости от уровня ПСА.

Уровень ПСАобщ., нг/мл ДГПЖ РПЖ

всего I ст. Ист. Шст. 1Уст.

Число пациентов / процент от числа пациентов с данным

показателем

0-2,5 20 / 44,44 3/4,62 0 1 2 0

2,5-4,0 7/15,56 11 / 16,92 5 4 1 1

4,1-9,9 13/28,89 21/32,31 8 7 5 1

10-19,9 3 / 6,67 16/24,62 3 5 6 2

20-29,9 2/4,44 7/10,77 0 2 2 3

30-100 0 5 / 7,69 0 1 2 2

>100 0 2 / 3,08 0 0 0 2

Всего пациентов 45 65 16 20 18 11

В материале, представленном доброкачественной гиперплазией предстательной железы, отдельные пролиферирующие клетки располагались только в базальном клеточном слое, пролиферативная активность клеток секреторного клеточного слоя не отмечалась (Рис. 2).

Рис.2. Иммуногистохимическая реакция в доброкачественной аденоме предстательной железы с антителами к белку Кл-67. Окраска ДАБ-гематоксилин (х200).

В аденокарциномах различных градаций в настоящем исследовании выявлен широкий спектр пролиферативной активности секреторных железистых клеток. При исследовании группы пациентов с опухолями 2-й градации по шкале Глисона пролиферативная активность секреторных опухолевых клеток (ИП Кл-67) составляла 5,3+1,1% (Таблица 3).

Таблица 3. Характеристика пролиферативной активности аденокарциномы по градации шкалы Глисона.

Аденокарцинома, Кол-во ИП И-67

шкала Глисона пациент М+Б

ов %

2-я градация (2 балла) 10 5,3+1,1

3-я градация (3 балла) 18 7,2+1,4

4-я градация (4 балла) 20 10,0+3,9

5-я градация (5 баллов) 5 17,2+9,4

Всего: 53

Опухоли 3-й градации по шкале Глисона также характеризовались умеренной пролиферацией (7,2+1,4%). В высоко инвазивньтх аденокарциномах 4-й и 5-й градаций, нами отмечено увеличение пролиферативной активности атипических клеток (Рис. 3). В опухолях 4-й градации уровень пролиферации соответствовал 10,0+3,9%, а 5-й -17,2+9,4%. Достоверные различия выявлены между всеми исследованными градациями опухолей за исключением низкодифференцированных аденокарцином, пролиферативная активность опухолей 4- и 5- градаций достоверно не различались (Таблица 4).

Таблица 4. Достоверность различий по критерию Манна-Уитни между индексом пролиферации (ИП Ю-67) аденокарциномы различной градации по

шкале Глисона.

Аденокарцинома, шкала Глисона 2 балла и 3 балла и 4 балла и 5 баллов и

Р Р Р Р

2-я градация (2 балла) X 25,0* 0,001 10,0* 0,0001 2,5* 0,006

3-я градация (3 балла) X X 88,0* 0,007 19,5* 0,032

4-я градация (4 балла) X X X 30,0 0,213

5-я градация (5 баллов) X X X X

*-различия достоверны

Рис.3. Иммуногистохимическая реакция в аденокарциноме предстательной железы (5-я градация по шкале Глисона) с антителами к белку Кл-67. Окраска ДАБ-гематоксилин (х200).

Таким образом, пролиферативная активность анапластических клеток аденокарциномы различных градаций по шкале Глисона, определяемая с помощью моноклональных антител Ю-67, является чувствительным тестом для дифференциальной диагностики этих новообразований, а при необходимости- высоконадежным методом дифференциальной диагностики ДГПЖ и РПЖ. Индекс пролиферативной активности (Кь67) также отражает скорость роста аденокарциномы предстательной железы и является надежным прогностическим маркером при раке предстательной железы.

Коллаген IV является основным компонентом базальной мембраны эпителиальных клеток, он также встречается в стенке артериальных сосудов и собственном веществе соединительной ткани. Инвазивные свойства опухолевых клеток связаны с разрушением этого важного компонента соединительной ткани. В настоящем исследовании изучалось распределение коллагена IV в базальной мембране и строме различных опухолевых

образований от доброкачественной гиперплазии предстательной железы до аденокарциномы 5-й градации по шкале Глисона.

На рисунке 4 представлена иммуногистохимическая реакция в соединительно-тканной строме доброкачественной гиперплазии предстательной железы с антителами к коллагену IV (интенсивность 2 балла) при этом видны толстые коричневые полоски коллагена IV, распределяющиеся вдоль базальной мембраны желез. Большое количество коллагена выявляется также в соединительно-тканной строме простаты.

Рис.4. Иммуногистохимическая реакция в соединительно-тканной строме доброкачественной гиперплазии предстательной железы с антителами к коллагену IV (интенсивность 2 балла). Окраска ДАБ-гематоксилин (х200).

С увеличением числа Глисона более 3-й градации коллагеновые волокна полностью исчезают вокруг опухолевых клеток.

На рисунке 5 представлено распределение коллагена IV в соединительно-тканной строме аденокарциномы 4-й градации. На рисунках отсутствует окраска базальной мембраны желез вокруг опухолевых клеток (интенсивность окрашивания — 0), коллаген сохраняется только в окружающей строме в стенке мелких сосудов.

/I

„.. • ..... " ' V ' ' й ы............, ' V ~

Рис.5. Иммуногистохимическая реакция в соединительно-тканной строме аденокарциномы предстательной железы (4-я градация по шкале Глисона) с антителами к коллагену IV (интенсивность 0 баллов). Окраска ДАБ-гематоксилин(х200).

Таким образом, показатели распределения коллагена IV характеризуют доброкачественные и злокачественные опухоли предстательной железы, а также позволяют проводить дифференциальную диагностику аденокарцином высоких и низких градаций по шкале Глисона.

Последующие исследования были направлены на изучение механизмов протеолитической активности аденокарциномы предстательной железы, характеризующих инвазивный опухолевый рост и во многом определяющих злокачественный опухолевый потенциал.

Экспрессия матриксной металлопротеиназы-9 исследовалась в различных опухолевых образованиях: доброкачественной гиперплазии предстательной железы и аденокарциноме различной градации от 2 до 5. Как правило, фермент выявлялся в цитоплазме опухолевых клеток в виде мелких или крупных гранул, при этом отмечалась различная интенсивность

окрашивания продуктами ДАБ-реакции. На рисунке 6 представлено распределение ММП-9 в железистых клетках при доброкачественной гиперплазии предстательной железы. На рисунке видна выраженная иммуногистохимическая реакция, в секреторных клетках крупной железы в большом количестве видны крупные, средние и мелкие гранулы ММП-9 (интенсивность 3 балла).

Рис.6. Иммуногистохимическая реакция при доброкачественной гиперплазии предстательной железы с антителами к белку ММП-9 (интенсивность 3 балла). Окраска ДАБ-гематоксилин (х400).

При изучении аденокарциномы мы выявили снижение интенсивности иммуногистохимического окрашивания ММП-9. На рисунке 7 представлена иммуногистохимическая реакция в аденокарциноме предстательной железы с 2 баллами по шкале Глисона, при этом в цитоплазме секреторных клеток отмечаются отдельные мелкие гранулы ММП-9 (интенсивность 1 балл).

I ■ в | • и я 11 ар . ■ - -

- ?.....4 ¡11

-V*" - V . ' " 'Л

I .„ - .. • * « - *■«.

■:■■■■••: . : ......... ...........1........... .......................... ..........л ": -

Рис.7. Иммуногистохимическая реакция в аденокарциноме предстательной железы (2-я градация по шкале Глисона) с антителами к белку ММП-9 (интенсивность 1 балл). Окраска ДАБ-гематоксилин (х400).

Результаты полуколичественного анализа окрашивания аденокарциномы различной градации по шкале Глисона представлены в таблицах 5 и 6.

Таблица 5

Характеристика экспрессии ММП-9 в аденокарциноме различной градации по шкале Глисона.

Аденокарцинома, Кол-во ММП-9

шкала Глисона пациент М+8

ов у.е.

2-я градация (2 балла) 10 1,8+0,4

3-я градация (3 балла) 18 1,8+0,5

4-я градация (4 балла) 20 0,9+0,4

5-я градация (5 баллов) 5 0,8+0,4

Всего: 53

Таблица 6

Достоверность различий по критерию Манна-Уитни экспрессии ММП-9 в аденокарциноме различной градации по шкале Глисона.

Аденокарцинома, 2 балла 3 балла 4 балла 5 баллов

шкала Глисона и и и и

Р Р Р Р

2-я градация (2 балла) X 93,0 22,0* 4,0*

0,926 0,001 0,010

3-я градация (3 балла) X X 53,0* 11,0*

0,0002 0,009

4-я градация (4 балла) X X X 41,0

0,644

5-я градация (5 баллов) X X X X

*-различия достоверны

Как видно из представленных данных уровень экспрессии ММП-9 снижается в опухолях по мере нарастания в них анапластических изменений, при этом в аденокарциномах 2-й и 3-й градаций уровень экспрессии этого фермента достоверно в 2 раза превышает этот показатель в аденокарциноме 4-й и 5-й градаций. Нами не выявлено достоверных различий в экспрессии ММП-9 между аденокарциномами 2-й и 3-й градаций, а также между 4-й и 5-й градаций. По уровню экспрессии ММП-9 эти группы опухолей оказались идентичны.

ВЫВОДЫ

1. Сравнительная оценка неинвазивных методов диагностики рака предстательной железы показала, что наиболее чувствительным методом является определение уровня ПСА сыворотки крови - его чувствительность 74%, чувствительность ТРУЗИ 62%, а чувствительность пальцевого ректального исследования 48%. Окончательный диагноз устанавливается при морфологическом исследовании материала, полученного при мультифокальной биопсии предстательной железы.

2. Установлена умеренная отрицательная корреляционная связь (г8= -0,660) градации опухолей с уровнем экспрессии матриксной металлопротеиназы-9 и установлена слабая достоверная отрицательная корреляция (г,= -0,369) между уровнем пролиферативной активности клеток и экспрессией секреторными опухолевыми клетками ММП-9.

3. Установлена умеренная положительная корреляционная связь (г5 =0,674) между градацией по шкале Глисона и индексом пролиферации клеток по показателю Кл-67.

4. Проведенные исследования показали, что при доброкачественной гиперплазии предстательной железы высокая экспрессия коллагена IV, а в аденокарциноме предстательной железы коллаген IV разрушается за счет действия матриксной металлопротеиназы-9.

5. Иммуногистохимическое исследование ММП-9, белка Кл-67 и коллагена IV в предстательной железе является надежным методом дифференциальной диагностики доброкачественной гиперплазии предстательной железы и рака предстательной железы, а также методом оценки прогрессирования аденокарциномы предстательной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для диагностики рака предстательной железы на ранних стадиях рекомендуем осуществлять комплексное обследование больных, включающее пальцевое ректальное исследование, ТРУЗИ и определение уровня ПСА крови, с последующим определением показаний к проведению мультифокальной биопсии простаты.

2. Рекомендуем для ранней диагностики рака предстательной железы, а также для дифференциальной диагностики рака предстательной железы и доброкачественной гиперплазии предстательной железы, осуществлять исследование уровней экспрессии ММП-9, белка Кл-67 и коллагена IV.

3. Считаем целесообразным использовать определение уровня экспрессии ММП-9, белка Кь67 и коллагена IV в аденокарциноме предстательной железы с целью выявления степени анапластических изменений и прогноза течения заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пульбере С.А., Апрятин С.А., Глухов А.И., Локтев A.B. Фактор роста эндотелия сосудов человека(\ТЮР) и рецепторы к HeMy(FLT-l, KDR) как маркеры дифференциальной диагностики новообразований предстательной железы // X международный конгресс "Здоровье и образование в XXI веке".- Москва,- 2009. - С.1229-1230.

2. Авдошин В.П., Апрятин С.А., Пульбере С.А., Локтев A.B. Исследование TRF1 и ММР-7 при различных заболеваниях предстательной железы // Материалы V Конгресса Российского Общества Онкоурологов,- Москва,- 2010,- С.33-34.

3. Локтев A.B., Пульбере С.А. Значение генетических маркеров ММР-7 и TRF1 при заболеваниях предстательной железы // XI всемирный конгресс "Здоровье и образование в XXI веке".- Москва.- 2010. - С.398-399.

4. Апрятин С.А, Пульбере С.А., Локтев A.B. Генетические маркеры диагностики новообразований предстательной железы и стадии развития опухоли // II Международная Студенческая Научная Конференция с участием молодых ученых "Клинические и теоретические аспекты современной медицины",- Москва,- 2010,-С.143.

5. Авдошин В.П., Апрятин С.А., Пульбере С.А., Локтев A.B. Генетические маркеры дифференциальной диагностики заболеваний

предстательной железы // Пленум Правления Российского Общества Урологов, Материалы.- Краснодар,- 2010,- С.97-98.

6. Авдошин В.П, Глухов А.И., Апрятин С.А., Пульбере С.А., Локтев A.B. Исследование TRF1 и ММР-7 при различных заболеваниях предстательной железы // Вестник Российской Военно-медицинской Академии.- Санкт-Петербург.- 2011.- С.318.

7. Авдошин В.П, Глухов А.И., Апрятин С.А., Пульбере С.А., Локтев A.B. Значение генетических маркеров для дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы // Международная Научно-практическая Конференция "Научные исследования и их практическое применение. Современное состояние и пути развития, 2011",- Одесса.-2011,- Т.П.- С. 26-27.

8. Авдошин В.П., Андрюхин М.И., Бабиченко И.И., Пульбере С.А., Локтев A.B. Современные методы диагностики предстательной железы. Методические рекомендации // Российский Университет Дружбы Народов.-Москва.- 2013.

9. Авдошин В.П., Глухов А.И., Пульбере С.А., Локтев A.B. Значение матриксных металлопротеиназ и факторов неоангиогенеза в дифференциальной диагностике заболеваний предстательной железы // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия медицина. -2014. -№1. -С. 60-65.

Ю.Андрюхин М.И., Бабиченко И.И., Пульбере С.А., Локтев A.B. Экспрессия матриксной металлопротеиназы-9 в аденокарциноме предстательной железы // Онкоурология. - 2014. - №2. - С. 35-37.

11.Андрюхин М.И., Бабиченко И.И., Локтев A.B., Пульбере С.А. Экспрессия матриксной металлопротеиназы-9 и белка Ki-67 при новообразованиях предстательной железы // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия медицина. -2014. - №2. - С. 4651.

12.Бабиченко И.И., Пульбере С.А., Мотин П.И., Локтев A.B., Тальберг П.И., Абуд М. Диагностическая ценность белка Ki-67 и коллагена IV при новообразованиях предстательной железы // Клиническая Нефрология - 2014,-№3,-С. 47-50.

Локтев Артем Валерьевич (Россия) Диагностическая значимость ММП-9, белка Ki-67 и коллагена IV

при заболеваниях предстательной железы В работе произведена оценка особенностей экспрессии матриксной металлопротениназы-9, белка Ki-67 и коллагена IV у больных с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и аденокарциномой предстательной железы различных градаций по шкале Глисона. Установлено, что количество матриксной металлопротеиназы-9 уменьшается по мере нарастания анапластических изменений в эпителиальных клетках предстательной железы, пролиферативная активность анапластических клеток, определяемая с помощью моноклональных антител Ki-67, повышается с увеличением градации аденокарциномы по шкале Глисона. Также установлено, что при доброкачественной гиперплазии предстательной железы высокая экспрессия коллагена IV, а в аденокарциноме предстательной железы коллаген IV разрушается за счет действия матриксной металлопротеиназы-9. Итоги проведенного исследования показали высокую эффективность определения уровня экспрессии матриксной металлопротениназы-9, белка Ki-67 и коллагена IV в диагностике рака предстательной железы, а так же в определении степени анапластических изменений при аденокарциноме предстательной железы.

Loktev Artem Valerievich (Russia)

The diagnostic significance of MMP-9, protein Ki-67 and collagen IV in diseases of the prostate gland

In the work of the evaluated characteristics of the expression of matrix metalloproteinase-9, protein Ki-67 and IV collagen in patients with benign prostatic hyperplasia and adenocarcinoma of the prostate. It was found that the number of matrix metalloproteinase-9 decreases with increasing anaplastic changes in the epithelial cells of the prostate gland, proliferative activity anaplastic cells defined by monoclonal antibody Ki-67, increases with the grading of

adenocarcinoma of the Gleason score. Also was found that in benign prostatic hyperplasia high expression of collagcn IV, and in adenocarcinoma of the prostate collagen IV is destroyed due to the action of matrix metalloproteinase-9. The results of the study showed high efficiency of determining the level of expression of matrix metalloproteinase-9, protein Ki-67 and collagen IV in the diagnosis of prostate cancer, as well as in determining the extent of anaplastic changes with adenocarcinoma of the prostate.

Подписано в печать 12.11.2014г. Бумага офсетная. Печать цифровая. Формат 60x90/16. Усл. печ. л. 1. Заказ № 150. Тираж 100 экз. Типография «КОПИЦЕНТР» 119234, г. Москва, Ломоносовский пр-т, д.20 Тел. 8(495)213-88-17