Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Экспериментальное моделирование паркинсонического синдрома и его комплексная патогенетическая терапия



А ЗА

Академия медицинских наук СССР

Научно-исследовательский институт общей патологии /¿Л? и патологической физиологии

На правах рукописи

УДК 616.858-008.6.001.4-08

АТАДЖАНОВ МАШАРИП АЛЛАБЕРГЕНОВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ПАРКИНООНИЧЕСКОГО СИНДРОМА И ЕГО КОМПЛЕКСНАЯ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ

14.00.16 — патологическая физиология 14.00.25 — фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1989

Работа выполнена в лаборатории общей патологии нервной системы Научно-ласледо.вательского института общей патологии и патологической физиологии АМН СССР, в лаборатории психофармакологии НИИ фармакологии АМН СССР и в ЦНИЛ Ташкентского ордена Трудового Красного Знамени Института усовершенствования врачей МЗ СССР.

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор, академик АМН СССР Г. Н. Кры-жановский; доктор медицинских наук, профессор Т. А. Воронина; доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент АН УзССР А. Р. Рахим-джанов.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, академик АМН СССР М. Е. Вар-танян; доктор медицинских наук,, профессор Б. М. Гехт; доктор медицинских' наук, профессор, член-корреспондент АМН СССР К. С. Раевский.

Ведущее учреждение — ордена Трудового Красного Знамени Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АМН СССР.

Защита диссертации состоится_

19 г. в _ часов на заседании Специализированного Ученого совета Д 001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патологической физиологии АМН СССР (125315, Мр'сква, ул. Балтийская, 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан_19 г.

Ученый секретарь Специализированного Ученого совета, • кандидат медицинских наук

Л. н. скуратовская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время отмечается значительный рост заболеваемости паркинсонизмом. Это обстоятельство в значительной мере связано с увеличением продолжительности жизни людей и повышением частоты развития тех органических цереброваску-лярных заболеваний, которые сопровождаются паркинсоническии синц-ромом. Выявляется также "омоложение" паркинсонизма. Наблюдается увеличение числа лекарственных препаратов, длительное применение которых вызывает развитие симптомов паркинсонизма (А.М.Вейн и др. 1988; Н.Б.Маньковский и др. ,1988; Л.С.Петелин, 1988; Вепувпии в1 а1 1988; СароНа е* а1. 1988; с*ьь 1988). Рост заболеваемости и отсутствие достаточно эффективных средств лечения выдвигает паркинсонизм в ряд актуальных медико-социальных проблем.

Работы последних десятилетий привели к значительному прогрессу в понимании механизмов патологического процесса при паркинсонизме. Тем не менее, многие звенья патогенеза основных симптомов заболевания остаются но ясными и это не позволяет разработать рациональную и эффективную патогенетическую терапию. Существенное значение в этом отношении имеет создание патогенетически адекватных моделей паркинсонизма: оно является и методом выяснения патогенеза и обеспечивает возможность адекватного, доклинического испытания новых лекарственных средств. Наряду с эти/ моделирование паркинсонического синдрома (ПС) тлеет важное значение для решения ряда теоретических вопросов общей патологии нервной системы.

Паркинсонизм в естественных условиях встречается только у человека. Это обстоятельство затрудняет создание адекватных п патогенетическом и клиническом выражении паркинсонизма экспериментальных модолей заболевания на животных. В эксперименте на животных нельзя воспроизвести паркинсонизм как нозологическую форму. Такая задача и не входила в данное исследование. Речь гдет о создании модолей основных синдромов этого заболевания на базе лежащих а их основе общебиологичвских, нейрофизиологических и нейрохимических механизмов.

Согласно современны) представлениям, важнейшим условием развития паркинсонизма является повреждение нигростриарных дофаминор-гических нойронов и резкое снижение содержания стриарного дофамина (ДА) (Л.С.Петолин, 1980; А.М.Вейн и др., 1981; Н.Б.Маньковский и

- г -

др., 1982; В.П.Бархатова, 1986; Н.П.Бехтерева и др., 1987; Hassirr 19&ljöirtaayer I985f JeUir)Ger 1986; Karaden 1988; Kinne et al. 1989). На основании этого, моделирование основных симптомов паркинсонизма (бради-, олигокинезии, ригидности и тремора) осуществляется повреждением тел дофаминергических нейронов (например, 6-гидрооксидофамином, хлористьы марганцем и др.) в черной субстанции (ЧС) ( Uncorstedt 1971;Donnldoon et а]. 1982; Grabara 1984; Hajoo et al.1983), нарушением выделения ДА терминалями ниг-ростриарных ДА-ергических нейронов или блокадой постсинаптических ДА-рецепторов (например, резерпином, нейролептиками и др.) (Allen et al. 1986« Colpaert 1987; zhanc et al. 1989). Экспериментальные исследования по моделировании ПС на различных видах лаборатории х животных показали, что повреждение нигростриарицх ДА-ергичес-кнх нейронов, нарушение равновесия между дофаминергическими и хо-линергическими системш/и в хвостатом лдре (>Я) играпт центральна роль в патогенезе основных симптомов паркинсонизма (Э.Б.Арушанян, Е.А.Отеллин, 1976; З.Т.Самойлова, В.А.Шаволина, 1977; К.Б.Шаповалова, 1985, Unßerstedt et al. 1973; Klawans et а]. 1978; Лаг Л: lini '1987; bicGre^or 1987). Шесте с тем, разработанные модели но стали основой единой патогенетической концепции, которая могла Си объяснить, как формируется основная триада двигательных симптомов паркинсонизма, почему развивается та или иная форма с.индг ма, и разработать новые методы фармакологической коррекции окстра-пираыидных нарушений.

Моделирование паркинсонического синдрома в настоящее время приобрело самостоятельную эвристическую теоретическую ценность п свете представлений о генераторных, детерминантных и системных иеханизках нейропатологических синдромов (Г.Н.Крыжановский, 1980). Согласно этой теории, в патологических условиях, в связи с нарушением тормозного контроля и гиперактивацией нейронов, в ЦНС образуются генераторы патологически усиленного возбуждения (ГНУВ). То образование ЦНС, в котором возникает ГПУВ, приобретает значение ключевой патогенетической структуры - патологической детерминанты, формирующей новую, патодинамическую организацию - патологическую систему. Клиническим выражением деятельности патологической системы является соответствующий нейропатологический синдром (Г.Н.Крыжановский, 1980).

Одной из экспериментальных основ теории послужили опит», а которых билатеральное введение крысам в ростральную часть столбнячного токсина (СТ), вызывающего долгосрочную блокаду выделения ГМК и ДА пресииаптическини окончаниями,индуцировало у тавотных ригидность, акинезию, тремор, общую заторможенность, адипста, афагию, вегетативные и дистрофические изменения (Г.Н.КрютновскиП, .Ч.И.Алиев, 1978; М.Н.Ллизв, 1981). Было постулировано, что возшш-1!овение ПС в данных условиях связано с растормаанванием холинерги-ческих нейронов >Я, которые в нормальных условиях находятся под тормозным контролем ДА. Этот механизм является патогенетической основой образования ГП.УВ.

В этих исследованиях не бил проведен в достаточной мере анализе состояния электрической активности (ЭА) в >Н и других подкорковых структурах, что необходимо для доказательства того, что патогенетической основой паркинсонизма является ГПУВ в ЛЗ и формирование патологической системы. Представление о паркинсонизме как о сложней комплексе синдромов, каздый из которых является клиническим выражением деятельности соответствующей патологической системы» сделало необходимым нэ только доказать факт формирования ГП УВ в И, но и определить, коррелирует ли деятельность ШУВ с клиническим проявлением синдрома. Необходимо баю такхе провести экспериментальный исследования с целью изучения антиппркинсоничос-кнх эффектов общепринятых и вновь синтезированных лекарственных препаратов, как в отношении клинических проявлений паркинсонизма, так и активности ГПУВ; определить, в какой мере коррелирует изменение активности ГНУВ с динамикой клинических признаков паркинсонизма. Результаты этих исследований явились бы существенным доказательством значения генераторных механизмов в патогенезе паркинсонизма. Эти исследования должны бани быть направлены одновременно на разработку патогенетической терапии паркинсонизма н в конечном счете представлять собой разработку комплексной патогенетической терапии (КПТ). Для адекватной оценки полученных данных ваэдо было бы провести исследования на различных моделях паркинсонизма, что делало необходимым разработку нопых моделей.

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы было создание новых экспериментальных моделей паркинсонического синдрома путем формирования различными способами генератора пато-

логически усиленного возбуждения в )Я, проведение нейропатофизио-логического и нейрорармакологического анализа особенностей индукции, деятельности и подавления ГПУВ, разработка комплексной патогенетической терапии экспериментальных паркинсонических синдромов. Эта цель достигалась проведением экспериментальных исследований в нескольких направлениях. Для достижения этой цели сформулированы следующие задачи:

I. Изучение экстрапирамидных нарушений и электрической активности сенсомоторной коры, хвостатого ядра, черной субстанции и других мозговых структур после повреждения ДА-ергических нигростриар-ных нейронов, изменения деятельности их терминалей в Ж, выключения действия ДА в )Я путем его специфического связывания и первичной активации холинергических нейронов в условиях сохранения дофа-ыинергической иннервации.

- 2. Исследование продуктов перекисного окисления липидов ней-рональных мембран в ХЯ после деструкции тел и терминалей нигро-стриаркых дофаминергических нейронов.

3. Изучение эффективности классических и атипичных антипар-кинсонических препаратов, а также новых соединений на разработанных ыоделях паркинсонического синдрома.

4. Изучение эффектов сочетанного действия патогенетически подобранных препаратов на электрическую активность исследуемых структур и экстрапирамид!гые симптомы.

Научная новизна работы. Результатом работы является создание новых экспериментальных моделей паркинсонического синдрома на крысах. На основании анализа экспериментального материала показано, что, независимо от каузального фактора, патогенетической основой развития различных форм паркинсонического синдрома является формирование генератора патологически усиленного возбуждения в хвостатом ядре.

Впервые установлено, что паркинсонические синдромы, вызванные первичным дефицитом ДА и иервичной активацией холинергических нейронов Ж, имеют свои особенности как по формированию ГПУВ в так и по проявлению экстрапирамидных симптомов. Это позволило условно разделить все модели паркинсонического синдрома на "дофамин-дефицитную" и "холинергическую". Впервые экспериментально докззн-но, что эффективность лекарственных препаратов зависит от того, какое патогенетическое звено в развитии паркинсонического синдрома

является инициальным. На основании этих данных выдвинуто предположение о двух патогенетически инициальных формах паркинсоничеекого синдрома: I - патологический процесс начинается с дегенерации тел ДА-ергических нейронов черной субстанции (классическая форма) и 2-патологический процесс начинается в Ж с поражения терминалей дофаминергических цейронов или активации холинергических нейронов.

Установлено, что формирование ГПУВ в хвостатом ядре при ПС, вызванном повреждением дофаминергических нейронов ЧС, сопровождается повышением продуктов перекисного окисления липидов в стриатуме.

На ДА-дефицитнцх моделях паркинсоничеекого синдрома впервые установлено противопаркинсоническое действие ноотропных препаратов пирацетама и анирацетама, антагониста опиатных рецепторов налоксо-на,' субстанции Р и антиконвульсанта дифенина. Изучение эффективности сочетания различных препаратов позволило предложить несколько наиболее удачных комбинаций. Показано, что пирацетам повышает эффективность ц/клодола, а активный антиконвульсант дифенин в сочетании с мадопаром и налоксоном полностью подавляет ГПУВ в Ж и устраняет компоненты паркинсоничеекого синдрома.

" Теоретическая и практическая значимость. Проведенные исследования развивают основные положения теории генераторных, детерминант-ных и системных механизмов нейропатологических синдромов (Г.Н.Крц-жановский, 1980). Полученные результаты составили фактологическую основу для анализа патогенетических механизмов паркинсоничеекого синдрома и разработки его терапии с принципиально новых позиций, исходя из которых следует, что клинический полиморфизм паркинсонизма обусловлен не только нейрохимической и нейроанатоыической гетерогенностью нигростриарной системы, но и гетерохронией и гетеротопией патологического процесса, формирующего патологическую систему. В связи с этим представляется необходимым с новых позиций анализировать патогенетические механизмы различных форм паркинсонизма в клинике и строить тактику лечения больных. Фармакологические исследования позволяют рекомендовать применение пирацетама, налоксона и дифенина в лечении различных форм паркинсонизма.

Теоретический и методологический подход, примененный при изучении механизмов формирования паркинсоничеекого синдрома, представляет собой самостоятельную ценность для изучения механизмов синдромообразования при различных формах патологии нервной системы и разработки проблем общей патологии нервной системы.

Положения, выносимые на защиту.

1. Патогенетической основой паркинсоничкского синдрома являет ся на только повреждение или дегенерация тел нигростриарных дофа-минергических нейронов, как это представлялось ранее, но и пораке-ние терминалой этих нейронов в хвостатом ядре, снижение уровня стр арного дофамина, а также первичная активация холинергических нейро нов ЯЯ, в условиях сохранения ДА-ергической иннервации. Патогенетической основой синдрома, независимо от каузального фактора, явля ется образование из холинергкческих нейронов генератора патологически усиленного возбуждения в хвостатом ядре.

2. Манифестация синдрома определяется особенностями деятельности ГПУВ в Ш и нарушением той медиаторной системы мозга, котора является инициальным патогенетическим звеном паркинсонического сип дрома.

3. Существуют две формы развития синдрома: нигральная, при которой возникновение основных симптомов обусловлено повреждением тел ДА-ергичееких нейронов в черной субстанции, и стриарная, при которой возникновение симптомов обусловлено поражением постсинап-тических нейронов в >Я, специфической блокадой стриарного ДА или активацией холинергических нейронов Ш.

4. Подбор препаратов для фармакологической коррекции должен определяться тем, нарушение какой медиаторной системы нигростриар-ного комплекса является определяющим в патогенезе формирования П в Ж и развитии паркинсонического синдрома. Существенна условие», эффективности применяемых препаратов является включение в комплекс ную патогенетическую терапию паркинсонического синдрома ггрепарато! усклиеаввдх процессы торможения или ослабляющих процессы возбуждения нейронов структур мозга, т.е. средств, способных подавлять патологическую детерминанту, которую представляют собой гиперактивные Хй.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на юбилейной конференции Ташкентского института усовершенствования врачей (1982), на объединенном заседании биологической и медицинской секции АН УзССР (Ташкент, 1985), на Советско-Британском симпозиум по неврологии "Причины и механизмы заболеваний мозга человека", Л нинград, 1988), на 6 Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент, 19Э на 5 Всесоюзном съезде геронтологов и гериатров (Тбилиси» 1986), на 4 Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989),

Внедрение. Результаты работы внедрены: в практику экспериментальных исследований лаборатории общей патологии нервчой системы и лаборатории патофизиологии системы иммунитета НИИ общей патологии и патологической физиологии АМН СССР, лаборатории психофарыа-кологии Института фармакологии АШ СССР, кафедры патофизиологии Одесского медицинского института им.Н.И.Пирогова. Полученные в диссертации результаты используются в лекционных курсах на кафедре психиатрии Ростовского медицинского института, на кафедре фармакологии Азербайджанского медицинского института.

Моделирование паркинсонического синдрома путем интракаудат-ного введения антител к дофамину защищено авторским свидетельствои - "Способ моделирования паркинсонического синдрома" (А.С.№ В Стделе научной и экспериментальной медицинской кинематографии АМН СССР снят научно-методический фильм по моделированию паркинсонического синдрома.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных методов, 3 глав собственных исследований с обсуждением полученных результатов, заключения и выводов. Диссертация иллюстрирована 4 таблицами и 58 рисунками. Список литературы содержит 517 источников, из которых 98 отечественных и 419 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Животные. В работе были использованы белые беспородные крысы-самцы и крысы линии Вистар массой 180-650 г. Большинство экспериментов проводились в условиях хронического и полухронического опыта. Часть исследований проводили в условиях острого опыта. Эксперименты проводились с соблюдением всех требований к хроническому и острому опыту. В зависимости от конкретной задачи животные наблв-дались от нескольких часов до 4-6 недель. Поскольку возраст играет существенную роль в развитии паркинсонизма, моделирование ПС и разработку его терапии проводили с учетом этого фактора. В опытах были использованы крысы 3-5, 8-10 и 12-15 месячного возраста. Для моделирования ПС с помощью 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-т9трогидропири-дина (МФИ1), вещество вводили внутрибрюшинно (в/б) животным всех указанных выше возрастных групп. Интранигральное введение нейро-токсина 1-метил-4-фенилпиридиния (МФП+) проводили крысам 3-5, 8 10

и 12-месячного возраста. Моделирование синдрома путем интракаудат-ногс введения ацетилхолина (АХ) с прозернном проводили у крыс 3, 5 и 10 месячного возраста. Оксотремэрин о/б и антитола к дофамину в >И вводили животным 4 и 5 месячного возраста. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) в стриатуме исследовалось на модели ПС, вызвана; го MUÍ и 1!'М1+, у крыс 8-10 месячного возраста. Влияние фармакологических препаратов на паркинсокический синдром изучали у животных всех возрастных групп. Выяснение эффективности сочетанного плдме-нения различных препаратов проводили у крыс 8 и 12-13 месячного возраста. Всего в работе было использовано около 3000 животных.

Используемые вещества. МФТЛ-гидрохлорид синтезирован в лаборатории синтеза фармакологически активных соединений Института фармакологии АМН СССР (руководитель - проф. В.А.Загоревский, исполнитель - с.н.с. Л.М.Шаркова) и охарактеризован элементарным анализом, ИК-, ПМР, масс-спектрами и тонкослойной хроногографией. Нейроток-син вводили в/б в физиологическом растворе, животным контрольной группы вводили соответствующий объем физиологического раствора. С использованием метода Личфильда-Уилкоксона было предварительно установлено, что при однократной инъекции нейротоксина для крыс 5 месячного возраста составляет 72,0-3,1 мг/кг. Для оценки влияния МФТП на двигательную активность животных испытывали различные дозы нейротоксина. Однократно вводили 5,10, 15, 20, 30, 40, 50, 60 70, 80 мг/кг; 30, 40, 50 «г/кг вещества вводили в течение 10 дней. Для моделирования ПС различные дозы нейротоксина вводили также через 4, б, 8 и 12 ч в течение 2, 4, 6, 7 и 8 суток.

МФП^-йодид синтезирован в лаборатории синтеза ФАС Института фармакологии АМН СССР (руководитель - проф. В.А.Загоревский, испол нитель - с.н.с. Л.М.Шаркова). Нейротоксин вводили в ростральные отделы обоих ХЯ и в обе компактные зоны ЧС. Внутримозговые инъекции осущзствляли с помощью микрошприца Гамильтон, помещенного в микроманипуляторе стероотаксического прибора, через канлли, Фиксированные на черепе кивотного. Фиксацию животных в стереотаксичес-ком приборе и вживление канюль проводили под гексеналовым наркозом Стереотаксические координаты и ЧС определялись по координатам стереотаксического атласа { Burea et al. 1960; Paxinoo, Watcon 1982). Универсальные канюли с электродом были изготовлены п мастог ских НИИ общей патологии и патологической фиэиологил АМН СССР, ко-

торые позволяли осупрствить введение ницкостей в структуры мозга, а также регистрировать ЭА этих структур. НФП+ вводили через 7-8 дней после фиксации каншь на черепе со скоростью I мкл/ыин. Для моделирования ПС изучено влияние различных (5, 10, 15, 20, 30 ыкг) доз Ш>П+ на двигательную активность животных. Нейротоксин вводили однократно. Животньм контрольной группы вводили соответствующую концентрацию йодистого натрия; вещества вводили в 2 мкл физиологического раствора. Посла ыикроиньекции MSII* у животных помимо ПС, как правило, наблюдались явления адипсии и афагии. В таких случаях кивотных вскармливали искусственно (2-х разовое введение жидкой кашицы из глюкозы, молока, творога, растертого гранулярного корца, моркови и воды (используя резиновый зонд). Двигательную активность животных и ЭА исследуемых структур регистрировали сразу после выхода животных из наркоза.

Антитела к дофамину получены с.н. с. Башаровой Л. А. и и.н.с. Л.А.Ветрилэ лаборатории патофизиологии системы иммунитета (руководитель - д.м.н. В.А.Евсеев) НИИ общей патологии и патологической физиологии АМН СССР. Для внутримозгового введения использовали гамма-глобулины опытных и контрольных сывороток, очищенные от гя-тител к белку-носителю методом аффинной хроматографии с использованием в качества иммуносорбента сефарозы - 4В и иммобилизованном-на ней бычьего сывороточного альбумина (БСА), а также сывороточ-t ные гамма-глобулины неиммунизированных кроликов. Антитела к ДА. .astv дили билатерально в ростральные отделы Ж через имплантирований?..,.,: на черепе канюли с помощью микрошприца Гамильтон. Иммуноглобулине (ИГ), содержащие антитела к ДА, по 200 ыкг белка в объеме 5 мкх,„ , вводили через 6-7 дней после стереотаксической операции.'»-Киечткуц " контрольной группы вводились гамма-глобулины, ввделеннъгэ.;!!з сывег "> ки кроликов, иммунизированных белком-носителем (БСА) н> ош'Щекнш от антител к БСА (контроль № I) и гамма-глобулины '.нормальной кроличьей сыворотки (контроль № 2). Поведенческую активность животных и электрокаудатогрмлму начали регистрировать! сразу после введения антител к ДА и продолжали до 25 ч. Моделирование ПС путем ин-тракаудатного введения антител к ДА проведено совместно с д.м.н., с.н.с. С.В.Нагаевой, с.н.с. Л.А.Башаровой и m4h.cí Л.А.Ветрилз (лаборатория патофизиологии системы ишунитета НИИ общей патологии и патологической физиологии АЩ СССР).

Ацетилхолин с прозерином вводили в ростральные отделы >Я билатерально через канюли с помощью микрошприца Гамильтон со скоростью I мкл/мин в объеме 2 мкл. Контроль ты животным вводил;! соответствующий объем физиологического раствора. Двигательную активность животных изучали после введения различных доз АХ и гтро-зерина, в результате чего было установлено, что оптимальным для воспроизведения ПС является сочетание АХ с прозетном в дозах соответственно 5 мкг и I мкг. Все экспериментальные исследования проводились на модели синдрома, вызванного введением АХ в дозе 5 мкг в объеме I ыкл и прозерина в дозе I мкг в объеме 2 мкл.

Оксотреморин вводили внутрибрюшинно в дозе I мг/кг.

Регистрация электрической активности.Электроды вводили по координатам стереотаксического атласа ( Burea et al. I960, Faxinos, Vfatspn 1982) в сенсомоторную кору (CK) и различные подкорковые структуры: ростральную часть >Я, компактную зону ЧС, бледний шар (БШ), венгроыедиальное ядро таламуса (БЫТ), дорэальный гиппокамп (ДГ) и латеральное ядро гипоталамуса. В CK вживляли шариковый серебряный электрод диаметром 0,1 мм, в подкорковые структуры - биполярные нихромовые электроды в заводской изоляции (диаметр кончика 70-100 мкм). Часть исследований проводили с использованием монополярных нихромовых электродов того же размера. В экспериментах, где осуществляли микроинъекцию веществ (МФП+, антитела к ДА, АХ с прозерином) в мозг, в зависимости от конкретной задачи в >Я или в ЧС вживляли канюли с регистрирующим электродом, а в кору и другие структуры одновременно вживляли обычные электроды. Индифферентный электрод укрепляли в носовой кости. Для регистрации электромиограм-мы (2ЫГ) в шейные мышцы билатерально вводили нихромовые электроды (диаметр кончика 0,4 мм). Запись электрической активности и ЭМГ проводилась в условиях свободного поведения животных. Регистрация биопотенциалов мозга осуществлялась на электроэнцефалографе "Нейро-граф-18" фирмы О.Т.Е. " Bionedica" (Италия) с последущей обработкой данных на нейрокомпьютере "BAS -161" той же фирмы. В части исследований регистрацию ЭА проводили на 8-канальном полиграфе ( ï'ihon Kohden )с параллельной записью данных на магнитограф "ТЕСЛА" (Чехословакия).

Часть электрофизиологических и фармакологических исследований выполнена в лаборатории психофармакологии (руководитель - проф. Т.А.Воронина) Института фармакологии АМН СССР с участием с.н.с.дан-

ной лаборатории к.б.н. Л.Н.Неробковой.

Запись ЭА проводили через 5-7 дней после вживления электродов. У всех животных регистрировали фоновую активность до введения применяемых в эксперименте веществ. В зависимости от конкретных задач опыта ЭА исследуемых структур регистрировали на протяжении 3-8 ч непрерывно в день введения веществ, в последующем в течение 20-40 мин ежедневно до 2-х недель. При изучении эффектов фармакологических препаратов на созданных моделях ЭА регистрировали до введения исследуемого препарата и на протяжении 4-6 ч непрерывно после его введения. Такой же принцип соблюдался при сочетан-ном применении различных веществ.

Регистрация двигательной активности. Основной целью изучения двигательной активности животных было выявление экстрапирамидных нарушений, характерных для паркинсонизма: олигокинезии, ригидности и тремора. Для выявления олигокинезии животных тестировали на "открытом поле", регистрируя в течение 5 мин число горизонтальных движений (пересечение квадратов), вертикальных движений (стойки), поисковой активности (заглядывшшя в отверстия), груминг (умывание, чесаиие). Динамику двигательной активности в процессе моделирования ПС и под влиянием фармакологических препаратов оценивали в процентах по отношению к интактным. При этом число пересечения квадратов, стоек и груминга за время наблюдения принимали за 100$.

Ригидность. Мышечный тонус задних лап определяли по сопротивлению при пассивной флексии в голеностопном суставе. Для количественной оценки ригидности мышц туловища (МР) использовали симптом "горбатости", выраженность которой засисела от степени МР и определялась по укорочению расстояния от шеи до основания хвоста. Ригидность оценивали по балльной системе: 0 - отсутствие ригидности; I - укорочение расстояния от шеи до основания хвоста до 3 см, 2 -более 3 сы.

Тремор оценивали и регистрировали с помощью актографа изготовленного с использованием пьезоэлементов для регистрации механических колебаний малой амплитуды. По локализации и амплитуде тремор выражали в баллах: 0 - отсутствие тремора; I - локальный мелке амплитудный тремор головы, передних лап или хвоста; 2 - локальны:; среднеамплитудный тремор; 3 - генерализованный мелко- или средне-амплитудный тремор всего тела.

Регистрацию двигательной активности животных проводили до начала экспериментов, в течение 4-8 ч после введения того или иного вещества. В хроническом эксперименте двигательные нарушения регистрировали до 4-6 недель. Фармакологические вещества вводили на фоно развившегося паркинсонического синдрома, в основном внутрибрю-шинно. Дофамин в дозе 200 мкг в объеме 4 мкл, субстанцию Р в дозе 6 мкг в объеме 2 мкл вводили в ростральные отделы ХЯ. Бромкриптин вводили подкожно.

Исследование переписного окисления липидов. Определение содержания продуктов ПОЛ в )Я осуществляли по методу, основанному на реакции между малоновым альдегидом и 2-тиобарбитуровой кислотой, проходящей с образованием окрашенного триыетинового комплекса. Концентрация комплекса определялась спектрофотометрически. Эту серию исследований проводили совместно со с.н.с. Е.В.Никушкиным и м.н.с. В.Г.Кучеряну лаборатории общей патологии нервной системы НИИ общей патологии и патологической физиологии АМН СССР,

Морфологический контроль. После окончания экспериментов проводили ыорфологическиЯ контроль локализации канюль и электродов. Для этого мозг вместе с электродами и канюлями фиксировали в 12% нейтральном формалине. С помощью замораживающего микротома изготовляли серийные срезы, начинал с ростральных отделов мозга. Срезы заключали в глицерин и фотографировали в масштабах, соответствующих схемам стереотаксического атласа.

Фармакологические вещества, примененные в работе. Дофамин, Л-дофа, ыадопар 125, бромкриптин, мидантан и его аналоги АД-1, АД-2, АД-3, катинон, паргилин, Л-депренил, циклодол, бторацизин, фтордгелетазин, пирацетам, анирацетам, наклоксон, субстанция Р, ди-фенин.

Математическая обработка результатов. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по методам Стыодента и P.A. Фишера (Миле, 1958). Корреляционный анализ ¡проводили на компьютере "М-24" С Olivetti Италия).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Модель_пвркинсонического_сищ

нигростриарных_дофаминпргических_не

Открытие избирательной нейротоксичности МФИ1 к нигростриаргыч

дофаминергическиы нейронам в последние годы дало основание использовать данное соединение для моделирования ПС у различных видов лабораторных животных ( langaton et al. 1983; Burns at al. 1984;

Jenner et al. 1986).

Внутрибрюшинное введение МИЛ вызывало у крыс всо основные двигательные симптомы (олигокинезию, ригидность и тремор) ПС, выраженность и продолжительность которых зависели от дозы нейротоксина и возраста животных. После введения М1ТП экстрапирамидные нарушения наиболее часто выражались в виде снижения и замедления двигательной активности животных, длительных эпизодов "застывания". Ригидность и тремор были выражены незначительно и наблюдались не у всех животных. Изучение ЭА сенсомоторной коры, Ж и ЧСпоказало, что в период развития экстрапирамидных нарушений происходит замедление ЭА, на фоне которых регистрируется высокоамплитудная (300-400 ыкВ) медленная (1-2 Гц) активность, наиболее выраженная в Ш. При нарастании олигокинезии и ригидности на электрограмме (ЭР) наблюдались пароксизмальные разряды во всех исследуемых структурах. На фоне общей дизритмии в ХЯ отмечались группы медленных (0,5-2 Гц) высокоамплитудных волн. Редукция ЭГ изменений совпадала с ослаблением клинических проявлений ПС.

По мнению ряда исследователей ( Chiueh et al.1984; Sahgal et al 1984; Wattera et al. 1984), ЖГП при в/б введении не вызывает у крыс ПС. Это утверждение обосновывалось тем, что М5ТП у крыс не приводит к дегенерации ДА нейронов ЧС. Результаты наших исследований показали принципиальную возможность воспроизведения ПС у крыс. Неудачи других авторов, по-видимому, связаны с условиями их опытов, в частности, с применением низких доз МФТП.

Было установлено, что токсический эффект ШТП обусловлен его конечным метаболитом М5П+, который обладает высоким сродством к ДА нейронам и вызывает их дегенерацию ( Chiba et al. 1984;и&гкеу at al. I9S4; Kopin et al. 1986). Системное введение 1ЙЛ1" не вызывает у животных экстрапирамидных нарушений, т.к. не проникает гематоэн-цефалический барьер. Исходя из этого ШЛ+ вводится непосредственно в область подкорковых структур мозга ( Perry et al.I986;Sayro et al. 1988; Altar et al. 1989).

Билатеральное введение 20 мкг Щ'П+ в ростральные отделы Ш, т.е. в область тергшналей нигростриарных ДА нейронов, вызывало бо-

лео выраженную олигокинезию ; ригидность, чем системное введение 13ТП. Тремор бш выражен незначительно. Олигокинезия и ригидность бчли максимально выражены через сутки после микроинъекции нейроток-снна. В этот период на ЭГ кори, И и Ш отмечается диффузная медленная активность, на фоне которой регистрируются пароксизмальные разряды высокоамплитудных медленных волн (частотой 4-5 кол/с, амплитудой 250-300 мкВ, доминирующие в Ж. Через 3-4 сутки пароксиз-ыальная активность (ПА) в ffl начинает редуцироваться, одновременно с этим уменьшается олигокинезия и ригидность.

Билатеральное введение 10 мкг ШгП* в компактную зону ЧС вызывало у крыс весь комплекс симптомов (акинезия, ригидность, адип-сия, афагия), характерных для поражения данной структуры. ПС при этом бш наиболее выраженным, вместе с тем и при интранигральнш введении ЫЬП+ тремор был выражен меньше, чем олигокинезия и ригидность. Вскоре после ыикроиньекции нейротоксина во всех исследуемых структурах (>Я, БШ, вентромедиальный таламус и ЧС) появлялись высокоамплитудные медленные волны (частотой 2-3 кол/с, амплитудой 150 ыкВ), отдельные пароксизмальные разряды медленных волн (1,52 кол/с, амплитудой до 300 мкВ)в ЧС. Затем ПА становилась генерализованной, а через несколько часов начинала доминировать в Ж. Через 24 ч после микроиньекции нейротоксина было выявлено снижение ПА в БШ, ШТ, но усиление ее в >Я, что коррелировало с выраженностью ПС. С течением времени ПА снижалась и в ЧС, но диффузная медленная активность и высокоаыплитудные разряды в ХЛ продолжали сохраняться. Через 4-6 суток после введения нейротоксина было отмочено исчезновение ПА, снижение диффузной медленной активности и усиление бета-активности во всех исследуемых структурах, что совпадаю с редукцией ПС.

Сопоставление динамики ЭГ изменений и двигательных нарушений показало, что развитие основных симптомов ПС после системного введения №£ТП, микроиньекции МФП*" в Ш и ЧС связано с формированием устойчивой ПА в Ж. Пароксизмальные разряды високоамшштудкых острых и медленных волн в Ж наиболее выражены при интранигральнок введении (ЙП"1", что коррелирует с выраженностью экстрапирамидных нарушений.

В настоящее время известно, что ДА оказывает на нейроны >Я тормозное влияние (Э.Б.Арушанян, В.А.Отеллин, 1976; О.В.Годухин, 1987; Schultz, Uncerotodt 1978; llcGecr et al. 1984). Исходя

из этого можно било предположить, что развитие ПС после введения МФТП и КЭП+ связано с растормаживанием холинергическил нейронов

из популяции которых образуется ГПУВ. Следовательно, восполнение дефицита ДА или угнетение холинергических нейронов должно подавлять ГПУВ и редуцировать ПС. С целью проверки этого предпологе-ния бы..о изучено влияние Л-дофа и циклодола на ЭГ и клинические проявления ПС, вызванного системным введением 15ФТП и интраниграль-ным введением ШгП*.

Исследования показали, что системное введение Л-дофа на фона развернутого ПС вызывает значительное подавление ПА в исследуемых структурах и редукцию олигокинезии и ригидности. Данный эффект сохранялся на время действия препарата, после чего постепенно восстанавливалась ПА и клинические проявления ПС. Системное введение циклодола уменьшало пароксиэмальные разряды в Я и увеличивало двигательную активность кивотных. Однако эффект циклодола был менее выраженньм, чем аффект Л-дофа. Эти данные свидетельствуют о том, что развитие ПС после введения ШТП и связано с формированием

ГПУВ в Ж.

2. 0§1£кисное_окисление_липщо па2кинсоническом_сищ^

В процессе структурной перестройки нейрональных мембран и гиперактивации нейронов, из популяции которых образуется ГПУВ, существенное значение имеет нарушение регуляции процесса ПОЛ (Г.Н. Крыжановский, 1980; Р.Н.Глебов, Г.Н.Крцжановский, 1983; Г.Н.Крыжа-новский с соавт., 1987). Прямы!-! доказательством участия процесса ПОЛ в развитии гиперактивности нейронов являются данные, согласно которым в нейронах ГПУВ эпилептического очага, создаваемого аппликацией пенициллина на кору головного мозга, значительно возрастает ПОЛ (Г.Н.Крыжановский с соавт., 1985; Е.В.Никушкин, Г.Н.Кры>:ишовский, 1987). Исходя из изложенного было изучено состояние ПОЛ в при ПС, вызванном ЬЙТП и МИГ".

Проведенные исследования показали, что при ПС, вызванном в/б введением МФТП, концентрация продуктов ПОЛ, реагирующих с 2-тиобар-битуровой кислотой (ТШП), в Ж не изменяется. Отмечается тенденция к увеличению продуктов ПОЛ в после интракаудатного введения !Ш1+. Достоверное повышение продуктов ПОЛ в Ш выявляется при ПС, вызванном введением МШ+ в компактную зону ЧС. Сопоставление этих

показателей с ди.ламикой окстрапиракидных нарушений показало, что изменения содержания продукт в ПОЛ в ffl коррелируют с наличием и выраженностью ПС у животных. Так, синдром был наиболее выражен через 24 ч у животных, которым 14Ы1+ вводили в ЧС. Наиболее выраженное увеличение уровня ТКШ отмечалось при данном способе моделирования и также через 24 ч после введения нейротоксина.

Полученные результаты согласуются с данными литературы, указывающими, что нарушение процесса ПОЛ является необходимым звеном патогенеза нейротоксического эффекта ШИ1 и ЫФП* (Kopin 1986; Ro-sjetti et al. 1987; Schultz 1988). Однако, нашими исследованиями впервые показано, что при деструкции ДА нейронов в ЧС нейротокси-нсм ЫФ1Г" достоверная активация ПОЛ происходит в Ä1. Это подтверждает наша предположение о том, что образование ГПУВ в Xrl, также как и в эпилептическом очаге в коре, сопровождается активацией ПОЛ. 8 связи с этим можно предположить необходимость включения антиоксидантов в комплексную патогенетическую терапию паркинсонизма. К такому же выводу пришли ряд исследователей, изучающих механизмы ПОЛ в патогенезе паркинсонизма ( Kisii et al. 1985; Cohan 1986;Martilla et al. 1988). Наши исследования показывают, что активация процесса ПОЛ является важньм условием формирования ГПУВ в Ш.

3, Моаель_па2кинсонического_си^

Доказательство роли ГПУВ в ХЯ как непосредственного патогенетического механизма ПС, индуцируемого с помощью Mí Til и М£П+, привело к постановке вопроса о том, раэвиьаетси ли ПС при избирательной редукции ДА в )й и образуется ли при этом ГПУВ. Известно, что антитела к нейромедиаторам способны избирательно связывать соответствующие медиаторы в организме и изменять функциональное состояние систем и органов (В.А.Евсеев, С.В.Магаева, 1988; O'Brien et al 1975; Sandyk et al. 1987). Основываясь на этих данных, нам и разработан новый подход к моделированию ПС у крыс путем связывания ДА микроинъекцией антител к ДА в Ш.

Билатеральное введение антител к ДА в ÍH приводило к выраженному снижению двигательной активности животных. На фоне олигокл-иэзии наблюдались периоды "застывания", которые выражались во внезапном прекращзнии текущего поведенческого акта. Периоды акинезии

совпадали с периодами высокоамплитудной медленной активности, которые регистрировались на ЭГ обоих ffl на фоне низкоамплитудной активности. Все формы двигательной активности (ходьба, умывание, стойки и др.) осуществлялись только на фоне низкоамплитудной активности с преобладанием быстрых колебаний. Ригидность и тремор были выранены в меньией степени, чем олигокинезия. Возникновение мелкоамплитудного тремора головы коррелировало с появлением средне-амплитудной ПА в Экстрапираыидные симптомы и ЭГ изменения в большинстве случаев сохранялись в течение I суток. Исчезновение высокоамплитудных медленных волн в как правило, предшествовало редукции экстрапирамидных нарушений. Результаты наших исследований совпадают с данными Hiooenbaum с соавт. (1986), которые на модоли недостаточности ДА в >И, вызванной б-гидрооксидофаминсм, показали, что акинезия коррелирует с гипернктивностью Ж, а восстановление двигательной активности происходит на фоне нормализации ЗА в /Я.

Введение в ХЯ нормального ^-глобулина контрольных сывороток не вызывало существенных изменений ЭА и не приводило к нарушениям двигательной активности животных.

Результаты указанных опытов свидетельствуют, что ПС развивается также при избирательном связывании ДА в >Я антителами к медиатору. Развитие синдрома и в данных условиях связано с образованием ГПУВ в Ж. Причем, также как при введении нейротоксинов, избирательная редукция ДА в ffl приводит к развитию акинетико-ригадной формы ПС. Проведенные исследования ставят вопрос о значении ДА-ан-тител в патогенезе паркинсонизма. При паркинсонизме обнаружены антитела к тканевьи антигенам мозга, в частности,к Jil (А.П.Зайченко и др., 1981; Н.Б.Маньковский и др., 1982; Г.А.Севостьянова и др., 1982; Pouplard ot al. 1984; Kuhn et al. 1987), однако их значение в патогенезе данного заболевания до сих пор но было объектен специальных исследований. Возможность участия ДА-антител d развитии паркинсонического синдрома показана впервые.

Таким образом, проведение исследования показывают, что подавление функции нигростриарной дофаминергической системы, независимо от каузального фактора, приводит к гиперактивации холкнергических нейронов и образованию из них ГПУВ, с деятельностью которого связано развитие акинетико-ригидной формы ПС. С этим согласуется таквд многолетняя клиническая практика лечения паркинсонизма с по-

нощью различных холинолитических средств. Исходя из этих данных можно было предположить, что ГПУВ может образоваться не только вследствии первичного дефицита ДА в ЭЯ, но и при непосредственной активации холинергических нейронов в условиях сохранения ДА-ергической иннервации. Следовательно, характерные для паркинсонизма двигательные симптомы могут быть вызваны прямой стимуляцией холинергических нейронов >Я. Изложенное явилось основанием для постановки вопроса о том, формируется ли ГПУВ при активации холинергических нейронов XI, имеется ли корреляция между его активностью и клиническими проявлениями ПО.

4. Ь!одель_паркинсонического_сищромаА_внзв

введе™ем_АХ_с_П£Озерином_в_)Я.

Билатеральное введение в К! АХ с прозерином вызывало всю три-аду'основных двигательных нарушений ПС: олигокинезию, ригидность и тремор. Эти симптомы наблюдались у всех животных, степень выраженности их зависела от дозы вводимых препаратов. Оптимальным было сочетание 5 мкг АХ и I мкг прозерина. После интракаудатной микроинъекции АХ с прозерином вначале возникал мелкоамплитудный грамор передних лап, который в дальнейшем охватывал и другие чвс-ги тела. Тремор развивался на фоне умеренной олигокинезии и ригидности. Генерализованный тремор бьм выраженным в течение 30-40 мин, а тремор передних лап и головы до 1,5-2 ч. По мере редукции тремора, в клинической картине стали преобладать олигокинезия и ригидность, которые сохранялись до 4-6 ч. Появление и редукция тремора соьпадали с появлением и исчезновением в и СК сгруппированных разрядов гиперсинхронизированной активности. В период преобладания олигокинезии и ригидности на ЭГ регистрировались диффузные низкоамплитудное медленные и быстрые волны, на фоне которых в Ж отмечались отдельные высокоамплитудные медленные волны. Такая динамика клинических и ЭГ изменений наблюдалась при системном введении оксотреморина, агонисто М-холинорецепторов.

Возникновение ПА, наиболее выраженной в после интракау-датного введения АХ с прозерином и системного введения оксотреморина свидетельствует об образовании в этой структуре ГПУВ. Для проверки этого заключения был проведен фармакологический анализ сиадрома, вызванного интракаудатньм введением АХ с прозерином.

Введение ДА (200 мкг в 4 мкл) в ростральные отделы Ж, куда ранее вводили АХ с прозериноы, вызывало повышение двигательной активности животных, исчезновение ригидности и редукцию тремора. Эти эффекты наступали одновременно с исчезновением гиперсинхронизи-рованных групповых разрядов и разрядов высокоаыплитудных медленных волн, однако диффузная медленная активность сохранялась. Системное введение циклодола на стадии развернутого ПС вызывало исчезновение тремора, значительное снижение ригидности и ослабление олиго-кинезии, которая не исчезала полностью. Редукция ПС наступала одновременно с исчезновением ПА и значительным угнетением медленных волн на ЭГ исследуемых структур.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что первичная гиперактивация холиноргических нейронов Ж в условиях сохранности ДА-ергической иннервации также приводит к формированию в Ж ГПУВ. С его возникновением и деятельностью связано появление экстрапирамидных нарушений в виде дрожательно-ригидной формы ПС. Результаты наших исследований совпадают с данными других авторов, которые наблюдали развитие паркинсонического синдромокомплекса у крыс, кошек и обезьян после введения в Ж различных холиноыимети-KOB ( Connor et al. 1970; Murphey, Dill 1972; Hyers 1974; Matthewa et al. 1978). Однако, эти исследования были проведены с целью изучения роли холинергических механизмов в возникновении экстрапирамидных нарушений. В наше" же работе впервые показано, что развитие ПС в данных условиях связано с формированием ГПУВ из холинергических нейронов Ж.

Проведенные исследования показывают, что ПС возникает при целенаправленном воздействии как на нигрострнарную ДА-ергическую систему, так и на холинергическую. Принципиальный патогенетический механизм развития синдрома во всех случаях связан с образованием ГПУВ в Ж. Изучение ЭА коры, Ж, Ш, ЧС, ШТ, гипоталамуса и гип-покампа на различных моделях ПС показывает, что начало развития синдрома коррелирует с образованием ГПУВ в Ж. Чем быстрее формировался ГПУВ в Ж и чем мощнее он был, тем быстрее он усиливал и синхронизировал активность других структур, создавая тем самым единый функциональный комплекс, реализующий экстрапирамидные нарушения. При ослаблении синдрома вначале снижалась гиперактивность других структур, потом только Ж, т.е. ГПУВ образуется первым, но исчезает последним. Это свидетельствует о том, что образование

ГПУВ в XI превращает данную структуру в первичную патологическую детерминанту, под влиянием которой образуется патологическая система ПС. Тот факт, что введение ДА и его агонистов, центральных холинсяигиков подавляет ГПУВ указывает, что основу патологической детерминанты состазлядт холинергическле нейроны )Я.

При с и ста/, ном введении МФТП, интракаудатном введении МФП+ наиболее выражена олигокинезил, а характерна признаком ГГ1УВ является редукция ритмической активности и преобладание высокоамплитудных разрядов дельта и тета надобных волн. При интранигральном введении МФП+ наиболее ьирахена риг;цушсть и олигокинезия. Характерны-! признаком ГПУВ при г,том является преобладание высокоамплитудных пароксизмальных разродов и високоамплитудных медленных волн. При интракаудатном введении АХ с прозерююм и в/б введении оксотре-морина наиболее Еыражен тремор, а ЭГ изменения проявляются высокоамплитудными гиперсинхронизированными сгруппированными разрядами. Эти даннсе свидетельствуют о том, что хотя во всех случаях моделирования первичной патологической детерминантой ПС являются гиперактивные структуры Ш, в которых образуетсяГПУВ, в каждом конкретном случае формируется своя патолсг/.ческая система, которая определяет развитие соответствующего синдрома. Исходя из этого следует, что клинический поли/орфизм паркинсонизма обусловлен тем, что пэрвичной патологической детернинантной является XI, морфо-функ-циональные особенности которого детерминируют возникновение; нэз-кольких патологических систем. Поэтому в зависимости от экзогенного фактора и направления патологического процесс ь.ожет возникнуть та или иная клиническая форма синдрома.

Электрографические изменения, наблюдаемые при различных моделях ПС, по основным признакам совпадают с результатами ЭЭГ-ис-следований при паркинсонизме. Характерной особенностью ЭЭГ при паркинсонизме считается склонность к медленным ритмам. Чаще других на ЭЭГ больных представлен тете-рлтм, который более характерен для акинетических форы паркинсонизма (Н.К.Боголепов и др., 1978; A.M. ВейН И др., 1981; Mareden et ab I9R6; Neufeld et al. 1988). Ha фоне тета-активности у больных нередко выявляются высокоамнлитуд-ные дельта волны, отмечается наличие единичных или групповых разрядов (В.А.Борисов и др., 1978; Н.М.Маджидов, Г.П.Кумарина, I97fi, Ф.А.Поемный и др., 1981; DeXwaid et al. 19®; Imal et al. ¡[987; Gerone et al. 1988).

Согласно теории генераторных, детерминантных и системных механизмов невропатологических андромов (Г.Н.Крыжановский, 1980, 1987), га или иная структура патологической системы, возникшей под влиянием патологической детерминанты, может приобретать значение вторичной самостоятельной детерминанты. Сопоставление динамики клинических проявлений ПС и ЭГ' изменений исследуемых структур позволяет подтвердить это положение. Как показывают результаты исследований, патологическая система, сформиро&анная при системном введении с началом ослабления ПС, и заканчивается в ВЕН и талзмусе. Тот факт, что БШ и таламус последними выпадают из патологической системы свидетельствует о формировании вторичной детерминанты в этих структурах. Это согласуется с представлениями ряда исследователей, которые считают таламус "пейсмекером" тремора (С.Н.Раева, 1977; Cains X97Q; liarabayashi 1985 и др.). Подтверждением того, что БШ и таламус являются вторичными патологическими детерминантами, может служить тот факт, что эти структуры являются наиболее оптимальной "мишенью" стереотаксического разрушения при паркинсо- 1 низме (Э.И.Кандель, 1966; 1981; Н.П.Бехтерева идр. 1976; Н.Я.Васин И др., 1978; Siegfried 1980; Selby 1985; liarabayashi et al. 1987). Считается, что такие к/еаательства наиболее эффективны при дрожательной и дрожательно-ригидной формах паркинсонизма. Такой эффект, можно полагать, обусловлен тем, что разрулается вторичная детерминанта, которая играет главную роль в поддержании патологической системы. Вместе с том, такие вмешательства малоэффективны при акинетической форме паркинсонизма, а у ряда больных лишь снижают степень выраженности дрожания и ригидности ( Соорэг et al. I9S4;' Kupeman 1985; Stem e : al. 1988 и др.). Этот факт можно объяснить тем, что данные вмешательства не ликвидируют первичную патологическую детерминанту в 1

5. Особенности_ГПУВ_и_клинических_проявл9ний_ПС_при различных_способах_его_мозелиЕ2вания.

Разработанные модели ПС отличались друг от друга по степени клинических проявлений и по характеру ГПУВ в Л. Результаты проведенных опытов показывают, что синлром, возникающий при изолированной активации холинергичэских нейронов ХЯ и синдром, возникающий при подавлении дофаминергичрской системы, не идентичны, хотя в последнем случае имеет место растормаживание и гиперактизация

стриарной холинергической системы. Очевидно, обусловлено это тем, что не идентичны нейрохимические и нейрофизиологические события, запускающиеся активацией холинергической системы и дефицитом дофа-минергической медиации. Об этом свидетельствуют клинические и электрографические различия возникновения, развития и распада пар-кинсонического синдрома, индуцируемого активацией холинергических нейронов и редукцией ДА в Хй. Эти различия дали нам основание условно разделить все модели ПС на "дофаминдефицитную" и "холинерги-ческую". Дофаминдефицитными являются модели, когда ПС индуцирован первичным дефицитом ДА в Ж (после интранигрального введения МФП4", после интракаудатного введения М$П+ и антител к ДА, после системного введения ЙЫП). Холинергическими являются модели, индуцирован ные Первичной гиперактивацией холинергических нейронов ХЯ (после интракаудатного введения АХ с прозерином, системного введения ок-сотреморина). Да-дефицитная модель ПС характеризуется, медленным формированием ГПУ В, длительным латентнш периодом возникновения и медленным развитием синдрома. ГПУВ проявляется пароксизмальными разрядами высокоамплитудных медленных и быстрых волн, а экстра-пирамедные нарушения - акинетико-ригвдной формой синдрома. Системное введение Л-дофа и агонистов ДА вызывает почти полное подавление ГПУВ в ХЯ и значительную редукцию ПС. Эффективность же центральных холинолитиков при данной модели выражена слабо, а в ряде случаев они угнетали двигательную активность животных и увеличивали частоту и амплитуду медленных волн в исследуемых структурах. Хо-линергическая модель ПС характеризуется быстрым формированиемГПУВ в XI, коротким латентньы периодом возникновения и быстрым развитием' синдрома. ГПУВ проявляется сгруппированной высокоамплитудной ПА, а экстрапирамидные нарушения - дрожательно-ригидной формой сивдрома. Систе'мное введение центральных холинолитиков полностью подавляет ПА и устраняет высокоамплитудную медленную активность, что приводит к исчезновению тремора, значительной редукции олиго-кинезии и ригидности. Интракаудатное введение ДА и системное введение агонистов ДА подавляли ПА, но не устраняли высокоамплитудные медленные волны; не полной была редукция олигокинезии и ригидности, некоторое усиление тремора отмечалось сразу после введения препаратов.

Можно считать правомерным использование вышеуказанного разделения моделей и при других способах воспроизведения синдрома (на-

иыер, с помощью 6-гидрооксидофамина, карбахола, обратимых и не-ратимых ингибиторов холинестеразы и др.), т.к. в реализации страпирамидных нарушений, наблюдаемых в данных условиях, вэдущую ль играют холинергическая и дофаминергическад нейромедиаторные стемы.

Развитие ПС как при подавлении дофаминергической медиации, к и при активации холинергической медиации в ffl указывает, что ициальным зв< ном патогенеза синдрома может быть не только дефи-;т ДА в Ж, но первичная гиперактивация холинергической системы гростриарного комплекса. По даннш известного специалиста по юблеме паркинсонизма Barbeau (1986) наблюдается 2 типа эволю-1И болезни Паркинсона: А - заболевание начинается с тремора и ри-1дн0сти, значительно позднее присоединяется акинезия; В - заболе-1ние нач/.нается с ранней акинезии и ригидности, потом присоединя-■ся тремор. Указанные типы течения болезни Паркинсона совпадают динамикой клинических симптомов и ЭГ изменений, наблюдаемых на шинергической и ДА-дефицитной моделях ПС. Исходя из зтого можно хздположить, что развитие той или иной формы синдрома в клинике 1болевания является следствием того, нарушение какой нейротрансмиг-|рной системы играет ведущую роль в развитии патологического про->сса. Этим, очевидно, можно объяснить, почему не все больные оди-iKOBO поддаются JI-дофа терапии и терапии центральными холинолити-

1МИ.

В последние годы установлено, что большая часть холинерги-!Ской иннервации ЧС концентрируется в ее компактной зоне Hender->п et al. 1987;Greenfield et al. 1989). Эти данные указывают, :о тесная функциональная с.и (зь между ДА и АХ имеется также в кома штной зоне ЧС. Этим можно объяснить экспериментальные данные, >гласно которым микроии$узия ацетилхолинэстеразы а ЧС вызывает ¡вышение спонтанной активности нигростриарных ДА нейронов (bast t cl. 1988), а микроинъекция холиномимстиков в ЧС у крыс индуци-/<ir дрожатольно-ригццную форму ПС ( НУ0ГЗ et al. 1981).

Таким образом, результаты проведенных экспериментов и данные 1тературы указывают, что разные клинические формы ПС имеют раз-ганые патогенетические механизмы, обуслаленные гетерогенностью зйронных популяций нигростриарного комплекса, гетерохронией вклю-зния нейрохимических и нейрофизиологических процессов-и гетеро-эпией инициального звена патологического процесса, С этих'позиций

следует рассмотреть патогенетические механизмы двух форм ПС. При акинетико-ригидной форме синдрома патологический процесс начинается с дегенерац-и ДА нейронов компактной зоиыЧ) или их терминалей в стриопаллидуме. При атом гиперактивация холинергических нейронов >Н является следствием дефицита ДА, в связи с чем ГПУВ формируется в }Н значительно позднее начала заболевания (когда потеря ДА клеток в ЧС достигает болео 8056 или когда уровень стриарного ДА резко снижен). Именно этим можно объяснить результаты фармакологических исследований, которые показывают, что подавление ГПУВ в ХЧ и редукция ПС, индуцированного введением МФП+ в ЧС, наиболее выражены при применении препаратов, действующих на различные ута-пы синоптической передачи в нигростриарных ДА-ергических нейронах. Об этом же свидетельствует клиническая практика применения агонис-тов ДА, которые наиболее эффективны при акинетических и акинетико-ригидных формах паркинсонизма.

Дрожательно-ригидная форма ПС (возможно также, только дрожательная) связана с тем, что патологический процесс начинается с гиперактивации холинергических нейронов >Я. При этом относительно быстро формируется ГПУВ в М, но значительно медленнее развивается дефицит ДА в XI и ЧС, а дегенерация пресинаптических ДА нейронов происходит значительно позднее поело начала патологического процесса. Это подтверждают фармакологические исследования, которие показали, что при холинергических моделях ПС активность ГПУВ в Ж и клинические проявления ПС наиболее эффективно подавляются центральными холинолитикаыи.

6. Е2:Ш&ботка_комплексндй_пат^ паркинсонического_сицд£ома. (

Согласно теории генераторных, детершнантних и системных механизмов нейропатодогических синдромов (Г.Н.Крыжановский, 1980, 1987) основным принципом их фармакологической коррекции является ликвидация патологических систем, а радикальным методом - ликвидация соответствующей патологической детерминанты. Исходя из всего изложенного вша становится очевидным» что основная задача фармакологической коррекции ПС должна быть направлена на подавление патологических систем, лежащих в основе олигокинезии, ригидности и тремора, а радикальным методой терапии их будет ликвидация патологической детерминанты путем подавления ГПУВ в ХП. Основными патоге-

нетическими звеньями ПС является дефицит стриарного ДА и активация холинергических нейронов ЗА. Поэтому, естественно, что ликвидация ГПУВ и подавление основных проявлений ПС может быть достигнуто путем восполнения дефицита ДА или ингибированием гиперактивности холинергических нейронов )Я. Как известно, дофаминомимети-ки и холинолитики в настоящее вр^мя наиболее широко применяются для лечения паркинсонизма (Л.С.Петелин, 1977, 1988; Л.Г.Столярова и др., 1979; А.М.Вейн и др., 1981; Н.П.Бехтерева и др.,' 1984; Н.Б.Маньковский, И.Н.Карабань, 1987; \Yebater еъ а1. 1985; Саг1вэоп 1986; Рга(1а вt а1. 1988 И Др.).

Влияние функциональных агонистов дофамина на экспериментальный паркинсонический синдром. Для изучения антипаркинсони-ческих эффектов как в отношении клинических проявлений ПС,- так и активности ГПУВ в экспериментальных исследованиях был использован ряд препаратов и веществ (ДА, Л-дофа, мадопар, бромкриптин, мидан-тан и его аналоги, катинон, Л-депренил), селективно действующие на различные этапы синаптической передачи в ДА-ергических нейронах. 3

Результаты исследований показали, что агонисты ДА вызывают снижение диффузной медленной активности, отчетливо подавляют па-роксизмальные разряды в исследуемых структурах, что коррелирует со значительной редукцией олигокинезии и ригидности. Нормализация ЭГ изменений происходило вначале в таламусе, БШ, ЧС, потом только в Ж. Эффекты агонистов ДА были наиболее выражены на ДА-дефицит-ных моделях ПС. На тремор ДА-миметики оказывали незначительное влияние, а на холннергических моделях даже несколько усиливали его. Эффекты указанных препаратов на сшигокинезию и ригидность при холинергических модел!х были значительно слабее, чем на МФТД и М$П+ моделях сиедрома.

Влияние центральных холинолитиков на экспериментальный паркинсонический синдром. Системное введение препаратов центрального холинслитического дейсть.ш (циклодола, фторацизина, фтордиметази-на) на холинергических моделях ПС приводило к исчезновению парок-сизмальных разрядов и угнетению пысокоамплитудной медленноволновой активности в исследуемых структурах, что совпадало с исчезновением тремора, значительной редукцией олигокинезии и ригидности. Введение циклодола на ДА-дефицитных моделях приводило к полному подавлению тремора, но на олигокинезию и ригидность оказывало меньшее влияние. После короткого периода ослабления олигокинезии отмеча-

лось угнетение двигательной активности животных, что сопровождалось увеличением частоты и продолжительности высокоаыплитудных медленных волн на ЭГ исследуемых структур.

Проведенные исследования показывают, что степень редукции клинических проявлений ПС зависела от того, происходило ли полное подавление ГПУВ в >Я после введения изучаемых средств. Препараты ДА были наиболее эффективны ПРИ ДА-дефицитных моделях ПС, а препараты с центральным холинолитическим действием - на холинсргических. В связи с этим следует отметить, что разная чувствительность больных паркинсонизмом к дофаминовым и холинолитическим препаратам привела ряд клиницистов к заключению о том, что болезнь Паркинсона неоднородна ( Maroden et al. 1981; Duvoisin et al.J985; Jenner et al. 1987; Сaine 1988). Однако, нет единого мнения относительно природы этого явления. Высказывается предположение, что эффект агонис-тов ДА зависит от степени нарушения функции постсинаптичаскнх дофаминовых Д2 рецепторов в стриатуме больных ( Rinne et al. 1985, ciovannini 1986; Kerkerian et al. 1988). Результаты наших исследований дают основание считать, что степень эффективности ДА-ыиметиков и холинолитиков зависит от того, нарушение какой медиа-торной системы играет ведущую роль в патогенезе формирования ГПУВ в ХЯ. Поэтому, нельзя согласиться с распространенным мнением, согласно которому лечение паркинсонизма целесообразно начинать с центральных холинолитиков.

Сравнительный анализ эффектов указанных препаратов на различных моделях ПС дает основание считать, что применение центральных ' холинолитиков наиболее эффективно в тех случаях, когда синдром сопровождается только дрожанием или дрожанием и ригидностью. Если зхе сивдром сопррвождается только акинезией, то эти вещества могут усиливать данный синдром. При акинетико-ригидной или ригидно-акинетической формах синдрома холинолитики могут применяться как дополнительное средство к агонистам ДА. Применение ДА-миметиков наиболее эффективно при акинетической и акинетико-ригидной формах синдрома. При дрожательной форме они усиливают течение синдрома, а при дро.жательногригидных формах могут применяться как дополнительное средство к центральным холинолитикам.

В проведенных исследованиях ни агонисты ДА, ни холинолитики сами не устраняли полностью все проявления ПС. Об этом свидетельствует и клиническая практика применения этих препаратов. Получен-

ныз нами данные позволяют полагать, что наблюдаемый неполный эффект данных веществ связан с тем, что они неспособны ликвидировать ГПУВ в >Я.

Как было показано нами в предыдущих разделах работы, подавление ДА-ергической медиации и гиперактивации холинергической системы нигростриарного комплекса является лишь начальным звеном процесса формирования ГПУВ. Необходимым условием прсьрьщонип >Я в патологическую детерминанту является вовлечение в этот процесс других нейромедиаторных систем (ГАМК, глутамат, серотонин, нора-дреналин, эндогенные опиоидные пептиды и др.), участвующих в регуляции двигательной активности (З.П.Бархатова, 1988; Carpenter ot al. 1987; Sarauel et al. 1988; Clow et al. 1989). В связи с этим очевидно, что одним из путей ликвидации патологической детерминанты является избирательное воздействие на различные нейроке-диаторные системы, функционально связанные с дофамннергической и холинергичос.-:ой знзтэмзми. Поэтому, для разработки комплексной патогенетической терапии ПС нами были изучены эффекты ряда препа- ' ратов с различньм механизмом действия.

Влияние веществ с различным механизмом действия на экспериментальный паркинсонический синдром..Ноотропные препараты относятся к средствам, активирующим высшую интегративную деятельность мозга и обладающим церебропротективкнми свойствами. Механизм действия этих веществ сложен и поликомпонентен. Он связан с мембраномоду-лирующими эффектами, влиянием на синтез белка и РНК, энергетические процессы (Т. А. Воронин3., 1989). Имеются данные о том, что но-отропы могут усиливать синтез ДА и ускорять его метаболизм в различных структурах мозга (З.П.Петков, 1989; Benesova et al. jggs), усиливать процесс обратного захвата холина в гиппокампе у старых животных ( Bartua ot alj982). Установлено, что ri условиях патологии (старение, гипоксия) ноотропные препараты защищают мембранные липиды от действия свободных радикалов, ускоряют репарацию фосфо-липидов мембран вповрежденных нейронах (1,аСУ 1985; Fischer et al. 1988, 1989). Было показано, что н синаптосомах коры мозга крыс выступает в качестве агониста глутаматных ауторецептороп (К.С.Раевский с соавт., 1986). Вышеизложенное явилось основанием для изучения особенностей аитипаркинсоничзских эффектов ноотропных препаратов пирацетама и анирзцетама.

Системное введение пирацетама на ДА-дефицитной модели (ин-транигральное введение М2Г1+) ПС вызывало редукцию высокоаиплитуд-ных пароксизмальных разрядов, которая, как правило, начиналась в БШ и таламусе и заканчивалась сначала в ЧС, потом в Ж. Угнетение ПА в исследуемых структурах коррелировало с увеличением двигательной активности животных. На ригидность препарат оказывал меньшее влияние, чем на олигокинезию. На ЭГ ЧС и Ж обычно сохранялась диффузная медленноволновая активность. На тремор пирацетам почти на оказывал эффекта или усиливал его. Подавление ГПУВ в ХЯ и редукция олигокинезии, ригвдности были наиболее выражены в течение 45-60 мин и продолжались до 1,5 ч. Такой же, но менее выраженный чем у пирацетама, эффект на ДА-дефицитной модели ПС оказывал анирацетам. Системное вьзденяе пирацетама в той же дозе (600 мг/кг в/б) крысам, получавшим оксотреморин (I мг/кг в/б) в начале усиливало тремор, а через 35-45 мин подавляло его. В это время отмечалось увеличение двигательной активности животных и ослабление ригидности. Подавление олигокинезии и ригидности на данной модели было менее выражено, чем на ЫФП* модели ПС. Но ослабление этих симптомов сопровождалось ослаблением ПА вначала в ЧС и ХЯ, а затем в бледном шаре и таламусе.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что ноотропные препараты пирацетам и анирацетам обладают антипьркинсо-нической активностью, которая направлена в основном на подавление олиго- и брадикинезии. Антипаркинсонический эффект ноотропов наиболее выражен на ДА-дефицитных моделях ПС. Учитывая данные о том, что пирацетам усиливает синтез и метаболизм ДА в различных структурах ЦНС, можно предположить, что антипаркинсонический эффект указанных препаратов в определенной степени реализуется через дофаминергические механизмы. Наличие дофаминергического компонента в действии их подтверждают и клинические исследования, согласно которым пирацетам подавляет олигокинезию и ригидность у больных паркинсонизмом (В.Ы.Морковкин и др., 1978; Г.П.Пантеле-' ева и др., 1978; Н.Ю.Вачинская, 1981).

К настоящему времени твердо установлено наличие тесной функциональной связи'между опиатными и ДА рецепторами в нигростриар- . ной системе (А.Я.Могилевский и др., 1987; Науетапп et а1. 1985; Ка11х 1984; оэ^епЪгапа et а1. 1986). Экспериментальные исследования, проведенные в последние годы, показывают, что в стриа-

туме опиатшв рецепторы локализуются на терыиналях ДА нейронов ( Arbathnott et al. 1987; Spamplnato et al. 1988; Schaefer 1988). Установлено, что связывание меченого мет- и лейэнкефалина в сгриатуме больных паркинсонизмом повышено, а связывание меченого налоксона значительно снижено в XFÎ ( Heiaine et al. 1979;

Rinne at al. 1984; Agid et al. 1985). Эти данные свидетельствуют о важной роли опиатных рецепторов в процессе трансмиссии ДА в стриатуме и позволяют предположить, что агонисты опиатных рецепторов способны подавлять доф&чинергическую медиацию в стриатуме. В этой связи следует отметить, что избирательная токсичность МФТИ к ДА нейронам была открыта в "новом синтетическом героине", который употребляли молодые наркоманы. Вышеизложенное явилось основанием для изучения янтипаркинсонического эффекта налоксона,"избирательного антагониста опиатных рецепторов.

Системное введение налоксона (0,5 мг/кг, в/б) на фоне развернутого ПС, вызыванного микроинъекцией IMIT* в ЧС, вызывало значительное увеличение двигательной активности животных. Эффект налоксона проявлялся быстро и через 15-20 мин достигал максимума. На ригидность его аффект был менее выражен. Влияние налоксона на тремор был неоднозначным. Действие препарата сохранялось до I ч, в дальнейшем наблюдалось резкое угнетение двигательной активности. Полученные результаты совпадают с данными ряда авторов, которые показали антипаркинсонический эффект налоксона на 6-ГДА и резерпи-ноиой модели ПС ( Friederich ot al. 1987; Gonzalez et al. 1989). Результаты наших исследований и данные литературы позволяют предположить, что налоксон обладает способностью усиливать ДА медиацию в стриатуме, о чем, очевидно, связана редукция олигокинезии и ригидности после введения препарата.

В последние годы установлены прямые связи мЬжду нигральными ДА нейронами и сгриарными нейронами,синтезирующими субстанцию Р (СР) Ш.Л.Ашмарин, М.А.Каменьская, 1988; Pettibone et al. jgeO; Graybiel 1986; Nylander et al. 1987). Имеются Данные О ТОМ, что стриониггалышп нейроны, содержащие СР, оказывают тоническое, возбуждающее влияние на нигральние ДА нейроны ( Bunney et al. 1987; Brent et al. 1988; Cador ot al. 1989). Исходя из этого было изучено влияние СР на ПС, вызванный хроническим (в течение 5 суток с 12 ч интервал т.- по 20 мг/кг в/б) введением ШТП крысам 12 месячного ьоэраста. Субстанцию Р вводили интрастриарно (5 мкг)

и внутрибрюшинно (125 и 250 миг/кг) животным, у которых были выражены олигокинезия и ригидность. Билатеральная микроинъекция CP в ростральные отделы Ж вызывала увеличение двигательной активности животных и сниэьенло ригт^ности. Редукция ПС была максимально выражена в первые 30 мин после введения CP, что сопровождалось уменьшением числа и продолжительности парокс.лзмальных разрядов, снижением амплитуды медленных волн в сенсомоторной коре л ХЯ. В дальнейшем олигокинезия и ригидность постепенно нарастали, а на ЭГ вновь регистрировались средне амплитудные быстрые и медленные волны. Через 3 ч после микроинъекции неиропептида отмечалось полное восстановление ПС и характерных для Ы$ТП электрографических изменений коры и ХЯ.

В контрольных опытах внутрикаудатное введение (Ьизиологичес-кого раствора не оказывало существенного влияния на ЭГ и клинические проявления ПС. Внутрибрюшинное введение CP не оказывало влияния на ЭА исследуемых структур и динамику ПС.

Таким образом, проведенные исследования показали, что введение CP в ростральные отделы Ж в область локализации ГПУВ, вызывает подавление активности последнего и значительное ослабление оли-гокинезии, ригидности. Данные о содержании CP в ЧС при паркинсонизме противоречивы. Согласно некоторым клиническим данным у больных паркинсонизмом иымунореактивность к CP в ЧС повышена ( Agid et al. 1985; Grafе et al. 1986;), по другим данным ( Mauborgue et al.1983; Tenovuo et al. 1984; elevens et al.1989) содержание субстанции P в ЧС у больных паркинсонизмом снижено. Предполагается, что изменение содержания CP при паркинсонизме носит вторичный характер и обусловлено дегенерацией ДА нейронов ЧС (Water et al. 1988). Результаты наших исследований дают основание полагать, что нарушение синтеза или метаболизма CP в нигростриарной системе является одним из патогенетических звеньев развития паркинсоническо-го синдрома.

Для ликвидации гиперактивной детерминантной структуры наряду со специфическими средствами, воздействующими на нейрохимическую природу ГГШЗ, существенное значение имеют неспецифические вещества. К такой терапии можно отнести применение противосудорожных средств при невралгиях тройничного нерва, пароксизмальных аритмиях, различных дискинезиях. Эффекты антиконвульсантов в данном случае обусловлены их свойством подавлять генераторы возбуждения различ—

ной нейрохимической природы (Г.Н.Крыжановский, 1980). В последние годы показано, что такие антиконвульсанты как примидон, клоназе-пам обладают способностью подавлять тремор (И.А.Иванова-Смоленская, 1986; Dietrichson et al. 1987; Koller ot al. 1987). ИСХОДЯ ИЗ этих данных можно было предположить, что антиконвульсанты могут подавлять ГПУВ з Ж и ослаблять ПС. В связи с этим был изучен ан-типаркинсонический эффект дийенилгидантоина (дифенина) на ДА-де-фицитной модели ПС.

ДиФенин вводили (20 кг/кг , в/б) на фоне олигокияезии и ригидности, которые развивались после хронического (20 мг/кг с интервалом 12 ч в течение 6 дней) в/б введения МФТП, крысам 12 месячного возраста. Системное введение дийенина уменьшало число и продолжительность парохсизмальных разрядов, снижало амплитуду медленных и острых волн в сенсомоторной коре и )Я. Эти изменения сопровождались редукцией олигокинезии и ригидности. Наиболее характерным эффектом дифенина была почти полная нормализация ЭА в )Я. Подавление ГНУВ в Ж и ослабление клинических проявлений ПС поело введения дифенина били более продолжительными, чем после введения других препаратов, и сохранялись до 3-4 ч.

Сравнительный анализ полученного материала показывает, что эЛФекты испытанных препаратов на ПС выражены в различной степени. Пирацетам, внирацетам и налоксон преимущественно подавляют олиго-кинезию, ригидность уменьшают в незначительной степени. Пирацетам и анираиетам несколько усиливают тремор, а налоксон уменьшает. Субстанция Р и дифенин оказывает влияние и на двигательную активность и на ригидность. При этом эффект СР наиболее выражен в первые 30 мин после введения препарата, а дифенина через 1,5-2 ч. Ослабление ПС во всех случаях было связано с редукцией основных признаков ГПУВ в /Я. Учитывая различный механизм действия испытанных препаратов их антипаркинсонический эффект можно объяснить тем, что они действуют на разные звенья патогенеза гиперактивной детерминант-ной структуры. Однако, ослабление ПС и ГПУВ в ХЯ после введения данных препаратов были менее выражрнными, чем после введения аго-нистов ДА или холинолитиков на соответствующих моделях. Это естественно, ибо эффективность фармакологической коррекции определяется тем, нарушение какой медиаторной системы мозга играет ведущую роль в патогенезе формирования ГПУВ в ХН при ПС.

Комплексное применение препаратов, оказывающих влияние на различные патогенетические звенья паркинсонического синдрома. Как было показано вше, даже специфическое воздействие на нейрохимическую структуру ГПУВ в ХЯ путем восполнения дефицита ДА или введением холинолитиков, несмотря на значительное ослабление ПС, не подавляет полностью гиперактивность детерминантной структуры. Поэтому патогенетическая терапия паркинсонизма должна предусматривать воздействие на различные звенья патологической системы. Комплексно 8 воздействие на отдельные патогенетические звенья обеспечивает более полное и адекватное влияние на патологическую детерминанту, в результате чего терапевтический эффект достигается при более низких дозах используемых веществ. Ослабление связей между частный патологической системы способствует снижению резистентности ГПУВ , благодаря чему достигается выраженный терапевтический эффект на ивдуцированный им нейропатологический синдром (Г.Н.Крыаа-новский, 1980, 1987, 1988). Исходя из изложенного, изучение влияния различных сочетаний препаратов представляет самостоятельную задачу для разработки адекватной фармакологической коррекции, а также для понимания сложного характера нейромедиаторных сдвигов, лежащих б основе экстрапирамидных нарушений.

Наиболее эффективным способом лечения паркинсонизма до настоящего времени остается применение дофаминоыиметиков, холинолитиков и их комбинация. Поэтому для разработки комплексной патогенетической терапии ПС мы изучали эффективность традиционных средств (циклодола и мадопара) в комбинации с пирацетвмоы, налоксоноы и дифенином. Учитывая возможность потенцирования эффекта применяемых средств доза каждого из них была снижена. Действие сочетанно-го применения препаратов на ЫФП+ модели ПС изучалось у крыс 10 месячного возраста, а на ЖЕП модели - у животных 12-13 месячного возраста.

Сочетанное применение Л-дофа (50 мг/кг в/б) и пирацетама (400 мг/кг в/б) при ПС, вызванном интранигральным введением М$П+, значительно ослабляло олигокинезию и ригидность. Данный эффект был менее выраженным, чем эффект только Л-дофа, но более продолжительным и сохранялся до 1,5-2 ч. Комбинация препаратов ослабляла тремор, что было наиболее выражено в первые 30 мин после введения Л-дофа и пирацетама.

Эффекты циклодола и пирацетама. Сочетаннов применение циклоида (3 мг/кг в/б) и пирацетама (400 мг/кг) значительно увеличивало двигательную активность животных, у которых синдром был ин-1уцирован введением МФП+ в ЧС. Этот эффект отмечался во всех временных интервалах и значительно превосходил эффект циклодола. Подавление ригидности и тремора было особенно выражено через 45-60 лин после введения препаратов.

Проведенные исследования показывают, что при сочетанном применении пирацетам ослабляет эффект Л-дофа на олигокинезию и ригидность, но несколько пролонгирует его влияние на указанные симптомы. Более эффективным оказалась сочетание пирацетама с циклодо-лом. На данной модели пирацетам не только потенцировал, но и пролонгировал антипаркинсонический эффект циклодола. Эти данные согласуются с таковыми, полученными при лечении нейролептического паркинсонизма с помощью циклодола и пирацетама (Г.П.Пантелеева, В.Л.Макеева, 1978; Hardie et al. 1988).

Введение мадопара (50 мг/кг Л-дофа и 12 мг/кг бензеразида) и налоксона (0,25 мг/кг) приводило к подавлению основных симптомов ПС. Данный эффект был более выраженным и длительнш, чем эффект мадопара. Значительная редукция тремора сохранялась до 4060 мин, а увеличение двигательной активности и снижение ригидности продолжалось более 2 ч.

Сочетзнное применение циклодола (3 мг/кг) и налоксона (0,25 мг/кг) ослабляло олигокинезию, ригидность и тремор. Однако эффекты данного сочетания на ПС были значительно слабее, чем эффект циклодола. Полученные результаты свидетельствуют, что налоксон потенцирует влияние мадопара на ПС и значительно ослабляет эффек? циклодола. Этот вывод подтверждается исследованиями ЭА коры и ХЯ. Введение мадопара и налоксона уде через 40 мин приводило к полной редукции ПА и высокоамплитудной медленной активности в коре и ХЛ, что коррелировало со значительным ослаблением ПС. Введение циклодола и налоксона приводило к снижению амгиЫт.уды медленных волн и укорочению продолжительности ПА. Среднеамплитулная медленная активность и кратковременные пароксизмальные разряды сохранялись в период действия препаратов и совпадали со степенью выраженности экстрапирамидных симптомоь.

Эффекты готоапетома и налоксона. Сочетание указанкых> ггрепа-

ратов ослабляло олигокинезию и ригидность. Данный эффект был наиболее выражен через I ч после введения препаратов и превосходил эффекты каждого из них в отдельности. Примененное сочетание сникало амплитуду тремора лап и укорочивало продолжительность периодов дрожания головы у опытных животных.

Эффекты сочетания мадопара, налоксона и дифенина. Данное сочетание приводило к полной редукции основных симптомов ПС. Характерной особенность» влияния такой комбинации была двухфазность действия препаратов на экстрапирамидные симптомы. Первая фаза действия была сопоставима с эффектом мадопар+налоксон и наступала через 40-60 мин после инъекции веществ. Вторая Фаза действия препаратов была менее значительной, чем первая йаза и наступала через 2 ч. Данная фаза продолжалась до 4 ч и намного превосходила эффект сочетанного применения мадопара с налоксоноы.

Эффекты сочетания циклодола, налоксона и дифенина были менее выражены, чем эффекты сочетания дифенина с мадопароы и налоксоноы, но превосходили эффекты сочетания циклодола с налоксонсы. Характерной для данной комбинации веществ, также как и предыдущей комбинации, была двухфазность влияния их на экстрапирамидные симптомы. Однако эффекты данного сочетания на ПС были наиболее выражены во второй сЬазе действия препаратов и проявлялись через 3 ч после введения веществ. Эти данные свидетельствуют, что включение дифенина в комплексы мадопар+налоксон и циклодол+налоксон значительно потенцирует эффекты указанных сочетаний как по выраженности, так и по продолжительности, что находит свое подтверждение в динамике ЭГ изменений сенсомоторной коры и хвостатого ядра.

Как было указано выше, сочетание мадопара и налоксона уже через 40 мин приводило к нормализации ЭЭГ и значительной редукции ПС. Однако,через 1,5-2 ч на ЭГ коры и ХЯ вновь появлялись высокоамплитудные медлейныэ волны и пароксизмальные разряды, что коррели] вало с нарастанием двигательных нарушений. При включении дифенина ' в данный комплекс через 2 ч регистрировались лишь единичные медленные среднеамплитудные волны, более выраженные в коре, а пароксизмальные разряды ни в коре, ни в ХН не регистрировались. Такая картина на электрограммах сохранялась до 3-4 ч, что совпадало со значительным ослаблением экстрапирамидных симптомов в данный период. Включение дифенина в комплекс циклодол+налоксон полностью

подавляло ПА и в коре и в ХЯ, но медленная активность сохранялась. Данный эффект был наиболее выражен через 3 ч после введения препаратов. В этот период в СК регистрировались единичные средне-амплитудные медленные волны на фоне дизритмичной быстрой активности, а в Ж на фоне низкоамплитудной быстрой активности сохранялась диффузная медленная низкоамплитудная активность.

Таким образом, проведенные исследования показывают, что на ДА-дефицитной модели ПС наиболее эффективными являются комбинации мадопара с налоксоном и дифенином, а также? циклодола с налоксоном и дифенином. Присутствие дифенина в указанных комбинациях подавляет ГПУВ в ХЯ, значительно потенцирует и пролонгирует влияние указанных сочетаний препаратов на олигокинезию и ригидность. На основании этих данных мы считаем целесообразным в1слючение дифенина, налоксона и пирацетама в КПТ акинегико-ригидной Формы ПС, а сочетание дифенина с центральными холинолитиками может оказаться рациональным в терапии дрожательной и дрожательно-ригидной форм синдрома.

Эффекты сочетания мадопара. циклодола. пирацетама и налоксона. При сочетанном введении мадопара (Л-дофа 50 мг/кг и бензеразида 12 мг/кг) , циклодола (2 мг/кг), пирацетама (300 мг/кг) и налоксона (0,25 мг/кг) выявлено подавление двигательной активности животных, незначительное снижение ригидности и тремора. Данный эффект сохранялся до 1,5-2 ч после введения препаратов.

Эффекты сочетания мадопара, циклодола, пирацетама, налоксона и дифенина. Включение дифенина в дозе 10 мг/кг в вышеуказанный комплекс не приводило к существенным изменениям направленности эффектов на экстрапирамидные симптомы. Подавление локомоторной ак-о тивности животных сохранялось до 3-4 ч после введения данного комплекса. Эти данные свидетельствуют о том, что однбвременное использование препаратов, потенцирующих эффект и дофаминомиметиков и холинолитиков, может не только снизить эффективность КПТ, но и ухудшить течение как акинетико-ригидной, так и лрожательной, дрожательно-ригидной форм паркинсонического синдрома. Можно предположить, что при такой комбинации ускоряется разрушение каждого из препаратов. С другой стороны, отсутствие эффекта такой комбинации на ПС обусловлено, по-видимому, тем, что воздействие на отдельные патогенетические звенья синдрома само по себе не може* остановить

развитие патологического процесса и ликвидировать патологическую детерминанту.

Таким образом, в настоящем исследовании на основных моделях паркинсонического синдрома показана существенная роль генераторных механизмов в патогенезе паркинсонизма. Полученные данные показали, что основные симптомы паркинсонизма (олигокинезия, ригидность и тремор) могут быть воспроизведены не только повреждением тел дофаминергических нейронов в ЧС, но и повреждением терлиналей нигростриарных ДА-ергических нейронов в )Я, избирательным связыванием ДА введением антител к данному медиатору в ХЯ, а также первичной активацией холинергических нейронов Ж. Установлено, что в каждом конкретном случае воспроизводимый ПС имеет свои особенности по характеру патологической детерминанты в >Я, манифестации экстрапирамидных нарушений, по времени формирования и распада ГПУВ в ХЯ, по времени возникновения и редукции двигательных нарушений, а также по резистентности к фармакологической коррекции. При микроиньекции Ш/П+ в компактную зону ЧС характерным признаком модели является ригидность и акинезия, при введении МФП+ в ростральные отделы наиболее выражены олигокинезия и ригидность. При интракаудатноы введении антител к ДА и системном введении МФТИ наиболее выражена олигокинезия. При активации холинергических нейронов Ш наиболее выражены тремор и ригидность.

На разработанных моделях установлено, что при ДА-дефицитных моделях наиболее эффективны агонисты ДА и налоксон, субстанция Р, дифенин. При холинергических моделях наиболее эффективны центральные холинолитики и пирацетаы, дифенин. Комплексное применение препаратов, оказывающих влияние на различные патогенетические звенья ПС позволяет рекомендовать использование в клинике новую комбинацию препаратов: мадопар, налоксон, дифенин при акинетико-ригидной форме; циклодол, пирацетам и дифенин при дрожательно-ригидной форые паркинсонизма.

Результаты проведенных исследований дают основание рассматривать паркинсонизм как гетерогенное заболевание. Формирование экстрапирамидных нарушений, развитие той или иной клинической формы заболевания при этом определяется тем, нарушение какой нейро-трансмиттерной системы нигросгриарного комплекса играет ведущую роль в организации патологической системы; эволюция заболевания определяется тем, в какой структуре начинается патологический процесс (в хвостатом ядре или черной субстанции) и какие структуры

и

вовлекаются в патологическую систему. С учетом этих положений необходимо анализировать патогенетические механизмы различных форм паркинсонизма и разработать патогенетическую терапию заболевания в клинике.

ВЫВОДЫ

1. Сложный полиморфный паркинсонический синдром, основными компонентами которого являются олигокинезия, ригидность и тремор, развивается как при первичном дефиците дофамина в нигростриарной системе, так и при первичной активации холинергических нейронов хвостатых ядер. Существенным патогенетическим механизмом паркинсо-нического синдрома, независимо от каузального фактора, является формирование генератора патологически усиленного возбуждения (ГПУВ) в хвостатых ядрах.

2. Дофамивдефицитная модель паркинсонического синдрома развивается при повреждении не только тел дофаминергических нейронов в черной субстанции, но и пресинаптических терганалей в хвостатом ядре, а также при избирательном связывании дофамина в данной структуре антителами к медиатору. Характерными признаками деятельности ГПУВ, возникающего в указанных условиях, являются пароксизмаль-ные разряды высокоамплитудных медленных и быстрых волн, а клинические нарушения проявляются акинетико-ригидной формой синдрома.

3. Холинергическая модель паркинсонического синдрома, развивающаяся при первичной активации холинергических нейронов хвостатого адра в условиях сохранения ДА-ергической системы и отсутствия дефицита ДА, характеризуется высокоамплитудной, во многих случаях сгруппированной, пароксизмальной активностью популяпии нейронов, составляющих ГПУВ. Клинические симптомы проявляются лро-жательно-ригидной формой синдрома.

4. Популяция гиперактивных нейронов хвостатых ядер, составляющих ГПУВ, играет роль первичной патологической детерминанты, формирующей патологические системы, которые лежат в основе соответствующих синдромов - акинезии, ригидности и тремора. Специфика синдрома определяется структурой его патологической системы -теми образованиями ЦНС, которые входят з данную систему. Важтан звеньями патологических систем дрожательно-ригидной формы синдрома являются бледшй! шар и ядра таламуса.

5. Одним из патогенетических механизмов формирования ГПУВ в хвостатых ядрах и развития паркинсонического синдрома после деструкции дофаминергических нейронов в черной субстанции является усиление перекисного окисления липидов нейрональных мембран в хвостатом ядре.

6. Препараты, влияющие на отдельные этапы синаптической перс-дачи в дофаминергических нейронах, наиболее эффективны при паркин-соническо;.! синдроме, обусловленном первичным нарушением дофаминер-гической медиации, а центральные холинолитики - при первичной активации хсшинергических нейронов хвостатого ядра. Эти препараты подавляют активность ГПУВ в хвостатом ядре, соответственно ослабляют клинические проявления синдрома.

7. При паркинсоническом синдроме, развивавшемся вследствие первичной гиперактивации хсшинергических нейронов хвостатого ядра, сгонисты дофамина усиливают тремор и провоцируют дискинезии, а при

. синдрало, обусловленном первичным дефицитом дофамина в хвостатой ядра, центральные холинолитики подавляют общую дсигательнул активность. Эти данные свидетельствуют о том, что длительное применение только дофашшомиметиков при дрожательной форао синдрома или толькс холинолитиков при акинетической форме синдрома будет усиливать двигательные нарушения и ухудшать течение синдрома.

8. Ноохропшо препараты (пнрацегш.!, анирацетам), антагонист опиатпих рицоптороа-иплоксон, нейропептид-субстанция Р и антшеон-вульсант дифенин, дейсгиуя на соответствующие звенья патологической дстор.шнанти, 0|{йЗШН1да пнтипаркинсонический эффект на дофамин-дилипитной модели синдрома.

9. Пирацатам потенцирует слияние циклодола на слигоккнезию и ригидность, а налоксон влияние мадопара на указанные симптомы. Сочетание мадопара с налоксонш и дифенином приводит к полному подавлению ГПУВ и исчезновению всех двигательных нарушений паркинсонического синдрома на время действия препаратов. Следовательно,

.для полного подавления ГПУВ и ослабления паркинсоничкского синдрома необходило сочетание препаратов, воздействующих на патогенетически взаимосвязанные звенья патологической детерминанты, т.е. применение комплексной патогенетической терапии.

10. Одновременное применение мадопара, циклодола и препаратов потенцирующих аффект каждого из них, усиливает проявления паркинсонического синдрома на дофаминедефицитной модели.

II. Разработанные модели могут быть использованы для изучения патогенетических меланизмов олигокинезии, ригидности, тремора и для выявления антипаркинсонических средств среди новых химических соединений. Изучение энтнпаркинсонического эффекта различного класса фармакологических препаратов позволяет рекомендовать использование п клинике новых комбинаций препаратов: мадопара, налоксо-на и дифенина при акинетико-ригидной форме; циклодола, тграцета-ма и дифенина при дрокательно-ригидной форме паркинсонизма.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Двигательная активность после разрушения сгриопаллидар-ных ядер // Мед.¡".урн.Узбекистана. -1981. II. -С. 41-44,- Соавт. А. Р. Ря химда а н о п.

2. Влияние аминазина на двигательную активность кроликов // Материалы юбилейной конференции ТАШ1У2. -Ташкент, 1982. -С.176-179.

3. Деструкция ядер ствола и двигательная активность у экспериментальных животных // Мед.хурн.Узбекистана. -1982.-№ 4. - С„ 141-144. -Соавт. А.Р.Рахимджанов. С.К.Саидкаримов.

4. Моделирование паркинсонизма (обзор) // Мурн.невропат, и психиатр.-1982. - 3, -С. 109-199.

С. Экспериментальный паркинсонический синдром у крыс, вызванный 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетраг11Дропиридином // Еюлл.экспе-пим.биол. и мед. - 1988. 4. -С.397-400.-Соавт. Г.Н.Крыжановский, З.А.ЗагоревскиЯ, Л.М.Шяркова, Т.А.Воронина, Л.Н.Неробкова.

6. Моделирование паркиноонического синдрома стимуляцией ло-лннергичаских нейронов хвостатых ядер // Заболевания органов дыхания и сердечно-сосудистой системы. -Ташкент,' 1983. -С. 16-19.

7. Моделирование паркиноонического синдрома путем изб!гратбль-ной дегенерации дофаминергических нейронов // Там ко. -С.13-16.

8. Перекисное окисление липидов при экспериментальном моделировании паркиноонического синдрома // Интеграгивная деятельность нейрона: молекулярные основы. Международный симпозиум, посвященный 90-летию со дня рождения П.К.Анохина. Тез.докл. -М., 1988.

-С.77-78. -Соавт. В.Г.Кучеряну, Е.В.Никушкин.

9. Фармакологическая коррекция паркинсонического синдрома, вызванного 1-метил-4-Фенил-1,2,3,6-тетрзгвдропирадино:) (МИН) //

Фармакология и научно-технический прогресс. Тез.докл. У1 Всесоюзного съезда фармакологов. -Ташкент, 1988. -С.29.-Соавт. Л.Н.Нероб-нова, В.А.Загоревский, Т.А.Воронина, Л.М.Шаркова, Г.Н.Крыжановс-кий.

10. Паркинсонический синдром, вызванный 1-метил-4^фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридином, у молодых и взрослых крыс // У Всесоюзный съезд геронтологов и гериатров. Тез.докл.-Киев. 1988. -Ч.1.-С.41.

11. Развитие паркинсонического синдрома у крыс при иммунологическом связывании дофамина в хвостатых ядрах // Там же. -С. 350. -Соавт. Г.Н.Крыжановский, С.В.Магаева, Л.А.Башарова, Л.А, Ветрилэ, В.А.Евсеев.

12. Нарушение перекисного окисления липидов (ПОЛ) у взрослых крыс после введения . 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина

и его метаболита II Там же. -С.368-369. -Соавт. В.Г.Кучеряну, В.А. .Загоревский, Л.М.Шаркова.

13. Влияние ноотропила на динамику ЭЭГ при паркинсоническсы синдроме, вызванном интранигральным введением МФП+ // Там же -4.2.-С.464-465. -Соавт. Л.Н.Неробкова, Т.А.Воронина, В.А.Загоревский, Л.М.Шаркова.

14. Фармакологическая коррекция паркинсонического синдрома, вызванного стимуляцией холинвргических нейронов хвостатых ядер. Сообщение I // Актуальные вопросы терапии. -Ташкент, 19Ш. -С. 183-187.

15. Фарлакологическая коррекция паркинсонического синдрома, вызванного ШТП. Сообщение И // Там же. -С. 187-191.

15. Порокксное окисление липидов в хвостатых ядрах при экспериментальном паркинсоническоы синдроме // Еюл.экспер.биол. и мед

- 1989. - }? 1.-С. 39-41. -Соавт. В.Г.Кучеряну, Е.В.Никушкин, В.А. Загоревский, Л.М.Шаркова.

17. Изменения ЭЭГ и явления паркинсонизма при интракаудат-ном введении антител к дофамину // Там же. -С.13-16. -Соавт., Г.Н.Крыжановский, С.В.Мага ева, Л.А.Башарова, Л.А.Ветрилэ, В.А. Евсеев.

18. Удобный синтез 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропириди-на ШРТР), избирательного до&аминергического нейротоксина // У Московская конференция по органической химии и технологии.Тез.докл.

- Ы. , 1989, -С. 233-234.-Соавт. В.А.Загоревский, Л.М.Шаркова, Е.В.Титова, Т.А.Воронина, Л.Н.Неробкова.

19. Нарушение регуляции пейротрансмнттерной системы мозга в патогенезе паркинсонического синдрома//Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. Тез. докл. IV Всесоюзного съезда патофизиологов. —М., 1989. —С. 79.

20. Моделирование паркинсонического синдрома с помощью антител к дофамину//Там же. —С. 243. —Соавт. С. В. Магаева, Л. А. Башарова, Л. А. Ветрилэ.

21. Клинико-электроэнцефалографические показатели паркинсонического синдрома, вызванного МФП+ у крыс//Бюлл. экспер. биол. и мед. —1989. —№ 2, —С. 147—150. —Соавт. Г. Н. Крыжановский, Т. А. Воронина, Л. Н. Неробкова, В. А. Загоревский, Л. М. Шаркова.

22. Синдром Паркинсона после введения ацетилхолина в экспер. биол. и мед. —1989. —№ 2, — С. 147—150. —Соавт. С. 522—525. —Соавт. Г. Н. Крыжановский, Т. А. Воронина, Л. Н. Неробкова.

Л 10737 от 3.7.89 г. За.к. 1058 Объем 2,5 п. л.

Типография МХТИ им, Д. И, Менделеева

Тираж 150