Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование и стандартизация новых мягких лекарственных форм на основе бишофита

На правах рукописи

СТРЕЛЬЦОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВЫХ МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ОСНОВЕ БИШОФИТА

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК2004

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ПЯТИГОРСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ АКАДЕМИИ

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор фармацевтических наук,

профессор Компанцева Евгения Владимировна

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук,

профессор Денисенко Олег Николаевич кандидат фармацевтических наук Волобуев Юрий Анатольевич ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Московская медицинская академия им.

И.М. Сеченова.

Защита состоится 'Л "^¿.¿рсцЯЖ004 г в часов на заседании диссертационного совета Д.208.069.01. по защитам диссертаций при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятагорской государственной фармацевтической академии (пр. Калинина, 11) Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета,,

доктор фармацевтических наук, профессор

О

Э.Ф. Степанова

2004-4 27383

Введение

Актуальность темы. Хроническое течение воспалительных ревматических заболеваний обусловливает необходимость длительного перорального применения лекарственных средств. Как правило, больные вынуждены принимать большое количество лекарственных препаратов, что создаёт проблемы переносимости, взаимодействия, противопоказаний. Поэтому остается актуальной разработка лекарственных средств для местной противовоспалительной терапии. Перспективным для этих целей является минерал бишофит, который был рекомендован для наружного применения в комплексной терапии таких заболеваний как. деформирующий артроз, заболевания нервной системы у больных с компрессионными и рефлекторными нарушениями шейно-грудного и пояснично-крестцового отделов позвоночника (радикулиты, люмбалгии, люмбоишеалгии), при мышечных котрактурах у детей, страдающих церебральным параличем. По химическому составу бишофит на 40% состоит из шестигидратного магния хлорида с включением макро- и микроэлементов. Основной фармакологический эффект бишофита при местном воздействии на кожу и слизистые связан с его противовоспалительным, рассасывающим, антиспастическим, сосудорасширяющим и иммунотропным действием. В настоящее время выпускается паста с бишофитом под названием «Бишолин», мазь «Бишаль» и пластыри бишофита. Кроме того, имеются патенты на другие мягкие лекарственные формы на основе бишофита. В качестве мазевых основ использованы композиции полиэтиленгликолей, моноглицерид, сорбитанолеат, ланолин, димексид в качестве пенетратора и др. Создана мазь в состав которой кроме бишофита включен местноанестезирующий препарат анестезин (бензокаин). Ввиду отсутствия научно-обоснованных данных о выборе мазевых основ и влиянии магния хлорида на их стабильность и реологические свойства представляло интерес провести сравнительную оценку и обоснование выбора мазевых основ с целью создания новых мягких лекарственных форм на основе бишофита.

Поскольку бишофит в насто т использовать при

различных травматических поражениях суставов и мягких тканей, актуален вопрос о введении в такие мази местноанестезирующего вещества. Наиболее часто для приготовления мазей используют анестезин. Поскольку анестезин представляет собой сложный эфир аминопроизводного ароматического ряда, становится необходимым решение вопроса влияния хлорида магния на химическую стабильность этого вещества. По имеющимся данным в мазевые основы для создания мазей бишофита рекомендуется вводить димексид в качестве пенетратора, что значительно расширяет задачу исследования и подразумевает исследование стабильности димексида в присутствии хлорида магния и анестезина, а также в присутствии компонентов основы.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования является обоснование состава, изучение стабильности и стандартизация мягких лекарственных форм, содержащих бишофит, анестезин и димексид в качестве пенетратора, для расширения ассортимента наружных нестероидных противовоспалительных средств.

Для реализации постановленной цели необходимо решать следующие задачи:

1. Изучить в опытах in vitro кинетику высвобождения ионов магния из различных мазевых основ и обосновать оптимальный состав для мази бишофита.

2. Обосновать оптимальные условия хроматографического анализа димексида и анестезина и разработать методики их определения в предлагаемых мазях.

3. Изучить влияние бишофита на стабильность анестезина и димексида, введенного в мази в качестве пенетратора.

4. Установить нормы качества на предлагаемые мягкие лекарственные формы бишофита и сроки их хранения с помощью метода "ускоренного старения".

Научная новизна. На основании сравнительной оценки реологических характеристик и высвобождения ионов магния установлено, что оптимальной

является мазевая основа на полиэтиленгликолях с М.м. 1500 и 400 и димексидом.

При изучении микробиологической чистоты в процессе хранения предлагаемых мазей показано, что в их состав не следует вводить консерванты.

Обоснованы условия газохроматографического определения димексида и разработаны методики определения его и возможных примесей в новых мягких лекарственных формах бишофита с димексидом.

Показано, что стабильность димексида увеличивается в присутствии бишофита, и в присутствии вспомогательных веществ.

Обоснованы условия хроматографического разделения анестезина и продуктов его деструкции методом ВЭЖХ. Разработаны методики для количественного и качественного определения анестезина методом спектрофотометрии и ВЭЖХ в мази бишофита с димексидом и анестезином. Установлено, что бишофит уменьшает стабильность анестезина в предлагаемой мази. В качестве стабилизатора предложено использовать натрия сульфит.

Практическая значимость результатов исследования. На основании проведенных исследований разработаны методики анализа и предложены нормы качества лекарственных препаратов: мазь бишофита с димексидом, мазь бишофита с димексидом и анестезином, мазь бишофита. Результаты валидации методики газохроматографического определения димексида, методик определения анестезина с помощью методов ВЭЖХ и УФ-спектрофотометрии по специфичности, линейной зависимости, правильности и воспроизводимости подтвердили обоснованность выбора используемых методов. Методики характеризуются простотой выполнения, экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество исследуемых лекарственных препаратов.

Установлен срок годности мазей в 2 года.

Результаты экспериментальных исследований использованы при подготовке нормативной документации на данные лекарственные препараты.

Внедрение результатов исследования в практику. Работа выполнялась по договору о научно-практическом сотрудничестве с Волгоградским государственным медицинским университетом. По результатам исследований разработаны ТУ, ТИ, регламент предприятия, проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на лекарственные препараты: мазь бишофита с димексидом, мазь бишофита с димексидом и анестезином и мазь бишофита. Материалы переданы заказчику и после проведения комплекса доклинических испытаний будут направлены для рассмотрения в Департамент по контролю качества. лекарственных. средств и медицинской техники МЗ РФ.

Положения выдвигаемые на защиту.

- обоснование оптимального состава мазей на основе бишофита по результатам высвобождения бишофита методом in vitro и определения микробиологической чистоты;.

- выбор оптимальных условий для газохроматографического определения димексида в присутствии продуктов его деструкции в мазях бишофита

- обоснование выбора методик определения анестезина методом УФ-спектрофотометрии и методом ВЭЖХ;

- результаты изучения стабильности димексида и анестезина при их совместном присутствии, а также в присутствии бишофита или компонентов основы;

- установление норм качества и сроков годности изучаемых мазей.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные

положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2001-2002 гг.), По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских наук ПятГФА (номер

6

государственной регистрации № 01.2.00101060) в рамках проблемы "Фармация" Ученого совета МЗ РФ секции №38.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 49 таблиц, 29 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", и 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 144 источника, в том числе 36 иностранных, и приложения.

Основное содержание работы 1. Обоснование состава мази с бишофитом -С целью прогнозирования биологической активности бишофита из различных мазевых основ (табл. 1), определяли кинетику его высвобождения методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану.

Таблица 1-Составы основ, используемых для приготовления мази

с бишофитом

Ингредиенты основы, г № основы

1 2 3 4 5 6

Ж-КМЦ 7,0 9,4

Глицерин 3,0 3,0 3,0 75,0

Аэросил 2,5 5,0

Крахмал 4,0

Полиэтиленгликольстеарат 10

Вода очищенная 803

Димексвд 15,0 10,0 15,0

Моноглицерид 10,5

Сорбитанолеат 1,0

Ланолин 11,0

Полиэтиленгликоль 1500 28,0

Полиэтиленгликоль 400 7,0

Бишофит 90,0 94,5 6,3 62,5 10,0 50,0

Установлено, что наибольшее количество магния за 60 мин. высвобождается из мазевой основы №2 и основы №6. Степень высвобождения магния из основы №2 составляет 51,3%, а из основы №6 49,5%, что значительно выше, чем из основ №№ 1,3,4,5 (рис. !).

10

30 45 60

1 мин

----Мазь №6 ----Мазь №5

.......... МэзьКМ -Мазь N63 -Мазь№2

Рисунок 1-Диаграмма высвобождения магния из модельных образцов мазей, содержащих бишофит Реологические характеристики мазей контролировали по основным показателям: пластической вязкости, предельному напряжению сдвига, степени тиксотропности. Кинетику структурообразования исследуемых мазей изучали в области изменения градиента скорости течения от малых к большим и от больших к малым скоростям. Построив по этим данным графики зависимости вращения от нагрузки получили "восходящую" кривую, которая в совокупности с "нисходящей" кривой, построенной при снятии нагрузки,- образует петлю «гистерезиса». Установлено, что наилучшей основой для мази. бишофита является основа №6, т.к. она обеспечивает наибольшее высвобождение магния, имеет оптимальную для гидрофильных основ вязкость, образует симметричную петлю гестерезиса, предельное напряжение сдвига ^ = 295,2) определяет хорошую намазывающую способность мази.

Таким образом, по своим биофармацевтическим свойствам мазь приготовленная на основе полиэтиленгликолей с М.м. 1500 и 400,

превосходит мази выпускаемые в настоящее время отечественной промышленностью (основы №1 и №2).

Известно, что димексид как пенетратор используется в концентрациях от 10 до 20%, для уточнения концентрации димексида на базе Волгоградского государственного медицинского университета было проведено исследование по влиянию димексида на проницаемость ионов магния через кожу крыс (таблица 2).

Таблица 2-Влияние димексида на проницаемость ионов магния

через кожу крыс

Препарат ДМСО, % Константа Т1/2, Коэффициент

скорости диализа, час проницаемости,

мМ/час мМ/час* см2

Минерал бишофит 20% раствор 0 1*10"5 1222 1,35*10'

3 7.13М0-4 972 2,67*10"'

5 8,37*10"4 828 2,5*102

10 1,57*10*'' 459 4,79*10"2

15 1,97*10'3 352 6,1*10-'

20 2,18*10""' 318 . 6,5*10"2

Линимент «Бишолин» 5 2,03*10"4 3407 ,г 7,48*10 *

10 3,43*10-* 2020 1,16*10-2

15 3,34*10"* 2075 1.10Ч0'2

Анализируя представленные данные можно сделать заключение, что

вспомогательные вещества влияют на проницаемость ионов магния.

Добавление димексида резко изменяет коэффициент проницаемости, причем

оптимальным количеством можно считать 15% димексида.

Для проведения сравнительной оценки специфической активности

мягких лекарственных форм бишофита при различных течениях

воспалительного процесса, по согласованию с заказчиком нами предложен

состав без димексида в виду того, что некоторые больные имеют

выраженную аллергическую реакцию на димексид. Также предложен состав

9

с добавлением; анестезина для снижения болевого синдрома при травматических поражениях суставов (табл.3).

Таблица 3- Составы мазей бишофита

Мазь бишофита с димексидом (1) Мазь бишофита (2) Мазь бишофита - с димексидом и анестезином (3)

ПЭГ-1500-28г ПЭГ—400- 7г Димексид-15г Бишофит-50г ПЭГ-1500-37г ПЭГ-400-13Г Бишофит-50г ПЭГ-1500- 28г ПЭГ-400-7г Димексид- 15г Бишофит- 50г Анестезин- 1г

Известно, что для предотвращения микробиологической обсеменённости в состав мазей вводят консерванты, но по данным Спасова А.А. бишофит проявляет антимикробную активность в отношении ряда микроорганизмов таких как стафилококк, стрептококк, кандида и некоторых других. В связи с этим для уточнения методики определения микробиологической чистоты нами проведены совместно с к.ф.н. Скребцовой Е.Н. испытания на; антимикробную активность предлагаемых мазей в соответствии с требованиями ГФ XI. Оказалось, что изучаемые мази не обладают антимикробным действием на все стандартные штаммы в условиях определения микробиологической чистоты (табл.4)

Таблица 4-Антимикробное действие мазей бишофита

Разведение Тест-микроорганизмы по ГФ XI изд. и Изменению №2 к ГФ XI

препарата изд.

В. ВасШих £ £ Л. Л. С. А.

сетей зиЫШ* соИ а<1опу аег^т аитет а1Ысап п'^ет

5 АТСС АТСС ГИСК о$а ■ АТСС I АТСС ВКМ

АТСС 6633 5922 103/39 ГИСК 6538-Р &85-53 Г

1072 453 1119

Мазь бишофита ■

1:10 + ± + + ± ± ± +

1:20 + ± + + + + + +

Мазь бишофита с димексидом

1:10 + + + + ± "" + +

1:20 ± + + + + + + +

Мазь бишофита с димексидом и анестезином

1:10 ± ± + ± ± ± + +

1:20 + + + ± + - ± + +

Контроль + + + + + + + +

культуры

микроорга

низмов

При этом все образцы приготовленных мазей выдерживают испытания на микробиологическую чистоту в соответствии с категорией 2, как после приготовления, так и после двух лет хранения. В связи с этим, мы посчитали возможным не вводить в предлагаемые мази консервант.

2. Разработка методов анализа и стандартизация мазей бишофита, биш офита с димексидом, бишофита с димексидом и анестезином Поскольку исследуемые мази бишофита являются новой агрегатной формой бальнеологического рассола бишофита Волгоградского месторождения, то для выбора оптимальных методов количественного и качественного анализа готовили модельные смеси мазей.

Для определения подлинности бишофита, который представляет собой 40% раствор шестигидратного магния хлорида, были; использованы химические реакции на ионы магния и хлорида. Определение подлинности димексида проводили методом газожидкостной хроматографии. Время удерживания основного пика на хроматограмме мази должно соответствовать времени удерживания раствора РСО димексида. Определения подлинности анестезина проводили методом УФ спектрофотометрии, используя раствор, приготовленный для количественного определения в сравнении со спектром поглощения раствора РСО анестезина.

Для количественного определения ионов магния в мази использовали метод комплексонометрического титрования. Установлено содержание ионов магния в модельных образцах мазей бишофита с димексидом, бишофита и бишофита с димексидом и анестезином. Относительная, погрешность определения не превышает ± 1,8% (таблица 5).

Таблица 5- Результаты определения ионов магния в модельных

образцах мазей

Метрологические характеристики

Магний (должно бьпъ от 0,040 до 0,047г в 1 г мази): Мазь бишофита с димексидом Мазь бишофита Мазь бишофита с димексидом и анестезином

X=0,0432 8Х=0,0003 Д7=0,00079 е.=±1,8% X =0,0437 5Х=0,0002 Д7=0,00057 £«=±1,3% Л" =0,0439 8„=0,0003 ДЛ^О,000774 Еа=± 1,8%

Предлагаемая методика позволяет определять ион магния непосредственно в навеске лекарственного препарата. Ввиду того, что используемый для изготовления мазей бишофит содержал 8,5% ионов магния предлагаемая методика также не отягощена систематической ошибкой (должно быть 0,043г).

Для установления нормы содержания ионов магния мы руководствовались тем, что бишофит по НД может содержать от 8,5 до 9% магния, а допустимое отклонение должно быть в пределах ± 5 %. С учетом вышесказанного ионов магния в мазях должно быть от 0,04 до 0,047г в 1г мази.

Для качественного и количественного определения димексида и его органических примесей в мазях нами использован описанный в литературе метод газожидкостной хроматографии.

В ходе исследования было выяснено, что при работе на НЖФ Reoplex 400 в описанных в литературе условиях удалось получить четкие, но ассимметричные пики димексида и его органических примесей.

В процессе дальнейшей работы было выяснено, что снижение температуры термостата до 130°С и снижение подачи газ-носителя до 30 мл/мин приводит к получению четкого симметричного пика димексида (рисунок 2) и позволяет достичь максимального разделения пика основного вещества от пиков диметилсульфона, диметилформамида (внутренний стандарт) и от пиков органических примесей (рисунок 3).

1-спирт этиловый, 2-димексид Рисунок 2 — Хроматограмма модельной мази бишофита с димексидом

1- спирт этиловый, 2-диметилформамид, 3,4 — неидентифицированные примеси, 5 - димексид, б - диметилсульфон Рисунок 3- Хроматограмма модельной мази бишофита с димексидом при определении примесей Полученные условия ГЖХ анализа мы попытались использовать для определения димексида и его органических примесей в модельных образцах мазей бишофита. Однако при попытке использовать различные приемы для выделения димексида из мазей не удавалось осадить полиэтиленгликоли, а также провести экстракцию димексида с помощью различных органических экстрагентов. Так, при использовании эфира в качестве экстрагента можно было определить только 10% димексида, а хлороформа до 5%. По нашему мнению это очевидно связано с тем, что молекула димексида имеет выраженную поляризацию (высокий дипольный момент), поэтому она активно сольватирует, и может образовывать слабые комплексы как с бишофитом так и с мазевой основой, что не позволяет выделить димексид из мази. В связи с этим ввод пробы осуществляли без предварительной -экстракции димексида. При проведении эксперимента компоненты мазевой -основы и бишофита определению не мешали. Было показано, что ввод более 70 проб никак не отразился на работе колонки, дрейф нулевой линии не наблюдался.

Установлено, что относительная ошибка определения димексида в мази бишофита с димексидом находится в пределах ± 2,7%, а для мази бишофита с димексидом и анестезином ± 1,9%. Относительная ошибка метода количественного определения диметилсульфона и органических примесей в модельных образцах этих мазей не превышает ±3,5% (таблица б).

Таблица 6- Результаты определения димексида и его органических

примесей в модельных образцах мазей

Мазь Метрологические характеристики

Димексвд, г Диметилсульфон, % Суммарное количество посторонних примесей, %

Мазь бишофита с димексидом * =0,1520 8Х=0,0016 Д* =0,0041 £„=±2,7% X =0,0208' 8х=0,0002' Д 7=0,0005 £»=2,7% X =0,1028 8,=0,0008; Д 7=0,0022 £.=2,1%

Мазь бишофита с димексидом и анестезином X =0,1525 8Х=0,0011 Д7=0,0028. £.= ±1,9% X =0,04093 8,=0,00056-Д 1=0,0014 £.=3,5% X =0,1179 8,=0,0007 Д 7=0,0018 £.= 1,6%

При проведении валидационной, оценки установлено, что данная методика количественного определения димексида является специфичной, т.е. позволяет определять димексид в присутствии примесей; и вспомогательных веществ. Предложенная методика обладает также линейной зависимостью в области концентраций от 0,5мкг до 5 мкг, аналитическая область методики находится от 0,1425г до 0,1575г димексида в 1г мази, предел обнаружения 0,2мкг. Показано, что используемая методика воспроизводима, относительная погрешность определения не превышает ± 3%. Для получения результатов с данной относительной ошибкой

определения, достаточно провести только одно измерение. Кроме того, отсутствует отягощение результатов систематической ошибкой.

Для определения количественного содержания анестезина изучали возможность использования спектрофотометрического метода. Для растворения навески мази нами использован спирт этиловый 95%. Путём сравнительной оценки точности определения анестезина в спирте этиловом 95% и 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной дальнейшее разведение предложено проводить в 0,001 М растворе кислоты хлористоводородной. Установлено, что вспомогательные вещества в области поглощения анестезина не влияют на его спектральные характеристики (рисунок 4).

08

0.6

I

2«0. 280. ЗПО. 320. 34а ({м

Рисунок 4- Спектр поглощения раствора анестезина в растворе 0,001 М кислоты хлористоводородной

Для определения посторонних примесей в НД на анестезин используется метод ТСХ. Однако при попытке применить этот метод для разработанной мази мы обнаружили, что бишофит и полиэтиленгликоли не дают возможность определять примесь, так как нанесенная проба остается на линии старта. Поэтому мы остановили свой выбор на методе ВЭЖХ,

позволяющем разделить анестезин и продукты его деструкции. При выборе подвижной фазы исходили из данных литературы по определению анестезина. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил и полярный компонент системы - фосфатный буферный раствор со значением рН 3,0. Определение влияния, концентрации ацетонитрила на время удерживания примеси проводили при содержании органического модификатора в подвижной фазе от 15 до 70%, интервал варьирования был установлен в 5% (рисунок 5).

12 ю в

х '

I в

4

2 О

15 20 25 30 35 40 45 50 : 55 60 65 70

С.*

Рисунок 5 - Влияние концентрации ацетонитрила на время удерживания пика примеси Установлено, что при низких концентрациях ацетонитрила значительно увеличивается время удерживания как примеси, так и анестезина, что удлиняет время проведения анализа. Высокие концентрации ацетонитрила приводили к получению пиков с большой ассиметрией.

Таким образом, оптимальное разделение анестезина и его примеси (п-аминобензойная кислота), наблюдается в подвижной фазе ацетонитрил-фосфатный буферный раствор в соотношении 40:60 при рН 3,0 и скорости подачи элюента 70 мкл/мин, что позволяет определять анестезин в присутствии продуктов его деструкции (рисунок 6).

UL

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

мин

1- п-аминобензойная кислота, 2-анестезин Рисунок 6- Хроматограмма раствора РСО анестезина Используя для расчетов площади пиков РСО, мы предложили методику количественного определения анестезина и его примеси в мази бишофита с димексидом и анестезином. Относительные ошибки определения составили ± 2,1% для анестезина, ± 3,5% для примеси.

На основании полученных данных мы провели валидационную оценку- двух методов количественного определения анестезина: прямой спектрофотометрии и ВЭЖХ по параметрам специфичность, линейная зависимость, аналитическая область, предел обнаружения, воспроизводимость, систематическая ошибка, пригодность

хроматографической системы, установление, необходимого числа параллельных определений, сходимость двух параллельных определений.

Установлено, что методика УФ-спекрофотометрического определения анестезина в отличии от методики ВЭЖХ является не специфичной т.к. при использовании данной методики невозможно определение примесей. Обе методики воспроизводимы и не отягощены систематической ошибкой. Для получения результатов с достигнутой относительной ошибкой определения достаточно провести только одно

D 1.7 1.5 1.3 1.1 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1 -0.1

измерение, поэтому данные методики предложены нами как альтернативные для определения анестезина. Определение примеси анестезина предложено проводить методом ВЭЖХ.

3. Изучение стабильности димексида и анестезина в присутствии основообразующих веществ и бишофита Для изучения стабильности димексида использовали метод ГЖХ. При этом, для того, чтобы установить какие ингредиенты мази больше всего оказывают влияние на стабильность димексида нами исследовались: 1) 15% водный раствор димексида, 2) 15% водный раствор димексида в присутствии полиэтиленгликолей с М.м. 1500 и 400 (вспомогательные вещества), 3) 15% раствор димексида в бишофите.

Изучение проводилось согласно инструкции по определению сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения». Эксперимент проводили при температуре термостата 40°С.

Изменением качества лекарственных препаратов служило уменьшение площади пика димексида, появление дополнительных пиков возможных примесей, изменения окраски, запаха и значения рН растворов.

Для всех изучаемых объектов в процессе хранения было характерным' снижение содержания димексида и увеличение содержания продуктов его деструкции (рисунки 7, 8).

□ 13% водкий раствор димексида

■ 13% раствор димексида в -бишофите -

□ Раствор димексида ■ присутствии вспомогательных веществ

Рисунок 7-Зависимость содержания димексида от времени хранения растворов

Омсс. быес. 12шх 18ыес 24ыес ЗОиес

Время хранения.

□ 15% водный раствор димексида.

■ 15% раствор димексида в ■ Сииюфите

□ Раствор димексида в 1 присутствии вспомогательных -веществ

Омес бмес 12мес 1вмес 24мес ЗОмес Время хранения

Рисунок 8- Зависимость суммарного содержания органических примесей от времени хранения растворов димексида

Установлено, что в водных растворах димексид может хранится только 1,5 года, тогда как раствор димексида в бишофите и композиция димексида с полиэтиленгликолями остаются стабильными в течение 2-х лет.

Это на наш взгляд связано, с тем, что димексид может образовывать комплексы с основой мази и с компонентами бишофита.

Таким образом, установлено, что как раствор; бишофита, так и полиэтиленгликоли увеличивают стабильность димексида в изучаемой концентрации (15%).

Для изучения стабильности анестезина, использовали метод «ускоренного старения» при температуре 40° С. Поскольку анестезин относится к производным п-аминобензойной кислоты, при хранении, особенно в присутствии воды, он может подвергаться процессам деструкции, а именно гидролизу с последующим окислением, п-аминобензойной кислоты. Эти процессы могут ускоряться в присутствии катионов металлов, катализирующих процесс окисления. Такие катионы как медь, кобальт, железо, марганец содержатся в бишофите в концентрации до 0,1%. При выяснении компонентов мази бишофита с димексидом и анестезином, которые в большей степени влияют на стабильность анестезина, изучали стабильность 1% раствора анестезина, 1% раствора анестезина в бишофите, 1% раствора анестезина в полиэтиленгликолях с Мм. 1500 и 400, 1%

раствора анестезина в димексиде и образцов мази, исключающих поочерёдно один из компонентов основы и действующих веществ, причем действующие вещества и компоненты основы взяты в соотношении, прописанном в мази, недостающие количества доводили до массы водой очищенной.

Установлено, что модельные смеси,. содержащие в своём составе анестезин и бишофит, как и мазь, были стабильны только в течение 1,5 лет. При этом наблюдалось окрашивание в желтый цвет, а на хроматограмме наблюдалось увеличение площади пика примеси анестезина. Остальные модельные смеси и растворы сохраняли стабильность в течение срока, эквивалентного 2,5 годам условного хранения соответственно. Таким образом, установлено, что компоненты, входящие в состав бишофита, снижают стабильность анестезина в мази, в то время как стабильность димексида в мази бишофита с димексидом и анестезином остаётся в пределах срока определённого ранее.

В связи с этим нами были проведены исследования по выбору наиболее эффективного стабилизатора анестезина для мази бишофита с димексидом и анестезином.

Для выбора стабилизатора использовали различные вещества, способные предотвращать процессы окисления: метабисульфит натрия, сульфит натрия, лимонную кислоту, глицин, метионин, мочевину и их различные композиции, наиболее часто используемые как стабилизаторы лекарственных препаратов.

Установлено, что для стабилизации анестезина в мази бишофита с димексидом и анестезином достаточно присутствия сульфита натрия в концентрации 0,3 %.

Таким образом, нами разработаны методики анализа и предложены нормы качества мазей: бишофита, бишофита с димексидом, бишофита с димексидом и анестезином. В таблице 8 приведены показатели качества, нормы и методы анализа мази бишофита с димексидом и анестезином. Показатели качества других мазей те же и отличаются только отсутствием показателей для анестезина или для димексида с анестезином

21

Таблица 8 - Нормы качества мазей бишофита, бишофита с

димексидом, бишофита с димексидом и анестезином

Показатели качества Методы и нормы качества

Описание мазь белого или слегка с желтоватым оттенком цвета с запахом

Подлинность

Магний-ион реакция с фосфатом натрия, должен образовываться белый кристаллический осадок

Хлорид-ион реакция с нитратом серебра, должен образовываться белый творожистый осадок.

Димексид ty, извлечения ■ из мази ¡ должно совпадать с tya PCO димексида.

Анестезин ХтП извлечения из мази должно соответствовать с PCO анестезина.

Однородность в 3 пятнах из 4 не должно быть сгустков <

рН водного извлечения От 5,0 до 7,0

Микробиологическая чистота не более 100 бактерий и грибов суммарно (категория 2)

Количественное определение

Димексид ГЖХ-метод 0,1425-0,1575г димексида в 1 г мази

Ион магния Трилонометрия 0,04-0,045г магния в 1гмази.

Анестезин Спектрофотометрия 0,00984-0,01056г анестезина в 1 г мази

Посторонние примеси -диметилсульфон -суммарное количество -п-аминобензойная кислота ГЖХ-метод не более 0,1% не более 0,5% ВЭЖХ-метод не более 0,5%

Срок годности 2 года

Нами проведено исследование одной из важнейших характеристик лгкарственного препарата, как его способность сохранять свою стабильность при хранении. Определение сроков годности мазей бишофита проводили в соответствии с «Инструкцией по определению сроков годности, на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре» и в естественных условиях для мази бишофита, и мази бишофита с димексидом. Контроль осуществляли по всем показателям. качества, указанным в разработанных НД. При этом установлено, что все мази бишофита остаются стабильными сроком более двух лет. Таким образом, рекомендуемый срок годности определен в два года.

Общие выводы

1. Обоснована на основании литературных данных по использованию в медицинской' практике бишофита как; противовоспалительного средства природного происхождения целесообразность создания новых лекарственных препаратов на основе бишофита.

2. Проведена сравнительная оценка мазей бишофита, приготовленных на основах различного состава. Установлено, что оптимальные реологические характеристики и высвобождение обеспечивает основа на смеси полиэтиленгликолей с молекулярной массой 1500 и 400 и димексидом.

3. Разработана методика газохроматографического определения димексида и его возможных примесей в водном растворе, в растворе, приготовленном на полиэтиленгиколях с М.м. 1500 и 400, и в растворе бишофита. Относительные ошибки определения содержания димексида находились в пределах от ± 3,2% до ± 3,9%, а для примесей от ±1,3% до ±2,8%.

4. Изучена стабильность водного раствора димексида, раствора димексида приготовленного на растворе бишофита, и раствора димексида, приготовленного на полиэтиленгликолях с М.м. 1500 и 400. Показано, что бишофит и полиэтиленгликоли увеличивают стабильность

23

димексида. Установлено, что раствор димексида в бишофите и раствор димексида. в полиэтиленгликолях с М.м. 1500 и 400 остаются стабильными в течение двух лет, в то время как срок годности водного раствора димексида составляет 1,5 года.

5. Предложены методики количественного анализа бишофита комплексонометрическим методом, димексида и возможных примесей газохроматографическим методом в мази бишофита с дии ексидом. Относительные ошибки определения находятся в пределах ± 1,84% для комплексонометрического определения, и ±2,73% для газохроматографического определения.

6. Разработаны методики качественного и количественного определения анестезина методом спектрофотометрии и ВЭЖХ в мази бишофита с димексидом и анестезином.

7. Изучено влияние бишофита, димексида и вспомогательных веществ на стабильность анестезина, сделан вывод о том, что вспомогательные вещества и бишофит при совместном присутствии уменьшают срок годности анестезина в мази. Показано что оптимальным стабилизатором является 0,3% натрия сульфит. Проведено изучение стабильности мази бишофита с димексидом и анестезином.

8. Разработаны нормы качества и установлено, что срок годности мазей бишофита составляет два года

Список опубликованных работ

1. Биофармацевтическая оценка мазей на основе бишофита /Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров. (56; 2001; Пятигорск): Материалы... Тез.докл. Пятигорск, 2001.-С. 112. (соавт. Т.Ф. Марннина).

2. Разработка технологии и стандартизация мази «Бишофига» с димексидом. /Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке

кадров. (57; 2002; Пятигорск): Материалы... Тез.докл. Пятигорск, 2002.-С. 109. (соавт. Г.В. Сеньчукова).

3. Разработка и стандартизация мази бишофита /Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения /Материалы международного съезда (6; 4-6 июля 2002; с. Петербург-Петродворец) с. Петербург; Межрегиональный фонд «Адаптация» -2002. С. 152-154. (соавт. Е.В. Компанцева).

4. Изучение стабильности мази бишофита с димексидом /Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров. (58; 2003; Пятигорск): Материалы... Пятигорск, 2003.-С. 258.

5. Разработка методик анализа и изучение стабильности мази бишофита с димексидом / Фармация — 2004. - №2. принято к печати (соавт. Е.В. Компанцева)

СТРЕЛЬЦОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВЫХ МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ОСНОВЕ БИШОФИТА

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 09.01.04 г. Формат 60 х 84/16. Бумага книжно-журнальная. Печать — ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 80 экз. Заказ /V & £ Пятигорская государственная фармацевтическая академия

357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11. Ротапринт ПятГФА

РНБ Русский фонд

2004-4 27383

Актуальность темы. Хроническое течение воспалительных ревматических заболеваний обусловливает необходимость длительного перорального применения лекарственных средств. Как правило, больные вынуждены принимать большое количество лекарственных препаратов, что создаёт проблемы переносимости, взаимодействия, противопоказаний. Поэтому остаётся актуальной разработка лекарственных средств для местной противовоспалительной терапии. Перспективным для цели является минерал бишофит, который был рекомендован для наружного применения в комплексной терапии таких заболеваний как деформирующий артроз, заболевания нервной системы, у больных с компрессионными и- рефлекторными нарушениями шейно-грудного и пояснично-крестцового отделов позвоночника (радикулиты, люмбалгии, люмбоишеалгии), при мышечных котрактурах у детей, страдающих церебральным параличем. По химическому составу бишофит на 40% состоит из шестигидратного магния хлорида с включением макро- и микроэлементов. Основной фармакологический эффект бишофита при местном воздействии на кожу и слизистые связан с его противовоспалительным, рассасывающим, антиспастическим, сосудорасширяющим и иммунотропным действием. В настоящее время выпускается паста с бишофитом под названием «Бишолин», мазь «Бишаль» и пластыри бишофита. Кроме того, имеются патенты на другие мягкие лекарственные формы на основе бишофита. В качестве мазевых основ использованы композиции полиэтиленг-ликолей, моноглицерид, сорбитанолеат, ланолин, димексид в качестве пенетра-тора и др. Создана мазь в состав которой кроме бишофита включен местноане-стезирующий препарат анестезин (бензокаин). Ввиду отсутствия научно-обоснованных данных о выборе мазевых основ и влиянии магния хлорида на их стабильность и реологические свойства представляло интерес провести сравнительную оценку и обоснование выбора мазевых основ с целью создания новых мягких лекарственных форм на основе бишофита. Поскольку бишофит в настоящее время рекомендуют использовать при различных травматических поражениях суставов и мягких тканей, актуален вопрос о введении в такие мази местноанестезирующего вещества. Наиболее часто для приготовления мазей используют анестезин. Поскольку анестезин представляет собой сложный эфир аминопроизводного ароматического ряда, становится необходимым решение вопроса влияния хлорида магния на химическую стабильность этого вещества. По имеющимся данным в мазевые основы для создания мазей бишофита рекомендуется вводить димексид в качестве пенетратора, что значительно расширяет задачу исследования1 и подразумевает исследование стабильности димексида-в присутствии хлорида магния и анестезина, а также в присутствии компонентов основы.

Таким образом, целью настоящего исследования является:

Обоснование состава, изучение стабильности и стандартизация мягких лекарственных форм, содержащих бишофит, анестезин и димексид в качестве пенетратора, с целью расширения ассортимента наружных нестероидных противовоспалительных средств.

Для реализации постановленной цели необходимо решать следующие задачи:

1. Изучить в опытах in vitro кинетику высвобождения ионов магния из различных мазевых основ и обосновать оптимальный состав для мази бишофита.

2. Обосновать оптимальные условия хроматографического анализа димексида и анестезина и разработать методики их определения в предлагаемых мазях.

3. Изучить влияние бишофита на стабильность анестезина и димексида, введенного в мази в качестве пенетратора.

4. Установить нормы качества на предлагаемые мягкие лекарственные формы бишофита и сроки их хранения с помощью метода "ускоренного старения".

Научная новизна. На основании сравнительной оценки реологических характеристик и высвобождения ионов магния установлено, что оптимальной является мазевая основа на полиэтиленгликолях с М.м. 1500 и 400 и димекси-дом.

При изучении микробиологической чистоты в процессе хранения предлагаемых мазей показано, что в их состав не следует вводить консерванты.

Обоснованы условия газохроматографического определения димексида и разработаны методики определения его и возможных примесей в новых мягких лекарственных формах бишофита с димексидом.

Показано; что стабильность димексида увеличивается в присутствии бишофита, и в присутствии вспомогательных веществ.

Обоснованы условия хроматографического разделения анестезина и продуктов его деструкции методом ВЭЖХ. Разработаны методики для количественного и качественного определения анестезина методом спектрофотометрии и ВЭЖХ в мази бишофита с димексидом и анестезином. Установлено, что бишофит уменьшает стабильность анестезина в предлагаемой мази. В качестве стабилизатора предложено использовать натрия сульфит.

Практическая значимость результатов исследования. На основании проведенных исследований разработаны методики анализа и предложены нормы качества лекарственных препаратов: мазь бишофита с димексидом, мазь бишофита с димексидом и анестезином, мазь бишофита. Результаты валидации методики газохроматографического определения димексида, методик определения анестезина- с помощью методов ВЭЖХ и УФ-спектрофотометрии по специфичности, линейной зависимости, правильности и воспроизводимости подтвердили обоснованность выбора используемых методов: Методики характеризуются простотой выполнения, экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество исследуемых лекарственных препаратов.

Установлен срок годности мазей в 2 года.

Результаты экспериментальных исследований использованы при подготовке нормативной документации на данные лекарственные препараты

Внедрение результатов исследования в практику. Работа выполнялась по договору о научно-практическом сотрудничестве с Волгоградским государственным медицинским университетом. По результатам исследований разработаны ТУ, ТИ, регламент предприятия, проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на лекарственные препараты: мазь бишофита с димексидом, мазь бишофита с димексидом и анестезином и мазь бишофита. Материалы переданы заказчику, и после, проведения комплекса доклинических испытаний будут направлены для рассмотрения в Департамент по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ.

Положения выдвигаемые на защиту.

- обоснование оптимального состава мазей на основе бишофита по результатам высвобождения бишофита методом in vitro и определения микробиологической чистоты;

- выбор оптимальных условий для газохроматографического определения димексида в присутствии продуктов его деструкции в мазях бишофита

- обоснование выбора методик определения анестезина методом УФ-спектрофотометрии и методом ВЭЖХ;

- результаты изучения стабильности димексида и анестезина при их совместном присутствии, а также в присутствии бишофита или компонентов основы;

- установление норм качества и сроков годности изучаемых мазей.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2001-2002 гг.). По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских наук ПятГФА (номер государственной регистрации № 01200101060) в рамках проблемы "Фармация" секции №38. Ученого совета МЗ РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 156 страницах машинописного текста, содержит 49 таблиц, 29 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", и 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 144 источника, в том числе 36 иностранных.

Обзор литературы

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведена сравнительная оценка мази бишофита, приготовленной на основах различного состава. Установлено, что наиболее оптимальные реологические характеристики и высвобождение обеспечивает основа на смеси полиэтиленгликолей с молекулярной массой 1500 и 400 и димексидом.

2. Разработана методика газохроматографического определения диметилсульфоксида и возможных примесей в 15% растворе димексида и композициях приготовленных, на полиэтиленгиколях, и в присутствии бишофита. Относительные ошибки определения содержания димексида находились в пределах от ± 3,2% до ± 3,9%, а для примесей от 1,3% до 2,8%.

3. Изучена стабильность водного раствора димексида, раствора димексида, приготовленного на растворе бишофита, и композиции димексида, приготовленной на полиэтиленгликолях. Установлено, что раствор димексида в бишофите и композиция на полиэтиленгликолях остаются стабильными в течение 2-х лет. Срок годности водного раствора димексида составляет 1,5 года.

4. Предложены методики количественного анализа бишофита комплек-сонометрическим методом, димексида и возможных примесей газо-хроматографическим методом в мази бишофита с димексидом. Относительные ошибки определения находились в пределах 1,84% для комплексонометрического определения, и 2,73% для газохроматографического определения.

5. Разработаны нормы качества и проведена стандартизация мази бишофита с димексидом. Изучение стабильности показало, что срок её годности в естественных условиях и методом «ускоренного старения» составляет 2,5 года.

6. Разработаны методики и проведена стандартизация мази бишофита. Изучение стабильности показало, что срок её годности, определённый при хранении в естественных условиях и методом "ускоренного старения", составляет 2 года.

7. Разработаны методики для количественного и качественного определения анестезина методом спектрофотометрии и ВЭЖХ в мази бишофита с димексидом и анестезином.

8. Разработаны методики и проведена стандартизация мази бишофита с димексидом и анестезином. Изучено влияние бишофита, димексида и вспомогательных веществ на стабильность анестезина. Показано, что оптимальным стабилизатором является 0,3% натрия сульфит. Изучение стабильности показало, что срок её годности, определённый при хранении в естественных условиях и методом "ускоренного старения", составляет 2 года.