Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Экспериментально-теоретическое обоснование применения свободного консервированного аллоколо-трансплантанта в пластической хирургии желудочно-кишечного тракта(Экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ имени И. М. Сеченова

РГ6 ОД

7 ИЮН 1993 На пРавах рукописи

УДК: 616.345:617-089.843

МУХАМЕДКУЛОВА Марьям Мухитдиновиа

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ СВОБОДНОГО КОНСЕРВИРОВАННОГО АЛЛОКОЛО-ТРАНСПЛАНТАТА В ПЛАСТИЧЕСКОЙ ХИРУРГИИ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА

(Экспериментальное исследование) 140027 — хирургия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

„ Москва — 1993

/

■У - ■ /

* V V О

Работа выполнена в Таджикском государственном медицинском университете имени Абуали ибн Сино и Московской медицинской Академии имени И. М. Сеченова.

Научный консультант:

Лауреат Государственной премии, Заслуженный деятель науки России, академик РАМП, доктор медицинских наук, профессор В. В. Кованов.

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор Э. Д. Смирнова, Доктор медицинских наук, профессор В. Д. Розвадовскнй Доктор медицинских наук, профессор В. С. Васильев,

Ведущее учреждение — Институт Хирургии имени А. В. Вишневского РАМН.

на заседании специализ! ^ _ , ¡1 ¿Москов-

ской медицинской Академии имени И. М. Сеченова.

Адрес академии: 119881, г. Москва, ул. Б. Пироговская, 2/6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Защита диссертации

1993 г.

Автореферат разослан « ■14

»

1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук, профессор

Н. С. Королева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Актуальность проблемы. В настоящее время большое соцналь-ээ значение приобретает лечонгэ по восстановлению естествен-э2 попрерывноотл толстой ешшсп после обширной еэ резокцзи.По-10ДПШ1 сдуггт операцной выбора прп опухолях, а такяэ при не-восползтадышх и травматпческт: поражениях, ослоякен-с: обтурациояной кпиечной нешроходшгостыэ либо перфорацией в :гппуп полость о рааолтаои калового перитонита. Пзсу^ость пробела спроделяетея тек, что больпэтнетво оперпрованных больных с ;z;iöernc2 полсстоиой на поредноЗ брхгяой стопке становятся пн~ шдая, а пэрпед раабшнтацдл протечет у пех длнтзльно п гя-!ЛО (Абдорааая У .А., 1981} Curet-Ocott M.J., 1987; Uoolaury J. t .«aJ9BS; 7ЛПТЯН B.A., 1233} 5Um И.З, et al.I989; Bahi 3., 191).

»

Проблот восстановления еотестзегшой проходимости килечии-; псслэ пгзгшггаг опарзцгЭ является прэдмэтеп постоянного об-язозея, однако шюгаэ хгрдзштънне Еспрозя данной проблем осязая гзресэншиз. Трансплантация толстсЗ гсежз п.тл се сегкэн-л кап азрдаа? гюпепгя задачи прздетавляет одну аз стяг: мало« J48REHX ЕГОДОЕОЗ ( llllshoi И.О. St C.1I967). 3 П0СЛ0ДНЗЗ врОЯ<1 рургл проязлгст всо больной которое и колотранепяаятацяя, по-гая восьаа актуальная всследосазш бяслогпческях еопоктов то- и аглотраясшшнтадаа толстой киши с акцоят«! па оценку зноеьособноста трансплантата, язученпэ рзакциа отгеряония я зработсу способов оо подавления.

Вопросу пересадка кепэтных сегментов поовящеяы нсмяого^зо-вяна наследования (Краса В.Н., 1983; Шумаков В. II. я соавг., 53;3lelioki D. 1988} Кпрпатовскна И.Д., Скалозуб И.Н., 1989; яоусов S.B. и сбавт., 1989), среда: которых внделяется фута-

ментальный труд, автором которого является Кулак В.П.(1986),чьи работа показали принципиальную возможность свободной пересадки юшки и вместо с тем обнаружили чрезвычайную ее анатомическую и физиологическую слабость: кишечник как объект трансплантации отличается от остальных органов не только высокой чувствительностью к переживанию, но и особенностью отроения, заключающейся в богатстве лимфоидными элементами, определяющими силу и скорость реакции отторжения. Кроме того, крайняя чувствительность нервного аппарата кишечника обусловливает извращение его функции з посттрансплантационном периоде (Макарова В.М., 1967),что молот служить дополнительным осложняющим фактором.

Для поддержания жизнеспособности трансплантата кишки и пре, отвращения необратимых шемических повреждений в нем до настоящ го времени предложено немалое число различных методов. Большинс во исследователей отдает предпочтение охлаждению и перфузии сос доь и ее просвета кровью или заменителями крови ( Banner B.et а: 1988; Shir.aeu R. et al..I988; Kreyer J. et al.I989; Halcagawa Gt al.,1989; Schmia J. ey al.1989). •

Аллотрансплантацию толстой кишки без включения ее в крут кровообращения, без приемов противоишемической защиты трансплав тата и одопрес сивной терапии принято считать полностью бес перспективной. Однако опыт, накопленный исследователями из шкс лы академика В.В.Кованова (Кованов В.В., 1966, 1989; Парфентьех В.Ф., 1976, 1986; Биленко М.В., 1978; Щумаков В.И., 1983; Болт-рукевич С.И. 1984; Кулик В.П., 1986; Лапкина Т.И., 1986; Кирпа-товский И.Д., 1988; Кирошка Л.И., 1988), позволяет утверадать, что данная проблема не столь безнадежна, как это представлялос] до последнего времени: в экспериментах на животных доказана во: мощность успешного замещения больших дефектов различных органо]

тканей консервированными в растворах малой концентрации фэрм-гьдегида трансплантатами без явлений их скорого отторжокил.

Нарушения, связанные с обширной резекцией толстой киыки и шещенибм дефекта трансплантатом, требуют максимального внима-!Я к теоретическое осмыслению ряда вопросов данной патологии. 50бенн0 ваяно это при изучении условий, благоприятствующих то-знив восстановительных процессов, расширяющих пределы рзгоне-адаи в соседних с трансплантатом тканях реципиента. В конечном того это обеспечивает возможность перестройки коечного тракс-тантата за счет регенерата. Решение этой, казалось бы, чисто ;следовательской задачи прпсбротает большоэ практическое зна-знпе, так как позволит создать необходимую фундаманталыг/г) ос-зву для усопершонствованкя м расширения поиска кошх способов пестики оргслоз брзшяой почостп для 3£л:0щсж1я больших депонтов.

Гель исслелоряния: ёксперимэнталы'о-тесретичзскоа обссно-шив нового подкодз к рршбнзв проблем пластики толстой кишка гэлудаа свободным консершровашнм адлотрансплаятатом.

В соответствии с поставленной целью балл опродолены слэду-дио коикоетнне задачи:

1. Создать экспериментальное модола для изучения особонно-гсЗ течения рэпаратгвного процесса, при замещении дефектов тол-гей кишки н .телудка свободным консервированный аялотрансплаи-

вто?,!.

2. Разработать методику формирования биопротеза из свобод-огс аллотрансплалтата толстой кишки.

3. Разработать способ консервирования свободного аллотранс-лалтата толстой кишки на основе когглозиции формальдегида и яазоноидов.

4. Изучить закономерности изменений, протекающих в свобод-

ио;л аллотрайОи--лнтато толстой кишки, в зависимости от концентрации формальдегида и флавоноядов.

5. Оценить степень иумунологичоской и противоишемичвской защиты свободного аллотрансплантата при новом способе консервирования.

6. Оценить воздействие консерванта на физиологические показатели биопротеза толстой кишки из свободного аллотрансплантата.

7. Оценить влияние оптимального варианта композиций форы-альдегида и фдавоноидов на свойства созданного биопротеза толстой кишки в зависимости от срока консервации и периода замещения дефекта в толстой кишке и нелудке, а такав после гетерото-пичаской пересадки петли толстой кишки под ксау.

8. Обосновать достоверность образования полноценного регенерата в виде сформировавшейся органотипичеокоЗ стенки толстой кишки при вашдашш ее дефекта свободным консервированный алло-трансплантатом.

9. Разработать теюшку восстановительных операций на ьгаде-ллх сегментарной плаотшах толстой кишки с герметизацией меаки-иачкьпс анастомозов свободным консервированный еллотранопдантато^

Данная работа находится в рамках Основного Государственного плана НИР АМН Тадашютана. Работа входит в координационную программу НИР Т1Ш" по теме "Морфофункциональные изменения внутренних органов при экстремальных условиях".

Научная новизна исследования.

- Впервые воспроизведена свободная пересадка в аллогешой системе консервированного трансплантата толотой кишки. Разработаны оригинальные принципы аллоколопласгики, включая методы надежной герметизации ыанкишечных швов.

- На основании морфологических методов исследования уста-ионо, что в условиях замещения резецированного сегмента тол-3 кишки консервированным аллогонным материалом выявляется ха-горная закономерность - асинхронность процессов регенерация эзорбцди. Показано, что выраженное превалирование рогоиера-

тканевых элементов толстой кишки реципиента над резорбцией зорвированного трансплантата в области анастомоза лсз'г з )вэ перестройки и формирования органотипической структуры юбразозаяной стекки.

- Впорвые в условиях экспериментальной аллоколопяастикл азу-процесо васкулярязации регенерата и выявлена возможность ре->ротш нервных волокон через формалинизирсзавний трансплантат.

- Биологическую ценность новообразованной стенки толстой

я на основа аллогэнной ткани,консервированной формальдегидом ахчеппегл флазоноидоэ',подтверждают данные клиш1чэских,рентгс-•1тае(«их,гистологаческ1к,гистотл149с1'ла,биох1азггеск1г/.,цито-[ческих, гематологических и иммунологических исследований.

~ Уточнены оптимальные концентрации формальдегида и его смэ-

флавоноидамн для консервирования ткани толстой киаки.

- Выяснены некоторые физиологические механизмы действия альдегида и флавоноидов на уровнях, приближенных к метаболи-¡зл, - пролонгирование в их присутствии временя моторной ак-оста изолированной петли толстой кишки.

Теоретическая ценность работы заключается в том, что данные еденных исследований позволяют сформулировать повое научное . ставление о процессе регенерации в условиях пластики полых чатых органоз консервированным особым способом биоматериалом. ковлеяо, что при пластике толстой кишки, восстановлении ее эрУ-Еноотя после резекция консервированным одноименным алло-

трансплантатом выявляется характерная закономерность, заключающаяся б асннхронности регенерации-резорбции с выраженным отставанием последней, что обеспечивает в конечном итоге формировало новой стенки кепки, достаточно полноценной в структурном и функциональном отношении. Теоретическая ценность заключается та'ско в подтверждении для ткани толстого кишечника ранее уста-новлеккого научного факта относительно обеспечения формальдеги-до:; в качество консерванта особой фиксации биологических ткане! благодаря которой фиксированный материал не подвергается скоро] оттор.?.ок:а, а медленно резорбируется за время, достаточное дл образования мощного регенерата. Активная регенерация клеток во слоев культей, сосудов и рост нервных волокон через а

лстрансплантат обеспечиваются влиянием формальдегида, вымываем го но розорбируемого трансплантата и действующего подобно мет. бзлическсму альдегиду, а также флавоноидов, обладающих выражен к-м актиоксидантным и энергосберегающим эффектом. Благодаря п следнему реализуется активизация процессов репарации в зонах анастомозов и через них - в трансплантате.

Совокупность обоснованных в диссертации научных положений подтверждахждас целесообразность применения свободного консерви рэванного аллотрансплантата толстой кишки в пластической хирур пи: желудочно-кишечного тракта, создает необходимую фундамента ну» основу для усовершенствования и расширения поиска новых ев собов пластики органов брюшной полости для замещения больших л фектов с использованием достижений абдоминальной хирургии.пров тологии, трансплантологии и восточной медицины.

Практическая пенность и реализация результатов работы. Не стоящее исследование имеет экспериментально-теоретическую нащ лонность, и в то же время основные положения его приобретают ь

д

¡редственно прикладное значение. В процессе исследования ь-^лэ-[О, что ткань толстой кишки в пограничной с трансплантатом дотлеет большие потенциальные возможности в отношении ропаратив-I регенерации, достаточные для заведения больших дефектов толс-I кишки свободным консервированным аллотрансплантатом. Устлнов-га возможность и целесообразность использования кснсерзнрован-: по нашему методу аллотрансплантатов для замещения розециро-гкюс сегментов толстой кишки. Расширена возможности пластигм с 1ьв восстановления непрерывности толстой кишки после резекции, цучшие результаты колопластики получены в эксперименте после зесадки аллотрансплантата, консервированного сроком до 10 сут. ),Ц5-яом раствора формальдегида в сочетании с 0,01%-ным рлстзо-.-! флавоноидов.

Предложения и выводы диссертационной работез могут бы ТЬ гендованы дял использования:

- в лабораториях НИИ, ориентированных' на решение проблеет ^сервирования и пересадки органов и тканей, а такта пластики зечняка;

- в учебном процессе в медицинских учебных заведениях, на культвтах усовершенствования врачей по разделам "Спороции па ганах брпяной полости", "Операции'на толстой кншхо", "Цели и зможностп трансплантологии".

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждена яаседатшх кафедры оперативной хирургии и топографической атомнл Таджикского государственного медицинского университета .Абуали ибн Сино (1983, 1936, 1988, 1Э89, 1991, 1992); проб-мных комиссий по теоретической медицине (1983, 1989) и хирур-ческнм дисциплинам (1334, 1985, 1987, 1989, 1991, 1992)Тадз-Ш; датского общества анатомов, гистологов и эмбриологоз (1934,

1986, IS89, 1991, 1992); на совместных конференциях академюи ской группы академика РАМН В.В.Кованова при Российском научн центре хирургии РА,',Я и кафедры оперативной хирургии и топогр. фичзской анатомии Московской медицинской академии иы.И.М.Сеч' нова (1983, 1985, 1987, 1990-1992); годичных научных конферв] днях ТадаИИ (1981, 1987, 1992), 1-м съезда морфологов Таджик стана (Душанбе, 1987), 1-й республиканском съезде иммунолого: и аллергологов (Душанбе, 1991), 1-м съезде физиологов Средне! Азии к Казахстана (Душанбе, 1991), 4-м съезде хирургов Среда* Азии и Казахстана (Алма-Ата, 1982), Всесоюзной научной конференции "Пробле-^ы лимфологин" (Новосибирск, 1987), Всесоюзной научной конференции с международным участием "Лабораторные зи вотные для медико-биологических и биотехнологических исследо: ний" (Москва, 1990).

По тема диссертации опубликовано 17 научных работ. Полу1 но 6 удостоверений на рационализаторские предложения:

- "К ранней диагностике заживления анастомоза при илеоректо-пластике ручным швом в эксперименте" (удост.й 364 от 25.05.

Тада!й1/соавт.Ю.И.Кадушкин, Ы.М.Шифрина);

- "Способ васкуляризации толстой кишки с помощью колооментоа сии" (удост.й 931 от 20.12.86 ТадаЩ/соавт.Р.Ю.Бабаев, M.M.Gt рина) ;

- "Способ определения жизнеспособности консервированного киш< шиса"(удост.й 932 от 20.12.86 ТаджМИ/соавт.Ы.М.Шифрина) ;

- "Способ профилактики стенозирования после аллоколопластики с помощью эндопротеза'Чудост.Л 1427 от 21.01.93 ТаджМГУ);

- "Способ применения низких концентраций формальдегида в кач стве консерванта для толстой кишки"(удост.й 1428 от 21.01.93 ТаджМГУ/соавт.Ы.М.Шифрина);

"Споооб применения 0,1% раствора формальдегида в качестве онсорванта для трансплантации толстой кишка" (удост.й 1429 т 28.02.92 ТаджМГУ).

Объем работы и ее структура. Диссертация состоит из 7 лав, общего заклвчения, выводов и йиблиографичэского указа-еля, включающего 270 отечественных и 104 зарубежных поточ-аков литературы. Работа иллюстрирована 6 таблицами и ри-уккаки, содержащими фотографа рентгенограмм, макро- а шк-опрепаратов. Текст изложен на 250 стр. машинописи.

Работа выполнена в точение 10 лет ка кафедре оперативной ирургпл п топографической анатомии Таджикского Государственно-о гадицкнского университета имени Абуали абн Сяно л в академи-еской группо академика РА!Ш, заслуженного деятеля науки России, ауроата Государственной Прзыии, профессора Кованова Владпшра асильевяча на баао Российского научного центра хирургия РАМИ.

Личное участие автора п полтчонгл нзуvwnc результатов.

Данная работа выполнена автором самостоятельно по вс?п раз-злам. Являяоь хирургом по специальности, по смежным разделай аботи автор сотрудничала со слэдухцима специалиста!.®:

- основпыо морфологические исследования выполнены па кафод-э патологической анатомии ММА им.И.М.Сеченова под руководством октора мед.паук профессора Кодоловой И.М. Кроме того, гпстохи-нческио исследовалия выполнены на базе Института гастроэнтеро-огпа АН Таджикистана под руководством доктора мед. наук профео-ора Г.К.Мзроддева, а такае на кафедре патологической аяатоызш ШУ при участия канд.мед.наук М.М.Шифриной;

- ик.?унологпческий фрагмент работы выполнен на базе ЩШ [W с консультативной помощью канд.мед.паук Л.В.Адамчук;

- отдельные фрагменты работы выполнены в сотрудничестве

о академической группой академика В.В.Кованова.

Автор выражает искреннюю и глубочайшую признательность всем кохлвггм, способствовавшим выполнению данной работы, особенно благодарна академику РАМН Кованову Владимиру Васильевичу и профессору Кодоловой Ирине Михайловне ва ценные консультации и создайте условий, позволивших завершить работу.

На защиту выносятся следующие полояеншг диссертации:

1. Экспериментальное обоснование принципиальной возможности свободной трансплантации консервированного сегмента толстой кишки.

2. Обоснование споооба консервирования ткани толстой ккя-кп в комплексном растиоро, оодержащом малые концентрации фор:г~ альдегида и фяавоноида.

3. Обоснование выявленной закономерности, леаащзй в основ перестройки и формирования органотигшческой структуры новообра sosaimoíl отенки толстой кишки при плаотическом замещении ео се гмоата консервированной иллокишкой, заключающейся в асинхронно ста процессов регенерации и резорбции.

4. На основании полученных результатов - обоснованно науч пы:; и практических основ для постановки вопроса о создании"бак кь. тканой" для нужд клиник абдоминальной хирургии и проктологи

РАБОТЫ

Материал и метотгн исследования. Экспериментальные исследс залил выполнены на 755 еивотшх 3 видов: беспородных собаках глссой от 15 до 30 кг, всего 60 голов; беспородных крысах массой от 180 до 200 г, всего 660 голов; кроликах-самцах породи "¡Зяншллла" массой 2,5-3,0 кг, всего 35 голов. Проведено пасть серий экспериментов.

В первой серии изучали влияние консервантов на ¡азнеспо-¡обность свободного аллоколотрансплантата при 23-часовом бос-¡ерфузионном консервировании. Всего животных участвовало 32.

Во второй серии изучали влияние 0,1;1 формальдегида как сонсерванта-фиксатора с 0,01£ раствором флавокоидзв на сохра-генио биопластическзтх свойств кишечного трансплантата,то сот:, m его пригодность для выполнения роли бнокаркзса в процсссо реакции приживления-отторжения после аллопластической операции. Животных 36S.

Р третьей рорил изучали иммунологический ответ организма ia имплантацию фатальной толстой кишки под кс;:су ушной раковк-iu. Еивоткнх 40.

В четвертой серите проводила сравнительный анализ нроцос-зов репаративной регенерации тканей реципиента пр;* пластике толстой кншкл свободным консервированным аллотрансплантатсм. Зрох наблюдения I год. Животных 292.

В данной сорил обращали внимание на анатомическую и гистологическую структуру пересажанного отрезка толстой кишки.клшт-ческуп систгоматпку, состояние фагоцитарной активности нойтро-£илоз крови, активность окислительных формантов лимфоцитов,пей-грофалов и ткани кишки, скорость реакции гаперчувстЕИтельноотя замедленного типа (РГЗТ), характеризующей силу криза отторжения. Применен также ирригографический контроль.

В пятой серии изучали возможность герметизировать ¡.ганки-шечные анастомозы отрезками консервированного свободного алло-трансплантата толстой кишки. Животных 150.

В шестой серии изучали пластику сквозных дефектов стенки желудка свободны?.! консервированным аллотгансплантатом толстой юшки. Животных 152.

Интактншс животных 35 (собак 5, крыо 20, кроликов 10). Цряготорлотв консерванта для консервации свободного алло-траноплантате! толстой кишки. В качестве фиксирующего компонента использовали формальдегад (ФА) в концентрациях от 0,001? до 0.5Í раствор которого готовили путем приливания к физраствору насыщенного нейтрального раствора формалина.

В качестве биоактивной добавки в раствор формальдегида непосредственно перед применением использовали флавоноиды 0,01?. Флавоноида выделены из листьев облепихи крушиновидной, известно! в Таджикистане как чиносор. Кроме того, в раствор ФА добавляли ряд метаболитов энергетического обмена клеток.

Нами были использованы следующие консервирупцие растворы:

1. Для контрольных групп исследований - физиологический раствор и раствори формальдегида 0,001?, О,Olí, 0.I3Í и 0,5?.

2. Для опытной группы исследований - на I литр консерванта:

формальдегида 0,1% флавоноидов 0,01% К* 50 макв/л а+ 30,5 ыэкв/л НС0~ 10 мэкв/л

HgPO" и HP0g~ 42 и 8 мэкв/л

сукцанат 2,8 иг/л

цитрат 0,5 мг/л

аденин 10 мг/л

цатохром С 0,9 мг/л

глюкоза 50 г/л

рН при 37°С 7,1-7,2.

Раствор формальдегида после приготовления хранили в холодильнике при 4°С (срок но ограничен). Консервирующие добавки при тех со условиях хранили не дольше Ю суток.

Мэтодика консервирования. Сегменты толстой кишки, взятые

iT животных-доноров того же вида, промывали консервирующим рас-■вором до тех пор, пока промывные зоды не становились прозрачными. После этого для предотвращения спада стенки и поддержания [росвета на физиологическом уровне один конец отрезка порэвязы->алл полковой лигатурой, а с другого конца заливали раствор кон-¡ервалта таким образом, чтобн отрозок кишки бил заполнен без грезмзрного напряжения. Посла этого перевязывали полковой лига-•урой второй конец. Подготовленный таким образом трансплантат гогругали в банку, заао.чненяую той же консервирующей смзсыз.

Трансплантат хранили в холодильнике при 4°С I, 6 п 12 ч.„ 3 п 7-10 суток.

ЭЯСПШМЕЭТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ. Модель I. Техника пллотрштецлар-'aran толстой кати, Алдоколопласта:а осуществляйгол на крысах г собаках под яалалсоловым наркозом (доза для собак - 6,5, для rpuo - 10 кг/кг ггасси тела) с добавлением внутрлбрюзпнно 10%-toro раствора тпопэнтал-д натрия в дозе 0,6 мг/кг. Посла ерэдип-есЗ лапаротоиге н' выведения в ралу петля толстой кишки пронзво-яля еэ цобзхизагсгаэ и кдгпеащяув резекцеэ в продэлах рацнональ-Iых границ. Длина отрозка толстой кишка, взятого у собак, равняюсь 7-10 см. Б зависимости от массы животного это составляло ;00í-70í длины нисходящей толстой кишки. Аналогично производили зазэкцшо левой половины толстой киша у крыо - длина отрезка 2,5-3 сы, что составляет 100? этого отдела с<5одочной кишки. Па ;эсто резецированного отрезка кишки виивалн свободный кснсерви-зованный аллстрансплантат (от животного того же вида) путем на-1сго!ШЯ мзжкншечиых анастомозов по тяпу "конец-з конец".

Для профилактики сузопич просЕОта кишки трансплантат зая-»аяи с эндопротезом, представляющим собой эластичную полизтиле-íO'-TT„ трубку соответствующего просвету кишки диаметра,который

фиксировали с заходом на проксимальный и дисгальный когахы собственной кишка.

Модель 2. Техника профилактики несостоятельности щва на ки-цечникя о помощью коксервироданноур толстокишечного аллотрано-плантатя. Герметизация мелишшэчного соустья при резекции тoлcтoi кишки производится под юалипсоло-тиопенталовым наркозом,поело срединной лапаротомии у ообок и крыс в рану выводят петлю толстой кишки, которую резецируют о последующим ушиванием у собак трехрядным, у крыс - двухрядным муфтообразным швом и укутыванием соустья кишечным лоскутом, взятым от другого животного того же вида и выдержанного в соответствующих растворах. Ширина муфты для собак равна 3,5-4 см, для крыс - 1,5-2 см. Мтоту прикладывают серозной поверхности к дооарозированной поверхности килечного анастомоза (заявка па авторское свид.от 24.03.89).

Модель 3. Техника пластических операций на лелудке с помощью свободного консервированного тодстокмечиого аллотранс-плантата. Замещение дефекта желудка отрезком толстой кишки у со бак и крыс производили под калилсоловым'наркозом (доза для соба 6,5, для крыс - 10 мг/кг массы тола) с добавлением внутрибрюшин но 1055 раствора тиопентала натрия в дозе 0,6 мг/кг. При ауто-трансплантации после срединной лапаротомии производили забор от резка толстой кишки: у собак длиной 7-10, у крыс - 2,5-3 см с последующим погружением их в испытуемый раствор на I ч - 7-1Ос> На время консервации (за исключением I ч.) рану ушивали,а затек в нуанкй срок пшы снимали, края раны иссекали и в рану подводили породашз стенку келудка, на которой вырезали отверстие в виде аллипса у собак размером 3x6, у крыс 0,5-1 см, а в него впивали лоскут толстой кшки соответствующего размера, так что ел: зистая оболочка лоскута была обращена вовнутрь.

В случае аллотрансплантации операцию производили идентично, исключением выделения отрезка кишки и повторной лапарото.ляи аявка на авторское свидетельство от 24.03.89).

Модель 4. Техника ддплантахдст Фатальной толстой клики под яу ушной раковины. Донором служила сакса (крыса) на последнем оке боременностп, в качеотве реципиента использовалась другая цоа того го возраста. Перед операцией животных фиксировали д калипсоловым наркозом (в бедро внутримышечно взодят 5%~¡ik¡: створ катомила пз расчета 10 мг/кг массы тола). Самке-доиору низводили лапаротомив срединным надрезом, пзвлекали п.'од,а кз го - отрезок толстой кишки длиной 1,5 см, погружая его затем . I час при нештатной температуре в испытуемый консервирующий отпор. С внутренней стороны делали надрез ко.тл ушной раковины ысн-рзциппента, козу слегка отслаивали п в образовавшуюся нл-• вкладывала петли кллпш, а затем накладывал:! один узловой шов.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Иммунологические иссстцопания. актгяя галегчувстпптольности замедленного типа (РГЗТ). Антиген я поотапозкл реакции I3T готовили пз свезпзс и кснсервировал-х отрезков толстой кишка крыс и собак путем измельчения п го-гонпзацил о кварцевым песком па физрастворе в соотношении 1:1. лученную взвесь оставляла на 24 ч. при 4-6°С, затем цептрифу-ровалп в точение 3 млн. пря 3 тыс.об./мин, осадок отбрасывала, ютом надосадочную глдкость акпулировали п хранили на льду в ■розалгнико. Количество антигена оценивали по содержании белка, торий определяла по методу Лоуря. Для постановки реакции ки-th'ím вводили по 0,1 мл антигена зяутрякояно в одегу лапу, а в угуэ, которая служила контролем, вводили физраствор (перед шгь-ллей шерсть выбривали). Реакции оценивали через 4-6 ч. и затем 2 и 3 суток после введения, при этом учитывали степень гдпе-

рамки, отека и инфильтрации по 4-балльной системе. Из зоны инъекции одновременно забирали участок кожи для гистологического анализа.

Фагоцитащая активность нейтрсхЬилов крови (ФАН). Определяли в периферической крови, взятой у крыс после декапитации, у кроликов - из ушной вены, у собак - из вены передней лапы, по методу Н.В.Васильева в модификации Н.Б.Бердиева и соавторов по стадиям фагоцитоза (аттракции, опсонизации, поглощения и лизиса]

Ферментативная активность лейкоцитов крови. Определяли в периферической крови, взятой у крыс после декапитации, у кроликов - из ушной вены, у собак - из вены передней лапы, по методу Н.В.Васильева в модификации Н.Б.Бердиева и соавторов по стадиям фагоцитоза (аттракции, опсонизации, поглощения и лизиса).

Ферментативная активность лейкоцитов крови. Для определонн активности окислительных ферментов лимфоцитов - СДГ и альфа-гли церофосфатдегидрогеназы (альфа-ГФДГ, КФ) использовали цитохимический метод, прздлокенный Р.П.Нарциссовым.

Кимограстческое контролирование церпстальтической активности изолированной петли толстой киики. Метод изолированной кишки яо Магаусу использовали (наряду о гистологическим анализом) для выбора оптимальной концентрации формальдегида при бесперфу-зионном консервировании отрезков толстой кишки кроликов и крыс. Было изучено политическое действие консерванта в концентрации от 0,001^ до 0,5% в условиях спонтанных сокращений петли кишки, фиксируемых на кдмографо.

Рентгенолопгческое исследование кишечника. С целью контролирования состояния кишечника после пластических операций проводили ирригографшо иадечншса крыс и собак на рентгеновском аппарата марки ЕР 750 В; режим работы для крыс - 50 мА, 40 кВ,

),4 о; для собак - 150 ыА, 55 кВ, 0,25 с. В качество контраст-юго вещества попользовала 20$ взвесь сульфата бария, которуп ¡водили ректально с помощью шприца Еанэ собакам (50 мл) п од-[оразовым пзрздем без иглы крысам (3 мл) непосредственно перед )бСЛ9ДОВаШЮИ.

Г'опФо логические доследования. Забор материала (отрезка шзкя, включающего трансплантат п часть собственной кишкл рз-ппшапта) производили по стадия!', приживления я отторжения ка !, 7, 10, 30» 45-60 л 120 сутки после операции, в контроле -:о паздцсо 9-10 сут. Вначале препарат списнвалл гакрсскоппчз->кп, а сатзм для гпотологпчссглх ссслодоЕанпй фзкозровап в :0£-»гск рпсгссрэ нейтрального фзргазяна, готовили глстопрепа-тл, скрзпггз гагатопсглигх-зозаноз по гап Пхзопу, Рэйгорту, : ;.:зтодса пщроишцга сзребрсг.;, предло~опзл;м В.В.Купрп-

&*л изучаш*л архпт&кткпгкд сосудистого русла был нсполъ-'.оплп пагод прссгатлспгл в кзтклспск с-£про салтцглсвой кислоты по А.А.Акряозоа,

Суправптллы'уп окрлску 0Д;1-:::г.! раствором трппансвой сц-5с2 прслзводплп прз окспозицнз я течение I часа щп 37°С о по-?лздукщзй фиксацией стасьп Суз а п подхрггзваяне« квасцогкм 'врюзои.

Гзстояалггвокио исследования якаяп целъэ выявление РНК [окраска по Брала), а такие ферментов - оукцккатдогкдрогеназы [СДГ,КЯлэ Нахласу, альдогаддогндрогеназы (АДГ, КО) п щелочкой ^зс^атазы (ЩФ) по Гомори.

Статистическая обработка. Цифровой материал подвзргаян статистическому подсчету нйтодом сравнения средних результатов прь покощл показателя достоверности различий по Стьвдонту.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОЕШЯЙ

На основании изучения состояния двигательной активности изолированного сегмента толстой кишки показано: при консервации в физиологическом растворе двигательная активность толстой кишки сохранялась з течение 3 часов. Добавление в раствор формальдегида до концентрации 0,00001? приводило к уменьшению амплитуда сокращений, которые тем не менее сохранялись в течение 1,5 часа и несколько усиливались после отмывания кишки от формальдегида. Экспозиция изолированного отрезка в растворах альдегида убывающей концентрации 0,1?-0,000001? при 37°С через I ча< свидетельствует об уменьшении амплитуды сокращений кишки во вс< случаях, но особенно заметно при концентрации в 0,1?. Раствор альдегида в концентрации 0,5? вызывал наибольшее ингибирование функциональной активности петли кишки.

Экстракт из листьев облепихи, содержащий смесь флавоноидо: оказал отчетливое стимулирующее воздействие на перистальтическую активность кишки, более всего выраженное для 0,001? раствора. Тенденция к увеличению размаха "колебаний записи на кшо грамма в случае данной концентрации флавоноидов сохранялась,хотя н с нарушением ритмичности, до 27,5 часа, включая время ксн сервирования.

Консервация толстокишечных отрезков в 0,0001-0,00001? рас творе формальдегида на протяжении 19-20 ч. при 4°С и последующе о помещение отрезка кишки в 0,01? раствор флавоноидов при 37°С вызывал определенный эффект активизации моторики кишки в течение 5 часов после начала термостатирования. При содержании изолированной толстой кишки в смеси 0,1? раствора формальдегида и 0,01? раствора флавоноидов перистальтическая активность угасала к 4 часу.

Полученные розультаты свидетельствуют о том, что флавонои-в концентрации 0,01? и особенно 0,001;? стимулируют моторную нкцию отрезка толстой кишки. В то же время формальдегид в сла-х концентрациях (0,1^-0,000001^) является ингибитором функции шки. Их совместный эффект - 0,1% ФА и 0,01* флавоноады - ука-вает на своего рода протекторную роль флавоноидов в прнсутст-и формальдегида, так что реакция ингибирования замедляется, а

£ *7

.случае очень высокого разведения альдегида - 1.10 -10 - да-оказываотся обратной. В качестве оититлядъкого парпант? ксн-рвкр>'та;с.4 скзс~ выбр-гно сочоташ'.в формальдегида тт флапоноидоп концентрами,соответственно 0,1% и 0,015.

Визуальная тздртяда илкроскопи^скач структура толстой ек2 собаки, крысы и пролила в процесса выдергивания в физлс-тическсл растворе, з контрольных растворах формальдегида -001^, 0,01$, 0,1? и 0,5$ s в консервирующей с;.;еси "ало отлились по срока;-' з зависимости от видовой принадлежности. В пер-:з часы консервации з 0,00155 ФА серозная оболочка теряет свою исхичнесть. Болоо выиокая концентрация - 0,01^ - вызывает то i изменения, но более Бкратоиио. 0,1% к 0,5?! £<А шгиэдо? зш.тзт->е уплотнение тканей кишки па 2-3 сутки консервации, вслэдстзне зссаруязого эффекта альдегида. Однако питательные добавки в ви-! флавоноидов сохраняют способность отрезка толстой кишки к ияцкоиироввяню при консервации в ФА.

Наиболее благоприятна ковдонтрация флззонопдов 0,001^-0,01^: течение I суток в просвете кишки выявлено наличие раствора,ко-¡чествонно разное физиологической омкссти, серозная оболочка адкая и блестящая, мышечная и слизистая также без заметных из-1нзний. На 2-3 сутки макроскопическая картина сохраняется э юделах корнч. На 6 сутки слизистая оболочка частично отторга-

отся. На 7 сутки отторжение эпителиального слоя усиливается, что подтверждается методом суправитальной окраски с трипано-вой синькой. Данная картина оказывается типичной до 9-10 сут. консервации.

Таким образом, визуально мояно сделать вывод о том, что оптимальной концентрацией ФА для консервирования отрезков толстой кишки при добавлении питательных и стимулируицих смесей (флавоноидов и раствора В.М.Крысы) является 0,01??.

Морфологические изменения при консервировании толстой кишки в растворах формальдегида различной концентрации (табл.1) показали, что наиболее благоприятной по отношению к слизистой оболочка и другим слоям кишки является концентрация 0,01$. Добавка флавоноидов (0,01*) способствует более выраженной сохранности структуры всех слоев кишки, включая слизистую. Обнаруженная зависимость находят свое отражение в изменении макроструктура отрезка кишки и его способности к перистальтическим движениям. В концентрациях 0,1$ и 0,5$ формальдегид оказывает фиксирующее дойствио, поэтому при проБвденйи колоплаотшш мы использовали в качестве консерванта смзсь, содержащую формальдегид в концентрации и флавонопды - 0,01%, приготовленную на питательной растворе В.{.¡.Крысы.

Гиотохимичаокис исолодованпя изолированной толстой кипки пыявили в эпителии ворсинок слизистой оболочки высокий уровень активности окислительных ферментов - АДГ, СДГ и ЩФ и менее вырг тленную активность в эпителии крипт, 'что соответствует нормально! значениям отих показателей, лишь при концентрации ФА не вице 0,01%, да и то в точение 2 суток, максимум 28 часов. В течение того яе срока консервации и в тох ао условиях в ткани слизистой кишки сохранено высокое содержание РНК, которое значи-

морфологаческиэ ЕЗЬЮНОШШ В хкаши тилитил ¿ишш-л ииишш, луи.<шла д шуи^и^ишцш

в растворах формзльдегндз (ФА) отдельно п в сочетании с флавоноидамя (0,01?)

Ткань

Срок

Физраствор

ФА, %

(контроль)

0,001

0.01

!

0.5

10,1? ФА И -!флавоноиды 1(0.01%)

Слизистая оболочка

Покровный эпителий

Эпителий крилт.

Стрема слизистой

Подслнзист. слой

{¿ШЮЧНЫЙ

слой

1-12 ч истончение

I сут

3 сут 7-10 сут 1-12 ч

дескваыация очаговая

десквамацля

очаговая досквамация

I сут

отторжение частично сохранен

деекзамацзш Д9С1Цзаг'яРов'частично

деекзаьир. дескваыацяя -"-

сут

1-12 ч отечна

I суг 3 сут 7-10 сут 1-12 ч отечен

отечна

явл.дасгроф.

отечен

Серозная оболочка

I сут 3 сут 7-10 сут

1-12 ч разволокнол оточен

I сут

3 сут 7-10 сут

1-12 ч" о точна отвЧна

I сут

3 сут 7-10 сут -"Сосуда 1-12 ч малокровны полнокровны 7 сут -"-

отторжение сохранена уплотнение та,апвнная уплотнение

сохранен

отечна

несколько оточен

отечен

и

разрыхлен

насколько отечна

цветами отечен

сохранен

десквамация

незначительно

отечна уплотнена отечна

уплотнен сохранен

1>-Э сх

а

а »

отечна сохранена уплотнена сохранена утолщена -"- -"- ->

расширены расширены расшираны полнокровны

го

СО

и

п

п

и

тально уменьшается через 48 часов и практически сводится к нулю через 72 часа консервации. Высокая концентрация РНК свидетельствует о достаточно удовлетворительной степени сохранности анаболических процессов в ткани.

{Лорфофункниочальная характеристика биопластического материала при аллоколоттластике. При консервации сегмента толстой кишки в ¿изиолоп-:ч е ск ом растворе собаки и крысы погибали до 12 суток после операции при явлениях калового церитонита, вызванного несостоятельностью шзов в результате возникшей острой реакции отторжения. Среди опытных яиботиых пало 25?. Постопераци-ошшй период выживших тавотных протекал соответственно сложности операцио.шой травмы: к 7-10 суткам при общей удовлетворительном состоянии отмечалась нормализация стула, что свидетельствовало о достаточно физиологичном функционировании кпшочьика к трансплантата. По данным ирригографии, во всех случаях барий выполнял всю толстуэ кашку в:.":сте с анастомозом, границы которого четко видны в виде участков кольцевидного сужения на уровне верхней трети подвздошных костой. Через 4 mgc.-I год сужение кавзл}Г'.огалось, функция кишечника становилась полноценной.

По результатам морфологических исследований установлено, что в контрольной группе на C-I2 сутки наблюдения у погибших ообак и бэлих крыс имели место ропаративные процессы, протекавшие за счет концов кишки рэцшшакта, однако они выражены слабо. ОтторЕоагз ь г »ом случае трансплантата произошло практически полностью и ср:1зу, а не частая. Поэтому ссодинонке концов кивки рафи-чэпха с трансплантата эо>азоБагься па успевает,в результате чего происходит расхождение пшов анастомоза.

В опытной группе нь протяжении 4 ;лас. после операции на мэсто консервированного трансплантата формируемся ткань толотоЧ'

иеки. Формирование новой стэнки толстой кишки преходит сл9ду-щие этапы:

- на 3 сутки по линии анастомоза и вокруг трансплантата 1ктивная пролиферация молодой соединительной ткани с густой отыэ тонкостенных капилляров. В краевых зонах культи кишка ре-сипиента большое количество расширенных полнокровных сосудов о •либяами фибрина внутри 1шх;

- на 5-6 сутки некроз трансплантата, удаление яекротизиро->анных его частой через просвет кишки. Отчетливые три зоны ретратт: I. зона некроза; 2. зона воспаления (демаркационная) п

¡. зона грануляции. Утолщенно слоев, особенно серозы, культи кнш-щ реципиента, прилагающей к анастомозу, миоулляцяя мышечных пуч-сов. Первичное соединение между трансплантатом и концами кишки хэципиента;

- на 14 суткл продолжение отторжения кусочков трансплантата. Сохранение трех зон репарации. Врастание грануляционной ткани в гаружные слои некротизированного трансплантата. Начало созрева-пш грануляционной ткани, появление молодых коллагеновых волокон

I ж02еетеа тонкостонных сосудов по ходу вновь образующегося фут-шра. Шовный материал окружен соодянитольнотканной капсулой;

- к 30 суткам в укрепленной серозным покровом с сальником ;теяке трансплантата весьма разветвленная сеть сосудов. Сохранена зоны воспаления (демаркационной), но более узкой, нежели з тредадущие сроки. Продолжение созревания грануляционной ткани. Активное врастание коллагеновых волокон в серозный покров.Внутренняя поверхность вновь образованного футляра полностью очищена, в особенности концы анастомоза. В толще соединительнотканного регенерата отдельные хаотически расположенные пучки гладкомы-лечных клеток. Активное врастание переходного эпителия;

- к 45-60 суткам полное отсутствие зон некроза. Активнаi иаскуляризация вновь образованного футляра. Наползание эпителия в области анастомоза. Образование еолэз, разных по размеру, расположенных в глубине ткани, выстланных кубическим эпителием. Образование продольно расположенных мышечных пучков;

- К 4 мое, вновь образованная стенка кишки нормального органотшшческого строения: слизистая а подслизистел оболочки, строиальчая пластина, мышечный н серозный слои. Трехэтажная сс судистач сеть. Типичная архитектоника нервных пучков и узлов. Два слоя гладких мшщ - продольного п циркулярного расположат Нормальное строэнио слизистой» подслизпотой к серозной оболоче

Общая направленность пронесся гюпарзтгч. Наползанио гращ лчциошюго пласте, начинается с серозно£ оболочки культа роцшп екта при одновременном акткшеи фэриирог.аЕпз оооудиотего русл? Постепенно процесс регенерации и формообразования захватывает всо сдои стенки кашки. Закапчивается вгоцасс образованием goes го эпителия слизистой оболочки.

Определенно скорости реакции тчоторчуво'Л'-РЛ-еяъиостп замедленного типа (РГЗТ) поодо операции свздотельстзует о шгогокраз ном ее возрастании на фоне пзрессдки трансплантата в услозцях контроля: в 20-40 раз по сравнению с фоновыми дашпаш. Значительны;.! было такЕэ П0выш01шэ РГЗТ в опытной группе на 3 сутки после опзрацил (в 5-10 раз), что характеризует первую стадию цроцесса трансплантации - первичное приживление, однако позднее - на 6-7 сулси - в контрслэ криз оттсраегшя сопровождался высокой кнопочной активностью - РГЗТ оставалась на высоких pax; напротива в опыте интенсавнюс^ РГЗТ была резко подавленной и практически нэ отличав-, от £юновге: величин. Некоторый "вег.лооа" реакции ГЗТ'отшчэп ка 20 сутки после операции по

расадаэ формалинизированного трансплантата, однако он кззн:' телен, и aro можно отнести к числу нетипичных. В целом еоо-'йствие формальдегида о флавоноидами в период после операции 1рактерязуется отсутствием клеточной реакция, типичной для па-юда острого отторжения трансплантата, начиная с 5-7 суток.Ак-щизация клеточного звена иммунитета на 3 суткп после операции щдетельствует о том, что само хирургическое вмешательство вли-iT на состояние иммунокомпотентных клеток, внося некоторую доз аутоантигенов за счет измененного тканевого фонда. Однако па -7 сутка формальдегид и олавонопды оказывают выраженный ингиби-гасщй эффект в отношении РГЗТ. Аналогичные данные получены на знованиа определения активности окислительных ферментов лимфо-1тоз и нейтрофялов крови - сукцинатдегидрогеназы (основного фер-знта цикла трякарбоновых. кислот) и альфа-глицерофосфатдегадро-зназы (фермента, участвующего в гликолизе, энергетическом про-эссе анаэробного типа).

Контрольные данные указывают на феномен инверсии - когда ктивность алъфа-ГФДГ превышает активность СДГ, что отражает фа-у отторжения. Однако инверсия на наблюдается в случае пришивая форыалиназированного трансплантата толстой юшки. Более тоо, в этом случав активность СДГ несколько выше фоновых величин, . альфа-ГЗДГ - соответственно низке, что указывает на значитель-ую активизацию энергозапасащих механизмов в ткани, на отсутст-ае энергодефздпта, наблюдающегося при состоянии гипоксии.В нор-:е отношение активности СДГ к таковой альфа-ГФДГ равно примерно ,6. При аллотрансплантации в контрольных опытах, вследствие вы-'Ш*енной активизации клеточной реакции з форма "взрыва" окисли-'ельно-восстановитольных процессов в лейкоцитах ото соотношение тгзньшилось: коэффициент отношения активности названных фермой-

тоз был равен 0,67 (феномен инверсш). В опыте отношение по величине было близко к таковому у интактных животных либо несколько выше, что согласуется с литературными данными.

Фагоцитарная активность нейтроФнлов оказывается в значительной степени выраженной в контрольной и опытной группе на 3-10 оув после операции. Еслн в контроле и опыте на 3 сут.это связано со значительным выбросом нвйтрофилышх лейкоцитов из клеточного депо, то в более поздние сроки(в опыта вплоть до 45-50 сут.)- за счет все большего и большого вовлечения нейтрофолов в фагоцитарный процесс, а такжо за счет возрастания активности отдельных микроцитов, одновременно ускорялся переход нейтрофила от первой стадии аттракции к стадия:.! поглощения и переваривания,что свидетельствует о повышении степени созревания согыонтоядерных нейтро-фзлов, тс есть о том, что в организме имеются условия,энергвтичо-ски обеспечивающие напряжение протекающего процесса фагоцитоза. Достаточно высокая активность фагоцитов в крови после пересадки формаликизьроваиного трансплантата вплоть до 45-50 сут»свидетельствует о длительном сохранении нэкротизированных тканей(трансплантата л собственных, измененных под влиянием формальдегида)е их поток достаточно интенсивен, что н дерсит процесс фагоцитоза на высокой уровне. Однако, начиная о огого срока, фагоцитарная активность нейтрофилсв крови нормализуется, видимо, вследствие прекращения реакций воспаления, некроза н аутокммункзащш.

Таким образом, характер иьиуккых процессов, происходящих в организме псслэ пересадки формаликизирозашюго аллоколотранс-плантата, оусг-аег, о одной стороны, иигибпрованле клеточного звэна иммунитета, заинтересованного в развитии криза отторжения (РГЗТ), что находкт'езее подтв-зрздзнне а отсутствии феномена инверсии активности СДГ й. альфаыФДГ в шшфоцитях, а такЕэ в воз •

раоташщ в динамике эксперимента активности СДГ, а с другой -активизацию фагоцитарной активности нейтрофилов крови, осуществляющих но только фагоцитирование и в коночном итоге переваривание нокротически измененных клеток аллотрансплантата и собственных тканей организма, но и презентацию антигенов (они сохраняются до 45-50 сут.после операции). Непосредственная реакция на оперативное вмзшательство в виде лейкоцитоза нивелируется в среднем через 14 суток после пересадки.

Суммируя вышесказанное о результатах аллоколопластики с использованием форыалиназпрованного с добавлением фдавоноидов трансплантата, следует подчеркнуть, что процесс пересадки части кишки, гснотпческл несовместимой по основным локусам системы гистосовме-стимоста, в период поело операции не завершается острым кризом огторташя. Аляотрансплантат надежно выполняет роль с ластичного и удовлетворительно функционирующего органа, что и явилось решающим фактором в вышепредложекпой модели аллоколопластики.

Процесс регенерации толстой кишки начинается с серозной оболочки, что свидетельствует о большей жизнеспособности тленно данного слоя кпшкл. Слизистая оболочка, как наиболее лабильная в отношении поврождагщпх факторов, хотя и начинает интенсивно нарастать на трансплантат со стороны культи з начало п особенно в серо дине периода после операции, то есть на 45-50 сутки,тем не некое его фор-тареганде заканчивается в последний очородь, то есть к 4 мае. Это,по воей Еороятностп, можно объяснить его непосредственной близостью к инфицированным л некротпзпрованным массам в просвете кишечника, его повышенной способностью к обновлению и меньшей, нежели у других слоев кишки, отопоныо кровоснабжения.

Морфофункциональпая характеристика юормалкнизированнох'о ко-логрансплантата после пересадки в желудок. Контрольные кивотныв

погибли все до одного на 7-10 сутки после операции от расхожде-нея швов при явлениях разлитого перитонита.

Гистологическое изучение процесса заживления дефекта желудка в опытной группе показало, что в ранние сроки (5-7 сут.)отмечены явления воспаления и развития грануляционной ткани, как и 1 случае аллоколопластикн, при этом такжо происходит первичное соединение краев аллотрансплантата с краями желудка. Сам же трансплантат кэкротизлрован и медленно по частям выделяется в просвет келудка. В поздшо сроки (25-35 су т.) трансплантат полностьв отторгается, и на ого месте формируется стенка го дудка, нмепдая типичное строение. По сути, в данной случае так же, как Е при порасадко толстой кишел, тракошшнтат временно заполняет дефект органа - стенал желудка - без расхождения евов и служит сво&го рода биологическим хшркасом, па мосте которого и вокруг него фо] мируется регенорат и затем ткань, свойственная желудку. Саы же биоматериал некротизкруется и поотзпенно розорбнруется. Подобно го рода операция позволяет использовать предложенную каш аллопластику желудка толстой кишкой, при атом в постоперационныС период жодудок удовлетворительно справляется с функцией переваривания и эвакуации пищевой кезпцы.

Укрепление линии шва резецированного клпечкика бормаллст-Еированнцм аллограисплантатом» Предложенный способ муфтирования ьажкишечных анастомозов пмэот долью создание надежных условий для сражения кзов, которые часто в постоперацвонный период оказываются несостоятелышмз по ряду причин. Результаты наших ис-следз:>сг:Г)'Л'; сг'лстольствуют о тог,', Что данный метод гарантирует образование крапкдх мегашлт-ших ывел,' хотя сам трансплантат рас Сасыг-аеггл.

Показа'.?, что на 3 сутки поело операций на месте анастомоз

звивается выраженная воспалительная реакция, на 7 сутки швы азываются замурованными в толще слоя фибрина, при этом сам ансплантат прочно склеен о подлежащим анастомозом. На 16-21 тки трансплантат несколько истончен, его слизистая сглажена, енки фибрина практически отсутствуют. На 30 сутки обращенная аружи поверхность муфты представлена тонкой соединительноткан-8 пластиной, напоминающей серозу. Выявляются признаки воспале-я, однако сохранность швов полная. В этот срок остатки транс-янтата представлены в основном фибриновыми волокнами, цирку-рно охватывающими кишку в месте соустья. Быстрее (на 8-Э сутО надежнее образование анастомоза происходит при десерозировании 1верхнооти собственной кишки перед наложением муфты из аллотранс-:антата. Формирование плотного каркаса на место муфты происходит среднем через 3 месяца после операции.

Подсадка плодннх тапок под коду тха. Проведенные зксперимен-í отчетливо показали, что попользованный в качество фиксатора ¡рмальдегид в концентрации 0,1% в смеси с флавоноидамп (0,01$) 1медляет отторзение адлотрапсплантата. Если в контроле хирурги->ский шов не закрылся до конца и в сохранившийся просвет посто-)ННО в виде крошка на 5-12 сутки был полностью выведен аллотранс-шнтат (фатальная толстая кишка длиною 1,5 см) и только поело того на месте раны был образован грубый рубец, то в опытном ва-(анте на месте ива сформировался на 5-7 сутки тонкий раневой гбец, трансплантат ™а длительный срок сохранялся в виде грану-зм, хотя я подвергался медленному рассасывашсз, тем не ивнва з эчение 7 недель внутри гранулемы плодные кишки сохраняли орга-этипическое строение, и только позднее постепенно подверглись элной и окончательной резорбции.

Заключение

Проблема пластического замощения органов и тканей консервированными материалам актуальна, поскольку число больных,нук-давт.^хся в пластических операциях с целью замещения больших дефектов органа, не убывает. Поиск новых способов для пластически операций ¡¡а желудочно-кишечном тракте имеет колоссальное значении, гак как процент Сольных, страданцих заболеваниями желудка а кигечникл срод: нуждающихся в пластической коррекции органа, проооладает. В сачзп с этим приобретает большое значение поиск новых решений отой проблемы, чему посвящена данная работа.

Вопрос о необходимости поиска нового консерванта для толстой хшшки п нозох'о способа ое пластики встал в связи о достиже-2и,1ямк восточной медицины. В течение послодних 30 лет внимание фармаколехев и клиницистов привлекают так называемые адаптогеш стг^у.^то;.^ деятельности центральной нервной системы (33), и ид ленные из различных растений, в том числе и из листьев облэпих крутЕовидноп, корня кень-сеня, лкмоннщ-.а китайского и т.п. Как стало известно за последило 20 лет, адаптогеиное действие стек ляторои 1ШС - флавоноидов по конечно:^ результату напоминает э факт препаратов, защищающих трансплантат от ишемии. Биохимический г.охг^изм их действия в определенной мере совпадает,что ов детельствует о аозмокной общности неспецифаческах реакций орга низка на гипоксический фактор и многообразие реакций, продотвх щавдих возникновение гипоксичзского состояния в тканях. В наше конкретно:.: с;:учае, когда флавоноиды используются для консервах тракеаяан^ата вместе с малыми концентрациями формальдегида, £ таете когда флавоноиды нрисутстБут в большом количестве,наряд с психостимуляторами растительного происхождения, способствуя акмЕизирухщему действии пссл^.'-лтх, мохзхо сделать следующее П]

лежание: флавоноиды создают адаптогоннкй и прот^зо'.гхмэтсск.чй фокт, благодаря способности активизировать окнслктелько-всс-ановителыше реакции в тканях кишки. Чороз энэрготаку метки и воздействуют на процессы синтеза н распада, выступал регу-торами метаболических превращений в окружающих трансплантат :анях, и ото их качество целесообразно использовать наряду с лонительным влиянием малых концентраций формальдегида.

Полученные на;а в эксперимента результаты ебнадетавазт и чзт основания полагать, что разработанный нами способ замощо-1Я больших дефектов желудочно-кишечного тракта Судет взят ка юоругение" абдоминальными хирургам и проктологами и окажет шянио на решаняо вопроса о способе восстановления органа,бла-)даря использованию свободного аллоколотрглеплаитата, кснсор-[рованного а емзеа 0,1% раствора форг,альдегида с добавлением ,011? фгазоноадоэ, который обоспечазаот еоз.чогяюсть отступления ? традиционного роконструктнрованая сосудов, лимфопутей и нерв-¡х саязей. Это ппиннипиапьно отличает над подход от всех суще-гвоваЕших до сих пор способов восстановления целостности :еточ-;1 ка биокаторцалакя.

Результата, полученные при выполнений данного исслодогашы, эзволила выделить следующие закономерности в течении рапяратив-ого процесса при замещения большого дефекта шд свободным онсервировашим аллсколотрансплантатом с укреплением штастс:,:о~ ов аналогичным трансплантатом:

I. создание надежного биопротеза в вида свободного коло-рансплантата возмогло получить при консервация алло:сязкаг в сме-и 0,1% раствора формальдегида с добавлением 0,01л фязвонездоз течение 7 суток. При этом жизнеспособность тканой и (Туякцло-альная активность изолированной толстой кишки сохраняется в та-

чение 8 часов.

2. Консервация предложенным наш способом обеспечивает ш, ь^унологическую и противоишемическую защиту тканей реципиента, анаотомозируюдих с аллоколотрансплангатом, способствуя постепе ной резорбции трансплантата в течение 4 месяцев, что подтверзд но изучением роакции крови реципиента на аллогенные ткани. Пр атом иммунные реакции, ответственные за криз отторжения (РГЗТ ФАН), отличаются высокой напряженностью в течение 45 суток пос ле трансплантации: выраженная фагоцитарная актшшооть нойтро^я лов крови на 3 сутки характеризуется ускоренным переходом пик; цитов к стадии переваривания и о 10 суток - выбросом полинукле арных лейкоцитов из клеточных депо, вовлеченной их в полном сс ставе в реакции фагоцитоза и увеличением функциональной нагруз ки на отдельный нейтрофил, особенно чороз I месяц; реакция гв порчувствительности замедленного типа оказалась возросшей в де сяткц раз на 3 сутки после операции, неоколысо ослабевала на 14 сутки и имела тенденцию к возрастанию на 20-30 сутки. Повышенная активность клеточного эвена иммунитета оопроволдалась усилением активности ферментов в твдунокомпотентных клетках (СДГ и альфа-ГФДГ) вплоть до 45 суток. На 3 сутки в контроле отмечался феномен инверсии, когда активность альфа-ГФДГ превышает активность СДГ, однако в опыте его пе наблюдали.

Подшивание отрезка консервированной фатальной толстой гаа ки под кожу уха собаки или крысы подтверждает удлинение процес сов отторжения и приводит к образованию на мосте иодеала гранулемы, а ч .рэз 20-30 суток - рубцовой ткани. В контрольных ис следованиях - без консервации в формальдегиде - полное отторже ние подсаженной фетальной толстой кишка через незаросшую рану происходит за неделю. '

3. Удовлетворительное общее состояние животных, нормализация рентгенологической картины и кинограмм кишечника свидетельствуют о восстановлении функциональной активности кишки,что служит объективным критерием сохранения ее жизнеспособности. Период реконвалесценции у животных посла аллоколотрансплантацил в опытной группе завершается полностью к 45-60 дню: нассаз кишечника и формирование кала восстанавливаются к 14 суткам, ректальная температура нормализуется к 6 суткам, показатели периферической крони нормализуются к 5 суткам, хотя лейкоцитоз сохраняется до 14-20 суток. В контрольных группах с консервацией кишки только раствором формальдегида картина аналогичная, но период реконвалесценцаи затягивается до 90 дней. В контрольной группе, где кишка перед пересадкой выдержана в физиологическом растворе, все животные пали до 12 дня.

4. Морфологическое изучение как свободного аллоколотранс-плантата, так и тканей реципиента, взятых после пластической операции в разные сроки, свидетельствует о РЕЗОРБЦИИ СВОБОДНОГО ШЮК0Л0ТРАКСШ1АНТАТА С ЗАМЕЩЕНИЕМ ЕГО СОБСТВЕННЫМИ ТКАНЯМИ РЕЦИПИЕНТА ПО ТИПУ ЗАМЕЩЕНИЯ КАРКАСА БИОПРОТЕЗА. Выявлена закономерная АСИНХРОННОСТЬ ПРОЦЕССОВ РЕЗОРБЦИИ И РЕГЕНЕРАЦИИ ТРАНСПЛАНТАТА. При этом в основе структурной перестройки аллоколо-трансплантата лежат замедление процесса отторжения и преобладание над ним репаративных реакций.

Репаратпвный процесс при замещении участка толстой кишки свободным консервированным аллоколотрансплантатом имеет следу-сдую общую направленность:

наползание грануляционного пласта начинается с серозной оболочки культи кишки реципиента при одновременном активном формировании сосудистого русла. Процесс регенерации захватывает

постепенно все слои, что идет параллельно с формообразованием юшки. Восстановительный процесс заканчивается образованием эпителия слизистой оболочки вноеь образованного участка кишки.

5. Предложенный метод герметизации межкишечных анастомозов с помощью цитирования трансплантатом, консервированным по тому же способу, что и основной аллоколотрансплантат, позволяет обеспечить надежность швоз и избежать таких частых после операционных о'сло.тлении, как несостоятельность кишечно-кишечных анастомозов. Прочность герметизации подтверждена данными рентгенологического обслодовашш толстого кишечника после аллоколопластики: через 3 суток в мостах анастомозов кишка функционирует удовдетворитель но. К 4 мзс., когда регенерат полностью сформирован, проходамост кишечника восстанавливается полностью без следов стенозирования или супрастеноткческого расширения.

Пола-жтельный результат, полученный при изучении свободного аллоколотрансплантата, позволил использовать эту ткань для закрытия сквозных дефектов в различных отделах желудка - кардиадь-ном, антрзльном и тела органа, что привело к восстановлению целостности стенки желудка за месяц с параллельным рассасыванием трансплантата по такому же типу, как и на толстой кишке: процесс репарации преобладает над резорбцией аллоткани.

Решащим моментом для положительного исхода пересадки толстой кишки или восстановления целостности стенки желудка по нашему мот оду является сложное воздействие ка ткани консерванта: с одной стороны, 0,15? раствор формальдегида обеспечивает фиксацию тракспл- ".¡тата и медленную его резорбцию без иммунологического феномат одномоментного отторжения, а с другой стороны - остаточный, связанный с тканью трансплантата альдегид в концентрации, близкой к метаболической, совместно с 0Г01& раствором фла-

юноидов обеспечивает протекание активной. опег>д:улглей процессы )аспада репаративной регенерации с образованном органотппичосксй ;тенки толстой кишки ка месте оезорбуровзнного трансплантата.

Предложенный способ консерзации свободного аллэколотр.инс-шантата в сочетании с укреплением анастомозов муфтами из аако-?о же материала возможно использовать в трудных ситуациях при замещении обширных дефектов толстой кишки в абдоминальной хирургии, проктологии, трансплантологии.

Предложенный способ защиты межкишечных анастомозов муфтами аз такого же пластического материала либо замещение сквозных дефектов в стенке желудка способствует увеличению срока жизнеспособности анастомозов и может быть также рекомендован для клинических испытаний.

Надеюсь, что результаты и уже наметившийся подход к мехшшз-му действия формальдегида и флавоноидов позволят в будущем проводить подобные оперативные вмешательства в клинике, что и будет для нас наибольшим выражением удовлетворенности по поводу достигнутых скромных успехов в таком большом деле, как спасение жизни и укрепление здоровья тяжелобольных людей.

ВЫВОДЫ

1. Выполненное эксперимонтально-теоретическое исследований обосновывает новый подход к решению проблемы пластического замощения обширных дефэктов толстой кишки свободным консервированным аллоколотрансплантатем. Его результаты опровергают положение о том, что аллотрансплантация толстой кишки бег включения ее в круг кровообращения бесперспективна.

2. Обоснована возможность создания биопротеза для толстой кишки из свободного (без сосудистой нохки и перфузии) аллоколо-трансплантата, консервация которого произведена простым, экономичным и доступным в общей хирургии способом: в смеси 0,1% раствора формальдегида с добавлением 0,01? флавоноидов в течете 7-10 суток.

3. Консервированный по предложенному способу толстокишоч-ный аллотрансплантат, сохраняющий эластичность стенки, при ко-лопдастике или закрытии дефектов стенки аелудка выполняет роль биопластического материала - своего рода биологической повязки, обеспечивая высокий уровень процесса регенерации собственных тканей реципиента.

4. Пластика толстой кишки свободный консервированным алло-колотргнсплантатом обеспечивает завершение периода рекоквалео-ценции у экспериментальных кивотных к 45-60 дня, восстановление проходимости кишечника к 7-14 дню» норгализ визга ректальной температуры к 6 дню.

5. Кььунные реакции, огватсъванные за криз оттораения (РГЗТ и ФАН), отучаются высокой напрягзшюстш в течение .45 дней. Пролонгирование процесса оттор^лия подтаорадено п методом подсада! консервированной толстой кишки под кояу уха животного. Нормализация иммунного ответа совпадает с исчезновением некроти-

рущихся участков аллотрансплантата, то есть к 45-60 дглэ.ког-уаа сфорешрован новый футляр толстой кишки, хорошо васкуля-зованный.

6. При изучения морфологической картины замещения дефекта толстой кишке выявлена асинхронность процессов резорбции тране-алтата и регенерацил б тканях реципиента с преобладанием поздней. Трансплантат розорбируется з течение 45-60 дней, замо-яоь собственными тканями реципиента по типу каркаса биопротези.

Реларативный процесс начинается с серозной оболочки при ак-вном формировании сосудистого русла, постепенно захватывая все он, я заканчивается образованием слоя гладких мышц продольного циркулярного расположения и эпителия слизистой оболочки.

7. Продлоленнш! способ аллоколспластпки свободным консерви-ваппын трансплантатом с укреплением моякисочных анастомоз ол кой г.э тканьгэ, а тшепз замэщоппо дефекта в стенке гелудка сна-гнчшгя адлотропеплаптатем создает условия для формирования на ото дефолта ортодотлпичоской структуры о присущими данному ор-гзу трехслойны:.! сосудистых* русл си, нервными узлами а гладкомы-чныгл пучкам.

8. Полозиольпыо результаты данного исследования позволлат командовать прэдаозонкцй способ консерзацил свободного транс-антата толстой кстяа пз атдогенной ткани для создания биоплас-ческого гатериала (банка тканей), пригодного для использования клинике при проведении рвконотруктинно-вобстановительных опо-ций на гелудочно-кнпачном тракте.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Макро- и микроскопическая анатомия артериального руола прямой кишки (Тр.ТадкШ. - Душанбе, 1974. T.I20. С.57-59 /ооав Н.И.Первушина).

2. Кровеносное русло стонок прямой кишки (Вопросы анатомии сосудистой системы. - Душанбе, 1978. С.57-59 /соавт. Н.И.Пер-вуыина).

3. Лимфатическое русло прямой кишки собаки в норме (Адаптация и макро-микрсскопическая анатомия. - Душанбе, 1981. С.187-188).

4. Лимфатическое русло собаки при перитоните (Там se.- С.188-189 /соавт. Ы.М.Шифрина).

5. Состоялио регионарного кровообращения прямой кишки при перитонит о в эксперименте (Мат.4-го съезда хирургоз Ср.Азии и Казахстана.- Алма-Ата, 1982. С.154-155 /соавт.М.М.Шифриш

6. Морфология консервированной толстой кишки (Здравоохранение Таджикистана. - 1985. - Js 4„ С.93-94 /соавт.М.М.Шифрина),

7. Значение экстраоргашшх сосудов толстой кишки и выбор сегмента ее при трансплантации (Мат. 1-го съезда морфологов Та, аашютана. - Душанбе, 1987. - С.158),

8. Сосг-ояииа толстой кишка поело перфузии слабым раствором гд тарсаоро ельдегида (Здравоохранение Таджикистана. - 1987.-Я 4. С.164-166 /соавт.М.М.Шфрина).

ч. Морф&лох'Еч^слая перестройка .лимфатического русла толстой KJ'Ciwi t.d поадньх сроках окспергментального перитонита (Wav Вс£С1.ко;1ф«"Проблег.Е. ^йфешитл".- Новосибирск, 1987. - С.7 соавт.М.М.Шифргна).

Ю.Перастройка гэнозного русла орямоб еяпки в условиях экспер

ментального застоя (Влияние климато-географ.условпй на организм человека и животных. - Душанбе, 1987.- С.167). Сравнительная морфофункциональная характеристика кишечника некоторых лабораторных животных в условиях консервации (Мат. Всео.конф.с меддунар.участием "Лаб.яивотные для медико-би-ол. и биотехнол.исследований".- М., 1990. С.231 /соавт. -

B.П.Кулик, Ы.М.Шифрина).

I. Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови крыс при аллотрансплантации петли толстой кишки, консервированной формальдегидом (Мат.1-го Рэсп.съезда иммунологов и ачлергологов.- Душанбе, 1991,- С.38-40 /соавт.-Д.В.Адамчук).

Нейтрофяльная реакция крови на аллотрансплантат в эксперименте (Мат.1-го съезда флзпологов Ср.Азии и Казахстана.-Душанбе, 1991. - Ч.П. С.34 /соавт.Л.В.Адамчук). I. Показатели ферментативной активности лимфоцитов периферической крови крыс при аллотрансплантации сегментов толстой кишки, консервированной з растворе формальдегида (Там же.-

C.35 /соавт.Э.Н.Зейналиева).

). Морфология консервированной кишки (Изв.АН Ташгикистана.Сер.

биол.науки.- 1991. У> 9. - С.39-421 5. Сравнительный анализ репаративной регенерации различных тканей реципиента при частичном их замещении консервированным аллотрансплантат ом (?,1ат.40-3 годичн.научн.конф.ТадйЛИ. -Душанбе, 1992. - СА86 /соавт.М.М.Шифрина, Т.И.Лапкина). Сравнительная характеристика консервации толстой кишки в растворе формальдегида (Там яз.- С.37 /соавт. М.М.Шифрина).