Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Экспериментально-клиническое обоснование применения микронутриентов и нестероидных противовоспалительных препаратов в профилактике злокачественных новообразований

На правах рукописи

БОЛИЕВЛ Лаура Зелимханом»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ МИКРОНУТРИЕНТОВ И НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ В ПРОФИЛАКТИКЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

14.00.25 - Фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ днссертацм на соасканше ученой степени доктора медшцввскнх наук

Старая Купавна 2004

Работа выполнена в Северо-Осеганской государственной медицинской академии

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор АЛ*. Сергеев

Официальные оппоненты:

-доктор медицинских наук, профессор В Л. Ковалева -доктор медицинских наук, профессор И. Г. Козлов -доктор медицинских наук, профессор АР. Муляр

Ведущая организация:

Российский университет дружбы народов

Защита диссертации состоится 2005 г. в часов на

заседании диссертационного совета Д 217.004^)1 при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (Московская область, Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан «А

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор ЛЛ. Корольченко

ъъ<ь<ь 3

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Профилактика злокачественных новообразований относится к числу наиболее сложных и актуальных медико-социальных проблем современности. Несмотря на определенные успехи, достигнутые в диагностике и лечении рака, показатели заболеваемости и смертности от этой патологии продолжают расти. Только за последнее десятилетие XX века заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них выросли в мире более чем на 23%. В России прирост заболеваемости за период с 1992 по 2001 г. г. составил 16%, при ежегодном его темпе - 1,7% (Напалков H.H., 2004). В связи с этим во многих национальных и международных программах противораковой борьбы вопросам профилактики отводится приоритетное место.

Самостоятельным и перспективным направлением профилактики злокачественных новообразований является химиопрофилажтика - направленное торможение канцерогенеза на стадиях инициации и/или промоции при помощи биологически активных веществ с антиканцерогенной активностью (Sporn М.В. и соавт., 1976), известное также как «лекарственная» (Лазарев Н.В., 1966), «химическая» (Wattenberg L.W., 1978), «биохимическая» (Шабад JIM, 1979), «фармакологическая» (Джиоев Ф.К., 1980) профилактика рака.

Поиск ингибиторов канцерогенеза интенсивно ведется с 60-70-х г. г. XX века. Среди относительно небольшого числа веществ, антиканцерогенный эффект которых можно считать к настоящему времени в той или иной степени доказанным, значительный интерес вызывают две труппы средств: микронут-риенты с антиоксидантной активностью и нестероидные противовоспалительные препараты.

Утверждение о химиопрофилактической роли бета-каротина, витаминов Б, С, селена базируется на результатах значительного числа исследований (Букин Ю.В., 1986, 1993; Kelloff G.J. и соавт., 1996; Reddy B.S., 1996). Получены убедительные доказательства наличия связи между низкой обеспеченностью организма человека данными микронутриентами и высоким риском развития злокачественных новообразований (Заридзе Д.Г., Букин Ю.В., 1990). Ряд экспериментальных данных и некоторые результаты клинических испытаний подтверждают эти наблюдения (IARC Handbooks of Cancer Prevention, 1998; Kaegi E., 1998; Blot W. и соавт., 1993; Clark L.C. и соавт., 1996; Bonelli L. и соавт., 1998). Интерес к веществам с антиоксидантным действием обусловлен той важной ролью, которую играет антиоксидантная система организма в процессе канцерогенеза. По современным представлениям, ее несостоятельность вызывает нарушение обезвреживания свободнорадикальных и перекисных соединений и способствует инициации цепи событий, приводящих к злокачественной трансформации (Якубовская Р.И., 2000). Несмотря на значительное количество исследований, посвященных изучению химиопрофилактических свойств бета-каротина, витаминов Е, С и селена, остается еще немало нерешенных вопросов. Наиболее важными из них являются определение спектра антиканцерогенной

активности отдельных микррнугоиентов и их сочетаний, рациональное комби-

РОС < >. „(ЬНАЯ

ь • . К А

2Й0бР'

Г У?г

нирование витаминов и микроэлементов для повышения эффективности и снижения токсичности, выбор показаний и оптимального режима профилактического применения.

Значительный интерес исследователей в качестве средств химиопрофилак-тики злокачественных новообразований вызывают в последние годы и нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП). Однако большинство имеющихся к настоящему времени данных об их антиканцерогенной активности касается рака толстой кишки. В отношении злокачественных новообразований других локализаций проведены единичные исследования, которые не позволяют сделать окончательных выводов (IARC Handbooks of Cancer Prevention, 1997). Антиканцерогенную активность НПВП связывают со способностью подавлять фермент циклооксигеназу и, соответственно, блокировать синтез про-стагландинов из арахидоновой кислоты. При этом доказано, что основное значение имеет активность препаратов в отношении изофермента ЦОГ-2, гиперэкспрессия которого обнаружена при злокачественных новообразованиях различной локализации (Насонов Е.Л., 2000; Sheehan K.M. и соавт., 1999; Soslow R.A. и соавт., 2000). В связи с этим, а также с тем, что длительное использование неселективных НПВП в значительной степени ограничивается их токсичностью, большие надежды связывают с применением нового класса препаратов - селективных ингибиторов ЦОГ-2. Наиболее перспективным является целе-коксиб, к настоящему времени одобренный Управлением США по контролю за продуктами и лекарствами для профилактики колоректального рака у лиц с семейным аденоматозным полипозом.

Таким образом, очевидно, что одним из подходов в решении проблемы повышения эффективности химиопрофилактики рака, является изучение антиканцерогенной активности витаминов, микроэлементов и НПВП, поиск наиболее эффективных комбинаций указанных средств, обеспечивающих высокую антиканцерогенную активность при минимальной выраженности побочных эффектов. Нет сомнений, что идентификация и внедрение в клиническую практику химиопрофилактических препаратов, эффективных в отношении основных видов новообразований человека, внесет значительный вклад в улучшение здоровья населения.

День и задачи исследования. Цель исследования состояла в изучении антиканцерогенной активности бета-каротина, витаминов Е, С, селена и нестероидных противовоспалительных препаратов, исследовании механизмов химио-профилактического действия указанных средств и обосновании возможности их применения в профилактике злокачественных новообразований.

Основные задачи исследования состояли в следующем: 1. Изучить влияние раздельного и комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина и селена на канцерогенез молочной железы, печени, пищевода, подкожной клетчатки, индуцированный у крыс химическими канцерогенами.

2. Изучить иммуномодулирующую активность раздельного и комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина, селена в отношении основных звеньев иммунной системы, участвующих в противоопухолевой защите, как один из возможных механизмов их антиканцерогенного действия.

3. Определить состав комплекса микронутриентов для применения в качестве химиопрофилактического средства.

4. Изучить влияние нестероидных противовоспалительных препаратов ацетилсалициловой кислоты, целекоксиба на канцерогенез молочной железы, печени и пищевода, индуцированный у крыс химическими канцерогенами.

5. Исследовать состояние основных систем, участвующих в патогенезе фиб-роаденоматоза молочных желез.

6. Разработать схемы лечения фиброаденоматоза молочных желез с использованием химиопрофилакгических препаратов и оценить их клиническую эффективность.

7. Обосновать необходимость применения химиопрофилакгических средств в лечении больных с фиброаденоматозом молочных желез.

Научная новизна работы. В работе впервые изучено влияние витаминов Е, С, бета-каротина и селена при их раздельном и комбинированном применении на канцерогенез молочной железы, индуцированный М-метил-Н-нитрозомочевиной, печени и пищевода, индуцированный М-шггрозодиэтиламином, пищевода, индуцированный К-метил-М-бензилнитрозамином, подкожных сарком, индуцированных 7,12-диметилбензантраценом. В условиях проведенных экспериментов установлено, что исследуемые вещества обладают антипромоторной активностью и их анти-бластомогенное действие не связано с этиологическим фактором, но в значительной степени зависит от гистогенеза и органной локализации новообразований. Впервые выявлено, что одновременное применение витаминов Е, С, бета-каротина и селена расширяет спектр их химиопрофилактической активности. Показано синергическое взаимодействие микронутриентов, позволяющее в два раза снизить дозу каждого вещества при комбинированном применении, что уменьшает риск возникновения побочных и токсических эффектов при их длительном профилактическом использовании.

Впервые проведено сравнительное изучение иммуномодулирующего действия разных доз витаминов Е, С, бета-каротина, селена в условиях нормы и индуцированного вторичного иммунодефицита. Результаты исследований свидетельствуют о важной роли иммуномодулирующих свойств в реализации антиканцерогенного действия указанных средств. Это значительно расширяет представления о механизмах химиопрофилактической активности витаминов Е, С, бета-каротина и селена и позволяет рекомендовать их комбинированное применение для коррекции вторичных иммунодефицитных состояний и повышения противоопухолевой резистентности организма.

Впервые на указанных выше экспериментальных моделях рака молочной железы, печени и пищевода изучена антиканцерогенная активность нового вы-

сокоселективного ингибитора ЦОГ-2 целекоксиба и проведено сравнение его химиопрофилактической активности и токсичности с наиболее часто применяемым в клинической практике «традиционным» неселективным НПВП - ацетилсалициловой кислотой.

Впервые на большом клиническом материале изучены изменения гормонального баланса, иммунного статуса, процессов перекисного окисления липи-дов и антиоксидантной защиты, уровня простагландинов у больных с фиброа-деноматозом молочных желез разной степени тяжести. Показана взаимосвязь нарушений различных звеньев гомеостаза в патогенезе мастопатии и возможность их коррекции при помощи лекарственных средств с антиканцерогенной активностью. Научно обоснована необходимость внедрения химиопрофилакти-ческих средств в клиническую практику на примере лечения больных с фиб-роаденоматозом молочных желез.

Научно-практическая значимость. Работа включает экспериментальный и клинический материал по изучению антиканцерогенной активности микро-нутриентов и нестероидных противовоспалительных препаратов, а также их фармакологической активности в отношении основных систем, опосредующих противоопухолевую защиту организма.

Результаты, полученные при изучении антиканцерогенной и иммуномоду-лирующей активности комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина и селена, позволяют рекомендовать использование комплекса микро-нутриентов в качестве средства химиопрофилактики злокачественных новообразований ряда локализаций в группах риска, а также его включение в схемы иммунокоррекции при вторичных иммунодефицитных состояниях для повышения противоопухолевой резистентности организма.

Полученные данные, характеризующие антиканцерогенную и иммуномо-дулирующую активность отечественного препарата синтетического бета-каротина, использованы при составлении нормативной документации, представляемой в Фармакологический комитет при МЗ РФ.

Выявленное в эксперименте на моделях рака молочной железы, печени и пищевода антиканцерогенное действие нового высокоселективного ингибитора ЦОГ-2 целекоксиба позволяет рекомендовать проведение дальнейших экспериментальных и клинических исследований химиопрофилактической активности данного препарата.

Практическое значение полученных данных состоит в выявлении роли и взаимосвязи нарушений функционирования эндокринной, иммунной систем, процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты, метаболизма арахидоновой кислоты в патогенезе фиброзно-кистозной мастопатии. Результаты клинических испытаний являются основанием для рекомендаций по проведению патогенетически обоснованной терапии у больных с фиброадено-матозом молочных желез.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах фармакологии с курсом клинической фармакологии, патологической физиологии, патологической анатомии, онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии СОГМА. Оригинальные экспериментальные модели индукции опухолей молочной железы у крыс и вторичного иммунодефицита у мышей внедрены в практику работы кафедр фармакологии и патологической физиологии, ЦНИЛ СОГМА. Методы обследования и лечения больных с фиброаденоматозом молочных желез внедрены в работу поликлинического отделения Республиканского онкологического диспансера, гинекологических отделений гор. поликлиник №1 и №7 г. Владикавказа.

Апробапия работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на 1-й Международной конференции «Экологические проблемы горных территорий» (г. Владикавказ, 1992 г.), V Юбилейной научной сессии СОГМИ (г. Владикавказ, 1993 г.), П Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г. Москва, 1995 г.), 9-th NCI-EORTC Symposium on new drugs in cancer therapy (Amsterdam, 1996), Международном симпозиуме «Перспективные информационные технологии и проблемы управления рисками на пороге нового тысячелетия» (г. Санкт-Петербург, 2000 г.), 4-й Международной конференции «Устойчивое развитие горных территорий: проблемы регионального сотрудничества и региональной политики горных районов» (г. Владикавказ, 2001 г.), V и VI Международных конгрессах «Парентеральное и энтеральное питание» (г. Москва, 2001, 2002 г.г.), V съезде иммунологов и аллергологов СНГ (г. Санкт-Петербург, 2003 г.), X и XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (г. Москва, 2003, 2004 г.г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (г. Москва, 2003 г.), совместной научно-практической конференции кафедр фармакологии с курсом клинической фармакологии, микробиологии, вирусологии и иммунологии, анатомии человека, нормальной физиологии, патологической анатомии, гистологии, биологии, онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии, гигиены и медицинской экологии, ЛОР-болезней, хирургических болезней детского возраста СОГМА.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 33 печатные работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 275 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, трех глав, включающих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 452 наименования (120 отечественных и 332 иностранных авторов). Диссертация иллюстрирована 30 рисунками, содержит 37 таблиц.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Комбинированное применение бета-каротина, витаминов Е, С, селена повышает антиканцерогенную активность микронутриентов при индукции опухолей разного гистогенеза и органной локализации по сравнению с их раздельным использованием.

2. Бета-каротин, витамины Е, С, селен при комбинированном применении оказывают иммуностимулирующее действие на основные звенья иммунной системы, участвующие в противоопухолевой защите, как в физиологических условиях, так и в условиях индуцированного вторичного иммунодефицита.

3. Селективный ингибитор ЦОГ-2 целекоксиб ингибируег экспериментальный канцерогенез молочной железы, печени и пищевода, обладает более выраженной, в сравнении с неселективным ингибитором ЦОГ ацетилсалициловой кислотой, антиканцерогенной активностью при меньшей частоте развития побочных эффектов.

4. Применение препаратов с антиканцерогенной активностью «Каскатола», селенита натрия и целекосиба у больных с фиброаденоматозом молочных желез приводит к уменьшению клинических проявлений мастопатии, нормализации баланса половых гормонов и простагландинов, восстановлению активности ан-тиоксидантной системы, коррекции вторичного иммунодефицита.

5. Клиническая эффективность и антиканцерогенная активность «Каскатола», селенита натрия и целекосиба позволяют рекомендовать их применение в терапии больных с фиброаденоматозом молочных желез с целью профилактики рака молочной железы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Методы изучения антиканцерогенной активности в эксперименте.

Животные. Исследования проведены на крысах линии Вистар, самцах и самках, полученных из питомника «Столбовая» РАМН и из вивария Пятигорской государственной фармацевтической академии. Животные содержались по 5-6 крыс в клетке в стандартных условиях при температуре 20-22 С и естественном световом режиме, на стандартном рационе вивария и получали питьевую воду без ограничений.

Препараты. В качестве канцерогенов применялись следующие вещества: N-Menui-N нитрозомочевина (МНМ); Ы-метил-Ъ1-бензилнитрозамин (МБН); N-нитрозодиэтиламин (НДЭА) (получены из НИИ онкологии им. RH. Петрова МЗ РФ, г. СПб); 7,12-диметилбензантрацен (ДМБА) (Fluka В, Швейцария).

В качестве модификаторов канцерогенеза изучались: бета-каротин (НПО «Витамины», г. Белгород) - 10% суспензия в оливковом масле; «Каскатол» (ОАО «Холдинг «ЭДАС») - комбинированный препарат, содержащий в 1 драже бета-каротина 2,5 мг, аскорбиновой кислоты 25 мг, альфа-токоферола 12,5 мг; «Неоселен» (НПЦ «Исинга», г. Чита) - 0,05% нейтральный раствор селенита натрия, содержащий 230 мкг селена в 1 мл; ацетилсалициловая кислота (ООО «Росмедпрепараты», г. Ростов-на-Дону) - таблетки по 500 мг, целекоксиб (целебрекс) (SEARLE, США) - капсулы по 100 мг.

В условиях проведенных экспериментов исследуемые вещества вводились животным в следующих дозах:

♦ бета-каротин - по 25 мг/кг массы тела 2 раза в неделю (Шеренешева H.H., и соавт., 1992; Шелепова В.М. и соавт., 1992);

♦ «Каскатол» - по 4 драже/кг массы тела 4 раза в неделю;

♦ «Неоселен» (селенит натрия) - по 4 мг/л воды или по 0,4 мг/кг массы тела (Беспалов В.Г., Александров В.А., 1984; Horvaih P.M., Ip С., 1983);

♦ «Каскатол» в комбинации с селенитом натрия - по 2 драже/кг массы тела 4 раза в неделю и по 2 мг/л воды соответственно;

♦ ацетилсалициловая кислота - по 400 мг/кг корма (Davis А.Е. и соавт., 1994; Reddy B.S. и соавт., 1993; Wargovich M.J. и соавт., 1995);

♦ целекоксиб (целебрекс) - по 1500 мг/кг корма (Alshafie G.A. и соавт., 2000; Jacoby R.F. и соавт., 2000).

Индукция опухолей молочной железы.

Опухоли молочной железы индуцировали по описанной методике (Джиоев Ф.К., 1989) пятикратным с недельными интервалами подкожным введением МНМ в область одной и той же молочной железы в разовой дозе 2,5 мг на крысу в 0,2 мл воды для инъекций.

Эксперимент по изучению антиканцерогенной активности бета-каротина проведен на 65 крысах-самках линии Вистар начальной массой 50-60 г. В опыте

было сформировано 3 группы животных. 25 крыс 1-й группы, служившие контролем, получали только МНМ, и по окончании его введения никаким дополнительным воздействиям не подвергались; по 20 крыс 2-й и 3-й групп получали дополнительно бета-каротин с первого дня введения канцерогена (1-й режим введения бета-каротина) или с 3-их суток после окончания введения канцерогена (2-й режим введения бета-каротина) до конца опыта. Продолжительность эксперимента составила 31 неделю.

Антиканцерогенная активность «Каскатола», селена и Н11ВП изучена в двух сериях опытов на 105 крысах-самках линии Вистар начальной массой 100120 г. 25 крыс 1-й группы служили контролем в обеих сериях экспериментов и получали только МНМ. В 1-й серии опытов 20 животных 2-й группы получали «Каскатол», 20 крыс 3-й группы получали «Каскатол» в комбинации с селенитом натрия. Во второй серии опытов по 20 крыс 2-й и 3-й трупп получали соответственно ацетилсалициловую кислоту или целекоксиб. Введение исследуемых препаратов осуществлялось с 3-го дня после окончания инъекций МНМ до конца опыта. Продолжительность эксперимента составила 37 недель.

Индукция опухолей пищевода.

Эксперимент проведен на 115 крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 120-130 г. Для индукции опухолей пищевода крысам вводили МБН по описанной методике с питьевой водой в разовой дозе 0,5 мг/кг в 10% растворе этилового спирта в течение 8 недель (Беспалов В.Г. и соавт., 1992). Животные были разделены на 3 группы. 60 крыс 1-й группы служили контролем, 25 крыс 2-й группы получали с кормом бета-каротин, начиная с первого дня ведения МБН (1-й режим введения бета-каротина), 30 животных 3-й группы получали бета-каротин, начиная с 3-х суток после окончания введения МБН (2-й режим введения бета-каротина), до конца эксперимента. Продолжительность опыта составила 37 недель.

Индукция подкожных сарком.

Эксперимент проведен на 100 крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 120-130 г. Для индукции подкожных сарком всем крысам вводили однократно под кожу в области правого бока по 2 мг ДМБА в 0,25 мл оливкового масла (Джиоев Ф.К., 1966).

В первой серии опытов животные были разделены на две группы по 20 крыс в каждой. Крысы контрольной группы после инъекции ДМБА никаким дополнительным воздействиям не подвергались. Животные опытной группы получали с кормом бета-каротин с 3-х суток после введения канцерогена до конца эксперимента. Продолжительность опыта составила 27 недель.

Во второй серии опытов животные были разделены на 3 группы по 20 крыс. При этом крысы 1-й группы служили контролем, а животные 2-й и 3-й групп получали с кормом соответственно «Каскатол» или «Каскатол» с селенитом натрия с 3-х суток после введения ДМБА до конца эксперимента. Продолжительность опыта составила 28 недель.

Индукция опухолей печени и пищевода.

Эксперимент проводился на 140 крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 100-120 г. Опухоли печени и пищевода индуцировали по описанной методике (Джиоев Ф.К., 1973) добавлением к питьевой воде НДЭА в концентрации 100 мг/л в течение 4 месяцев. Проведено две серии опытов. 30 крыс 1-й группы служили контролем в обеих сериях экспериментов. В 1-й серии опытов по 20 крыс 2-й, 3-й и 4-й фупп получали с кормом соответственно «Каскатол», селенит натрия или «Каскатол» с селенитом натрия. Во второй серии опытов по 25 животных 2-й и 3-й групп получали соответственно ацетилсалициловую кислоту или целекоксиб. Исследуемые препараты добавляли в рацион животных в течение всего эксперимента. Продолжительность опыта составила 38 недель.

Во всех проведенных экспериментах животных, доживших до конца опыта, умерщвляли парами эфира или фторотана. Крыс вскрывали и проводили макроскопическое исследование внутренних органов. Материал для гистологического исследования фиксировали в 10% нейтральном формалине, срезы толщиной 5-7 микрон окрашивали гематоксилином и эозином. Препараты подвергали гистологическому исследованию. При анализе микроскопических изменений основывались на классификации опухолей лабораторных животных, предложенной Международным агентством по изучению рака (1973,1990).

Эффективность модифицирующего воздействия оценивали по изменению числа животных с опухолями, количества опухолей на одно животное (индекса множественности), среднего латентного периода возникновения и темпов роста новообразований, степени малигнизации неопластических изменений, продолжительности жизни и выживаемости животных в опытных группах по сравнению с контролем.

Методы изучения иммуномодулирукнцей активности микронутриентов.

Животные. Эксперименты проведены на мышах-самцах линий ВАЬВ/с, СЗН весом 18-22 г, полученных из питомника «Столбовая» РАМН и из группы разведения отдела лабораторных животных РОНЦ РАМН.

Препараты. Аскорбиновая кислота (ЗАО «Алтайвитамины», г. Бийск) - по 50 или 100 мг/кг массы тела с кормом; бета-каротин (НПО «Витамины») - по 10 и 25 мг/кг с кормом; альфа-токоферол (ЗАО «Брынцалов-А», Ферейн) - по 25, 50 и 100 мг/кг с кормом; «Каскатол» (ОАО «Холдинг «ЭДАС») по 4 драже/кг с кормом; «Неоселен» (НПЦ «Исинга», г. Чита) по 2 мг селена/л воды. «Каскатол» в комбинации с «Неоселеном» - по 2 драже/кг и 1 мг селена/л воды соответственно. Препараты вводили животным в течение 8 недель.

Состояние вторичного иммунодефицита индуцировали при помощи подкожного введения ДМБА в дозах 0,5; 1,0; 2,5 мг/мышь или аранозы в разовой дозе 200 мг/кг в/в четырехкратно с интервалом четыре дня.

Получение лимфоцдных клеток. Для приготовления суспензий сплено-цитов мыши использовали гомогенизаторы Потгера. Выделенные клетки культивировали в среде ЯРМ! 1640, содержащей 10% инактивированной телячьей

эмбриональной сыворотки (ТЭС), 1% 200 тМ L-глутамина. Т-клетки получали нанесением 2,5-5,0x107 клеток селезенки на колонну с нейлоновой ватой, с последующей 30-минутной инкубацией при 37°С. Затем, неприкрепившиеся клетки элюировали экспериментальной средой. Для получения фракции лимфоцитов, обогащенных макрофагами, прикрепившиеся к пластику клетки после 45-минутной инкубации (37С°) в обработанных ТЭС чашках Петри удаляли 0,25% раствором трипсина, после чего собирали открепившиеся клетки.

Постановка реакции бласттрансформации лимфоцитов. Для определения пролиферативной активности лимфоцитов селезенки мышей BALB/c извлекали в стерильных условиях и растирали в стеклянном гомогенизаторе с 20 мл культурной среды. Клеточную суспензию дважды отмывали средой 199. Осажденные клетки помещали в культуральную среду и ресуспендировали. Культуральная среда содержала 100 мл среды RPMI1640, 20% инактивирован-ной ТЭС, 2х10*М L-глутамина, SxlO ^XEnEC, Зх10-5М 2-меркаптоэтанола, по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина в 1 мл. Клеточную суспензию разводили до плотности 106 клеток/мл. Инкубацию проводили в 96-луночных пластиковых планшетах при 37°С в присутствии 5% С02 в течение 3-х суток. Митоген Кон A (Sigma) вносили в объеме 10 мкл. За 4 часа до окончания инкубации добавляли 3Н-тимидин в концентрации 1 мкКи/мл. По окончании культивирования клетеиосаждали на фильтрах с помощью мультихарвестера. Радиометрию образцов осуществляли на бета-счетчике "Интертехник". Отношение числа импульсов в минуту (имп/мин) в опыте к числу имп/мин в монокультуре принимали за индекс пролиферации (ИП).

Однонаправленная смешанная культура лимфоцитов (СКЛ) селезенок аллогенных мышей н определение пролиферативной н цнтолитической активности лимфоцитов. Селезенки мышей BALB/c и СЗН извлекали в стерильных условиях и острожно растирали в стеклянном гомогенизаторе с 20 мл культуральной среды. В качестве реагирующих клеток использовали лимфоциты мышей Balb/c, в качестве стимулирующих сублетально облученные лимфоциты мышей СЗН. Лимфоциты смешивали в соотношении 1:1; 1:2; 5:1 и инкубировали в количестве 5-Ю6 клеток в 1 мл среды в 24-луночных планшетах в течение 5 суток в термостате при 37°С с 5% С02. Контролем служили монокультуры лимфоцитов.

Для определения скорости пролиферации в культуру добавляли hi-тимидин и клетки собирали на фильтры с помощью мультихарвестера. Отношение числа имп/мин в опыте к числу имп/мин в контроле принимали за ИП.

Цитолитическую активность определяли по степени освобождения 51Сг из лизированных клеток-мишеней после их совместной инкубации с лимфоцитами. Цитолитическую активность Т-киллеров оценивали в процентах специфического цитолиза или литических единицах (ЛЕ).

Определение цнтотоксической активности макрофагов. Цитологическую активность макрофагов, полученных их брюшной полости мышей ВАЬВ/с, определяли по степени освобождения 3Н-тимидина из лизированных клеток мастоцитомы Р-815, которые предварительно метили изотопом и инкубировали с макрофагами в течение 48 часов. За 4 часа до окончания инкубации в пробы вносили ДНК-азу. Радиометрию образцов проводили на бета-счетчике «Интертехник». Цитотоксическую активность рассчитывали по формуле: (1-(имп/мин в опыте)/(имп/мин в контроле))х 100.

Определение цнтотоксической активности натуральных киллеров. В

качестве клеток-мишеней использовали лейкозные клетки УАС-1, которые непосредственно перед опытом инкубировали в количестве 107 клеток с 1 мл среды 199, содержащей 10% ТЭС, с 20 мкКи 3Н-тимиднна в течение 4 часов при 37°С. Клетки отмывали и вносили в ячейки в 96-луночные пластины. Суспензию селезеночных клеток опытных и контрольных мышей добавляли к меченым клеткам-мишеням и инкубировали в течение 18-24 ч при 37°С и 5% СОг-За 4 часа до окончания опыта в супернатант добавляли ДНК-азу (100 мкг/мл). После окончания инкубации клетки собирали на фильтры с помощью мульти-харвестера. Цитолитическую активность Ж-клеток определяли по формуле: (1-(имп/мин в опыте)/(имп/мин в контроле))х100

Характеристика больных и методы обследования.

Обследовано 265 женщин репродуктивного возраста (18-45 лет), из них 230 больных с фиброаденоматозом молочных желез (ФАМ) и 35 здоровых женщин. Работа проводилась на базе Республиканского онкологического диспансера г. Владикавказа (гл. врач - Томаев И.П) в период с 1999 по 2003 годы.

Диагноз фиброаденоматоза молочных желез (ФАМ) ставился на основании жалоб, анамнеза, клинического обследования, ультразвукового сканирования молочных желез. Клиническое обследование включало осмотр и пальпацию молочных желез и регионарных лимфоузлов. УЗИ проводилось на аппарате «А1ока ССБ 1400».

Характеристику степени тяжести ФАМ проводили по 6-балльной шкале по Л.Н. Сидоренко (1991). Эта оценка была положена в основу анализа первоначального состояния и кинетики патологического процесса. Больные были разделены на 2 возрастные группы в соответствии с периодами гормональной активности: 18-35 лет - ранний и активный репродуктивный период -70 женщин и 36-45 лет - поздний репродуктивный период - 160 женщин. Распределение больных в группах по возрасту и степени тяжести мастопатии представлено в таблице 1. Следует отметить тот факт, что по обращаемости нами не было выявлено ни одного случая слабо или умеренно выраженного фиброаденоматоза (степень тяжести 1-П балла по Л.Н. Сидоренко), а доля больных с тяжелыми формами патологического процесса (степень тяжести У-У1 баллов) составила в обеих возрастных группах более 50%.

Таблица 1

Распределение больных с фнброаденоматозом молочных желез по степени тяжести патологического процесса.___

Возраст Степень тяжести в баллах Итого Средний балл в группе

1-П Ш IV V VI

Ранний и активный репродуктивный (18-35 лет) - 19 (27,1%) 10 (14,3%) 34 (48,6%) 7 (10%) 70 4,4±0,14

Поздний репродуктивный (36-45 лет) - 28 (17,5%) 31 (19,4%) 74 (46,3%) 27 (16,8%) 160 4,6±0,08

Для изучения патогенетических механизмов дисгормональных дисплазий молочных желез нами проведено исследование гормонального и иммунного статуса, состояния системы перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита и уровня простагландинов в крови больных с разной степенью тяжести фиброаденоматоза молочных желез.

Определение содержания гормонов в крови. Содержание гормонов (эст-радиола, прогестерона, пролактина) в сыворотке крови больных с фиброадено-матозом молочных желез определяли радиоиммунологическим методом в Эндокринологическом научном центре РАМН. Исследования проводили в соответствии с фазами менструального цикла с использованием соответствующих диагностических наборов.

Исследование иммунного статуса. Оценку иммунного статуса проводили по унифицированной методике лабораторно-иммунологического обследования. Кровь для исследования брали утром натощак из локтевой вены. Определяли количество лейкоцитов и абсолютное и относительное количество лимфоцитов.

Состояние клеточного иммунитета оценивали по экспрессии поверхностных антигенов лимфоцитов в реакции непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (ООО «Сорбент», г. Москва) при помощи люминесцентного микроскопа «МИКМЕД-2» («ЛОМО», СПб). Характеризовались уровни CD3, CD4, CD8, CD16, CD19, CD25, CD95, HLA-DR лимфоцитов. Определение количества иммуноглобулинов А, М, G проводили методом прямой радиальной иммунодиффузии в геле с использованием моноспецифических антисывороток по Манчини. Оценку фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов проводили в тесте бактериального фагоцитоза со Staphylococcus aureus. При этом определяли фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ).

Исследование процессов перекисиого окисления липидов и антиокси-даитиой защиты.

Исследования проведены в клинико-диагностической лаборатории РОНТД РАМН им. H.R Блохина (зав. лабораторией проф. Э.Г. Горожанская).

Активность фермента глутатионпероксидазы в эритроцитах регистрировали спектрофотометрически (спектрофотометр «Beckman DU-650», США) при 340 нм по скорости окисления NADPH2 в сопряженной реакции с глутатионре-дуктазой в присутствии восстановленного глутатиона (Paglia D.E., Valentine W.N., 1967).

Активность фермента супероксиддисмутазы в эритроцитах определяли спектрофотометрически при 560 нм по степени торможения скорости реакции восстановления нитросинего тетразолия в системе ксантин-ксантиноксидаза (Beachamp С., Fridovich J., 1971).

Содержание малонового диальдегида в сыворотке крови определяли спектрофотометрически в тесте с тиобарбитуровой кислотой с образованием три-метинового комплекса с максимумом поглощения при 532 нм по методу M.Uchiyatna, M.Mihara (1978) в модификации Л. И. Андреевой и соавт. (1988).

Определение концентрации бета-каротина проводили на жидкостном хроматографе «Spectra physics-8000». Условия хроматографии: режим изократиче-ский; состав подвижной фазы - 85% ацетонитрил:изопропанол (93,5:6,5); скорость потока 2 мл/мин; использовали колонку 3x250 мм, заполненную Separes С с диаметром частиц 5 мкм. Для идентификации бета-каротина использовали стандартный раствор в хлороформе; количественное определение проводили по калибровочному трафику.

Исследование содержания простагландинов в плазме крови.

Для определения уровня простагландинов у всех обследуемых брали кровь из вены в 1, 7-8 и 21-22 дни менструального цикла. Крою помещали в пробирку, содержащую 500 мкл 0,05 М раствора ЭДТА и 50 мкл 0,04 М раствора ин-дометацина, затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 минут при 4°С. Содержание ПГЕ2, ШТ^ в плазме крови определяли иммуноферментным методом с использованием диагностических наборов фирмы «Amersham».

Методы лечения.

Препараты:

• «Каскатол» (ОАО «Холдинг «ЭДАС») - комбинированный препарат, содержащий в 1 драже бета-каротина 2,5 мг, аскорбиновой кислоты 25 мг, альфа-токоферола 12,5 мг;

• «Неоселен» (НПЦ «Исинга», г. Чита) - 0,05% нейтральный раствор селенита натрия, содержащий 230 мкг селена в 1 мл;

• целекоксиб (целебрекс) (SEARLE, США) - капсулы по 100 мг,

• ЭДАС 927 (ОАО «Холдинг «ЭДАС») - гомеопатический препарат в гранулах, содержащий Calcium fluoratum С6, Kalium jiodatum С6, Kreosoti С6, Silícea С6, Conium СЗ, Thuja СЗ;

• Солодка-ЭДАС (ОАО «Холдинг «ЭДАС») - драже, содержащие по 0,025 г экстракта солодки голой, 0,015 г аскорбиновой кислоты;

Больные были разделены на 3 группы.

В первую группу было включено 68 пациенток с ФАМ. Больные были разделены на две возрастные группы в соответствии с периодами гормональной активности: в первую группу вошли 28 женщин раннего и активного репродуктивного возраста - 18-35 лет, во вторую - 40 женщин позднего репродуктивного возраста - 36-45 лет. Проведено изучение антиоксидантной, иммуномодули-рующей активности и клинической эффективности комбинированного применения витаминного комплекса «Каскатол» и селенита натрия. Тип исследования: пострегистрационное, открытое, несравнительное (исследование до - после (Флетчер Р. и соавт., 1998)). Критерием включения в исследование было отсутствие сопутствующих гиперпластических заболеваний внутренних половых органов, обострения хронических воспалительных заболеваний, отсутствие отягощенного аллергического анамнеза, нормальные показатели рутинных лабораторных анализов, отрицательный тест на беременность. Пациентки принимали «Каскатол» по 1 драже 3 раза в день и «Неоселен» по 50 мкг селена в сутки в течение трех месяцев. Эффективность применения «Каскатола» и селенита натрия оценивали по клинической и эхографической динамике патологических изменений в молочных железах и влиянию на иммунный статус и процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у больных с ФАМ. Клиническое обследование проводили в первой половине менструального цикла до начала лечения и затем ежемесячно в течение трех месяцев, УЗ сканирование молочных желез, лабораторное обследование - до начала и по окончании курса лечения.

Вторую группу составили 32 больные с ФАМ с выраженной масталгией и синдромом предменструального напряжения, отбор которых осуществлялся с учетом следующих критериев: отрицательный тест на беременность, отсутствие сопутствующих гиперпластических заболеваний внутренних половых органов и отягощенного соматического анамнеза, отсутствие в анамнезе аллергических реакций на НПВП, нормальные показатели рутинных лабораторных анализов. Изучали клиническую эффективность селективного ингибитора ЦОГ-2 целе-коксиба. Тип исследования: пострегистрационное, открытое, несравнительное (исследование до - после). Целекоксиб (целебрекс) (SEARLE, США) назначали внутрь после еды в суточной дозе 200 мг в два приема. Прием препарата начинался за десять дней до предстоящей менструации, курс лечения составил .2 недели. Всего проводилось три курса лечения в течение трех последовательных менструальных циклов. Степень выраженности болевого синдрома оценивали с помощью визуальной аналоговой шкалы (VAS) до начала терапии и по окончании курса лечения. Кроме того, пациентки оценивали эффективность препарата по 4-балльной шкале: 0- нет эфекта; 1- незначительный; 2- удовлетворительный; 3- хороший; 4- превосходный. В качестве лабораторного критерия эффективности целекоксиба исследовали уровень простагландинов Е2 и F2o в плазме крови больных с ФАМ до начала и после окончания курса лечения.

В третью группу вошли 130 больных с ФАМ. Изучена эффективность медикаментозного комплекса, включавшего следующие препараты: «Каскатол», «Неоселен», Солодаса-ЭДАС и ЭДАС-927, целекоксиб. Тип исследования: пострегистрационное, открытое, несравнительное. Критерии включения в исследование были аналогичны изложенным выше. Больные были разделены на две возрастные группы в соответствии с периодами гормональной активности: в первую группу вошли 32 женщины активного репродуктивного возраста -1835 лет, во вторую - 98 женщин позднего репродуктивного возраста - 36-45 лет. Пациентки принимали «Каскатол» по 3 драже в день и «Неоселен» по 50 мкг селена в сутки непрерывно в течение трех месяцев, ЭДАС-927 по 5-7 гранул 3 раза в день под язык в течение месяца, Солодку-ЭДАС по 4 драже в день в течение месяца, целекоксиб - по 100 мг 2 раза в день по 2 недели, начиная за 10 дней до предстоящей менструации в течение трех последовательных менструальных циклов. Эффективность медикаментозного комплекса оценивали по клинической и эхографической динамике патологических изменений в молочных железах и лабораторым данным по окончании курса лечения.

Сроки наблюдения за больными составили от 2 до 3,5 лет. Оценку клинической эффективности проводимой терапии осуществляли через 3, 6, 12 месяцев, затем один раз в 6 месяцев в течение всего срока наблюдения.

Статистический анализ. Полученные данные подвергали статистической обработке с использованием принятых в медико-биологических исследованиях методах статистического анализа (Гланц С., 1999) при помощи статистического программного пакета ВЮвТАТ 3.03, 8Ш1зйса 6.0 на 1ВМ-РС.

При обработке результатов вычисляли значение средней величины и стандартную ошибку средней. Достоверность различий оценивали по критериям Ъ-Стьюдента, х2, Уилкоксона, Манна-Уитни, точному критерию Фишера. При анализе зависимостей вычисляли коэффициент ранговой корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Антиканцерогенная активность микроиутриентов.

Влияние бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс МНМ.

МНМ индуцировал у крыс новообразования молочной железы, гистолога-чески классифицированные как аденокарциномы.

Бета-каротин снижал частоту возникновения опухолей молочной железы до 47,1% при 1-м режиме введения и до 50% при 2-м режиме введения по сравнению с контролем. Средний латентный период возникновения опухолей увеличился во 2-й группе животных на 84,8%, в 3-й группе на 56,3% по сравнению с показателем контрольной группы (табл. 2). Средняя продолжительность жизни животных увеличилась на 41,5% и 24,4% во 2-й и 3-й группах соответственно. Получены данные о замедлении темпов роста новообразований и повышении выживаемости животных в опытных группах по сравнению с контролем.

Таблица 2

Влияние бета-каротина на канцерогенез молочной железы, индуцированный у крыс МНМ____

Группа, воздействие Эффективное число крыс Число крыс с опухолями Средний латентный период, сутки

1 .Контроль, МНМ 21 17(81,0%) 79,6±17,5

2.МНМ + бета-каротин в 1-м режиме введения 17 8(47,1%)* 147,1±12,9*

З.МНМ + бета-каротин во 2-м режиме введения 18 9 (50,0%)* 124,4±11,8*

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05.

В эксперименте по изучению влияния «Каскатола» и его комбинации с селенитом натрия на канцерогенез, индуцированный МНМ, опухоли молочной железы развились у 95,5% крыс контрольной группы. Применение «Каскатола» приводило к достоверному снижению частоты возникновения новообразований до 63,2%, «Каскатола» в комбинации с селенитом натрия - до 50%. Средний латентный период возникновения опухолей увеличился по сравнению с контрольной группой на 28,9% во 2-й группе животных и на 32,3% в 3-й группе (табл. 3). Средняя продолжительность жизни животных увеличилась на 34,9% и на 44,5% во 2-й и 3-й группах соответственно. Нами также выявлено замедление темпов роста новообразований и повышение выживаемости животных в опытных группах по сравнению с контролем.

Таблица 3

Влияние «Каскатола» н селенита натрия на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс МНМ.__

Группа, воздействие Эффективное число крыс Число крыс с опухолями Средний латентный период, сутки

1.Контроль, МНМ 22 21 (95,5%) 125,7±6,2

2.МНМ +«Каскатол» 19 12 (63,2%)* 162,0±7,9*

3 .МНМ+«Каскатол»+ селен 20 10 (50%)** 166,2±8,3*

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05; ** - р<0,01.

Полученные в результате проведенных экспериментов данные позволяют говорить о наличии у бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия ингиби-рующего влияния на канцерогенез молочной железы, индуцированный МНМ, которое проявилось в достоверном снижении частоты возникновения новообразований, удлинении среднего латентного периода их развития, замедлении темпов роста опухолей, увеличении продолжительности жизни и выживаемости животных в группах, получавших исследуемые вещества, по сравнению с контролем. В условиях комплексного воздействия эффект достигался при использовании в два раза более низких доз микронутриентов. Препараты проявляли антиканцерогенную активность при введении после окончания канцерогенного воздействия, что свидетельствует об их антипромоторном действии и способности ингибировать канцерогенез независимо от влияния на этиологический фактор.

Влияние бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия на экспериментальный канцерогенез пищевода.

В первой серии опытов изучалось влияние двух режимов введения бета-каротина на возникновение опухолей пищевода, индуцированных у крыс МБН.

МБН индуцировал у крыс новообразования пищевода, глотки и предже-лудка, большинство из которых гистологически классифицировалось как папилломы. Частота возникновения новообразований достоверно снижалась с 97,7% в контрольной группе до 54,5% при первом режиме введения и до 78,3% при втором режиме введения бета-каротина. Индекс множественности снижался в 2,1 и 1,3 раза во второй и третьей группах соответственно (табл. 4). Бета-каротин проявлял антиканцерогенную активность как при введении на протяжении стадий инициации и промоции канцерогенеза, так и при введении после окончания канцерогенного воздействия. В это время у крыс контрольной группы уже обнаруживались морфологические признаки предопухолевых изменений в виде гиперплазии и дисплазии эпителия пищевода. Данный факт имеет важное практическое значение, так как указывает на возможность торможения процесса канцерогенеза в пищеводе на стадии предраковых изменений.

Таблица 4

Влияние бета-каротина на возникновение опухолей пищевода, глотки и преджелудка, индуцированных у крыс МБН. __

Группа, воздействие Эффективное число крыс Число крыс с опухолями Кол-во опухолей Индекс множественности

1 .Контроль, МБН 43 42(97,7%) 282 6,8±1,04

2.МБН +бета-каротин в 1-м режиме введения 22 12 (54,5%)** 71 3,2+0,14**

3 .МБН +бета-каротин во 2-м режиме введения 23 18 (78,3%)* 117 5,1±0,27*

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05, ** - р<0,01.

Во второй серии опытов изучалось влияние «Каскатола» и селенита натрия на канцерогенез пищевода, индуцированный у крыс НДЭА. В результате проведенного эксперимента получены следующие данные (табл. 5).

Таблица 5

Влияние «Каскатола» и селенита натрия на канцерогенез пищевода, ннду-цированный НДЭА. ____

Группа, воздействие Эффективное число крыс Число крыс с опухолями Индекс множественности Микроскопическая оценка в баллах

1. Контроль, НДЭА 23 21 (91,3%) 4,13±0,35 2,13±0,11

2.НДЭА + Каскатол 18 11 (61,1%)* 1,83±0,46*** 1,56±0,17*

3. НДЭА + селен 19 12 (63,2%)* 1,84±0,4*** 1,37±0,24**

4. НДЭА + Каскатол + селен 19 10 (52,6%)* 1,53±0,45*** 1,26±0,03**

Различия с контрольной группой достоверны: *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001.

В контрольной группе новообразования пищевода развились у 91,3% животных. «Каскатол» приводил к снижению частоты возникновения новообразований пищевода до 61,1%, индекса множественности в 2,3 раза по сравнению с контролем. Применение селенита натрия способствовало снижению частоты возникновения опухолей до 63,2%, индекс множественности снижался в 2,3 раза. При комбинированном применении «Каскатола» и селенита натрия отмечено усиление антиканцерогенной активности, что проявилось в снижении час-

тоты возникновения новообразований до 52,6%, индекса множественности в 2,8 раза по сравнению с контрольными показателями. Микроскопический анализ выявил снижение степени малигнизации неопластических изменений в опытных группах по сравнению с контролем.

Таким образом, в условиях проведенных экспериментов бета-каротин, «Каскатол» и селенит натрия оказывали ингибирующее влияние на химически индуцированный канцерогенез пищевода, что проявилось в достоверном снижении частоты возникновения, множественности и степени малигнизации неопластических изменений. Специфический эффект был наиболее выражен при одновременном применении «Каскатола» с селенитом натрия в режиме доз в два раза меньших, чем при их раздельном использовании.

Влияние «Каскатола» и селенита натрия иа канцерогенез печени, индуцированный у крыс НДЭА.

Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 6. Неопластические изменения в печени развились у 91,7% крыс контрольной группы. Во 2-й группе частота возникновения неопластических изменений составила 77,8% (различия с контролем недостоверны, р>0,05). В 3-й и 4-й группах неопластические изменения выявлены у 63,2% и 52,6% животных соответственно, что было достоверно ниже контрольных значений. При микроскопическом анализе ткани печени получены данные, свидетельствующие о торможении малигнизации в ткани печени под действием селенита натрия или комбинации «Каскатола» с селенитом натрия.

Таблица 6

Влияние «Каскатола» и селенита натрия на канцерогенез печени, индуци-

рованный у крыс НДЭА

Группа, воздействие Эффективное число крыс Число крыс с неопластическими изменениями Микроскопическая оценка в баллах

1. Контроль, НДЭА 24 22(91,7%) 2,17±0,25

2. НДЭА + «Каскатол» 18 14 (77,8%) 1,1±0,19

3. НДЭА + селен 19 12 (63,2%)* 0,74±0,16**

4. НДЭА + «Каскатол» +селен 19 10 (52,6%)* 0,68±0,19**

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05; ** - р<0,001.

Комбинированное применение «Каскатола» с селенитом натрия способствовало наиболее выраженному снижению частоты возникновения и степени малигнизации неопластческих изменений в печени. Из результатов проведенного эксперимента следует, что «Каскатол» не подавляет самостоятельно канцерогенез печени, однако потенцирует антиканцерогенное действие селена.

Влияние бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия иа возникновение подкожных сарком, индуцированных ДМБА.

В первой серии опытов опухоли развились у 100% животных, как в контрольной группе, так и в группе, получавшей бета-каротин (табл. 7). Гистологически все развившиеся новообразования были классифицированы как фибро-саркомы. Показано, что бета-каротин, не влияя на частоту возникновения опухолей, отодвигал сроки их развития на 36,8% по сравнению с контролем.

Во второй серии опытов подкожные саркомы также развились у 100% животных контрольной и опытных групп. Средний латентный период возникновения опухолей увеличился под действием «Каскатола» на 36,5%, под действием «Каскатола» с селенитом натрия на 493% (табл. 8). Нами было также отмечено торможение темпов роста опухолей и повышение выживаемости животных при применении исследуемых микронутриентов.

Таблица 7

Влияние бета-каротина на возникновения подкожных сарком, индуцированных у крыс ДМБА.____

Группа, воздействие Эффективное число крыс в группе Число крыс с опухолями Средний латентный период, дни

1. Контроль, ДМБА 20 20(100%) 94,5 ±21,8

2. ДМБА + бета-каротин 20 20(100%) 130,2 ± 28,9*

Различия с контрольной группой достоверны:* - р<0,05.

Таблица 8

Влияние «Каскатола» и селенита натрия на возникновение подкожных сарком, индуцированных у крыс ДМБА __

Группа, воздействие Эффективное число крыс в группе Число крыс с опухолями Средний латентный период, дни

1. ДМБА 20 20 (100%) 98,3±12,7

2. ДМБА + «Каскатол» 20 20(100%) 134,2±21,4*

3. ДМБА + «Каскатол» +селен 20 20(100%) 146,8±18,9*

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05

Таким образом, бета-каротин, «Каскатол» и его комплексное применение с селенитом натрия оказывали умеренное ингибирукмцее влияние на канцерогенез, индуцированный ДМБА. Следует подчеркнуть, что в данном случае за-

тцитное действие микронутриентов проявилось в жестких условиях эксперимента, так как нами применялась высокая доза одного из наиболее активных канцерогенов, которая обычно вызывает опухоли в короткие сроки у 100% животных.

В результате проведенных опытов нами получены данные, свидетельствующие об антиканцерогенной активности бета-каротина, витаминов Е, С, селена при индукции опухолей разного гистогенеза и органной локализации, наиболее выраженной при их комбинированном применении. Исследуемые вещества обладают антипромоторным действием и, следовательно, способны инги-бировать канцерогенез независимо от влияния на этиологический фактор.

Иммуномодулирующая активность микронутриентов

При систематическом в течение 8 недель введении мышам аскорбиновой кислоты, бета-каротина, альфа-токоферола и селенита натрия были получены результаты о дозозависимом стимулирующем влиянии каждого из препаратов на пролиферативную активность Т-лимфоцитов как под действием митогена Кон А, так и при использовании аллоантигенов в СКЛ. При этом достоверный стимулирующий эффект препаратов проявлялся не ранее 6-8-й недели исследования. Введение мышам ВАЬВ/с препарата «Каскатол» в комбинации селенитом натрия приводило к достоверному по сравнению с интактным контролем увеличению пролиферативной активности Т-лимфоцитов в 1,4 раза (р<0,05) к 4-й неделе я в 2,0 раза (р<0,01) к 8-й неделе эксперимента.

При изучении влияния микронутриентов на активность цитотоксических Т-лимфоцитов отмечено, что аскорбиновая кислота в дозах 50 и 100 мг/кг и бета-каротин в дозах 10 и 25 мг/кг приводят к увеличению активности данной популяции клеток в среднем в 1,5-1,9 раза (р<0,05), начиная с 6-й недели эксперимента. Селен повышал цитотоксичность Т-киллеров в 1,4 раза (р<0,05) к 8-й неделе исследования. Витамин Е не оказывал влияния на активность данной популяции клеток. Ежедневное в течение 8 недель скармливание мышам ВАЬВ/с «Каскатола» с селенитом натрия приводило к усилению цитолитиче-ской активности Т-киллеров в СКЛ в 1,9 раза (р<0,01) к 6-й и в 2,3 раза (р<0,01) к 8-й неделе эксперимента.

Аскорбиновая кислота и витамин Е практически не влияли на активность натуральных киллеров. В группах мышей, получавших бета-каротин или селенит натрия, нами было отмечено усиление их активности в 1,7 раза (р<0,05) к 8-й неделе опыта. «Каскатол» повышал цитотоксичность натуральных киллеров в 2,0 раза к 8-й неделе эксперимента с быстрой обратимостью стимулирующего эффекта после отмены препарата. При этом, совместное применение «Каскатола» с селенитом натрия приводило к достоверному и более стойкому повышению активности МК-клеток в 2,0 раза, начиная с 6-й недели исследования.

В отличие от натуральных киллеров, перитонеальные макрофаги оказались более чувствительны к изолированному воздействию микронутриентов. Уже к 4-6-й неделе ежедневного введения мышам витаминов Е, С, бета-каротина, се-

лена наблюдалось достоверное усиление цитотоксической активности макрофагов. Введение мышам препарата «Каскатол» приводило к достоверной стимуляции цитолитической активности перитонеальных макрофагов, начиная с 6-й недели эксперимента. При одновременном скармливании мышам «Каскато-ла» и селенита натрия активность макрофагов начинала повышаться с 4-й недели опыта и к 6-8-й неделям превышала контрольный показатель в среднем в 2,0 раза (р<0,01), при этом эффект стимуляции сохранялся в течение как минимум двух недель после отмены препарата.

Важным свойством потенциального химиопрофилактического средства является способность восстанавливать сниженный, по тем или причинам, уровень иммунного ответа. Изучение возможностей использования микронутриен-тов с целью коррекции вторичной иммунной недостаточности проведено на моделях иммунодефицита, индуцированного у мышей канцерогеном ДМБА или цитостатиком аранозой.

Введение ДМБА вызывало угнетение пролиферативной и цитолитической активности лимфоцитов в СКЛ соответственно в 2,1 раза (р<0,05) и в 2,3 (р<0,05) к 8-й неделе эксперимента. Бета-каротин при введении мышам, не получавшим ДМБА, стимулировал функциональную активность Т-лимфоцитов, повышая ее показатели в 1,9 раза (р<0,05) и в 1,7 раза (р<0,05). Добавление бета-каротина в рацион мышей, получавших ДМБА, способствовало восстановлению пролиферативной и цитолитической активности Т-лимфоцитов и коррекции развившегося иммунодефицита (рис. 1,2).

Результаты опытов по изучению влияния «Каскатола» и селенита натрия на пролиферативный ответ и цитолитическую активность Т-лимфоцитов в условиях вторичного иммунодефицита, индуцированного аранозой, представлены на рисунках 3, 4. В условиях проведенного исследования комбинированное применение «Каскатола» и селенита натрия оказывало наиболее выраженное иммуностимулирующее действие, сохраняя пролиферативный и цитотоксиче-ский потенциал Т-лимфоцитов и предотвращая развитие иммунодепрессии.

Таким образом, бета-каротин, витамины Е, С, селен повышают функциональную активность Т-лимфоцитов, натуральных киллеров и макрофагов как в физиологических условиях, так и в условиях вторичного иммунодефицитного состояния. При раздельном применении действие микронутриентов зависит от дозы препарата и длительности воздействия. Кроме того, показана разная чувствительность клеточных популяций к исследуемым веществам. При комбинированном применении «Каскатола» и селенита натрия достоверное иммуностимулирующее влияние проявлялось в более ранние сроки исследования на всех экспериментальных моделях.

Механизм иммуномодулирующего действия микронутриентов до конца не изучен, хотя весьма аргументированным является предположение о том, что в его основе лежат антиоксидантные свойства, препятствующие иммунотоксиче-скому действию продуктов ПОЛ (Лебедев В.В., 2002; ВепсИсЬ А., 1990,1991).

2 4 6 8

Недели

□ Контроль ИДМБА ор-каротин ЕЗДМБА+р-каротин

Различия с контрольной группой достоверны: * - р < 0,05 Различия с группой, получавшей ДМБА достоверны:" - р < 0,05

Рис. 1 Влияние 7,12 -диметилбензаитрацена (ДМБА) н бета-каротина на пролиферативиый ответ Т-лимфоцнтов на аллонтнгены в СКЛ.

Недели

□ Контроль ШДМБА СЗр-каротин ИДМБА+р-каротан

Различия с контрольной группой достоверны: * - р < 0,05 Различия с группой, получавшей ДМБА достоверны: " - р < 0,05

Рис. 2 Влияние 7,12 -диметилбензаитрацена (ДМБА) и бета-каротина на цитолитическую активность Т-лимфоцнтов в СКЛ

Недели

□ Контроль ВАраноза

ИАраноза + «Каскатол» НАраноза + «Каскатол» + Se

Различия с контрольной группой достоверны: * - р < 0,05; ** - р < 0,01 Различия с группой, получавшей араяозу, достоверны: " - р< 0,05; "" - р< 0,01

Рис. 3 Влияние аранозы, «Каскатола» и селенита натрии на пролифера-тивный ответ Т-лимфоцитов, трансформированных in vitro Кон А.

Недели

□Контроль

ЕЗАраноза + «Каскатол»

■Араноза

ВАраноза + «Каскатол» + Se

Различия с контрольной группой достоверны: * - р < 0,05; ** - р < 0,01 Различия с группой, получавшей аранозу, достоверны: " -р< 0,05

Рис. 4 Влияние многократного введения аранозы, «Каскатола» и селенита натрия на цитотоксическую активность Т-лимфоцитов в СКЛ.

Влияние ацетилсалициловой кислоты и целекоксиба на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс №метил-№ нитрозомочевнной (МНМ).

В результате проведенного исследования были получены следующие данные (табл. 9).

Опухоли молочной железы развились у 95,5% животных контрольной группы. Во 2-й и 3-й группах животных опухоли развились у 65% и 47,3% крыс соответственно, что было достоверно ниже контрольного показателя. Средний латентный период возникновения новообразований увеличивался во 2-й группе на 13,9%, в 3-й группе на 27%. Темпы роста опухолей молочной железы были достоверно замедлены в группах животных, получавших исследуемые вещества. Таким образом, профилактическая активность ацетилсалициловой кислоты и целекоксиба в отношении экспериментального канцерогенеза молочной железы проявилась в достоверном снижении частоты возникновения опухолей, удлинении латентного периода их развития и замедлении темпов роста новообразований.

Таблица 9

Влияние ацетилсалициловой кислоты (АК) н целекоксиба на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс МНМ._

Группа, воздействие. Эффективное число крыс Число крыс с опухолями Средний латентный период

1. Контроль, МНМ 22 21 (95,5%) 125,7±6,1

2. МНМ + АК 20 13(65%)* ' 143,2±7,4

3. МНМ + целекоксиб 19 9 (47,3%)* 159,7±6,6*

Различия с контрольной группой достоверны: * - р<0,05.

Влияние ацетилсалициловой кислоты и целекоксиба на канцерогенез печени и пищевода, индуцированный у крыс НДЭА.

При изучении влияния НПВП на канцерогенез печени и пищевода получены следующие результаты.

Неопластические процессы обнаружены у 91,7% крыс контрольной группы. В группе животных, получавших ацетилсалициловую кислоту, неопластические изменения обнаружены у 76,2% крыс (рХ),05). В группе животных, получавших целекоксиб, неопластические изменения развились у 65,2% (р<0,05). При анализе макро- и микроскопических изменений в ткани печени получены достоверные данные о торможении малигнизации в опытных группах по сравнению с контролем (табл. 10).

Таблица 10

Влияние ацетилсалициловой кислоты (АК) н целекокснба на канцерогенез

печени, индуцированный НДс >А

Группа, воздействие Эффективное кол-во крыс в группе С неопластическими изменениями

Число крыс Макроскопическая оценка в баллах Микроскопическая оценка в баллах

1. Контроль, НДЭА 24 22(91,7%) 2,67±0,34 2,17±0,25

2. НДЭА + АК 21 16(76,2%) 1Д4±0^2** 1,29*0,24*

З.НДЭА + целекоксиб 23 15 (65,2%)* 0,65±0,11*** 0,87±0,15***

Различия с контролем достоверны: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.

Опухоли пищевода развились у 91,3% крыс контрольной группы, индекс множественности составил 4,22±0,33 опухоли на крысу. В группе животных, получавших ацетилсалициловую кислоту, новообразования пищевода развились у 84,2% крыс при индексе множественности 4,11±0,5. Применение целе-коксиба также не приводило к достоверному снижению частоты возникновения опухолей пищевода (73,9% против 91,3% в контрольной группе), однако количество опухолей на одно животное составило в этой группе 2,61 ±0,44, что было в 1,6 раза (р<0,05) ниже контрольного показателя. При оценке микроскопических изменений получены достоверные различия с контролем для обеих опытных групп. При изучении гастротоксичности НПВП нами выявлены эрозивно-язвенные поражения слизистой желудка у 78,3% крыс, получавших ацетилсалициловую кислоту, в группе, получавшей целекоксиб, поверхностные эрозии слизистой желудка обнаружены у 17,4% (р<0,05) крыс.

Таблица 11

Влияние ацетилсалициловой кислоты (АК) и целекокснба на канцерогенез пищевода, индуцированный у крыс НДЭА.__

Группа, воздействие Эффективное число крыс в группе Число крыс с опухолями Индекс множественности Микроскопическая оценка в баллах

1. Контроль, НДЭА 23 21 (913%) 4,13±0,35 2,13±0,11

2. НДЭА + АК 19 16 (84,2%) 4,11±0,51 1,79±0,11*

З.НДЭА + целекоксиб 23 17 (73,9%) 2,61*0,44* 1,57±0,15**

Различия с контролем достоверны: * - р<0,05, ** - р<0,01.

Таким образом, в условиях проведенного эксперимента влияние ацетилсалициловой кислоты на канцерогенез печени и пищевода проявилось в торможении малигнизации. Следует отметить, что нами была использована высокая доза ацетилсалициловой кислоты, соответствующая 80% максимально переносимой дозы в условиях длительного введения (Wargovich M.J., 1995). Это опровергает мнение ряда исследователей (Giovannucci Е. и соавт. 1995; Stürmer Т. и соавт., 1998; Suh О. и соавт. 1993) о перспективах использования низких доз препарата (75-300 мг/сут) с целью одновременной профилактики сердечнососудистых заболеваний и злокачественных новообразований. Целекоксиб оказывал более выраженное, по сравнению с ацетилсалициловой кислотой, антиканцерогенной действие. Его применение приводило к достоверному снижению частоты возникновения и степени малигнизации неоплпастических изменений в печени и пищеводе, а также снижению »тожественности новообразований пищевода по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе. Основной механизм антиканцерогенной активности нестероидных противовоспалительных препаратов связывают с влиянием на ЦОГ-2 зависимую регуляцию апоптоза опухолевых клеток, что делает понятным особый интерес исследователей к новой группе противовоспалительных средств, позволяющих избирательно подавлять циклооксигеназу 2 типа. Предполагается, что это может обеспечить противоопухолевую активность с минимальным риском развития серьезных побочных эффектов (Насонов E.JL, 2001), что, в условиях проведенных экспериментов, подтверждается более выраженной антиканцерогенной активностью и меньшей частотой эрозивно-язвенных поражений слизистой желудка при применении целекоксиба.

Возможности применения препаратов с антиканцерогенной активностью в терапии больных с фиброаденоматозом молочных желез (ФАМ).

У больных с фиброаденоматозом молочных желез нами выявлен дисбаланс гормонов, оказывающих прямое влияние на молочную железу (эстрадиола, прогестерона, пролактина), характеризующийся развитием абсолютной или относительной гиперэстрогении на фоне дефицита прогестерона. Эти изменения коррелировали со степенью тяжести мастопатии и были наиболее выражены при V-VI степени тяжести заболевания в обеих возрастных группах.

Результаты исследования показателей, характеризующих состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у больных с дисгормональными днсплазиями молочных желез, свидетельствуют об изменении интенсивности процесса ПОЛ у больных с ФАМ, в зависимости от степени тяжести патологического процесса. При этом, если у больных с диффузным ФАМ III-TV степени тяжести мы наблюдали лишь незначительное повышение концентрации малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови, то при локализующемся ФАМ уровень МДА составил 6,17±0,18 мкмоль/л и превышал соответствующий показатель контрольной группы в 1,5 раза (р<0,05). Одновременно с этим у больных с фиброаденоматозом отмечался более высокий ба-

зальный уровень функционирования системы детоксикации супероксиданион радикала, о чем свидетельствовала несколько повышенная активность фермента супероксиддисмутазы (СОД) (536,6±17,5 ЕД/мл эр. у больных узловой формой мастопатии против 450,5±12,4 ЕД/мл эр. у здоровых женщин, р>0,05). Практически у всех обследованных больных выявлено снижение активности глутатионпероксидазы, отражающее низкий селеновый статус организма, и низкий уровень бета-каротина, являющегося одним из основных компонентов неферментативного звена антиоксидантной защиты. Тяжесть описанных нарушений в окислительном гомеостазе была наиболее выраженной у больных с V-VI степенью тяжести ФАМ независимо от возраста.

Мониторинг иммунного статуса выявил зависимость между изменениями в системе иммунитета и выраженностью клинических проявлений ФАМ. Количество CD3+ Т-лимфоцитов у больных раннего и активного репродуктивного возраста достоверно снижалось в зависимости от степени тяжести патологического процесса с 54,2±1,3% в группе больных с Ш степенью тяжести до 36,9±1,8% (р<0,05) у больных с локализованным ФАМ. Та же закономерность прослежена в группе пациенток позднего репродуктивного возраста. Нарушена субпопуляционная структура Т-клеггочного звена за счет снижения относительного и абсолютного количества CD4+ Т-хелперов. В возрастной группе 18-35 лет снижение уровня Т-хелперов происходило на фоне нормального количества CD8+ супрессорных/цитотоксических Т-лимфоцитов, в то время как в группе больных 35-45-летнего возраста отмечено увеличение относительного и абсолютного содержания данной субпопуляции клеток, что приводило к снижению иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+ (в 1,4 раза (р<0,05) в груше больных с локализованным ФАМ). Уровень экспрессии CD95 антигена был достоверно ниже у больных с фиброзно-кистозной мастопатией VI-степени тяжести обеих возрастных групп. Уровень IgA во всех группах был достоверно ниже контрольных значений.

Таким образом, у больных с ФАМ выявлено вторичное иммунодефицитное состояние с преимущественным дефектом функционирования Т-клеточного иммунитета, степень тяжести которого в обеих возрастных группах прямо коррелировала со степенью тяжести патологического процесса. Наиболее выраженная иммунодепрессия отмечалась у больных 36-45 лет с резко выраженным локализующимся фиброаденоматозом.

У больных с ФАМ нами отмечено возрастание концентрации ПГЕз и ПГТга в позднюю секреторную фазу цикла в 1,9 и 2,4 (р<0,05) соответственно по сравнению с контрольными показателями у здоровых женщин. Максимальные уровни указанных простагландинов были отмечены во время менструации. Содержание ПГЕ2 в плазме крови в первый день менструального цикла составило 140±9,47 нг/мл, ПГТга 125±7,18 нг/мл, что было в среднем в 2,3 раза выше аналогичных показателей в контрольной группе здоровых женщин. При этом наблюдалась положительная корреляция между выраженностью болевого синдрома и уровнем простагландинов в плазме крови.

Полученные нами данные о гормонально-метаболических нарушениях у

больных с ФАМ подтверждают высказанное рядом авторов мнение о несомненной близости условий, на фоне которых развиваются и существуют предо-пухолевые и опухолевые процессы в молочных железах (Городилова В.В., 1983; Сидоренко Л.Н., 1986, 1991; Ьа УессЫа С. и соает., 1985). В этой связи, лечение больных с фиброаденоматозом молочных желез должно рассматриваться как профилактика рака данной локализации. Это вызывает обоснованный интерес к изучению эффективности препаратов с антиканцерогенной активностью в терапии фиброаденоматоза молочных желез.

Результаты исследования комбинированного применения «Каскато-ла» н селенита натрия у больных с фиброаденоматозом молочных желез.

Средний возраст больных в первой группе составил 28,4±1,8 лет, средняя оценка степени тяжести мастопатии до лечения- 4,2±0,1 балла. Во второй группе средний возраст больных равнялся 39,4±1,6 годам, степень тяжести мастопатии по данным объективного обследования до лечения - 4,6±0,12 баллов.

Через три месяца после начала лечения в группе больных мастопатией раннего и активного репродуктивного возраста уменьшение субъективных проявлений мастопатии, таких как масталгия, синдром предменструального напряжения отмечали 19 (67,8%) женщин, в группе пациенток позднего репродуктивного возраста - 22 (55,0%). За тот же период объективные признаки фиброаденоматоза по данным пальпаторного обследования уменьшились у 16 больных первой группы, что составило 57,1%, и у 19 (47,5%) больных второй группы. При балльной оценке степень выраженности патологического процесса после проведенного лечения у больных 18-35 лет статистически достоверно уменьшилась в 2,6 по сравнению с показателем до начала лечения и составила 1,6±0,08 баллов (р<0,05). У пациенток в возрасте 36-45 лет эти показатели составили соответственно 1,8 раза и 2,2±0,11 балла (р<0,05). По данным эхографии, через 3 месяца приема препаратов в первой группе положительные результаты были отмечены у 15 больных (53,6%), во второй группе у 19 (47,5%) больных, что проявлялось в частичной регрессии патологических изменений в молочных железах. Ухудшения не отмечено ни у одной пациентки первой группы. Во второй возрастной группе ухудшение состояния отметили 3 женщины (7,5%).

Результаты исследования некоторых показателей, характеризующих состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты больных с дисгормональными дисплазиями молочных желез до и после проведенного лечения, представлены в таблице 12. Результаты исследования влияния «Каскатола» и селенита натрия на иммунный статус больных с фиброаденоматозом молочных желез представлены в таблице 13. Полученные нами данные свидетельствуют о восстановлении под действием комплекса исследуемых микронутриентов нарушенного баланса в иммунной системе и системе пере-кисное окисление липидов - антяоксидантная защита.

Таблица 12

Показатели системы ПОЛ-ЛОЗ у больных с ФАМ в динамике антиокси-даитнон терапии___

Показатели Контроль, п=15 Больные с ФАМ Ш-IV ст., п=28 Больные с ФАМ V-VI ст., п=40

До лечения После лечения До лечения После лечения

МДА, мкмоль/л 4,18±0,08 4,59±0,12 4,41±0¿1 6,17±0,18" 4,81±0,14*

СОД, ЕД/мл эр. 450,5±12,4 464,5±14,1 453,4±21,4 536,6±17,5 474,1±12,5

ГПмкмоль /мл за мин 4,35±0,10 3,46±0,14 4,55±0,22* 3,21±0,11" 4,63±0,17*

Р-каротин, мкмоль/л 2,72±0,29 1,38±0,07" 3,26±0,15* 1,41±0,05" 3,35±0,15*

Различия с контролем достоверны:"- р<0,05.

Различия с показателем до лечения достоверны: * - р<0,05.

Таблица 13

Динамика показателей иммунного статуса больных с фиброаденоматозом молочных желез после курса лечения «Каскатолом» и «Неоселеном»._

Показатель Контроль, п=35 Больные с ФАМ, 18-35 лет, п=28 Больные с ФАМ, 36-45 лет, п=40

До лечения После лечения До лечения После лечения

CD3, % 61,7±0,66 49,7±1,6** 59,7±2,3 46,7±13** 59,6±1,7

CD4, % 35,7±0,93 29,1±1,9** 35,9±0,7 27,4±1,1** 33,8±0,9

CD8,% 23,8±0,65 20Д±1Д 22,5±1,0 26,9±1,3» 22,5±0,8

ИРИ 1,51±0,04 1,49±0,11 1,59±0,08 1,02±0,04** 1,54±0,06

CD 19, % 16,6t0,4 18,8±1,6 173±1Д 24,8±1,5* 19,1±0,8

CD16, % 15,6±0,7 21,7±2,4* 18,7±1,4 22,7±1,8* 16,9±1,1

CD25, % 14,9±1,6 20,4±1,7* 14,2±0,8 20,4±1,7* 17,4±1,1

HLA-DR 18,9±0,7 19,2 ±2,4 18,3±1,0 19,1±1,9 16,3±1,3

CD95, % 15,5±0,7 13,9±1,8 12,8±и 13,8±1,4 12,4±0,7

IgA 2,02±0,16 1,54±0,18* 1,7±0,2 1Д4±0,9** 1,68*0,18

IgM 1,25±0,07 1,3±0,2 1,4±0,1 1,1±0,11 1,57±0,13

IgG 12,5±0,54 14,8±1,1 15,2±1,5 12,8±0,57 13,38±1,4

ФЧ,% 83,14±1,79 80,37±2,51 81,62±1,42 79,44±2,68 82,15±1,56

ФИ 7,41±0,93 7,28±1,22 б,81±1,41 7,08±1,04 7,14±1,1

Различия с контролем достоверны: * - р<0,05; ** - р<0,01.

Таким образом, ежедневное в течение трех месяцев комбинированное применение витаминного комплекса «Каскатол» и селенита натрия у больных с фиброаденоматозом молочных желез приводило к уменьшению проявлений масталгии и синдрома предменструального напряжения, регрессии пальпатор-ных и эхографических признаков заболевания, восстановлению нормального функционирования антиокисдантной и иммунной систем. Никаких побочных и токсических эффектов применения препаратов в ходе исследования не зарегистрировано. Полученные данные позволяют рекомендовать применение данного комплекса в терапии фиброаденоматоза молочных желез.

Изучение эффективности целекоксиба у больных с фиброаденоматозом молочных желез.

В результате исследования влияния целекоксиба на такие проявления фиброаденоматоза, как масталгия и синдром предменструального напряжения получены следующие данные.

При оценке интенсивности болевого синдрома по шкале VAS показатели распределялись следующим образом. Исходное среднее числовое значение интенсивности боли составило 75,3±0,65 мм; на фоне лечения целекоксибом этот показатель последовательно снижался до 14,(Ш),54 мм (р<0,05). При проведении последующих двух курсов терапии болезненных ощущений в секреторную фазу цикла и во время менструации больные практически не отмечали. Большинство участниц исследования 27 человек (84,4%) отметили высокий эффект купирования масталгии и нагрубания молочных желез при лечении целекоксибом - 3,48±0,12 балла. Из них 23 пациентки (85,1%) не испытывали каких-либо болевых ощущений, а у оставшихся отмечалось чувство дискомфорта, которое не влияло на повседневную активность. При изучении влияния целекоксиба на содержание простагландиновЕг и F^ в плазме крови больных фиброаденоматозом молочных желез в менструальную фазу цикла получены статистически достоверные данные о снижении уровня исследуемых веществ практически до нормальных значений. Содержание 111 Ьг снизилось со 128,7±2,3 нг/мл до 78,4±1,8 нг/мл (р<0,05), ШТ^ со 136,4±2,05 нг/мл до 68,7±0,97 нг/мл (р<0,05).

Каких-либо серьезных побочных эффектов при приеме целекоксиба выявлено не было. Отмены препарата не потребовалось ни у одной из включенных в исследование женщин. Учитывая доказанное повышение синтеза простагдан-динов и экспрессии ЦОГ-2 при канцерогенезе молочной железы и исходя из результатов проведенного исследования, мы считаем целесообразным включение целекоксиба в комплексную терапию фиброзно-кистозной мастопатии у женщин с выраженным болевым синдромом, который в большинстве случаев является маркером участия метаболитов арахидоновой кислоты в развитии данного патологического процесса. Препаратом выбора целекоксиб является ввиду доказанной эффективности и безопасности (Насонов Е.Л., 2001), что делает возможным его профилактическое применение в группах риска.

Результаты исследования клинической эффективности комплексной негормональной терапии фиброаденоматоза молочных желез.

Средний возраст больных в первой группе составил 27,4±2,7 года, средняя оценка степени тяжести мастопатии до лечения- 4,5±0,21 балла. Во второй группе средний возраст больных равнялся 40,7±2,9 года, степень тяжести мастопатии по данным объективного обследования до лечения - 4,7±0,18 баллов.

Через три месяца от начала лечения в группе больных мастопатией активного репродуктивного возраста уменьшение субъективных проявлений мастопатии, таких как масталгия, синдром предменструального напряжения отмечали 29 (90,6%) женщин, в группе пациенток позднего репродуктивного возраста - 86 (87,8%). За тот же период объективные признаки фиброаденоматоза по данным пальпаторного обследования уменьшились в той или иной степени у 25 больных первой группы, что составило 78,1%, и у 74 (75,5%) больных тарой группы. При балльной оценке степень выраженности патологического процесса после проведенного лечения у больных 18-35 лет достоверно уменьшилась в 3,8 раза по сравнению с показателем до начала лечения и составила 1,2±0,06 баллов (р<0,05). У пациенток в возрасте 36-45 лет эти показатели составили соответственно 2,9 раза и 1,6±0,08 баллов (р<0,05). По данным эхографии, через 3 месяца приема препаратов в первой группе положительные результаты были отмечены у 25 больных (78,1%), во второй группе у 73 (74,5%) больных, что проявлялось в регрессии патологических изменений в молочных железах. Ухудшения не отмечено ни у одной пациентки. Эффективность проведенного лечения достаточно высока и сопоставима с эффективностью используемых в настоящее время комплексных схем лечения данной патологии (Летягин В.П., 2000; Тагиева Т.Т., 2001). Больные с недостаточным эффектом от проводимой терапии продолжили лечение еще в течение 1-3 месяцев.

Поддерживающие курсы терапии проводились в индивидуальном режиме 2-3 раза в год в зависимости от степени тяжести патологического процесса. Сроки наблюдения за больными составили от 2 до 3,5 лет.

Основным критерием оценки клинической эффективности проводимой терапии в течение всего срока наблюдения являлась динамика патологических изменений в молочных железах по данным клинического и эхографического обследования. С учетом эффективности лечения можно выделить три группы больных в зависимости от динамики клинической картины.

Первая группа соответствует полному клиническому успеху при применении негормональной терапии (69,6% больных), когда после проведенных курсов лечения в течение не менее 12 месяцев отмечаются отсутствие субъективных жалоб и объективная нормализация клинической картины в молочных железах по данным пальпаторного и ультразвукового обследования.

Вторая группа (18,3% наблюдений) характеризуется лишь частичным улучшением при применении негормональной терапии. Течение патологического процесса характеризуется торпидностью, длительное время сохраняются явления слабо или умеренно выраженного диффузного фиброаденоматоза.

Третья группа больных (12,1%) характеризуется отсутствием четко выраженного клинического эффекта. Анализ причин неэффективности комплексной терапии показал, что наибольшие сложности представляет лечение больных с тяжелыми нервно-психическими расстройствами, общей астенизацией и комплексом сопутствующих заболеваний.

В целом результаты лечения указывают на возможность успешного лечения фиброаденоматоза молочных желез негормональными средствами с антиканцерогенной активностью при условии комплексного патогенетического подхода к терапии. Применение «Каскатола», селенита натрия и целекоксиба может служить в данном случае примером так называемой «нацеленной хими-опрофилактики» (Александров В.А., Беспалов В.Г., 1991) в группе повышенного риска развития рака молочной железы

выводы.

1. Бета-каротин, «Каскатол» и селенит натрия при раздельном и комбинированном применении оказывают ингибирующее влияние на канцерогенез молочной железы, индуцированный у крыс №метил-К-нитрозомочевиной, пищевода, индуцированный у крыс Ы-метил-Н-бензилнитрозамином, печени и пищевода, индуцированный у крыс Ы-нитрозодиэтиламином, подкожных сарком, индуцированных у крыс 7,12-диметилбензантраценом. Антиканцерогенная активность исследуемых веществ проявляется в снижении частоты, множественности и темпов роста новообразований, удлинении латентного периода их развития, замедлении малигнизации неопластических изменений.

2. Бета-каротин, «Каскатол» и селенит натрия интибируют экспериментальный химический канцерогенез как при введении в фазах инициации и промоции, так и при применении только в фазе промоции. Это позволяет отнести исследуемые препараты к числу химиопрофилактических средств с антипромоторной активностью, способных ингибировать процесс канцерогенеза независимо от влияния на этиологический фактор.

3. Антиканцерогенная активность бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия проявляется в зависимости от гистогенеза и органной локализации неопластического процесса. Показано, что ингибирующее влияние исследуемых микронутриентов более выражено в отношении опухолей эпителиального происхождения. При этом бета-каротин и «Каскатол» более эффективны на моделях плоскоклеточного рака пищевода и аденокарци-ном молочной железы, селенит натрия проявляет максимальную актив. ностъ в отношении неопластической трансформации в ткани печени. Комплексное применение микронутриентов расширяет спектр и повышает эффективность их химиопрофилактического действия.

4. Бета-каротин, витамины Е, С и селенит натрия повышают функциональную активность Т-лимфоцитов, натуральных киллеров и макрофагов как в физиологических условиях, так и в условиях вторичного иммуноде-фицитного состояния. При раздельном применении действие микронутри-ентов зависит от дозы препарата, чувствительности клеточных популяций и длительности воздействия. При комбинированном применении «Каска-тола» и селенита натрия достоверное иммуностимулирующее действие проявляется на всех экспериментальных моделях и в более ранние сроки исследования.

5. Впервые в условиях проведенных экспериментов показано, что комплексное применение «Каскатола» и селенита натрия оказывает более выраженное по сравнению с их раздельным введением антиканцерогенное и иммуностимулирующее действие, что позволяет рекомендовать создание нового отечественного химиопрофилактического средства с антиокси-дантной, иммуномодулирующей и антиканцерогенной активностью, включающего бета-каротин, витамины Е, С и селен.

6. Ацетилсалициловая кислота и целекоксиб оказывают ингибирующсе влияние на канцерогенез молочной железы, индуцированный у крыс И-метил-К-нитрозомочевиной, что проявляется снижением частоты возникновения новообразований, удлинением среднего латентного периода и снижением темпов роста опухолей.

7. Целекоксиб оказывает ингибирующее влияние на канцерогенез печени и пищевода, индуцированный у крыс Ы-нитрозодиэтиламином, которое проявляется в достоверном снижении частоты возникновения и степени малигнизации неопластических изменений в печени, снижении множественности и злокачественности новообразований пищевода. Антиканцерогенное действие ацетилсалициловой кислоты на данной экспериментальной модели проявляется замедлением малигнизации неопластических изменений.

8. Впервые на моделях экспериментального химического канцерогенеза показано, что применение целекоксиба оказывает более выраженное, по сравнению с ацетилсалициловой кислотой, антиканцерогенное действие при меньшей частоте и тяжести эрозивно-язвенных изменений слизистой желудка.

9. У больных с фиброаденоматозом молочных желез выявлен гормональный дисбаланс с преобладанием абсолютной или относительной гиперэст-рогении, нарушение равновесия в системе перекисное окисление липидов - антиоксидангная защита, состояние вторичной иммунной недостаточности с преимущественным дефектом функционирования клеточного иммунитета, повышение продукции простагландинов Ег и Р^ в позднюю секреторную и менструальную фазы менструального цикла. Применение препаратов с антиканцерогенной активностью «Каскатола», селенита натрия и целекосиба у больных с фиброаденоматозом молочных желез приводит к уменьшению клинических проявлений мастопатии, нормализации баланса половых гормонов н простагландинов, восстановлению активности антиокеидантной системы, коррекции вторичного иммунодефицита.

Ю.Результаты исследований позволяют рекомендовать применение препаратов с антиканцерогенной активностью «Каскатола», селенита натрия и целекоксиба в комплексной терапии больных с фиброаденоматозом молочных желез с целью профилактики рака молочной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные позволяют рекомендовать применение негормонального медикаментозного комплекса, включающего «Каскатол», «Неоселен», «Солодку-ЭДАС» и ЭДАС-927 для лечения фиброаденоматоза молочных желез у женщин репродуктивного возраста. В результате проведенных исследований определен следующий режим применения указанных средств: «Каскатол» по 1 драже 3 раза в день, «Неоселен» по 50 мкг селена в сутки, «Солодка» по 2 драже 2 раза в день, ЭДАС-927 по 5-7 гранул 3 раза в день. Курс приема препаратов 3-6 месяцев в зависимости от клинической и эхографической динамики патологического процесса.

Способность целекоксиба уменьшать проявления масталгии и нагрубания молочных желез, снижать уровень простагландинов Ег и Р^ в крови больных с фиброаденоматозом молочных желез, является основанием для включения препарата в комплексную терапию мастопатии с выраженным болевым синдромом и синдромом предменструального напряжения. С этой целью рекомендуется принимать целекоксиб по 100 мг 2 раза в день двухнедельными курсами, начиная за 10 дней до предстоящей менструации в течение трех последовательных менструальных циклов.

Выявленные иммуномодулирующие свойства комплекса «Каскатол» -«Неоселен» позволяют рекомендовать применение «Каскатола» по 1 драже 3 раза в день и «Неоселена» по 50 мкг селена в день месячными курсами два раза в год с целью коррекции вторичных иммунодефицитных состояний и повышения противоопухолевой резистентности организма.

Основные работы, опубликованные по теме диссертации

1. Влияние ретинола ацетата и каротиноидов на возникновение опухолей, индуцированных химическими канцерогенами в эксперименте // Тезисы докладов участников 1-й Международной конференции «Экологические проблемы горных территорий».- Владикавказ.-1992.- С. 333-334 (соавт. Джиоев Ф.К.).

2. О влиянии бета-каротина на возникновение опухолей, индуцированных химическими канцерогенами в эксперименте // Тезисы докладов 5-й Юбилейной научной сессии СОГМИ.- Владикавказ.-1993.- С. 19 (соавт. Джиоев Ф.К.).

3. Влияние бета-каротина на возникновение новообразований пищевода и молочной железы // Успехи физиологических наук.- 1994.- Т. 25, №1.- С. 89 (соавт. Джиоев Ф.К.).

4. Разработка лекарственных средств на основе каротиноидов для коррекции иммунодефицитных состояний // Тезисы докладов П Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва.- 1995,- С. 143 (соавт. Сергеев А.В., Утешев Б.С., Коростелев С.А., Алпатов С.П., Буюклинская О.В., Раманау-скайте Р.Ю.).

5. Ингибирующее влияние отечественного синтетического бета-каротина на возникновение у крыс опухолей пищевода, глотки и преджелудка, индуцированных Н-мегал-Ы-бензилнитрозамином И Вестник ОНЦ РАМН.- 1995.- №3.-С. 21-24. (соавт. Джиоев Ф.К., Коростелев С.А.).

6. Pharmaceutical and Biological Aspects of Beta-carotene-based Drug Development // Abstracts book of 9-th WCI-EORTC symposium on new drugs in cancer therapy.- Amsterdam.- 1996,- №212 (Korostelev S.A., Sergeev A.V., Mkrtchyan T.V., Uteshev B.S.).

7. Влияние синтетического бета-каротина и Каскатола на возникновение опухолей пищевода, индуцированных у крыс метилбензилнитрозамином (МБНА) И Материалы Международного экологического симпозиума «Перспективные информационные технологии и проблемы управления рисками на пороге нового тысячелетия»,- Санкт-Петербург.- 2000.- С. 315-316 (соавт. Чочиева А.Р., Джиоев Ф.К.).

8. Влияние бета-каротина и комплексного препарата «Бета-кламин» на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс N-Menui-N-нитрозомочевиной (МНМ) // Там же.- С. 288-289 (соавт. Чочиева А.Р., Джиоев Ф.К., Басиева Т.С.).

9. Изучение возможностей лекарственной профилактики рака пищевода в эксперименте // Материалы 2-й Объединенной Всероссийской и Всеармейской конференции "Санкт-Петербург-Гас1ро-2000".- Гастробюллетень,- 2000.- №12.- С. 12 (соавт. Джиоев Ф.К.).

10. Влияние ретинола ацетата, синтетического бета-каротина и каскатола на возникновение опухолей пищевода в эксперименте // Материалы 2-й Всероссийской научно-практической конференции "Человек и ноосфера".-Краснодар.-

2000.-С. 199-201 (соавт. Джиоев Ф.К., Чочиева А.Р.).

11. Антиканцерогенная активность бета-каротина // Тезисы докладов 4-й Международной конференции "Устойчивое развитие горных территорий: проблемы регионального сотрудничества и региональной политики горных районов"-Владикавказ- 2001.- С. 481 (соавт. Джиоев Ф.К., Басиева Т.С.).

12. Влияние бета-каротина на возникновение подкожных сарком у крыс в эксперименте // Материалы V Международной конференции "Парентеральное и энтеральное питание".- Москва,- 2001.- С. 26-27 (соавт. Джиоев Ф.К., Чочиева А.Р.).

13. Влияние высокожировой диеты на экспериментальный канцерогенез в молочной железе и уровень эстрогена в крови подопытных животных // Там же,-С. 27 (соавт. Джиоев Ф.К., Чочиева А.Р.).

14. Иммуномодулирующая активность бета-каротина в условиях вторичного иммунодефицита, индуцированного канцерогенным воздействием в эксперименте // Актуальные проблемы теоретической и практической медицины.- Материалы VIII научной сессии СОГМА.- Владикавказ.- 2001.- С. 54-57 (соавт. Джиоев Ф.К., Басиева Т.С.).

15. Изучение возможностей лекарственной профилактики рака пищевода в эксперименте // Там же.- С. 58-60 (соавт. Джиоев Ф.К.).

16. Возможности витаминопрофилактики рака // Материалы Всеармейской юбилейной научной конференции «Современные проблемы гигиенического воспитания населения и военнослужащих».- Санкг-Петербург.-2001.- С. 180.

17. Изучение иммуномодулирующей активности бета-каротина в эксперименте // Медицинская иммунология.-2002.- Т.4, №2,- С.349.

18. Изучение влияния ряда антиоксидантов на возникновение рака молочной железы у крыс в эксперименте // Материалы VI Международного конгресса «Парентеральное и энтеральное питание».- Москва.- 2002.- С.20.

19. Влияние антиоксидантов на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс Ы-метил-Ы-нитрозомочевиной // Тюменский медицинский журнал.-2002.- № 3-4,- С.71-73.

20. Перспективы использования препарата «Каскатол» в лечебно-профилактической медицине // Тезисы докладов IX Научно-практической конференции «Эффективность применения Б АД в различных областях медицины».- Здравоохранение.- 2002.-С. 100 (соавт. Шашкина М.Я., Сергеев А.В.)

21. Опыт применения антиоксидантов в терапии фиброзно-кистозной мастопатии // Успехи современного естествознания.- 2003.- №4.- С. 31-32 (соавт. Албо-рова Б.Г., Бадтиева Р.М.).

22. Влияние целекоксиба на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс в эксперименте // Материалы X Российского национального

конгресса «Человек и лекарство».- Москва.- 2003.- С. 168.

23. Каскатол - потенциальное средство для химиопрофилактики наиболее распространенных заболеваний человека // Материалы X Российского национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва.- 2003.- С. 446 (соавт. A.B. Сергеев)

24. Возможные механизмы антиканцерогенной активности каротиноидов // Южно-Российский медицинский журнал.- 2003.- № 3.- С. 98-101.

25. Проблемы и перспективы создания средств витаминопрофилактики рака // В кн. «Экспериментальная онкология на рубеже веков» под ред. М.И. Давыдова, А.Ю Барышникова.- Москва.- 2003.- С. 377-398 (соавт. Сергеев A.B., Коро-стелев С.А., Шишкина МЛ).

26. Антиканцерогенные и антиоксидантные свойства препарата «Каскатол» // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты».- Москва.-2003,- С. 48-49 (соавт. Шашкина МЛ., Левшин В.Ф., Дрожагин В.Г., Карасева Л.И., Сергеев A.B.).

27. Иммуномодупирующая активность препарата «Каскатол» // Там же.- С. 3940 (соавт. Сергеев A.B., Карасева Л.И., Шашкина МЛ).

28. Влияние ацетилсалициловой кислоты и целекоксиба на возникновение опухолей молочной железы, индуцированных у крыс N-Merai-N-нитрозомочевиной Н Известия ВУЗов. Северокавказский регион.- 2003.-Приложение № 8.- С. 65-66 (соавт. Джиоев Ф.К.).

29. Изучение возможностей иммуномодулирующей терапии у больных дис-плазиями молочных желез И Аллергология и иммунология.- 2003.- Т.4, №2,- С. 135.

30. Влияние ацетилсалициловой кислоты и целекоксиба на возникновение опухолей пищевода, индуцированных у крыс в эксперименте // Материалы XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва,- 2004,-С. 861 (соавт. Джиоев Ф.К., Сергеев A.B.).

31. Возможности применения иммуномодуляторов в комплексной терапии фиброзно-кистозной мастопатии // Фундаментальные исследования.- 2004.-№4,- С. 104-105 (соавт. Алборова Б.Г., Джиоев Ф.К., Хохоева А.Г., Бадтиева P.M.).

32. Изучение применения «Каскатола» и селенита натрия у больных с фиброа-деноматозом молочных желез // Владикавказский медико-биологический вестник.- 2004.- Т. 4, №8,- С. 28-31 (соавт. Джиоев Ф.К., Алборова Б.Г., Сергеев A.B., Томаев И.П.).

33. Влияние микронутриентов с антиоксидантной активностью на канцерогенез печени, индуцированный у крыс N-нитрозодиэтиламином !! Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион,- 2005,- Приложение №1.- С. 34-38.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.06.2000 г. Подписано в печать 24.022005 Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 2,88

Печать авторефератов 730-47-74,778-45-60

РНБ Русский фонд

2006-4 3369

/,

Профилактика злокачественных новообразований относится к числу наиболее сложных и актуальных медико-социальных проблем современности. Несмотря на определенные успехи, достигнутые в диагностике и лечении рака, показатели заболеваемости и смертности от этой патологии продолжают расти. Только за последнее десятилетие XX века заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них выросли в мире более чем на 23%. В России прирост заболеваемости за период с 1992 по 2001 г. г. составил 16%, при ежегодном его темпе - 1,7% (Напалков H.H., 2004). В связи с этим во многих национальных и международных программах противораковой борьбы вопросам профилактики отводится приоритетное место.

Комплекс традиционных мер первичной профилактики злокачественных новообразований предусматривает исключение или уменьшение влияния на организм человека тех факторов, которые являются канцерогенными и способствуют развитию рака. Подобный подход уже дал определенные результаты в предупреждении опухолей некоторых локализаций (Evaluating Effective-nes of Primary Prevention of Cancer, 1990).

Самостоятельным и перспективным направлением в профилактике опухолей является химиопрофилактика - направленное торможение канцерогенеза при помощи биологически активных веществ с антиканцерогенной активностью. Для характеристики этого направления наряду с термином «химиопрофилактика» (Sporn M.B. и соавт., 1976) пользуются также терминами «лекарственная» (Лазарев Н.В., 1966), «химическая» (Wattenberg L.W., 1978), «фармакологическая» (Джиоев Ф.К., 1980), «биохимическая» (Шабад JI.M., 1979) профилактика рака. Ряд авторов (Сергеев A.B. и соавт., 1992) предлагает расширеный термин «средства активной профилактики опухолей».

Поиск средств, способных тормозить процесс канцерогенеза, интенсивно ведется с 60-70-х г.г. XX века на различных экспериментальных моделях и в эпидемиологических исследованиях. За столь короткую историю проведено большое количество работ по идентификации антиканцерогенных агентов и выявлены средства с различными механизмами действия. Это витамины А, Е, С, бета-каротин, некоторые микроэлементы, ретиноиды, нестероидные противовоспалительные препараты, фитоадаптогены и ряд других. Конкретным результатом этих исследований явилось разрешение Управления США по контролю за продуктами и лекарствами к применению тамоксифена для профилактики рака молочной железы, целекоксиба для профилактики рака толстой кишки у больных семейным аденоматозным полипозом и изотретиноина и ретинола пальмитата для профилактики развития вторых опухолей у больных раком легкого и головы/шеи (Fisher В. и соавт., 1998; Hong W.K. и соавт., 1990; Pastorino U. и соавт., 1993; Sporn М.В., 2000; Steinbach G. и соавт., 2000).

Однако, несмотря на определенные успехи, в области химиопрофилакти-ки остается еще немало нерешенных вопросов. Результаты экспериментальных и эпидемиологических исследований часто противоречат друг другу и требуют дальнейшего уточнения. Много неясного в изучении механизмов антиканцерогенной активности исследуемых препаратов и их возможного побочного действия на организм человека. Не определены критерии выявления и применения так называемых «универсальных» и «органотропных» химиопро-филактических средств. Очень актуальной является проблема создания комплексных антибластомогенных препаратов с широким спектром профилактической активности. Наблюдается явное отставание в проведении клинических испытаний и, особенно, использовании химиопрофилактических средств, как в группах высокого риска, так и в масштабах широких популяций.

Среди относительно небольшого числа веществ, антиканцерогенный эффект которых можно считать в той или иной степени доказанным, значительный интерес вызывают две группы средств: микронутриенты с антиоксидант-ной активностью и нестероидные противовоспалительные препараты.

Утверждение о химиопрофилактической роли бета-каротина, витаминов

Е, С, селена базируется на результатах большого числа исследований (Букин Ю.В., 1986, 1993; Keloff G.J., 1996; Reddy B.S., 1996). Получены убедительные доказательства о наличии связи между низкой обеспеченностью организма человека этими микронутриентами и высоким риском развития злокачественных новообразований (Заридзе Д.Г., Букин Ю.В., 1990). Ряд экспериментальных данных и некоторые результаты клинических испытаний подтверждают эти наблюдения (Blot W. и соавт., 1993; Bonelli L. и соавт., 1998; Clark L.C. и соавт., 1996, 1998; LARC Handbooks of Cancer Prevention, 1998; Kaegi E., 1998). Интерес к веществам с антиоксидантным действием обусловлен той важной ролью, которую играет антиоксидантная система организма в процессе канцерогенеза. По современным представлениям, ее несостоятельность вызывает нарушение обезвреживания и элиминации свободнорадикальных и перекис-ных соединений и способствует инициации цепи событий, приводящих к злокачественной трансформации (Франциянц Е.М. и соавт., 1996; Якубовская Р.И., 2000). Несмотря на значительное количество проведенных исследований, посвященных изучению химиопрофилактических свойств бета-каротина, витаминов Е, С и селена, остается еще немало нерешенных вопросов. Наиболее важными из них являются определение спектра антиканцерогенной активности отдельных микронутриентов и их сочетаний, рациональное комбинирование витаминов и микроэлементов для повышения эффективности и снижения токсичности, выбор показаний и оптимального режима профилактического применения.

Значительный интерес исследователей в качестве средств химиопрофи-лактики рака вызывают в последние годы и нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП). Однако большинство имеющихся к настоящему времени данных об их антиканцерогенной активности касается рака толстой кишки. В отношении злокачественных новообразований других локализаций проведены единичные исследования, которые не позволяют сделать окончательных выводов (Greenberg E.R. и соавт., 1996; IARC Handbooks of Cancer

Prevention, 1997). Антиканцерогенную активность 111 1ВП связывают со способностью подавлять фермент циклооксигеназу (ЦОГ) и, соответственно, блокировать синтез простагландинов из арахидоновой кислоты. При этом доказано, что основное значение имеет активность препаратов в отношении изофер-мента ЦОГ-2, гиперэкспрессия которого обнаружена при злокачественных новообразованиях различной локализации (Насонов E.JL, 2000; Hwang D. и со-авт., 1998; Sheehan K.M. и соавт., 1999). В связи с этим, а также с тем, что длительное использование традиционных неселективных НПВП в значительной степени ограничивается их токсичностью, большие надежды связывают с применением нового класса препаратов — селективных ингибиторов ЦОГ-2. Наиболее перспективным является целекоксиб, к настоящему времени одобренный Управлением США по контролю за продуктами и лекарствами для профилактики колоректального рака у лиц с семейным аденоматозным поли-позом.

Таким образом, очевидно, что одним из подходов в решении проблемы идентификации средств химиопрофилактики рака является изучение механизмов и спектра антиканцерогенной активности витаминов, микроэлементов и нестероидных противовоспалительных препаратов, выбор оптимальных доз и способов применения, поиск наиболее эффективных комбинаций микронутриентов, разработка практических рекомендаций по их использованию. Нет сомнений, что идентификация и внедрение в клиническую практику химиопрофилактических препаратов, эффективных в отношении основных видов новообразований человека, внесет значительный вклад в улучшение здоровья населения.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель исследования состояла в изучении антиканцерогенной активности бета-каротина, витаминов Е, С, селена и нестероидных противовоспалительных препаратов, исследовании механизмов химиопрофилактического действия указанных средств и обосновании возможности их применения в профилактике злокачественных новообразований.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить влияние раздельного и комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина и селена на канцерогенез молочной железы, печени, пищевода, подкожной клетчатки, индуцированный у крыс химическими канцерогенами.

2. Изучить иммуномодулирующую активность раздельного и комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина, селена в отношении основных звеньев иммунной системы, участвующих в противоопухолевой защите, как один из возможных механизмов их антиканцерогенного действия.

3. Определить состав комплекса микронутриентов для применения в качестве химиопрофилактического средства.

4. Изучить влияние нестероидных противовоспалительных препаратов ацетилсалициловой кислоты, целекоксиба на канцерогенез молочной железы, печени и пищевода, индуцированный у крыс химическими канцерогенами.

5. Исследовать состояние основных систем, участвующих в патогенезе фиб-роаденоматоза молочных желез.

6. Разработать схемы лечения фиброаденоматоза молочных желез с использованием химиопрофилактических препаратов и оценить их клиническую эффективность.

7. Обосновать необходимость применения химиопрофилактических средств в лечении больных с фиброаденоматозом молочных желез.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе впервые изучено влияние витаминов Е, С, бета-каротина и селена при их раздельном и комбинированном применении на канцерогенез молочной железы, индуцированный К-метил-Ы-нитрозомочевиной, печени и пищевода, индуцированный Ы-нитрозодиэтиламином, пищевода, индуцированный Ы-метил-Ы-бензилнитрозамином, подкожных сарком, индуцированных 7,12-диметилбензантраценом. В условиях проведенных экспериментов установлено, что исследуемые вещества обладают антипромоторной активностью и их антибластомогенное действие не связано с этиологическим фактором, но в значительной степени зависит от гистогенеза и органной локализации новообразований. Впервые выявлено, что одновременное применение витаминов Е, С, бета-каротина и селена расширяет спектр их химиопрофилакти-ческой активности. Показано синергическое взаимодействие микронутриен-тов, позволяющее в два раза снизить дозу каждого вещества при комбинированном применении, что уменьшает риск возникновения побочных и токсических эффектов при их длительном профилактическом использовании.

Впервые проведено сравнительное изучение иммуномодулирующего действия разных доз витаминов Е, С, бета-каротина, селена в условиях нормы и индуцированного вторичного иммунодефицита. Результаты исследований свидетельствуют о важной роли иммуномодулирующих свойств в реализации антиканцерогенного действия указанных средств. Это значительно расширяет представления о механизмах химиопрофилактической активности витаминов Е, С, бета-каротина и селена и позволяет рекомендовать их комбинированное применение для коррекции вторичных иммунодефицитаых состояний и повышения противоопухолевой резистентности организма.

Впервые на указанных выше экспериментальных моделях рака молочной железы, печени и пищевода изучена антиканцерогенная активность нового высокоселективного ингибитора ЦОГ-2 целекоксиба и проведено сравнение его химиопрофилактической активности и токсичности с наиболее часто применяемым в клинической практике «традиционным» неселективным НПВП - ацетилсалициловой кислотой.

Впервые на большом клиническом материале изучены изменения гормонального баланса, иммунного статуса, процессов перекисного окисления ли-пидов и антиоксидантной защиты, уровня простагландинов у больных с фиб-роаденоматозом молочных желез разной степени тяжести. Показана взаимосвязь нарушений различных звеньев гомеостаза в патогенезе мастопатии и возможность их коррекции при помощи лекарственных средств с антиканцерогенной активностью. Научно обоснована необходимость внедрения химио-профилактических средств в клиническую практику на примере лечения больных с фиброаденоматозом молочных желез.

НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Работа включает экспериментальный и клинический материал по изучению антиканцерогенной активности микронутриентов и нестероидных противовоспалительных препаратов, а также их фармакологической активности в отношении основных систем, опосредующих противоопухолевую защиту организма.

Результаты, полученные при изучении антиканцерогенной и иммуномо-дулирующей активности комбинированного применения витаминов Е, С, бета-каротина и селена, позволяют рекомендовать использование комплекса микронутриентов в качестве средства химиопрофилактики злокачественных новообразований ряда локализаций в группах риска, а также его включение в схемы иммунокоррекции при вторичных иммунодефицитных состояниях для повышения противоопухолевой резистентности организма.

Полученные данные, характеризующие антиканцерогенную и иммуномо-дулирующую активность отечественного препарата синтетического бетакаротина, использованы при составлении нормативной документации, представляемой в Фармакологический комитет при МЗ РФ.

Выявленное в эксперименте на моделях рака молочной железы, печени и пищевода антиканцерогенное действие нового высокоселективного ингибитора ЦОГ-2 целекоксиба позволяет рекомендовать проведение дальнейших экспериментальных и клинических исследований химиопрофилактической активности данного препарата.

Практическое значение полученных данных состоит в выявлении роли и взаимосвязи нарушений функционирования эндокринной, иммунной систем, процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты, метаболизма арахидоновой кислоты в патогенезе фиброзно-кистозной мастопатии. Результаты клинических испытаний являются основанием для рекомендаций по проведению патогенетически обоснованной терапии у больных с фиброа-деноматозом молочных желез.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах фармакологии с курсом клинической фармакологии, патологической физиологии, патологической анатомии, онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии СОГМА. Оригинальные экспериментальные модели индукции опухолей молочной железы у крыс и вторичного иммунодефицита у мышей внедрены в практику работы кафедр фармакологии и патологической физиологии, ЦНИЛ СОГМА. Методы обследования и лечения больных с фиброаденомато-зом молочных желез внедрены в работу поликлинического отделения Республиканского онкологического диспансера, гинекологических отделений гор. поликлиник №1 и №7 г. Владикавказа.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ

Результаты исследования доложены и обсуждены на 1-й Международной конференции «Экологические проблемы горных территорий» (г. Владикавказ, 1992 г.), V Юбилейной научной сессии СОГМИ (г. Владикавказ, 1993 г.), II Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г. Москва, 1995 г.), 9-th NCI-EORTC Symposium on new drugs in cancer therapy (Amsterdam, 1996), Международном симпозиуме «Перспективные информационные технологии и проблемы управления рисками на пороге нового тысячелетия» (г. Санкт-Петербург, 2000 г.), 4-й Международной конференции «Устойчивое развитие горных территорий: проблемы регионального сотрудничества и региональной политики горных районов» (г. Владикавказ, 2001 г.), V и VI Международных конгрессах «Парентеральное и энтеральное питание» (г. Москва, 2001, 2002 г.г.), V съезде иммунологов и аллергологов СНГ (г. Санкт-Петербург, 2003 г.), X и XI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (г. Москва, 2003, 2004 г.г.), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (г. Москва, 2003 г.), совместной научно практической конференции кафедр фармакологии с курсом клинической фармакологии, микробиологии вирусологии и иммунологии, анатомии человека, нормальной физиологии, патологической анатомии, гистологии, биологии, онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии, гигиены и медицинской экологии, JIOP-болезней, хирургических болезней детского возраста СОГМА.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 33 печатные работы.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 275 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, трех глав, включающих результаты собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, кото

ВЫВОДЫ.

1. Бета-каротин, «Каскатол» и селенит натрия при раздельном и комбинированном применении оказывают ингибирующее влияние на канцерогенез молочной железы, индуцированный у крыс Ы-метил-Ы-нитрозомочевиной, пищевода, индуцированный у крыс 1Ч-метил-М-бензилнитрозамином, печени и пищевода, индуцированный у крыс М-нитрозодиэтиламином, подкожных сарком, индуцированных у крыс 7,12-диметилбензантраценом. Антиканцерогенная активность исследуемых веществ проявляется в снижении частоты, множественности и темпов роста новообразований, удлинении латентного периода их развития, замедлении малигнизации неопластических изменений.

2. Бета-каротин, «Каскатол» и селенит натрия ингибируют экспериментальный химический канцерогенез как при введении в фазах инициации и промоции, так и при применении только в фазе промоции. Это позволяет отнести исследуемые препараты к числу химиопрофилактических средств с ан-типромоторной активностью, способных ингибировать процесс канцерогенеза независимо от влияния на этиологический фактор.

3. Антиканцерогенная активность бета-каротина, «Каскатола» и селенита натрия проявляется в зависимости от гистогенеза и органной локализации неопластического процесса. Показано, что ингибирующее влияние исследуемых микронутриентов более выражено в отношении опухолей эпителиального происхождения. При этом бета-каротин и «Каскатол» более эффективны на моделях плоскоклеточного рака пищевода и аденокарцином молочной железы, селенит натрия проявляет максимальную активность в отношении неопластической трансформации в ткани печени. Комплексное применение микронутриентов расширяет спектр и повышает эффективность их химио-профилактического действия.

4. Бета-каротин, витамины Е, С и селенит натрия повышают функциональную активность Т-лимфоцитов, натуральных киллеров и макрофагов как в физиологических условиях, так и в условиях вторичного иммунодефицитно-го состояния. При раздельном применении действие микронутриентов зависит от дозы препарата, чувствительности клеточных популяций и длительности воздействия. При комбинированном применении «Каскатола» и селенита натрия достоверное иммуностимулирующее действие проявляется на всех экспериментальных моделях и в более ранние сроки исследования.

5. Впервые в условиях проведенных экспериментов показано, что комплексное применение «Каскатола» и селенита натрия оказывает более выраженное по сравнению с их раздельным введением антиканцерогенное и иммуностимулирующее действие, что позволяет рекомендовать создание нового отечественного химиопрофилактического средства с антиоксидантной, иммуномодулирующей и антиканцерогенной активностью, включающего бета-каротин, витамины Е, С и селен.

6. Ацетилсалициловая кислота и целекоксиб оказывают ингибирующее влияние на канцерогенез молочной железы, индуцированный у крыс И-метил-Ы-нитрозомочевиной, что проявляется снижением частоты возникновения новообразований, удлинением среднего латентного периода и снижением темпов роста опухолей.

7. Целекоксиб оказывает ингибирующее влияние на канцерогенез печени и пищевода, индуцированный у крыс Ы-нитрозодиэтиламином, которое проявляется в достоверном снижении частоты возникновения и степени малигни-зации неопластических изменений в печени, снижении множественности и злокачественности новообразований пищевода. Антиканцерогенное действие ацетилсалициловой кислоты на данной экспериментальной модели проявляется замедлением малигнизации неопластических изменений.

8. Впервые на моделях экспериментального химического канцерогенеза показано, что применение целекоксиба оказывает более выраженное, по сравнению с ацетилсалициловой кислотой, антиканцерогенное действие при меньшей частоте и тяжести эрозивно-язвенных изменений слизистой желудка.

9. У больных с фиброаденоматозом молочных желез выявлен гормональный дисбаланс с преобладанием абсолютной или относительной гиперэстро-гении, нарушение равновесия в системе перекисное окисление липидов - ан-тиоксидантная защита, состояние вторичной иммунной недостаточности с преимущественным дефектом функционирования клеточного иммунитета, повышение продукции простагландинов Е2 и Р2а в позднюю секреторную и менструальную фазы менструального цикла. Применение препаратов с антиканцерогенной активностью «Каскатола», селенита натрия и целекосиба у больных с фиброаденоматозом молочных желез приводит к уменьшению клинических проявлений мастопатии, нормализации баланса половых гормонов и простагландинов, восстановлению активности антиоксидантной системы, коррекции вторичного иммунодефицита.

10. Результаты исследований позволяют рекомендовать применение препаратов с антиканцерогенной активностью «Каскатола», селенита натрия и целекоксиба в комплексной терапии больных с фиброаденоматозом молочных желез с целью профилактики рака молочной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные позволяют рекомендовать применение негормонального медикаментозного комплекса, включающего «Каскатол», «Неоселен», «Солодку-ЭДАС» и ЭДАС-927 для лечения фиброаденоматоза молочных желез у женщин репродуктивного возраста. В результате проведенных исследований определен следующий режим применения указанных средств: «Каскатол» по 1 драже 3 раза в день, «Неоселен» по 50 мкг селена в сутки, «Солодка» по 2 драже 2 раза в день, ЭДАС-927 по 5-7 гранул 3 раза в день. Курс приема препаратов 3-6 месяцев в зависимости от клинической и эхографической динамики патологического процесса.

Способность целекоксиба уменьшать проявления масталгии и нагрубания молочных желез, снижать уровень простагландинов Е2 и Р2а в крови больных с фиброаденоматозом молочных желез, является основанием для включения препарата в комплексную терапию мастопатии с выраженным болевым синдромом и синдромом предменструального напряжения. С этой целью рекомендуется принимать целекоксиб по 100 мг 2 раза в день двухнедельными курсами, начиная за 10 дней до предстоящей менструации в течение трех последовательных менструальных циклов.

Выявленные иммуномодулирующие свойства комплекса «Каскатол» -«Неоселен» позволяют рекомендовать применение «Каскатола» по 1 драже 3 раза в день и «Неоселена» по 50 мкг селена в день месячными курсами два раза в год с целью коррекции вторичных иммунодефицитных состояний и повышения противоопухолевой резистентности организма.