Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Экспериментальная фармакотерапия повреждений матки и ее придатков растительными средствами

На правах рукописи

БОТОЕВА ЕЛЕНА АПОЛЛОНОВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ФАРМАКОТЕРАПИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ МАТКИ И ЕЕ ПРИДАТКОВ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

13 ФЕВ 2014

Улан-Удэ -2014

005545093

005545093

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации

Научный консультант:

Мондодоев Александр Гаврилович - доктор медицинских наук Официальные оппоненты:

Усов Лев Акимович, доктор медицинских наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ / кафедра фармакологии, профессор

Плеханов Александр Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, НУЗ «Отделенческая клиническая больница» на станции Улан-Удэ открытого акционерного общества «Российские железные дороги» / главный врач

Шурыгина Юлия Юрьевна, доктор медицинских наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления» Министерства образования и науки Российской Федерации / кафедра социальных технологий, заведующий

Ведущая организация: ФГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «27» февраля 2014 года в 10 00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра Сибирского отделения Российской академии наук (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6).

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, доцент

В.Б. Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Воспалительные процессы матки и ее придатков занимают одно из первых мест в структуре гинекологических заболеваний (Кулаков В.И., Манухин И.Б., Савельева Г.М., 2011; Сухих Г.Т., Шуршалина A.B., 2013; SivapaJasingam S., Steigbigel N.H., 2010). За последние годы отмечен рост патологии указанного профиля в республике Бурятия (Кожевников В.В., 2013). Многочисленные исследования гинекологов, морфологов, онкологов, вирусологов указывают на развитие системной воспалительной реакции, наличие связи между генигальными инфекциями, нарушениями гормональной регуляции при патологии шейки матки (Кисина В.И., 2001; Серов В.Н., 2004; Вихляева Е.М., 2006; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006; Молочков A.B. и др., 2009; Ганцев Ш.Х., 2011; Liaw K-L., Giuliano A. et al., 2010; White B.A., 2011). Ряд авторов указывают на увеличение частоты заболеваемости раком шейки матки (Хачатурян А.Р., 2011; Прилепская В.Н., 2013; Роговская С.И., 2013; Goldhaber-Fiebert J.D. et al., 2008). Интерес специалистов к изучению воспалительных заболеваний гениталий определяется полиморфизмом микробных ассоциаций, существованием

антибиотикорезистентных штаммов, атипичностью клинической картины (Кузьмин В.Н., 2008; Бакулев А.Л., Василенко Л.В., 2008; Макаров О.В., 2010; Рафальский В.В., 2011; Workowski К.А., Berman S., 2010; Taylor B.D. et al., 2013). Наличие в арсенале акушеров-гинекологов лекарственных средств не решает данную проблему. Несвоевременное и неадекватное лечение заболеваний органов малого таза ухудшает качество жизни, приводит к снижению трудоспособности женщин в возрасте социальной активности, ухудшает репродуктивное здоровье (Жовтун Л.М., 2006; Жуковская И.Г., 2012; Краснопольский В.И. и др., 2013; Хамадьянова А.У., 2013). В последние годы сохраняющаяся угроза депопуляции, низкий уровень здоровья женщин фертильного возраста вызывают большую тревогу (Радзинский В.Е., 2011), особенно в регионах Сибири и Дальнего Востока с миграционным оттоком, низкой экономической плотностью территории. Сохранение и рост численности населения в субъектах Дальневосточного и Сибирского федеральных округов имеет государственное стратегическое значение (Жукевич Г.В., Аверков A.B., 2010; Савельева М.В., 2010) .

В Посланиях Федеральному собранию Президента Российской Федерации (РФ), «Стратегии национальной безопасности Российской Федерации до 2020 года» указано на фундаментальное значение положительной демографической ситуации в стране. Разработка и реализация комплекса мероприятий для решения проблем в сфере охраны материнства и детства по сохранению и укреплению репродуктивного здоровья населения в соответствии с Указом Президента РФ от 7 мая 2012 года № 606 «О мерах по реализации демографической политики Российской Федерации» является одной из главных задач. Работа Совета по реализации приоритетных национальных проектов и демографической политике по осуществлению «Концепции демографического развития Российской Федерации на период до 2025 года» должна привести к укреплению репродуктивного здоровья женщин (Указ Президента РФ от 9 октября 2007 года № 1351).

Основным принципом лечения заболеваний матки и ее придатков, наряду с ликвидацией патологического процесса, является терапия тех изменений в

организме, которые поддерживают длительное течение заболевания. Используемые в настоящее время в гинекологии лекарственные препараты нередко оказывают побочное действие, многие из них имеют ограниченное применение ввиду имеющихся противопоказаний (Яковлев C.B., 2002; Авдеева В.Б., 2003; Козлов С.Н., Страчунский JI.C., 2009; Болевич С.Б., Синельникова Т.Г., 2012). Кроме того, медикаментозные методы фармакотерапии указанной патологии не всегда позволяют добиться полной реабилитации больных и предотвратить рецидивы воспалительного процесса. Это можно объяснить тем, что при заболеваниях матки и ее придатков в патологический процесс вовлекаются все звенья репродуктивной системы, центральная и вегетативная нервная, сердечно-сосудистая, мочевыделительная, иммунная системы, нарушаются гемостаз и обмен веществ, что приводит к нарушению специфических функций женского организма (Бодяжина В.И., 1978; Мартынов Ю.С., 1989; Ахмедова Е.Х., 1990; Линде В.А., 2004; Айламазян Э.К., 2008; Пестрикова Т.Ю. и др., 2009; Афанасьева Г.А., 2013).

В связи с этим, тактика лечения в таких случаях предполагает использование средств, оказывающих действие на основные звенья патологического процесса и обеспечивающих комплексное воздействие на организм, а также устраняющих сопутствующие нарушения. Поэтому проблема изыскания новых высокоэффективных, безвредных, удобных в применении лекарственных средств остается весьма актуальной (Вайс Р.Ф., Финтельманн Ф., 2004; Чучалин А.Г., 2004; Никонов Г.К., Мануйлов Б.М., 2005; Савинов В.А., 2008; Белоусов Ю.Б., 2010; Кукес В.Г., 2012).

Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются ориентиром для выбора направления поиска новых видов лекарственного сырья. В качестве объектов исследования служили ортилия однобокая - Orthilia secunda (L.) House, семейства Pyrolaceae, панцерина шерстистая Panzeria lanata (L.) Moench, семейства Lamiaceae, какалия копьевидная Cacalia hastata L. Compositae, которые издавна известны в Сибири как лекарственные растения, применяемые при лечении гинекологических заболеваний. Это является особенно ценным фактом, так как в справочной литературе отсутствуют разделы, касающиеся растительных средств, используемых для лечения и профилактики заболеваний матки и ее придатков. Кроме того, ортилия однобокая, панцерина шерстистая, какалия копьевидная произрастают на территории Сибири, являются доступными для их промышленных заготовок (Телятьев В.В., 2004; Турищев С.Н., 2007).

Наиболее часто указанные растения используются для приготовления настоев и отваров, что крайне невыгодно с точки зрения рациональности использования сырья. В современной фармации предложена перспективная лекарственная форма - экстракт сухой, представляющий собой легкорастворимый в воде или водно-спиртовых смесях комплекс биологически активных веществ из лекарственных растений в концентрированном виде. Показатели его качества и содержание биологически активных веществ являются стабильными. Кроме того, использование фитопрепаратов в такой лекарственной форме удобно для применения больными. При терапии заболеваний шейки матки и влагалища во многих случаях предпочтительным признается интравагинальное применение лекарственных средств из-за снижения системной абсорбции препаратов, что сводит к минимуму потенциальные возможности нежелательных эффектов.

С учетом этого разработаны новые растительные средства - экстракт сухой ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House), экстракт сухой панцерины

шерстистой (Panzerina 1anata (L.) Moench), экстракт сухой какалии копьевидной (iCacalia hastata L.) и его 5% линимент.

Цель работы - определить основные фармакологические свойства и оценить фармакотерапевтическую эффективность экстрактов сухих ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House), какалии копьевидной (Cacalia hastata L.) и панцерины шерстистой (Panzerina lanata (L.) Moench) при повреждениях матки и ее придатков в эксперименте.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

1) определить основные фармакологические свойства экстрактов сухих ортилии однобокой, какалии копьевидной и панцерины шерстистой;

2) исследовать фармакотерапевтическую эффективность указанных растительных средств при экспериментальных повреждениях матки и ее придатков - остром эндометрите у белых крыс, хроническом сальпингите у кроликов, эктопии шейки матки у белых крыс;

3) выявить общие закономерности в специфическом действии экстрактов сухих и фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, а также особенности их влияния на течение патологического процесса в матке и ее придатках;

4) определить роль отдельных групп биологически активных веществ, входящих в состав хлороформной, этилацетатной, бутанольной и водной фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, в реализации фармакотерапевтического эффекта;

5) сопоставить фармакотерапевтическую эффективность испытуемых растительных средств и препаратов сравнения при экспериментальных повреждениях матки и ее придатков;

6) выявить особенности в фармакотерапевтическом влиянии экстрактов сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной;

7) определить безопасность разработанных фитоэкстрактов ортилии однобокой, панцерины шерстистой.

Научная новизна работы, теоретическая значимость. Впервые установлено, что полученные фитоэкстракты ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной обладают выраженной фармакотерапевтической ■ эффективностью при экспериментальных повреждениях матки и ее придатков -остром эндометрите, хроническом сальпингите, эктопии шейки матки, способствуя нормализации морфофункционального состояния матки и ее придатков у животных на более ранних сроках патологического процесса.

Общим и одним из основных механизмов в действии указанных экстрактов растений является наличие выраженной мембраностабилизирующей активности, ингибирование активности циклооксигеназы 2, реализация которых обеспечивается антиоксидантным действием содержащегося в этих растительных средствах комплекса биологически активных веществ. Причем, хлороформная и этилацетатная фракции, извлеченные из ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной, с высоким содержанием флавоноидов в виде гликозидов и флавоноловых агликонов (кемпферол и кверцетин) и галлотанинов, оказывают наиболее выраженное мембраностабилизирующее и противовоспалительное действие. Выраженная общая антиоксидантная активность их связана как с прямым радикалперехватываютцим действием фенольных соединений, входящих в их состав, так и опосредованным, обусловленным их хелатирующей активностью, активацией эндогенной антиоксидантной системы организма. Доказано стимулирующее влияние хлороформной и этилацетатной фракций ортилии однобокой на репродуктивную систему с повышением содержания

гонадотропинов в сыворотке крови и увеличением массы репродуктивных органов.

Особенностями в их фармакотерапевтическом влиянии являются: экстракт сухой ортилии однобокой оказывает более выраженное противовоспалительное действие при остром эндометрите, экстракт сухой панцерины шерстистой - при хроническом сальпингите, линимент экстракта какалии копьевидной - при эктопии шейки матки. Показана возможность и целесообразность фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков указанными средствами растительного происхождения.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработан и предложен важный патогенетически обоснованный подход к фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков с использованием средств растительного происхождения, обладающих антиоксидантной,

мембраностабилизируюшей, противовоспалительной активностью. Разработаны и предложены «Способ получения экстракта сухого ортилии однобокой, обладающего антиоксидантной и противовоспалительной активностью» (заявка № 2002115666/14(06475) (положительный результат формальной экспертизы от 12.11.2012); «Способ получения средства, обладающего антиокислительной и противовоспалительной активностью» (заявка № 2012152178/20 (положительный результат формальной экспертизы от 16.04.2013); «Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью» (заявка № 2013114909/20 (положительный результат формальной экспертизы от 23.03.13). Подготовлены по материалам исследований и изданы методические рекомендации "Применение-метода фитотерапии в гинекологической практике", учебное пособие «Применение лекарственных растений в акушерстве и гинекологии», рекомендованное Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию ВУЗов России.

Результаты диссертационной работы используются в курсе лекций и практических занятий по фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии, гинекологии на медицинском факультете ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 09.09.2013).

Основные положения, выносимые на защиту:

- базисными механизмами в фармакотерапевтическом влиянии экстрактов сухих и фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной являются наличие у них выраженной антиоксидантной, мембраностабилизирующей и противовоспалительной активности и связанного с этим широкого спектра фармакологических свойств, что обусловливает целесообразность их применения при повреждениях матки и ее придатков;

- отличия в фармакотерапевтическом влиянии указанных средств заключаются в том, что более выраженную эффективность при острых повреждениях матки (остром эндометрите) оказывает экстракт сухой ортилии однобокой; при хроническом сальпингите - экстракт сухой панцерины шерстистой, при эктопии шейки матки у белых крыс - линимент экстракта какалии копьевидной;

- фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит по некоторым показателям, а по другим сопоставима с эффектами препаратов сравнения.

Апробация работы. Результаты исследования и основные положения данной работы доложены и обсуждены на: научно-практической конференции с международным участием «Тибетская медицина Бурятии - достояние России», посвященной 10-летию Центра восточной Медицины МЗ РБ (Улан-Удэ, 2000); И Международном Тихоокеанском конгрессе «Традиционная медицина: научные

и практические аспекты» (Владивосток, 2001); VIII, IX и XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001, 2002, 2010); Всероссийской научной молодежной конференции с международным участием «Биологически активные добавки и здоровое питание» (Улан-Удэ, 2001); III Международном Конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2002); The International conference «Integrated system of traditional and modern medicines - Дорно-Орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» (Ulaanbaatar, Mongolia, 2005); Международном Конгрессе «Практическая гинекология: от новых возможностей к новой стратегии» (Москва, 2006); The 4 International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs (Erdos, China, 2009); The III International scientific conference «Traditional medicine: a current situation and perspectives of development» (Ulan-Ude, 2008); II International scientific conference «The clinical and theoretical features of modern medicine» (Moscow, 2010); 69-ой Всероссийской итоговой научной конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (Томск, 2010); II International scientific conference of young scientists of National academy of sciences of Belarus «Moral, reproductive health, demography» (Minsk, Belarus, 2010); научно-практической конференции, посвященной 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа (Иркутск, 2011); VI Leiden International Medical Conference «LIMSC-2011» (Leiden, Netherlands, 2011); IV International scientific conference «Problems and prospects of development of modern medicine» (Gomel, Belarus, 2012); V International scientific conference «SCIENCE4HEALTH 2013» (Moscow, 2013); VI Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии» (Москва, 2013).

Диссертационное исследование выполнено в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет» в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ (№ гос. per. 01.2.00304320) по теме «Изучение перспективных лекарственных растений Восточной Сибири», а также Федеральной комплексной целевой программы «Прогнозирование, ранняя диагностика, профилактика и лечение инфекционно-воспалительных заболеваний органов женской половой сферы».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 59 научных работ, из них: 19 статей — в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для опубликования основных научных результатов диссертаций; 2 монографии; 2 учебных пособия, в которых отражены основные результаты проведенного исследования.

Структура п объем диссертации. Диссертация изложена на 271 странице компьютерного текста и состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 438 источников, из которых 128 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 38 таблицами, 8 рисунками и 29 микрофотографиями.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная работа выполнена на 570 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г, 510 беспородных белых крысах массой 200-250 г обоего пола, 90 белых крысах-самках линии Wistar с исходной массой 170-180 г, 50 белых беспородных мышах-самцах массой 18-20 г, 60 половозрелых крольчихах породы "Шиншилла" массой 2,5-4,5 кг. Животные находились в стандартных условиях вивария ФГБУН ИОЭБ СО РАН в соответствии с

правилами лабораторной практики (GLP) при проведении доклинических исследований в РФ (Приказ МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики»). Перед началом экспериментов животные распределялись на группы с учетом массы, пола, возраста и принципа рандомизации. Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к Приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.), правилами и международными рекомендациями «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 1986). Протокол исследования согласован с этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол №5 от 05.09.2000).

Экстракт сухой ортшши однобокой (Orthilia secunda (L.) House) получен в лаборатории химико-фармацевтических исследований Отдела биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН по технологии, позволяющей получить максимальный выход действующих веществ из растительного сырья, и представляет собой аморфный порошок, содержащий флавоноиды в виде гликозидов и флавоноловых агликонов (кемпферол и кверцетин), конденсированные и гидролизуемые дубильные вещества, тритерпеновые сапонины, кумарины, иридоиды и аминокислоты.

Этилацетатная фракция, извлеченная из ортилии однобокой, содержнт тритерпеновые сапонины, дубильные вещества, флавоноиды в виде гликозидов и флавоноловых агликонов. Хлороформная фракция ортилии содержит флавоноиды в виде флавоноловых агликонов, сапонины и кумарины. Бутанольная фракция, выделенная го ортилии, содержит флавоноиды в виде флавоноидных гликозидов и дубильные вещества. Водная фракция ортилии содержит только фенологликозиды.

Экстракт сухой панцерины шерстистой (Panzerina lanata (L.) Moench) получен в лаборатории химико-фармацевтических исследований Отдела биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН путем последовательной экстракции с последующей вакуумной сушкой, представляет собой легкорастворимый в воде или водно-спиртовых смесях комплекс биологически активных веществ, гомогенный, порошкообразный, стандартизированный по основным биологически активным соединениям, удобный для применения. Установлена идентичность качественного состава сырья (надземная часть панцерины шерстистой) и экстракта сухого. Известно, что в данном сырье содержатся алкалоиды, иридоиды, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и их производные, органические кислоты.

Экстракт сухой какалии копьевидной (Cacalia hastata L.) семейства сложноцветных (Compositae) получен в лаборатории химико-фармацевтических исследований Отдела биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН по технологии, позволяющей обеспечить стандартизацию, точность дозирования фитосредства, повышение удобства в использовании, времени хранения. Разработанный способ получения экстракта позволяет получить продукт постоянного состава и заключается в экстракции растительного сырья водноспиртовой смесью с последующим упариванием, очищением от балластных веществ и сушкой в вакуум-сушильном шкафу. Фотохимическое исследование ЭСКК подтвердило наличие в нем основных групп биологически активных веществ, содержащихся в исходном сырье.

Линимент экстракта какалии копьевидной (Cacalia hastata L.) семейства сложноцветных (Compositae) получен в лаборатории химико-фармацевтических исследований Отдела биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН, представляет однородную массу коричневого цвета с приятным запахом.

Изучение качественного состава листьев какалии методами цветных реакций и хроматографии показало наличие флавоноидов (кверцетин, кемпферол), дубильных веществ, органических (винная, лимонная, яблочная, янтарная, щавелевая, аскорбиновая) и фенолокислот (феруловая, хлорогеновая, кофейная), кумаринов (умбеллиферон), тритерпеновых соединений (олеаноловая кислота), полисахаридов, ¡3-каротина. Общее содержание флавоновдов составило 1,9% (в пересчете на рутин), 0,224% (в пересчете на кверцетин); дубильных веществ -8,4%; органических кислот - 3,63% (в пересчете на яблочную кислоту); 2,44% (в пересчете на щавелевую кислоту); аскорбиновой кислоты - 1,5%; каротиноидов -340мг%.

Фракционирование экстрактов сухих* проводили методом градиентной жидкофазной экстракции с применением ряда растворителей: экстракта сухого С. hastata - гексан, хлороформ, этилацетат, н-бутанол; экстракта сухого О. secunda — хлороформ, этилацетат, н-бутанол (в ходе фракционирования наблюдалось выпадение межфазного осадка, который также подвергали исследованию); экстракта сухого P. lanata - гексан, хлороформ, этилацетат.

Экстракт сухой ортилии однобокой (ЭСОО) вводили лабораторным животным per os в экспериментально-терапевтических дозах 50-200 мг/кг массы ежедневно курсом длительностью до 28 суток, а препараты сравнения в изоэффективных дозах согласно показаниям к их применению. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. Кроме того, для уточнения механизмов действия экстракта ортилии однобокой в отдельных сериях опытов этилацетатную, хлороформную, бутанольную, водную фракции и межфазный осадок, извлеченные из экстракта ортилии однобокой, вводили экспериментальным животным per os в дозах 10-30 мг/кг массы. Экстракт сухой панцерины шерстистой (ЭСПШ) вводили per os в экспериментально-терапевтических дозах 50-200 мг/кг ежедневно курсом длительностью до 28 суток, а препарат сравнения в изоэффективных дозах согласно показаниям к их применению. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве по аналогичной схеме в каждой серии экспериментов. Для изучения механизма действия ЭСПШ в отдельных сериях опытов этилацетатную, хлороформную, гексановую фракции, извлеченные из панцерины шерстистой, вводили экспериментальным животным per os в дозах 10-30 мг/кг массы. Для изучения механизма действия экстракта какалии копьевидной (ЭСКК) в отдельных сериях опытов этилацетатную, хлороформную, бутанольную, водную и гексановую фракции, извлеченные из экстракта какалии копьевидной, использовали в дозах 10-30 мг/кг массы животных.

Исследование антиоксидантной активности указанных фитосредств и их фракций проводили с применением методов в условиях in vitro*; определяли общую антиоксидантную емкость исследуемых средств (Govindarajan et al., 2003), влияние исследуемых средств на динамику перекисной деградации р-каротина (Olennikov et al., 2007), а также антирадикальную активность с применением DPPH-метода (Seyoum et al., 2006).

Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1:10 и центрифугировали при 1,5 тыс. об/мин в течение 10 минут.

Суспензию липосом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспендирования с фосфатным буфером (рН 7,4) в соотношении 1:1 на магнитной мешалке в течение 15 мин (Лопухин и соавт., 1983).

Исследования проведены при участии д.фарм.н., ст.н.с. Д.Н. Олейникова

Для определения основных фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности экстрактов сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой, какалии копьевидной, их фракций и 5% линимента экстракта какалии копьевидной были использованы наиболее информативные методы, позволяющие определить спектр фармакологической активности, особенности действия на основные звенья репродуктивной системы и уточнить некоторые молекулярно-клеточные механизмы, лежащие в основе их фармакотерапевтического влияния.

Острую токсичность экстрактов сухих ортилии однобокой, какалии копьевидной и панцерины шерстистой оценивали с наблюдениями за животными в течение 14 суток в соответствии с требованиями (Руководство..., 2005).

Влияние ЭСОО и ЭСПШ на течение основных фаз воспалительной реакции изучали в соответствии с "Методическими рекомендациями МЗ РФ по исследованию противовоспалительных препаратов" (1983). Оценку влияния экстрактов сухих и фракций оргилии однобокой и панцерины шерстистой на течение экссудативной фазы воспалительной реакции проводили по Ю.Е. Стрельникову (1960). Влияние испытуемых экстрактов на альтерацию тканей исследовали на фоне острого воспаления, индуцированного введением уксусной кислоты по И.А. Онвину и С.Л. Шетель (1961). Для оценки влияния ЭСОО и ЭСПШ на процессы пролиферации использовали метод Ф.П. Тринуса и др. (1975). На основании полученных данных оценивали степень угнетения экссудации, стимуляцию образования фиброзно-грануляционной ткани, выраженность торможения альтеративных процессов. Дополнительно определяли влияние экстрактов сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной на скорость циклооксигеназной реакции полярографическим методом (Vane, 1996). При этом в качестве препарата сравнения использовали экстракт календулы после деалкоголизации в дозе 100 мг/кг массы крысы (в пересчете на сухой остаток) (Машковский, 2010).

Жаропонижающее действие ЭСОО и ЭСПШ оценивали на модели гипертермического синдрома, вызванного внутрибрюшинным введением пирогенала, с последующим измерением ректальной температуры с помощью термометра (Методические рекомендации..., 1983).

Определение спазмолитической активности экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой проводили на изолированном отрезке тонкого кишечника крысы (Furchgott, 1967).

Анальгезирующую активность испытуемых средств оценивали по методу "горячих пластинок" (Методические рекомендации...,1983).

Влияние ЭСОО и ЭСПШ на функциональное состояние центральной нервной системы изучали с использованием гексенала, стрихнина и тиосемикарбазида (Гацура, 1974).

Ориентировочно-исследовательскую активность и эмоциональное поведение животных оценивали по методике "открытое поле" (Руководство..., 2005).

Исследование антибактериальной активности испытуемых средств осуществляли методом двукратных серийных разведений в жидкой среде (Меньшиков и др., 1987).

Для оценки влияния ЭСОО и ЭСПШ на функциональное состояние почек определяли диурез с использованием обменных клеток (Берхин, Иванов, 1972).

Функциональное состояние печени животных оценивали по концентрации в желчи общего холестерина по методу С.М. Дроговоз, по скорости секреции желчи, общему количеству выделенной желчи, суммарной концентрации в желчи желчных кислот (Руководство..., 2005). Для оценки нарушения окислительно-восстановительных процессов, состояния активности ферментных систем, нарушения обмена веществ использовали набор методик, позволяющих

определить характер и степень изменений в организме животных под влиянием испытуемых природных средств. О фармакотерапевтической эффективности последних судили по степени активности аспартатаминотрансферазы (ACT), аланинаминотрансферазы (AJIT), содержанию общего белка (биуретовая реакция), показателю тимоловой пробы на автоматическом биохимическом анализаторе «Sapphire-400» (Япония) с использованием стандартного набора реактивов (Меньшиков В.В. и соавт., 1987; Камышников B.C., 2009; Кишкун А А 2012).

Влияние на систему гемостаза ЭСОО и ЭСПШ определяли по параметрам аутокоагуляционного теста по Б. Беркарда и др. (Методы..., 1993).

Действие испытуемых средств на функциональное состояние сердечнососудистой системы у белых крыс оценивали по характеру электрокардиографических изменений на электрокардиографе ЭК1К-01.

Мембраностабилизирующую активность экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой, какалии копьевидной, а также этилацетатной, хлороформной, бутанольной и водной фракций ортилии однобокой изучали in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза отмытых эритроцитов донорской крови человека (Ковалев и др., 1986).

Влияние ЭСОО и ЭСПШ на кинетику Fe2+ - индуцированной хемшпоминесценции определяли с помощью хемилюминометра «PXL-01» (Россия). Расчет антиокислительной активности фитопрепарата осуществляли с использованием показателя X (tg угла 5) (Владимиров и др., 1972).

Воспроизведение экспериментального повреждения матки у крыс (острого эндометрита^осуществляли введением 0,1 мл 2% водного раствора формалина (Шурыгина, 2000). Экстракты сухие ортилии однобокой и панцерины шерстистой в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг массы животных вводили внутрижелудочно с первого дня опыта 1 раз в сутки в течение 21 дня, фракции ЭСОО и ЭСПШ в экспериментально-терапевтической дозе 30 мг/кг массы животных вводили внутрижелудочно с первого дня опыта 1 раз в день в течение 21 суток. Исследования проводили через 3, 8, 12, 24, 72 часа, а также на 5-, 7-, 14- и 21-е сутки опытов.

Моделирование повреждения придатков матки (хронического сальпингита) осуществляли введением 2% водного раствора формалина в правую маточную трубу крольчих. ЭСОО и ЭСПШ в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг массы животных вводили внутрижелудочно с первого дня опыта 1 раз в день в течение 28 суток.

В качестве препарата сравнения использовали отвар горца птичьего, применяемый при лечении воспалительных заболеваний матки и ее придатков. Препарат сравнения вводили в объеме 1 мл/100г массы животных внутрижелудочно по аналогичной схеме и режиму введения экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой.

Для оценки фармакотерапевтической эффективности испытуемых средств определяли количество лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов и лейкоцитарную формулу крови, по биуреговой реакции определяли содержание общего белка в сыворотке крови, унифицированным методом элекгрофоретического разделения на пленках из ацетата глюкозы - содержание белковых фракций в сыворотке крови, концентрацию фибриногена в сыворотке крови определяли по методу Рутберг (Меньшиков и др., 1987).

Интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) биомакромолекул оценивали по накоплению малонового диальдегида в сыворотке крови (Темирбулатов, 1981). Содержание диеновых конъюгатов в сыворотке крови

и

определяли спектрофотометрическим методом (Гаврилов, Мишкорудная, 1983). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы - в эритроцитах (Чевари и др., 1985) и содержанию восстановленного глутатиона -в крови (Anderson, 1989).

Для исследования состава клеточной инфильтрации отпечатки эндометрия опытных и контрольных животных окрашивали по Романовскому-Гимза (Меньшиков и др., 1987), подсчитывали количество лейкоцитов, макрофагов и фибробластов на 100 клеток, результаты выражали в %.

С целью определения влияния фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на половую систему была проведена дополнительная серия опытов. В частности, этилацетатную, хлороформную, бутанольную и водную фракции, извлеченные из ортилии однобокой, вводили крысам-самкам через зонд в желудок в течение 14 дней в экспериментально-терапевтической дозе 30 мг/кг массы животных. Контрольная группа получала дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. На 15-й день в соответствии со стадией астрального цикла (проэструс) животных с целью изучения влияния фракционного состава ортилии однобокой на органы половой сферы определяли массу матки и яичников. О фазах полового цикла крыс судили по влагалищным мазкам (Гацура, 1974). Исследование гормонального профиля включало в себя определение содержания фолликулостимулирующего и люгеинизирующего гормонов в сыворотке крови крыс иммуноферменгным методом с использованием анализатора "Cobas EIL" (Швейцария) и наборов реактивов "Диа-Плюс-Рош" (Москва).

Для изучения морфофункционального состояния матки и ее придатков у подопытных животных использовали ряд гистологических методик . При этом матку и ее придатки фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизон (Микроскопическая..., 1996).

Воспроизведение экспериментальной модели эрозивных состояний шейки матки у крыс осуществляли по методике Соколовского (1967). 5% линимент экстракта какалии копьевидной в экспериментально-терапевтической дозе 3 мг вводили стеклянной палочкой интравагинально с двадцать четвертого дня опыта в течение 10 суток. Препарат сравнения - мазь календулы лекарственной в дозе 3 мг вводили по аналогичной схеме. Животные контрольной группы в соответствующих условиях получали мазевую основу в эквиобъемном количестве. Исследования проводили на 26-, 29-, 33-е сутки. О фармакотерапевтической эффективности 5% линимента какалии копьевидной судили по изменениям, происходящим в ткани шейки матки, влагалища и в окружающих их тканях. Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и пикрофуксином по ван Гизон (Микроскопическая..., 1996).

Полученные экспериментальные данные статистически обработаны с применением пакета прикладных программ «Excel 2003». Для выбора критериев оценки значимости (параметрических и непараметрических) средних контролировали равенство генеральных дисперсий в сравниваемых группах с помощью F-критерия Фишера, проверяли соответствие формы выборочных определений нормальному с использованием критерия Колмогорова-Смирнова (Лакин, 1990). Использовали параметрический t-критерий Стьюдента для оценки значимости различий в группах с нормальным распределением количественных показателей. В случае распределения, отличного от нормального, полученные данные сравнивали с помощью U-критерия Манна-Уитни при межгрупповом

* Исследования проведены при участии к.б.н., н.с. Я.Г. Разуваевой

сравнении. Во всех процедурах статистического анализа рассчитывали достигнутый уровень значимости (р), при проверке статистических гипотез критический уровень значимости принимался равным 0,05 (Сергиенко, Бондарева, 2000).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Определение фармакологических свойств экстрактов сухих и фракций ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной

Исследования острой токсичности испытуемых средств показали, что при внутрибрюшинном введении белым крысам ЭСОО DL» составила 1975,0 ± 81,52 мг/кг массы животных, DL50 ЭСПШ - 4625,0±390,0 мг/кг, DL50 ЭСКК - 4466,0±319,3 мг/кг. При внутрижелудочном введении указанных экстрактов в дозах до 10 ООО мг/кг гибели животных не наступало, и не было отмечено явных признаков острого отравления. Полученные данные позволяют отнести экстракты сухие ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной к группе практически нетоксичных веществ (Руководство..., 2005).

Исследование влияния ЭСОО и ЭСПШ на кинетику Ре2+-индуцированной хемилюминесценции показало, что ингибирующее влияние оказывают оба фитосредства. Рассчитанное численное значение параметра антиокислительной активности ЭСОО составляет 47,6 (г/л)"1, ЭСПШ - 2,90 (г/л) Эффективная действующая концентрация по двухкратному уменьшению tg угла наклона медленной вспышки (С Уг) экстракта ортилии составляет 0,021 г/л, экстракта панцерины - 0,345 мг/мл. ЭСКК в исследуемых дозах оказывает существенное ингибирующее влияние на процессы свободнорадикального окисления, в присутствии испытуемого средства в модельной системе многослойных липосом в данных количествах регистрируется ингибирование процессов перекисного окисления липидов (по данным хемилюминесцентного анализа) на 90%, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «медленной вспышки» с 79,06% до 0.

Определение влияния ЭСОО и ЭСПШ на перекисный и осмотический гемолиз эритроцитов показало, что ЭСОО оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, снижая степень перекисного и осмотического гемолиза в среднем на 51,4 -60,2% по сравнению с контролем; причем, процент гемолиза имеет тенденцию к снижению при повышении концентрации препарата в реакционной среде. В дополнительной серии экспериментов установлено, что наиболее выраженным мембраностабилизирующим действием обладают хлороформная и этилацетатная фракции ортилии однобокой. Также установлено, что ЭСПШ вызывает значительное снижение степени осмотического гемолиза (в среднем на 63,280,4%); причем процент гемолиза имеет тенденцию к снижению при повышении концентрации препарата в реакционной среде. ЭСКК в исследуемых дозах оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, снижая степень перекисного и осмотического гемолиза. Полученные результаты позволяют заключить, что экстракты сухие ортилии однобокой, панцерины шерстистой, какалии копьевидной обладают общими мембраностабилизирующими свойствами.

При исследовании способности к восстановлению биологического субстрата в условиях in vitro установлено, что общая антиоксидантная емкость ЭСКК составляет 263,72 мг/г, ЭСОО - 384,56 мг/г, ЭСПШ - 178,29 мг/г. Антирадикальная активность в отношении радикалов ДФПГ (1С50) экстрактов сухих Cacalia hastata составляет 37,84 мкг/мл, Panzerina lanata — 55,71 мкг/мл, Orthilia secunda - 4.79 мкг/мл и превышает таковую стандартного антиоксиданта кверцетина (9.93 мкг/мл). Антиоксидантная активность, определенная методом

СВА при влиянии исследуемых средств на динамику перекисной деградации р-каротина, ЭСКК составляет 94.54 мкг/мл, ЭСПШ - 209.86 мкг/мл, ЭСОО - 172.22 мкг/мл. Более глубокое исследование фракций ЭСКК показало, что величина радикал-связывающего действия снижается в ряду: н-бутанольная (15.90 мкг/мл) > водная > этилацетатная > хлороформная > гексановая (429.18 мкг/мл). При определении вкладов фракций в проявление данного вида активности установлено, что более чем на 90% она обусловлена компонентами, присутствующими в бутанольной и водной фракциях какалии. Аналогичная зависимость выявлена при изучении динамики деградации р-каротина в системе линолевая кисл0та-ДМСО-Н2О2. Распределение фракций ЭСОО согласно их активности следующее: этилацетатная (4.04 мкг/мл) > межфазный осадок > н-бутанольная > водная^ > хлороформная (47.98 мкг/мл), причем вклад этилацетатной фракции в проявлении данного действия составляет более 80%. Активными также являются компоненты межфазного осадка (54.65 мкг/мл) и хлороформной фракции (116.39 мкг/мл). Вклад соединений, составляющих хлороформную фракцию ортилии, в защите Р-каротина от перекисного повреждения максимальный. Наиболее активной фракцией ЭСПШ является этилацетная (12.92 мкг/мл), наименее активной - гексановая (> 500 мкг/мл). Следует отметить, что если в случае метода ОРРН влияние этилацетатной и водной фракций Ратегта 1апа1а было близким и составило в сумме около 90% от общей активности, то для СВА-метода наиболее активной является водная фракция (около 70%). Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что ЭСОО, ЭСПШ и ЭСКК проявляют закономерное антирадикальное действие и ингибируют процессы перекисной деградации Р-каротина. Изучение химического состава и данные ВЭТСХ-аутографии показали, что именно наличие фенольных соединений (флавоноидов, фенилпропаноидов, фенольных кислот) обусловливает данный вид фармакологической активности. Результаты проведенных исследований дают основание рассматривать указанные экстракты в качестве эффективных антиоксидантных агентов.

Определение противовоспалительной активности ЭСОО, ЭСПШ показало, что они оказывают существенное противовоспалительное действие, способствуя уменьшению выраженности воспалительной реакции (табл. 1,2).

Таблица 1 - Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на течение экссудативной фазы воспалительной реакции у белых крыс (М±т)_

Группы животных Доза, мг/кг Разность объема лапок с отеком и без отека, мл Степень угнетения отека, %

Контрольная (диет, вода), п=8 - 1,22 ±0,085 -

Опытная (ЭСОО), п=10 50 1,02 ±0,093 18,0

Опытная (ЭСОО), п=10 100 0, 85 ± 0, 054* 33,6

Опытная (ЭСОО), п=10 200 0,84 ± 0,064* 34,1

Спиртовый экстракт календулы, п=9 100 1,02 ± 0,043* 20,3

Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по отношению к контролю при р<0,05; п - количество животных в группе.

С увеличением дозы нарастает антиэкссудативная активность испытуемых ЭСОО, ЭСПШ, а также их фракций. Установлено, что наиболее выраженный

антиэкссудативный эффект экстракт ортилии проявляет в дозе 100 мг/кг массы животных (уменьшение отека лапки у крыс на 33,6%), экстракт панцерины - в дозе 100 мг/кг массы животных (уменьшение отека лапки у крыс на 25,0 %).

Таблица 2 - Влияние экстракта сухого панцерины шерстистой на течение экссудативной фазы воспалительной реакции у белых крыс (М±ш)

Группы животных Доза, мг/кг Разность объема лапок с отеком и без отека, мл Степень угнетения отека, %

Контрольная (диет, вода), п=9 - 1,56±0,104 -

Опытная (ЭСПШ), п=11 50 1,25±0,081* 15,0

Опытная (ЭСПШ), п=10 100 1,17+0,082* 25,0

Опытная (ЭСПШ), п=10 200 1,16±0,08* 25,1

Спиртовый экстракт календулы (п=9) 100 1,22 ± 0,04* 20,3

В другой серии экспериментов нами исследованы зависимости антиэкссудативной активности от дозы (10, 20, 30 мг/кг) хлороформной, этилацетатной, бутанольной и водной фракций, извлеченных из ортилии однобокой; хлороформной, этилацетатной, бутанольной, гексановой фракций, выделенных из панцерины шерстистой; хлороформной, этилацетатной, бутанольной, гексановой и водной фракций - из какалии копьевидной (рис. 1).

ортилии однобокая панцерина шерстистая какалия копьевидная

□ Эшацетатная ПБутанольная 8Хлороформная SJ Текстовая Вводная 0 Межфазный осадок

___

Рис. 1 - Влияние фракций экстрактов сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой и какалии копьевидной на течение экссудативной фазы воспалительной реакции у белых крыс.

Установлено, что с увеличением дозы нарастает и их эффект. В дозе 10 мг/кг массы животных значимое антиэкссудативное действие у фракций не выявлено. Наиболее выраженный эффект фракции проявляют в дозах 20-30 мг/кг массы животных. Дальнейшее увеличение дозы экстрактов и фракций не приводит к увеличению регистрируемого эффекта. Установленные эффективные дозы изучаемых фитосредств использовались нами в экспериментальных исследованиях при оценке их активности. Причем установлена разная степень выраженности противовоспалительной активности фракций, что, по-видимому, связано с их химическим составом. Можно полагать, что наиболее выраженное влияние хлороформной и этилацетатной фракций обусловлено присутствием более широкого спектра биологически активных веществ и доминирующим содержанием в них веществ фенольной природы.

При изучении влияния ЭСОО на течение альтеративной фазы воспалительной реакции установлено, что испытуемые фитосредства оказывают антиальтеративное действие, при этом снижается степень деструкции ткани на 33, 37 и 32% по сравнению с контролем через 7, 14 и 21 сутки соответственно, а ЭСПШ уменьшает площадь некротизированной ткани у крыс на 24,8%, 24,8% и 20,5%, т.е. в 1.25-1.33 раза соответственно по сравнению с контролем. При этом по выраженности антиэкссудативного и антиалътеративного действия указанные средства не уступают и даже превосходят активность препарата сравнения -экстракта календулы, а по степени влияния на образование фиброзно -грануляционной ткани при воспалительной реакции существенно не различаются и практически сравнимы с влиянием экстракта календулы.

В специальной серии опытов установлено, что испытуемые средства снижают скорость циклооксигеназной реакции по сравнению с показателями в контроле: ЭСОО - на 24%, ЭСПШ - на 21%, ЭСКК - на 18%.

Установлено, что указанные экстракты обладают выраженной спазмолитической активностью. ЭСОО снижает величину адренергической и холинергической реакций на 80-86% отрезка тонкой кишки крысы, а в присутствии ЭСПШ холинозависимая реакция мышц отрезка тонкой кишки практически не проявляется, что свидетельствует о наличии ярко выраженной спазмолитической активности. Испытуемые фитоэкстраюы оказывают ингибирующее влияние на реактивность гладкой мускулатуры. Это обстоятельство делает возможным применение испытуемых средств для лечения и профилактики эндометритов и сальпингитов, так как наличие изменений в центральной и периферической нервной системе, нарушений микроциркуляции с дефицитом кровоснабжения органов малого таза является одним из ведущих патогенетических механизмов воспалительных заболеваний женской половой сферы. Более выражено спазмолитическое действие у ЭСПШ, что обусловливает возможность применения этого фитосредства при хронических воспалительных процессах половых органов у женщин.

Выявлено, что ЭСОО оказывает жаропонижающее действие, нормализуя ректальную температуру у крыс через 3 часа, в то время как у животных контрольной группы она остается повышенной. ЭСПШ на протяжении 2 часов не оказывает существенное жаропонижающее действие, а на 3-4 час происходит нормализация ректальной температуры. Оба фитоэкстракта обладают выраженной анальгетической активностью, более чем в 3 раза снижая степень ноцицептивной чувствительности лабораторных животных при контактно-болевом воздействии. Причем противоболевой эффект испытуемых фитосредств превосходит в первые 2 часа, в среднем, в 1,3 раза действие препарата сравнения.

Известно, что пусковым механизмом в развитии воспалительных заболеваний половых органов является воздействие микробного фактора, которое определяет формирование очага воспаления и возникновение начальных проявлений заболевания. В результате проведенных исследований установлено, что ЭСОО обладает антимикробной активностью по отношению к Escherihia coli, Streptococcus faecalis и Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris и Staphylococcus aureus (табл. 3), а ЭСПШ - к Escherihia coli, Proteus vulgaris, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa.

У крыс, получавших испытуемые фитоэкстракты ортилии однобокой и панцерины шерстистой, регистрируется уменьшение количества сердечных сокращений за одну минуту (отрицательное хронотропное действие); происходит повышение амплитуды зубца R во втором стандартном отведении, что указывает на усиление электрической активности миокарда, а значит и на увеличение силы сердечных сокращений.

Установлено, что испытуемые фитосредства потенцируют снотворное действие гексеналау крыс. ЭСОО увеличивает продолжительность сна на 27,4%, а ЭСПШ - на 24,5%, что свидетельствует об их седативном действии. Также отмечено, что указанные фитоэкстракты оказывают влияние на функциональное состояние центральной нервной системы, снижая уровень эмоционального напряжения, тревожности и страха у белых крыс в тесте «открытое поле». Очевидно, это также свидетельствует о седативном компоненте в действии данных средств. Испытуемые экстракты не обладают заметной противосудорожной активностью, не оказывают значимого влияния на течение судорог, вызванных введением тиосемикарбазида и стрихнина.

Таблица 3 - Антимикробная активность экстракта сухого ортилии однобокой (минимальная подавляющая концентрация, мг/мл) (М ± ш)_

Культура бактерий, штамм № Бактерицидное действие Бактериостатическое действие

Staphylococcus aureus, 6538 4,25 0,42

Proteus vulgaris, 145 4,25 0,83

Escherihia coli, 387 2,13 0,21

Streptococcus faecalis, 27 2,13 0,11

Pseudomonas aeruginosa, 216 2,13 0,21

Выявленные спазмолитическая, жаропонижающая, седативная и анальгетическая активности указанных средств обосновывают возможность их применения в комплексном лечении воспалительных заболеваний половых органов, так как наличие нарушений микроциркуляции с дефицитом кровоснабжения органов малого таза, нарушений проницаемости сосудов, болевого, гипертермического синдромов, ганглионевритов, изменений в центральной и периферической нервной системе, являются одним из ведущих патогенетических механизмов в развитии эндометритов и сальпингитов (Мартынов Ю.С., 1989; Ахмедова Е.Х., 1990; Марченко Т.К., 1994; Стругацкий В.М., 1999; Афанасьева Г.А., 2013). Также известно, что воспалительные заболевания половых органов сопровождаются нарушениями нейрогуморальной регуляции ввиду изменений содержания гормонального фона, заинтересованности основных систем организма; при этом нарушается функция почек, развивается нарушение оттока мочи, гипокалиемия и гипернатриемия (Ворона И.Г., 1990; Линде В.А., 2004; Русакевич П.С., Литвинова Т.М., 2006; Савинов В.А., 2008; Летяева О.И., 2013).

Определение влияния ЭСОО на функциональное состояние почек у белых крыс показало, что испытуемое средство оказывает выраженное диуретическое действие, о чем свидетельствует увеличение диуреза на 33,3 % по сравнению с данными у животных контрольной фуппы. При этом фитоэкстракг стимулирует экскрецию с мочой катионов натрия, концентрация которых по сравнению с контролем повышалась на 25,1 %, не влияя отчетливо на экскрецию с мочой катионов калия. Курсовое введение экстракта ЭСПШ в экспериментально-терапевтических дозах также вызывает достоверное увеличение диуреза.

Установлено, что ЭСОО и ЭСПШ обладают слабым желчегонным эффектом, незначительно снижая концентрацию билирубина в выделяемой желчи. При биохимическом исследовании сыворотки крови животных установлено, что под влиянием ЭСОО и ЭСПШ наблюдается тенденция к уменьшению АЛТ, ACT, характеризующих синдром цитолиза, показателей тимоловой пробы по сравнению с данными у животных в контрольной группе.

Установлено, что фитоэкстракты оказывают регулирующее влияние на показатели коагуляционного гемостаза и фибринолиза у белых крыс, проявляя антикоагуляционные свойства в зависимости от времени действия и исходного состояния системы гемостаза в целом, повышая через 30 минут после внутрижелудочного введения активность антикоагулянтной и фибринолитической систем, а через 60 минут, увеличивая свертывание крови до уровня у ингактных животных с более выраженной активацией механизмов антикоагулянтной системы. Указанное свойство испытуемых экстрактов может способствовать уменьшению

выраженности ДВС - синдрома.

Таким образом, испытуемые экстракты сухие ортилии однобокой, панцерины шерстистой, какалии копьевидной обладают широким спектром фармакологической активности благодаря содержанию биологически активных веществ. При изучении механизмов действия испытуемых фитосредств установлено, что фракции, извлеченные из ортилии однобокой, панцерины шерстистой, какалии копьевидной оказывают противовоспалительное действие. По антиэкссудативной активности основные фракции можно расположить в следующей последовательности: хлороформная, этилацетатная, водная, бутанольная, гексановая фракция, межфазный осадок. Разная степень выраженности противовоспалительной активности фракций связана с их химическим составом. Можно полагать, что наиболее выраженное влияние хлороформной и этилацетатной фракций обусловлено присутствием преимущественно фенольных веществ (флавоноиды - в виде гликозидов и флавоноловых агликонов, кумарины, а также тритерпеновые сапонины). Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что широкий спектр фармакологической активности экстрактов сухих ортилии однобокой, какалии копьевидной и панцерины шерстистой, обусловленный присутствием в них комплекса биологически активных веществ, способствует реализации их фармакотерапевтической эффективности при повреждениях матки.

Влияние экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой на течение острого эндометрита

На модели острого эндометрита установлено, что курсовое введение ЭСОО и ЭСПШ в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг массы животных оказывает выраженное противовоспалительное действие, характеризующееся нормализацией морфофункционального состояния поврежденных органов на более ранних сроках патологического процесса. Показано, что при развитии

экспериментального эндометрита у всех подопытных животных развивается выраженный воспалительный процесс, сопровождающийся повышением скорости оседания эритроцитов, лейкоцитозом, нейтрофилезом. При этом у животных, получавших ЭСОО, уровень СОЭ на 7-, 14-, 21-е сутки был ниже по сравнению с данными у животных контрольной группы на 25, 50 и 45 % соответственно, а количество лейкоцитов было, в среднем, на 20% меньше по сравнению с таковым у крыс в контрольной группе.

Важным патогенетическим механизмом острого эндометрита является активация перекисного окисления липидов, не компенсирующаяся антиоксвдангаой системой организма.

Установлено, что ЭСОО оказывает положительное влияние на течение воспалительного процесса матки, снижая в сыворотке крови у крыс, получавших испытуемый экстракт, концентрацию ДК - на 34, 35, 39% на 7-, 14- и 21-е сутки соответственно, а также снижая уровень МДА (табл. 4). Выявлено повышение активности СОД в сыворотке крови по сравнению с контролем на 23, 25, 29% на 7-, 14- и 21-е сутки соответственно. Показано, что содержание ВГ в крови повышается по сравнению с контролем в 4,7; 4,9; 5,2 раза на 7-, 14- и 21-е сутки соответственно.

Таблица 4 - Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на концентрацию малонового диальдегида в сыворотке крови при экспериментальном эндометрите у белых крыс(М±ш)___

Сроки наблюдения, сутки МДА, мк моль/мл-мин

Интактная, п=6 Контрольная, п=6 Опытная (ЭСОО, 100мг/кг), п=10 ОГП, 1мл/100г, п=10

7 сутки 0,960±0,035 1,193±0,038 1,073±0,054 1,121±0,035

14 сутки 0,910±0,011 1,242±0,019 0,942±0,013 1,151±0,015

21 сутки 0,980±0,042 1,338±0,051 1,157±0,062* 1,162±0,062*

Введение животным ЭСОО способствует не только снижению тяжести острого эндометрита, но более быстрому восстановлению функционального состояния матки, яичников и гипофиза, о чем свидетельствуют данные проведенных исследований. Так, при изучении влияния ЭСОО на восстановление уровня лютеинизирующего гормона (ЛГ) и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) в сыворотке крови на 14-е сутки установлено увеличение содержания ЛГ на 23,1%, ФСГ - на 15,6%, а на 21-е сутки содержание ЛГ возрастает на 23,5%, ФСГ - на 16,1% (табл. 5).

Выявленное действие ЭСОО при эндометрите у белых крыс согласуется с данными патоморфологических исследований.

Известно, что выраженность воспалительных реакций находится в прямой зависимости от интенсивности инфильтрации органа клеточными элементами воспаления, такими как клетки лейкоцитарного, макрофагальногистиоцитарного рядов, которые активно вырабатывают медиаторы воспаления. Испьгтуемое средство усиливает функции нейтрофилов, макрофагов, сокращает длительность воспалительного процесса.

Таблица 5 - Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на содержание гормонов в сыворотке крови белых крыс при остром эндометрите (М±т)_

Группы животных Сроки эксперимента, сутки лг, ммЕ/мл ФСГ, ммЕ/мл

Интактная, п=6 7 0,112±0,002 0,43±0,011

14 1,112±0,003 0,44±0,008

21 0,111±0,002 0,43±0,007

Контрольная, 7 0,064±0,002 0Д9±0,006

п=6 14 0,060±0,002 0,27±0,011

21 0,062±0,002 0,26±0,008

Опытная 7 0,069±0,002 0,31±0,017

(ЭСОО, 100 14 0,078±0,002* 0,32±0,015*

мг/кг), п=10 21 0,081±0,001* 0,31±0,015*

ОГП, (1 мл/ЮОг), п=10 7 14 21 0,064±0,002 0,068±0,002* 0,070±0,002* 0,29±0,009 0,29±0,017 0,27±0,011

Так, при воздействии экстракта ортилии относительное количество макрофагов в отпечатках с эндометрия крыс увеличивается на 23,5 и 21,5%, а число фибробластов уменьшается на 25,6 и 23,7% соответственно по сравнению с контролем. Это, с одной стороны, свидетельствует о стимуляции воспалительной реакции, с другой стороны -о том, что макрофаги активно участвуют в секреции матрикса матки и осуществляют негативный контроль фиброгенеза тем, что активно вырабатывают антифиброгенные цитотоксины (например, интерферон-альфа/бета), коллагеназу, простагландины Е1/У2 и другие ингибиторы фиброгенеза. Это обстоятельство имеет значение в переходе от сбалансированного фиброгенеза к стойкому фиброзу органов, который развивается при длительном течении ВЗПО (Медведев А.Н., 1991; Хмельницкий O.K., 2000; Авдеева В.Б., 2003; Бизунок H.A., 2004; Майборода A.A., Кирдей Е.Г., Семинский И .Ж. и др., 2006; Барсуков A.A., 2009; Богданова A.M., 2012; Хамадьянова А.У., 2013).

Для дальнейшего изучения механизмов действия фитоэкстракта этилацетатную, хлороформную, бутанольную, водную фракции и межфазный осадок, извлеченные из ортилии однобокой, вводили животным в экспериментально-терапевтической дозе 30 мг/кг внутрижелудочно с первого дня опыта в течение 21 суток. Исследования проводили через 3, 8, 12, 24, 72 часа, а также на 5-, 7-, 14- и 21-е сутки опытов. В результате проведенных исследований установлено, что указанные фракции оказывают выраженное влияние на течение экспериментального эндометрита. У крыс, получавших этилацетатную фракцию, уровень СОЭ на 7-, 14-, 21-е сутки был ниже, чем таковой у животных контрольной группы на 31, 58, 51 % соответственно. В течение всего эксперимента у опытных животных количество лейкоцитов было в среднем на 31% меньше, чем таковое у крыс в контрольной группе. У крыс, получавших хлороформную фракцию, уровень СОЭ на 7-, 14-, 21-е сутки был ниже, чем у животных контрольной группы на 30, 55, 48% соответственно. Анализ биохимических показателей крови показал, что у животных в этом опыте отмечается наиболее выраженное фармакотерапевтическое влияние с ингибированием перекисного окисления липидов. Об этом свидетельствует снижение уровня МДА на 14- и 21-е сутки соответственно в среднем на 22,2 и

95 9% Установлено снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 38, 39, 44% на'7- 14- и 21-е сутки соответственно. Активность СОД в крови повышалась по сравнению с контролем на 27, 29, 32% на 7-, 14- и 21-е сутки соответственно Содержание ВГ в крови повышалась по сравнению с контролем в 4,9; 5,1; 6,0 раза на 7- 14- и 21-е сутки соответственно. В целом, влияние хлороформной, бутанольной, водной фракции и межфазного осадка на изменение указанных показателей у крыс имело положительные результаты, но они уступали по исследуемым показателям влиянию этилацетатной фракции, содержащей комплекс биологически активных веществ (кумарины, тритерпеновые сапонины, флавоноиды в виде гликозидов и флавоноловых агиконов). Степень выраженности фармакотерапевтической эффективности фракций связана с их химическим составом. Выраженное противовоспалительное действие экстракта ортилии однобокой обусловлено присутствием преимущественно флавоноидов, кумаринов, тритерпеновых сапонинов.

Воспалительные заболевания половых органов, как правило, сопровождаются интоксикационным синдромом с нарушением функционального состояния печени. При этом степень выраженности диспротеинемии коррелирует с тяжестью и длительностью воспалительного процесса (Авдеева В.Б. 2003; Шустрова ЮС.^2009; Летяева О.И., 2013). Анализ биохимических показателей показал, что ЭСОО при остром экспериментальном эндометрите оказывает противовоспалительное действие, способствуя уже на 7-е сутки эксперимента снижению уровня гамма-глобулина на 23 5% общего глобулина- на 19,2%, фибриногена- на 18,9% относительно данных у крыс в конгрольной группе. Начиная с 14 суток, отмечали нормализацию исследуемых биохимических показателей, что свидетельствует об улучшении белковообразовательной функции печени.

Влияние препарата сравнения - отвара горца птичьего на нормализацию регистрируемых показателей при остром эндометрите у крыс свидетельствовало об аналогичной тенденции, но они уступали результатам влияния фракций ЭСОО. Таким образом, курсовое введение экстракта сухого ортилии однобокой оказывает фармакотерапеэтическое влияние на течение экспериментального

острого эндометрита у белых крыс.

В другой серии экспериментов на модели острого эндометрита установлено, что курсовое введение животным экстракта сухого панцерины шерстистои в экспериментально-терапевтической дозе 100мг/кг массы животных оказывает выраженное противовоспалительное действие, характеризующееся нормализацией морфофункционалыюго состояния поврежденных органов на более ранних сроках патологического процесса. На фоне введения испьпуемого фитоэкстракта нормализовались характерные доя острой фазы воспаления леикоцитоз, нейтрофильный сдвиг лейкоцитарной формулы, скорость оседания эритроцитов, биохимические показатели крови. Скорость оседания эритроцитов при применении испытуемого фитоэкстракта была в 1,2 раза ниже, чем в контрольной группе на 7-е сутки; в 1,6 раза на 14-е и 21-е сутки соответственно. Количество лейкоцитов при введении ЭСПШ было ниже, чем в контрольной группе животных, в среднем, в 1,2 раза на всех сроках наблюдения. Палочкоядерные лейкоциты были практически на одном уровне, но их количество увеличилось по сравнению с данными в группе интактных животных в среднем в 1,5 раза. Сегментоядерных клеток было в среднем в 1,3 раза меньше при введении экстракта панцерины, чем в контроле на указанных сроках опытов. Процентное содержание эозинофилов и моноцитов практически не изменялось и существенно не отличалось в исследуемых группах. Количество лимфоцитов имело тенденцию к снижению по сравнению с данными в группе интактных животных, и на 7-е

сутки этот показатель в контроле был ниже в 2,6 раза, а в группе, получавшей ЭСТШ1 - в 1,1 раза; на 14-е сутки - в 3,5 раза и в 1,7 раза, на 21 -е сутки - в 2,5 раза ив 1,3 раза соответственно. Биохимические показатели также свидетельствовали, что испытуемый экстракт в дозе 100 мг/кг массы животных оказывает отчетливое влияние на течение острого эндометрита, способствуя уже на 7-е сутки эксперимента снижению уровня гамма-глобулина на 15,6%, общего глобулина -на 13,4% относительно данных в контроле. Начиная с 14 суток, отмечали нормализацию исследуемых биохимических показателей. При применении ЭСПШ у крыс наблюдали снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 17, 20, 22% на 7-, 14- и 21-е сутки соответственно. При этом активность СОД, содержание ВГ в крови повышались по сравнению с данными в контрольной группе. Для дальнейшего изучения механизмов действия ЭСПШ этилацетатную, хлороформную, гексановую фракции, извлеченные из панцерины шерстистой, вводили животным в экспериментально-терапевтической дозе 30 мг/кг массы внутрижелудочно с первого дня опыта в течение 21 суток. Исследования проводили через 3, 8, 12,24, 72 часа, атакже на 5-, 7-, 14- и 21-е сутки опытов.

В результате проведенных исследований установлено, что все фракции оказывают влияние на течение экспериментального эндометрита. Наиболее выраженное влияние отмечалось у животных, получавших этилацетатную фракцию. У животных, получавших указанную фракцию, наблюдали наиболее выраженное ингибирование перекисного окисления липидов, о чем свидетельствует снижение уровня ДК - на 22%, повышение активности супероксиддисмутазы - на 17%, содержания ВГ - в 3,3 раза. Влияние хлороформной, гексановой фракций на указанные показатели у крыс имело тенденцию к нормализации, но они уступали данным этштацетатной фракции панцерины шерстистой, содержащей комплекс биологически активных веществ. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что выраженность действия фракций связана с их химическим составом. Выраженное противовоспалительное действие ЭСПШ обусловлено присутствием, в основном, флавоноидов, кумаринов, тритерпеновых сапонинов.

Данные, полученные при патоморфологическом исследовании органов животных, получавших испытуемые фитоэкстракты, также свидетельствовали о нормализации структурного состояния и ранней инволюции органических изменений в матке. Наблюдали менее выраженные явления альтерации и экссудации в матке. Эпителий не был десквамирован, был сохранен гликокаликс, дистрофические изменения в маточных железах были выражены в меньшей степени, чем у животных контрольной группы (рис. 2,3,4).

слизистой

Рис. 2 - Контроль. Введение формалина в правый рог матки крысы №8. Отек стромы

Расширение и полнокровие

мелких сосудов. Диапедезное

кровоизлияние. Клеточная

инфильтрация. 14-е сутки

эксперимента. Окраска

гематоксилином и эозином. Увел. 10x20.

пластины.

Рис. 3 - Опыт. Введение крысе №16 экстракта сухого . ортилии однобокой. Фигуры

митоза в железистом эпителии матки. 14-е сутки опыта.

Окпягк-я грмятпхгипыиплл м

Окраска гематоксилином и ' : . л1"-'эозином. Увел. 10 х 40.

Рис. 4 - Опыт. Введение крысе № 18 экстракта сухого ортилии однобокой.

Сохранены стромы слизистой пластины матки, желез и покрывающего их эпителия. 14-е сутки эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10x20.

Таким образом, курсовое применение экстрактов сухих панцерины шерстистой и ортилии однобокой в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг массы животных оказывает благоприятное влияние на течение острого эндометрита. Фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит таковую у препарата сравнения - отвара горца птичьего (рис. 5,6). Причем, основные фракции из Orthilia secunda и Panzerina lanata оказывают выраженное противовоспалительное действие на фоне ингибирования свободнорадикального окисления биомакромолекул, стабилизируют биомембраны клеток.

Рис. 5 - Опыт. Введение крысе №14 экстракта сухого ортилии однобокой.

Эпителий, покрывающий слизистую пластину матки, в состоянии нормы. 21-е сутки опыта. Окраска

гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 40.

Рис. 6 - Опыт. Введение крысе №30 препарата сравнения - отвара горца птичьего. Верхний слой слизистой пластины матки некротизирован, пропитан экссудатом. Видны очаги выпота фибрина. 7-е сутки эксперимента. Окраска

гематоксилином и эозином. Увел. 10x20.

изученные фракции можно расположить в следующей убывающей последовательности: хлороформная, этилацетатная, водная, бутанольная, гексановая фракция, межфазный осадок. Выраженность противовоспалительной активности фракций связана с их химическим составом. Наиболее выраженное влияние хлороформной и этилацетатной фракций обусловлено присутствием основных биологически активных веществ (флавоноиды - в виде гликозидов и флавоноловых агликонов, кумарины, тритерпеновые сапонины).

При сравнении эффективности испытуемых фитосредств при остром эндометрите следует, что более выраженное фармакотерапевтическое влияние оказывает курсовое введение экстракта сухого ортилии однобокой, эстрогеноподобные биологически активные вещества которого предотвращают переход патологического процесса из острой формы в хроническую, способствуют более быстрому восстановлению функционального состояния матки, яичников и гипофиза, снижают воспалительную инфильтрацию матки, стимулируют активность макрофагов, тем самым препятствуют фиброгенезу и хронизации процесса.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что широкий спектр фармакологической активности экстрактов сухих Orthilia secunda и Panzerina lanata, обусловленный присутствием в них комплекса биологически активных веществ, способствует реализации их фармакотерапевтической эффективности при повреждениях матки.

Влияние экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой течение хронического сальпингита

При хроническом сальпингите у крольчих установлено, что введение экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой в дозах по 100 мг/кг массы животных оказывает благоприятное влияние на течение патологического процесса, уменьшая тяжесть воспалительного процесса.

Результаты исследований показали, что при введении 2% водного раствора формалина в маточную трубу животных контрольной группы развивается воспалительная реакция. Об этом свидетельствуют наличие лейкоцитоза, нейтрофилеза, повышение СОЭ, гиперфибриногенемия, диспротеинемия и гипергаммаглобулинемия у животных контрольной группы. Увеличение МДА в сыворотке крови крольчих с острым сальпингитом также свидетельствует о развитии

По фармакотерапевтической эффективности

острой воспгшительной реакции с интенсификацией процессов перекисного окисления липидов (рис. 7).

1,6

1,4

1,2

0,8

0,6

0,4

0,2

—сэпш

- сэоо

- интактаая

- контрольная

Рис. 7 - Влияние сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой на концентрацию МДА при остром сальпингите у крольчих (М ± ш)

Исследования показали, что ЭСОО оказывает позитивное влияние на течение хронического сальпингита. Так, установлено снижение СОЭ на 72,0%, уровня гамма-глобулина - на 20,4%, количества лейкоцитов - в 1,2 раза, а нейтрофилов -в 1,1 раза при использовании указанного экстракта, чем у животных в контрольной группе на 28-е сутки эксперимента. Кроме того, показано, что при введении испытуемого средства происходит повышение содержания общего белка, нормализуется функциональная активность гипофиза - на 7-е сутки уровни ЛГ и ФСГ на 22,6 и 14,2%, а на 28 сутки - на 24,1 и 16,5% выше, чем таковые у животных контрольной группы. ЭСОО ингибирует перекисное окисление липидов, о чем свидетельствует на 7-, 14, 21 и 28-е сутки соответственно снижение содержания в сыворотке крови крольчих с хроническим сальпингитом МДА на 10,3; 10,1; 14,5 и 16,3%, снижение концентрации ДК - на 32,3; 33,6; 40,8; 42,5%. Активность СОД в крови повышалась на 22; 25; 26; 29%, а содержание ВГ в крови

повышалось в 4,1; 4,3; 5,2; 5,6 раза по сравнению с контролем в указанные сроки соответственно.

В результате проведенной другой серии исследований установлено, что ЭСПШ оказывает благоприятное влияние на течение экспериментального сальпингита. У животных, получавших указанное средство, уровень СОЭ на 7- и 28-е сутки был ниже, чем таковой у животных контрольной группы на 58,9 и 76,0% соответственно. В течение всего эксперимента у опытных животных количество лейкоцитов было в среднем в 1,5 раза, уровень гамма-глобулина - на 31,6% ниже, а содержание общего белка повышено на 8,6%, чем у животных контрольной группы; уровни ЛГ и ФСГ не изменялись существенно. При применении ЭСПШ у крольчих отмечалось снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 22,6; 29,9; 41,3; 42,9% на 7-, 14-, 21 и 28-е сутки соответственно. Активность СОД в крови повышалась по сравнению с контролем на 17,3; 24,6; 26,8; 29,3% в указанные сроки наблюдения, а содержание ВГ в крови повышалось по сравнению с контролем в 3,0; 4,2; 5,3; 5,8 раза.

Данные, полученные при патоморфологическом исследовании, также свидетельствовали о нормализации морфофункционального состояния поврежденных тканей, органов животных, получавших данные экстракты (рис. 8,9).

Влияние препарата сравнения - отвара горца птичьего на нормализацию регистрируемых показателей при хроническом сальпингите у крольчих также имело положительную динамику, но они уступали влиянию ЭСПШ и ЭСОО.

Рис. 8 - Опыт. Введение крольчихе №2 экстракта панцерины шерстистой. Сохранение примордиальных фолликулов в окружении многочисленных стромальных клеток. 7-е сутки эксперимента. Окраска гематоксилином и эозином. Увел 10 х 40.

Рис. 9 - Опыт. Введение крольчихе №3 экстракта панцерии шерстистой. В большинстве случаев все слои стенки маточной трубы по структуре близки к норме. Умеренная инфильтрация верхнего слоя слизистой оболочки. 28-е сутки опыта. Окраска гематоксилином и эозином. Увел. 10 х 10.

Таким образом, курсовое введение животным экстрактов сухих панцерины шерстистой и ортилии однобокой и в экспериментально-терапевтических дозах оказывает благоприятное влияние на течение хронического сальпингита у крольчих, эффективность их превосходит отвар горка птичьего. При хроническом сальпингите у крольчих более выраженное фармакотерапевтическое влияние оказывает курсовое введение ЭСПШ, биологически активные вещества которого оказывают более выраженное спазмолитическое, антиоксидантное действие. Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что широкий спектр фармакологической активности экстрактов сухих Orthilia secunda, Panzerina ¡anata, обусловленный присутствием в них комплекса биологически активных веществ, способствует реализации их фармакотерапевтической эффективности при повреждении придатков матки.

Влияние фракций, извлеченных из ортилии однобокой, на репродуктивную систему белых крыс в эксперименте

Результаты исследований показали, что хлороформная и этилацетатаая фракции, извлеченные из ортилии однобокой, в дозах 30 мг/кг массы животных обладают наиболее выраженным эстрогеноподобным действием, повышая содержание фолликулостимулируюшего и лютеинизирующего гормонов в крови крыс в активные стадии эстрального цикла (табл. 6).

Таблица 6 - Влияние отдельных фракций ортилии однобокой на содержание гормонов в сыворотке крови у крыс (М±ш)___

Группы животных Доза, мг/кг Стадия эстрального цикла лг, мМЕ/мл ФСГ, мМЕ/мл

Контроль (диет, вода), п=б проэструс эструс 0,561±0,021 0,411±0,017 1,078±0,003 0,882±0,021

Хлороформная фракция, п=6 30 проэструс эструс 0,630±0,028 0,490±0,019 .1,941*0,005* 1,278±0,005*

Этилацетатная фракция, п=6 30 проэструс эструс 0,590±0,007 0,435±0,014 1,286±0,006* 1,981±0,006*

Бутанольная фракция, п=6 30 проэструс эструс 0,570±0,009 0,418±0,018 1,090±0,005 0,893±0,017

Водная фракция, п=6 30 проэструс эструс 0,502±0,025 0,410±0,044 1,070±0,006 0,891±0,007

Введение хлороформной и этилацетатной фракций показало наиболее выраженное увеличение массы матки и яичников (на 23,5 и 29,8% соответственно). Бутанольная и водная фракции на массу матки и яичников отчетливого влияния не оказывали. Прирост массы половых органов можно расценивать как свидетельство об активирующем влиянии изучаемых веществ на репродуктивную систему. При этом длительное введение фракций ортилии однобокой не влияет на течение и продолжительность эстрального цикла у половозрелых крыс. Отсутствие изменений в цикличности яичников косвенно свидетельствует об отсутствии влияния испытуемых веществ на скорость роста фолликулов в условиях физиологической нормы.

При патом орфолоптческом исследовании установлено, что при введении хлороформной и этилацетатной фракций также имеются наиболее выраженные признаки эстрогенного влияния на матку и ее придатки: гипертрофия, отек и гиперемия рогов матки, заполнение их просвета экссудатом.

Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод о том, что хлороформная и этилацетатная фракции, извлеченные из ортилии однобокой, оказывают гонадотропное эстрогеноподобное действие. Можно полагать, что это обусловлено присутствием широкого спектра биологически активных веществ (кумарины, тритерпеновые сапонины, флавоноиды в виде гликозидов и флавоноловых агликонов). Эстрогеноподобное действие фракций способствует реализации фармакотерапевтической эффективности испытуемых фитосредств при эндометритах и сальпингитах, так как известно, что эстрогены участвуют в регуляции местного иммунитета, в том числе и макрофагов. Содержащиеся в ортилии эстрогеноподобные биологически активные вещества участвуют в обеспечении противовоспалительной активности, что предотвращает переход патологического процесса из острой формы в хроническую.

Влияние линимента экстракта какалии копьевидной на течение эктопии шейки матки у белых крыс

В результате проведенных исследований установлено, что линимент экстракта какалии оказывает фармакотерапевтическое влияние на течение эктопии шейки матки. Под воздействием испытуемого линимента микроскопически наблюдалось восстановление структуры эпителия. Он приобретал способность образовывать многорядный пласт с ресничными клетками, формировать отношения с подлежащей соединительной тканью через базальную мембрану, что резко уменьшало пролиферативные и реактивные изменения в соединительной ткани собственной пластинки. Наблюдались явления, выражающиеся в снижении складчатости эпителиального пласта, но с сохранением его неравномерной структуры за счет участков из чередующихся высоких и низких клеток. Курсовое введение испытуемого фитосредсгва приводило к снижению экссудативных явлений: гемодинамических расстройств, отека, инфильтрации лейкоцитами, что способствовало более быстрому восстановлению структуры стенки шейки матки. В контрольной группе животных при микроскопическом исследовании влагалищной части шейки матки обнаруживались язвенно-некротические и воспалительные изменения с частичным нарушением эпителиального покрова и распространением процесса в субэпителиальной строме. Влияние препарата сравнения на регистрируемые показатели при эктопии шейки матки у крыс характеризовалось позитивным эффектом, но уступало влиянию линимента экстракта СасаНа \ишат (рис. 10).

я? у '^ЭТ* гйирг"1'" " *

* I

Рис. 10 - Опыт. Введение

5% линимента какалии 1 копьевидной на шейку ИИ1 матки белой крысы № 4. Восстановление структуры эпителия. 29-е сутки эксперимента. Окраска

*<**■ "■>- ? гематс

Увел. 10x10.

Таким образом, курсовое введение линимента экстракта какалии копьевидной в использованной дозе сопровождается выраженным фармакотерапевтическим эффектом на течение экспериментальной эктопии шейки матки у белых крыс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Используемые в настоящее время методы фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков не всегда позволяют добиться полной реабилитации больных. Это можно объяснить тем, что при заболеваниях матки и ее придатков в патологический процесс вовлекаются звенья репродуктивной, нейро-эндокринной системы, а также участвуют сердечно-сосудистая, мочевыделительная, иммунная системы, система гемостаза и обмен веществ. Изменения микроциркуляции с дефицитом кровоснабжения органов малого таза, нарушения проницаемости сосудов, проявления болевого, гипертермического синдромов, ганглионевритов, изменений в центральной и периферической нервной системе, являются ведущими патогенетическими механизмами заболеваний матки и ее придатков и аргументируют применение комплексного лечения заболеваний половых органов (эндометритов, сальпингитов, эктопий шейки матки), включая растительные средства.

В результате проведенных исследований установлено, что новые растительные лекарственные средства - экстракт сухой ортилии однобокой, экстракт сухой панцерины шерстистой, 5% линимент экстракта какалии копьевидной обладают выраженной фармакоггерапевтической эффективностью при повреждениях матки и ее придатков - остром эндометрите у белых крыс, хроническом сальпингите у кроликов, эктопии шейки матки у белых крыс. Полученные данные свидетельствуют о том, что реализация фармакотерапевтической эффективности указанных средств обусловлена широким спектром фармакологической активности экстрактов: аншоксидантной, мембраностабилизирующей, спазмолитической, антимикробной, анапьгезирующей, жаропонижающей, седативной, диуретической, кардиотонической и гемосгатической. Более того, хлороформная и этил ацетатная фракции, извлеченные из ортилии однобокой, оказывают гонадотропное эстрогеноподобное действие, обусловленное содержащимися в них кумаринами, тритерпеновыми сапонинами, флавоноидами в виде гликозидов и флавоноловых агликонов. Выраженная фармакотерапевтическая эффективность ЭСОО, можно полагать, определяется сочетанием противовоспалительного действия с обнаруженной гонадотропной активностью, что обеспечивает комплексное воздействие при воспалительных заболеваниях половых органов.

Известно, что пусковым механизмом в развитии эндометритов и сальпингитов является воздействие микробного фактора, которое определяет формирование очага воспаления и начальные проявления заболевания. В результате проведенных нами исследований установлено, что ЭСОО и ЭСПШ обладают антимикробной активностью, что обусловливает также их фармакотерапевтическую эффективность. Можно полагать, что выраженное антибактериальное действие обусловлено содержанием в испытуемых фитоэкстрактах, главным образом, дубильных веществ, флавоноидов, тритерпеновых сапонинов, которые по данным литературы обладают антимикробным эффектом (Георгиевский В.П., 1989; Головкин Б.Н., 2001; Турищев С.Н., 2007).

Воспалительные заболевания половых органов, нередко протекающие с выраженной интоксикацией, наклонностью к хронизации, сопровождаются изменением функционального состояния печени и почек с нарушением оттока мочи, гипокалиемией и гипернатриемией. При этом степень выраженности лиспротеинемии

коррелирует с тяжестью и длительностью воспалительного процесса. Исследованиями установлено, что ЭСОО и ЭСПШ улучшают функциональное состояние печени и почек, способствуя их нормализации у животных с экспериментальными эндометритом и сальпингитом. Противовоспалительное действие экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой сочетается с улучшением состояния сердечно-сосудистой системы, системы гемостаза, улучшением микроциркуляции. Так, испытуемые средства оказывают регулирующее влияние на показатели коагуляционного гемостаза и фибринолиза у белых крыс, проявляя как прокоагуляционные, так и антикоагуляционные свойства в зависимости от времени действия и исходного состояния системы гемостаза в целом, очевидно, корригируя функциональную систему гемостаза. Указанные свойства могут снизить вероятность развития ДВС - синдрома, являющегося одним из звеньев патогенеза повреждений матки и ее придатков.

Выраженность воспалительных реакций находится в прямой зависимости от интенсивности инфильтрации органа клеточными элементами воспаления, такими как клетки лейкоцитарного, макрофагальногистиоцитарного рядов, которые активно вырабатывают медиаторы воспаления. Установлено, что ЭСОО стимулирует функции нейггрофилов, макрофагов, сокращает длительность воспалительного процесса, изменяет количественное соотношение клеточных элементов в воспалительном инфильтрате матки. Это, с одной стороны, свидетельствует о стимуляции воспалительной реакции, с другой стороны - о том, что макрофаги участвуют в секреции матрикса матки и осуществляют негативный контроль фиброгенеза тем, что активно вырабатывают ангифиброгенные цитотоксины (например, интерферон-альфа/бета), коллагеназу, простагландины и другие ингибиторы фиброгенеза. Это обстоятельство имеет решающее значение в переходе от сбалансированного фиброгенеза к стойкому фиброзу органов, который развивается при длительном течении ВЗПО.

Установлено, что экстракт сухой ортилии однобокой снижает скорость циклооксигеназной реакции на 24%, экстракт сухой панцерии шерстистой - на 21%, экстракт сухой какалии копьевидной - на 18% по сравнению с показателями в контроле на фоне стабилизации биомембран.

Общим молекулярно-клеточным звеном в патогенезе заболеваний матки и ее придатков являются нарушения структурной и функциональной целостности биомембран клеток в результате индукции процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул со снижением активности системы антиоксидангаой защиты организма и последующим развитием каскада нарушений. Включение в комплексную терапию препаратов, обладающих выраженным антиоксидантным и мембраностабшшзирующим действием, приводит к ослаблению мембранодеструктивных нарушений в организме, оказывая положительный эффект на течение и исход повреждений органов половой сферы (Медведева И.Н., 2002; Дугиева М.З., 2003; Хамадьянова А.У., 2004; Добренькая П.С., 2005; Калинин В.В., 2006; Степанькова Е.А., 2006; Виноградова О.П., 2012; Афанасьева Г.А., 2013; Чурикова М.С.,2013).

Полученные данные позволяют утверждать, что одним из важнейших аспектов в молекулярно-клеточных механизмах противовоспалительного действия экстрактов сухих ортилии однобокой, панцерины шерстистой, какалии копьевидной, их фракций, линимента экстракта какалии копьевидной является наличие у них антиокислительной и мембраностабилизирующей активностей, а также способности их ограничивать активацию циклооксигеназной реакции, что было подтверждено в отдельной серии экспериментов. В результате исследования способности к восстановлению биологического субстрата в условиях in vitro установлено, что

общая антиоксидантная емкость ЭСКК составляет 263.72 мг/r, что связано с выраженной антирадикальной активностью в отношении радикалов ДФПГ (1С50 37.84 мкг/мл). При определении вкладов фракций в проявление данного вида активности установлено, что более чем на 90% она обусловлена компонентами, присутствующими в бутанольной и водной фракциях. Аналогичная зависимость выявлена при изучении динамики деградации ß-каротина в системе линолевая кислота-ДМСО-Н202. Антиоксидантная активность ЭСКК, определенная методом СВА, составляет 94.54 мкг/мл.

Полученные данные свидетельствуют о том, что ЭСПШ, ЭСОО, ЭСКК обладают весомым потенциалом к восстановлению биологического субстрата, проявляют выраженное антирадикальное действие и ингибируют процессы перекисной деградации биомакромолекул (ß-каротина), что связано с химическим составом и подтверждается данными ВЭТСХ-аутографии. Установленная радикалперехватывающая активность испытуемых средств имеет важное значение для объяснения молекулярных механизмов их влияния при заболеваниях матки и ее придатков, поскольку известно, что повреждающее действие свободные радикалы реализуют посредством инициирования реакций в биологических мембранах с последующим нарушением их морфофункциональной целостности. В основе антирадикального действия испытуемых средств, как показано нами, лежит непосредственная реакция ингибитора с образующимися свободными радикалами, поскольку для фенольных соединений, содержащихся в фитоэкстрактах, как и для классических антиоксидантов типа а-токоферола, характерно наличие ароматических колец с ОН- группами, являющимися акцепторами электронов. Экспериментально установлены антиоксидантные свойства производных биофлавоноидов и дубильных веществ - эллаготанинов, которые проявлялись ингибированием ПОЛ, восстановлением функциональной активности элементов антиоксидантной системы, стабилизацией мембран клеток. Можно предположить, что антирадикальная активность, обнаруженная у испытуемых средств, обусловлена высоким содержанием фенольных соединений. Вместе с тем, нельзя исключить, что в ингибировании ПОЛ определенную роль играет установленная хелатирующая способность указанных фитоэкстрактов, поскольку фенольные соединения, содержащиеся в растениях, способны образовывать прочные комплексы с металлами переменной валентности (Антошина C.B., 2005; Побединский Н.М., 2007; Nogochi N.. Niki Е., 2000) и, тем самым, предотвращать развитие процессов СРО биомакромолекул.

Общим патогенетическим механизмом в развитии мембранодеструктивных нарушений в клетках матки и маточных труб является активация свободнорадикального перекисного окисления липидов, не компенсирующаяся антиоксидантной системой организма. Подтверждением общего антирадикального механизма и стабилизации клеточных мембран под влиянием указанных растительных средств служат также полученные данные о снижении перекисного гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона. Наблюдаемое снижение гемолиза, очевидно, обусловлено ингибированием гидроксильных радикалов, образующихся в реакции Фентона, благодаря чему предотвращается инициация СРО молекул и повышается устойчивость эритроцитарных мембран к окислительным процессам. При детальном изучении механизмов действия испытуемых фитосредств установлено, что наиболее выраженное фармакотерапевтическое влияние на течение экспериментального эндометрита, ингибирование перекисного окисления липидов отмечалось у животных, получавших этилацетатную фракцию, извлеченную из ортилии однобокой. Выраженное противовоспалительное действие обусловлено присутствием флавоноидов в виде гликозидов и флавоноловых агиконов, кумаринов, тритерпеновых сапонинов.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что одним из ведущих молекулярно-клеточных механизмов в действии испытуемых экстрактов и линимента является наличие выраженной общей антиоксидантной активности, связанной как с прямым радикалперехватывающим действием фенольных соединений, входящих в их состав, так и опосредованным, связанным с хелатирующей активностью и активацией эндогенной антиоксидантной системы организма, с проявлениями выраженной мембраностабилизирующей,

противовоспалительной активности и связанными с ними другими обнаруженными свойствами. При этом курсовое введение животным экстракта сухого ортилии однобокой в экспериментально-терапевтической дозе 100мг/кг массы животных оказывает более выраженное противовоспалительное действие при остром эндометрите, экстракта сухого панцерины шерстистой - при хроническом сальпингите, линимента экстракта какалии копьевидной - при эктопии шейки матки. Полученные данные аргументируют целесообразность применения экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой, линимента экстракта какалии копьевидной в гинекологической практике в комплексе с другими лечебно-профилактическими мероприятиями при заболеваниях матки и ее придатков, которые протекают с нарушениями в эндокринной, половой, нервной, сосудистой и других сферах и требуют длительного лечения. Многогранность действия лекарственных растительных средств, высокая эффективность, безвредность и удобство в применении аргументируют целесообразность их использования в комплексной фармакотерапии заболеваний матки и ее придатков.

ВЫВОДЫ:

1) экстракты сухие ортилии однобокой и панцерины шерстистой проявляют широкий спектр фармакологических свойств: противовоспалительный, спазмолитический, антимикробный, жаропонижающий, обезболивающий, кардиотонический, седативный и диуретический;

2) общим молекулярно-клеточным механизмом в их действии является наличие у них выраженной антиоксидантной и мембраностабилизирующей активности при повреждениях матки и ее придатков, для которых активация свободно-радикального окисления биомакромолекул является основным звеном их патогенеза;

3) курсовое введение животным экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой, линимента экстракта какалии копьевидной в экспериментально-терапевтических дозах при повреждениях матки и ее придатков - остром эндометрите у белых крыс, хроническом сальпингите у кроликов и эктопии шейки матки у белых крыс оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние;

4) биологически активные вещества в составе фракций и экстрактов сухих, преимущественно флавоноиды, гашютанины, обусловливают базисный механизм коррекции патологического процесса;

5) фармакотерапевтическая эффективность исследуемых средств превосходит таковую у препаратов сравнения- отвара горца птичьего и мази календулы лекарственной;

6) особенностью указанных фитосредств является: при остром эндометрите у белых крыс - выраженное влияние экстракта сухого ортилии однобокой, при хроническом сальпингите у кроликов - экстракта сухого панцерины шерстистой,

при эктопии шейки магки у белых крыс - линимента экстракта какалии копьевидной;

7) экстракт сухой ортилии однобокой и экстракт сухдй панцерины шерстистой относится к группе практически нетоксичных веществ, при их введении животным нежелательные побочные реакции не развиваются.

Практические рекомендации

1. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать включение экстрактов ортилии однобокой и панцерины шерстистой, линимента экстракта какалии копьевидной в комплексную фармакотерапию воспалительных заболеваний матки и ее придатков, эктопии шейки матки.

2. Данные, полученные в работе, могут использоваться в учебном процессе на кафедрах фармакологии, клинической фармакологии, акушерства и гинекологии медицинских учебных заведений.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ботоева Е.А. Антиоксидангные свойства экстракта сухого ортилии однобокой / Е.А. Ботоева // Мат-лы научно - практ. конф. с междунар. участием «Тибетская медицина Бурятии - достояние России». - Улан-Удэ, 2000. - С. 57.

2. Ботоева Е.А. Мембраносгабшшзирующее действие экстракта сухого ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House) / E.A. Ботоева, C.C. Ломбоева, C.A. Чукаев, Л.Б. Бураева // Мат-лы Всеросс. научной молодеж. конф. «Биологически активные добавки и здоровое питание». - Улан-Удэ, 2001. - С. 61-62.

3. Ботоева Е.А. Противовоспалительное действие экстракта сухого ортилии однобокой / Е.А. Ботоева, С.С. Ломбоева, Л.Б. Бураева, С.А. Чукаев, A.B. Цыренжапов // Мат-лы II Междунар. Тихоокеанского конгресса «Традиционная медицина: научные и практические аспекты». - Владивосток, 2001. - С. 182 -183.

4. Ботоева Е.А. Фармакологические свойства экстракта сухого ортилии однобокой / Е.А. Ботоева // Химия и биологически активные вещества / Вып. 5: Сб. научных тр ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2001. - С. 132-133.

5. Чукаев С.А. Антиоксидангные и мембраностабилизирующие свойства сухого экстракта ортилии однобокой / С.А. Чукаев, Е.А. Ботоева, Л.Б. Бураева, С.С. Ломбоева // Тез. докл. VIII Росс, национ. конгресса «Человек и лекарство». - М., 2001. - С. 636.

6. Ботоева Е.А. Антимикробная активность экстракта ортилии однобокой / Е.А. Ботоева, Е.М. Баханова // Мат-лы III междунар. конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». - Томск, 2002. - С.204-205.

7. Ботоева Е.А. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на течение воспалительной реакции в эксперименте / Е.А. Ботоева, Л.Б. Бураева, A.B. Цыренжапов // Тез. докл. IX Росс, национ. конгресса «Человек и лекарство». - М, 2002. - С. 588.

8. Ботоева Е.А. Химическое и фармакологическое исследование экстракта сухого ортилии однобокой Orthilia secunda (L.) House / Е.А. Ботоева, С.С. Ломбоева, Л.Б. Бураева, С.А. Чукаев // Сибирский медицинский журнал. - 2003. - № 1. - С.69-71.

9. Леднева И.П. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на реактивность гладкой мускулатуры / И.П. Леднева, И.Г. Етобаева, Е.А. Ботоева II Тез. докл. IX Росс, национ. конгресса «Человек и лекарство». - М, 2002. - С. 650.

10. Способ получения сухого экстракта ортилии однобокой, обладающего ангиокислительной и противовоспалительной активностью / С.С. Ломбоева, Е.А.

Ботоева, Л.М. Танхаева, С.М. Николаев, Л.Б. Бураева, С.А. Чукаев // Заявка на изобретение № 2002115666 / 14 (06475), Российская Федерация; положительное решение формальной экспертизы от 12.11.2012.

11. Ботоева Е.А. Оценка фармакотерапевтического действия экстракта сухого оршлии однобокой / Е.А. Ботоева, Л.Б. Бураева, И.П. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. Сер. 11: Медицина. - 2004. - Вып. 4. - С. 144-149.

12. Ботоева Е.А. Принципы лечения хронического воспалительного процесса придатков магпси (обзор литературы) / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева, Л.Б. Бураева // Вестник Бурятского государственного университета. Сер. 11: Медицина. -2004.-Вып. 4.- С. 149-159.

13. Ботоева Е.А. Фигокоррекция эктопии шейки матки на фоне дисбиозов влагалищного биотопа / ЕА. Ботоева, А.В. Борголов, В.Е. Хигрихеев, И.П. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. Сер. 11: Медицина. -2004.-Вып. 4. - С. 172-178.

14. Ботоева Е.А. Фармакотералевтическая эффективность экстракта какалии копьевидной при эктопии шейки матки. / Е.А. Ботоева, А.В. Борголов, В.Е. Хитрихеев // Тез. докл. междунар. конф. «Integrated system of traditional and modern medicines -Дорно-Орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» - Ulaanbaatar, 2005. - P. 79-80.

15. Ботоева Е.А. К эпидемиологии эктопий шейки матки в Республике Бурятия / Е.А. Ботоева, А.В. Борголов, В.Е. Хитрихеев // Мат-лы междунар. научно-практ. конф., посвященной 75-летию Улан-Удэнского базового медицинского колледжа им. Э.Р. Раднаева. - Улан-Удэ, 2005. - С. 178-179.

16. Ботоева Е.А. Оценка противовоспалительного действия экстракта сухого ортилии однобокой / Е.А. Ботоева, Л.Б. Бураева, А.В. Борголов // Тез. докл. междунар. конф. «Integrated system of traditional and modem medicines - Дорно-Орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» - Ulaanbaatar, 2005. - P. 80-81.

17. Ботоева Е.А. Фармакологические свойства линимета экстракта какалии копьевидной / ЕА. Ботоева, А.В. Борголов, В.Е. Хитрихеев // Химия и биологически активные вещества/Вып. 9: Сб. научных тр. ВСГТУ. - Улан-Удэ, 2005. - С. 132-133.

18. Ботоева Е.А. Фармакотерапия эктопии шейки матки на фоне дисбиозов влагалищного биотопа / Е.А. Ботоева, А.В. Борголов, И.П. Убеева, В.Е. Хигрихеев // Вестник Бурятского государственного университета. Сер. 11: Медицина. - 2006. -Вып. 4,- С. 207-212.

19. Ботоева Е.А. Применение метода фитотерапии в гинекологической практике / Е.А. Ботоева, В.В. Ботоев // Учебное пособие. - Улан-Удэ, 2007. - 123 с.

20. Ботоева Е.А. Применение лекарственных растений в акушерстве и гинекологии / И.П. Убеева, С.М. Николаев, Е.А. Ботоева // Учебное пособие. -Иркутск, 2008. - 137 с.

21. Ботоева Е.А. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на течение экспериментального эндометрита / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева // Сибирский медицинский журнал. - 2009. - №5. - С. 45-49.

22. Botoeva Е.А. Influence of the diy extract of the Orthilia secunda (L.) House on a current of the experimental endometritis / E.A. Botoeva, I.P. Ubeeva, S.M. Nicolaev, K.S. Lonshacova, S.A. Chucaev // Abstract book: Erdos Forum on Development of Inemational Traditional Medicine, The 4th International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs. - Erdos, 2009. - P. 59.

23. Botoeva E.A. The definition of a pharmacotherapevtic efficiency of the diy extract oftheCacaliaHastata/ E.A. Botoeva, I.P. Ubeeva, S.M. Nicolaev // Abstract book: Erdos Forum on Development of Inemational Traditional Medicine, The 4th

international Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs. - Erdos, 2009 -P. 116.

24. Ботоева E.A. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на повреждение матки в эксперименте / Е.А. Ботоева, И.Г1. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2009. - Вып. 12. - С. 106-110.

25. Ботоева Е.А. Биологическая роль фитоэстрогенов (обзор литературы) / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. -2009.-Вып. 12.-С. 110-114.

26. Ботоева Е.А. Фармакотерапия эктопии шейки матки на фоне дисбиозов влагалищного биотопа / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2009. - Вып. 12. - С. 46-50.

27. Ботоева Е.А. Влияние экстракта сухого панцерины шерстистой на течение эндометрита / Е.А. Ботоева // Abstracts of II International scientific conference «The clinical and theoretical features of modern medicine». - Moscow, 2010. - P. 271.

28. Ботоева Е.А. Оценка фармакологических свойств экстракта сухого ортилии однобокой / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010 -№2 (72).-С. 167-170.

29. Ботоева Е.А. Средства растительного происхождения, стимулирующие и угнетающие репродуктивную систему (обзор литературы) / Е.А. Ботоева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 2 (72). - С. 239-242.

30. Ботоева Е.А. К вопросу о фитоэстрогенах (обзор литературы) / Е.А. Ботоева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010. - № 2 (72). - С. 234-238.

31. Ботоева Е.А. Фитотерапия в акушерской и гинекологической практике / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева. - Иркутск, 2010. - 207 с.

32. Гыгмытова J1.B. Оценка эффективности экстракта сухого ортилии однобокой при повреждении матки и ее придатков в эксперименте / JI.B. Гыгмытова, О.В. Сверкунова, Е.А. Ботоева // Мат-лы I Всеросс. научной конф. студентов и молодых ученых «Современные методы диагностики и лечения в акушерстве, гинекологии и репроцуктолопш» // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2010. - № 1. - С. 15-16.

33. Тыхенова МЛ. Фармакотерапия повреждений матки в эксперименте / M.JI. Тыхенова, В.В. Мяханов, Е.А. Ботоева // Мат-лы I Всеросс. научной конф. студентов и молодых ученых «Современные методы диагностики и лечения в акушерстве, гинекологии и репродуктологии» // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2010. - № 1. - С. 48-49 .

34. Ботоева Е.А. Фармакотерапия повреждений матки и ее придатков в эксперименте / Е.А. Ботоева. - Улан-Удэ, 2010. - 240 с.

35. Ботоева Е.А. Исследование фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта ортилии однобокой / Ботоева Е.А. // Казанская наука. - 2010. - № 9. - Вып. 2. - С. 10-16.

36. Ботоева Е.А. Антиоксидантная активность экстрактов сухих Cacalia hastata, Orthilia secunda и Panzerina lanata / Е.А. Ботоева, Д.Н. Олейников, JI.M. Танхаева, И.П. Убеева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2010. - Вып. 12.-С. 50-55.

37. Ботоева Е.А. Лекарственные растения, применяемые при лечении воспалительных заболеваний женских половых органов / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева,

С.М. Николаев // Вестник Бурятского государственного университета. - 2010. - Вып.

12.-С. 283-287. „

38 Ботоева Е.А. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на течение сальпингита в эксперименте/ Е.А. Ботоева, И.П. УбееБа, С.М. Николаев // Вестник Бурятского государственного университета. - 2010. - Вып. 12. - С. 276-281.

39 Ботоева Е.А. Изучение фармакологических свойств экстрактов сухих ортилии однобокой и панцерины шерстистой / Е.А. Ботоева, A.B. Власова // Казанская наука. -

2010. - № 9. - Выл. 2. - С. 16-22.

40. Ботоева Е.А. Оценка фармакотерапевтической эффективности экстракта какалии копьевидной при повреждении матки в эксперименте / Е.А.Ботоева, И.П. Убеева, С.М. Николаев, Л.М. Танхаева, Д.Н. Оленников // Тез. докл. XVII Росс.национ. конгресса «Человек и лекарство». - М., 2010. - С. 583.

41 Ботоева Е.А. Влияние экстракта сухого ортилии однобокой на течение экспериментального эндометрита / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева, С.М. Николаев, К.С. Лоншакова, С.А. Чукаев // Traditional medicine: a current situation and perspectives of development: Materials of the III International Scientific Conference. - Ulan-Ude,

2010.-P. 409.

42 Ботоева Е.А. Влияние средства растительного происхождения на течение острого эндометрита / Е.А. Ботоева, A.B. Власова // Moral, reproductive health, demography: Materials of the II International scientific conference of young scientists of National academy of sciences of Belarus. - Minsk, 2010. - P. 42-45.

43 Ботоева Е.А. Фармакологическое исследование сухих экстрактов ортилии однобокой и панцерии шерстистой / Е.А. Ботоева, И.П. Убеева, С.М. Николаев // Сибирский медицинский журнал. - 2010. - № 6. - С. 207-210.

44. Ботоева Е.А. Оценка фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта ортилии однобокой при повреждении матки и ее придатков в эксперименте / Е.А. Ботоева, В.В. Мяханов // Мат-лы 69-ой Всероссийской итоговой научной конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова. - Томск, 2010. - С. 259-260.

45 Botoeva Е.А. Phytotherapy of inflammatory diseases in gynecology / E.A. Botoéva, E.A. Ubeeva // LIMSC-2011: Materials of the VI Leiden International Medical Student Conference. - Leiden, 2011. - P. 89-90.

46 Ботоева EA Фитотерапия воспалительных заболеваний женских половых органов / Е.А. Ботоева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2011. - № 6 (74).- С. 167170.

47. Ботоева Е.А. Влияние средства растительного происхождения на течение экспериментального сальпингита / Е.А. Ботоева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -

2011. -№6(74). -С. 117-120.

48. Ботоева Е.А. Средства растительного происхождения при повреждениях матки и ее придатков / Е.А. Ботоева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2011. - Вып. 12. - С. 230-235.

49. Ботоева Е.А. О механизмах противовоспалительного действия сухих экстрактов ортилии однобокой, панцерии шерстистой, какалии копьевидной / Е.А. Ботоева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2011. - Вып. 12. - С 85-92

50. Ботоева Е.А. Фитотерапия в гинекологии / Е.А. Ботоева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2011. - Вып. 12. - С. 92-95.

51. Ботоева Е.А. Экспериментальная фармакотерапия острого эндометрита средством растительного происхождения / Е.А. Ботоева, С.М. Николаев, И.П. Убеева // Мат-лы научно-практической конференции, посвященной 25-летию кафедры клинической фармакологии ИГИУВа. - Иркутск, 2011. - С. 7-8.

52. Ботоева Е.А. Терапия повреждений шейки матки / Е.А. Ботоева // Problems and prospects of" development of modem medicine: Materials of the IV International scientific conférence. - Gomel, 2012. - C. 30-31.

53. Ботоева Е.А. О механизмах противовоспалительного действия сухих экстрактов ортилии однобокой, панцерии шерстистой, какалии копьевидной / Е.А. Ботоева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2012. -Вып. 12.-С. 85-92.

54. Ботоева Е.А. Фитотерапия в гинекологии / Е.А. Ботоева // Вестник Бурятского государственного университета. - 2012. - Вып. 12. - С. 92-96.

55. Ботоева Е.А. Влияние нового средства растительного происхождения на уровень продуктов перекисного окисления липидов при повреждении матки в эксперименте / Е.А. Ботоева, Е.А. Убеева // SCIENCE4HEALTH 2013: Materials of the International scientific conférence - Moscow, 2013. - C. 161.

56. Убеева Е.А. К вопросу о механизмах противовоспалительного действия фракций новых фитосредств / Е.А. Убеева, Е.А. Ботоева // Мат-лы VI Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии» // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2013. - № 2. - С. 162-163.

57. Kornopoltseva T.V. The substantiation of the plant composition use for the treatment gynaelogical disease / T.V. Kornopoltseva, T.A. Aseeva, E.A. Botoeva // Ways of intégration with modem health care: Materais of the VI international scientific conférence. - Ulan-Ude, 2013. - P. 36-37.

58. Способ получения средства, обладающего антиокислительной и противовоспалительной активностью / С.С. Ломбоева, Е.А. Ботоева, С.М. Николаев, Л.М. Танхаева, Т.А. Асеева, Т.В. Корнопольцева, Д.Н. Олейников, С.А. Чукаев // Заявка на изобретение № 2012152178/20, Российская Федерация; положительное решение формальной экспертизы от 16.04.13.

59. Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью / Т.В. Корнопольцева, Е.А. Ботоева, Ж.Б. Дашинамжилов, С.М. Николаев, Т.А. Асеева, Д.Н. Олейников // Заявка на изобретение № 2013114909/20, Российская Федерация; положительное решение формальной экспертизы от 23.03.13.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - аланинаминотрансфераза; АСТ - аспартатаминотрансфераза; АОС -антиоксидантная система; ВГ - восстановленный глутатион; ДК - диеновые конъюгаты; МДА - малоновый диальдегид; ПОЛ - перекисное окисление липидов; СОД - супероксиддисмутаза; ФСГ - фолликулостимулирующий гормон; ЛГ - лютеивизирующий гормон; СОЭ - скорость оседания эритроцитов; СРО -свободнорадикальное окисление; TAC - общая антиоксидантная емкость; СВА -перекисная деградация [3 - каротина; DPPH - 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил радикал; ХЛ - хемшпоминесценция; АО А - антиокислительная активность; ВЗПО - воспалительные заболевания половых органов; ЭСОО - экстракт сухой ортилии однобокой; ЭСПШ - экстракт сухой панцерии шерстистой; ЭСКК - экстракт сухой какалии копьевидной; ОГП - отвар горца птичьего

Подписано в печать 21.01.2014 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 2,0 печ. л. Тираж 100. Заказ № 3.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.