Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Доклиническое исследование эмбрио- и фетотоксических свойств нейромодулятора фенотропила

На правр^щ'

'копией

00460

515

ОСИПЧУК Дмитрий Олегович

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭМБРИО- И ФЕТОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НЕЙРОМОДУЛЯТОРА ФЕНОТРОПИЛА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

г э апр гт

Челябинск - 2010

004601515

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук профессор,

доктор медицинских наук, профессор

Ларионов Леонид Петрович

Волчегорский Илья Анатольевич Сыропятов Борис Яковлевич

Ведущая организация:

Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт имени В.В. Закусова РАМН

Защита диссертации состоится «_» мая 2010 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан «_» апреля 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В течение последних десятилетий особое место в мировой научной медицинской литературе отводится проблеме психопатологии беременных [Сорокина Т.Т., 2003; Schaefer С., 2007]. Основой многокомпонентной терапии психических расстройств является патогенетическая психофармакотерапия. Вопреки обширности экспериментального и клинического материала, послужившего базисом для развития современной психофармакотерапии, единой и общепринятой мировой тактики ведения беременных пациенток с расстройствами психической сферы так и не сложилось. Причин тому множество, по основным ограничивающим любую фармакотерапию в период беременности фактором является влияние применяемых препаратов на эмбрион, плод и плаценту [Абрамченко В.В., 1994; Schaefer С., 2007].

Зачастую оценить точный вклад лекарственных веществ в развитие врожденной патологии сложно, прежде всего, из-за невозможности точного учета используемых при беременности препаратов, а порой и по причине бесконтрольного применения беременными лекарственных веществ. Предположительно именно лекарственные средства, принимаемые беременными в разные сроки гестации, являются причиной 1-3% врожденных аномалий [Ушкалова Е.А., 2005].

Применение лекарственных веществ при беременности остается одной из наименее изученных проблем клинической фармакологии. Считаем серьезной проблемой для практического российского здравоохранения отсутствие четкой принятой классификации вреда при использовании лекарственных препаратов в течение беременности, а также отсутствие в аналогичных международных классификациях (например, FDA) некоторых широко используемых в России групп препаратов (например, поотропов). Для коррекции патологически протекающей беременности и родов может быть необходимо использование препаратов метаболического и ноотропного действия. Список разрешенных для применения в период беременности J1B указанных групп весьма скуден: из группы ноотропных препаратов используется только пирацетам, в качестве средств метаболической терапии - глюкоза, аскорбиновая кислота и поливитаминные препараты. Антидепрессанты первого ряда (селективные ингибиторы обратного захвата серотонина, селективные стимуляторы обратного захвата серотонина, обратимые ингибиторы МАО-А и др.) [Крылов В.И., 2003] в России в период беременности не назначаются из-за их дороговизны; препараты второго ряда (трициклические антидепрессанты и др.) не показаны беременным по причине их плохой переносимости.

Ввиду отсутствия литературных данных об эмбрио- и фетотоксичности ноотропного препарата с нейромодуляторными свойствами фенотропила нам представляется необходимым проведение экспериментальных исследований влияния фенотропила, вводимого пренатально, на пренаталыюе и постна-тальное развитие животных. Выполнение данных исследований необходимо

для решения вопроса о сообразности дальнейших клинических исследований применения фенотропила в период беременности для коррекции психических нарушений, что и позволило нам определить цель и задачи настоящего исследования.

Цель работы - в эксперименте на животных оценить эмбрио- и фето-токсическое влияние нейромодулятора фенотропила в анте- и постнатальном периодах развития.

Задачи

1. В эксперименте на белых крысах исследовать влияние фенотропила, вводимого в различных дозах в течение беременности, на внутриутробное развитие плодов крыс; выявить возможные эмбрио- и фетотоксические эффекты фенотропила.

2. Изучить влияние разных доз фенотропила на гистологическую структуру плацентарного комплекса при введении фенотропила беременным крысам.

3. Определить влияние фенотропила на течение беременности, а так же на ориентировочно-исследовательское поведение беременных крыс, получавших фенотропил в разных дозах.

4. Изучить влияние фенотропила, вводимого пренаталыю в разных дозах, на постнаталыше сенсомоторное и биологическое развитие потомства белых крыс.

5. Изучить влияние фенотропила, вводимого беременным крысам в разных дозах, на показатели клеточного состава периферической крови потомства.

Научная новизна исследований определяется тем, что впервые изучено влияние фенотропила, вводимого в различных дозах беременным беспородным белым крысам, на течение беременности крыс, пренаталыюе развитие потомства. Нами изучено влияние фенотропила, вводимого беременным самкам белых крыс, на плацентарный комплекс - с использованием стандартных гистологических методов и на постнаталыгое развитие потомства -при помощи тестов развития сенсомоторной сферы и теста исследования ориентировочно-исследовательского поведения «Открытое поле». Использование модернизированной установки «Открытое поле», снабженной автоматизированной системой регистрации, позволило значительно повысить точность подсчета локомоций и исключить субъективный фактор при исследовании параметров двигательной активности.

Необходимо отметить, что впервые эмбрио- и фетотоксические свойства фенотропила изучены в сравнительном аспекте с эталонным ноотроп-ным препаратом пирацетамом.

Тератогенных свойств у фенотропила не выявлено. Однако совокупность изменений постнатального развития потомства, получавшего внутриутробно фенотропил, расценена нами как свидетельство формирования комплекса ответных реакций на минимальное повреждающее воздействие, которым являлось введение ксенобиотика фенотропила. Нами выявлено наличие

у фенотропила колоколообразиой зависимости «доза-эффект», характерной для других препаратов ноотропного ряда.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость работы состоит в получении новых экспериментальных данных о влиянии фенотропила, вводимого беременным беспородным крысам, на пре-натальное и постнатальное развитие потомства. Полученные данные позволяют в новом свете оценить влияние ноотропных препаратов с метаболической активностью на эмбрион, плод, плаценту. Практическая значимость определяется разработкой и модификацией морфологических и экспериментальных методик изучения эмбрио- и фетотоксичности JIB (методики Вильсона, Стейплса, Доусона), тестов развития сенсомоторной сферы, теста «Открытое поле». Выявленные особенности развития потомства, получавшего внутриутробно фенотропил, позволяют дополнить данные ранее выполненных доклинических исследований, являющихся основой для клинических исследований фенотропила в акушерской практике.

Положения, выносимые на защиту:

1. В эксперименте на белых беспородных крысах фенотропил, вводимый в период беременности, не индуцирует развития неправильностей формирования структуры и топографии внутренних органов у потомства.

2. Фенотропил, вводимый в среднеэффективной дозе беременным крысам, приводит к уменьшению численности плодов в помете, что сочетается с повышением средних массы и длины плодов; вызывает уменьшение количества точек окостенения скелета задних конечностей плодов. Перечисленные эффекты при увеличении дозы фенотропила в 4 раза не воспроизводятся. Фенотропил приводит к увеличению относительных масс внутренних органов плодов (сердца, почек и тимуса), что обусловлено метаболическим эффектом препарата.

3. Фенотропил индуцирует развитие адаптационных процессов в фетопла-центарном комплексе крыс, расцениваемых как реакция на минимальное повреждающее воздействие.

4. В тесте «Открытое поле» выявлено разнонаправленное влияние фенотропила на ориентировочно-исследовательское поведение беременных крыс. Свойства фенотропила могут быть охарактеризованы колоколообразиой зависимостью «доза-эффект», характерной для других ноотропных препаратов.

5. Исследование формирования рефлексов потомства выявило, что фенотропил. вводимый беременным самкам белых беспородных крыс, вызывает ускорение созревания сенсомоторной сферы потомства. В тесте «Открытое поле» выявлено, что фенотропил повышает исследовательскую активность потомства при первичном предъявлении условий эксперимента, а так же ускоряет процесс адаптации потомства к новым условиям среды.

Апробация диссертационного материала. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2008), I Всероссийском конгрессе

молодых ученых в области медицины и биологии по итогам конкурса «Свет знаний во имя здоровья человека» (Москва, 2009), Съезде терапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра» (Ростов-на-Дону, 2009), IV Национальном конгрессе терапевтов (XX Съезд российских терапевтов) (Москва, 2009).

Публикация результатов исследования. По результатам диссертационного исследования опубликовано 6 научных работ, из них в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК - 2.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 28 таблицами, 16 фотографиями и 30 рисунками. Библиографический указатель содержит 49 отечественных и 81 иностранный источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Общая характеристика экспериментальных животных

Протокол эксперимента и содержание животных были составлены в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и приказа МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты проводили на беспородных белых половозрелых виргин-ных самках крыс массой 180-270 г. Интактные половозрелые самцы массой 280-350 г, ссаженные с самками для индукции беременности, после подтверждения наступления беременности из эксперимента были исключены. Выбор препаратов. В исследованиях использована субстанция фенотропила, предоставленная производителем препарата ОАО «Валента Фармацевтика». Свойства фенотропила изучали в следующих дозах: 50 мг/кг - минимальная эффективная доза, 100 мг/кг - среднеэффективная доза, 400 мг/кг ('Л ЬЭ50 [Ахапкина В.И., 2005]). В качестве препарата сравнения из класса ноотропов использован эталонный препарат пирацетам в дозе 300 мг/кг (максимальное проявление ноотропного эффекта [Воронина Т.А., 1998]).

Методы исследования антенатального повреждающего действия фенотропила, регистрируемого в антенатальном периоде развития [Фисенко В.П., 2000]

Изучение безопасности фенотропила в антенатальном периоде проводили на беспородных виргинных крысах 3-х групп (п=15 в каждой группе) с исходной массой 200-300 г (тср=245 г.). Животным вводили следующие препараты: 5% крахмальный гель (растворитель) - 1 группа (контроль); фено-тропил 100 мг/кг - II; фенотропил 400 мг/кг- III. Препараты вводили внут-рижелудочно через зонд один раз в сутки в одно и то же время с 1 по 19 дни беременности. На 20 день беременности под эфирным наркозом производили эвтаназию крыс, их вскрытие с последующим выявлением морфологических

пороков развития (аномалии развития внутренних органов и скелета) и общей задержки развития плодов. После наружного осмотра плоды каждого помета делили на три группы: одну группу плодов фиксировали в жидкости Боуэна и использовали для изучения внутренних органов по методике Вильсона, вторую группу фиксировали в 10% формалине и проводили исследование внутренних органов по Стейплсу, третью группу плодов фиксировали в 96° этаноле и использовали для изучения состояния скелета по методике До-усона.

Методика исследования внутренних органов плодов по методике Вильсона в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР. Исследования проводили на плодах, фиксированных в жидкости Буоэна. После проведения девяти последовательных срезов (в горизонтальной и фронтальной плоскостях) каждого плода макроскопически оценивали структуру, топографию и синтопию внутренних органов - головного и спинного мозга, гортани, трахеи, пищевода, крупных сосудов, сердца, легких, бронхов, печени, диафрагмы, кишечника, поджелудочной железы, почек, мочеточников, мочевого пузыря, прямой кишки, внутренних половых органов.

Метод висцерального исследования органов плодов по Стейплсу. После внешнего осмотра плодов и морфометрии последовательно вскрывали грудную и брюшную полость с последующим изучением макроморфологи-ческой структуры и топографии крупных сосудов, отходящих от сердца, собственно сердца, легких, органов брюшной полости. Определяли абсолютную и относительную массу вилочковой железы, сердца, почек.

Окрашивание скелета ализарином (методика Доусона, модифицированная в отделе эмбриологии НИИЭМ АМН СССР). Окрашивание окостеневших участков скелета плодов добивались погружением плодов в слабый раствор ализарина красного. Затем плоды изучали под микроскопом, учитывали аномалии скелета, количество точек окостенения в различных костных образованиях.

Методика исследования морфологической структуры плацент крыс. Извлечение плацент из матки крыс проводили одновременно с извлечением плодов на 20 день беременности. Из каждой группы произведено гистологическое исследование 10 плацент, полученных от разных самок. Гистологические препараты изготовлены согласно стандартным методикам, окраска производилась гематоксилином и эозином, а так же реактивом Шиффа по ШИК для обнаружения гликогена и гликопротеидов.

Методы исследования антенатального повреждающего действия фенотропила, регистрируемого в постнатальном периоде развития [Фисенко В.П., 2000]

Эксперимент проводили на потомстве первобеременных самок беспородных белых крыс четырех групп (п=15) с исходной массой 180-300 г. (п1ср=240г.). Животным вводили следующие препараты: 5% крахмальный гель - 1 группа (контроль); пирацетам 300 мг/кг (препарат сравнения) - II; фенотропил 50 мг/кг - III; фенотропил 100 мг/кг - IV; фенотропил 400 мг/кг -

V. Препараты вводили внутрижелудочно через зонд (субстанцию фенотро-пила разводили на 5% крахмальном геле) один раз в сутки с 6 по 19 дни беременности. Фенотропил в дозе 50 мг/кг был исследован лишь на этапе изучения его влияния на ориентрировочно-исследовательское поведение беременных самок крыс (развитие потомства данной группы нами не оценивалось). В течение беременности производили четырехкратное взвешивание крыс (до ссаживания с самцами, на 7, 14 и 21 дни гестации). С целью регистрации ориентировочно-исследовательского поведения самок использовали тест «Открытое поле» в те же сроки.

Исследование постнатального развития крысят продолжалось до 2-х месячного возраста и включало в себя общее наблюдение за физическим развитием, в том числе взвешивание на 7, 30, 45 и 60 сутки жизни животных, изучение динамики биологического созревания (открытия глаз, прорезывания резцов, опускания семенников, открытия влагалища), формирования сенсорно-двигательных рефлексов (переворачивания на плоскости, избегания обрыва, отрицательного геотаксиса), координации движений по показателям общей двигательной и исследовательской активности в установке «Открытое поле».

Методика определения ориентировочно-исследовательского поведения животных в тесте «Открытое поле» «ОП». Использовалась установка «ОП», снабженная цифровой видеокамерой с последующей компьютерной обработкой видеоизображения, что позволяло повысить точность регистрации локомоций и исключить субъективный фактор при подсчете показателей двигательной активности [Осипчук Д.О., 2008]. В течение трехминутной экспозиции производили подсчет следующих показателей: «горизонтальной двигательной активности» «ГДА» (в усл. ед., 1 усл. ед. - один пересеченный квадрат площадки установки), исследовательской активности, а именно -«вертикальной двигательной активности» «ВДА», «исследования нор», «суммарной вертикальной исследовательской активности» «СВИА» (сумма вертикальных стоек и заглядываний в норы), а также частоты груминга. Автоматизированной системой данные параметры фиксировались каждый деся-тисекундный интервал экспозиции.

Методика определения показателей клеточного состава периферической крови потомства. Для скринингового исследования влияния фено-тропила, вводимого беременным самкам крыс, на показатели клеточного состава периферической крови потомства исследована венозная кровь самцов контрольной группы, а так же самцов, получавших фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг внутриутробно на 60-е сутки жизни животных. Подсчет показателей был произведен на Автоматизированном гематологическом анализаторе МЕК-6400 J/K (Japan).

Статистическая обработка результатов

Обработку результатов проводили с помощью программы Statistica 6.0. Для анализа количественных признаков двух независимых выборок использовали непараметрический критерий Манна-Уитни; достовер-

ними считались различия показателей при р<0,05. Качественные признаки оценивали путем проверки гипотез (определение z-критерия); при р<0,05 считали различия между относительными частотами признака в сравниваемых группах статистически значимыми [Гланц С., 1999, Реброва О.Ю., 2006]. Результаты представлены в виде: среднего арифметического ± стандартная ошибка среднего (М±т) - для количественных признаков, относительной частоты признака и ее доверительного интервала - для качественных признаков.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование антенатального повреждающего действия фенотропила, регистрируемого в антенатальном периоде развития

В исследуемых трех группах животных нами не выявлено различий в следующих показателях эмбриотоксического действия: количество мест имплантации, количество желтых тел, показатели пред- и постимплантацион-ной гибели плодов. Ни в одной из исследуемых групп при извлечении плодов не обнаружено участков резорбции эндометрия, резорбцированных и мертвых плодов.

Численность потомства в исследуемых группах составила: контрольная группа - 170 плодов; группа, получавшая фенотропил в дозе 100 мг/кг - 105 плодов; группа, получавшая фенотропил в дозе 400 мг/кг - 140 плодов. При обследовании извлеченных плодов всех групп у них не выявлено внешних аномалий развития лицевого и мозгового черепа, глаз, ушных раковин, передней брюшной стенки, конечностей, хвоста. Среднее количество плодов в пометах составило: контрольная группа -14,5±0,3; группа, получавшая фенотропил в дозе 100 мг/кг - 11,67±0,78 и группа, получавшая фенотропил в дозе 400 мг/кг - 13,55±0,47. Средняя численность потомства самок, получавших в течение беременности фенотропил в дозе 100 мг/кг, была достоверно меньше средней численности потомства самок контрольной группы. Считаем, что уменьшение численности помета крыс, получавших в течение беременности фенотропил в дозе 100 мг/кг, является проявлением специфических свойств препарата, используемого в среднеэффективной дозе, и не может быть расценено как проявление общетоксического действия фенотропила, поскольку четырехкратное увеличение дозы препарата не приводило к воспроизведению данного эффекта.

При исследовании морфометрических показателей плодов выявлено, что масса и длина плодов контрольной группы составила 3,20±0,17 г, 3,30±0,08 см; в группе, получавшей фенотропил 100 мг/кг - 4,13±0,13 г, 3,70±0,06 см и в группе, получавшей фенотропил 400 мг/кг - 3,66±0,14 г и 3,50±0,09 см. Морфометрические показатели плодов самок, получавших во время беременности фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг достоверно превышали показатели плодов контрольной группы, что при соотнесении с меньшим количеством плодов в помете представляется закономерным.

Окрашивание скелета ализарином (методика Доусона, модифицированная в отделе эмбриологии НИИЭМ АМН СССР). Количество иссле-

дованных плодов по указанной методике составило: контрольная группа -25; группа, получавшая фенотропил 100 мг/кг - 38 и группа, получавшая фе-нотропил 400 мг/кг - 40. Среднее количество точек окостенения кисти и стопы плодов крыс составило: в контрольной группе - 9,83±1,48 и 8,83±1,04, в группе, получавшая фенотропил 100 мг/кг - 6,37±0,52 и 6,18±0,48 и в группе, получавшая фенотропил в дозе 400 мг/кг-8,74±0,56 и 8,10±0,49.

Выявлено достоверное уменьшение числа точек окостенения стопы потомства, получавшего пренаталыю фенотропил в дозе 100 мг/кг, по сравнению с показателями окостенения скелета потомства контрольной группы. Расцениваем данный эффект как проявление специфических свойств фено-тропила, используемого в среднеэффективной дозе, ввиду отсутствия воспроизводимости эффекта при четырехкратном увеличении дозы препарата. Считаем, что для окончательного решения вопроса о влиянии фенотропила, вводимого пренаталыю, на процесс остеогенеза у потомства, необходимо проведение дополнительных исследований, что не входило в задачи настоящей диссертационной работы.

Исследование внутренних органов плодов по методике Вильсона в модификации отдела эмбриологии НИИЭМ АМН СССР. По указанной методике нами изучено 117 плодов контрольной группы, 31 плод из группы, получавшей фенотропил 100 мг/кг и 57 плодов из группы, получавшей фенотропил 400 мг/кг. Проведенные исследования последовательных срезов плодов указанных трех групп в горизонтальной плоскости выявили абсолютную симметричность расположения и идентичность анатомических структур как внутри группы, так и при сравнении срезов плодов разных групп между собой.

Метод висцерального исследования органов плодов по Стейплсу. С

использованием данной методики нами изучено 28 плодов контрольной группы, 36 плодов из группы, получавшей фенотропил в дозе 100 мг/кг и 43 плода из группы, получавшей фенотропил в дозе 400 мг/кг. На произведенных фронтальных срезах не установлено нарушений топографии и структуры крупных сосудов (артерий и вен), сердца, легких, печени, диафрагмы, надпочечников и почек, мочеточников, мочевого пузыря. Относительная масса внутренних органов плодов трех групп приведена в табл. 1.

Таблица 1

Показатели относительной массы внутренпнх органов плодов крыс (М±т)

Группа Относительная масса сердца, % Относительная масса почек, % Относительная масса тимуса, %

правая левая

Контроль 0,78±0,03 0,26±0,006 0,26±0,007 0,13±0,006

Фенотропил 100 мг/кг 1,15±0,04* 0,35±0,01* 0,36±0,009* 0,19±0,007*

Фенотропил 400 мг/кг 0,95±0,04* 0,32±0,009* 0,31*0,01* 0,18±0,005*

Примечание. * - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы, р<0,05.

Среди плодов, подвергшихся внутриутробно влиянию фенотропила, относительная масса внутренних органов была достоверно выше таковых показателей контрольной группы. Обзор литературных данных [Кузнецов P.A., 2008; Пятышкина H.A., 2008] позволяет утверждать, что увеличение массы плодов может свидетельствовать о неспецифической реакции организма матери и фетоплаценгарного комплекса на минимальные повреждающие воздействия. Исходя из указанного выше, предполагаем, что уменьшение средней численности пометов в группах, получавших феиотропил привело к компенсаторному перераспределению питательных веществ и гипертрофии плодов. Увеличение показателей относительной массы внутренних органов плодов обусловлено оптимизацией обменных процессов под влиянием фенотропила [Ахапкина В.И., 2005]. Считаем, что причиной большей выраженности изменений показателей в группе, получавшей фенотропил 100 мг/кг, стало проявление дозазависимого эффекта фенотропила, что и обусловило более выраженные изменения показателей относительной массы внутренних органов потомства при использовании препарата в среднеэффектив-ной дозе.

Исследование морфологической структуры плацент крыс. При гистологическом исследовании плацент крыс, получавших фентропил в дозе 100 мг/кг, были выявлены следующие морфологические свидетельства гемоди-намических расстройств: отложения фибрина и очаги кровоизлияний над ба-зальным отделом плаценты, неравномерное расширение материнских сосудов, фокусы кровоизлияний в лабиринтном отделе, расширение материнских лакун (см. рис. 1-3). Выявлено увеличение количества гликогена в гликоге-новых клетках лабиринтного и базального отделов по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей фенотропил 400 мг/кг (см. рис. 5-6).

Гистологическое исследование плацент крыс, получавших фентропил в дозе 400 мг/кг, выявило: расширение базального отдела плацент, наличие в нем фокусов некроза и кариорексиса, расширение материнских сосудов базального отдела плаценты и их облитерирующий тромбоз (см. рис. 4). Изменение кровообращения в материнских сосудах базального отдела плаценты наряду с признаками ишемии (некроз и кариорексис) свидетельствуют о формировании дисциркуляторных расстройств в плаценте. При окраске по ШИК гистологических препаратов плацент крыс, получавших фенотропил 400 мг/кг, в специализированных клетках лабиринтного и базального отделов плаценты выявлено снижение количества гликогена, что косвенно свидетельствует об уменьшении запаса энергетических субстратов и, следовательно - о напряжении компенсаторных механизмов фетоплацентарного комплекса.

Необходимо отметить, что ряд авторов сообщает о неспецифичности морфологических изменений фетоплацентарного комплекса [Авакян Т.Г., 2005; Кузнецов P.A., 2008; Куликова Г.В., 2008; Пятышкина H.A., 2008].

Рис. 1. Назальный отдел плаценты (контрольная группа). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение* 100. Рис. 2. Фокусы кровоизлияний над базальным отделом плаценты (группа, получавшая фенотропил 100 мг/кг). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение* 100. Рис. 3. Полнокровие материнских лакун лабиринтного отдела, расширение околоворсинчатых пространств плаценты (группа, получавшая фенотропил 100 мг/кг). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение* 100. Рис. 4. Кровоизлияния в лабиринтном отделе плаценты (группа, получавшая фенотропил 400 мг/кг). Окраска гематоксилин-эозин. Увеличение* 100. Рис. 5. Плацента (группа, получавшая фенотропил 100 мг/кг). Окраска по ШИК. Увеличение* 100. Рис. 6. Плацента (группа, получавшая фенотропил 400 мг/кг). Окраска по ШИК. Увеличение* 100.

Выявленные нами морфологические свидетельства гемодинамических расстройств в плацентах крыс, получавших в период беременности фенотро-пил, могут быть расценены как проявление адаптационных процессов фетоп-лацентарного комплекса, триггером для запуска которых стал ксенобиотик фенотропил. Перечисленные выше признаки гемодинамических расстройств могут быть расценены как компенсаторная реакция в ответ на минимальное повреждающее воздействие.

Исследование антенатального повреждающего действия фенотропила, регистрируемого в постнатальном периоде развития Исследование ориентировочно-исследовательского поведения беременных самок в тесте «Открытое поле» (ОП). Введение с 6-го по 21 дни беременности пирацетама в дозе 300 мг/кг не приводило к изменению поведения беременных крыс; фенотропил в дозе 50 мг/кг, вызывал достоверное угнетение общей и исследовательской активности беременных самок после однократного введения, однако при субхроническом введении с 6 по 21 дни беременности угнетения исследовательской и двигательной активности под влиянием фенотропила в дозе 50 мг/кг выявлено не было (см. рис. 7-8).

5 о

з «

1ЯГ. 140 НИ)

('О 24

Цсчмдная

-Контроль

-Фснчтроинл Щ)мг кг

"дан-Мира детям .»00 мг кг -фенотропил-ИШмг кг

Ыдснь

•фенотропил50мг кг

Рис. 7. Горизонтальная двигательная агстивность беременных самок в тесте «Открытое поле»: исходная, на 7, 14 и 21 дни беременности.

Рис, 8. Вертикальная двигательная активность беременных самок в тесте «Открытое поле»: исходная, на 7, 14 и 21 дни беременности. Примечание. * - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы, р<0.05; ** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы и одной из групп, получавшей фенотропил в иной дозе. р<0.05; *** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей пирацетам 300 мг/кг, р<0,05

Фенотропил в дозе 100 мг/кг оказывал выраженное активирующее действие по показателям двигательной активности (достоверны отличия от контрольной группы), а фенотропил в дозе 400 мг/кг не вызывал достоверных изменений показателей двигательной активности беременных самок в тесте «ОП». Таким образом, нами выявлено выраженное активирующее действие средних доз фенотропила и отсутствие такового при применении малых и высоких доз.

Исследование биологического и сенсомоторного развития потомства. Численность потомства составила: 133 особи в контрольной группе, 86 -в группе, получавшей пирацетам 300 мг/кг, 109 - в группе, получавшей фенотропил 100 мг/кг, 131 - в группе, получавшей фенотропил 400 мг/кг. В табл.2, представлены данные, полученные при четырехкратном взвешивании потомства на 7, 30,45 и 60 сутки жизни.

Таблица 2

Средняя масса потомства на 7,30,45 и 60 сутки жизни_

Группа 7 сутки 30 сутки 45 сутки 60 сутки

самки самцы

Контроль 13,20±0,19 52,40±0.72 127,55±1,88 167,92 ±4Д8 191,81*3,26

Пирацетам 300 мг/кг 14,73±0,34 * 52,82±0,83 115,90±1,65 * 163,82±2,40 179,65±4,05 *

Фенотропил 100 мг/кг 13,81 ±0,23 *** 67,64±1,85 ** *** 137,21±3,03 ** 148,85±2,59 ** 186,67±3,71 ****

Фенотропил 400 мг/кг 11,26±0,59 84,20±3,42 ** *** 127,86±4,40 ** 171,77±7,74 **** 204,69±6,6 **

Примечание* - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы, р<0,05; ** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей пирацетам 300 мг/кг, р<0,05; *** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы и группы, получавшей фенотропил в иной дозе, р<0,05; **** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей фенотропил в иной дозе, р<0,05.

В соответствии с указанной выше методикой, нами были проведены исследования созревания сенсомоторной сферы потомства, получавшего

внутриутробно указанные препсфаты_(рис. 9-11).

В 2

% 1 £ 0; 5 3 ?

5 I £ 0,6 5 5 §

||&§0.4 !

г

%ь

ё

? в Щ 0,2

7 сутки 8 сутки 9cyn.it 10 сути

■ Контроль □Пирацетам ЗАО мг кг ЕЗФенотроппл 100мг кг ■ Фенотропил-100 мг кг

Рис. 9. Формирование навыка переворачивания на плоскости у потомства на 7-10 сутки жизни (относительная частота и ее доверительный интервал).

"сутки 5; тки 9су1ки 10 сутки 11 сутки

■Контроль аПнрдцетам 300 мг кг ШФенотроиил ЮОмгкт ■Фыготролил4®0мгкг

Рис. 10. Формирование навыка отрицательного геотаксиса у потомства на 7-11 сутки жизни (относительная частота и ее доверительный интервал).

Рис. 11. Формирование навыка избегания обрыва у потомства на 7-11 сутки жизни (относительная частота и ее доверительный интервал).

При анализе динамики формирования навыков переворачивания на плоскости, отрицательного геотаксиса, избегания обрыва, выявлено, что у крысят, получавших фенотропил в дозе 100 мг/кг, достоверно раньше, чем у других животных сформировывались изучаемые навыки, что свидетельствует о их более быстром обучении.

При выполнении дополнительного обзора литературных данных клинических исследований нами выявлено сообщение [Бондаренко Е.С., 1999] о более высоком темпе моторного и психического развития детей, подвергшихся перинатальной гипоксии легкой степени. С общебиологической точки зрения, и ксенобиотик фенотропил, вводимый беременным самкам, и перинатальная гипоксия новорожденного легкой степени, могут быть отнесены к минимальным повреждающим воздействиям. Вышеперечисленное подтверждает предположение о формировании неспецифической реакции фетопла-центарного комплекса, возникшей в ответ на введение беременным самкам ксенобиотика фенотрогшла в среднеэффективной дозе - 100 мг/кг.

Исследование ориентировочно-исследовательского поведения потомства в тесте «Открытое поле» («ОП»). Ориентировочно-исследовательского поведение потомства было изучено в тесте «ОП», повторенном трехкратно: впервые - на 30 сутки жизни (ОП 30), повторно - на 45 сутки жизни (ОП 45), в третий раз - на 60 сутки жизни (ОП 60).

На рис.12. представлены данные, полученные при изучении ГДА потомства в ОП 30. ГДА животных всех групп уменьшалась к концу экспозиции, что свидетельствовало об адаптации к новым условиям. Показатели ГДА животных в группах, получавших фенотропил 100 и 400 мг/кг, в течение всего теста была достоверно выше показателей ГДА контрольной и получавшей пирацетам 300 мг/кг групп.

На рис. 13. представлены данные, полученные при исследовании ВДА потомства в ОП 30. ВДА потомства из групп, получавших фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг, была достоверно более высокой по сравнению с таковой в группах контрольной и получавшей пирацетам в дозе 300 мг/кг.

На рис. 14. представлены данные, полученные при исследовании ГДА потомства в ОП 45.

ГДА потомства из групп, получавших фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг, была достоверно ниже активности животных контрольной группы и получавших пирацетам в дозе 300 мг/кг.

Данные, полученные при изучении ВДА в тесте ОП 45 (рис. 15) свидетельствуют о достоверно более низком уровне указанного показателя среди животных, получавших фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей пирацетам 300 мг/кг.

Наблюдаемое у получавшего фенотропил потомства снижение горизонтальной и вертикальной двигательной активности при повторном предъявлении условий теста «Открытое поле» (ОП 45) свидетельствует о более быстрой адаптации животных по сравнению с потомством контрольной группы и получавшего пирацетам в дозе 300 мг/кг.

Для анализа исследовательского поведения животных в тесте «ОП» изучаются два основных показателя - ВДА и заглядывание в норы. Нами введен суммарный показатель вертикальной исследовательской активности (СВИА) для комплексной оценки исследовательского поведения животных. Данный показатель с нашей точки зрения является более наглядным, позволяет более точно оценить вклад исследовательской активности в показатели общей активности животных.

00:10 00:30 00:50 01:10 -Контроль ПиряцетамЭООмгкт -

01:30 01:50 02:10 -Фенотропял МОмгкг —г-

02:30 02:50 ■Фгаотропил 400 мг кг

Рис. 12. Горизонтальная двигательная активность потомства в тесте ОП 30, усл. ед.

Рис. 13. Вертикальная двигательная активность потомства в тесте ОП 30, усл. ед. Примечание. * - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы, р<0,05; ** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей пираце-там 300 мг/кг, р<0,05; *** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей фенотропил в иной дозе, р<0,05.

•Контроль -*-Пирацетам500мг кг -*-Фенотрош1л100мгкг -*г-Феиотропял400мг кг

Рис. 14. Горизонтальная двигательная активность потомства в тесте ОП 45, усл. ед.

О.б

00:10 00:30 00.?0 01:10 01:30 0150 0.2:10 02.30 0::.<0 -Контроль -*-Пирацег!1мЗООмгкг ~±—Фенотропнл 100 мг кг Фенотротп400мгкг

Рис. 15. Вертикальная двигательная активность потомства в тесте ОП 45, усл. ед.

Примечание. * - отличие достоверно по тесту Манна-Унтни от контрольной группы, р<0.05; ** - отличие достоверно по тесту Манпа-Уитни от группы, получавшей пираце-там 300 мг/кг, р<0,05; *** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей фенотропил в иной дозе, р<0.05.

На рис. 16. представлены данные, полученные при исследовании СВИА потомства в тестах ОП 30, 45 и 60, выполненных на 30, 45 и 60 сутки жизни соответственно.

ОПЗО ОП45 ОП 60. самцы ОПбО.самкн

мконтролъ опир'ЛЦ€Т;1мзоо мгкт ш фенотропил x 00.мгкг вфенотропил400мг/кг

Рис 16. Суммарная вертикальная исследовательская активность потомства в тестах ОП 30,45 и 60.

Примечание. * - отличие достоверно но тесту Манна-Уитни от контрольной группы, р<0,05; ** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от группы, получавшей пираце-там 300 мг/кг, р<0,05; *** - отличие достоверно по тесту Манна-Уитни от контрольной группы самцов в тесте ОП 60, р<0,05.

Представленная диаграмма подчеркивает изменение именно специфической СВИА у животных, как маркера исследовательского поведения в незнакомой среде и показателя адаптации к условиям эксперимента. Как видно из рис.16., СВИА контрольной группы и группы сравнения увеличилась при повторном помещении в «ОП», в то время как данный показатель у групп, получавших фенотропил, наоборот снизился. Вероятно, животные контрольной группы и группы сравнения в большей степени подверглись стрессиро-ванию при первом помещении в «ОП», поэтому активное исследовательское поведение демонстрировали только при повторном предъявлении условий эксперимента.

Показатели частоты актов груминга и частоты заглядываний в норы всех групп достоверных отличий не имели. Достоверных отличий между показателями ориентировочно-исследовательского поведения потомства в гесте ОП 60 не выявлено.

Выявленная при первичном предъявлении условий эксперимента «ОП» (ОП 30) высокая исследовательская активность потомства, получавшего внутриутробно фенотропил. может быть расценена как проявление стресс-протективного эффекта фенотропила. Угасание исследовательского поведения при повторном предъявлении ситуации (ОП 45) свидетельствует о более быстрой адаптации к условиям эксперимента и лучшем сохранении памятно-

го следа у потомства, получавшего фенотропил. Это позволяет предположить, что, несмотря на относительно короткий период полувыведения (ТА = 3-5 часов) [Ахапкина В.И., 2005], фенотропил включается в нейрометаболи-ческие процессы и оптимизирует их даже после прекращения введения препарата. Регрессирование эффектов препаратов через 60 дней от последнего введения (ОП 60) свидетельствует о временном характере изменения поведения потомства, получавшего пирацетам и фенотропил внутриутробно.

Исследование показателей клеточного состава периферической крови потомства не выявило достоверных отличий показателей периферической крови самцов указанных групп на 60 сутки жизни, что свидетельствует об отсутствии влияния фенотропила, вводимого внутриутробно, на процесс гемопоэза у потомства.

ВЫВОДЫ

1. Введение фенотропила в дозах 100 и 400 мг/кг нелинейным белым крысам с 1 по 19 дни беременности не приводит к развитию неправильностей формирования структуры и топографии внутренних органов плодов.

2. Фенотропил в зависимости от дозы оказывает неодинаковое действие - в дозе 100 мг/кг приводит к уменьшению численности плодов в помете, что сочетается с повышением средних массы и длины плодов; вызывает уменьшение количества точек окостенения скелета задних конечностей плодов; сходных изменений скелета плодов под влиянием фенотропила, вводимого в дозе 400 мг/кг, не выявлено.

3. Фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг приводит к увеличению относительных масс внутренних органов плодов (сердца, почек и тимуса); данные изменения максимально выражены под влиянием фенотропила, вводимого в дозе 100 мг/кг.

4. Введение фенотропила беременным крысам с 1 по 19 дни беременности приводит к развитию адаптационных процессов в фетоплацентарном комплексе с напряжением компенсаторных механизмов и явлениями субкомпенсации.

5. Фенотропил в дозе 50 мг/кг после однократного введения вызывает угнетение общей и исследовательской активности беременных самок в тесте «Открытое поле». Фенотропил в дозе 100 мг/кг, при введении с 6 по 21 дни беременности, оказывает выраженное активирующее действие.

6. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозе 100 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, вызывает ускорение созревания сенсорно-моторной сферы потомства.

7. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозах 100 и 400 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, вызывает повышение исследовательской активности потомства при первичном предъявлений условий эксперимента «Открытое поле». При повторном предъявлении ситуации животные демонстрируют ускорение адаптации.

8. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозах 100 и 400 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, не влияет на показатели клеточного состава периферической крови потомства.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Осипчук Д.О. Использование автоматизированной системы в мониторинге двигательной активности экспериментальных животных / Д.О. Осипчук, М.Б. Дрикер, С.Н. Пестерев // Материалы конференции Фармация и общественное здоровье, г. Екатеринбург .- 2008 .- С. 240-244.

2. Осипчук Д.О. Изучение эмбрио- и фетотокснческого действия феногропи-ла в антенатальном периоде развития / Д.О. Осипчук, М.Б. Дрикер // Сборник научных работ участников конкурса молодых ученых (в рамках I Всероссийского национального конгресса молодых ученых), Москва, 2009 г.- С. 217-223.

3. Осипчук Д.О. Исследование морфологических и морфометрических показателей плодов крыс, получавших М-карбамоил-метил-4-феиил-2-пирролидон в период внутриутробного развития / Д.О. Осипчук, М.Б. Дрикер // Материалы Съезда терапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра». Ростов-на-Дону, 17-18 сентября 2009 г. - Ростов-на-Дону, 2009 г.-С. 68.

4. Осипчук Д.О. Изменение остеогенеза плодов крыс, получавших Тч!-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон в период внутриутробного развития / Д.О. Осипчук, М.Б. Дрикер // Материалы IV Национального конгресса терапевтов (XX Съезд российских терапевтов). Москва, 2-4 декабря 2009 г. - Москва, 2009 г. - С. 190.

5. Осипчук Д.О. Использование антидепрессантов, бензодиазепиновых транквилизаторов и ноотропных препаратов в период беременности и лактации / Д.О. Осипчук // Вестник Уральской медицинской академической науки.- Екатеринбург, 2009 г. - № 4. - С. 83-89.

6. Осипчук Д.О. Влияние нейромодулятора фенотропила, вводимого пренатально, на поведенческую активность животных в постнаталь-ном периоде развития / Д.О. Осипчук, М.Б. Дрикер // Вестник Уральской медицинской академической науки. - Екатеринбург, 2010 г. - № 1.-С. 55-57.

ОСИПЧУК Дмитрий Олегович

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЭМБРИО- И ФЕТОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НЕЙРОМОДУЛЯТОРА ФЕНОТРОПИЛА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 01.04,2010 г. Объём 1,3 п.л. Формат 64x84. Тираж 100 экз. Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ГОУ ВПО УГМА Росздрава. Заказ Лг2.15. 620028, г. Екатеринбург, ул. Репина, д.З

Актуальность проблемы

В течение последних десятилетий особое место в русскоязычной и мировой научной медицинской литературе отводится проблеме психопатологии беременных [39, 114, 119]. Основой многокомпонентной терапии психических расстройств является патогенетическая психофармакотерапия. Вопреки обширности экспериментального и клинического материала, послужившего базисом для развития современной психофармакотерапии, единой и общепринятой мировой тактики ведения беременных пациенток с расстройствами психической сферы так и не сложилось. Причин тому множество, но основной ограничивающий любую фармакотерапию в период беременности фактор - влияние применяемых препаратов на эмбрион, плод и плаценту [1, 119].

Вне зависимости от тяжести клинической картины психического расстройства женщины, приоритетное значение имеет именно безопасность назначаемых препаратов для матери и плода. Зачастую оценить точный вклад JIB, принимаемых во время беременности, в развитие врожденной патологии сложно, прежде всего, из-за невозможности точного учета используемых при беременности препаратов, а также по причине бесконтрольного применения беременными JIB. Предположительно именно лекарственные средства, принимаемые беременными в разные сроки гестации, являются причиной 1-3% врожденных аномалий [45].

Проведение клинического этапа исследований эмбриотоксических свойств JIB является обязательным после выполнения доклинических исследований [35], а экстраполяция данных экспериментальных исследований на человека недопустима. Так, например, талидамид, использовавшийся в 60-х годах XX века в медицинской практике в Европе и Австралии в качестве се-дативного средства, вызывал тератогенный эффект даже в тех случаях, когда применялся однократно с третьей по седьмую неделю гестации беременными женщинами в дозах более 0,5-1,0 мг/кг. Тератогенность талидамида проявлялась фекомелией - укорочением или полным отсутствием конечностей у новорожденных; фокомелия была зарегистрирована более чем у 10000 новорожденных. Примечательна низкая видовая чувствительность к препарату — у мышей и крыс токсическое действие талидамида не было выявлено даже при использовании в дозах более 4000 мг/кг [22].

Подводя итог вышесказанному необходимо отметить, что применение J1B при беременности остается одной из наименее изученных проблем клинической фармакологии. Кроме того, считаем серьезной проблемой для практического российского здравоохранения отсутствие четкой принятой классификации вреда при использовании лекарственных препаратов в течение беременности, а также отсутствие в аналогичных международных классификациях (например, FDA) некоторых широко используемых в России групп препаратов (например, ноотропов). Для коррекции патологически протекающей беременности и родов может быть необходимо использование препаратов метаболического и ноотропного действия. Список разрешенных для применения в период беременности JIB указанных групп весьма скуден: из группы ноотропных препаратов используется только пирацетам, в качестве средств метаболической терапии - глюкоза, аскорбиновая кислота и поливитаминные препараты. Антидепрессанты первого ряда (СИОЗС, ССОЗС, иМАО и др.) [19] в России в период беременности не назначаются из-за их дороговизны; препараты второго ряда (ТЦА и др.) не показаны беременным по причине их плохой переносимости.

Ввиду отсутствия литературных данных об эмбрио- и фетотоксичности ноотропного препарата с нейромодуляторными свойствами фенотропила нам представляется необходимым проведение экспериментальных исследований влияния фенотропила, вводимого пренатально, на пренатальное и постна-тальное развитие животных. Выполнение данных исследований необходимо для решения вопроса о сообразности дальнейших клинических исследований применения фенотропила в период беременности для коррекции психических нарушений, что и позволило нам определить цель и задачи настоящего исследования.

Цель работы - в эксперименте на животных оценить эмбрио- и фето-токсическое влияние нейромодулятора фенотропила в анте- и постнаталь-ном периодах развития.

Задачи

1. В эксперименте на белых крысах исследовать влияние фенотропила, вводимого в различных дозах в течение беременности, на внутриутробное развитие плодов крыс; выявить возможные эмбрио- и фетотоксические эффекты фенотропила.

2. Изучить влияние разных доз фенотропила на гистологическую структуру плацентарного комплекса при введении фенотропила беременным крысам.

3. Определить влияние фенотропила на течение беременности, а так же на ориентировочно-исследовательское поведение беременных крыс, получавших фенотропил в разных дозах.

4. Изучить влияние фенотропила, вводимого пренатально в разных дозах, на постнатальное сенсомоторное и биологическое развитие потомства белых крыс.

5. Изучить влияние фенотропила, вводимого беременным крысам в разных дозах, на показатели клеточного состава периферической крови потомства.

Научная новизна исследований определяется тем, что впервые изучено влияние фенотропила, вводимого в различных дозах беременным беспородным белым крысам, на течение беременности крыс, пренатальное развитие потомства. Кроме того, нами изучено влияние фенотропила, вводимого беременным самкам белых крыс, на плацентарный комплекс — с использованием стандартных гистологических методов и на постнатальное развитие потомства - при помощи тестов развития сенсомоторной сферы и теста исследования ориентировочно-исследовательского поведения «Открытое поле». Использование модернизированной установки «Открытое поле», снабженной автоматизированной системой наблюдения, позволило значительно повысить точность регистрации локомоций и исключить субъективный фактор при исследовании параметров двигательной активности.

Необходимо отметить, что впервые эмбрио- и фетотоксические свойства фенотропила изучены в сравнительном аспекте с эталонным ноотроп-ным препаратом пирацетамом.

Тератогенных свойств у фенотропила не выявлено. Однако совокупность изменений в развитии потомства, получавшего внутриутробно фено-тропил, расценена нами как свидетельство формирования комплекса ответных реакций на минимальное повреждающее воздействие, которым являлось введение ксенобиотика фенотропила. Кроме того, нами выявлено наличие у фенотропила колоколообразной зависимости «доза-эффект», характерной для других препаратов ноотропного ряда.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость работы состоит в получении новых экспериментальных данных о влиянии нейромодулятора фенотропила, вводимого беременным беспородным крысам, на пренатальное и постнатальное развитие потомства. Полученные данные позволяют в новом свете оценить влияние ноотропных препаратов с метаболической активностью на эмбрион, плод, плаценту. Практическая значимость определяется разработкой и модификацией морфологических и экспериментальных методик изучения эмбрио- и фетотоксичности JIB (методики Вильсона, Стейплса, Доусона), тестов развития сенсомоторной сферы, теста «Открытое поле». Кроме того, выявленные особенности развития потомства, получавшего внутриутробно фенотропил, позволяют дополнить данные ранее выполненных доклинических исследований, являющихся основой для клинических исследований фенотропила в акушерской практике.

Положения, выносимые на защиту:

1. В эксперименте на белых беспородных крысах фенотропил, вводимый в период беременности, не индуцирует развития неправильностей формирования структуры и топографии внутренних органов у потомства.

2. Фенотропил, вводимый в среднеэффективной дозе беременным крысам, приводит к уменьшению численности плодов в помете, что сочетается с повышением средних массы и длины плодов; вызывает уменьшение количества точек окостенения скелета задних конечностей плодов. Перечисленные эффекты при увеличении дозы фенотропила в 4 раза не воспроизводятся. Фенотропил приводит к увеличению относительных масс внутренних органов плодов (сердца, почек и тимуса), что обусловлено метаболическим эффектом препарата.

3. Фенотропил индуцирует развитие адаптационных процессов в фетопла-центарном комплексе крыс, расцениваемых как реакция на минимальное повреждающее воздействие.

4. В тесте «Открытое поле» выявлено разнонаправленное влияние фенотропила на ориентировочно-исследовательское поведение беременных крыс. Свойства фенотропила могут быть охарактеризованы колоколообразной зависимостью «доза-эффект», характерной для других ноотропных препаратов.

5. Исследование формирования рефлексов потомства выявило, что фенотропил, вводимый беременным самкам белых беспородных крыс, вызывает ускорение созревания сенсомоторной сферы потомства. В тесте «Открытое поле» выявлено, что фенотропил повышает исследовательскую активность потомства при первичном предъявлении условий эксперимента, а так же ускоряет процесс адаптации потомства к новым условиям среды.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2008), I Всероссийском конгрессе молодых ученых в области медицины и биологии по итогам конкурса «Свет знаний во имя здоровья человека» (Москва, 2009), Съезде терапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра» (Ростов-на-Дону, 2009), IV Национальном конгрессе терапевтов (XX Съезд российских терапевтов) (Москва, 2009). По результатам диссертационного исследования опубликовано 6 научных работ, из них в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК - 2.

ВЫВОДЫ

1. Введение фенотропила в дозах 100 и 400 мг/кг нелинейным белым крысам с 1 по 19 дни беременности не приводит к развитию неправильностей формирования структуры и топографии внутренних органов плодов.

2. Фенотропил в зависимости от дозы оказывает неодинаковое действие — в дозе 100 мг/кг приводит к уменьшению численности плодов в помете, что сочетается с повышением средних массы и длины плодов; вызывает уменьшение количества точек окостенения скелета задних конечностей плодов; сходных изменений скелета плодов под влиянием фенотропила, вводимого в дозе 400 мг/кг, не выявлено.

3. Фенотропил в дозах 100 и 400 мг/кг приводит к увеличению относительных масс внутренних органов плодов (сердца, почек и тимуса); данные изменения максимально выражены под влиянием фенотропила, вводимого в дозе 100 мг/кг.

4. Введение фенотропила беременным крысам с 1 по 19 дни беременности приводит к развитию адаптационных процессов в фетоплацентарном комплексе с напряжением компенсаторных механизмов и явлениями субкомпенсации.

5. Фенотропил в дозе 50 мг/кг после однократного введения вызывает угнетение общей и исследовательской активности беременных самок в тесте «Открытое поле». Фенотропил в дозе 100 мг/кг, при введении с 6 по 21 дни беременности, оказывает выраженное активирующее действие.

6. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозе 100 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, вызывает ускорение созревания сенсорно-моторной сферы потомства.

7. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозах 100 и 400 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, вызывает повышение исследовательской активности потомства при первичном предъявлений условий эксперимента «Открытое поле». При повторном предъявлении ситуации животные демонстрируют ускорение адаптации. 8. Фенотропил, вводимый беременным самкам в дозах 100 и 400 мг/кг с 6 по 21 дни беременности, не влияет на показатели клеточного состава периферической крови потомства.

Практические рекомендации

Для экстраполяции на человека полученных нами данных экспериментальных исследований, безусловно, необходимо проведение клинических исследований. В настоящий момент результаты нашей работы позволяют предполагать, что введение фенотропила в течение беременности не остается безразличным для потомства, однако предполагаемые ожидаемые эффекты препарата для матери и плода всё же более значимы, чем возможные нежелательные реакции.

Считаем, что проведение в дальнейшем клинических исследований по использованию нейромодулятора фенотропила в акушерской практике с целью коррекции психических нарушений у беременных, подтвердят его эффективность.